28-11-2022

Nom: HAMED.
Prénom : MANEL.
Groupe : 09.

TP N°2 DE MICROBIOLOGIE GÉNÉRALE

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Année universitaire 2022-2023

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 1-LES DIFFÉRENTS NIVEAUX DE DANGERS BIOLOGIQUES DANS UN
LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE:
NIVEAU Exemples d’agents RISQUE Niveau de
confinement

Niveau 1 -le Bacillus subtilis, FAIBLE L1

Escherichia coli non
pathogène,
bactéries non-
infectieuses
Niveau 2 grippe, salmonelles, MODERE L2
VIH.

Niveau 3 anthrax, virus du Nil FORT L3

occidental,
tuberculose, typhus,
fièvre
jaune.
Niveau 4 virus Ebola MAJEUR L4
marbourg

2-LES RISQUES AU LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE:

L'activité des laboratoires de microbiologie présente des risques d'exposition
infectieuse pour les professionnels qui y participent. Mais les personnels des autres
laboratoires d'analyse médicale, qui traitent des prélèvements provenant des mêmes
patients, sont également exposés à ces risques.

3-BIOSECURITÉ ET BIOSURETE:
La biosécurité et la biosûreté sont régies par un rigoureux cadre réglementaire, tel
que : des lois, des règlements, des normes, des lignes directrices, des exigences émises par
les instances gouvernementales (Agence de la santé publique du Canada et Agence
canadienne d’inspection des aliments) et par les organismes subventionnaires.

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4-PICTOGRAMMES DE SÉCURITÉ:

5-RÉGLES FONDAMENTALES DE LA MANIPULATION

MICROBIOLOGIQUE:
1-Suivre toutes les procédures établies et effectuer les tâches professionnelles comme vous
avez été formé à le faire.
2-Soyez prudent et planifiez à l’avance. Pensez à ce qui pourrait mal tourner et faites très
attention à ce que vous faites pendant que vous travaillez.
3-Toujours utiliser les EPI (équipement de protection individuel) requis – et les inspecter
soigneusement avant chaque utilisation pour s’assurer qu’ils sont sûrs. Remplacez les EPI
usés ou endommagés ; ils ne fourniront pas une protection adéquate.
4-Vérifiez que tous les contenants sont correctement étiquetés et que la matière est
conservée dans un contenant approprié. N’utilisez pas de matériau qui n’est pas contenu ou
étiqueté correctement. Signalez immédiatement à votre superviseur tout contenant
endommagé ou toute étiquette illisible.
5-Lisez les étiquettes et la fiche de données de sécurité (FDS) avant d’utiliser tout matériau
pour vous assurer de comprendre les dangers et les précautions à prendre.
6-Utilisez tous les matériaux uniquement aux fins prévues. N’utilisez pas, par exemple, de
solvants pour vous nettoyer les mains, ou de l’essence pour essuyer du matériel.
7-Ne mangez ou ne buvez jamais en manipulant des matériaux, et si vos mains sont
contaminées, n’utilisez pas de produits cosmétiques et ne manipulez pas de lentilles de
contact.
8-Lire les étiquettes et se référer aux fiches signalétiques pour identifier les propriétés et les
dangers des produits et matériaux chimiques.

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9-Stockez correctement tous les matériaux, séparez les incompatibles et rangez-les dans des
endroits ventilés, secs et frais.
10-Gardez votre propreté et celle de votre zone de travail. Après avoir manipulé tout
matériau, lavez-vous soigneusement à l’eau et au savon. Nettoyez les surfaces de travail au
moins une fois par poste afin de minimiser les risques de contamination.
11-S’informer sur les procédures et les équipements d’urgence. Comprendre les procédures
d’urgence signifie connaître les procédures d’évacuation, les procédures de signalement
d’urgence et les procédures de traitement des incendies et des déversements. Cela signifie
aussi savoir ce qu’il faut faire en cas d’urgence médicale si un collègue est blessé ou
submergé par des produits chimiques.

6-RÉGLES DE BASES (LES BONNE PRATIQUES DANS LE LABORATOIRE

MICROBIOLOGIQUES):
A/AVANT LE DEBUT DE LA MANIPULATION:
1-Porter des vêtements appropriés (pantalon long et chaussures fermées);
2-Porter un sarrau;
3-Porter des lunettes de protection.
B/PENDANT LA MANIPULATION:
1-Ne jamais entreposer les matières dangereuses dans les réfrigérateurs utilisés pour la
nourriture. De même, ne jamais déposer de la nourriture dans les réfrigérateurs utilisés
pour les activités du laboratoire.
2-Il est interdit de courir ou de se bousculer dans les laboratoires, ou encore d’utiliser le
matériel ou l’équipement de façon inappropriée.
3-Tenir toutes les zones du laboratoire propres et rangées. Éviter l’accumulation de déchets
(ils constituent une source de combustible en cas d’incendie).
C/APRES LA MANIPULATION:
1-Nettoyer son espace de travail.
2-Retirer ses gants ou en garder un pour réduire la contamination des surfaces communes.
Ranger l’équipement et le matériel dans le bon espace de rangement.

7-GESTION DES DÉCHETS:

1-Utilisez des contenants compatibles/résistants aux déchets que vous voulez éliminer.
2-Apposez des étiquettes respectant le SIMDUT 2015 - SGH
3-Faites des regroupements lorsque c'est possible et que les déchets sont compatibles

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4-Avant de jeter, avez-vous évalué si vous pouviez recycler
5-Ayez une personne en charge qui a la formation adéquate
6-Assurez-vous d'entreposer vos déchets de laboratoire dans un endroit ventilé et à la
température adéquate si requis.

8-LA NORME ISO 17025:

La norme iso 17025 est une norme internationale qui établit les
exigences générales de compétence pour effectuer des essais et/ou des
étalonnages, y compris l'echantillonnage. Elle couvre les opérations effectuées
au moyen de méthodes normalisées, de méthodes non normalisées et de
méthodes élaborées par les laboratoires.

9-EQUIPEMENT DE LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE:

A/PAILLASE: Une paillasse de laboratoire ou une
table de manipulation désigne un plan de travail.

B/ÉTUVE: Une étuve de laboratoire est un appareil

de chauffage fonctionnant le plus souvent à la
pression atmosphérique et permettant d'effectuer
divers traitements thermiques à température
régulée.

C/AUTOCLAVE: un autoclave est un récipient dont le couvercle

est glissé à l'intérieur de l'enveloppe du récipient et qui se ferme
hermétiquement sous l'effet de la pression intérieure de la vapeur.

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D/FOUR POUPINEL: Stériliser le matériel utilisé permet
de protéger des contaminations croisées entre patients
et personnel médical, et entre les patients eux-mêmes,
en détruisant les microorganismes potentiellement
pathogènes
présents.

E/BAIN MARIE: Le bain-marie est un des équipements

de laboratoire permettant de chauffer un récipient
dans un bain d'eau ou d'huile (en fonction de la
température souhaitée).

F/HOTTE: Une hotte de laboratoire, est un dispositive

qui permet l'extraction des vapeurs toxiques des produits
utilisés lors de manipulations. Sa fonction première est
de protéger le manipulateur.

G/LES BOITES DE PETRI: Une boîte de Petri

est une boîte cylindrique transparente
peu profonde, en verre ou en plastique,
munie d'un couvercle.

H/PIPETTE PASTEUR: Les micro-pipettes

ou pipettes Pasteur sont des tubes fins
généralement en verre dont l'extrémité
a été effilée pour obtenir une pointe ouverte d'un
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diamètre ad hoc.
J/BEC BENSEN: Un bec Bunsen est un appareil
de laboratoire destiné à produire une flamme
ouverte avec du gaz combustible afin de chauffer
des préparations, stériliser du matériel ou burler
des substances.

K/PISETTE: Une pissette est un récipient

de laboratoire, de forme cylindrique,
munie d'un tube plongeant et d'un tube
verseur recourbé.

L/LAMELLE: Une lamelle (ou lamelle couvre-objet)

est une petite et fine plaque de verre utilisée pour
couvrir un échantillon placé sur une lame pour
une observation au microscope.

M/MATERIELS DE LABORATOIRE EN GÉNÉRALE:

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N/L’ANTIBIOGRAMME:
L'antibiogramme est une technique de routine d'analyse médicale. Il est
réalisé lorsque l'examen bactériologique d'un prélèvement biologique a mis
en évidence la présence de bactéries. L'antibiogramme permet alors de
déterminer si une bactérie est résistante ou sensible à tel ou tel antibiotique
testé.

10-Stérilisation:
La stérilisationest une technique destinée à détruire tout germe microbien
par exemple d'une préparation (souvent alimentaire). La première technique a
consisté à porter cette préparation à haute température, c'est-à-dire de 100 à
180 °C.

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11-La désinfection:
est l’opération au résultat momentané permettant d’ éliminer ou de tuer
les micro-organismes et/ou d’inactiver les virus indésirables portés par des
milieux inertes contaminés en fonction des objectifs fixés.

12-L'antisepsie:
est le processus d'inhibition ou de destruction des microorganismes sur
les tissus vivants, y compris la peau, les cavités buccales et les plaies
ouvertes.

LA DIFFERENCES ENTRE DESINFECTION ET ANTISEPTIE:

le différence clé entre la désinfection antisepsie et la stérilisation est que
la L'antisepsie désigne le processus d'élimination des microbes responsables
des maladies des surfaces vivantes, tandis que la désinfection désigne le
processus d'élimination de nombreux microbes responsables des maladies
présentes sur des objets inanimés afin d'éviter leur propagation..

13-CLASSIFICATION DE SPAULDING
La classification de Contacts pour les Risque de Niveau de
Spaulding dispositifs transmission de désinfection
médicaux l’infection
Critique Tissu stérile ou HAUT Stérilisation ou
circulation désinfection de
sanguine haut niveau*
Semi-critiques Les membranes MOYEN Désinfection de
muqueuses ou niveau
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 avec la peau non intermédiaire
intacte
Non-critiques Peau intacte FAIBLE Désinfection de
uniquement bas niveau

14-Certification d’un laboratoire:

La certification est un processus par lequel une tierce partie (un organisme
compétent) donne
une assurance écrite de conformité aux exigences spécifiées dans une norme
donnée.

Accréditation:
Attestation délivrée par une tierce partie, ayant rapport à un organisme
d’évaluation de la
conformité, constituant une reconnaissance formelle de la compétence de ce
dernier à réaliser
des activités spécifiques d’évaluation de la conformité
L’accréditation a pour objet après évaluation d’attester que des organismes
sont capables
techniquement : - De réaliser des analyses, des étalonnages ou des essais ; - De
procéder à des
actions d’inspection ; - Ou à des actions de certification (de produits, services,
systèmes
qualité ou de personnes).

15-ÉTAPES DE STÉRILISATIONS:
Les étapes qui precedent la sterilisation à proprement parler sont
identiques aux étapes de préparation du matériel médical avant la
désinfection.

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A/Le pré-traitement
Les instruments médicaux sont immergés juste après leur utilisation dans
une solution détergente-désinfectante pendant 15 minutes. Un rinçage
abondant à l'eau du robinet après l'immersion est obligatoire.

B/Le nettoyage
Il peut se faire en machine à laver ou dans un bac à ultrasons. Quatre
facteurs sont associés à un nettoyage efficace :
• l'action chimique (le détergent) ;
• l'action mécanique (le brossage) ;
• la durée ;
• la température.

Le nettoyage doit être suivi d'un rinçage abondant et d'un séchage soigneux.

C/Le conditionnement
Le dispositif médical doit être emballé avant son passage dans le
stérilisateur médical pour garantir la pérennité de l'état stérile. Les emballages
peuvent être réutilisables (conteneurs recevant les plateaux) ou non
réutilisables comme les sachets de stérilisation des instruments.

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D/La stérilisation
Elle est réalisée pour le matériel thermo-résistant par un procédé utilisant la
chaleur humide sous pression. Les instruments sont disposés dans un
autoclave sans contact entre eux. Pour le matériel thermosensible, une
désinfection de haut niveau sera requise.

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