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Les Bacillus

Aspect microscopique
Bacilles Gram +
prsentant une spore
lEF : mobiles le
plus souvent par
ciliature pritriche

Distinction de trois
groupes:
Bacillus spore
ovale non dformante,
Bacillus spore
ovale dformante,
Bacillus spore
ronde dformante

Observation au MEB

Forme vgtative : bacilles bouts arrondis

Forme de rsistance : spore


dans un environnement
favorable permet le
dveloppement dun nouveau
Bacillus.

Bacillus anthracis
Observation microscopique
Grand bacille (5 m de long, 1
m de large),
Gram +,
Formant une spore ovalaire
centrale non dformante.
immobiles
capsul
Caractres biochimiques:
AAF, glucose +, non exigeant, VP
+ (caractre de la classification
des Bacillus), glatinase +,
urase -, maltose +, saccharose
+ trois facteurs agissant
Il labore une toxine comprenant
en synergie:
facteur I oedmatogne
facteur II immunogne
facteur III ltal

Les milieux de culture des Bacillus


Glose lamidon
Glose nutritive 1% damidon de riz ou de pomme de
terre
Ensemencer par une strie centrale
partir dune suspension
bactrienne.
Ou en faisant 5 ou 6 dpts dse
sur la glose

Incuber 24 heures
37C

Glose loeuf
Glose trypticase-soja 10% de jaune duf strile
Ensemencer par une strie centrale
partir dune suspension
bactrienne.
Ou en faisant 5 ou 6 dpts dse
sur la glose

Incuber 24 heures
37C

Milieu TCA

Source N

Composition
Peptone trypsique de casine
Chlorure de sodium
Sulfite de sodium
Cystine
Rouge de phnol
Glose
ED

pH = 6,8 7

20 g
5g
0,5 g
0,5 g
0,017 g
2,5 g
qsp 1 L

Sources minrales
Source de C et N

Indicateur de pH

Ensemencement
Rgnrer les milieux 20 min au BM 100C.
Refroidir les tubes 45C.
Incorporer le sucre dsir pour une concentration
finale de 1% (10g.L-1).
Solidifier les milieux sous leau froide.
Ensemencer par piqre centrale.
Incuber 24 heures 37C.

Milieu de Mossel
Composition
Extrait de viande
Peptone
Mannitol
Chlorure de sodium
Rouge de phnol
Agar
ED

pH = 7,1

Source N

1g
10 g
10 g
10 g
0,025 g
12 g
qsp 1 L

Sources de carbone
Sources minrales

Indicateur de pH

Au moment de lemploi, ajouter 90 mL de milieu:


10 mL de jaune duf dilu au dans de leau
physiologique
1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine 1 mg/mL
(Inhibiteur)
Cest
un milieu disolement slectif des
Bacillus de lespce Bacillus cereus
partir des aliments ou des selles.

Ensemencement

Isolement par la technique des quadrants.

Glose au lait
Glose blanche 2,5 3% dagar en solution dans leau dans
laquelle on ajoute la mme quantit de lait strile.

Ensemencer en faisant 5 ou 6
dpts dse sur la glose
Incuber 24 heures
37C

Lecture des milieux

Glose lamidon

Recouvrir de lugol la glose aprs


Pas de coloration noire autour
culture
des cultures: absence damidon
il a t hydrolys par les
bactries, test positif
Coloration noire autour des
cultures: prsence damidon
test ngatif

Glose luf

Lecture directe:
claircissement du milieu de
culture les bactries ont
hydrolys les lcithines du
jaune duf , test positif
Pas de changement du milieu
test ngatif

Glose Mossel
Colonies rouges entoures dun
halo opaque et blanchtre
suspicion de Bacillus cereus,
LECITHINASE +++

Colonies rouges pas dutilisation


de mannitol par les bactries
MANNITOL Prsence dun halo: hydrolyse des
lcithines par une lcithinase, en
choline soluble et diglycride
insoluble qui prcipite dans le milieu
en formant un trouble.

Glose au lait
Lecture directe aprs culture

Halo clair autour de la culture


hydrolyse de la casine, test
positif
Pas de modification du milieu
autour de la culture test
ngatif, la casine nest pas
hydrolyse.

Correction du TP
1er jour

N impair: Bacilles en chanette


Gram +

N pair: Bacilles en chanette Gram


+
prsence dune spore
dformante dans le bacille.

2nd jour
Coloration des spores au vert de
Malachite

N pair: prsence dune spore


centrale ovode dformante

Lecture du VF
N impair: culture en surface AS
1re orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase
+, VP+, non exigeants,(sporogne), AS
orientation vers le genre Bacillus.
N pair: culture dans tout le tube
AAF
1re orientation: Bacilles Gram +, mobiles,
VP+, non exigeants, sporognes, AAF
orientation vers le genre Bacillus.

Lecture des milieux CTA


N
impair

gluco
se
Virage de lindicateur
de pH glucose +

xylos
e
Virage de lindicateur
de pH xylose +

arabino
se
Virage de lindicateur
de pH arabinose +

N pair

gluco
se
Virage de lindicateur
de pH glucose +

xylos
e
Pas de virage de
lindicateur de pH
xylose -

arabino
se
Pas de virage de
lindicateur de pH
arabinose -

Lecture de la glose lamidon


(npair et impair)
Pas de coloration autour de la
culture absence damidon qui a
t hydrolyse par l-amylase des
Bacillus.

Lecture de la glose au lait (npair


et impair)
Prsence dun halo dclaircissement autour de la culture
de la casine a t hydrolyse par les protases des Bacillus.

Lecture de la glose luf


n pair
Prsence dun halo clair autour de
la culture les lcithines ont t
hydrolyses par la lcithinase des
Bacillus.

n
impair
Pas de modification autour de la
culture les lcithines nont pas
t hydrolyses.

Lecture de la glose de Mossel


n pair

Colonie rose pas dutilisation du


mannitol par les Bacillus
MANNITOL Prsence dun halo clair autour de
la culture les protines du jaune
doeuf ont t hydrolyses par les
protases des Bacillus.

Prsence dun halo opaque autour


de la culture les lcithines ont t
hydrolyses par la lcithinase des
Bacillus.

Suspicion de Bacillus cereus


Identification de lespce: Bacillus prsentant divers enzymes (-amylase,
lcithinase, protases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractristique
sur Mossel Bacillus cereus.

Lecture de la glose de Mossel


n
impair

Colonie jaune Utilisation du


mannitol par les Bacillus
MANNITOL +

Absence dun halo opaque autour


de la culture les lcithines nont
pas t hydrolyses par les Bacillus.

Il sagit dun Bacillus autre que


Bacillus cereus
Identification de lespce: Bacillus prsentant divers enzymes (-amylase,
protases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132
du livre).