UNIVERSITE IBN ZOHR

FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE

TRAVAUX PRATIQUES
DE BIOLOGIE CELLULAIRE

Élaboré par : Pr. Bouchra CHEBLI

2023-2024
 RECOMMANDATIONS IMPORTANTES
Les étudiants sont priés de :
- Arriver à l’heure pour ne pas perturber le déroulement de la séance ;
- Travailler par binôme ;
- Porter une blouse blanche propre ;
- Préparer la séance de TP : lire attentivement le texte du fascicule correspondant au
TP
- Nettoyer sa paillasse à la fin de chaque séance.
- Se munir de matériel de dessin : feuilles de dessin blanches non quadrillées format
A4,crayon graphite HB, gomme, taille, règle, boite de couleur.
Le comportement durant le TP, le fait d’arriver à l‘heure, l’assiduité et la propreté seront
notés.

Réalisation des copies

Les copies doivent être réalisées entièrement au crayon ;
Sur chaque feuille doit figurer :
- En haut et à gauche votre nom et prénom, votre numéro de groupe, en haut et à droite la date
- Au milieu le thème et le titre du TP.
Ne jamais dessiner recto-verso, une seule face du papier doit être employée pour une bonne
présentation ;
D’une façon générale, le dessin doit reproduire fidèlement l’image que donne le microscope
(agrandir l’image en lui conservant ses proportions et sa disposition) et donner la valeur du
grossissement ;
Deux dessins par feuille au maximum ;
Tout dessin doit être accompagné d’une légende complète, sinon le travail n’a aucune valeur. Les
flèches doivent être, dans la mesure du possible, toutes situées du même côté du dessin à droite
en général et dirigées vers le dessin, les écrire horizontalement. Les flèches doivent être tracées à
la règle et parallèlement les unes aux autres.
Le compte rendu sera noté
Les préparations microscopiques et la manipulation correcte du microscope après la séance de
démonstration seront notées.

En fin de TP, toutes les lames et lamelles devront être rassemblée pour être nettoyées. NE JETEZ
RIEN A LA POUBELLE NI DANS LES EVIERS

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 TP 1. INITIATION A LA MICROSCOPIE OPTIQUE

1- Définition :
Le mot microscope est composé de 02 racines étymologiques différentes, du Grec (micro= petit
et scopein= voir).
Le microscope est un instrument optique permettant d’observer des objets très minces (qui
peuvent être traversés par la lumière) en les grossissant (32 à 1000 X). L’objet à observer, appelé
préparation est disposé entre une lame et une lamelle de verre dans une goutte d’eau ou de
solution de préparation ou réactif ou colorant selon ce que l’on veut observer.
Il existe d’autres microscopes, dits microscopes électroniques, qui permettent des grossissements
plus importants.
Fonctionnement du microscope :
La plupart des cellules sont très petites pour être observées à l’œil nu. Le microscope optique
permet d’obtenir des grossissements de l’ordre de 1000.
Dans la microscopie optique classique, la préparation à observer est déposée sur la platine du
microscope.
Posée sur une plaquette de verre appelée porte objet ou lame et couverte d’un couvre objet ou
lamelle, la préparation est maintenue en place par deux pinces ou valets.

1. Oculaire
2. Tube oculaire
3. Tourelle revolver
4. Bras ou potence
5. Objectif
6. Valet
7. Platine
8. Condensateur
9. Vis macro métrique
10. Vis micrométrique
11. Source lumineuse

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La lumière fournie par une lampe ou miroir, est concentrée par le condensateur avant de traverser
l’objet. La lumière transmise est captée par l’un des objectifs du microscope. Ces objectifs sont
montés sur une pièce tournante appelée tourelle revolver.
Finalement l’image agrandie par l’objectif parcourt le tube porte oculaire et est encore magnifiée
par l’oculaire sur lequel l’observateur pose son œil.

Le grossissement de l’oculaire multiplié par celui de l’objectif fournit le grandissement

total de l’image par le microscope !!!!
La mise au point s’effectue à l’aide d’une ou plusieurs vis de réglages : vis macro métrique pour
le réglage grossier et la vis micrométrique pour le réglage fin.

* Remarques :
1) Il est à signaler que l’examen des échantillons biologiques au microscope optique doit
répondre à deux exigences :
- Les objets à examiner doivent être minces
- Leurs différents éléments doivent présenter un certain contraste.
2) Il est à noter qu’un bon éclairage est essentiel si on veut faire de bonnes observations.
Selon un principe d’optique on obtient une meilleure résolution quand le condensateur et
l’objectif sont couplés, c'est-à-dire quand ils ont la même ouverture numérique. Pour y arriver il
suffit :
- de faire la mise au point sur le spécimen à observer.
- de fermer le diaphragme et de l’ouvrir lentement jusqu’à ce que la lentille postérieure
de l’objectif soit remplie de lumière.

Fiche technique
Utilisation du microscope
 placez le microscope face à vous, bien droit;
 sélectionnez le plus petit objectif;
 éclairez la lampe;
 placez la lame à observer au centre de la platine;
 fixez la lame;
 mettez au point au faible grossissement;
 explorez la préparation et vous choisissez le meilleur endroit que vous centrez;
 mettez en place l'objectif moyen;
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 faite la mise au point au moyen grossissement en remontant l'objectif;
 passez au fort grossissement et recommencez la mise au point;
 sélectionnez le meilleur grossissement pour réaliser un dessin d'observation

DÉTERMINATION DU GROSSISSEMENT TOTAL

ET DÉTERMINATION DU DIAMÈTRE DU CHAMP MICROSCOPIQUE

1. Détermination du grossissement total :

Dans un microscope photonique, les rayons lumineux passent à travers un objet (dont la minceur
le rend transparent. L’image de cet objet passe ensuite à travers deux systèmes de lentilles
grossissantes, soit l’objectif et l’oculaire. L’image est donc agrandie deux fois. Pour connaître le
grossissement total, il s’agit de multiplier la puissance de l’oculaire (qui est toujours de 10) par la
puissance de l’objectif (4, 10 ou 40). Donc, lorsque vous utilisez l’objectif 4X, le grossissement
total est de 40X. Cela signifie que vous voyez l’objet 40 fois plus gros qu’il est en réalité.

2. Détermination de la taille du champ :

Vous allez mettre en pratique les consignes concernant la mise au point du microscope afin de
déterminer le diamètre du champ microscopique obtenu à chacun des grossissements.
On appelle le champ microscopique la surface (de forme circulaire) qu’on aperçoit en regardant
dans le microscope.
RAPPEL : le diamètre d’un cercle est une ligne qui va d’un côté à l’autre du cercle en passant
par le centre. Pour mesurer le diamètre du champ du microscope à chacun des grossissements,
nous utiliserons un petit morceau de papier millimétrique monté sur une lame.

Étapes à suivre : (en commençant avec l’objectif 40X, donc au plus faible grossissement) : a)
Faites les ajustements et la mise au point décrits dans la partie B (p. 12) afin d’apercevoir une
image parfaitement claire du papier millimétrique à un grossissement total de 40X. b) Ajustez la
position du papier de façon à ce qu’une ligne verticale soit placée à l’extrême gauche du champ
(comme si vous placiez le «zéro» de votre règle à l’extrême gauche d’une ligne pour la
mesurer!). (Voir Fig. 2)

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 Ajustez la position du papier de façon à ce qu’une ligne verticale soit placée à l’extrême gauche du
champ (comme si vous placiez le «zéro» de votre règle à l’extrême gauche

Figure – Façon de positionner le papier quadrillé pour permettre de mesurer le diamètre du

champ microscopique. (Le champ = le cercle éclairé ; le quadrillé = l’objet observé ; la zone
grise est invisible au microscope car à l’extérieur du champ).

QUESTION :
Complétez le tableau suivant,
Tableau 1 : Grossissements et diamètre du champ microscopique avec différents objectifs

Grossissements Diamètre du champ microscopique (en

de l’oculaire de l’objectif TOTAL (en mm)

Compte rendu : des questions peuvent vous être posées par les responsables, sinon la qualité de
vos préparations témoignera de votre maitrise du microscope.

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 TP 2. ETUDE MICROSCOPIQUE DE CELLULES
I. ETUDE MICROSCOPIQUE DE CELLULES ANIMALES
1. OBSERVATION DES CELLULES DE FOIE (HÉPATOCYTES)
Un matériel pratique pour l’observation microscopique des cellules animales est constitué par le
foie frais de poulet.

MATÉRIEL ET RÉACTIFS
- Morceau de foie, microscopes, lame et lamelles, spatule, papier essuie-tout, glycérol, bleu de
méthylène 0,01%.

MODE OPÉRATOIRE
- Couper un petit morceau de foie et gratter avec une spatule la surface de la section de façon à
déposer sur une lame de microscope un échantillon de la taille d'une lentille au maximum. -
Dissocier au mieux les cellules avec la spatule puis recouvrir d'une goutte de bleu de méthylène.
- Laisser agir environ une minute.
- Déposer une goutte de glycérol et bien mélanger avec la spatule.
Le glycérol rend possible l’observation de la préparation pendant une longue durée sans risquer
l’évaporation du milieu de montage.
- Poser une lamelle sur l’échantillon et placer l’ensemble sur une feuille de papier essuie-tout.
- Utiliser une autre feuille pour presser fermement sur la lamelle de façon à dissocier les cellules
en prenant garde de ne pas casser la lamelle. Le papier sert à essorer le trop plein de liquide qui
s’échappe lors du pressage.
- Essuyer soigneusement la surface de la lamelle et observer au microscope.
- Rechercher les régions de la préparation où les cellules sont dissociées et suffisamment
colorées pour faciliter leur observation.

RÉSULTATS
Dessiner, mettre un titre et une légende et décrivez vos observations :
- Forme et taille des hépatocytes, forme et nombre de noyaux par cellule, présence de nucléole,
présence de granulations etc.

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2. OBSERVATION DES CELLULES DE L’ÉPITHÉLIUM BUCCAL

MATÉRIEL
Microscope, lames, lamelles, bleu de méthylène, pissette avec eau ordinaire, compte-gouttes,
cuve à coloration, cristallisoir avec eau de Javel pour lames et lamelles usagées, bec Bunsen.

PRÉLÈVEMENT ET COLORATION
- Se rincer d’abord, la bouche a l’eau
- Frotter avec un doigt propre, la paroi interne de la joue.
- Déposer le produit recueilli sur une lame et la placer sur le support de la cuve à coloration.
- Recouvrir sans attendre avec quelques gouttes d'hématoxyline-éosine ou de bleu de méthylène
- Rincer à l'eau après 5 minutes.
- Avec un papier absorbant, essuyer le dessous et le pourtour de la lame.
- Recouvrir la préparation d'une lamelle et placer la lame sur la platine du microscope.

OBSERVATIONS
Dessiner, mettre un titre et une légende et décrivez vos observations : Fort grossissement:
coloration de différents compartiments cellulaires, présence de granulations, aspect et taille des
cellules, aspect de la membrane cellulaire, etc. Remarques
- Si la préparation est bonne, on peut observer un ou deux grains brillants dans le noyau. Il s'agit
des nucléoles (ensemble de fibrilles et granules, producteurs de ribosomes).
- En réalité, ces cellules constituent un tissu (elles sont jointives). On peut les observer isolées,
car au frottement, elles ont été détachées de ce tissu.

1°) Une cellule simple : la cellule épithéliale buccale humaine

La cavité interne de la bouche est recouverte d’un épithélium pluristratifié dont certaines
cellules se desquament (se détachent) : les cellules buccales.

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Activité 1. Observation d’une cellule buccale

Travail à effectuer :
a. Prélevez des cellules buccales dans votre bouche à l’aide d’une tige stérile en coton
(Jetez le coton dans la poubelle)
b. Montez quelques cellules déposées entre lame et lamelle dans du bleu de méthylène.
c. Réalisez l’observation microscopique, au grossissement approprié, de ces cellules.
d. Réalisez ensuite un dessin d’observation sur votre compte rendu, légender le dessin et
précisez le grossissement.

.
Cellule buccale (Colorée au bleu de méthylène)

1 – À l’aide de l’ensemble des informations découvertes, complétez le tableau suivant :

Tableau comparatif des différentes cellules étudiées

Cellule du Cellule Cellule de

foie d’épithélium levure
buccale humaine
Membrane
cytoplasmique
Cytoplasme
Organites
-Noyau

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 TP 3. L’osmose

Les échanges d’eau et de substances ont un rôle capital dans le fonctionnement des organismes.
Les mouvements d’eau et des différentes substances dans l’organisme se réalisent en fonction de
leurs concentrations :
Les lois physiques sont les mêmes qu’en dehors du vivant, et les systèmes évoluent vers un
équilibre des concentrations.
La diffusion est un déplacement de molécules, d’ions, d’une zone de plus forte concentration
vers une zone de moins forte concentration. Elle ne demande pas d’énergie.
Dans l’organisme, les deux milieux de concentrations différentes sont séparés par une membrane
plus ou moins perméable.
L’osmose : Si la membrane est semi- perméable, c’est l’eau qui se déplacera du milieu le moins
concentré en solutés (solution hypotonique) vers la solution la plus concentré en solutés (solution
hypertonique). Ce phénomène est appelé osmose.

Turgescence et plasmolyse : Deux solutions qui ont une concentration en solutés identiques (et
sont donc en équilibre osmotique) sont dites isotoniques.
Dans tous les cas, le système évolue de manière à se rapprocher de l’isotonie.
Si le milieu extracellulaire est hypotonique par rapport au milieu intracellulaire, l’eau va avoir
tendance à entrer dans la cellule :
La pression dans la cellule devient alors élevée. La cellule est dite turgescente. Si la pression
intracellulaire devient élevée, la membrane se rompt, le contenu cellulaire se disperse : la cellule
meurt.
À l’inverse si le milieu extracellulaire est hypertonique par rapport au milieu intracellulaire,
l’eau va avoir tendance à quitter la cellule : la cellule est dite plasmolysée.

NB : Ces phénomènes sont réversibles tant que les membranes ne sont pas rompues.

Manipulations

Cas de la cellule d’oignon : plasmolyse et turgescence.

PRÉPARATION DES LAMES :

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1- Sur une écaille d'oignon, on prélève un fragment d'épiderme rouge (il doit être le plus
fin possible), puis on l'étale soigneusement sur une lame, dans une goutte de rouge neutre. On
recouvre le tout d'une lamelle en évitant la formation de bulles d'air.
2- Sur une écaille d'oignon, on prélève un fragment d'épiderme rouge (il doit être le plus
fin possible), puis on l'étale sur une lame, dans une goutte de solution concentrée de NaCl. On
recouvre le tout d'une lamelle.
3- Après observation, sur la même préparation précédente on ajoute quelques gouttes
d’eau distillée pour observer ce qu’il se passe.

OBSERVATIONS :

Faible et moyen grossissement : pour centrer et repérer les endroits les plus favorables à
l'observation. On constate que ces cellules sont jointives et forment donc un tissu.

Fort grossissement :
Résultat 1 L'intérieur de la cellule est occupé par une vacuole colorée en rose rouge.
Le cytoplasme est très réduit, à peine visible et se situe entre la vacuole et la membrane, à la
périphérie de la cellule. Il contient le noyau. La membrane plasmique est plaquée contre la paroi
pectocellulosique très épaisse et rigide.
L'intérieur de la cellule est occupé par une énorme vacuole colorée en rose rouge, qui occupe
presque tout le volume de la cellule, car elle est gonflée d'eau. On dit que ces cellules sont
turgescentes.

Résultat 2 Plaçons maintenant sur la lame, au contact de la lamelle, 1 ou 2 gouttes de

solution concentrée de NaCl.
Les cellules d'oignon sont maintenant en milieu très concentrées. Après 2 à 3 minutes, on
constate que les vacuoles sont devenues très petites. On dit que ces cellules sont plasmolysées.

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 Echanges d’eau dans un tissu de l’épiderme de l’oignon

Compte rendu :
Attendre le responsable pour lui montrer les trois stades, la préparation sera notée
Faire un dessin légendé des trois stades.

Cas des globules rouges : Hémolyse et plasmolyse des hématies

Cette partie sera réalisée ou non en fonction de la disponibilité en échantillon sanguin.

La pression osmotique du plasma sanguin est d'environ 8 bars à 37°C, due surtout aux ions
chlore et sodium. Les globules rouges sont en équilibre osmotique avec le plasma. La
membrane plasmique étant tout à fait perméable à l'eau, l'eau pénétrera ou sortira des cellules
dans le sens de son gradient de concentration.
Hémolyse
Un globule rouge placé dans l'eau pure subit une pression osmotique considérable. En absence
de contre-pression appliquée dans le cytoplasme, l'eau pure (hypotonique) diffuse vers
l'intérieur de la cellule (hypertonique) à travers la membrane. L'entrée massive d'eau dans
l'hématie entraîne le gonflement puis l'éclatement du globule rouge, il y a hémolyse des
cellules.
Plasmolyse
Réciproquement, si les globules rouges sont placés dans une solution hypertonique, ils se
rétracteront. Le milieu extérieur est hypertonique entraînant la sortie de l'eau des hématies et
donc le phénomène de plasmolyse.
TRAVAIL DEMANDÉ RECHERCHE, OBSERVATION ET DESSIN DES CELLULES
PLASMOLYEES ET CELLULES EN TURGESCENCES.

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