M.C. Gutirrez, M.

Droguet IDENTIFICACIN DE COMPUESTOS VOLTILES POR CG-MS

LA CROMATOGRAFA DE GASES Y LA ESPECTROMETRA DE MASAS: IDENTIFICACIN DE COMPUESTOS CAUSANTES DE MAL OLOR

M.C. Gutirrez*, M. Droguet**

0.1.

Resumen

0.3.

Se describe la cromatografa de gases y su acoplamiento con la espectrometra de masas, tcnicas que constituyen una herramienta potente para separar, identificar y cuantificar los componentes voltiles y semivoltiles de mezclas complejas. Se aplican estas tcnicas a la identificacin de los compuestos que producen mal olor en un tejido. Para ello, se emplea tambin la extraccin de espacio en cabeza. De los resultados del anlisis GC-MS se desprende que la principal causa del mal olor es la presencia de sulfuros orgnicos en el tejido.
Palabras clave: Cromatografa de gases, GC, espectrometra de masas, MS, cromatografa de gases-espectrometra de masas, GC-MS, espacio en cabeza, head-space, compuestos orgnicos voltiles, mal olor, sulfuros orgnicos, dimetil disulfuro, dimetil trisulfuro

Rsum: LA CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE ET LA SPECTROMTRIE DE MASSES: IDENTIFICATION DES COMPOSS QUI PRODUISENT UNE MAUVAISE ODEUR

La chromatographie en phase gazeuse et la spectromtrie de masses sont dcrites. Le couplement de ces deux techniques constitue un outil important pour sparer, identifier et quantifier les composs volatiles et semi volatiles de mlanges complexes. Ces techniques sont appliques lidentification des composs qui produisent une mauvaise odeur sur un tissu. Dans ce cas, la technique dextraction head-space est aussi employe. Daprs les rsultats de lanalyse, la principale cause de la mauvaise odeur est attribue la prsence de sulphurs organiques sur le tissu.
Mots cls: Chromatographie en phase gazeuse, GC, spectromtrie de masses, MS, chromatographie en phase gazeuse-spectomtrie de masses, GC-MS, head-space, composs organiques volatiles, mauvaise odeur, sulphurs organiques, dimetyl disulphur, dimethyl trisulphur

0.2.

Summary: GAS CHROMATOGRAPHY AND MASS SPECTROMETRY: IDENTIFICATION OF OFFODOURS COMPOUNDS

Gas chromatography and mass spectrometry are described. The coupling of these techniques constitutes a potent tool to separate, identify and quantify the volatile and semi-volatile components of complex mixtures. These techniques are applied to the identification of compounds which produce offodours on a fabric. In this case the head-space extraction is also used. The analysis results show that the main cause of these odours is the presence of organic sulfides on the fabric.
Key words: Gas chromatography, GC, mass spectrometry, MS, gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS, head-space, volatile organic compounds, bad smell, organic sulphurs, dimethyl disulfide, dymethil trisulfide

1.

INTRODUCCIN

M. Carmen Gutirrez Bouzn, Dra. en Qumica, Investigadora de la Universidad Politcnica de Catalunya, en el Laboratorio de Control de la Contaminacin Ambiental Marta Droguet, Ing. Industrial, Lasem

**

El primer trabajo en el que se hace pasar una fase mvil gaseosa a travs de una columna data de 1951, dando lugar a la tcnica conocida como cromatografa de gases. Esta tcnica, descrita por Martin y James en 1952, es en la actualidad en mtodo usado ampliamente para la separacin de los componentes voltiles y semivoltiles de una muestra. La combinacin de altas resoluciones, sensibilidad y tiempos de anlisis cortos la ha convertido una tcnica de rutina usada en la mayora de los laboratorios qumicos. Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de disponer de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama). Adems, para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms sensibles que los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La instrumentacin requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y econmica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la 35 35

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cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta limitaciones en tres casos: compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a., compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada (determinados compuestos de inters biolgico), compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son en general poco voltiles). Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de un compuesto en una muestra determinada. Esto se lleva a cabo por comparacin del cromatograma de la sustancia pura con el de la muestra, siempre que las condiciones para la obtencin de ambos sean idnticas. Una de las dificultades de esta comparacin es que puede haber diferentes compuestos que presenten el mismo comportamiento cromatogrfico bajo condiciones idnticas, lo que llevara a identificaciones errneas. En consecuencia, las mejores tcnicas de anlisis cualitativo son aqullas que combinan la capacidad de separacin de la cromatografa con la capacidad de la identificacin de tcnicas como la espectroscopa de masas (tcnicas acopladas). Por otra parte, tambin se utiliza la cromatografa de gases para establecer la cantidad de componentes individuales presentes en una muestra, empleando curvas de calibracin de los correspondientes patrones. A tal efecto, se pueden emplear diferentes detectores basados generalmente en la medida de una determinada propiedad fsica de los componentes a analizar. Algunos de ellos son universales, mientras que otros resultan ms selectivos y responden nicamente a algunos de los componentes de una mezcla. En este sentido, la espectrometra de masas acoplada a la cromatografa de gases puede resultar un detector universal para la cuantificacin de sustancias orgnicas si se registran el total de los iones generados (modo TIC) o bien un detector ms especfico cuando se seleccionan unos iones de masa determinada (modo SIR).

1.1.

La cromatografa de gases

En cromatografa de gases, la muestra se inyecta en la fase mvil, la cual es un gas inerte (generalmente He). En esta fase, los distintos componentes de la muestra pasan a travs de la fase estacionaria que se encuentra fijada en una columna. Actualmente, las ms empleadas son las columnas capilares.

La columna se encuentra dentro de un horno con programacin de temperatura. La velocidad de migracin de cada componente (y en consecuencia su tiempo de retencin en la columna) ser funcin de su distribucin entre la fase mvil y la fase estacionaria. Cada soluto presente en la muestra tiene una diferente afinidad hacia la fase estacionaria, lo que permite su separacin: los componentes fuertemente retenidos por esta fase se movern lentamente en la fase mvil, mientras que los dbilmente retenidos lo harn rpidamente. Un factor clave en este equilibrio es la presin de vapor de los compuestos (en general, a mayor presin de vapor, menor tiempo de retencin en la columna). Como consecuencia de esta diferencia de movilidad, los diversos componentes de la muestra se separan en bandas que pueden analizarse tanto cualitativa como cuantitativamente mediante el empleo de los detectores seleccionados. Existen tres tcnicas bsicas de inyeccin de muestras (lquidas o gaseosas) en columnas capilares: split, split-less y on column. Las dos primeras consisten en inyectar y vaporizar la muestra en una cmara de vaporizacin. El sistema split desva la mayor parte de la muestra fuera del sistema cromatogrfico y enva slo una pequea fraccin a la columna. El mtodo split-less dirige toda la muestra a la columna, por lo que resulta ms adecuado para el anlisis de trazas o de componentes muy voltiles. La inyeccin oncolumn se lleva a cabo en fro, eliminando la etapa de vaporizacin que podra producir la descomposicin de los compuestos termolbiles. En ocasiones, por ejemplo en el caso de muestras de tejidos, se desean analizar los componentes voltiles contenidos en muestras slidas. En tal caso, es necesario efectuar una extraccin previa con un disolvente adecuado e inyectar el extracto en la columna. La extraccin de espacio en cabeza (HS: head-space) es una alternativa ms rpida a la extraccin en Soxhlet, que adems evita la prdida de los componentes ms voltiles. En este mtodo, la muestra slida se coloca en un vial sellado con un septum y se calienta durante un tiempo determinado a la temperatura fijada. Durante esta operacin, la mayor parte de los compuestos voltiles se transfieren al aire del vial, denominado espacio de cabeza. Se calienta el tiempo suficiente para que se alcance el equilibrio. Seguidamente, con una jeringa se toma una alcuota del aire del vial y se inyecta en el cromatgrafo. La aguja de la jeringa debe calentarse a la misma temperatura que la muestra para evitar condensaciones sobre la misma.

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1.2.

La espectrometra de masas

1.3

La espectrometra de masas (MS) es una de las tcnicas analticas ms completas que existen. Recientemente, esta tcnica se utiliza no slo en investigacin, sino tambin en anlisis de rutina de los procesos industriales, en control de calidad, etc. Sus principales cualidades son: - Capacidad de identificacin de forma prcticamente inequvoca, ya que proporciona un espectro caracterstico de cada molcula. - Cuantitativa: permite medir la concentracin de las sustancias. - Gran sensibilidad: habitualmente se detectan concentraciones del orden de ppm o ppb y en casos especficos se puede llegar hasta ppt e incluso ppq. - Universal y especfica. - Proporciona informacin estructural sobre la molcula analizada. - Suministra informacin isotpica. - Es una tcnica rpida: se puede realizar un espectro en dcimas de segundo, por lo que puede monitorizarse para obtener informacin en tiempo real sobre la composicin de una mezcla de gases. Dentro del espectrmetro de masas, se procede a la ionizacin de la muestra mediante diferentes mtodos. El sistema de ionizacin ms frecuente es el de impacto electrnico que bombardea las molculas con electrones de una cierta energa, capaces de provocar la emisin estimulada de un electrn de las molculas y as ionizarlas. Adems de molculas ionizadas o iones moleculares (M+) tambin se forman iones fragmento debido a la descomposicin de los iones moleculares con exceso de energa. El tipo y proporcin relativa de cada uno de estos fragmentos es caracterstico de las molculas analizadas y de las condiciones del proceso de ionizacin. Una vez ionizadas las molculas, se aceleran y se conducen hacia el sistema colector mediante campos elctricos o magnticos. La velocidad alcanzada por cada in ser dependiente de su masa. La deteccin consecutiva de los iones formados a partir de las molculas de la muestra, suponiendo que se trate de una sustancia pura, produce el espectro de masas de la sustancia, que es diferente para cada compuesto qumico y que constituye una identificacin prcticamente inequvoca del compuesto analizado. El espectro de masas puede almacenarse en la memoria del ordenador para compararse con los espectros de una coleccin de espectros (o librera) y proceder a su identificacin o puede estudiarse para averiguar la naturaleza de la molcula que le dio origen, etc.

Acoplamiento cromatografa de gases-espectrometra de masas

La cromatografa de gases es una tcnica separativa que tiene la cualidad de conseguir la separacin de mezclas muy complejas. Pero una vez separados, detectados, e incluso cuantificados todos los componentes individuales de una muestra problema, el nico dato de que disponemos para la identificacin de cada uno de ellos es el tiempo de retencin de los correspondientes picos cromatogrficos. Este dato no es suficiente para una identificacin inequvoca, sobre todo cuando analizamos muestras con un nmero elevado de componentes, como es frecuente en cromatografa de gases capilar. Por otra parte, la espectrometra de masas puede identificar de manera casi inequvoca cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz de identificar los componentes individuales de una mezcla sin separar previamente sus componentes, debido a la extrema complejidad del espectro obtenido por superposicin de los espectros particulares de cada componente. Por lo tanto, la asociacin de las dos tcnicas, GC (Gas Chromatography) y MS (Mass Spectrometry) da lugar a una tcnica combinada GC-MS que permite la separacin e identificacin de mezclas complejas. La utilizacin de la cromatografa de gases acoplada a un espectrmetro de masas requiere sistemas especiales de conexin. En principio, se trata de dos tcnicas que trabajan en fase gaseosa y necesitan una muy pequea cantidad de muestra para su anlisis, por lo que son muy compatibles. El nico obstculo serio a la hora de realizar su acoplamiento es que el efluente que emerge de la columna cromatogrfica sale a presin atmosfrica y debe introducirse en el interior del espectrmetro de masas que trabaja a alto vaco. Actualmente, el acoplamiento directo resulta fcil cuando se utiliza la cromatografa de gases capilar, que es el caso ms habitual. En resumen, una mezcla de compuestos inyectada en el cromatgrafo de gases se separa en la columna cromatogrfica obteniendo la elucin sucesiva de los componentes individuales aislados que pasan inmediatamente al espectrmetro de masas. Cada uno de estos componentes se registra en forma de pico cromatogrfico y se identifica mediante su respectivo espectro de masas. En este proceso, el espectrmetro de masas, adems de proporcionar los espectros, acta como detector cromatogrfico al registrar la corriente inica total generada en la fuente inica, cuya representacin grfica constituye el cromatograma o TIC (total ion current). En efecto, la corriente inica generada por todos los iones da lugar a un pico gaussiano de rea proporcional a la concentracin del compuesto detectado.

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En el caso de mezclas complejas, el cromatograma obtenido puede presentar muchos picos, algunos de ellos muy prximos, resultando difcil la identificacin rpida y fiable de algn compuesto de inters. Cuando se desea explcitamente localizar la presencia de uno o varios compuestos determinados, de espectro conocido, con la mayor rapidez o con la mxima sensibilidad posible se recurre a la tcnica de deteccin SIR (selected ion recording). En esta modalidad de trabajo se detectan solamente algunas masas de inters, en lugar de trabajar con el total de los iones (TIC). De esta forma, se aumenta la selectividad del mtodo, reducindose las interferencias.

pequeos y se mantiene a 150C durante 1 h en un vial sellado. Se inyecta 1ml del espacio de cabeza (aire). Anlisis por cromatografa de gasesespectrometra de masas (GC-MS): Se emplea un equipo FISONS MD-800 con una columna DB-5MS. La programacin de temperatura es la siguiente: 40C (inicial), 120C (final), gradiente: 3C/min. La inyeccin se efecta en split 1/75 a 200C. El modo de adquisicin es Full Scan (35-450 u.m.a.). Identificacin de los compuestos voltiles: a partir de su espectro de masas; librera NIST; programa MASSLAB.

2.

EXPERIMENTAL
Muestra a analizar: compuestos voltiles contenidos en una prenda de polister/algodn teida y confeccionada que presenta un olor desagradable. Se encuentra plegada sobre un cartn y almacenada en una bolsa. Tratamiento previo de la muestra (head-space): El tejido a analizar (1g) se corta en trozos

3.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Para determinar la causa del olor en la prenda confeccionada, se analizaron cualitativamente por GC-MS los compuestos voltiles emitidos por la muestra. La figura 1 representa el cromatograma obtenido.

Sample ID: T-052-150

8FEB-3 100 3.473

Acquired on 21-Oct-2000 at 23:24:38 Scan EI+

TIC 1.23e5 RT

1.089

% 2.629 3.253 3.179 4.701 7.855

1.272

8.827

1.401 2.336

9 1.000

rt 2.000 3.000 4.000 5.000 6.000 7.000 8.000 9.000 10.000 11.000 12.000 13.000 14.000

FIGURA 1: Cromatograma (TIC) obtenido a partir del tejido

En la tabla 1 se recopila la informacin relativa a dicho cromatograma: los compuestos voltiles detectados, sus tiempos de retencin y los factores de identificacin correspondientes a cada uno de ellos. Se observa que estos compuestos voltiles identificados son, en general, hidrocarburos aromticos y disolventes clorados. Sin embargo, tambin se identifican dos

tipos de sulfuros orgnicos (dimetil disulfuro y dimetil trisulfuro), compuestos a los cuales se atribuye principalmente el mal olor de la muestra. Su presencia se confirma por comparacin de los espectros de masas (obtenidos a los tiempos de retencin correspondientes a dichos sulfuros) con los espectros de estos compuestos almacenados en la librera (figuras 2 y 3).

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TABLA 1 Compuestos voltiles identificados a partir del cromatograma del tejido y de los espectros de masas correspondientes
Tiempo de retencin (min) 1,01 1,08 1,09 1,2 1,3 1,4 1,6 1,8 2,3 2,6 3,2 3,3 4,4 4,7 7,9 8,8 Factor de identificacin (%) 90 97 93 96 92 98 94 97 91 91 90 98 89 81 95 89

Compuesto identificado Isobutano Metil ester c. actico Cloruro de metileno 2-pentanona Pentano Cloroformo Ciclohexano Tricloroetileno Dimetil disulfuro Tolueno Hexanal Tetracloroetileno Etilbenceno 1,3-dimetilbenceno Dimetil trisulfuro 1-etil-4-metil benceno

Sample ID: T-VCbolsa150

8FEB-2 125 (2.317) Rf (6,3.000)

Acquired on 21-Oct-2000 at 22:08:17 Reverse fit factor [REV]: 908

94 1.94e3

SAMPLE

100

45

79

47 48 44 0 55 61 64 81 84

96

R:908

R:908 100

WILEY6 3475: DIMETHYLDISULFIDE $$ METHYLDISULFIDE

WILEY6 3475: DIMETHYLSULFIDE $$ METHYLDISULFIDE

94

Hit 1

45

79

% 46 47 48 44 0 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 61 64 81 96 m/z 105

FIGURA 2: Identificacin del dimetil disulfuro a partir de su espectro de masas

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Sample ID: T-054-1
5FEB-2 426 (7.837) Rf (6,3.000) 100 126 1.24e3

SAMPLE

Acquired on 19-Oct-2000 at 12:01:55 Reverse fit factor [REV]: 952

79 % 45 47 46 48 0 R:952 WILEY6 12611: TRISULFIDE, DIMETHYL (CAS) $$ 2,3,4-TRITHIAPENTANE $$ METHYLTRITHIOMETHANE $$ METHYL TRISULFIDE 126 Hit 1 64 80

111

128

R:952

100

WILEY6 12611: TRISULFIDE, DIMETHYL (CAS) $$ 2,3,4-TRITHIAPENTANE $$ METHYLTRITHIOMETHANE $$ METHYL TRISULFIDE

% 45 46 64

79

80

111

128 m/z

0 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135

FIGURA 3: Identificacin del dimetil trisulfuro a partir de su espectro de masas Por otra parte, tambin se pueden confirmar visualizando el cromatograma correspondiente a los iones ms caractersticos estos compuestos (figura 4): A un tiempo de retencin de 2,3 minutos se obtiene un pico importante de masa 94 u.m.a correspondiente al dimetil disulfuro.
Sample ID: T-052-150
8FEB-3 100 % 0 8FEB-3 100 % 1.584 0 8FEB-3 100 % 0 2.000 3.000 4.000 5.000 6.000 7.000 8.000 9.000 1.107 1.162 1.877 DMTS 2.336 DMDS 1.877 2.336 3.253 DMDS 3.308 4.316 5.105 6.883 8.222 8.845 Scan EI+ 94 1.98e3 RT 4.555 5.416 5.563 6.278 7.213 7.653 8.552 9.521 9.888 Scan EI+ 79 1.23e3 RT 8.332 8.754 9.448 9.851 rt 7.855 DMTS

A un tiempo de retencin de 7,9 minutos se obtiene un pico importante de masa 126 u.m.a. correspondiente al dimetil trisulfuro. A tiempos de retencin de 2,3 minutos y 7,9 minutos se obtienen dos picos importantes de masa 79 u.m.a., fragmentacin comn al dimetil disulfuro y dimetil trisulfuro.
Acquired on 21-Oct-2000 at 23:24:38
Scan EI+ 126 1.01e3 RT 8.662 8.827 8.937 9.723 9.888

1.034

1.731

2.354 2.501 3.161

3.803

4.665 4.903

5.343

5.673 6.058

6.920

7.672

2.978

7.873 2.758 2.996 3.161 3.693 4.261 4.976 5.160 6.132 6.810 7.122 7.635

FIGURA 4: Cromatogramas correspondientes a los iones de masa 126, 94 y 79 u.m.a. obtenidos a partir del tejido A pesar de haberse confirmado la presencia de sulfuros orgnicos como causantes del mal olor del tejido, no se dispone de datos suficientes para precisar su procedencia. Aunque no se puede descartar que se originen durante el propio procesado de la muestra, es ms probable que provengan del cartn que est en contacto con ella 40 dentro de la bolsa. En efecto, las pastas de papel fabricadas por proceso Kraft y no sometidas a blanqueo pueden desprender sulfuros residuales. En concreto, el cartn que acompaa al tejido analizado tiene aspecto de haberse obtenido a partir de papel reciclado y no est blanqueado.

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4.

CONCLUSIONES

orgnicos, concretamente dimetil disulfuro y dimetil trisulfuro.

4.1. La cromatografa de gases es una tcnica muy til para de separacin y determinacin de compuestos orgnicos voltiles y semivoltiles que sean trmicamente estables. Acoplada a la espectrometra de masas, permite una identificacin inequvoca de los distintos componentes separados sin necesidad de disponer de patrones de los mismos. En caso de poder comparar con los correspondientes patrones, se puede llevar a cabo, adems, el anlisis cuantitativo de los compuestos identificados. 4.2. Estas dos tcnicas acopladas (GC-MS) permiten la identificacin de cualquier tipo de compuestos voltiles presentes sobre tejidos. Concretamente, se pueden aplicar a la determinacin de los compuestos que causan malos olores. Existen muchos compuestos voltiles capaces de conferir un olor desagradable. En la prenda confeccionada analizada, la causa del mal olor se atribuye a la presencia de sulfuros

5
1.

BIBLIOGRAFA
J.M.Casas, J.Garca, J.M:Guadayol, J.Oliv. Anlisi instrumental 2: Cromatografa i electroforesi. Edicions UPC, Barcelona, 250p. (1994). M. Lpez-Mesas. Tesis doctoral. Universitat Politcnica de Catalunya (UPC), Terrassa (2002). L. Esteban. La Espectrometra de masas en imgenes. ACK editores, Madrid, 261 p. (1993). M.C.Gutirrez, M. Crespi Characterization of textile effluents treated by electrochemical techniques. WEFTEC Annual Conference and Exposition, Anaheim (California) (2000). M.Vilaseca, M.C.Gutirrez, M.Raspall, M.Crespi. Characterisation of dried sludge from textile treatment plants. IFATCC 19th Congress, Paris (2002)

2. 3. 4.

5.

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