A.

Isolement et mise en
évidence des flores
polymorphes dans
l’environnement.
 Introduction :
a) Définition de flore polymorphe :
La flore polymorphe fait référence à la présence de multiples espèces de plantes
dans un même environnement, avec une grande diversité morphologique,
génétique et écologique. Cela signifie que la flore polymorphe peut inclure une
grande variété de plantes qui ont des caractéristiques différentes, telles que la
taille, la forme, la couleur et les adaptations spécifiques à leur habitat. Cette
diversité peut résulter de facteurs tels que la variation naturelle, les changements
environnementaux, les migrations, l'adaptation, la sélection naturelle et la
domestication.

b) Définition de flore fongique :

Les champignons sont des organismes eucaryotes qui se nourrissent d'autres
matières organiques en utilisant des enzymes pour décomposer leur nourriture.
Ils jouent un rôle important dans l'écosystème en décomposant les matières
organiques mortes et en aidant les plantes à absorber les nutriments du sol. La
flore fongique peut inclure une grande variété de champignons tels que les
moisissures, les levures, les champignons filamenteux, les truffes, les morilles et
les champignons comestibles et toxiques. La flore fongique est présente dans
tous les types d'environnements, y compris les sols, les eaux, les plantes et les
animaux, et joue un rôle crucial dans le maintien de l'équilibre écologique.

I. Objectif :
Notre Manuel des travaux pratiqueront été effectué au sein de laboratoire de
biotechnologie à l’université de Moustapha STAMBOULI DE MASCARA pour
l’objectif de :

Isolement de la flore fongique à partir de sol pour obtiens des souches sauvages,
et permettre de valoriser les espèces de champignons ayant des propriétés
biotechnologiques intéressantes, notamment dans la production de médicaments,
d'enzymes et d'autres produits.

II. Les matériels et les milieux utilisés :

a. Echantillon : sol sèche
b. Les matériels :
  Balance électrique
 Tubes à essai
 Boites de Pétri
 Pipette de pasteur
 Etuve
c. Les milieux :
 Mx Sabouraud
 Mx gélose nutritive

Autre : eau physiologie

III. Mode opératoire :

10-1 10-2 10-3

9 ml d’eau physiologique

Ensemencement dans milieu :

Sabourand : puis GN : puis incubation à 37

incubation à 25 °C pendant °C pendant 24hà 48 h
5j
 IV. Résultats :

Résultats Aspect macroscopique

 Boite (2) :
 Colonie blanche,
grand, convexe, bord
régulier.

 Colonie jaune –
orange, petit, bombé,
bord régulier.

(1) (2)

Ensuite on a isolé les souches dans le même milieu sabouraud pour purifier
notre souche et caractériser.
 B. Intérêt des
microorganismes

I. Objectif :
Dans ce TP on a la sélection et l’identification des caractères descriptifs des
souches sauvages isolées (flore fongique) de la plus vasse (macroscopique
S.M.R) vers le plus précise (microscopique).

II. Les matériels et les milieux utilisés :

a. Les matériels :
 Tubes à essai
 Microscope optique
 Scotch
 Lame
 Pipette de pasteur
 Etuve
b. Les milieux :
 Bleu de méthyle
 Boillon nutritive

III. Mode opératoire :

Identification de flore fongique
a) Aspect macroscopique : étudié la colore de colonies recto et verso et leur
texture.
b) Aspect microscopique : par ruban adhésif (scotch+ bleu de méthyle),
étudié le mycélium, conidies, et sporange
Tests biochimiques
1. Type fermentaire :
BN + Cloche + échantillon
 BN +
suspension du
champignon

Incubation à 25 °C pendant 24

2. Test de croissance :
BN + échantillon

Incubation à 4 °C Incubation à 25 °C
pendant 24 h pendant 24 h

3. Les conditions hostiles :

Echantillo
n + BN

Neutr Acide( Alcalin

HCl) ( NaO

Incubation à 37 °C pendant
 IV. Résultats et interprétation :
Souche Aspect macroscopique
Recto : colonies évoluant
du beige clair au vert foncé
à gris noirâtre.

Verso : incolore (pas de

pigment)

Aspect macroscopique d’une souche

fongique

Souche Aspect microscopique

les hyphes apparaissent comme
des filaments ramifiés et septes.

les conidiospores se
développent à partir des hyphes et
portent des conidies, qui sont des
structures de reproduction
aériennes.
Observation microscopique de genre
Les conidies sont de forme
Aspergillus objectif 40X (ruban adhésif).
sphérique à ovale, avec une taille
moyenne.

Tête aspergilaire : bisériée

Orientation : Aspergillus
fumigatus.

Observation microscopique d’Aspergillus

fumigatus objectif 100X.
Après 24 h d’incubation on a :
Test Résultats Photos Interprétation
biochimiques
Type Il y a de trouble *fermentation négative
fermentaire mais l’absence (hétérofermentation)
de gaz au niveau donc
de cloche Aspergillus fumigatus
n'a pas la capacité de
pratiquer une
fermentation dans le
sens traditionnel du
terme, mais plutôt une
respiration cellulaire
aérobie ou anaérobie
partielle.

Température Présence de 25°C 4°C *A une température de

de croissance trouble dans les 4°C, la croissance
deux tubes de d'Aspergillus
25°C et 4°C. fumigatus est
considérée comme
limitée ou faible. Cette
température est
considérablement
inférieure à la
température optimale
de croissance
d'Aspergillus
fumigatus qui est 25
°c, à 4°C, la
croissance des
champignons est
généralement ralentie
en raison de la faible
disponibilité d'eau et
de la diminution de la
réactivité enzymatique.
Donc la croissance
d'Aspergillus
 fumigatus à différentes
températures peut être
utilisée comme un
indicateur de la
capacité du
champignon à se
développer dans des
environnements
différents.
Condition Présence de *le champignon fait la
hostile trouble dans le croissance au milieu
tube qui contient neutre
le milieu neutre donc ce champignon
et l’absence de est présent dans
trouble chez les l'échantillon qui
tubes acide et étudié.
alcalin.
 C. Mise en évidence des
caractères biotechnologiques
des souches isolées.

I. Objectif :
Dans ce TP nous avons avoir les interactions entre deux bactéries et entre
bactéries et champignons, et leurs réactions soit de façon conflictuel
(compétition, indifférence, et antagonisme), ou de façon bénéfique symbiose)
pour avoir l’intérêt de cette souche, les substances secrétés, leurs rôle dans
l’industrie (ATB, facteur de croissance et antimicrobienne) avec des différentes
méthodes.

II. Les matériels et les milieux utilisés :

c. Les matériels :
 Boites de pétri
 Ecouvillon
 Papier wattman
 Vortex
 Tubes à essais
 Cathéter non implantable
 Pipette pasteur
 Pipette graduée
 Bec bunsen

d. Les milieux :
 Milieu MH
 Bouillon nutritif
 Milieu sabouraud
 Milieu GN

III. Mode opératoire :

S1 : Bactérie lactique
S2 : staphylocoque
S3 : champignons
1. Détection de production d’ATB :

Milieu MH

S21 S3 S3 S1 S1
Technique d’ensemencement : S21

 Ecouvillonnage
S1 Inondation S2
S3
 Incubation : 37 °C pendant 24 h

2. Technique de détection de production de facteur de croissance “bio-

autographie“ :

Milieu MH

S1 S1 S2 +S3 S3+S2

Ensemencement
Milieu MH

Ruban Papier wattman S3

S2

3. Production du bactériocines :
BN Centrifugation
+bactéri Surnageant Surnageant
e
lactique Culot
3000 tours /10min
Témoi
n l’eau
S3=
S2 = staph

Incubation à 37 °C pendant 24h

IV. Résultats et interprétation :
souches S1 (bactérie S2 (staphylocoque) S3
Métabolites lactique) (champignon)
Production des * La bactérie * La bactérie de * Absence de
substances lactique elle staphylocoque elle est pousse de
antibactérienne. est poussée poussée sur le milieu. champignon sur
sur le milieu. le milieu.
* Présence les zones
* présence d’inhibition autour les * Présence les
les zones puits de bactérie lactique zones
d’inhibition (0.5) et champignon d’inhibition
autour les (3cm) autour les puits
puits de de bactérie
staphylocoq lactique
ue (1.5cm) et (2.5cm) et
champignon staphylocoque
(3cm) (0.3cm)
Production de * Diffusion * Diffusion de zone * Aucune zone
facteur de de zone d’inhibition d’inhibition
croissance “bio- d’inhibition * Absence de
autographie“ pousse de
champignon sur
le milieu
Production des *Présence de zone * Absence de
bactériocines d’inhibition autour de pousse de
(LB) surnageant donc champignon sur
staphylocoque pas le milieu.
poussée * absence zone
* absence zone d’inhibition
d’inhibition autour le autour le
témoin - témoin -

 La bactérie lactique peut également produire des substances

antimicrobiennes qui peuvent inhiber la croissance de certaines
 bactéries pathogènes, y compris le staphylocoque et inhiber la
croissance d’Aspergillus fumigatus.
 On a peut avoir des effets synergique sur la pathogénicité de
staphylocoque et Aspergillus fumigatus, il ya des certaines souches de
staphylocoques peuvent produire des enzymes qui dégradent les parois
cellulaire des champignons, ce qui peut faciliter l’invasion fongique.
 Et on peut avoir de compétitive lorsque les deux des microorganismes
(staphylocoque et Aspergillus fumigatus) se font concurrence pour les
ressources environnementales.
 Et l’interaction entre staphylocoque et Aspergillus fumigatus peut
également considérée comme parasitaire si l’un en bénéficie au
détriment de l’autre.
Conclusion général :
Staphylocoque est une bactérie pathogène qui peut causer des infections chez
l'homme, mais il est également utilisé dans l'industrie biotechnologique pour
produire des enzymes, des pigments, des peptides et des antibiotiques. Certaines
souches de staphylocoques sont également utilisées pour la production de
fromage.

Les bactéries lactiques sont des bactéries qui sont utilisées dans l'industrie
alimentaire pour produire des produits laitiers fermentés, tels que le yaourt, le
fromage et le kéfir. Elles peuvent également être utilisées pour la production de
probiotiques, de bactéries bénéfiques pour la santé.

Aspergillus fumigatus est un champignon qui peut causer des infections

pulmonaires graves chez les personnes immunodéprimées, mais il est également
utilisé dans l'industrie biotechnologique pour produire des enzymes, des
pigments, des acides organiques, des antibiotiques et des antioxydants.

Ces trois microorganismes peuvent être utilisés dans l'industrie

biotechnologique pour produire une variété de produits utiles. Cependant, leur
utilisation doit être étroitement surveillée pour éviter les risques pour la santé
publique.