GUIDE POUR LA CONCEPTION

DUN

LABORATOIRE DE CONFINEMENT L 3

Septembre 2001

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 1- Introduction

Le niveau de confinement, en matire de scurit biologique pour lhomme et

lenvironnement, est obtenu par la mise en uvre conjointe dune installation et
dquipements adquats ainsi que de bonnes pratiques de travail correspondant au niveau de
scurit recherch. Pour chaque niveau de confinement, des prescriptions minimales sont
fixes par la rglementation et la normalisation, en particulier larrt du 13 aot 1996 fixant
les mesures techniques de prvention, notamment de confinement, mettre en uvre dans les
industries et les laboratoires de recherche et denseignement o les travailleurs sont
susceptibles dtre exposs des agents biologiques pathognes. Ces prescriptions sont
galement dveloppes, quant lutilisation confine dOGM, dans le guide de la
Commission de gnie gntique intitul Principes de classement et guides officiels de la
commission de gnie gntique . Si la conception et la ralisation dinstallations de niveaux
de confinement L1 et L2 ne prsentent pas trop de difficults, il nen va pas de mme pour
une installation de niveau L3, beaucoup plus complexe. Lobligation dun double
confinement, primaire et secondaire, ce dernier tant destin empcher la contamination de
lenvironnement en cas de rupture accidentelle du confinement primaire constitu par la
premire barrire physique entre la source de danger et loprateur, rend la ralisation
nettement plus difficile.

Cest pourquoi il est apparu utile de rassembler dans ce guide les points essentiels prendre
en considration au regard de la scurit biologique, lors de la conception dun laboratoire de
niveau de confinement L3. Ce document nest pas un cahier des charges mais a pour but
daider le matre douvrage dans llaboration de celui-ci. Ce document a encore moins pour
objet de dcrire des pratiques de travail ou des rgles de fonctionnement bien dtailles par
ailleurs.

Ce guide sappuie sur les rglementations et les normes en vigueur en matire de scurit
biologique. De plus, il importe de bien veiller la conformit des projets de construction de
laboratoires L3 vis--vis de toutes les autres rglementations en matire de droit du travail, de
scurit, en particulier scurit incendie, scurit lectrique, scurit radiologique, scurit
chimique, ainsi quen matire de construction. Un projet de laboratoire L3 peut aussi tre
compliqu par lobligation, pour certaines activits ou certains types de produits, de respecter
des normes dassurance-qualit ou de mettre en uvre des bonnes pratiques de laboratoire ou
de fabrication. Il conviendra alors de choisir les solutions techniques capables de rpondre
ces exigences supplmentaires.

La construction dun laboratoire L3 reprsentant un investissement important, il est

recommand dintgrer au projet, ds lorigine, les lments dadaptabilit de linstallation
aux volutions possibles de lactivit du laboratoire.

Enfin, compte tenu du niveau technique de ce type dinstallation, sa ralisation ne peut tre
confie qu un service ou un bureau dtude particulirement qualifi.

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 2- Localisation et dimensions

- Sparer le laboratoire des zones ouvertes la circulation normale dans le btiment.

- Eviter la proximit immdiate avec les locaux usage collectif ou administratif (par
exemple la caftria, la bibliothque ou les bureaux des services administratifs).
- Dterminer les dimensions de linstallation en fonction de la nature des activits et du
nombre de personnes intervenant dans les locaux ainsi que de limportance des
quipements et des contraintes de nettoyage.
cf. notamment lannexe A de la norme NF EN 12128 sur les lignes
directrices relatives aux besoins en espace libre et aux dimensions.
- Tenir compte des ncessits dacheminement de charges manuelles ou roulantes ou des
dplacements dappareils par les diffrents accs; prter attention aux obstacles, aux
diffrences de niveaux, aux dimensions des cheminements, des portes et des sas matriels.
- Tenir compte des liaisons ou de la proximit avec certaines activits annexes : laverie,
stockages, le cas chant travaux en amont ou en aval de lactivit du laboratoire L3.
- Prendre en considration, si ncessaire, les flux de personnel, de matriels, de matires
premires et de produits, notamment lorsque des bonnes pratiques de laboratoire ou de
fabrication doivent tre appliques.
- Tenir compte des oprations de maintenance des installations et des quipements.
- Tenir compte de la ncessit de dcontaminer les appareils avant leur rparation, leur
contrle ou leur transport lextrieur du laboratoire.
- Tenir compte, dans la conception des cltures, des risques dintrusion ou de malveillance.
-

3- Conception gnrale de la construction

- Laccs contrl des personnes autorises se fait, dans le laboratoire, par au moins un sas
double porte conu pour viter toute dissmination dorganismes dangereux, du
laboratoire vers lextrieur. Ce confinement est ralis, dune part en asservissant les deux
portes pour quelles ne puissent pas souvrir simultanment, dautre part en ralisant une
barrire de pression entre le laboratoire et la zone contigu. Le sas doit comporter un
double vestiaire permettant de sparer vtements de ville et vtements ordinaires de
laboratoire, de la tenue spcifique au laboratoire L3 ; une division du sas en deux zones
constitue une version plus labore dans laquelle la zone adjacente au laboratoire peut
accueillir le vestiaire pour tenues de laboratoire; dautres variantes sont possibles avec la
mise en place dun sas dentre, simple ou double et dun sas de sortie simple ou double.
Diffrentes combinaisons de pressions sont possibles lintrieur du sas (cf. 6) selon
que lon considre un seul sas ou un double sas ou que lobjectif recherch est uniquement
la scurit biologique ou bien la fois la scurit biologique pour lhomme et
lenvironnement et la qualit du produit et des oprations conduites dans le laboratoire.
- Laccs au sas doit pouvoir tre verrouill; ( voir contrle daccs par badge)
- La prsence dun risque biologique doit tre signale de faon claire et permanente, en
apposant sur la porte daccs la zone L3 le pictogramme de danger biologique ,
conforme la norme ISO 7000 quant sa prsentation graphique et la norme ISO 3864
quant la forme gomtrique et aux couleurs ; voir galement larrt du 4 novembre
1993 relatif la signalisation de scurit.
- Le niveau de confinement L3 doit tre aussi indiqu sur la porte daccs cette zone.
- Un sas matriel de dimensions appropries permettant la dcontamination par fumigation
ou pulvrisation dagent dsinfectant doit tre envisage, en cas de sortie de matriels non

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 autoclavables;. Un tel sas comporte galement deux portes asservies pour ne pas souvrir
simultanment. Il est recommand de rendre le systme de fumigation du sas, indpendant
du systme gnral de fumigation du laboratoire, par exemple par la mise en place de
volets tanches sur les entres et les sorties d'air.
- Le laboratoire lui-mme est conu pour viter toute dissmination dorganismes
dangereux vers lextrieur. Dans le cas gnral, ce confinement secondaire est obtenu,
dune part en plaant le local en pression ngative par rapport la zone attenante et aux
sas, dautre part en assurant une tanchit correcte des sols, des cloisons, des plafonds,
des jonctions entre lments de construction, des joints de portes et fentres ainsi que des
passages de canalisations de fluides dans les parois. Dans certains cas particuliers, par
exemple lorsquil est ncessaire pour la qualit de lopration ou du produit de travailler
en atmosphre contrle, faible contamination particulaire, des moyens alternatifs de
confinement valus, donnant des conditions de scurit biologique quivalentes, peuvent
tre mis en uvre sous rserve de laccord de la Commission de gnie gntique.
- Lensemble des locaux doit pouvoir tre ferm hermtiquement pour permettre une
dsinfection par fumigation. Les fentres doivent tre fermes, scelles et quipes de
joints tanches.
- Linstallation doit pouvoir se prter aisment des traitements contre les rongeurs et les
insectes.
- La disposition des quipements doit faciliter le nettoyage et viter les endroits
inaccessibles celui-ci.
- Un vitrage dobservation, ou un systme quivalent, permettant de voir les occupants est
ncessaire

4- Caractristiques des matriaux

- Matriaux non relarguant.

- Rsistance des structures la pression, compte tenu des pressions diffrentielles mises en
uvre.
- Etanchit et rsistance des structures du laboratoire et des systmes associs de
ventilation extractive, aux agents de dsinfection par fumigation et aux agents de
neutralisation des dsinfectants.
- Rsistance leau des sols, des murs, des cloisons et des plafonds.
- Conception des bas de murs, des cloisons et des seuils de porte pour viter la diffusion
lextrieur de liquides accidentellement rpandus (viter les plinthes); ce dispositif
correspond des barrires de rtention.
- Impermabilit leau des paillasses (viter les joints) et rsistance de celles-ci aux
acides, alcalis, solvants organiques et dsinfectants ainsi qu une chaleur modre.
- Etanchit des sols leau (si possible, viter les joints).
- Rsistance aux chocs des portes, des fentres et des oculi .
- Etanchit, rsistance mcanique et rsistance au feu (M0 recommand: voir
prconisations des assurances) des gaines lectriques.
- Rsistance des canalisations de fluides (corrosion, temprature).
- Rsistance des bacs de dcontamination et des canalisations associes aux lavabos et
douches, en fonction des traitements et des dsinfectants appliqus.
- Degr coupe-feu des cloisonnements, des portes, des fentres et des oculi (degr coupe-
feu et de rsistance au feu prciser selon les cas).

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 5- Equipements

- Un lavabo permettant le lavage et la dsinfection des mains est localis prs de la porte de
sortie du laboratoire et, ventuellement, dans le sas prs de la porte donnant sur le
laboratoire; ce lavabo est quip de robinets commande non manuelle (commande au
bras par exemple); un bac ddi ce lavabo est prvu pour en recueillir les effluents et les
dcontaminer sur place avant rejet; un killing-tank gnral pour le laboratoire peut tre
galement une solution.
- Un dispositif pour la dsinfection des mains doit tre disponible.
- Une douche de scurit pour les risques non biologiques associs, en particulier
chimiques, est place proximit du sas. Les effluents en sont recueillis dans un bac de
dcontamination ddi; des robinets commande non manuelle sont recommands.
- Si une douche de dcontamination biologique est juge ncessaire, elle est place dans le
sas prs de la porte donnant sur le laboratoire; les effluents en sont recueillis dans un bac
de dcontamination ddi; les robinets sont commande non manuelle.
- Un dispositif de rinage oculaire en cas durgence doit tre prvu.
- Dautres ensembles arrive deau-siphon-vier , que ceux mentionns ci-dessus, sont
dconseills dans ce type de laboratoire. En cas de ncessit, prvoir chaque fois un bac
de rcuprationdcontamination ddi, ainsi que des robinets commande non
manuelle.
- Les canalisations de vide sont protges par des piges contenant un dsinfectant valid
ou, de prfrence, des filtres HEPA; une pompe vide ddie au laboratoire est
recommande.
- Des moyens de communication avec lextrieur: tlphone, tlcopie, micro-ordinateur,
doivent tre prvus, afin dviter toute sortie de documents ou cahiers dessais.
- En fonction de lvaluation des risques ou de contraintes de qualit, prvoir, le cas
chant, un approvisionnement en nergie lectrique de secours ; en cas dimpossibilit de
raccordement un rseau secouru, un onduleur peut constituer une solution alternative.
- Des postes de scurit microbiologique (PSM) de type I, II ou III, des protections
individuelles ou des quipements de confinement adapts sont utiliss chaque fois que des
oprations ou des techniques susceptibles de produire des arosols ou des projections de
liquides contamins sont mises en uvre, comme louverture de rcipients contenant des
micro-organismes lors de transferts de cultures, les centrifugations, les broyages, les
agitations, les sonications, la cytomtrie en flux, les inoculations intra-nasales chez des
animaux et les prlvements de tissus danimaux infects.
- Les PSM de type I, II ou III doivent tre conformes la norme NF X 44-201 dans laquelle
sont notamment donnes les dfinitions de ces diffrents types (on peut galement
consulter la norme europenne NF EN 12469 qui devrait remplacer la norme NF X 44-
201). Les chambres de manipulation de ces enceintes sont en dpression; ces appareils de
scurit biologique sont quips dun ou de deux filtres HEPA sur lvacuation dair
contamin . Le Laboratoire National dEssais (LNE) fournit une liste des marques et
rfrences commerciales de postes de scurit microbiologique de type II admis au label
NF.
- Les PSM de type I nassurent que la protection du manipulateur et de lenvironnement.
Les PSM de type II, les plus utiliss, assurent la fois la protection du manipulateur et de
lenvironnement ainsi que de la manipulation, grce un flux dair strile dirig de haut
en bas vers le plan de travail et une veine de garde vitant la sortie de lair contamin par
la faade partiellement ouverte de lappareil. Pour viter toute perturbation excessive du

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 flux dair et tout risque de fuite dair contamin au travers de la veine de garde, il est
impratif dappliquer des consignes strictes de scurit au cours des travaux mens sous
ce type de PSM. Il faut, notamment, viter de trop encombrer la chambre de manipulation
et dy faire des mouvements brusques et dsordonns. Toujours dans le but dviter de
perturber le flux laminaire et de diminuer la dure de vie des filtres, il est recommand de
ne pas utiliser de flamme sous ce PSM.
- Lair filtr sur HEPA provenant des PSM est rejet lextrieur par le systme
dvacuation dair du laboratoire. Ce rejet ne doit pas perturber le systme de ventilation
du laboratoire. En fonction de lvaluation des risques, mais de faon exceptionnelle, lair
filtr sur HEPA, extrait des PSM de type I ou II, peut tre rejet dans le laboratoire, si ces
PSM sont contrls au moins une fois par an par un organisme extrieur comptent,
dclars conformes et si la sortie dair des PSM est proche de lextraction dair du
laboratoire.
- Un PSM ne doit pas tre plac sous une bouche de soufflage dair.
- Lair provenant des PSM de type III (isolateurs) doit toujours tre rejet directement
lextrieur du laboratoire, sans recyclage.
- Afin dviter une rupture complte de confinement en cas de panne lectrique, les PSM
assurant le confinement primaire lors de certaines oprations seront aliments
prioritairement en courant secouru.
- Toute panne sur les PSM conduisant une rupture de confinement primaire devra tre
signale par une alarme visuelle et sonore afin de permettre aux oprateurs dengager la
procdure dfinie de mise en scurit des manipulations en cours et, le cas chant,
dvacuation du laboratoire pendant le maintien en fonctionnement secouru des PSM.
- Il est recommand de veiller laspect scurit biologique des centrifugeuses, la
dcontamination de la cuve doit tre facile raliser et les tubes de centrifugation doivent
tre incassables et ferms par des couvercles visss.
- Les tuves et les incubateurs doivent pouvoir tre facilement dcontamins.
- Un laboratoire L3 doit comporter un autoclave frontire double entre, quip pour
assurer la strilisation des condensats et interdire louverture simultane des deux portes ;
parmi les normes correspondantes, consulter la norme NF EN 12347 et les normes
associes.
- Dans certains cas exceptionnels (par exemple plusieurs laboratoires L3 contigus) et avec
lavis favorable de la CGG, lautoclave frontire peut tre remplac par un autoclave situ
proximit immdiate du laboratoire, avec des procdures appropries, values et
contrles dans leur droulement, permettant le transfert des dchets et matriels
contamins vers cet autoclave en assurant la mme protection. Cette solution,
exceptionnelle, ncesite lutilisation de conteneurs tanches et rsistants, extrieurement
dcontamins dans un sas matriel avant transfert rapide lautoclave pour strilisation
par une personne autorise; le conteneur doit tre conu de manire permettre
directement la strilisation par la vapeur.
- En rgle gnrale, un laboratoire L3 doit comporter un quipement de base ddi et, dans
toute la mesure du possible, conforme aux normes existantes, contrl rgulirement et
peu bruyant.

6 Ventilation Extraction - Araulique.

- Le systme de ventilation doit raliser une dpression stable dans le laboratoire par
rapport aux zones attenantes, crant un flux dair directionnel de lentre du local vers

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 lextraction. Lair extrait est filtr au plus prs du local sur filtre HEPA avant rejet
lextrieur, loin des entres dair, sans recyclage dans aucune autre partie du btiment.
- Si une ventilation tout air neuf, sans aucun recyclage dans le laboratoire, napparat pas
ncessaire en fonction de lanalyse des risques et des ventuelles contraintes de qualit, il
est possible deffectuer un reconditionnement et un recyclage partiels dans le laboratoire,
de lair extrait. Dans ce cas, il est recommand dextraire cet air travers deux filtres
HEPA contrls indpendamment ; le rseau de gaines entre les deux filtres devra alors
tre tanche et le plus court possible.
- Les filtres HEPA dextraction dair sont implants en barrire physique soit, de
prfrence, dans des gaines basses soit dans le plafond du laboratoire.
- Les filtres HEPA doivent tre placs de manire tre accessibles aux contrles et
permettre leur dcontamination et leur changement en toute scurit.
- Dans certains cas, notamment lorsque des exigences de qualit des oprations sont
prsentes ou sur la base de lvaluation des risques, le soufflage de lair lentre peut
galement tre muni dun filtre HEPA, isolant ainsi compltement le laboratoire vis--vis
des rseaux arauliques.
- Il est recommand dutiliser deux systmes indpendants, lun pour le soufflage, lautre
pour lextraction de lair du laboratoire.
- Les systmes de soufflage et dextraction de lair sont toutefois asservis afin dviter une
surpression du laboratoire par rapport aux zones attenantes; ainsi, un arrt de lextraction
doit induire automatiquement un arrt du soufflage.
- Limpact des PSM et des autres appareils, en particulier quant aux dbits dair et au
dgagement thermique, doit tre pris en compte dans le projet dinstallation de ventilation,
notamment le calcul de son dimensionnement.
- Les risques de dtrioration des filtres lis la formation de condensats dans les gaines de
ventilation ou dextraction doivent tre vits.
- Des manomtres placs lextrieur du laboratoire doivent permettre une lecture des
pressions arauliques prsentes dans les diffrents compartiments de linstallation.
- Le contrle de la pression dair, de la temprature et si ncessaire de lhygromtrie dans
les compartiments de linstallation doit tre parfaitement dfini.
- Un rgime de fonctionnement et de rgulation automatique de la pression araulique, peut
tre prvu en option.
- Divers rgimes de pression dair sont possibles dans les compartiments, selon que lon
considre uniquement laspect scurit biologique ou bien le double objectif scurit
biologique et qualit des oprations. Une configuration frquente, lorsque seul laspect
scurit biologique est considr, prvoit un premier sas en surpression relative de + 30
Pa par rapport au couloir extrieur, un deuxime sas en dpression de -15 Pa et le
laboratoire en dpression de -30 Pa, toujours par rapport au couloir extrieur.
- La prsence dun seul sas nest pas recommander pour un L3, dans la mesure o les
vtements de ville ou les tenues ordinaires de laboratoire ne seraient pas spars des
tenues spcifiques au laboratoire L3 par une barrire de pression. Il est prfrable de
prvoir un sas propre cot couloir et un sas potentiellement contamin donnant sur le
laboratoire .
- Une alarme sonore et visuelle, capable de dtecter tout changement inacceptable de la
pression dair dfinie, doit tre prsente.
- Dans tous les cas de coupure lectrique ou de panne dalimentation en air trait,
lisolement des rseaux arauliques dsactivs doit tre assur par des clapets tanches
fermeture automatique par manque de courant.
- En cas dincident sur linstallation principale de ventilation-extraction, le maintien du
laboratoire en dpression peut tre assur par un doublement du poste dextraction.

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- En fonction de lanalyse des risques, le ou les postes dextraction peuvent tre aliments
par un rseau secouru en cas de coupure lectrique gnrale ; en cas dimpossibilit de
raccordement un rseau secouru, un onduleur peut constituer une solution alternative.
Une procdure de mise en scurit des oprations en cours et, le cas chant, dvacuation
du personnel, doit tre prvue en cas de panne dextraction dair et donc de risque
daltration du confinement secondaire.

7 Impact des mesures dintervention durgence sur la conception de

linstallation.

- Prvoir la possibilit de neutraliser lasservissement des portes du sas personnel en cas

dvacuation durgence.
- Prvoir, si ncessaire, notamment en fonction des dimensions du laboratoire, une issue de
secours tanche.
- Prvoir la possibilit dvacuer dventuelles victimes daccident ou de malaise en
position semi-allonge ou allonge. En prvoir les consquences sur les espaces entre les
paillasses et sur les dimensions du ou des sas.
- Prvoir laccs possible de personnel dintervention durgence avec leur quipement et
leur matriel.
- Prvoir des solutions aux problmes poss par la rcupration et le traitement ventuel des
eaux rpandues suite lextinction dun incendie ; un bac de rtention peut constituer une
rponse ; bien examiner avec les personnels de secours les possibilits dutilisation
dagents dextinction tels que poudres, mousses, CO2 .
- Prvoir des extincteurs et leur contrle priodique.

8 Qualification de linstallation.

- Un plan directeur de qualification de linstallation et des quipements est tabli en vue des
oprations de rception et de mise en service.
- Le dossier de qualification pour lensemble de linstallation comporte notamment le
descriptif document, les tests de qualification et le rapport attestant que linstallation et
ses quipements sont conformes et oprationnels.

9 Contrle et maintien des performances de linstallation.

- Un programme de maintenance et dentretien priodique propre au fonctionnement des

systmes de ventilation, dextraction et de filtration, des volets disolement en phase de
dcontamination par fumigation, des alarmes de modification des pressions arauliques
dans les compartiments doit tre labor; une frquence semestrielle est recommande
pour ce type de programme.
- Un arrt complet des activits du laboratoire et sa dsinfection peuvent tre prvus
pendant quelques jours pour permettre des oprations approfondies dentretien.
- Les conditions et la frquence de changement des filtres ainsi que leur dcontamination
complte.

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