TP n:2 La production des amylases

chez le genre Bacillus

par : TIFRIT ABDELKRIM

L/O/G/O

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Introduction
Les amylases sont des enzymes qui hydrolysent les molcules d'amidon pour
donner des produits divers, y compris les dextrines et progressivement des
produits plus petits compose d'units de glucose. Ces enzymes sont d'une
grande importance en matire de biotechnologie et dtiennent la part majeur du
march mondial des enzymes.
Bien que les amylases peuvent tre tires de plusieurs sources: les plantes, les
animaux et les microorganismes; cest derniers reprsentent la source prfre et
rpondent gnralement aux exigences industrielles. Aujourd'hui un grand
nombre d'amylases microbiennes sont disponibles dans le march et ils ont
presque compltement remplac lhydrolyse chimique de l'amidon
dans l'industrie de biotransformation. avec des applications allant de
lalimentation , dtergents, du textile aux industries du papieretc.

Objectif du TP
Isoler des bactries du genre Bacillus
Tester leur capacit produire des
amylases et de dgrader lamidon

Dfinition de Lamidon
Lamidon est le polysaccharide de rserve du rgne vgtal ou il
est localis dans les cellules parenchymateuses sous forme de
granules (amyloplastes). Il est particulirement abondant dans
certaines espces qui constituent, pour cette raison, les principaux
aliments glucidiques de lhomme (graine de crales telles que
bl, mas, riz et certains tubercules tels que les pommes de terre).

Proprit de lamidon
Lamidon est insoluble dans leau froide. Dans
leau chaude, il se forme un empois (proprit
prsentant une importance dans lindustrie des
colles et textiles).
Il est compos de deux substances diffrentes :
lamylose (15-30%) et lamylopectine (70-85%).
Il se colore en bleu par la solution iode. Cette
proprit est la base de la quantification et le
suivis de la dgradation de lamidon.

Structure de lamidon

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1) Lamylose
cest un polysacc
haride linaire co
nstitu par des un
relies par des lia
its de D-glucopy
isons (1--4) et p
ranose
o
s
sdant une mass
15000 600000.
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altose. La molc
prendre une struc
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tabilise par des
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us glucosyle par to
ur de spire.

clusion bleu fonc.

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Liode ragit avec lamylos
e hlicodale. En effet,
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centre de lhlice prsente
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le
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do
de
lio
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av
formation des complexes
lice.
paralllement laxe de lh

Lamylose

2) Lamylopectine
cest un polysaccharide ramifi, constitu par des chaines formes
dunits de D-glucopyranose relies par des liaisons (14) ; ces
chaines tant runies entre elles par des liaisons (16). Il existe
environ un branchement pour 20 25 units de D-glucose.

La molcule prsente une structure arborescente. Lindustrie des

colles et dadhsifs utilise des dextrines qui sont des produits de la
dgradation partielle de lamidon, constitus par de courte chaines de
restes de D-glucopyranoses relis par des liaisons (14).

Lamylopectine

Gnralit sur les

amylases
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Dfinition des amylase

L-amylase comme toutes les enzymes est une
macromolcule appartenant la classe des protines
globulaires, de type endoglycanase de la classe des
hydrolases qui agit sur les liaisons (1 4) de
lamidon. Elle est largement reprsente chez les
animaux, les vgtaux et les micro-organismes.

Calcium ion

Structure 3d de l-amylase

Les diffrentes sources de l-amylase

Les -amylases peuvent avoir plusieurs sources :

amylase

vgtale

animale

microbienne

Lavantage de la production des enzymes par

les microorganismes :
Des que le dveloppement de la microbiologie a permis de mieux comprendre
les systmes qui prsident la synthse des enzymes chez les
microorganismes, la production industrielle denzymes sest oriente vers les
processus fermentaires. Les principaux avantages des enzymes de
fermentation par rapport aux enzymes dextraction sont les suivant :
Une production indpendante des contraintes saisonnires et gographiques ;
Une possibilit dutilisation de matires premires bon march ;
Des rendements de production pouvant tre augments de faon importante
par lamlioration des souches microbiennes et loptimisation des conditions de
fermentation.

Protocole exprimental

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Isolement des bactries du

genre bacillus
Choc thermique 80c
pendant 10 min au bain
marie

chantillon de
sols

Isolement des souches bactriennes

productrice damylases

Starch agar + Lugol

Zone damylolyse

Culture pure

Slection des souches les plus

performantes

Mesure de la zone
dhydrolyse

Diamtre performance
starch agar + lugol

Les applications industrielles

et biotechnologiques de l'amylase
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Dans la glucoserie et la sucrerie

L' - amylase est utilise pour faciliter les oprations d'extraction et de

raffinage du saccharose partir de la betterave ou de la canne sucre
pour liminer des traces d'amidon gnant la purification .De plus, des amylases fongiques sont trs utilises pour la prparation des sirops
sucrs base d'amidon de mas et de sirops de chocolats

Panification et biscuiterie
Lusage de lalpha amylase
amliorant de panification est
devenue une pratique de fabrication
machinal dans lindustrie panaire,
non seulement pour amliorer la
qualit du pain mais aussi pour
contrler le processus, de
fabrication ce qui conduit un gain
en temps et en nergie. Cette
industrie emploie les -amylases
pour la rgulation des activits
diastasiques des farines en
dgradant l'amidon en maltose.
Cette opration favorise la
formation de la mie souple en
boulangerie et amliore la texture
des gteaux ptissiers et des
biscuites (Malhotra et al., 2002).

Industrie des boissons

Dans ce secteur l' - amylase intervient essentiellement dans la

fabrication d'alcool thylique, de boissons sucres non alcoolises,
de jus de fruits (Mamo et al., 1999). En brasserie, elle permet
d'obtenir des bires sans dextrines, dites bires basses calories

Dans le domaine mdical

L'augmentation du taux des - amylases dans le sang peut tmoigner d'une
pancratite aigu et se rencontre galement dans certains cancers digestifs
et dans les oreillons (Lo et al., 2001) , elles sont donc employes en
diagnostic mdical pour dtecter certaines maladies.

Autres applications
Les -amylases sont aussi utilises dans l'industrie textile pour le dsencollage
des tissus ainsi que dans les domaines de la tannerie, de la papeterie et des
dtergents pour les lessives o elles facilitent la disparition des tches
en dgradant les souillures, permettant ainsi l'augmentation du pouvoir
blanchissant. Elles sont utilises aussi dans le traitement des eaux rsiduaires
pour llimination de l'amidon