Dr L.

B BENCHERIF
LABORATOIRE CENTRAL-CHU DE SETIF.
Résidents 1e année/ ANNEE UNIVERSITAIRE 2009-2010

BRUCELLES- BRUCELLOSE

I- INTRODUCTION :
Les bactéries du genre Brucella sont responsables de la Brucellose ou :
 Fièvre de Malte.
 Mélitococcie.
 Fièvre méditerranéenne.
 Maladie de Bang.
C’est une Zoonose qui atteint beaucoup plus les animaux domestiques (ovins, bovin et
caprins) Mais qui peut accidentellement toucher L’homme (anthropozoonose).
Le genre Brucella comprend une seule espèce B.melitensis .Celle ci est formée de six sous-
espèces :
 B.melitensis (la plus pathogène) 3 biovares.
 B.abortus 6 biovares.
 B.suis 4 biovares.
 B.néotomae.
 B.bovis.
 B.canis.
Chacune de ces sous espèce est subdivisée en biovares.
Elles sont toutes pathogènes pour les animaux et seules les trois premières sont pathogènes
pour l’homme. C’est une maladie à déclaration obligatoire.

II- HABITAT ET TRANSMISSION :

La Brucellose sévit dans le pourtour méditerranéen, Afrique noire, Amérique du sud et en Asie ;
Elle atteint les animaux domestiques et sauvages.
Il n’existe pas de spécificité d’hôte mais chaque espèce possède un hôte de prédilection à
partir du quel l’homme s’infecte :
- B.melitensis : chèvres, moutons.
- B.abortus : bovins.
- B.suis : porc, lièvre.
- B.canis : chien.
- B.neotomae : néotomes (rongeurs).
- B.ovis : moutons.
L’infection animale souvent inapparente se manifeste par des avortements chez la femelle
et des lésions génitales chez le male (la bactérie est éliminée dans le lait, les urines et dans les
produits d’ABRT), elle survie dans le sol et la poussière pendants 15 à 40 jours et 4 ans dans la
terre glacée; Elle survie également dans l’eau douce et de mer, elle contamine l’homme et le
cheptel.
L’homme se contamine :
 Par contact direct avec les animaux malades : Eleveurs, vétérinaires et
ouvriers d’abattoirs. (Brucellose professionnelle)
  Par ingestion de lait cru ou de fromage frais de fabrication artisanale
(chèvre, brebis)
 Par inhalation ou par voie conjonctivale (ferme, laboratoire « Brucella est
une bactérie de classe 3 »).

III- CARACTERES BACTERIOLOGIQUES :

1- Morphologie : Petit coccobacille à gram négatif, aérobie strict, immobile, habituellement
isolé rarement en paire ou en chaînette(en milieu liquide) non capsulé et non sporulé.
Il existe des souches Smooth (lisses) et des souches Rough (rugueuses)

2- Caractères culturaux : Ces bactéries sont caractérisées par leur lenteur de croissance en
primo culture.
Sur milieu liquide (tripticase soja):Culture positive en 48 h à 4 jours avec trouble
homogène et léger sédiment.
Sur milieu solide : TSA +YE.
 Prélèvement contaminé (milieu additionné de bacitracine, polymyxine,
vancomycine et nystatine)= milieu de FARELL.
 Prélèvement mono microbien : GSC.
 Sous 5 % de CO2, PH 6,8 et T°37 °C.
Les colonies sont visibles après 48 h d’incubation, elles sont petites de 0,5 mm de diamètre,
grises blanchâtres.
« Toute culture qui pousse en 24 h distinctement n’est pas une Brucella »

3- Caractères biochimiques :
A/ Identification du genre :
 Aérobie stricte (B.abortus et B.ovis exigeant en CO2)
 Catalase +.
 Oxydase + (sauf B.neotomae et B.ovis)
 Uréase + (rapide)
 Nitrate réductase + (sauf B.ovis)
 Citrate -.
 ONPG -, acidification des glucides -.
 RM -, VP -.
 Absence d’hémolyse.
 Dégradation des AA soufrés en H2S :
* B.melitensis produit peu ou pas d’H2S.
* B.abortus produit de l’H2S pendant 2 jours
B/ Détermination des biovares : dépend de :
1)-Exigence en CO2 : (B.abortus et B.ovis exigeant en CO2)
2)- Production d’H2S : Mettre une bandelette d’acétate de plomb (papier Whatman) dans un
milieu BAB2 en pente :- Bandelette noire : H2S + (B.a, B.s, B.n)
- Bandelette blanche : H2S – (B.m, B.o, B.c)
3)- Agglutination à l’aide de sérums polyclonaux A et M(Réaction sur lame) :
Structure antigénique
 Bactéries Smooth :
Ag de surface de nature LPS : Il existe deux types A et M.
Leur répartition varie d’une espèce à une autre :

A partir de ces Ag on peut produire des AC mono spécifiques anti A et anti B.

Ag solubles.
Ag communs à Brucella et à Yersinia enterocolitica O9, Vibrio cholérae et Francisella
tularensis.
 Bactéries Rough : Les bactéries Smooth (Ag A et Ag M) subissent parfois des
mutations entraînant la perte du LPS-S, les bactéries deviennent Rough posédant
un LPS-R (Ag R)
4)- Sensibilité ou résistance aux colorants : Thionine, Fuschine
Milieu BAB2 + Sérum de cheval + colorants à différentes concentrations (Thionine, Fuschine)
NB : travailler en parallèle avec des souches de référence.

CARACTERES DIFFERNTIELS DES ESPEES PRINCIPALES DE BRUCELLA

Espèce Exigence en Production Croissance en Agglutination

CO2 d’H2S présence de ave sérums
mono
spécifiques
Thionine Fuschine A M
B.melitensis - - + + - +
B.abortus + + - + + -
B.suis - ++ + - + -

C/ Identification de l’espèce : Par lysotypie par les phages (Tbilissi et Izatnagar) sur milieu
BAB2 + 5 % de sérum de cheval.

Espèce Oxydase Uréase Lyse par les Besoins en

phages sérum

Tb Iz
B.melitensis + + - + -
B.abortus + + + + -
B.suis + + - + -

IV – PHYSIOPATHOLOGIE :
 Pénétration du germe par voie cutanée ou muqueuse (inhalation, conjonctivale),
digestive.
 Incubation 8 à 20 jours.
  Les bactéries sont entraînées par voie lymphatique aux premiers relais
ganglionnaires (axillaires, médiastinales, mésentériques) selon la porte d’entrée.
 Multiplication dans les macrophages par inhibition de la fusion phago-lysosomiale.
 Passage dans le sang: Septicémie « Brucellose aiguë » hémocultures +.
 Rechutes septicémiques avec localisations secondaires (osseuses et
nerveuse) « Brucellose subaiguë ». (Les lésions tissulaires sont dues à une
réaction immunitaire de type cellulaire + hypersensibilité).
 Formes non ou mal traitées : « Brucellose chronique »

V- CLINIQUE :
1- Brucellose aiguë septicémique :
- Après incubation de 8 à 20 j Début insidieux : Asthénie, malaise, fièvre.
- Fièvre ondulante sudoroalgique étalée sur 15 à 20 j. peut passer inaperçue.
- Forme septicémique accompagnée de splénomégalie, d’hépatomégalie et d’adénopathie.
- La Brucellose est parfois atténuée, parfois grave : polyviscérale maligne.
2- Brucellose subaiguë focalisée :
Fait suite à la septicémie.
 Atteinte ostéoarticulaire.
 Atteinte neuro-méningée.
 Rarement atteinte hépatosplénique, génitale et bronchiques.
3- Brucellose chronique : « patraquerie brucelienne » fait suite souvent à des formes
mineures inapparentes. D’où il faut penser devant tout syndrome fébrile inexpliqué à une
Brucellose.
L’état général est conservé avec céphalées, asthénie physique, psychique et sexuelle.

VI- DIAGNOSTIC :
A)- Diagnostic direct : Sous hotte, port de gants, masque et lunettes.
1- Prélèvements : Hémocultures, LCR, ganglions lymphatiques, M.O, liquide articulaire et
pus de foyer suppuré.
NB : Fiche de renseignement complète indispensable avec demande précise de recherche de
Brucelles. Certaines notions épidémiologiques permettent d’orienter la recherche : Milieu rural
ou non, région, profession, notion d’ABRT du bétail.
2- Culture :
Hémoculture (3) et prélèvements liquides ensemencés sur Castaneda ou bouillon citraté.
 Incubation 7 jours à 6 semaines à 37 °C en atmosphère normal.
 L’isolement se fait sur GSC ou gélose TSA incubé 48 h à 4j.
Les prélèvements solides doivent être ensemencé directement sur GSC ou TSA ou si
polymicrobiens sur milieu de FARREL et incuber 2 à 4 j.
Toute culture positive doit faire l’objet d’un:
 Examen microscopique (coccobacilles à gram -)
 Identification du genre.
 Identification d’espèce.
 Identification des biovares.
 Antibiogramme (sous hotte car très dangereux) : Réaliser sur MH + 5 % de sang de
cheval.
 Les ATB à tester : Minocycline, Doxycyline, Gentamicine, Kanamycine, Streptomycine et
Ctrimoxazole.
B)- Diagnostic indirect : Le diagnostic sérologique est + dés l’apparition des signes cliniques(les
cultures peuvent être négatives et le risque de contamination est élevé)
1- Epreuve de l’Ag tamponné (Rose Bengale) « EAT »ou Card-test :( test qualitatif)
Technique d’agglutination rapide su plaque permettant de mettre en évidence les IgG
Elle se positive après le Wright, mais elle est plus sensible et persiste longtemps. Elle est
utilisée dans les enquêtes épidémiologiques.
 Technique :
1 Goutte de sérum + 1 Goutte d’Ag Brucelien coloré par le Rose Bengale Agitation pdt 4 mn.
 Interprétation :
Agglutination + = Apparition de grumeaux. Réponse rendue en croix (+ + + +, + + +, + +, +)
NB : Tout sérum + ou – en EAT doit être testé en SAW.

2- Sérodiagnostic de WRIGHT : « SAW » : (test quantitatif, il permet de suivre l’évolution

de la maladie)
Test de référence de l’OMS. Il met en évidence les AC de type IgG et IgM. Il permet le
diagnostic d’une Brucellose aiguë. Mais se négative rapidement lors d’une Brucellose subaiguë ou
et chronique.

a)- Technique :
C’est une réaction d’agglutination en tubes ou en micro plaque en U.
- Mettre une même quantité d’Ag + dilutions croissantes du sérum du malade (décomplémenté
au bain Marie à 56 °C pendant 30 mn).
- Agiter les tubes ou la micro plaque. (L’ensemble des tubes sont troubles)
- Incuber à 37°C pendant 24h.
NB : Ce test est contrôlé par un sérum étalon OMS (1000 UI)
b)- Lecture :
Lire l’importance de la clarification du surnageant. : Le titre du sérum correspond à la plus haute
dilution présentant un surnageant clair.

EXP : Si la dilution 1/80 avec un éclaircissement de 50 % du surnageant : 80 X 1.5 =120 UI.

Pourcentage
d’éclaircissement Indice
% 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160
25 1.25
50 1.5 - Les sérums positifs ont souvent des titres de 640, 1280, 2560.
75 1.75 - Si titre bas 1/40 avec clinique évocatrice
100 2 refaire le test après 3 semaines.
- Faux négatifs :
* Par excès d’Ac (phénomène de zone) levé par dilution.
* Par AC bloquant (IgA, IgG) non agglutinant on ajoute une goutte de sérum + dans les tubes
- Faux positifs : Par réaction croisée.

3- Immunofluorescence indirecte : Intérêt dans le diagnostic des Brucelloses subaiguë et

chroniques. Elle reste longtemps +.
 Ag fixé sur lame de microscope + Sérum de malade dilué (+ ieurs dilutions) + Sérum anti
globuline conjugué à la fluorescéine Observation au microscope à fluorescence.
4- Fixation du complément : technique très lourde.
5- Recherche d’une hypersensibilité retardée : Après prélèvement de sang pour diagnostic
on pratique une IDR à la Mélitine de Burnet.
Inj ID de filtrat de culture en bouillon de B.melitensis ou fraction phénol soluble de
B.abortus mieux toléré.
Lecture après 24 à 48 h. Une réaction positive se traduit par un érythème ou un œdème
local.

VII - TRAITEMENT :
Les ATB efficaces sont : Doxycycline, Gentamicine, Rifampicine, Cotrimoxazole et
Streptomycine.
En Algérie une souche Streptomycine R a été isolée.
1- Brucellose aigue septicémique :
 Adulte : trois modalités possibles
* Doxycycline (200 mg/j pdt 6 semaines) + Streptomycine 1g/J pendant 15 à 21J par voie
parentérale ou Gentamycine (5 mg/Kg/J en 1 prises parentérale pdt 7 à 10J) à la place de la
Streptomycine.
* Doxycycline (200 mg/j pdt 6 semaines) + Rifampicine (15 mg/ Kg/J per os)
* Fluoroquinolones + Rifampicine.
 Femme enceinte et Enfant < à 8 ans : Problème
* Cotrimoxazole (arrêté 15 J avant le terme prévu de grossesse) + Rifampicine

2- Brucellose focalisée : (TRT plus long)

* Localisation ostéoarticulaire : 3 mois de TRT au minimum.
* Localisation neuroméningée : 6 mois de TRT au minimum.
 Selon le schéma de l’OMS :
* Tétracyclines 2 g / j pdt 3 semaines + Streptomycine pdt 15 j (donne moins de rechutes)
* Doxycycline 2 g / j + Rifampicine 200 mg / j pdt 45 j (On a actuellement tendance à
Préférer ce schéma)
* Cotrimoxazole pdt 45 j + Gentamycine pdt 5 j.

VIII- PROPHYLAXIE :
1) Eviter le contact direct (mains nues) avec les animaux vivants ou morts.
2) Eviter les manipulations à mains nues des animaux nouveaux -nés, avortons et
placenta.
3) Ne pas consommer de lait de vache ou de chèvre cru ou caillé.
4) Eviter la consommation de fromage cru artisanal.
5) Tester sérologiquement les personnes à risque (berger, vétérinaire et
laborantins)
6) Abattage du cheptel sérologiquement positif (ring test +).
7) Manipulation au laboratoire de tout prélèvement à risque (hémoculture, biopsie
ganglionnaire..etc.)Sous hotte avec masque, gants et lunettes.
8) Vaccination des personnes exposées : 2 injections S/C ou IM à un mois
d’intervalle de fraction phénol insoluble de B.abortus peu allergisant.
Rappel à 1 an (il assure une protection de 18 mois)