CHRISTELLE TARABAY – TECHNIQUES PARASITOLOGIQUES

Parasite au
Nom de la technique Réactif + Mode de préparation Quelques remarques
microscope
Colorations
Examen direct classique (une goutte d'eau sur une lame +
un fragment des selles) ou utiliser le culot de Les kystes des
Coloration au lugol
centrifugation d'une technique de concentration. protozoaires
+une goutte de lugol
Examen direct classique (une goutte d'eau sur une lame +
- Cytoplasme en rouge
un fragment des selles) ou utiliser le culot de
Coloration au MIF - Structures nucléaires en
centrifugation d'une technique de concentration.
rouge sombre ou noir
+ une goutte de MIF (Merthiolate, Iode, Formol)
Dépôt d'une goutte de culot de Ritchie sur une lame - Objectif x25
Les oocystes de
+ Fuschine (Coloration) - La coloration de Ziehl-Neelsen
Coloration de Ziehl- cryptosporidies
+Acide sulfurique (Différenciation) n’est pas seulement utilisée
Neelsen modifiée - Fond vert
+Vert malachite (Coloration de fond ou de contraste) pour Mycobacterium mais aussi
- Parasites roses
pour certains parasites.
- Faire une suspension : Selles + Eau distillée ou NaCl
- Filtrer les selles à l'aide d'un porte filtre fixé sur un tube
Les spores de
Falcon
Microsporidies
Coloration de Weber - Faire une lame avec le filtrat - Objectif x100 pendant 10 min
- Fond bleu
+ méthanol (Fixation)
- Parasites roses
+ trichrome (Coloration)
+ acide-alcool puis alcool 95% (Rinçage)
- Faire une suspension : Selles + Eau distillée ou NaCl
- Filtrer les selles à l'aide d'un porte filtre fixé sur un tube
- Microscope à fluorescence au
Falcon Les spores de
grossissement x400 (objectif
Coloration de Van Gool - Faire une lame avec le filtrat Microsporidies
40) ou au grossissement x1000
+ méthanol (Fixation)
(objectif 100 à l'immersion)
+ goutte de fluorochrome
+ Bleu Evans (Coloration de contraste)

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Nom de la
Réactif + Mode de préparation Parasite au microscope Quelques remarques
technique
Techniques de recherche des parasites sanguicoles
- Prélèvement sur tube capillaire Le paludisme et d'autres parasites - Microscope à fluorescence
+ Acridine orange (Colorant fluorescent) sanguins - Test sensible (il peut détecter moins
Quantitative - Fond sombre qu'un parasite par μL de sang et établir
buffy coat (QBC) - Les parasites émettent une le diagnostic plus tôt que le film épais
fluorescence brillante. dans 47% des cas de faible parasitémie)

- Dépôt du sang : déposer une grosse goutte de sang - Méthode de référence du Plasmodium
(double size). - Il y a hémolyse dans cette technique.
- Défibrination : pour empêcher la coagulation, étaler en
tournant de 1 cm de diamètre avec le coin d'une autre
lame.
- Sécher 24h à temp ambiante ou 2h à 37°C
Goutte épaisse
-Lyse des GR et libération de l’Hb : recouvrir la goutte
épaisse du mélange Giemsa concentré
(3 gouttes, 2 ml eau neutre) ou tremper la lame dans de Figure: Défibrination
l’eau distillée.
+ Alcool méthylique (Fixation)
+ Giemsa : 1 ml, eau neutre qsp (Coloration)
La lame est colorée selon la méthode de May-Grünwald- Les parasites : - Pas d’hémolyse dans cette technique
Frottis mince ou
Giemsa (MGG) -Noyau rouge + cytoplasme bleu - Les parasites sont retrouvés à
épais
l’intérieur des globules rouges.
Centrifuger successivement 10 ml de sang prélevé sur - Perte de la vitalité des parasites par
anticoagulant à 1500 tours/min, prélever le plasma cette technique
surnageant de la première centrifugation et recentrifuger - La triple centrifugation donne de
Technique de à la même vitesse, enfin prélever le plasma surnageant meilleurs résultats dans les
triple de la deuxième centrifugation et recentrifuger à 3000 trypanosomes que dans les filarioses.
centrifugation tours/min. -Elle est sans intérêt dans les autres
-Prendre le culot et faire une lame parasitoses sanguicoles.
- Elle est faite pour les extraglobulaires
et pas d’intérêt pour le paludisme.

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Réalisation du petit dispositif à

observation :
Concentration Prendre 2 lames, en casser une dans le
par Aspirer le sang dans le tube capillaire, boucher et Méthode utilisée pour concentrer le sens de la longueur et coller les deux
centrifugation en centrifuger à une vitesse maximale pendant au moins 5 sang en vue de la recherche des parties obtenues sur la première.
tubes capillaires min. trypanosomes. - Il ne faut pas attendre (mobilité des
de Wood trypanosomes)
- objectif x100 + huile d’immersion

- Lyse des GR sans léser les microfilaires pour concentrer

le sang recueilli. - Recherche de microfilaires
- Diluer 2 ml de sang sous EDTA + 4 ml de NaCl 0.9% + 3 sanguicoles (parasites
gouttes de saponine (Solution lysante) extraglobulaires : trypanosomes et
Concentration Ho - Boucher + agiter le tube doucement surtout microfilaires). Technique de leucoconcentration ne
Thi Sang - Centrifuger pendant 5 min à grande vitesse + rejeter le - Le culot ne comporte que des tuant pas les parasites.
surnageant leucocytes et des microfilaires
- Examiner le culot entre lame et lamelle (x10) ou réaliser vivantes.
des frottis colorés au MGG.

- Sang+ Formol (Solution lysante)

- Sédimentation
- Prendre du culot et voir entre une lame et une lamelle.

- Recherche des parasites Technique de leucoconcentration tuant

Technique de
extraglobulaires : trypanosomes et les parasites.
Knott
surtout microfilaires.

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Parasite au
Nom de la technique Réactif + Mode de préparation Quelques remarques
microscope
Techniques de recherche des parasites intestinaux
- Dilution : 1 volume de selle + 10 volumes de réactif de - Recherche de formes - Les formes végétatives ne
Ritchie (100 mL de formol, 9g de NaCl, 900 mL ED) kystiques ou d'œufs. peuvent plus être mises en
- Mélanger + laisser sédimenter évidence après concentration
- Mettre le surnageant dans un tube à centrifuger - Les œufs d'Ascaris sont
Technique de - Ajouter de l'éther (Laisse les parasites sédimenter) détruits par cette méthode.
concentration de Ritchie - Centrifuger 2 min à 1500 tr/min
- Eliminer les 3 couches supérieures pour garder le culot
-Faire un examen direct sur le culot de centrifugation.

- Diluer les selles au 1/10ème dans une solution de MIF - Recherche de formes Les formes végétatives ne
(Merthiolate-Iode-Formol) kystiques ou d'œufs. peuvent plus être mise en
-Tamiser sur chinois Figure: Le tamis évidence après concentration
MIF concentration - Mélanger 10ml du filtrat à 4ml d'éther
- Centrifuger 1min à 1700tr/min
- Eliminer le surnageant par retournement
- Examiner le culot entre lame et lamelle.
- Mélanger : 20 ml de tampon acéto-acétique + une noix - Parasite jaune, jaune- POSSIBILITE D'UTILISATION DE
Méthode de
de selle orange ou jaune-brun L'ACETATE D'ETHYLE COMME
concentration
- Laisser reposer pour sédimenter les débris - Fond bleu plus ou SOLVANT ORGANIQUE A LA
d’éléments parasitaires
- Mettre le surnageant dans un tube + éther moins foncé. PLACE DE L'ETHER.
selon bailenger et
- Agiter puis centrifuger
coloration par le kop
- Jeter le surnageant puis ajouter du NaCl au culot
color II
- Mettre le mélange sur une lame + ajouter le kop color II
Homogénéiser le prélèvement au moyen d'un mortier et - Mise en évidence de C'est une méthode de
Technique d'extraction d'un pilon (humidifier si les fèces sont trop sèches larves rhabditoïdes. concentration "biologique"
de Baermann Figure: un mortier basée sur l'hygrotropisme
et un pilon (tropisme pour l’humidité) et le

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- Mettre des selles sur de la gaze disposée sur une - Technique de référence thermotropisme des larves
passoire (compresse) pour le diagnostic d'anguillule.
- Poser la passoire dans un entonnoir (fermé) contenant d'anguillulose.
de l'eau tiède
- Laisser reposer 2-3H puis récupérer le liquide
- Centrifuger 3 min à 1500tr/min
- Réaliser un examen microscopique sur le culot de
centrifugation.

- Presser les selles à travers un tamis à mailles pour - Diagnostic qualitatif et

éliminer les grosses particules. semi-quantitatif des
- Une partie de l'échantillon tamisé est ensuite transférée infestations intestinales
dans le trou d'un gabarit sur une lame. helminthiques; causée
- Après avoir rempli le trou, le gabarit est retiré et par Ascaris lumbricoides,
Technique de Kato-Katz l'échantillon restant est recouvert d'un morceau de Trichuris trichiura,
cellophane imbibé de glycérol. ankylostome et surtout
- Le glycérol élimine les matières fécales autour des œufs. Schistosoma spp.
- Les œufs sont ensuite comptés et le nombre calculé par
gramme de matières fécales.

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Nom de la technique Réactif + Mode de préparation Parasite au microscope Quelques remarques

Enrichissement par flottation
Par dilution des selles dans un liquide de densité supérieure à celle des parasites qui se concentrent en surface.

- Placer un morceau de selle dans un flacon

- Ajouter la solution de Willis (une solution
aqueuse à saturation de chlorure de sodium NaCl)
Œufs d’ankylostomes et
Technique de Willis - Ecraser le morceau et homogénéiser
d’Ascaris fertiles.
- Remplir complétement le flacon
- Déposer une lamelle sur l’orifice du flacon
- Retirer et déposer la lamelle sur une lame.

- Dilution homogène : selles + eau distillée

- Tamiser
- Centrifuger 2 à 3 min a 3000 tours/min  
Technique de JANECKSO - Eliminer la phase aqueuse
et URBANYI modifiée - Diluer le culot avec le réactif iodomercurique
- Centrifuger 2 min a 2000 tours/min

- Prélever 4 à 5 gouttes du film superficiel avec
une anse métallique.
Enrichissement par sédimentation
Par dilution fécale dans un liquide de densité inférieure à celle des éléments parasitaires qui se concentrent par décantation.
Mise en évidence des œufs
- Placer un scotch sur l’anus
Scotch-test de Graham d’oxyures (Enterobius Objectif x10
-Retirer le scotch et le coller sur une lame
vermicularis)
Coproculture
Mise en évidence des anguillules
Milieu NNN Milieu de culture des parasites
et des ankylostomidés.

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L’échelle de Bristol
Type 1 : petites, dures, détachées, difficiles à évacuer (forme de noisettes)
Constipation
Type 2 : dures et grumeleuses (forme de saucisse)

Type 3 : craquelures sur la surface (forme de saucisse)

Selles idéales
Type 4 : lisse et douce (forme de saucisse)

Type 5 : morceaux mous

De plus en plus vers la Type 6 : morceaux duveteux, en lambeaux, selles détrempées

diarrhée
Type 7 : pas de morceaux, entièrement liquides

Les différentes couleurs des selles

Marron Tout est bien
Vert Manger trop des légumes verts ou de la nourriture colorée en vert
Jaune Un excès de graisse, un trouble de malabsorption(maladie de cœliaque), glissant et très odorant
Noir Hémorragie, cancer, prise du fer, …
Clair ou blanc Obstruction des voies biliaires ou certains médicaments
Saignant ou rouge Cancer