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TD N°1 : ENTEROBACTERIACEAE, ’’ ENTEROBACTERIALES ’’

1-Caractères bactériologiques

Ce sont des bacilles droits ou coccobacilles à Gram négatif, non acido-

résistants, de ( 0,3 à 1,0 µm )de diamètre sur (1,0 à 6,0 µm) de longueur, non
sporulés, parfois capsulés( exp :Klebsiella ) possédant une ciliature péritriche
pour les espèces mobiles ( immobiles : Klebsiella, Shigella, Salmonella gallinarum)
, aéro-anaérobies facultatifs , chimio-organotrophes, possédant à la fois un
métabolisme respiratoire et fermentatif, fermentant le glucose ( avec ou sans
production de gaz) , catalase positive, oxydase négative, nitrate réductase
positive, capable de croitre sur des milieux ordinaire à base de peptone ou
d’extrait de viande, non halophiles.

2-Caractères culturaux

Les colonies sont généralement rondes, lisses, à contour régulier et leur

diamètres est de( 2à3 mm) après 18h d’incubation à 35-37°C. En bouillon, on
obtient un trouble homogène. Quelques espèces font cependant exception.

Des colonies muqueuses, de consistance gélatineuse, de taille plus importante,

sont fréquemment obtenues avec les souches capsulées du genre Klebsiella.

Les espèces du genre Proteus peuvent envahir la surface des milieux

normalement gélosés utilisées pour l’isolement (essaimage ou swarming)

3-Caractères biochimiques (voir tests biochimiques)

4-Caractères antigéniques

Les entérobactéries présentent un antigène de paroi de nature

lipopolysaccharidique (antigène O) et éventuellement des antigènes flagellaires
de nature protéique (antigène H) et des antigènes de nature polysaccharidique (
antigène K) correspondant soit à l’antigène capsulaire.
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5-Habitat et pouvoir pathogène

Les entérobactéries sont présentes dans le monde entier et elles ont un habitat
très large : Intestins de l’homme et des animaux, eau douce, sol, végétaux et
elles peuvent contaminer des denrées alimentaires.

• Escherichia coli est un hôte normal de la flore intestinale (notamment du

colon) de l’homme et des animaux. Toutefois certains sérovars ou clones
sont responsables d’infections digestives (souches EPEC Enteopathogenic
Escherichia coli , ETEC Enterotoxigenic Escherichia coli EIEC
Enteroinvasive Escherichia coli, EHEC Enterohemorrhagic Escherichia
coli ... ) ou extradigestives.

• Salmonella spp. Sont présentent dans l’intestin de l’homme et des

animaux vertébrés. Les souches de Salmonella enterica subsp.enterica
sont hébergées dans l’intestin de l’homme et des animaux endothermes

Les sérovars Typhi Paratyphi A , Paratyphi C et Sendai ne sont isolés que

chez l’homme et ils provoquent des syndromes typhoïdiques .

Les sérovars Abortusovis et Abortusequi sont respectivement spécifiques

des ovins et des équidés et ils sont à l’origine d’avortement.

De nombreux sérovars sont ubiquistes et à l’origine de toxi-infections

alimentaires chez l’homme et d’infections diverses chez les animaux.

• Shigella dysenteriae la dysenterie bacillaire est principalement due à

Shigella dysenteriae . Les autres espèces sont responsables d’entérites
infectieuses.

• Yersinia pestis : est l’agent de la peste du rat et d’autres rongeurs et

Y.pseudotuberculosis est l’agent de la pseudotuberculose des rongeurs.
L’infection peut également concerner l’homme, la dinde, le bélier et le
porc.

Y.enterocolitica (Gastro-entérite)
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6-Diagnostic bactériologiques

Mise en culture : sur un milieux non sélectif et sur un milieux sélectif

(Mac Conkey , gélose Drigalski ou gélose EMB, gélose SS ,
Hektoen...).(voir tableaux)

7- Identification : Etude macro et microscopique, étude physiologique et

biochimique, identification sérologique et moléculaire

8-Etude de la résistance aux antibiotiques : Les entérobactéries

résistent souvent à de multiples antibiotiques en raison d'une résistance
intrinsèque et/ou d'une résistance acquise.
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Milieu Mac Conkey

Sélectivité Caractères Lecture

Ce milieu le lactose dont colonies rouges entourées d’un halo opaque de la même
+
contient deux l’utilisation est couleur du à la précipitation des sels biliaires: lactose
inhibiteurs de la révélée par
+
flore Gram : colonies incolores : lactose
-
l’indicateur
coloré du milieu,
- les sels le rouge neutre.
biliaires

- le cristal violet

Tests biochimiques
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2-Recherche de l’oxydase

La recherche de l’oxydase présente un intérêt taxonomique en ce qui concerne les

bactéries à Gram -. Le test consiste à mettre en évidence la capacité que possède la
bactérie à oxyder un réactif incolore (la NN-diméthyl-paraphénylène diamine) en un
dérivé de couleur violette.

NN-diméthyl-paraphénylène diamine Produit coloré

Oxydase
(Imprégnant un papier buvard) (Indole-phenol)

incolore Coloration violette

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3-Recherche de la nitrate réductase

Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une

enzyme du métabolisme énergétique : la nitrate réductase.
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4-Recherche de l’indole ou de la tryptophanase sur milieu urée –tryptophane

ou sur une eau peptonée exempte d’indole (EPEI)
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Mise en évidence de la production d’indole sur le milieu urée-tryptophane

Mise en évidence de la production d’indole sur l’eau peptonée exempte d’indole

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5-Différenciation entre fermentation des acides mites et butylène glycolique

Réaction de Voges –Proskauer (VP) : Au cours de la fermentation butylène

glycolique, les bactéries produisent de l’acétoine. En présence d’une base forte
et de l’alpha-naphtol, l’acetoine donne une coloration rouge en milieu très
oxygéné.

Réaction au rouge de méthyle (RM) : c’est la mise en évidence de l’acidification

finale d’un milieu glucosé après fermentation des acides mixtes.
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