Premiere Partie :

METHODES D΄ETUDE
DE LA MORPHOLOGIE
DES CELLULES
La cellule est l’unité structurale et fonctionnelle
fondamentale des organismes vivants et en raison de
sa petite taille, la biologie cellulaire à, tout d’abord,
besoin d’en obtenir une image agrandie de bonne
qualité.

D΄où l΄emploi d΄un certain nombre

d΄appareillages dont les microscopes

Il existe toute une gamme de microscopes

I - LA MICROSCOPIE
 I - LA MICROSCOPIE
La microscopie est un ensemble de techniques permettant
d'obtenir une image des structures biologiques.

Qu΄est ce qu΄un
microscope ?
 Terminologie :
Le terme microscope vient du grec :
mikros = petit et scope = observer .

Définition :
Instrument d΄optique qui ;

✓ Donne une image grossie d’un petit

objet (grossissement)

✓ Sépare les details de celui–ci sur

l’image ( résolution)

✓ Rend les details visible à l’oeil ou

avec une camera
 Suivant la nature de la particule élémentaire impliquée,
la microscopie est divisée en deux grands groupes

La microscopie optique, La microscopie

aussi appelée photonique électronique

utilise des photons utilise des électrons

La microscopie
optique ou
photonique.
Historique :

Le premier microscope fut sans doute fabriqué par

Hans et Zacharias Janssen, deux fabricants de
lentilles néerlandais, en 1590, mais le modèle final fut
inventé par Antoine van Leeuwenhœk en 1664, puis
fut amélioré par Christian Huygens.
Présentation du microscope optique :
Le microscope photonique est constitué de deux
systèmes : système mécanique et système optique
 Principe et fonctionnement :

La microscopie optique est fondée sur l’utilisation de la

lumière et de lentilles optiques pour permettre
l’observation d’éléments non visibles à l’oeil nu.

Le principe est dans l’ensemble le même, une onde est

envoyée sur la préparation ou émise par la préparation .
Cette onde est captée par un objectif qui la concentre et
passe par un oculaire qui crée une image observable. Cette
image est soit observée à l'œil nu, soit photographiée, soit
enregistrée par caméra.
Fonctionnement du microscope photonique :
 La préparation est éclairée par une lampe. Les molécules à
observer vont interagir avec la lumière de plusieurs
façons :

➢ Soit en absorbant certaines longueurs d'onde de la lumière.

C'est la microscopie en lumière directe.
➢ Soit en provoquant un déphasage des différents rayons
lumineux. C'est la microscopie en contraste de phase.
➢ Soit en émettant de la lumière à une autre longueur d'onde
que celle d'origine. C'est la microscopie à fluorescence.
Le microscope est caractérisé par :
- Son grossissement ou puissance :
Egal au produit du grossissement ( ou puissance) de
l’objectif et de l’oculaire

- Son pouvoir de résolution :

La résolution d'un microscope désigne sa capacité à
séparer des détails très voisins.
la résolution du microscope optique est
fondamentalement limitée par la diffraction de la
lumière.
Types de microscopes optiques :
La microscopie optique regroupe:
➢Le microscope à fond clair

➢Le microscope à fond noir

➢Le microscope à contraste de phase

➢Le microscope à lumière polarisée

➢ Le microscope en fluorescence

➢Le microscope confocal à balayage

➢Le microscope à fond clair
✓ Le plus courant et le plus ancien
✓ Utilise des rayons lumineux (lumière visible)
illumination se fait par transmission
✓ l’observation de cellules vivantes ou mortes

✓ des coupes fines de préparations fixées

(1 à 5 µm d΄épaisseur)
✓ Permet un grossissement de 1000 fois
✓ Observation vitale et colorée
la qualité de l’image dépend du pouvoir séparateur qui donne la
résolution du microscope limitée par la longueur d’onde de la radiation
lumineuse. le pouvoir séparateur de ce microscope 0,2 µm
Principe du microscope à fond clair

l’œil reçoit
enfin l’image
agrandie.

la lentille de l’oculaire
apporte un deuxième
grossissement

La lumiere traverse la lentille de

l’objectif qui permet un premier
grandissement

La lumière traverse le spécimen

biologique (objet) par en dessous

une source lumineuse est

concentrée par une lentille
spéciale appelée condenseur
 ➢ Le microscope à fond noir
➢ Utilise les rayons lumineux dans un fond noir .

➢ Utilise un filtre annulaire ( accésoire ajouté au condenseur )

➢ Les zones de la préparation qui diffusent la lumière apparaissent

lumineuses ( claires ) sur ce fond noir.

➢ Utilisé pour l’observation des objets vivants

➢ Utilisé pour les éléments trop transparents.

➢ Les éléments observés apparaissent très brillants ( les flagelles, les

fibres ).

➢ N'est pas utilisé pour l'observation d'objets colorés.

➢ la source de lumière est oblique par rapport à la préparation

cellulaire.

➢ seul les rayons réfléchis sont captés par l’objectif

 Les
éléments
observés
apparaissent
très brillants

Seuls les rayons

diffractés
pénètrent dans
l'objectif

Les rayons provenant du

condenseur ne penetrent
pas dans l,objectif

Element d’optique ;
condenseur avec
diaphragme annulaire ;
cone de lumiere
 ➢ Le microscope à contraste de phase
➢ Ne nécessite pas de colorants et s’applique aux cellules
vivantes non fixées.
➢ Possède des systèmes optiques conçus pour exploiter les
propriétés de diffraction des cellules vivantes
Utilise deux filtres : anneau ou plaque de phase et
diaphragme annulaire

➢ Le principe est basé sur le fait que les structures

biologiques sont transparentes ( n’absorbe pas la lumière transmise)

➢ Nécessite un éclairage trés précis dit éclairage de Koehler

➢ Déphasage proportionnel à la différence d'indice de réfraction et

à l'épaisseur de l'objet traversé converties en intensité
lumineuse.

➢ A l’observation, on voit une image en noir et blanc où les

différentes structures apparaissent bordées de blanc d’un
côté et de noir de l’autre.
 Ces ondes interfèrent avec faisceau
d'ondes non réfractées. Image finale
constituée de différents degrés de
brillance ou d'extinction en fonction de
l'indice de réfraction de chaque point
de l'objet.

Quand objet réfracte ou diffracte la

lumière ↔ modification de la phase
et déviation des ondes lumineuses
vers région mince de la plaque de
phase.

Lumière qui ne traverse pas l'objet

reste intacte et est focalisée par
l'objectif sur l'anneau gris épais de la
plaque de phase qui absorbe une
partie du faisceau et change sa
phase.

Lumière incidente traverse

diaphragme annulaire et
focalisée en anneau circulaire sur
l'objet.
Le microscope à contraste de phase possède des systèmes
optiques conçus pour exploiter les propriétés de diffraction des
cellules vivantes. La lumière traversant les parties relativement
denses ou épaisses de la cellule est retardée par rapport à celle qui
traverse une région voisine plus mince. Il se crée ainsi des effets
d’interférences produits par la recombinaison de ces deux séries
d’ondes donnant des images fortement contrastées.
 (A) (B)

Images obtenues à l'aide de la microscopie

optique ordinaire (A) et à contraste de phase (B)
En résumé
Microscope à fond noir Microscope à fond clair