Les laboratoires de base –Sécurité biologique niveaux 1 et 2
bonnes pratiques Aménagement du laboratoire
• connaître les consignes de
sécurité et la
conduite à tenir en cas
d’accident,
• ne pas boire, manger, fumer,
se maquiller,
• ne pas décapsuler les crayons
feutre avec les
dents,
• désinfecter les plans de travail
avant et après
manipulation et après toute
contamination,
• recouvrir la paillasse d’un
papier absorbant,
• se laver les mains avant et
après manipulation,
• ne pas pipeter à la bouche,
utiliser un système
d’aspiration mécanique,
Matériel et équipement
•un espace convenable pour Un autoclave doit être placé
chaque manipulateur, dans le même bâtiment.
• des surfaces lisses (murs, sols, Aucun équipement spécial de
paillasses), imperméables, confinement n’est exigé
faciles à nettoyer et et PSM non obligatoire
résistantes aux agents de
nettoyage et de désinfection,
• une absence d’endroit
difficilement accessible au
nettoyage (exemple : plinthes),
• un évier ou lavabo pour
permettre le lavage des mains,
• un vestiaire.
bonnes pratiques
, • connaître les consignes de
sécurité et la conduite à tenir en
cas d’accident,
• fermer les portes du
laboratoire pendant l’exécution
du travail,
• ne pas boire, manger, fumer,
se maquiller,
• ne pas décapsuler les crayons
feutre avec les dents,
• désinfecter les plans de travail
avant et après manipulation et
après toute contamination,
• recouvrir la paillasse d’un
papier absorbant (type
BenchKote®),
• se laver les mains avant et
après manipulation,
• porter une blouse. Il est
conseillé d’en avoir une
spéciale, facilement identifiable
Aménagement du laboratoire
. • marquage du niveau de
confinement et pictogramme "
danger biologique " à l’entrée
du laboratoire,
• séparation des autres locaux
par au moins une porte,
• accès réglementé et
verrouillable. Les noms du
responsable du L2 et des
personnes
autorisées seront affichés sur la
porte,
• espace convenable pour
chaque manipulateur,
• surfaces lisses (murs, sols,
paillasses), imperméables,
faciles à nettoyer et résistantes
aux agents de nettoyage et de
désinfection,
• absence d’endroit
difficilement accessible au
nettoyage (exemple : plinthes),
Matériel et équipement
poste de sécurité
microbiologique de type II (PSM
type II),
• autoclave de préférence à
l’étage,
• centrifugeuse à proximité :
utiliser des tubes étanches,
• étuve à proximité,
• moyen de communication
avec l’extérieur du local
recommandé (téléphone,
interphone) : ne pas l’utiliser
avec les gants servant à
l’expérience en cours.
 bonnes pratiques
, • connaître les consignes de
sécurité et la conduite à tenir en sas ; l’aménagement du sas
cas d’accident,
• tenir à jour un cahier
d’enregistrement de la date des
expériences et du matériel
biologique manipulé,
• ne pas boire, manger, fumer,
se maquiller,
• ne pas décapsuler les crayons
feutre avec les dents,
• il est recommandé de ne pas
travailler seul,
• désinfecter les plans de travail filtre absolu type HEPA,
avant et après manipulation et
après toute contamination,
• recouvrir la paillasse d’un
papier absorbant (type
BenchKote®),
Le laboratoire de confinement –Sécurité biologique
Aménagement du laboratoire
. • accès au laboratoire par un
devra comporter :
> des vestiaires pour permettre
de changer de blouse et de
s’équiper des protections
individuelles nécessaires aux
manipulations,
> une douche, si possible, pour
permettre la décontamination
du personnel en cas
d’accident.
• filtration de l’air extrait par un
• fenêtres du laboratoire
incassables et scellées
hermétiquement,
• accès réglementé et
verrouillable. Les noms du
responsable du L3 et des
personnes
autorisées à entrer seront
affichés à l’entrée,
• maintien du L3 en dépression
par rapport aux zones voisines.
Prévoir une alarme
pour
signaler
niveau 3 tout changement
de pression,
Matériel et équipement
• poste de sécurité
microbiologique de type II (PSM
type II),
• autoclave à double entrée,
• présence obligatoire d’une
centrifugeuse : utiliser des tubes
étanches,
• présence obligatoire d’une
étuve,
• présence d’un congélateur
permettant de stocker le
matériel biologique sur place. Il
est conseillé de l’équiper d’une
alarme,
• équipement de base (petit
matériel de type vortex, bain-
marie, centrifugeuse de
paillasse…) spécifique au L3 et
marqué,
 bonnes pratiques Aménagement du laboratoire et Matériel et équipement

• La règle du travail en binôme . Les caractéristiques du laboratoire de confinement – sécurité

doit être appliquée; autrement
dit, personne ne doit
jamais travailler seul dans le
laboratoire. Cette règle prend
toute son importance
dans un laboratoire – sécurité
biologique niveau 4, où le port
de combinaisons
pressurisées est obligatoire.
• Le personnel doit doit
changer complètement de
vêtements et de chaussures
avant
de pénétrer dans le laboratoire
et avant de sortir.
• Le personnel doit s’entraîner
à la conduite à tenir pour
l’évacuation d’urgence de
personnes blessées ou prises de le personnel
malaise.
• Il faut mettre au point un
système de communication
entre les membres du
personnel qui travaillent dans
un laboratoire de confinement à déchets solides, liquides et du personnel) .
haute sécurité – sécurité
biologique niveau 4 et le
personnel extérieur, que ce soit
pour les contacts
. Le laboratoire habituels ou en situation
de confinement à haute sécurité – Sécurité biologique niveau 4
d’urgence.
biologique niveau 3,
s’appliquent au laboratoire de confinement à haute sécurité –
sécurité biologique
niveau 4, moyennant les additifs suivants :
1. Confinement primaire.
— Laboratoire avec enceintes de sécurité biologique de classe
III. Le passage par deux
portes au minimum est nécessaire avant de pénétrer dans les
salles où se trouvent l’enceinte ou les enceintes de sécurité
biologique de classe III (salle des
enceintes de sécurité).
— Laboratoire pour travaux en combinaison pressurisée. Sur le
plan de la conception et de l’aménagement, un laboratoire pour
travaux en combinaison pressurisée diffère sensiblement d’un
laboratoire de confinement – sécurité
biologique niveau 4 doté d’enceintes de sécurité biologique de
classe III. Dans
ce type de laboratoire, les salles sont disposées de manière que
passe par le vestiaire et la salle de décontamination avant
d’entrer dans le secteur où du matériel biologique infectieux est
manipulé.Niveau de confinement de niveau 4 (local en
dépression avec double filtration HEPA, travail en scaphandre ou
sous PSM 3, sécurisation des souches, décontamination des
Classement

Les OGM sont classés par groupe en fonction des risques qu'ils présentent pour la santé

publique ou l'environnement, et notamment de leur pathogénicité. Les critères de ce

classement sont fixés par décret pris après avis du Haut Conseil des biotechnologies. Dans

l'attente de la parution dudit décret et au plus tard le 1er janvier 2009,

I. Principes de la détermination des risques

Les risques liés aux OGM dépendent de deux facteurs :

· les dangers propres des OGM

Pour évaluer le danger présenté par un OGM, il faut considérer le danger conféré par

chacun des éléments du trinôme du système expérimental . On évaluera ainsi les dangers

propres :

· à l’organisme donneur, et/ou à ceux de la séquence clonée provenant de celui-ci ;

· au(x) système(s) vecteur(s) ;

· à l’organisme receveur dans lequel la séquence clonée sur le système vecteur sera

transférée et éventuellement exprimée.

culture cellulaire

Origine : Sang, tissus ou organes humains ou animaux

Différents types de cultures cellulaires :

 cultures primaires : (durée de vie restreinte : 10 passages)

=> cardiomyocytes et fibroblastes de cœur d’embryon de poulet

 souches de cellules diploïdes : extraits de tissus embryonnaires (plus de 100

passages) => MRC5

 lignées cellulaires continues : (théoriquement passages infinis)

 variants « immortels » spontanés de cellules tumorales => cellules KB, Hela

 cellules « immortalisées » expérimentalement à l’aide de virus ou d’un produit

chimique => cellules Vero