Les Mycobactéries

I. Généralités – Classification

 Ordre : Actinomycétale
 Famille : Mycobactériaceae
 Genre : Mycobacterium
 Espèces : M. tuberculosis , M. bovis ,M. Africanum ,M. leprae.

 Ce sont des bacilles capables de conserver la coloration malgré l’action combinée de l’alcool et
des acides dilués : ce sont des Bacilles Acido – Alcoolo - Résistants = B.A.A.R
 Aérobies strictes ou microaérophiles.
 Immobiles
 Non ramifiés, non sporulés, à paroi riche en lipides.
 Du point de vue médical : 3 grandes catégories :

 Mycobactéries responsables de la tuberculose des mammifères M.tuberculosis, M.bovis,

M.Africanium.
 Mycobactéries non responsables de la tuberculose : Ce sont des mycobactéries de
l’environnement, parfois opportunistes = Mycobactéries atypiques.
 Mycobactéries responsables de la lèpre : M. leprae (l’homme) ,M. lepraemurium (Rat).

II. Mycobacterium tuberculosis :

 Parasite strict de l’homme. M. tuberculosis: Agent principal de la tuberculose humaine.

 Découvert en 1882 par Robert Koch: Bacille de Koch (BK).
 La tuberculose humaine peut être due: M. bovis ,M. Africanum.
 « La symptomatologie clinique est identique ».
 Seule l’identification biochimique précise les différencie.

Caractères bactériologiques :

 Morphologie :
 M. tuberculosis est un bacille fin, légèrement incurvé de 2 à 5 μm de long sur 0,2 à 0,3 μm de large à
extrémités arrondies.
 Il est immobile – acapsulé – asporulé.
 Se colore mal par les colorants habituels.
 Après coloration de Ziehl – Neelsen : coloration par la fushine phéniquée à chaud, le bacille se colore en rose
et n’est pas décoloré par l’action combinée des acides dilués et de l’alcool.
 Il est : Acido Alcoolo Résistant.
 Coloré à l’auramine phéniquée, il devient fluorescent sous lumière U.V.
 Dans les produits pathologiques : Il se présente isolé ou en petits amas.
 Au ME, la paroi est épaisse de 10 à 20 nm et apparaît constituée de 4 couches différentes:
1. PG
2. 2 couches internes qui contiennent des éléments ayant l’apparence de cordages de + en + enchevêtrés.
3. Couche externe qui est faite d’éléments enrubannées.
 Caractères culturaux :

 C’est un germe exigent

 Croissance lente, se divise toutes les 20H.
 Aérobie- sticte
 T°op =35° - 37°.
 PH op= 6,7.
 Il ne pousse que sur des milieux contenant : sérum, glycérine, pomme de terre glycériné, œuf ou Albumine
bovine.
 3 Catégories de milieux :
1. Milieux liquides :
 Milieu Sauton : employé pour la production du BCG et la préparation de la tuberculine.
 Milieu de Youmans.
 Milieu de Dubos.
 Milieu de Middelbrouk = 7H9.
2. Milieux solides : Milieu de Middelbrouk = 7H 10 et 7H11.
3. Milieux solide à l’œuf :
 Milieu Löwenstein – Jensen (L.J) : contient des sels minéraux, de l’asparagine, de la glycérine,
du vert malachite et de l’œuf.
 Il est solidifié par coagulation à 85°c pendant 50 mn.
 On y obtient des colonies au bout de 2 à 3 semaines : ellessont petites, transparents et lisses puis elles
prennent un aspect sec, variqueux, en chou-fleur de couleur crème beige.
 Elles sont dites eugoniques.

Caractères biochimiques :

 Mycobacterium tuberculosis :
 a une Catalase thermosensible (+) à 20°C, (-) à 68°C.
 Produit sans l’utiliser une quantité importante d’acide nicotinique ou niacine d’où : le Niacine test = Test
de konno (1956).
 L’accumulation de niacine est révélée par l’addition de l’aniline et du bromure de cyanogène sur une
culture âgée.
 Possède une Nitrate réductase.
 Est résistant au T.C.H = hydrazide de l’acide thiophène – 2 Carboxylique.
 Est sensible au P.N.B = Acide paranitrobenzoique.
 Est sensible au pyrazinamide.

Action des agents chimiques et physiques :

 Mycobacterium tuberculosis est :
 Sensible à la chaleur – à la lumière solaire – aux Rayons X – Rayons δ – Rayons UV – Alcool à 70°.
 Résistant au froid (+) 4°C (-) 70°C, aux désinfectants chimiques, H2 SO4 NaOH (d’où les procédés
de décontamination des prélèvements).
 Diagnostic :
 Prélèvement :
 D’origine pulmonaire :
• Crachats
• Tubage gastrique.
• Aspiration ou lavage bronchique.
 D’origine extra-pulmonaire :
• Contaminés : 1eres urines du matin – Pus d’abcès fistulisés.
• Non contaminés : L.C.R – liquide pleural –liquide péritonéal – Biopsie – épanchement articulaire.
 Examen microscopique :
 Réalisation du frottis :
 Le frottis est réalisé à partir des parties muco-purulentes du prélèvement sur une lame dégraissée affectée du
N° d’ordre correspondant au nom du malade.

 Mise en culture :
 Les prélèvements non contaminés sont ensemencés directement sur L.J.
 Les prélèvements contaminés subissent une décontamination.
 Plusieurs méthodes :
•Méthode de Petroff : soude seule à 4%.
•Méthode de Tacquet et Tison : Lauryl – sulfate et soude à 1%.
•Méthode de Kubica : N acétyle – L – cystéine + soude.
•Méthode de Hohn – Löwenstein : H2 SO4 à 4 ou 6% (urines- Pus divers).
 Après décontamination, centrifuger ; le culot est ensemencé sur milieux L.J (2 à 6 tubes) et incubés
horizontalement à 37°C pendant 28 jours.

Lecture au :
 4éme jour pour déceler les souillures ou les Mycobactéries atypiques à Croissance rapide.
 28éme jour : Si colonies eugoniques en chou-fleur  identifier. Si culture -  réincuber jusqu’au
 42éme jour : Si colonies eugoniques en chou-fleur  identifier. Si culture -  réincuber jusqu’au
 72éme jour : Si colonies eugoniques en chou-fleur  identifier. Si culture -  Rendre : Culture négative
 Les résultats de la culture doivent être qualitatifs et quantitatifs. Si :
Nombre de colonies < 100 + Nombre > 200  + + +
Nombre > 100 et < 200  + + Si nappe  culture confluente.
  Identification biochimique :

 Coloration de Z.N  BAAR.

 Catalase (+) à 22°C (-) à 68°C
 NR+
 Niacine test +.

 Antibiogramme :
 Tester les antituberculeux : Isoniazide – Streptomycine – Rifampicine – Pyrazinamide – Ethambutol –
TCH – PNB.
 ATB de 1ere intention : Isoniazide (INH ) – Rifampicine- Ethambutol- Streptomycine- Pyrazinamide.
Les quatre premiers possèdent, à des degrés divers, trois propriétés principales : ils sont bactéricides, stérilisants
et capables de prévenir l’émergence de bacilles résistants lorsqu’ils sont associés.
 Si multirésistance détectée: ATB de 2eme Intention :Ethionamide- Amikacine- Ofloxacine-
Levofloxacine- Moxifloxacine.

Traitement :
 Le traitement ATB doit répondre à 2 exigences :
 Eviter la sélection de mutants résistants aux ATB.
 Stériliser définitivement les lésions.
 Molécules : Isoniazide (hépatotoxique) Rifampicine (risque hépatique) Pyrazinamide (risque hépatique)
Ethambutol (risque de névrite optique).

Prophylaxie :
 Vaccination par le BCG : Appliquée depuis 1921.
 Le vaccin est un bacille bovin vivant atténué par 230 repiquages successifs sur pomme de terre biliée glycérinée.
 Vaccin : le BCG souche vivante de M. bovis dont la virulence est atténuée (bacille de Calmette et Guerin)
 Age : dès la naissance dans un groupe à risque, dès l’entrée dans une collectivité (crèche) ou à 6 ans.
 Injection intradermique au sujet IDR négative ➔ lésion qui persiste 1 à 3 mois
 Efficacité du vaccin : Très bonne protection contre les tuberculoses graves, bonne protection contre les
tuberculoses pulmonaires.
 III. Mycobactéries atypiques:

Classification:

 Mycobactéries atypiques = Mycobactéries non tuberculeuses = bacilles tuberculeux aviaires et bacilles para
tuberculeux présentes dans l’environnement et chez les animaux.
 Peuvent donner chez l’homme des :
 Infections d’allure tuberculeuse = Mycobactérioses.
 Infections hospitalières.
 Bactéries ubiquitaires, présentes dans l’eau, le sol et les végétaux.
 Ne sont pas des parasites stricts de l’Homme et des animaux
 Peuvent se développer à l’état commensal, contaminant les prélèvements biologiques
 ++ espèces ne sont pas pathogènes et d’autres se comportent en opportunistes.
 Pouvant être à l’origine d’infection chez le sujet immunodéprimé.

 1959, E. Runyon propose une classification en 4 groupes basée sur la:

 Rapidité de la Croissance.
 Pigmentation des colonies.

1. Groupe I = Mycobactéries Photochromogènes : Colonies non pigmentées à l’obscurité, se pigmentant en

jaune après exposition à la lumière.
2. Groupe II = Mycobactéries Scotochromogènes : Colonies à croissance lente, pigmentées en jaune
orangée à l’obscurité et plus intensément à la lumière.
3. Groupe III = Mycobactéries non chromogènes : Colonies à croissance lente, non pigmentées à
l’obscurité se pigmentant parfois à la lumière et avec l’âge en jaune ou en rose.
4. Groupe IV = Mycobactéries à croissance rapide : Colonies apparaissent en moins d’une semaine et dont
la pigmentation est variable suivant les espèces.

Caractères Biochimiques :