Compte rendu de manipulation n°2

Isolement et identification des

salmonelles

Elaborée par : Wissal Thabti & Nour Yahyaoui

& Abdallah Zellama

Enseignante : BEN ABDALLAH D

2022/2023
 I. Définition :
La salmonelle est un genre de bacilles Gram négatifs de la famille des Enterobacteriacea.
Ces bactéries sont susceptible de provoquer une intoxication alimentaire.
L’infection après ingestion d’aliment contaminés,
principalement les œuf et la volaille insuffisamment cuits.

La gélose Salmonella Shigella (SS) :

est un milieu d’isolement sélectif, inhibant les bactéries à Gram positif et utilisé pour la recherche
des Salmonella dans les selles.
La présence de lactose et de rouge neutre permet de connaitre le caractère lactose des bactéries.
 colonies roses/rouges : acidification du milieu par fermentation du lactose = lactose +
 colonies incolores ou jaunes : pas d’acidification du milieu = lactose –
Le thiosulfate de sodium est une source de souffre à partir de laquelle certaines bactéries forment
du sulfure d’hydrogène (H2S). Ce dernier réagit avec les ions ferriques pour former un précipité
noir de sulfure de fer.
 colonies à centre noir : formation de sulfure d’hydrogène = H2S +
 colonies sans centre noir : pas de formation de sulfure d’hydrogène = H2S –

Colonie 2
Colonie 1

 On a choisi ce milieu sélectif car il contient Les sels biliaires

associés au vert brillant inhibent la culture des bactéries à
Gram positif
 II. Teste macroscopique :

Colonie 1 Colonie 2
Couleur Incolore à centre noir Incolore

Taille Grosse Moyenne

(1 à 5 mm) (1 à 3 mm)
Forme Circulaire Circulaire

Contour Régulier Régulier

Opacité Transparent Transparent

III. Examen microscopique :

La colonie choisie sur le milieu SS  colonie 1
Car on est en train d’isoler la bactérie salmonelle, et les Salmonelles ont des
colonies incolores au centre noir
 A partir de la culture pure repiquée sur gélose nutritive :

Après 3 jours
 1. Examen à l’état frais :
o Frome : bacille
o Mobilité : immobile

2. Coloration de Gram :
suite à l’observation au microscope optique , les salmonelles sont des
bacilles Gram (-)

Observation Résultats
Forme Bactérie sous la Bacille
forme de bâtonnet
allongés
Gram Bacille à couleur Gram (-)
rose après
l’observation en
Gr×100
Mode de Pas de contacte entre Isolé
Groupement les bacilles
 VI. Identification biochimique :

1. Test d’orientation rapide :

Orientation résultats
Absence de déviation du couleur Oxydase (-)

2. Ensemencement des milieux (galerie de famille &

galerie de genre et espèce) et résultats :

Milieu Observation résultats

Gélose viande de foie La bactérie pousse le Aérobie anaérobie
long du tube facultative
Hugh et Leifson Virage de l'indicateur
de pH au jaune dans
tout le tube. Le milieu
est devenu acide. Les bactéries sont
Il y a eu production oxydatives vis-à-vis
d'acides lors de le glucose
l'utilisation du glucose
par les bactéries en
présence et en absence
d'O2
Bouillon nitraté pas de présence de Nitrate (+)
NOz issus des NO3. Stade Nitrite
Les NO3 été réduits
en N2 par la bactérie
Kligler Hajna Culot jaune Glu(+)
Pente rouge Lac(-)
 Absence de précipité H2S (-)
noir
Absence de bulles de Gaz (-)
gaz
Urée Indole pas de variation du Uréase (-)
couleur orangé
Absence d’anneau
rouge à la surface du
milieu en présence de Indole (-)
réactif Kovacs
Mannitol mobilité Le milieu vire au Mannitol (+)
jaune  souche
fermente le mannitol
Le trouble s’étend Mobilité (+)
autour de la strie