TP SV Cellule 1 Planches SD

TP1 BIOLOGIE CELLULAIRE
SV-C LA CELLULE DANS SON ENVIRONNEMENT

SV-C-1 LA CELLULE AU SEIN DE L’ORGANISME
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 1

E-LEARNING PRÉALABLEMENT VALIDÉ
As-tu réalisé
le e-learning?
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

OBJECTIFS D’APPRENTISSAGE
Objectifs Capacités attendues

- Observation des cellules végétales et - Savoir utiliser un microscope optique
animales au microscope optique
- Observation de tissus animaux et végétaux - Savoir réaliser un montage entre lame et lamelle
à partir de lames du commerce pour observation microscopique
- Réalisation de manipulations simples de - Savoir réaliser un dessin d’observation
colorations utilisées en microscopie
optique - Déterminer un ordre de grandeur de la taille d’un
- Observations de phénomènes cellulaires : objet observé au microscope à partir d’une
cyclose des plastes, échanges d’eau échelle ou d’un grossissement
- Identifier des structures cellulaires sur des - Identifier la technique d’observation utilisée (MO,
électronographies MET, MEB) en justifiant la réponse
- Comprendre le fonctionnement d’un microscope
électronique à transmission et à balayage

NIVEAUX
D’ORGANISATION
DU VIVANT

I. MICROSCOPIE
A. Méthodes d’étude en microscopie optique
1. Objectif et principe de fonctionnement
2. Le pouvoir de résolution
II. ETUDE DE CELLULES ANIMALES
B. Utiliser un microscope optique A. Observation de cellules de foie au microscope optique et
1. Préparation d’un échantillon microscopique structure générale d’une cellule animale
2. Rappels de la méthode d’utilisation d’un microscope optique B. Les cellules animales sont intégrées dans des tissus et des
organes : exemple de l’entérocyte, cellule épithéliale de l’intestin
grêle
C. Microscopie optique à contraste de phase et Contraste
interférentiel III. ETUDE DES CELLULES VÉGÉTALES
1. Le contraste de phase A. Les cellules végétales sont intégrées dans des tissus et des
2. Le contraste interférentiel (de Nomarski) organes : exemple des cellules de la feuille
1. Organisation générale de la feuille des Angiospermes
D. Fluorescence Et microscopie optique confocale 2. Un exemple de tissu : l’épiderme, un tissu de revêtement
1. Microscopie optique à fluorescence B. Observation de quelques organites de la cellule végétale
2. Microscopie confocale 1. Mouvements d’eau, déformation de la vacuole et changement
de forme de la cellule
E. Méthodes d’étude en microscopie électronique 2. Diversité des plastes, des organites caractéristiques des
1. Microscopie électronique à transmission cellules végétales
2. Microscopie Electronique à Balayage
3. Méthodes de cryofracture et cryodécapage
F. Entrainement

I. MICROSCOPIE
A. MÉTHODES D’ÉTUDE EN MICROSCOPIE OPTIQUE
Objectif: Observer un échantillon en

coupe fine et distinguer des détails
supérieurs à 500 nm (dû au pouvoir
séparateur lié à la longueur d'onde
des photons émis)

MICROSCOPE OPTIQUE

1. OBJECTIF ET PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT

1. OBJECTIF ET PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT
1 mm

LIMITES DE RÉSOLUTION DE L’IMAGE
Bactéries observées au microscope optique à partir d’un

calque cutané sur la peau d’un chien
X100 – Dermatologie, ENVT
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Campbell, 2012 10

LIMITES DE RÉSOLUTION DE L’IMAGE
 la limite de résolution (transverse) 𝑑 d'un microscope,
c'est-à-dire la plus petite distance en dessous de
laquelle deux points voisins ne seront plus distingués,
peut être exprimée simplement à l'aide de la longueur
La résolution du microscope optique est limitée d'onde d'illumination 𝜆, de l'indice de réfraction 𝑛 en
par la diffraction de la lumière. En effet, du fait sortie d'objectif, et du demi-angle du cône de lumière
de la diffraction, l'image d'un point n'est pas un maximum accessible 𝛼
point, mais une tache (la tache d'Airy).
Deux points distincts auront pour images deux
taches dont le recouvrement peut empêcher de 𝜆
𝑑=
distinguer les deux points images. 2𝑛𝑠𝑖𝑛𝛼
On peut augmenter le pouvoir

de résolution, donc diminuer 𝑑
en augmentant 𝑛 en utilisant de
l’huile à immersion. C’est
Puissant!
https://www.techno-science.net/glossaire-definition/Microscope-optique-page-2.html
LES CELLULES
ELÉMENTS NON OBSERVABLES À L’ŒIL NU
cm à m
mm à dm
Eléments observables à
l’œil nu > 0,5 mm µm à cm
Pouvoir de résolution nm à µm
ou pouvoir séparateur
I. Microscopie
A. Fonctionnement du microscope optique
B. Utiliser un microscope optique

1. Préparation d’un échantillon
2. Méthode d’utilisation
3. Méthode de lecture
4. Estimer la taille réelle d’un objet observé au MO

B. UTILISER UN MICROSCOPE OPTIQUE PRÉPARATION DE LA
LAME
Préparation d’un échantillon simple
Microtome (Alberts, 2003)
Frottis sanguin
Coupes fines (~ 5 µm), sur tissus fixés et

inclus dans une cire
14

B. UTILISATION DU MICROSCOPE OPTIQUE
La préparation d’un échantillon dépend du type d’échantillon

et de ce que l’on souhaite observer ou mettre en évidence.
1) Conserver les structures = fixer

2) Obtenir des échantillon fins :
• Sans préparation (ex : bactéries)
• Par dilacération (ex: fibres musculaires)
• Par coupe manuelle (rasoir, scalpel) (ex: tissus végétaux)
• Par coupe fine au microtome (ex: tissus animaux)
3) Obtenir des échantillons contrastés

• Échantillons naturellement colorés (ex : tissus chlorophylliens)
• Colorants vitaux (ex : bleu de méthylène)
• Colorants spécifiques (ex : lugol)
4) Monter entre lame et lamelle

• Dépôt simple 15
• Frottis
QUEL MONTAGE EST CORRECT : A, B OU C ?
16
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Peycru (2006)

LES IMAGES OBSERVÉES SONT GÉNÉRALEMENT VUES EN COUPE ET
PAS EN TROIS DIMENSIONS
Bacha (2000)
17

Orientation des coupes
- Dans le sens d'allongement de

l'organe : coupe longitudinale
(radiale : passe par le centre,
transversale : ne passe pas par le
centre)
- Perpendiculaire au sens
d'allongement de l'organe : coupe
transversale

Quelques colorants classiquement utilisés en microscopie
optique (à connaître pour les épreuves de TP)
Comment trouver Charlie efficacement ?
20

LECTURE DE LAMES MICROSCOPIQUES :
COMPTEZ LES CHIENS LE PLUS VITE POSSIBLE
21


22


23

VOTRE MÉTHODE DE LECTURE D’UNE LAME ?
 Garder toujours la même
 Ne pas repasser au même endroit
 S’entraîner !
24

ESTIMATION DE L’AGRANDISSEMENT (TAILLE DE L’OBJET)
Agrandissement = taille de l’objet

observé ou dessiné ou
photographié / taille réelle de
l’objet
Echelle 25

QUEL EST LE DIAMÈTRE DE LA LUMIÈRE DE CETTE ARTÈRE ?
Grossissement
26
Observé au MO avec un objectif x40

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE (+ celui de l’oculaire x10)
EQUIVALENCE TAILLE RÉELLE / GROSSISSEMENT AU MICROSCOPE
OPTIQUE
Grossissement total Taille réelle du champ

(échelle )
X40  4 mm
X100  1,6 mm
X400  0,4 mm soit 400 µm

Ø réel:1,6 mm
GX40 X1000  0,16 mm soit 160 µm
Papier millimétré observé au MO

GX40 27

EQUIVALENCE TAILLE RÉELLE / GROSSISSEMENT AU MICROSCOPE
OPTIQUE
Grossissement total Taille réelle du champ

(échelle )
X60  2,5 mm
X150  1 mm
X600  0,25 mm soit 250 µm

Ø réel:2,5mm
GX60 X1500  0,1 mm soit 100 µm
Papier millimétré observé au MO

GX60 28

I. MICROSCOPIE
grêle
F. Entrainement

C. MICROSCOPIE OPTIQUE À CONTRASTE DE PHASE
Principe
Lorsqu’un rayon lumineux traverse un objet épais,
son arrivée sur le capteur peut être retardée par
rapport à un rayon ne l’ayant pas traversé.
→ Décalage de phase
A
→ Augmentation du
contraste d’un objet
Fibroblaste
B au MO (A) et au MO à transparent selon la nature
contraste de phase (B) des structures traversées
Application/intérêt :
➢ Observer des tissus ou cellules peu colorés, fins ou isolés
➢ Observer en conditions vitales
➢ Suivre au cours du temps (modification, mouvement…) 30
D’après Alberts (2003)

C. MICROSCOPIE OPTIQUE À CONTRASTE INTERFÉRENTIEL (DE
NORMASKI)
Stomates d’une coupe transversale de feuille de tulipe
Principe : F. Labaune
• Les rayons lumineux Paramécie
sont déphasés avant de traverser
l’échantillon ; suite au passage dans l’échantillon il se crée des
interférences qui sont converties en contrastes
Caractéristiques :
• Contrastes élevés permettant de voir plus de détails
• Impression de relief (ombrage)
Paramécie (F. Labaune)
Application/intérêt :
➢ Observer des tissus ou cellules vivants
➢ Observer les détails des organites
➢ Observer l’organisation 3D des cellules
31

D. FLUORESCENCE ET MICROSCOPIE
OPTIQUE
http://www.abcam.com/beta-tubulin-antibody-loading-control-ab6046.html
32
Lodish (2000) Fibroblaste et fluorescence de la kératine des filaments intermédiaires

PRINCIPE DE LA FLUORESCENCE
 Les e- de certains atomes absorbent un photon de haute énergie (𝜆 faible) =
excitation
 Désexcitation par émission d'un photon de plus basse énergie (𝜆 plus élevée)
𝐸 = ℎ. 𝜈
𝑐
𝐸 = ℎ.
𝜆
33
Alberts, 2003
D. MICROSCOPE OPTIQUE À FLUORESCENCE
34
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Alberts, 2003

D. FLUORESCENCE PAR MICROSCOPIE OPTIQUE CONFOCAL
35

FLUORESCENCE CONFOCALE OU NON
Méthode de microscopie à
fluorescence conventionnelle
et confocale – Fuseau
mitotique dans un ovule
d’Oursin fécondé
Immunofluorescence in situ
Lodish (2008)
36
Lodish (2008)
FLUORESCENCE PAR MICROSCOPIE OPTIQUE CONFOCALE
 Observation d'actine d'un embryon de Drosophila

melanogaster à la GFP (Green Fluorescent Protein)
 (A) Fluorescence au microscope optique
 (B) Fluorescence au microscope optique confocal
Alberts, 2003 37

II. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE
I. Méthodes d’étude en microscopie optique
II. Méthodes d’étude en microscopie électronique

A. Microscopie électronique à transmission
B. Microscopie électronique à balayage
C. Méthodes de cryofracture et cryodécapage
39

A. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À TRANSMISSION (MET OU
TEM EN ANGLAIS)
Principe
• Utiliser un faisceau d’électrons (≠
lumineux) qui est amplifié par des
lentilles faites de bobines
électromagnétiques (≠ verre).
• L’image se forme sur un écran

fluorescent (≠ œil)
Caractéristiques
• Pouvoir séparateur : 0,2 nm
Intérêt/Application
• Etudier l’ultrastructure des cellules 40
• Visualiser les molécules

• Même principe que pour la
microscopie optique mais avec des
variantes :
PRÉPARATION D’UN ✓ Inclusion dans une résine très dure
ÉCHANTILLON (épon) ≠ cire
POUR LA ✓ Fixation et contraste par des métaux

lourds (≠ colorants)
MICROSCOPIE → matériel toujours fixé (mort)
ÉLECTRONIQUE ✓ Coupe ultrafine de 0,05 µm (≠ 5 µm)
→ ultra-microtome
41

A. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À TRANSMISSION
Cellule épithéliale de rein au MET

(Robbins (2015)
42

B. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À BALAYAGE (MEB)
Principe Principe du microscope électronique à balayage
(MEB)
• L’échantillon est ombré par une pellicule métallique
• Les électrons balayent la surface ; ils sont réfléchis mais ne
traversent pas l’échantillon
Caractéristiques
• Pouvoir séparateur : 10 nm
• Effet de volume, de relief 3D
Didinium, cilié d’après Alberts

Globules rouges (fausses (2003) 43
couleurs)

B. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À
BALAYAGE
Pouvoir séparateur : 10 nm
Echantillon ombré par une pellicule métallique : « 3D »
Balayage de la surface par un faisceau d’électrons
44
Didinium, cilié d’après Alberts (2003)

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Feuille de noyer
COMPARAISON DES MÉTHODES DE MICROSCOPIE
45

C. CRYOFRACTURE, CRYODÉCAPAGE ET OMBRAGE
Cryodécapage (facultatif)
Principe
« -fracture »
« Cryo- »
1. Congélation à l’azote 2. Fracture de l’échantillon 3. Décapage = élimination de la couche superficielle

liquide (-196°C) avec un micro-couteau. de glace par sublimation à basse T°C
Ombrage Moulage → Observation MET

Carbone
46
4. Projection d'un métal lourd 5. Projection d'un film consolidant 6. Dissolution de l'échantillon par un
(platine) selon un certain angle
de carbone par-dessus solvant → Observation au ME
C. CRYOFRACTURE, CRYODÉCAPAGE ET OMBRAGE
• La fracture se fait au niveau des zones de moindre résistance (espaces
inter-membranaires ou entre les deux couches lipidiques d’une
membrane)
→ Observer la structure des membranes
→ Localiser les protéines dans la membrane
Enveloppe nucléaire de cellules musculaires de rat

(cryofracture avec ombrage, MEB, x 200 000 )
47
Effet de la cryofracture
BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE sur les membranes
CRYOFRACTURE ET CRYODÉCAPAGE
48
MEB - Enveloppe nucléaire de cellules musculaires de rat. x 200 000

ENTRAÎNEMENT
49

ENTRAÎNEMENT
50

ENTRAÎNEMENT
51

ENTRAÎNEMENT
L’indication du
grossissement de
l’objectif n’est pas d’un
grand intérêt…
GX40
52

PANCRÉAS DE VEAU COLORATION HES (HISTOLOGY.BE)
53

Ø réel:1,6 mm
GX10
MESURE DE SURFACE D’UN ÎLOT DE LANGHERANS
Au grossissement GX10 (donc grossissement total X100)

on mesure un diamètre de 1,6 mm
Au grossissement GX40 (donc grossissement total X400),
on en déduit un diamètre de 0,4 mm.
Sur l’écran du téléphone portable, on mesure à GX40 un Ø grossi: 7,2 cm
diamètre total de 7,2 cm. Donc 7,2 cm sur la photo GX40
mesure en réalité 0,4 mm soit 400 µm. Ø réel: 0,4 mm soit 400 µm
Sur l’écran on mesure un diamètre moyen de l’îlot de 1,3
cm soit 72 µm. Associant cet îlot à un cercle, nous
obtenons un îlot de surface: ∏ (72/2)2 = 4 082 µm2
Ø grossi: 1,3 cm
GX40
Ø réel: 72 µm 54
=> Surface = 4 082 µm2

I. MICROSCOPIE
grêle
F. Entrainement

II. ÉTUDE DE CELLULES ANIMALES
A. OBSERVATION DE CELLULES DE FOIE AU MO ET STRUCTURE GÉNÉRALE D’UNE CELLULE ANIMALE
Pour les débutants en

dessin, je vous propose Noyau
de réaliser un dessin
d’observation de cette
préparation. Cytoplasme Une
L’observation est à cellule
GX600, vérifiez que
l’échelle indiquée est
Membrane
juste. plasmique
Cellules de foie de mammifère, observée

au microscope optique après coloration au
50µm bleu de méthylène (grossissement x 900)

Préparation d’étudiants ENCPB Promo 2023 56
Le dessin d'observation : critères de réussite
Présentation générale Dessin centré
Dessin assez grand
Ecriture soignée et horizontale
Tout au crayon à papier, bien taillé
Pas de gribouillage, coloriage, ombrage, remplissage
Feuille blanche propre
Dessin Forme générale ressemblant au modèle

Proportions conservées
Détails de l’observation
Trait net, fin, continu
Titre Mis en évidence, centré, souligné

Grossissement/échelle
Nom/nature de l’objet observé
Mode d’obtention : technique utilisée, microscope utilisé, colorants éventuels …
Légendes Alignées de part et d’autre du dessin

Orientation du dessin (si nécessaire : pôle apical/basal, antérieur/postérieur…)
Correctes et bien orthographiées
Organisées, regroupées, classées
Traits de légendes à la règle, se finissant horizontalement, ne se croisant pas, pas
de flèche
B. LES CELLULES ANIMALES SONT INTÉGRÉES DANS DES TISSUS ET DES ORGANES : EXEMPLE DE
L’ENTÉROCYTE, CELLULE ÉPITHÉLIALE DE L’INTESTIN GRÊLE
CT d’iléon humain coloration

 Lame commerciale ou histology.be trichrome de Masson
 Choisir le grossissement adéquat
permettant d’identifier 4 tuniques
CT d’iléon de chat coloration 58

hématoxyline Eosine Safran
Muqueuse (épithélium
d’absorption et de sécrétion)
Sous-muqueuse (conjonctif
richement vascularisé)
Musculeuse (remarquez les deux
couches de muscle parallèle et
perpendiculaire à l’axe
d’allongement du TD)
séreuse (conjonctif de
protection , vascularisé)
CT d’iléon humain coloration trichrome de Masson
Pour les confirmés en dessin, je vous propose de réaliser un dessin d’observation

de la préparation présente sur le site histology.be, appareil digestif, iléon de chat
https://www.histology.be/slides/showslide.html?s=HSV0086.
Dessin d'observation VS schéma fonctionnel : exemple de l'intestin grêle (M. Quertigniez)

 Les points d’amélioration
Pas de couleur dans un dessin
(couleur dans un schéma)
 Les points forts
Proposer un zoom afin de mettre en
Le soin évidence les caractéristiques
tissulaires de chaque tunique
La fidélité
Échelle à indiquer (celle de la coupe
Les proportions globale)
Plan de coupe à indiquer (ici CT)
Le tracé continu
Coloration à indiquer (Hémalun
La mise en évidence des 4 Eosine)
séreuse
villosité
Sous muqueuse
musculeuse
tuniques muqueuse Orientation à indiquer (lumière du
TD)

ENCPB Promo 2023 61
villosité
Épithélium d’absorption (entérocyte)

Conjonctif de soutien
Muqueuse
Sous muqueuse  Les points d’amélioration

Proposer un zoom afin de mettre en
Musculeuse évidence les caractéristiques tissulaires
de chaque tunique
Séreuse
Échelle à indiquer (celle de la coupe
globale)
ENCPB Promo 2023
 Les points forts Titre : objet, MO, CT, coloration HE, GX,
Le soin échelle
La fidélité Orientation à indiquer
Les proportions
Le tracé continu
La mise en évidence des 4 tuniques et le zoom sur deux tissus
62
I. MICROSCOPIE
grêle
F. Entrainement

III. ETUDE DES CELLULES VÉGÉTALES
 épiderme supérieur non photosynthétique recouvert d'une

cuticule : l’épiderme constitue un tissu de revêtement limitant les
pertes d'eau.
 Un parenchyme palissadique formé de cellules parenchymateuses
rectangulaires et riches en chloroplastes, organites spécialisés dans
la photosynthèse.
 Des faisceaux cribro-vasculaires, tissus conducteurs contenant
des vaisseaux de xylème (gros vaisseaux dont la paroi cellulaire et
lignifiée) qui conduisent la sève brute (eau et sels minéraux) des
racines vers les autres organes, et des vaisseaux de phloème (plus
petits vaisseaux à paroi non lignifiée) qui conduisent la sève élaborée
(eau, protéines et sucres formés grâce à la photosynthèse) des
organes photosynthétiques vers les autres organes. Ces faisceaux
constituent les nervures de la feuille.
 La nervure principale présente également des tissus de soutien qui
maintiennent la forme de la feuille : du sclérenchyme (tissu de
soutien dans lequel les cellules présentent une paroi lignifiée) et
collenchyme (tissu de soutien dans lequel les cellules ont une paroi
pectocellulosique très épaisse).
 Un parenchyme lacuneux présentant des cellules elles aussi
photosynthétiques mais moins strictement organisées et des lacunes
intercellulaires où peuvent circuler les gaz.
 Un épiderme inférieur riche en stomates, assemblage de deux
cellules de garde ménageant une ouverture appelée ostiole par 64
laquelle les gaz (H2O, O2 et CO2 principalement) peuvent circuler

Il s’agit d’un
2. UN EXEMPLE DE TISSU : L’ÉPIDERME, UN TISSU DE REVÊTEMENT schéma
d’observation

B. OBSERVATION DE QUELQUES ORGANITES DE LA CELLULE VÉGÉTALE
1. MOUVEMENTS D’EAU, DÉFORMATION DE LA VACUOLE ET CHANGEMENT DE FORME DE LA CELLULE
 Cellule végétale
 Épiderme oignon
rouge
 Vacuole riche en
pigments rouges
hydrophiles
anthocyanes
 Noyau excentré
 Cytoplasme peu
volumineux
Cellule d’épiderme d’oignon rouge au MO X60 en turgescence ENCPB Promo 2023
 Paroi végétale
 Turgescence vs
plasmolyse Cellule d’épiderme d’oignon rouge au MO X60 en plasmolyse
ENCPB Promo 2023
A l'échelle de la cellule et des organites : exemple des variations de volumes 67
de la vacuole chez les cellules d’épiderme d'oignon rouge

ψS = -R x T x CS
Avec:
CS la concentration en solutés = osmolarité de la solution. Plus CS augmente, plus ψS diminue, donc plus l’eau est
attirée. ψS est l’opposé de π qui correspond la « pression osmotique » (si π est élevé, la pression est forte)
R la constante des gaz parfaits
T la température en Kelvin

2. Diversité des plastes : les chloroplastes
chloroplaste
Protoplaste : cellule végétale
débarrassée de sa paroi

Estimer la longueur d’une ostiole et
d’un chloroplaste
2. Diversité des plastes : les chloroplastes
chloroplaste
2 cellules de garde
un ostiole (ouvert
lorsque les cellules
de garde sont en
turgescence)

Observation au MO d’épiderme d’épinard (face abaxiale), GX600 70
2. Diversité des plastes : les amyloplastes
Strie d’accroissement

ENCPB Promo 2023
71
2. Diversité des plastes : les chromoplastes

Pigments dans la
vacuole ou dans
un plaste?
Anthocyane de la vacuole du pétale Lycopène du chromoplaste de la tomate ou du poivron

de rose
Cellule d’épiderme de pétale de rose au MO X600
ENCPB Promo 2023

Bilan :
▪ Cellules animale et végétale : cytoplasme et membrane plasmique,

caractéristique de toutes les cellules
▪ Cellule animale et végétale : noyau et autres organites, caractéristique de toutes les

cellules eucaryotes
▪ Cellule animale et végétale : au sein d'un organisme pluricellulaire donc
➢ Organisation en appareils/organes/tissus/cellules
➢ Spécialisation fonctionnelle de chaque cellule

Les échelles d’organisation des
organismes pluricellulaires
Atome Molécule Organite Cellule Tissu Organe Système Organisme
0,1nm 10 nm 1µm 10/100µm 1mm 1-10cm 10cm/1m

1m
Exemple :
Carbone Glucose Mitochondrie Entérocyte Epithélium Intestin Système digestif Souris

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SV-C LA CELLULE DANS SON ENVIRONNEMENT

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 1

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Objectifs Capacités attendues

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 3

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 4

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 5

Objectif: Observer un échantillon en

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 8

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Bactéries observées au microscope optique à partir d’un

X100 – Dermatologie, ENVT

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Campbell, 2012 10

On peut augmenter le pouvoir

B. Utiliser un microscope optique

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 13

Coupes fines (~ 5 µm), sur tissus fixés et

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

La préparation d’un échantillon dépend du type d’échantillon

1) Conserver les structures = fixer

3) Obtenir des échantillons contrastés

4) Monter entre lame et lamelle

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Peycru (2006)

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

- Dans le sens d'allongement de

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 18

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

 Garder toujours la même

 Ne pas repasser au même endroit

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Agrandissement = taille de l’objet

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Observé au MO avec un objectif x40

Grossissement total Taille réelle du champ

X400  0,4 mm soit 400 µm

Papier millimétré observé au MO

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Grossissement total Taille réelle du champ

X600  0,25 mm soit 250 µm

Papier millimétré observé au MO

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE 29

D’après Alberts (2003)

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Lodish (2000) Fibroblaste et fluorescence de la kératine des filaments intermédiaires

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Alberts, 2003

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE Alberts, 2003

 Observation d'actine d'un embryon de Drosophila

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

I. Méthodes d’étude en microscopie optique

II. Méthodes d’étude en microscopie électronique

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

• L’image se forme sur un écran

• Visualiser les molécules

POUR LA ✓ Fixation et contraste par des métaux

BCPST1- ENCPB- STÉPHANIE DALAINE

Cellule épithéliale de rein au MET