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Principes de la
chromatographie
Dfinition
La chromatographie est une mthode physique de sparation base sur
les diffrentes affinits dun ou plusieurs composs lgard de deux
phases (stationnaire et mobile).
L'chantillon est entran par la phase mobile au travers de la phase
stationnaire qui a tendance retenir plus ou moins les composs de
l'chantillon l'aide de diffrentes interactions. Lchantillon est adsorb
puis dsorb sur la phase stationnaire, ou est plus ou moins soluble dans
la phase mobile.
Types de chromatographies
Type
Critre de sparation
Adsorption
Polarit
Partage
Solubilit
Exclusion
changeuse dions
Charge ionique
Affinit
Types de chromatographies
Chromatographie
changeuse dions
Chromatographie
dexclusion
Chromatographies dadsorption
Phase mobile
Nom
Gaz
Chromatographie en phase
vapeur (CPV) ou en phase
gazeuse (GC)
Chromatographie couche mince
(CCM ou TLC) ou clair
Chromatographie liquide haute
performance (CLHP ou HPLC)
Liquide
Liquide
Utilit de la chromatographie
Selon la quantit de produit appliqu en chromatographie, on sen sert pour:
Analyser < 1 mg de produit par CCM, HPLC ou CPV
Sparer ou purifier les produits dune raction par chromatographie clair
ou HPLC (50 mg 15 g)
Doser des produits. Lanalyse quantitative se fait avec un talon interne ou
aprs prparation dune courbe de calibration.
Adsorbants
Les adsorbants sont sous forme de granules
calibrs. La sparation est meilleure, mais
plus lente si les grains sont fins.
Plus un adsorbant est actif, plus il retient
fortement les composs polaires. La
sparation se fait par ordre croissant de leurs
forces dinteraction avec les composs
polaires.
R-X
Polarit croissante
R-NO2
O
R
O
OR
O
R
O
R
NR2
R-NH2
R-OH
Ar-OH
O
R
OH
Phase mobile
Hexanes
CCl4
Polarit croissante
Benzne, Tolune
Et2O
CH2Cl2
AcOEt
MeOH, EtOH
AcOH
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Choix de lluant
Deux facteurs interviennent lors de linteraction entre lluant et le solut
(mlange de composs sparer):
la solubilit: on doit tre en mesure de dissoudre le solut dans lluant
pour que la migration se fasse.
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Prparation de la CCM
B C
lution de la CCM
3. On utilise un capillaire pour dposer le produit sur la
plaque puis on laisse vaporer le solvant. On peut spotter
2-3 fois si lchantillon est trs dilu.
Rvlation de la CCM
lil nu: si le produit est color
la lampe UV: les molcules qui absorbent les UV 254 nm seront
visibles (noyaux aromatiques par exemple).
Avec un rvlateur chimique: liode est le premier rvlateur tester,
car il est non destructif. Il permet de rvler des doubles liaisons et les
halognures. Liode est vapor chaud ou dans la hotte.
De nombreux autres existent: KMnO4, acide phosphomolybdique,
vanilline, ninhydrine
UV
KMnO4
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Mesure du Rf
Le Rf (rapport frontal ou rtention frontale) est caractristique dun produit
dans un luant donn et pour une phase stationnaire donne.
l1
l2
Rf
Hauteur de migration
valeur entre 0 et 1
Hauteur du front de solvant
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Influence de lluant
Lorsque la polarit du solvant augmente, le Rf augmente. Le Rf
augmente, puis diminue.
Pour faire une sparation de deux produits par chromatographie, on
cherche un luant qui donne le plus grand Rf possible, avec un Rf pour
le produit le moins polaire autour de 0,3.
100% Hexane
Polarit de lluant
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CCM bidirectionnelles
Cest une exprience qui permet de prouver si un produit dcompose sur
la silice, ou si un spot de la CCM contient en fait deux produits.
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