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TRAVAUX PRATIQUES
DE BIOLOGIE CELLULAIRE
Semestre 1
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SOMMAIRE
- Recommandations
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RECOMMANDATIONS
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UTILISATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE,
REALISATIOND’UNE PREPARATIONMICROSCOPIQUE
PARTIE THEORIQUE
La celluleest l’unité morphologique de tout être vivant qu’il soit uni ou pluricellulaire.
La taille moyenne d’une cellule est de 2 à 3 m pour une bactérie et de 5 à 30 m pour une
cellule animale c’est pour cela que l’utilisation du microscope photonique est nécessaire.
L’étude de ces cellules et celle d’autres organismes dont on ne soupçonnait même pas
l’existence est rendue possible.
Ainsi, les manipulations en biologie cellulaire nécessitent l’usage presque constant du
microscope photonique. Celui-ci servira à l’observation d’images considérablement agrandies
d’un matériel biologique donné.
Introduction
Dans le monde vivant, l'organisation cellulaire se divise en 2 groupes: La cellule eucaryote et
la cellule procaryote.
La cellule eucaryote contient un vrai noyau (présence d'une enveloppe nucléaire qui sépare le
matériel génétique du reste de la cellule), et la présence de plusieurs organites. Alors que, la
cellule procaryote présente un matériel génétique qui est diffus dans l'hyaloplasme, et aussi
une absence d'organites cytoplasmiques à part les ribosomes.
La cellule eucaryote est une unité de base fonctionnelle qui peut former un organisme
unicellulaire ou protiste, soit entrer dans la constitution des organismes pluricellulaires, elle
est aussi soit végétale, soit animale.
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- La vis micrométrique : elle communique à la platine un mouvement vertical
lent et de faible amplitude, pour une mise au point précise (c’est à dire
l’obtention d’une image nette du matériel biologique).
c- Le tube optique, porte dans sa partie supérieure les oculaires et, dans sa partie
inférieure, le revolver (porte objectif), pièce tournante portant 4 objectifs qui sont
ainsi rapidement interchangeables.
d- La platine qui supporte la préparation à observer et qui percée d’une ouverture
circulaire permettant aux rayons lumineux d’arriver jusqu’à la préparation qui sera
ainsi examinée par transparence. Elle est pourvue d’un chariot qui maintient la
préparation et permet son déplacement dans un mouvement latéral ou antéro-
postérieur. Ceci facilite l’examen méthodique et complet du matériel biologique. Pour
certains microscopes, ce chariot est remplacé par des valets qui maintiennent la
préparation en place.
C’est l’ensemble des systèmes nous permettant d’agrandir l’image d’un matériel
biologique à examiner. Elle comporte : l’appareil d’éclairage, les oculaires et les
objectifs.
a- La lampe, elle est incorporée dans le pied et joue le rôle d’une source
lumineuse.
c- Les objectifs désignent les lentilles placées près du matériel biologique donc
de la platine. Ces lentilles ont également un pouvoir grossissant qui varie selon
les objectifs employés. Sur votre appareil vous trouverez un objectif : x4, x10,
x40 et x100 (objectif à immersion).
On utilise un objectif à immersion lorsque l’observation que l’on veut faire exige
des grossissements importants et une définition particulièrement bonne des
images. La lentille frontale est reliée à la partie supérieure de la préparation par
une goutte du liquide à immersion, possédant le même indice de réfraction que le
verre. Le liquide permet une utilisation complète de l’ouverture de l’objectif, qui
donne des images bien plus nettes que les objectifs ordinaires encore appelés
objectifs à sec. L’objectif x100 n’est pas utilisé dans les TP de Biologie (S1).
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Figure 1 : Différentes parties du microscope optique ou photonique.
Le microscope est conçu pour observer un matériel biologique par transparence. C’est un
instrument très coûteux et très fragile, doit être manipulé avec beaucoup de précautions, c’est-
à-dire en évitant les chocs et les mouvements brusques.
Le matériel biologique à examiner doit être obligatoirement très mince. Il doit être placé sur
une lame de verre d’une épaisseur déterminée. Pour des raisons optiques et biologiques,
notamment pour éviter la déshydratation, le matériel biologique est généralement monté dans
une goutte de liquide (eau, réactif, solution de colorant…) appelé liquide de montage. La
présence de lamelle est indispensable pour une observation de bonne qualité.
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Figure 2 : Réalisation d’une préparation microscopique
Pour arriver à observer les images agrandies d’un matériel donné, on procède à ce qu’on
appelle une mise au point qui se réalise selon les étapes suivantes :
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j- Régler à l’aide du diaphragme iris l’intensité de la lumière jusqu’à obtention d’un
éclairage optimal.
k- Calculer le grossissement employé (Gocc X Gobj)
L’objet observé est trop éclairé et peu Diminuez la quantité de lumière en fermant le
net diaphragme
J’observe des tâches noires Ce sont des bulles d’air, déplacez légèrement la
lame tout en observant
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III- MANIPULATION DU MICROSCOPE OPTIQUE
Remarques importantes:
- il faut toujours bien placer le microscope optique devant soi, avant de le manipuler,
donc avant de l'allumer.
- Les étapes qui vont être cités ci-dessous doivent être obligatoirement suivies durant
toutes les séances de T.P:
- Brancher le microscope optique, puis l'allumer.
b. Utilisation des objectifs : Tourner le revolver à objectif jusqu'à l'objectif 10, puis
ajuster l'image si nécessaire avec la vis micrométrique, après passer à l'objectif 40.
d. Grandissement
Le grandissement (G) est égal à la dimension du dessin de l'objet (D) divisée par la
dimension réelle de l'objet (d) observé.
G = D/d
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Le montage
entre lame
et lamelle
Nom et prénom :
N° de groupe :
Titre du TP
N° de la séance de TP
10
Titre du dessin :
X μm
e:
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B. PARTIE PRATIQUE
BUT DU TP
- Réaliser une préparation microscopique de l’épiderme interne d’écaille d’oignon pour
montrer que tous les êtres vivants sont constitués de cellules et que la cellule est l’unité
fondamentale d’un organisme vivant.
- Identifier les principales parties d’une cellule, et apprendre à faire une préparation
microscopique et à l’observer au microscope optique.
* Protocole expérimentale :
Découper sur la face interne de l’écaille du bulbe d’oignon à l’aide d’une lame de
rasoir ou un scalpel, un petit carré de quelques mm de côté. Prélever le avec une pince et
déposer le directement sur une lame propre, avec une goutte de liquide :
a- Dans une goute de rouge neutre :
- Observation de la cellule à l’objectif 10.
- Dessin d’une cellule observée à l’objectif 40
- Qu’observe-t-on lors de ce montage ? Quelles sont les différences observées entres
les objectifs 10 et 40 ?
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b- Dans une goute de Lugol :
- Observation de la cellule à l’objectif 10.
- Dessin d’une cellule observée à l’objectif 40
- Quel est l’intérêt du montage avec le Lugol?
Quelles sont les conclusions que vous tirez des ces différents montages?
Réactif : Lugol
Le lugol est une solution aqueuse iodo – iodure (1g d’iode + 2g d’iodure de potassium dans
100ml). L’iode tue les cellules en provoquant une coagulation fine du cytoplasme et du noyau
(c’est un fixateur) et en teintant en jaune certains éléments (c’est un colorant).
OBSERVATION :
- la paroi squelettique ou pectocellulosique (incolore),
- le noyauet
-les cytoplasmes granuleux : selon sa localisation, on distingue
a-cytoplasme pariétal ou périphérique (contre la paroi),
b- cytoplasme péri nucléaire (autour du noyau) et
c- cytoplasme trabéculaire
La membrane plasmique n’est pas apparente car elle est étroitement collée
contre la paroi squelettique.
A faire :
Dessiner une cellule avec le départ des autres cellules à l’objectif x40, en apportant le
complément d’informations issu de cette technique de coloration.
* Protocole expérimental
Avec un ongle bien nettoyé, raclez doucement l'intérieur de votre joue, déposez la
matière grise recueillie dans la goutte du liquide de montage, puis la délayer avec une aiguille.
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- Dans une goutte de bleu de méthylène:
° Observation à l'objectif 10 et 40.
° Dessins de quelques cellules à l'objectif 40.
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ORGANISATION GENERALE DE LA CELLULE
Cette séance de TP a pour but de vous permettre de définir quelques éléments constitutifs de
la cellule végétale.
1. Introduction
Les organites sont des structures subcellulaires, de différentes physiologies, et de
morphologies variables. On les retrouve disséminés autour du noyau.
I. La mitochondrie
La mitochondrie est un organite très important de la cellule eucaryote, elle se présente
sous plusieurs formes: en bâtonnet, ovoïde ou filament. La mitochondrie est formée d'une
membrane externe et d'une membrane interne, séparées par un espace osmiophobe appelé
chambre externe.
Le fragment d'épiderme prélevé est placé à la surface du réactif contenu dans un verre
de montre, qu'on recouvre avec un autre verre de montre, pendant 30 minutes, afin d'éviter
l'évaporation.
Remarque: Le vert Janus est un réactif bleuâtre qui colore les mitochondries en vert: c'est un
colorant métachromatique. Il peut se présenter dans la cellule sous deux formes: une forme
oxydée, verte au niveau des mitochondries; et une forme non oxydée incolore, au niveau de
l'hyaloplasme.
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II. Les plastes
Ils sont présents seulement chez les végétaux, il y a plusieurs types: Les chloroplastes
sont responsables de la photosynthèse (Transformation de l'énergie solaire en énergie
chimique), ils ont des pigments en vert: La chlorophylle. Il y a aussi les chromoplastes
rencontrés dans les pétales et les fruits de couleur jaune-rouge, les amyloplastes qui sont des
réserves d'amidon. .
1. Les chloroplastes
Les chloroplastes sont le siège de la photosynthèse: synthèse des glucides à partir du
CO2 et de H2O en utilisant l'énergie lumineuse. Vu au microscope optique, le chloroplaste
apparaît être formé de minuscules grains pigmentés appelés granums qui sont enrobés dans
une substance fondamentale ou stroma, Au microscope électronique, le granum apparaît être
constitué d'un empilement de disques de même diamètre (thylakoïdes granaires ou lamelles
granaires). Le chloroplaste est enveloppé par une double membrane osmiophile avec un
espace clair ou espace intermembranaire. Le stroma ou substance fondamentale peut
renfermer des inclusions lipidiques osmiophiles ainsi que des enclaves d'amidons se
présentant sous forme de plages claires.
Ainsi, chez certains végétaux inférieurs, les plastes ne présentent pas de structure
granaire, chez les procaryotes, comme c'est le cas pour certaines bactéries, le pigment
photosynthétique est enfermé dans des vésicules dont la structure est plus simple que les
Plastes.
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ANNEXES FICHES TECHNIQUES
TP de BC SV/S1
Séance 1 : Utilisation du microscope photonique
But de la séance :
Connaître le nom et le rôle de toutes les composantes du microscope optique ou photonique.
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A faire :
a-Inscris le nom de chaque partie du microscope sur le dessin (page 18) et sur le tableau suivant ainsi que le rôle
de chaque partie.
3 Objectifs
4 Valets
5 Diaphragme ou
condensateur
6 Lumière
7 Pied
8 Vis micrométrique
9 Vis macrométrique
10 Platine
11 Potence
12 Oculaire
Champ microscopique :
Grossissement :
Grandissement :
L’échelle :
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CORRIGÉ
A faire :
a-Inscris le nom de chaque partie du microscope sur le dessin (page 16) et sur le tableau suivant ainsi que le rôle
de chaque partie.
L’échelle : ……………………………..