Faculté de pharmacie d’Alger

4ème année de pharmacie

Cours de microbiologie
2022-2023

Genre : Pasteurella
Classification :
Ordre : Pasteurellales
Famille : Pasteurellaceae
Genre : Pasteurella
L’espèce principale est Pasteurella multocida : Agent de la Pasteurellose

Clinique:
Les Pasteurella sont des bactéries commensales du rhinopharynx et de l’intes n des animaux : 90%
des chats, chiens, moutons, chevaux.

L’homme se contamine par morsures, griffures de chat ou de chien ou par léchage d’une plaie par
des animaux. L’homme est donc un hôte accidentel : Zoonose (Maladie professionnelle).

Il existe plusieurs types d’infec ons:

La forme d’inocula on est la plus fréquente caractérisée par une inflamma on : rougeur, lésion très
douloureuse avec des adénopathies satellites. Les lésions sont situées surtout au niveau des
membres supérieurs (main, poignet, avant-bras) ainsi que le cou et la tête.
Les autres pathologies plus rares sont : la forme systémique avec atteintes respiratoire et la forme
neuro-méningées.

Diagnos c bactériologique
Prélèvements :
-La sérosité de la plaie, pus ganglionnaire, hémoculture, expectora ons.
- Fiche de renseignements ++++
Acheminement rapide

Morphologie :
Coccobacilles Gram néga f, à colora on bipolaire, immobile, asporulé et capsulé.

Culture
La Pasteurella peut cul ver à 22 °C ou à 44 °C, atmosphère enrichie en 5 à10% de CO2.
Bactérie non exigeante aéro-anaérobies.
Milieu liquide : appari on d’un trouble homogène avec un dépôt.
Gélose nutri ve en 24H : les colonies sont rondes bleutées.
Gélose au sang : pas d’hémolyse colonies rondes, lisses, bombées, jaunâtres.
Il est indispensable d’ensemencer 2 milieux enrichis:
GSC 35°C 4J sous CO2 + GSF 35°C 2J en anaérobiose
Iden fica on biochimiques
-Métabolisme fermentaire et oxyda f
- Catalase +, Nitrate réductase +indole +
-Oxydase+ mais certaines souches sont –
-Dégrade beaucoup de sucres.
-Uréase –Le citrate de Simmons néga f
La détermina on des différents biotypes se fait grâce à une galerie API 20E.

Identification antigéniques : Capsule permet de classée en sérotypes (A, B, D, E, F)

Traitement

Ampicilline, amoxicilline, céphalosporine de 2 ème généra on, Céphalosporine de 3 ème généra on,
tétracycline avec en plus de soins locaux.

Prophylaxie :
An biothérapie pour tous individus ayant été mordue par un animal. Ampicilline et cycline.
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Genre : Francisella
Classification :
Ordre : Thiotricales
Famille : Francisellaceae
Genre : Francisella
Espèce : Francisella tularensis

Epidémiologie

Une seule espèce dans ce genre : Francisella tularensis : agent de la Tularémie.

La tularamie est une anthropozoonose, maladie animale mortelle occasionnellement transmise à
l’homme.

Réservoir: plus de cent espèces d'animaux sauvages, particulièrement les lapins, les lièvres.
Vecteurs : tiques, puces, moustiques
Personnes à risque : Chasseur, agriculteurs, campeurs , Randonneurs
Période : Hiver-Automne

Bactérie très virulente. Agent biologique de la classe 3, au laboratoire prendre des mesures
rigoureuses (PSMIII, gants, masque, lune es). Agent de bioterrorisme.

Mode de contamina on
Directe: Voie cutanéomuqueuse (traverse la peau saine) ++++.
Indirecte: Aérosols, inges on de viande d’animaux contaminés, inges on d’eau, piqûres de
ques, morsures ou griffures de chat

Pouvoir pathogène
Incuba on 02 à 10 jours: la maladie a une appari on rapide avec fièvre et frissons, asthénie,
myalgies, arthralgies, céphalées et vomissements. Il s'agit de bactéries intracellulaires.

Il existe plusieurs formes en fonc on de la porte d’entrée:

Forme ulcèro-ganglionnaire +++
Formes angineuse ou pharyngo- ganglionnaire
Forme typhoïde
Forme oculaire
Diagnos c bactériologique
F. tularensis: bactérie hautement dangereuse et virulente (Port de gant, port de lune es, port de
masque. Ho e de sécurité à flux laminaire. PSMIII).

Prélèvements
Sérosité des plaies.
Ponc on d’une adénopathie, exsudats dans les formes conjonc vales ou pharyngées, hémoculture
(sep cémie), biopsie de Tissu, prélèvement d’ulcéra on, poudre (lyophilisat).

Examens microscopiques:
Gram : coccobacille Gram néga f pleiomorphe, isolé à colora on bipolaire immobile.

Culture :
Bactérie très exigeante, nécessite des milieux enrichis au sang, jaune d’œuf, glucose et cys ne ou
cystéine: Milieu de Francis, Gélose chocolat (+ polyvitex), Milieu de Mc Coy- Chapin, Hémoculture

Sceller les boites, T:35 °C aérobiose, pendant 14 jours, culture lente. On ob ent à par r de 2-3J de
pe tes colonies présentant un aspect nacré assez caractéris que (glaireux).
Enfin il convient de conserver les flacons d'hémoculture, au moins 21 jours.

Iden fica on biochimique :

Catalase : faiblement posi f.
Oxydase et uréase: néga ve.(# Brucella )
ß lactamase : posi ve (# Ac nobacillus, Brucella )

Sérodiagnos c
Le diagnos c sérologique est la méthode la plus u lisée et la plus fréquemment posi ve faisant appel
à la réac on classique de macroagglu na on en tube

Traitement
Phase pré- suppura ve : Streptomycine+ cycline
Phase suppura ve : Streptomycine + chloramphénicol.

Prophylaxie
Lu e contre les rongeurs
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Genre : Brucella
Introduction :
Les bactéries du genre Brucella sont responsables d’une infection dite Brucellose.

Dr Bruce Microbiologiste Britannique a isolé à Malte en 1887 la bactérie responsable de la fièvre de

Malte. Elle est dite aussi Mélitococcie, Fièvre méditerranéenne, Fièvre sudoro-algique, Maladie de
Bang.

La brucellose est une infection animale accidentellement transmissible à l’homme : Anthropozoonose

avec des répercussions importantes en santé publique et en économie.

Cette bactérie est un agent de bioterrorisme (agent biologique de la classe III)

I-Taxonomie :
Groupe : alpha-Proteobacteria
Ordre : Rhizobiales
Famille : Brucellaceae
Genre : Brucella
Le genre a été divisé en onze espèces, quatre espèces peuvent contaminer l’homme :

⮚ Brucella melitensis
⮚ Brucella abortus
⮚ Brucella suis
⮚ Brucella canis

En Algérie :
Brucella melitensis biovar 3 (essentiellement) et biovar 2
Brucella abortus biovar 2 et 3

II- Epidémiologie :

- Les bactéries du genre Brucella sont responsables d’une anthropozoonose touchant le monde rural, à
répartition mondiale et endémique dans le pourtour méditerranéen.

-Toutes les espèces sont pathogènes pour les animaux domestiques et sauvages, entrainant un
avortement des femelles gravides, avec une spécificité d'hôte qui n'est pas absolue. Chaque espèce à
un ou des hôtes de prédilection:
B. melitensis : les ovins (Chèvre et mouton)
B. abortus : les bovins.

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 B. suis : les porcins (Porc et lièvre)
B. canis: les chiens

-Certaines espèces sont pathogènes pour l’homme qui est un hôte accidentel. C’est une maladie
professionnelle (vétérinaires, éleveurs, personnel de laboratoire, bergers, bouchers) à déclaration
obligatoire.

-La brucellose est une maladie de la reproduction (avortement spontané, localisation de la bactérie
essentiellement dans les organes génitaux et glandes mammaires). Lors de l’avortement la
contamination est très importante. Les sécrétions vaginales des animaux malades disséminent la
bactérie dans leur environnement (litières, fumier), l’atteinte de la glande mammaire entraine
l’excrétion de Brucella dans le lait.

-Il existe deux types de contamination chez l’homme:

● Directe = Brucellose professionnelle:

-Par contact direct avec des animaux malades (agriculteurs, vétérinaire, éleveur)
-Par inhalation : 10 à100 bactéries par les techniciens de laboratoire lors du « sniffing » et les
habitants des fermes contaminés par la poussière des litières.

● Indirecte : plus rare, se fait par voie digestive, par ingestion de produit laitier non pasteurisé
(Lait cru, l’ben, fromage frais de fabrication artisanale …) provenant d’animaux contaminés
(femelles)

III-Physiopathologie - Pouvoir pathogène :

1- Physiopathologie :

-Brucellose humaine est une septicémie d’origine lymphatique.

-Il y a pénétration à travers une muqueuse (conjonctive, pharyngé, buccale, nasale,

respiratoire…)
-Incubation 8-20 jours (infection primaire focale)
-Les bactéries entrainées par voie lymphatique vers le 1 er relais ganglionnaire (ganglions
axillaire, médiastinale, mésentérique) où elles vont s’y multipliées provoquant une
adénopathie satellite.
-Passage dans le sang : bactériémie ou brucellose aigue.
-Forme non ou mal traitées : phase subaiguë (brucellose localisé ou secondaire) suivie par la
phase chronique.

2- Pouvoir pathogène :

Après une incubation de 8-20 jours les signes cliniques apparaissent :

⮚ Brucellose septicémique aigue : (Hémoculture positive)

o Fièvre sudoro-algique, ondulante, bien tolérée, étalée sur 15-20 jours
o Asthénie, myalgie, arthralgie, sueurs nocturnes.
o Splénomégalie, hépatomégalie, adénopathie.
o Cependant, les formes de brucellose aiguë asymptomatiques sont majoritaires
estimées à près de 90%

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 Sans traitement évolution vers :

⮚ Brucellose localisée subaiguë : (hémoculture souvent positive)

Localisation secondaire : atteinte ostéo-articulaire+++, hépatique, neuro-méningée et génitale

⮚ Brucellose chronique : (hémoculture négative)

Au-delà d’un an, importante asthénie physique, psychique et sexuelle.

IV-Caractères bactériologiques :

1- Morphologie :

-Très petit coccobacille (0,5mm de diamètre) à Gram négatif, immobile, non sporulé, non capsulé,
isolé rarement disposé par paire ou courte chainette.

2- Caractères culturaux :

-Les bactéries du genre brucella sont aérobies strictes. La température optimale de croissance : 35°C,
incubation avec ou sans CO2 pendant 2 à 4 jours. Le pH optimal de croissance est de 6,8.

-La culture des Brucella est difficile et lente, et elle est favorisée par l’addition de sang (Gélose au
sang cuit), glycérol, sérum, ascite.

-Sur gélose au sang cuit, les colonies sont très fines 0.5 mm de diamètre, grisâtres,
blanchâtres, légèrement bombées, non hémolytiques sur gélose au sang frais de cheval puis
elles évoluent vers l’orange jaune.

-Il pousse sur milieu TSA (Trypticase Soy Agar) seul ou additionné d’extrait de levure. Les colonies
sont petites de 0.5 mm de diamètre à bord arrondis, translucides, bleutées, légèrement bombées. Les
colonies sont de deux types : Smooth (lisses) et rough (rugueuses).

-L’isolement de Brucella à partir d’un prélèvement polymicrobien nécessite l’utilisation de milieux

sélectifs tel que le milieu de Farrell modifié : gélose à l’extrait de foie et de levure additionnée de
Cycloheximide, Polymyxine B, Vancomycine, Acide nalidixique, Nystatine

-Sur Bouillon TS (Trypticase Soy) : trouble homogène après 48Heures - 4 jours d’incubation.

3- Caractères biochimiques :

- Caractères communs au genre Brucella :

● Oxydase positive.
● Catalase positive.
● Uréase positive.
● Nitrate réductase positive.

-Acidification des glucides négative, citrate de Simmons négatif.

ONPG négatif, indole négatif, TDA négatif, VP et RM négatif.
Métabolisme protidique : la brucella dégrade les acides aminés soufrés en H2S

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-Détermination de l’espèce par lysotypie :

La Brucella est lysée par 3 phages (virus lysant les bactéries) :

● Tbilissi (Tb)
● Weybridge(Wb)
● Izatnagar (Iz)

Phages Tb Wb Iz
B melitensis - PL +
B abortus + + +
B suis - + +

PL : Pseudo lyse

Ces techniques sont maintenant abandonnées au profit des outils moléculaires

- Détermination des biovars :

● Exigence en CO2
● Production d’H2S en présence d’acétate de plomb
● Sensibilité aux colorants : thionine, fuchsine, safranine
● Agglutination avec des sérums : anticorps mono clonaux anti A et anti M.

4- Caractères antigéniques :

-Antigène de surface (LPS-S) : protéine de haut poids moléculaire, situé à la surface des souches
lisses (S) et constitué de 2 complexes antigéniques A(Abortus) et M(Melitensis) dont la répartition
quantitative dépend de l’espèce :

Brucella suis antigène M légèrement plus élevé que l’antigène A

Brucella abortus l’antigène A est en très grand nombre par rapport à l’antigène M
Brucella melitensis l’antigène M est en très grand nombre par rapport à l’antigène A

V- Diagnostic bactériologique :

1-Le diagnostic direct :

-La manipulation des prélèvements se fait sous hotte à flux laminaire avec gants, lunette, masque car
le germe est très dangereux(PSM3)

-Prélèvements :

Les hémocultures, Incubation varie de 7 jours à 6 semaines à 35-37 °C en atmosphère normale.

Isolement des hémocultures sur Gélose au sang cuit (GSC) incuber 35-37 °C pendant 48 H à 4 jours
avec ou sans CO2

Autres prélèvements : ponction ganglionnaire, moelle osseuse, pus d’abcès, ponction

articulaire, LCR.
-Ensemencer les prélèvements liquides dans un ballon d’hémoculture
-Ensemencer les prélèvements solides monomicrobiens sur milieu gélosé (GSC, TSA)
-Ensemencer les prélèvements polymicrobiens sur milieu de Farrell modifié.

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- Toutes les cultures positives apparaissent au 2 ème jour, les colonies sont bien visibles
après 4 jours d’incubation.

- GRAM : très fins coccobacilles Gram négatif

-Identification du genre.

-Identification de l’espèce.

-Identification du biovar.

-Test de sensibilité aux antibiotiques :

Il est conseillé d’éviter de faire un antibiogramme (risque de contamination)
Dans les laboratoire spécialisé il faut faire des CMI pour les antibiotiques suivant
minocycline, doxycycline , rifampicine gentamicine , streptomycine, cotrimoxazole.

2-Le diagnostic indirect :

-Epreuve à l’antigène tamponné (EAT) : test qualitatif et rapide, réaction d’agglutination sur lame
ou sur carte à usage unique avec un antigène coloré. Elle permet le diagnostic d’une brucellose aiguë
et subaigüe, se positive plus tardivement 3-4 semaines, et reste plus longtemps positive> 1an. Elle
permet la mise en évidence des IgG, elle est utilisée dans les enquêtes épidémiologiques.

-Séroagglutination de Wright (SAW) : test quantitatif, réaction d’agglutination en tube ou en plaque

qui permet la mise en évidence des IgM et IgG. Elle permet le diagnostic d’une brucellose aiguë 10 à
15J, mais se négative rapidement lors brucellose subaiguë et chronique <1an. Un titre supérieur ou
égal à 1/80 ème (100 UI) est significatif.

-Immunofluorescence indirecte: Elle est positive plus tardivement, > 4semaines, que l’agglutination
de Wright et permet le diagnostic d’une brucellose subaiguë et chronique.

Comparaison des différentes techniques de diagnostic en fonction du stade de la maladie

Brucellose. aigüe Brucellose focalisée Brucellose

chronique
Hémoculture +++ +/- -
SDW (IgM et IgG) +++ +/- -
EAT (IgG) + (après 10-15 j ) ++ +/-
IFI (IgG) ++ (12-15j) ++ +/-

Diagnostic génomique : Permet d’identifie le genre Brucella par amplification du gène codant pour
l’ARN ribosomal 16 S suivie d’un séquençage ou PCR en temps réel.

VI- Traitement : doit être long et bactéricide

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Bithérapie : Doxycycline +Gentamycine

VII- Prophylaxie :

1-Individuelle :

▪ Protection : gants, masque, lunette pour les laborantins, les vétérinaires et les éleveurs.
▪ Lavage fréquent des mains.
▪ Interdiction de consommer des produits laitiers et les dérivés non pasteurisés.
▪ Dépistage régulier par le test de Wright pour tous laborantins (manipulant des prélèvements ou
des souches à risque), les vétérinaires et les éleveurs.

2-Collective :

▪ Pas de vaccin commercialisé

▪ Abattage des animaux dépistés par sérologie positive
▪ Décontamination des surfaces par 0,5 % d’hypochlorite.