LA CYTOMÉTRIE EN

FLUX

 MATY DIALLO
 MARIE DIAW
 FATMA SAALIHATOU NIANG
 SOMMAIRE

Introduction

Principes de la méthode

Appareillages

Applications

Avantages et inconvénients

Conclusion
INTRODUCTION

La cytométrie en flux (cmf) est une technologie polyvalente, qui

permet de quantifier la fluorescence et les caractéristiques
structurelles des particules (le plus souvent des cellules). Elle
remplace progressivement, dans les laboratoires d’immuno-
hématologie, le microscope à fluorescence pour effectuer
rapidement des analyses sur un grand nombre de cellules en
suspension.
 PRINCIPE DE LA MÉTHODE

o La cytométrie en flux est une technique qui permet de mesurer, sur une suspension de particules
(cellules, bactéries, parasites ..), les caractéristiques individuelles de chaque particule telles que la
taille, la forme et la complexité grâce a un système optique etudiant la lumière transmise et la
lumière defractée et ou réemise par un fluorochrome . les cellules en suspension passent une à
une devant un ou plusieurs faisceau(x) laser et des détecteurs captent des signaux émis par chaque
cellule, tels que : la lumière diffusée aux petits angles (forward scatter, FSC) qui renseigne sur la
taille des particules la lumière diffusée à 90 degrés (side scatter – SSC) qui renseigne sur la
forme, la structure interne et la granularité des particules.
o La lumière du laser va également exciter des fluorochromes préalablement couplés à des anticorps
monoclonaux capables de reconnaître et fixer certaines protéines. Sachant que les fluorochromes
réémettent la lumière à différentes longueurs d’onde (loi de stoke), un même laser peut activer
jusqu’à cinq fluorochromes qui donneront cinq informations différentes. Un système de filtre
optique et de photomultiplicateur va permettre de collecter la lumière propre à chaque fluorochrome
et de la quantifier. Il sera alors possible d’évaluer si une molécule est présente à la surface de telle ou
telle cellule et également de donner l’intensité de son expression.
 APPAREILLAGES

Les principaux composants utilisés dans les cytomètres en flux sont : l’

électronique, l’informatique, l'optique et la fluidique.

• SYSTÈME OPTIQUE: Il est constitué de la source lumineuse laser et un jeu de

filtres et miroirs qui permettent le cheminement de la lumière diffusée par les
cellules jusqu’aux photodétecteurs convertissant l’influx lumineux en signal
électrique.
 • SYSTÈME FLUIDIQUE
Il permet d’aspirer la suspension cellulaire dans la
chambre d’analyse. L’hydrofocalisation produit son
entraînement passif grâce à un second flux de gainage
et permet un alignement et un défilé à grande vitesse
des cellules une à une devant le système optique de
détection.
 Il convertit les signaux optiques ou lumineux
(photons) en signaux électriques (volts) par
les photomultiplicateurs. Puis, il y’a la
conversion analogique (volts) en signaux
numériques (canaux).

• SYSTÈME ÉLECTRONIQUE
 • SYSTÈME INFORMATIQUE
Le signal recueilli par les photodétecteurs est
numérisé, stocké et analysé. La présentation des
résultats se fait sous la forme de graphiques,
histogrammes bi ou multiparamétriques qui font
apparaître sous forme de point les différentes
populations cellulaires.
 APPLICATIONS

• EN MÉDECINE

Phénotypage plaquettaire Phénotypage HLA Hématologie

 • AUTRES
Suivre une population de cellules parla taille et la granulosité du cytoplasme;
Evaluer la présence de protéines membranaires sur des cellules vivantes;
Trier des cellules vivantes selon l'expression de ces marqueurs;
Evaluer la présence de protéines cytosoliques sur des cellules perméabilisées;
Suivre un gène rapporteur fluorescent après transfection;
Evaluer la viabilité d'une population de cellule, sa mortalité et le type de mort (apoptose
ou nécrose).
 AVANTAGES ET INCONVENIENTS

 AVANTAGES

VITESSE D’ACQUISITION: analyse rapide d’un grand nombre de cellules, meilleure approche
statistique (1000 cellules par seconde)

L'ANALYSE SIMULTANÉE: de plusieurs paramètres: la CMF eut analyser les cellules sur plusieurs
paramètres, et définir des sous-populations homogènes pour les regrouper selon des critères choisis

 LE TRI : les cellules peuvent être isolées avec des taux de pureté superieurs à 99%.
  Inconvénients
 Les cellules doivent être en suspension;

 Le nombre de cellules doit être de l'ordre de quelques centaines de milliers au minimum;

 On ne dispose pas d'image des cellules analysées;

 L'analyse étant qu'à un unique instant donné, on ne peut pas faire de véritable étude cinétique
portant sur une même cellule;
RÉSUMÉ
 CONCLUSION

• En conclusion, l'apport majeur de la cytométrie est de pouvoir aborder les populations cellulaires
dans leur grande diversité et complexité. Il serait en effet aujourd'hui ridicule de limiter ces
systèmes à des ensembles homogènes et uniformes.