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366 UNIVERSITÉ CADI AYYAD N° d’ordre : 366
FACULTÉ DES SCIENCES

SEMLALIA - MARRAKECH
Abdelilah EL ABBASSI
**********************
THÈSE
présentée à la Faculté des Sciences Semlalia pour obtenir le grade de :
Docteur
UFR : Sciences de l’Eau
Valorisation des margines par isolement des polyphénols
Spécialité : Biochimie & Traitement des Eaux Usées

avec des procédés membranaires de séparation
VALORISATION DES MARGINES PAR ISOLEMENT DES

POLYPHENOLS AVEC DES PROCEDES MEMBRANAIRES DE
SEPARATION
par :
Abdelilah EL ABBASSI
(DESA: Gestion de la Biodiversité Fossile et Actuelle)
Soutenue, le 30 Mars 2013 devant la commission d’examen :
Président : Ahmed Benharref P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA - Marrakech
Examinateurs : Omar Assobhei P.E.S. Faculté des Sciences, UCD - El-Jadida
Abdelrhani Yaacoubi P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA - Marrakech
2013 B
Abdellatif Hafidi P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA- Marrakech

Mohamed Khayet P.E.S. Faculté des Physiques, UCM – Madrid
Mohamed Mountadar P.E.S. Faculté des Sciences, UCD - El-Jadida
Naila Ouazzani P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA - Marrakech
REMERCIEMENTS
Le présent travail n’aurait pas avoir lieu sans la contribution de plusieurs personnes.
Je tiens à exprimer ma profonde gratitude en remerciant tous ceux qui m’ont aidé pour mener
à bien ce travail.
Je tiens tout d’abord à exprimer mes vifs remerciements au Professeur Abdellatif
Hafidi. Si j’ai pu mener à bien ce travail, c’est à lui que je suis redevable. Il a su me guider
avec une constante bienveillance et m’a communiqué sa passion pour la recherche et m’a -
sans cesse - fait bénéficier de son soutien, de son expérience et de son aide aussi précieux
qu’efficace. Qu’il accepte ici tous mes remerciements et qu'il trouve ici l'expression de ma
profonde gratitude.
Je tiens à adresser également mes sincères remerciements au Professeur Mohamed
Khayet pour son aide renouvelée sans cesse.Une partie de ce travail a été réalisée au sein de
son laboratoire à la Faculté des Sciences Physiques (Université de Complutense – Madrid).
La rigueur de ses analyses et la qualité de ses conseils ont été d’un soutien considérable pour
la réussite de ces recherches.
Que le Professeur Jan Hoinkis, de l’Université des Sciences Appliquées de karlsruhe
(Allemagne) trouve ici l’expression de mes sincères remerciements d’avoir accepté de
m’accueillir au sein de son laboratoire pour la réalisation d’une partie de ce travail.
Que Messieurs les Professeurs Omar Assobhei et Mohamed Mountadar de la Faculté
des Sciences (Université Chouaib Doukkali – El-jadida), Pr. Ahmed Benharref, Pr.
Abdelghani Yaacoubi et Madame Pr. Naila Ouazzani de la Faculté des Sciences –Semlalia
(Université Cadi Ayyad – Marrakech), trouvent ici l’expression de mes sincères
remerciements pour leur participation au jury de ma soutenance de thèse malgré leurs
préoccupations et pour l’intérêt qu’ils portent à notre travail.
Je tiens à présenter mes remerciements à Messieurs les professeurs Hamid Ajana et
Benichou Mohamed pour leur soutien constant durant toutes ces années de préparation de
thèse.
De nombreuses personnes, de notre Laboratoire de Sciences des Aliments, par leurs
aides, conseils et discussions ont contribué à enrichir ce travail. Ainsi j’adresse mes sincères
remerciements à Mme Sagar Maha et aux Mlles Hanane Moummou, Hajar Kiai, Jihane Raiti
et Thouria Bourhim.
i
Je ne saurais oublier ici de remercier mes amis Mohamed El Atiqi, Faghir Mustapha,
Abdelhadi Ewague, Moulay Youssef Arjouni, Mounir Chammaa, Sana El Fadeli, Hasna
Soummane, Majida Lahrouni et Nabila Saadaoui pour leur amitié et complicité ainsi que
pour leur soutien durant la période de la réalisation de ce travail.
Je tiens à rendre un grand hommage à mes parents pour leurs soutiens moral et
matériel. Leurs efforts considérables et leurs encouragements m’ont permis de mener à terme
ce travail. Qu’ils trouvent ici l’expression de ma haute considération.
Que tous ceux que je n’ai pas cités et qui ont participé de prés ou de loin à la
réalisation de ce travail soient assurés de toute ma reconnaissance et mes remerciements.
ii
AVANT PROPOS
Nom et Prénom de l’auteur : Abdelilah EL ABBASSI

Intitulé du travail : Traitement et valorisation des margines par des procédés de séparation
membranaires.
Encadrant:
Non, prénom et grade : Abdellatif Hafidi, PES
Laboratoire et institution : Laboratoire Sciences des Aliments, Faculté des Sciences
Semlalia – Université Cadi Ayyad, Marrakech.
Co-encadrant:
Nom, prénom et grade : Mohamed Khayet, PES
Laboratoire et institution : Département de Physique Appliquée I, Faculté des Sciences
Physiques, Université Complutense de Madrid, Madrid (Espagne).
Lieux de réalisation des travaux :

Laboratoire Sciences des Aliments, Faculté des Sciences Semlalia-Marrakech.
Département de Physique Appliquée I, Faculté des Sciences Physiques, Université
Complutense de Madrid, Madrid (Espagne).
Université des Sciences Appliquées de Karlsruhe, Allemagne.
Période de réalisation du travail de thèse : Mars 2007- Décembre 2010
Rapporteurs autres que les encadrants :

A. Benharref P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA - Marrakech
M. Mountadar P.E.S. Faculté des Sciences, UCD - El-Jadida
N. Ouazzani P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA - Marrakech
Cadre de coopération et sources de financement:
1. Action Intégrée Maroco-Espagnol numéro A/016076/08, intitulé « Préparation des

membranes pour le traitement des margines marocaines et récupération des polyphénols par
distillation membranaire osmotique » financé par l’AECID, Espagne.
2. Action Intégrée Maroco-espagnol numéro A/6209/06, intitulé « Traitement et valorisation des
margines par technologies de séparation membranaires » financé par l’AECID, Espagne.
3. Bourse IFS numéro W4749-1, intitulé “Treatment and Valorisation of olive mill effluents
using micellar enhanced ultrafiltration”, financé par la Fondation Internationale de la
Sciences (IFS), Suède.
iii
Publications et communications en rapport avec le présent travail:
Publications
1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. 2013. Application of ultrafiltration to the
treatment of olive processing wastewaters. Journal of Cleaner Production, (Accepté)
2. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Khayet, M., Treatment of
crude olive mill wastewater by osmotic distillation. Separation and Purification
Technology 104: 327–332. (2011 Impact factor: 2.921).
3. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hoinkis, J., Hafidi, A. Removal of phenolic compounds by
micellar enhanced ultrafiltration using an anionic surfactant. Journal of Materials and
Environmental Science. (Soumis)
4. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hoinkis, J., Hafidi, A. Separation of natural monocyclic
phenolic compounds in synthetic wastewaters using a cationic surfactant. Water
Science & Technology. (Soumis)
5. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Cloud Point Extraction of Phenolic Compounds
from Pretreated Olive Mill Wastewater. Separation and Purification Technology.
(Soumis)
6. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Khayet, M. Integrated
Direct Contact Membrane Distillation of Olive Mill Wastewater. Desalination (2011
Impact factor: 2.590). Sous presse.
7. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Khayet, M. Treatment of
Olive Mill Wastewater by Membrane Distillation using Polytetrafluoroethylene
Membranes. Separation and Purification Technology, 98 (2012) 55 – 61. (2011
Impact factor: 2.921).
8. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., 2012. Phenolic profile and antioxidant activities
of olive mill wastewater. Food Chemistry 132: 406 – 412 (2011 Impact factor: 3.655)
9. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Khayet, M., 2011. Micellar-Enhanced Ultrafiltration
process for olive mill wastewater treatment. Water Research 45 (15): 4522 – 4530.
(2011 Impact factor: 4.865)
10. El-Abbassi, A., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Khayet, M. Concentration of olive
mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery. Desalination
245(1-3) (2009) 670 – 674. (2011 Impact factor: 2.590)
Publications en préparation
1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Riati, J., Hafidi, A., An overview on polyphenol extraction
and recovery methods from olive mill wastewater.
2. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Antioxidant capacities of phenolic extracts from
residual resources.
Communications dans des congrès nationaux et internationaux
1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Antioxidant capacities of phenolic extracts from
olive processing wastewaters. The 1st Morocco-Japan Symposium on “Sustainable
Society Through Advanced Sciences”, Mars 15-16, 2012, Marrakech, Morocco.
2. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of olive processing wastewaters using
micellar solubilization. The 1st Morocco-Japan Symposium on “Sustainable Society
Through Advanced Sciences”, Mars 15-16, 2012, Marrakech, Morocco.
3. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garcia-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic distillation. 3ème édition du Congrès International
Eaux, Déchets et Environnement (EDE3) 21- 23 novembre 2011, Fès, Maroc.
iv
4. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Vélez-Agudelo, C., García-Payo, M.C., Khayet,
M., Direct contact membrane distillation of Moroccan olive mill wastewater.
International Workshop on Membrane Distillation and Related Technologies, October
9 - 12, 2011, Institute on Membrane Technology (ITM-CNR), Ravello, Italy.
5. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Antioxidant capacities of phenolic extracts from
residual resources. The 16th International Symposium on Environmental Pollution and
its Impact on Life in the Mediterranean Region (MESEAP), September 24-27, 2011,
Ioannina, Greece.
6. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Antioxidant and radical scavenging activity of
bioactive compounds from agroindustrial by-products. 3ème édition du congrès
international sur l’Amélioration de la Production Agricole (APA3), 17-18 Mars 2011,
Faculté des Science et Techniques - Settat, Maroc.
7. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Comparative study on chemical changes in olives
and brine during the fermentation of olives from Moroccan picholine. 3ème édition du
congrès international sur l’Amélioration de la Production Agricole (APA3), 17-18
Mars 2011, Faculté des Science et Techniques - Settat, Maroc.
8. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic membrane distillation. Student Exchange Meeting
2011, Society of Chemical Engineers, University of Tsukuba, March 4, 2011, Tsukuba-
Ibaraki, Japan.
9. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Decolorization and detoxification of olive mill
wastewater by ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and
Environment -ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
10. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic membrane distillation. The First International
Seminar on Water, Energy and Environment –ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers,
Algeria.
11. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of Olive Table Wastewaters by
Ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and Environment –
ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
12. Khayet, M., El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., García Payo, M.C., Essalhi, M.,
Direct contact membrane distillation of olive mill wastewater. 2nd International
Chemical Engineering Conference, October 12-13, 2010, University of Jordan,
Amman, Jordan.
13. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Khayet, M. Essalhi, M., García-Payo, M. C.,
Olive Mill Wastewater Treatment and Concentration by Membrane Distillation using
polytetrafluoroethylene membranes. 5th International Conference on Thermal
Engineering, May 10-14, 2010. Marrakech – Morocco.
14. El-Abbassi, A., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Khayet, M., Treatment of olive mill
effluents by Osmotic Membrane Distillation. The 2nd Maghreb Conference on
Desalination and Water Treatment “CMTDE 09”, 19-22 December 2009, Hammamet,
Tunisia.
15. Hafidi, A. El-Abbassi, A. and Hoinkis, J., Removal of phenolic compounds from
model solutions using Micellar Enhanced Ultrafiltration. 15th International Symposium
on Environmental Pollution and its Impact on Life in the Mediterranean Region,
October 7-11, 2009, Bari, Italy.
16. El-Abbassi, A., Khayet, M., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Application de la
distillation membranaire au traitement des effluents liquides de l’industrie oléicole. Les
5ème Journées Internationales des Géosciences de l’Environnement. 13-15 Mai 2009.
Fès, Maroc.
v
17. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Traitement des margines par floculation micellaire
adsorptive. 1ère Rencontre nationale sur la valorisation des sous-produits
agroalimentaires. 20-21 Novembre 2008. Beni Mellal, Maroc.
18. El-Abbassi, A., Khayet, M., Hafidi, A., García-Payo, M. C., Recovery of polyphenols
from olive oil mill wastewaters by micellar enhanced ultrafiltration. 1ère Rencontre
nationale sur la valorisation des sous-produits agroalimentaires. 20-21 Novembre 2008.
Beni Mellal, Maroc.
19. El-Abbassi, A., García-payo, M. C., Hafidi, A., khayet, M., Concentration of olive
mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery. Engineering With
Membrane; Membrane processes: development, monitoring and modeling – from the
nano to the macro scale- May 25-28, 2008, Algarve - Portugal.
20. El-Abbassi, A., Hafidi, A., 2007. Application de dialyse au traitement des effluents de
l’industrie oléicole, 3ème Journée Scientifique Nationale : Environnement et Santé, 15
Novembre 2007, Mohammedia, Maroc.
Autres
1. Participation au premier espace euro-méditerranéen d’innovation (EMIS) Forum sur le
management de l’eau et des eaux usées, dans le cadre du Salon de l'innovation, de la
recherche et du partenariat technologique (MED INNOVA 2011) 1-2 Décembre, 2011
à Casablanca/Maroc.
2. Participation à la Rencontre Internationale sur la Gestion des Ressources en Eau dans
les Zones Arides. Apport des procèdes non conventionnels, les 21-22 Mars 2008 au
Palais des congrès de Laâyoune, Maroc.
Publications et communications hors sujet de thèse:

Publications
1. Khalid, N., El-Abbassi, A., Ahmad, A., Ahmed, A., Moringa Oleifera oil: Nutritive
value and health implications. Journal of Microbiology, Biotechnology and Food
Science. Soumis
2. El-Abbassi, A., Neves, M.A., Kobayashi, I., Hafidi, A. Nakajima M., Preparation and
characterization of highly stable monodisperse argan oil-in-water emulsions. European
Journal of Lipid Science and Technology (2011 Impact factor: 1.733). Accepté
3. El-Abbassi, A., Khalid, N., Zbakh, H., Ahmad, A. Physicochemical characteristics,
nutritional properties and health benefits of argan oil: a review. Critical Reviews in
Food Science and Nutrition (2011 Impact factor: 4.789). Sous press
4. Zbakh, H., El-Abbassi, A., Potential use of olive mill wastewater in the preparation of
functional beverages: a review. Journal of Functional Food 4 (2012) 53–65. (2011
Impact factor: 2.446)
5. Aourir, M., Znari, M., El-Abbassi, A., Radi, M., Melin, J-M., 2008. Reproductive
Parameters in Captive hand-reared Black-bellied Sandgrouse, Zoo Biology 27 (4): 269
– 281. (2010 Impact factor: 0.663)
6. El-Abbassi, A., Znari, M., Aourir, M., Ba M’Hamed, S., 2007. Ontogénie du
comportement chez la perdrix gambra, Alectoris barbara (Aves: Galliformes).
Biomatec Echo Review 2 (5): 76 – 84.
vi
Communications dans des congrès nationaux et internationaux
1. El fadeli, S., Bouhouch, R., El Abbassi, A., Chaik, M., Aboussad, A., Lekouch, N.,
Hurrell, R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. Soil, drinking water and plants
contaminated with lead and health risk assessment, from Marrakech area, Morocco. La
4ème conférence sur: les techniques analytiques nucléaires et conventionnelles et leurs
applications. 22 au 23 Octobre 2012, Rabat-Maroc.
Hurrell, R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. The risk of environmental contamination
of lead on food chain from Marrakech area, Morocco. 1er congrès International de
l’Association Tunisienne de Physiologie et de Biosurveillance de l’Environnement .19
au 22 décembre 2012, Douz – Tunisie.
Hurrell, R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. lead contamination in soil, drinking water
and plants from Marrakech area, Morocco. Istanbul International Solid Waste, Water
and Wastewater Congress (Istanbul3WCongress 2013). May 22-24, 2013 Istanbul-
Turkey.
4. El-Abbassi, A., Neves, M.A., Hafidi, A., Nakajima M., Preparation and
characterization of highly stable monodisperse argan oil-in-water emulsions. The 12th
Annual Meeting of the Japan Society for Food Engineering, August 5-6, 2011, Kyoto
Terrsa, Kyoto, Japan.
5. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Comparative study on chemical changes in olives
and brine during the fermentation of olives from Moroccan picholine. 3ème édition du
congrès international sur l’Amélioration de la Production Agricole (APA3), 17-18
Mars 2011, Faculté des Science et Techniques - Settat, Maroc.
6. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of Olive Table Wastewaters by
Ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and Environment –
ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
7. El-Abbassi, A. and Hafidi, A., Traitement des eaux usées des teintureries par
Ultrafiltration Assistée par Micelle. Les 5ème Journées Internationales des
Géosciences de l’Environnement. 13-15 Mai 2009. Fès, Maroc.
8. El-Abbassi, A., Chammaa, M., Lahrouni, A. & Ghoulam, C., Application des
techniques de contrôle du stresse hydrique chez l’olivier: effet sur la croissance et le
rendement. 2ème édition du congrès national sur l’Amélioration de la Production
Agricole (APA2), 03-04 Avril 2008, Faculté des Science et Techniques - Settat,
Maroc.
9. El-Abbassi, A., Znari, M., Aourir, M., Ba M’Hamed, S., 2007. Analyse
morphométrique de la croissance et hétérochronie du développement chez la perdrix
gambra, Alectoris barbara. Communication orale, 5ème Symposium « Morphométrie et
Évolution des Formes », Muséum d’Histoire Naturelle, 26 et 27 Mars 2007, Paris.
10. El-Abbassi, A., Znari M., Aourir, M., Radi, M., Ba M’hamed, S., Ontogénie du
comportement chez la perdrix gambra (Alectoris barbara, Aves : Phasianidae). 2nd
Mediterranean Conference of Neurosciences, 13-15 décembre 2006. Marrakech,
Maroc.
vii
Valorisation des margines par isolement des polyphénols avec des procédés
membranaires de séparation
Résumé
Les margines ou eaux résiduaires des industries d’extraction de l’huile d’olive sont
responsables de sérieux problèmes de pollution. Au Maroc, mais également dans d’autres pays
oléicoles, les margines sont dans la plupart des cas déversées sans aucun traitement dans le milieu
naturel, soit directement soit à travers le réseau public d’assainissement. Leur pouvoir polluant est
attribué principalement à leur contenu phénolique.
Nos travaux démontrent les potentialités d'un procédé intégré pour la concentration,
l'élimination et la récupération de composés phénoliques des margines. Deux procédés membranaires
(Ultrafiltration, UF et microfiltration, MF) ont été testés pour un prétraitement des margines réduisant
leur charge organique. Deux autres procédés membranaires différents, à savoir d'ultrafiltration assistée
par micelles (UFAM) et la distillation membranaire à contact directe (DCMD) ont été appliqués avec
succès pour la concentration préalable des margines avant la récupération des composés phénoliques.
La concentration des composés phénoliques des margines facilitera leur purification ultérieure.
Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes de téflon (PTFE)
a permis la concentration du contenu phénolique des margines jusqu’à 1,78 fois après 8 heures de
distillation. Le meilleur indice de performance a été obtenu par la membrane TF1000. En plus, l’effet
de traitement des margines par températures élevées sur leur contenu phénolique et leur activité
antioxydante (test de DPPH) a été évalué en fonction du temps de traitement. Les résultats obtenus
montrent qu’il n’y pas d’effets indésirables de la température élevée (jusqu’à 80°C) sur le contenu
phénolique et son activité antioxydant. En distillation osmotique isothermique, les membranes de
PTFE offrent aussi des flux raisonnables (2,9-4,2 L/h.m2) avec des facteurs de concentration du
contenu phénolique des margines de l’ordre de 1,2 après 280 min de distillation osmotique à 30°C.
Nos résultats démontrent que l’UFAM permet - sous des conditions optimisées – l’élimination
de 88% de la couleur sombre des margines et de 95% de la DCO initiale avec un taux de rétention des
composés phénoliques de 70%. Le rejet de composés phénoliques individuels à partir des solutions
modèles a été étudié en utilisant différentes tailles des pores membranaires (20 et 50 KDa) et en
employant différents types d'agents tensioactifs (cationique et anionique). Les rétentions ont été très
élevées lors de l'utilisation de 10 fois la concentration micellaire critique (CMC) du chlorure de
cétylpyridinium (CPC) et a atteint 95% pour l'acide p-coumarique. Les taux de retentions se sont
révélés dépendants de la structure moléculaire des composés phénoliques. Le tensioactif a été récupéré
efficacement du retentât par précipitation sous sa température de Krafft, surtout à 5 °C, où le taux de
récupération a été supérieur à 90%. La récupération du tensioactif (SDS) par précipitation avec des
électrolytes a été aussi étudiée et a montré son efficacité. Toutefois, la précipitation physique (par
abaissement de température) reste la plus pratique et la plus efficace par rapport à la précipitation
chimique qui nécessite l’addition des sels aux solutions. Le recyclage du tensioactif du perméat et du
retentât rendra le procédé plus écologique et économique et permettra ainsi de réduire toute pollution
secondaire générée par des agents tensioactifs.
Le procédé d’extraction des polyphénols des margines par point de trouble (cloud point)
(CPE) a été appliqué pour la récupération des composés phénoliques. Les résultats obtenus montrent la
possibilité d'extraire jusqu'à 66,5% de la teneur totale en composés phénoliques des margines en
utilisant un seul cycle d’extraction par CPE. Le rendement le plus élevé a été obtenu lors de
l'utilisation de 10% de Triton X-100 à 90 °C. Les résultats montrent que le CPE peut être une
alternative efficace aux méthodes classiques d'extraction, car elle peut offrir un mélange
d'antioxydants naturels adaptés pour des applications pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires.
L’étude des activités antioxydantes des extraits des margines a révélé un pouvoir antioxydant
comparable à certains antioxydants synthétiques largement employés dans l’industrie alimentaire. Vu
leur valeur économiques, les composés phénoliques récupérés, constitueront une source de revenues
supplémentaires pour les huileries.
Mots clés : margines ; polyphénols ; activités antioxydantes ; ultrafiltration assistée par micelles ;
distillation membranaire ; extraction par point de trouble.
viii
Valorization of olive mill wastewater by recovering the phenolic content
using membrane separation processes
Abstract
Olive mill wastewaters (OMW) are responsible for serious pollution problems especially in
the Mediterranean basin. In Morocco, like in other olive-growing countries, OMW are in the most of
cases discharged untreated into the natural environment, either directly or through the public sewage
system. Their pollutant power is mainly attributed to their phenolic content.
Our works demonstrate the potential of an integrated process for the concentration, the
removal and the recovery of phenolic compounds from OMW. Two membrane processes
(Ultrafiltation, UF and microfiltration, MF) were tested for the pretreatment of OMW by reducing
their organic load. Two other different membrane processes, namely micellar-enhanced ultrafiltration
(MEUF) and direct contact membrane distillation (DCMD) have been successfully applied for the
preconcentration of OMW prior to the recovery of phenolic compounds. The concenration of the
phenolic compounds allow the economy of chemicals used later for extraction.
OMW treatment by membrane distillation (MD) using polytetrafluoroethylene (PTFE)
membranes, allow the concentration of OMW phenolic content 1.78 times after 8 hours of membrane
distillation process, obtaining the best performance index when using the membrane TF1000 with a
mean pore size 1 µm. In addition, the effect of OMW treatment by high temperatures on the phenolic
content and its antioxidant activity (DPPH test) was evaluated against operating time. It was observed
that the treatment of OMW at high temperatures (<80°C) has almost no negative effect on the total
phenolic content neither on its antioxidant activity since the antioxidant activity increased by 15%
(IC50 decreased from 146 to 125 µg/ml) and the total phenolic content (TPC) increased by 16%.
Furthermore, PTFE membranes showed reasonable permeate fluxes (2,9-4,2 L/h.m2) when used in the
isothermal osmotic distillation (OD) giving concentration factor of OMW phenolics of 1.2 after 280
min of treatment at 30°C.
The results demonstrate that MEUF allows – in optimal conditions – the elimination of 88% of
the OMW dark color and 95% of the initial COD along with a retention rate of phenolic compounds
approaching 70%. The rejection of individual phenolic compounds from model solutions was also
investigated using membranes of different pore sizes (20 and 50 kDa) and using different types of
surfactants (cationic and anionic). Retentions were very high when using 10 times the critical micelle
concentration (CMC) of Cetylpyridinium chloride (CPC) and reached 95% for p-coumaric acid. The
MEUF shows differential retentions depending on the molecular structure of phenolic compounds.
The surfactant was effectively recovered by precipitation from the retentate at temperatures below its
Krafft temperature, especially at 5 °C, where the recovery rate was above 90%. The recovery of the
surfactant (SDS) by precipitation with electrolytes was also studied and showed its effectiveness.
However, the physical precipitation (by lowering the temperature) is the most practical and effective
compared to chemical precipitation, which requires the addition of salt to the solutions. Recycling of
surfactant from the permeate and retentate will make the process more ecological and economical and
will thus reduce any secondary pollution generated by surfactants.
Cloud point extraction (CPE) method was applied for the recovery of phenolic compounds
from pretreated OMW by UF. The results show the possibility of extracting up to 66.5% of the total
phenolic content of OMW using a single extraction stage by CPE. The highest yield was obtained
when using 10% of Triton X-100 at 90 °C. The results show that the CPE can be an effective
alternative to the classical extraction methods because it can offer a mixture of natural antioxidants
suitable for pharmaceutical, cosmetic or food application. The study of antioxidant activities of OMW
extracts revealed a powerful antioxydant capacity comparable to some synthetic antioxidants widely
used in the food industry. Regarding their economic interests, the recovered phenolic compounds can
be a source of additional incomes for oil mills owners and thereby can participate to the sustainable
development of rural areas.
Keywords : Olive mill wastewater ; polyphenols ; antioxidant activities ; micellar-enhanced

ultrafiltration ; membranaire distillation; cloud point extraction.
ix
‫ﺗﺜﻤﯿﻦ اﻟﻤﯿﺎه اﻟﻨﺎﺗﺠﺔ ﻋﻦ اﻧﺘﺎج زﯾﺖ اﻟﺰﯾﺘﻮن ﺑﺎﺳﺘﺨﻼص ﻣﺤﺘﻮاھﺎ ﻣﻦ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت‬
‫اﻟﻔﻨﻮﻟﯿﺔ ﺑﻮاﺳﻄﺔ ﺗﻜﻨﻠﻮﺟﯿﺎ اﻷﻏﺸﯿﺔ‬
‫ﻣﻠﺨﺺ ‪:‬‬
‫ﻣﯿﺎه اﻟﺼﺮف اﻟﻨﺎﺘﺟﺔ ﻋﻦ اﺳﺘﺨﺮاج زﯾﺖ اﻟﺰﯾﺘﻮن أو ﻣﺎ ﯾﺴﻤﻰ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﺗﻤﺜﻞ ﻣﺼﺪر ﺗﻠﻮث ﺧﻄﯿﺮ ﯾﮭﺪد اﻟﺘﻮازن اﻟﻄﺒﯿﻌﻲ ﻟﻠﺒﯿﺌﺔ‪.‬‬
‫ﻓﻲ اﻟﻤﻐﺮب ﻛﻤﺎ ھﻮ ﺷﺄن ﺑﻌﺾ اﻟﺒﻠﺪان اﻷﺧﺮى اﻟﻤﻨﺘﺠﺔ ﻟﺰﯾﺖ اﻟﺰﯾﺘﻮن‪ ،‬ﯾﺘﻢ اﻟﺘﺨﻠﺺ ﻣﻦ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ‪ -‬ﻓﻲ ﻣﻌﻈﻢ اﻟﺤﺎﻻت – ﻋﻦ‬
‫طﺮﯾﻖ ﺗﻔﺮﯾﻐﮫ ﻓﻲ اﻟﺒﯿﺌﺔ اﻟﻄﺒﯿﻌﯿﺔ ﺑﺪون ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ‪ ،‬إﻣﺎ ﻣﺒﺎﺷﺮة أو ﻋﻦ طﺮﯾﻖ ﺷﺒﻜﺔ اﻟﺼﺮف اﻟﺼﺤﻲ اﻟﻌﺎﻣﺔ‪ .‬وﯾﻌﺰى اﻟﺘﻠﻮث اﻟﻨﺎﺗﺞ‬
‫ﻋﻦ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﻓﻲ اﻟﻤﻘﺎم اﻷول إﻟﻰ اﺣﺘﻮاﺋﮫ ﻋﻠﻰ ﻛﻤﯿﺔ ھﺎﻣﺔ ﻣﻦ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ‪.‬‬
‫ﻓﻲ ﺑﺤﺜﻨﺎ ھﺬا‪ ،‬ﻧﻌﻤﻞ ﻋﻠﻰ ﺗﻄﻮﯾﺮ ﻋﻤﻠﯿﺔ ﻣﺘﻜﺎﻣﻠﺔ ﻟﻤﻌﺎﻟﺠﺔ وإزاﻟﺔ و ﺗﺮﻛﯿﺰ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ اﻟﻄﺒﯿﻌﯿﺔ اﻟﻤﺘﻮاﺟﺪة ﺑﻤﺎء اﻟﺠﻔﺖ‪ .‬ﺗﻢ‬
‫اﺧﺘﺒﺎر طﺮﯾﻘﺘﯿﻦ اﺛﻨﺘﯿﻦ ﻟﻠﻤﻌﺎﻟﺠﺔ اﻟﻤﺴﺒﻘﺔ ﻟﻤﺎء اﻟﺠﻔﺖ‪ :‬اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ )‪ (Ultrafiltration‬و اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﺪﻗﯿﻖ‬
‫)‪ .(Microfiltation‬ﺛﻢ ﻗﻤﻨﺎ ﻓﯿﻤﺎ ﺑﻌﺪ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام طﺮق أﻏﺸﯿﺔ أﺧﺮى )اﻟﺘﻘﻄﯿﺮ اﻟﻐﺸﺎﺋﻲ اﻟﻤﺒﺎﺷﺮ واﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ اﻟﻤﺪﻋﻢ‬
‫ﺑﺎﻟﻤﺬﯾﻼت( ﻣﻦ أﺟﻞ ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﻋﻦ طﺮﯾﻖ اﻧﺘﺎج ﻣﺎء ﻧﻘﻲ ﻗﺎﺑﻞ ﻹﻋﺎدة اﻹﺳﺘﻌﻤﺎل وﺗﺮﻛﯿﺰ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ ﻣﻦ أﺟﻞ‬
‫اﺳﺘﺨﻼﺻﮭﺎ ﻻﺣﻘﺎ‪ .‬ﺗﺮﻛﯿﺰ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ اﻟﻄﺒﯿﻌﯿﺔ اﻟﻤﺘﻮاﺟﺪة ﺑﻤﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﺳﯿﺴﻤﺢ ﺑﺎﻗﺘﺼﺎد اﻟﻤﻮاد اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ اﻟﻤﺴﺘﺨﺪﻣﺔ ﻓﻲ‬
‫اﺳﺘﺨﻼﺻﮭﺎ‪.‬‬
‫ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﻣﯿﺎه اﻟﺠﻔﺖ ﺑﺎﻟﺘﻘﻄﯿﺮ اﻟﻐﺸﺎﺋﻲ ﺑﻮاﺳﻄﺔ أﻏﺸﯿﺔ ﺗﻔﻠﻮن )‪ (PTFE, TF200‬ﻣﻜﻨﺖ ﻣﻦ ﺗﺮﻛﯿﺰ ﻣﺤﺘﻮى اﻟﻔﯿﻨﻮل اﻟﻰ ‪1.78‬‬
‫ﻣﺮات ﺑﻌﺪ ‪ 8‬ﺳﺎﻋﺎت ﻣﻦ اﻟﺘﻘﻄﯿﺮ‪ ،‬واﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﻰ أداء أﻓﻀﻞ ﻋﻨﺪ اﺳﺘﻌﻤﺎل ﻏﺸﺎء ‪ .TF1000‬ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ ذﻟﻚ‪ ،‬ﺗﻢ ﺗﻘﯿﯿﻢ‬
‫ﺗﺄﺛﯿﺮاﻟﻤﻌﺎﻟﺠﺔ ﺑﺎﻟﺘﻘﻄﯿﺮ اﻟﻐﺸﺎﺋﻲ ﺗﺤﺖ درﺟﺎت ﺣﺮارة ﻣﺮﺗﻔﻌﺔ ﻋﻠﻰ ﻣﺤﺘﻮى ﻣﯿﺎه اﻟﺠﻔﺖ ﻣﻦ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ و ﻋﻠﻰ ﻧﺸﺎطﮭﺎ‬
‫اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻸﻛﺴﺪة‪ .‬أظﮭﺮت اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أﻧﮫ ﻻ ﺗﻮﺟﺪ آﺛﺎر ﺳﻠﺒﯿﺔ ﻋﻠﻰ اﻟﻤﺤﺘﻮى اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﻲ واﻟﻨﺸﺎط اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻸﻛﺴﺪة ﺧﻼل ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﻣﯿﺎه‬
‫اﻟﺠﻔﺖ ﻋﻨﺪ درﺟﺔ ﺣﺮارة ﻻ ﺗﻔﻮق ‪ 80‬درﺟﺔ ﻣﺆوﯾﺔ‪ .‬وأﺑﺎﻧﺖ ﻛﺬﻟﻚ أﻏﺸﯿﺔ ﺗﻔﻠﻮن ﻋﻦ ﺗﺪﻓﻖ ﻣﻌﻘﻮل ‪ 4.2 - 2.9‬ﻟﺘﺮ ‪ /‬ﺳﺎﻋﺔ ‪ /‬ﻣﺘﺮ‬
‫ﻣﺮﺑﻊ ﻣﻊ ﻋﺎﻣﻞ ﺗﺮﻛﯿﺰ ﻟﻠﻤﺤﺘﻮى اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﻲ ﯾﺴﺎوي ‪ 1.2‬ﺑﻌﺪ ‪ 280‬دﻗﯿﻘﺔ ﻣﻦ اﻟﺘﻘﻄﯿﺮ اﻟﺘﻨﺎﺿﺤﻲ ﻋﻨﺪ ‪ 30‬درﺟﺔ ﻣﺌﻮﯾﺔ‪.‬‬
‫وﺗﻈﮭﺮ اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أن اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ اﻟﻤﺪﻋﻢ ﺑﺎﻟﻤﺬﯾﻼت ﯾﺴﻤﺢ ‪ -‬ﻓﻲ اﻟﻈﺮوف اﻟﻤﺜﻠﻰ‪ -‬ﺑﺎﻟﻘﻀﺎء ﻋﻠﻰ ‪ ٪88‬ﻣﻦ اﻟﻠﻮن اﻟﺪاﻛﻦ ﻟﻤﺎء‬
‫اﻟﺠﻔﺖ و ‪ ٪95‬ﻣﻦ اﻟﻄﻠﺐ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﻲ ﻣﻦ اﻷﻛﺴﺠﯿﻦ )‪ (DCO‬ﻣﻊ ﻣﻌﺪل ﺑﻘﺎء اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ ﯾﺼﻞ اﻟﻰ ‪ .٪70‬ﻛﻤﺎ ﻗﻤﻨﺎ ﺑﺪراﺳﺔ‬
‫اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ اﻟﻤﺪﻋﻢ ﺑﺎﻟﻤﺬﯾﻼت ﻻﺳﺘﺒﻘﺎء ﻣﺨﺘﻠﻒ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ اﻟﻨﻤﻮذﺟﯿﺔ )ﺣﺎﻣﺾ اﻟﻜﻮﻣﺎرﯾﻚ‪ ،‬ﺣﺎﻣﺾ اﻟﻔﺎﻧﯿﻠﯿﻚ‬
‫واﻟﺘﯿﺮوزول( ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﻣﺨﺘﻠﻒ أﺣﺠﺎم اﻟﻤﺴﺎم اﻟﻐﺸﺎﺋﯿﺔ )‪ 20‬و ‪ 50‬ﻛﯿﻠﻮ داﻟﺘﻮن( وﺑﺎﺳﺘﺨﺪام أﻧﻮاع ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﻣﻦ اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت‬
‫)اﻟﻤﻮﺟﺒﺔ واﻟﺴﺎﻟﺒﺔ(‪ .‬أﻋﻠﻰ ﻣﻌﺪل اﺳﺘﺒﻘﺎء ﺗﻢ ﺗﺴﺠﯿﻠﮫ ﻋﻨﺪ اﺳﺘﺨﺪام ﻛﻠﻮرﯾﺪ ﺳﯿﺘﯿﻞ ﺑﯿﺮﯾﺪﯾﻨﯿﻮم )‪ (CPC‬وﺑﻠﻎ ‪ ٪95‬ﺑﺎﻟﻨﺴﺒﺔ‬
‫ﻟﺤﺎﻣﺾ اﻟﻜﻮﻣﺎرﯾﻚ‪ .‬وﯾﻈﮭﺮ اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ اﻟﻤﺪﻋﻢ ﺑﺎﻟﻤﺬﯾﻼت ﻣﻌﺪﻻت اﺳﺘﺒﻘﺎء ﺗﻔﻀﯿﻠﯿﺔ ﺗﺨﺘﻠﻒ ﺣﺴﺐ اﻟﺘﺮﻛﯿﺐ اﻟﺠﺰﯾﺌﻲ‬
‫ﻟﻠﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ‪ .‬ﻣﻦ ﻧﺎﺣﯿﺔ أﺧﺮى ﺗﻢ اﻟﻌﻤﻞ ﻋﻠﻰ إزاﻟﺔ واﺳﺘﺮﺟﺎع اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت ﻋﻠﻰ ﻧﺤﻮ ﻓﻌﺎل ﻋﻦ طﺮﯾﻖ اﻟﺘﺮﺳﯿﺐ ﻓﻲ درﺟﺔ‬
‫ﺣﺮارة ﻣﻨﺨﻔﻀﺔ أدﻧﻰ ﻣﻦ درﺟﺔ ﺣﺮارة ﻛﺮاﻓﺖ )‪ (Krafft‬اﻟﻤﻤﯿﺰة ﻟﻠﻤﺼﺒﻨﺎت اﻟﻤﺴﺘﺨﺪﻣﺔ‪ ،‬وﺧﺼﻮﺻﺎ ﻋﻨﺪ ‪ 5‬درﺟﺎت ﻣﺌﻮﯾﺔ‬
‫ﺣﯿﺚ ﺑﻠﻎ ﻣﻌﺪل ﺗﺮﺳﺐ اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت ﻓﻮق ‪ .٪90‬إن إﻋﺎدة ﺗﺪوﯾﺮ اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت اﻟﻤﺴﺘﺮﺟﻌﺔ ﺳﺘﺠﻌﻞ اﻟﻌﻤﻠﯿﺔ أﻛﺜﺮ رﻓﻘﺎ ﺑﺎﻟﺒﯿﺌﺔ وأﻗﻞ ﻛﻠﻔﺔ‪،‬‬
‫وﺳﻮف ﺗﺨﻔﺾ ﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﻣﻦ أي ﺗﻠﻮث ﺛﺎﻧﻮي ﻧﺎﺗﺞ ﻋﻦ اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت‪.‬‬
‫إظﺎﻓﺔ إﻟﻰ ﻣﺎ ﺳﺒﻖ‪ ،‬ﺗﻢ ﺗﻄﺒﯿﻖ ﻋﻤﻠﯿﺔ اﺳﺘﺨﺮاج ﻣﺎدة اﻟﺒﻮﻟﯿﻔﯿﻨﻮل ﻣﻦ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﻋﺒﺮ اﺳﺘﻌﻤﺎل اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت اﻟﻤﺤﺎﯾﺪة ) ‪Cloud‬‬
‫‪ .(Point Extraction, CPE‬وأظﮭﺮت اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ إﻣﻜﺎﻧﯿﺔ اﺳﺘﺨﻼص ﻣﺎ ﯾﺼﻞ اﻟﻰ ‪ ٪66.5‬ﻣﻦ اﻟﻤﺤﺘﻮى اﻟﻜﻠﻲ ﻣﻦ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت‬
‫اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام دورة اﺳﺘﺨﻼص واﺣﺪة‪ .‬ﺗﻢ اﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﻰ أﻋﻠﻰ ﻣﻌﺪل اﺳﺘﺨﻼص ﻋﻨﺪ اﺳﺘﺨﺪام ‪ ٪10‬ﻣﻦ ﺗﺮﯾﺘﻮن ‪X-100‬‬
‫ﻓﻲ ‪ 90‬درﺟﺔ ﻣﺌﻮﯾﺔ‪ .‬وأظﮭﺮت اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أن ‪ CPE‬ﯾﻤﻜﻦ أن ﺗﻜﻮن ﺑﺪﯾﻼ ﻓﻌﺎﻻ ﻷﺳﺎﻟﯿﺐ اﻻﺳﺘﺨﻼص اﻟﺘﻘﻠﯿﺪﯾﺔ ﻷﻧﮭﺎ ﯾﻤﻜﻦ أن ﺗﻘﺪم‬
‫ﻣﺰﯾﺠﺎ ﻣﻦ اﻟﻤﻮاد اﻟﻄﺒﯿﻌﯿﺔ اﻟﻤﻀﺎدة ﻟﻸﻛﺴﺪة ﻗﺎﺑﻠﺔ ﻟﻼﺳﺘﺨﺪام ﻓﻲ اﻟﺼﻨﺎﻋﺎت اﻟﻐﺬاﺋﯿﺔ واﻟﺪواﺋﯿﺔ أو ﺻﻨﺎﻋﺔ ﻣﺴﺘﺤﻀﺮات اﻟﺘﺠﻤﯿﻞ‪.‬‬
‫وﻛﺸﻔﺖ دراﺳﺔ اﻟﻔﻌﺎﻟﯿﺔ اﻟﻤﻀﺎدة ﻟﻸﻛﺴﺪة ﻟﻠﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ ﻟﻤﺎء اﻟﺠﻔﺖ‪ ،‬أن ھﺬه اﻷﺧﯿﺮة ﯾﻤﻜﻦ أن ﺘؤدي دورا ھﺎﻣﺎ ﻓﻲ‬
‫اﻟﺘﻘﻟﯿل ﻤن ﻤﺨﺎطﺮ اﻹﺼﺎﺒﺔ ﺒﺎﻟﻌدﯿد ﻤن اﻷﻤرا ض ﮐﺎﻟـﺴرطﺎن وأﻤـﺮا ض اﻟﻘﻟب و اﻟﺸﺮاﯾﯿﻦ‪ .‬و أظﮭﺮت اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أن ﻧﺸﺎط‬
‫ﻣﺴﺘﺨﻠﺼﺎت ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻸﻛﺴﺪة ذو ﻗﻮة ﻣﻤﺎﺛﻠﺔ ﻟﺒﻌﺾ اﻟﻤﻮاد اﻻﺻﻄﻨﺎﻋﯿﺔ اﻟﻤﻀﺎدة ﻟﻸﻛﺴﺪة اﻟﻤﺴﺘﺨﺪﻣﺔ ﻋﻠﻰ ﻧﻄﺎق‬
‫واﺳﻊ ﻓﻲ اﻟﺼﻨﺎﻋﺎت اﻟﻐﺬاﺋﯿﺔ‪ .‬اﺳﺘﺨﻼص اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﻔﯿﻨﻮﻟﯿﺔ ﻣﻦ ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ ﯾﻤﻜﻨﮫ أن ﯾﻌﻮد ﻋﻠﻰ أﺻﺤﺎب ﻣﻌﺎﺻﺮ اﻟﺰﯾﺘﻮن‬
‫ﺑﻤﺪاﺧﯿﻞ ﻣﺎﻟﯿﺔ ھﺎﻣﺔ ﻣﻤﺎ ﺳﯿﺴﺎھﻢ ﻻ ﻣﺤﺎﻟﺔ ﻓﻲ اﻟﺘﻨﻤﯿﺔ اﻟﻤﺴﺘﺪﯾﻤﺔ ﻟﻠﻤﻨﺎطﻖ اﻟﻘﺮوﯾﺔ ﺣﯿﺚ ﺗﺘﺮﻛﺰ ﻣﻌﺎﺻﺮ اﻟﺰﯾﺘﻮن‪.‬‬
‫ﻛﻠﻤﺎت اﻟﺒﺤﺚ‪ :‬ﻣﺎء اﻟﺠﻔﺖ؛ اﻷﻧﺸﻄﺔ اﻟﻤﻀﺎدة ﻟﻸﻛﺴﺪة؛ اﻟﺒﻮﻟﯿﻔﯿﻨﻮل؛ اﻟﺘﺮﺷﯿﺢ اﻟﻔﺎﺋﻖ اﻟﻤﺪﻋﻢ ﺑﺎﻟﻤﺬﯾﻼت‪ ،‬اﻟﺘﻘﻄﯿﺮ ﺑﺎﻷﻏﺸﯿﺔ‪،‬‬
‫اﻻﺳﺘﺨﻼص ﺑﻮاﺳﻄﺔ اﻟﻤﺼﺒﻨﺎت اﻟﻤﺤﺎﯾﺪة‪.‬‬
‫‪x‬‬
SOMMAIRE
REMERCIEMENTS i
AVANT PROPOS iii
PRINCIPALES PUBLICATIONS ET COMMUNICATIONS iv
RESUME viii
ABSTRACT ix
‫ﻣﻠﺨﺺ‬ x
SOMMAIRE xi
INTRODUCTION GENERALE 1
CHAPITRE 1. REVUE BIBLIOGRAPHIQUE 5
1. Introduction 5
2. Caractéristiques physico-chimiques des margines 6
3. Les problèmes environnementaux engendrés par les margines 9
4. Les composés phénoliques 10
4.1. Nature et diversité 10
4.2. Activités antioxydantes et bienfaits des polyphénols des margines 12
4.2.1. Intérêts agroalimentaires 13
4.2.2. Intérêts pharmaceutiques 15
4.2.3. Intérêts cosmétologiques 16
5. Principaux méthodes de traitement et de valorisation des margines 16
5.1. Application directe des margines brutes pour la fertilisation du sol 17
5.2. Traitements physicochimiques 18
5.3. Traitements biologiques 18
5.3.1. Transformation aérobie 18
5.3.2. Compostage 19
5.3.3. Digestion anaérobie 19
5.4. Autres méthodes de traitement et de valorisation des margines 20
5.5. Extraction de composés à haute valeur ajoutée 20
6. Les procédés de séparation membranaires 21
6.1. Généralités 21
6.2. Distillation Membranaire 22
6.3. Ultrafiltration Assistée par Micelle 24
6.3.1. Généralités sur les tensioactifs 25
6.3.2. Traitement des effluents par ultrafiltration assistée par micelle 27
7. Extraction par point de trouble 28
Références bibliographiques 30
CHAPITRE 2. ETUDE DE L’ACTIVITE ANTIOXYDANTE DES EXTRAITS PHENOLIQUES
DES MARGINES
- Profil phénolique et activités antioxydantes des margines 41
CHAPITRE 3. APPLICATION DE L’ULTRAFILTRATION ASSISTEE PAR MICELLES POUR

LA SEPARATION DES COMPOSES PHENOLIQUES A PARTIR DES SOLUTIONS MODELES ET
DES MARGINES
- Séparation des composés phénoliques monocycliques naturels par 52

ultrafiltration assistée par micelles en utilisant un tensioactif cationique
- Séparation des composés phénoliques par ultrafiltration assistée par micelles 72
xi
en utilisant un tensioactif anionique
- Application de l’ultrafiltration assistée par micelles pour le traitement des 92
margines
CHAPITRE 4. TRAITEMENT ET CONCENTRATION DES MARGINES PAR DISTILLATION

MEMBRANAIRE ET OSMOTIQUE
- Concentration des margines par distillation membranaire pour la 103
récupération des polyphénols
- Distillation membranaire des margines par différentes membranes de 110
polytétrafluoroéthylène (PTFE)
- Traitement intégré des margines par distillation membranaire à contact direct 120
- Traitement des margines brutes par distillation osmotique et distillation 130
membranaire osmotique
CHAPITRE 5. EXTRACTION MICELLAIRE DES POLYPHÉNOLS DES MARGINES
- Extraction par point de trouble des polyphénols à partir des margines 139
prétraitées
DSCUSSION GENERALE 160
CONCLUSION GENERALE 171
xii
INTRODUCTION GENERALE
Introduction Générale
INTRODUCTION GENERALE
L'eau est le principal constituant des êtres vivants et l'élément indispensable à toute
forme de vie. Sa disponibilité ainsi que son abondance jouent un rôle fondamental dans le
développement et l'évolution des sociétés. Bien que l’eau soit l’une des substances les plus
présentes sur Terre, elle n’est constituée qu’à hauteur de 2,53% d’eau douce dont les deux
tiers sont immobilisés dans les glaciers, le reste étant constitué essentiellement d’eau de mer.
Si par le passé, la consommation de l’eau était relativement faible comparativement
aux ressources naturelles qui paraissaient inépuisables dans différentes régions du monde, les
modes de vie modernes ont complètement bouleversé cette situation. Les conditions socio-
économiques de l'utilisation de l'eau ont notablement changé depuis le début du siècle sous
l'effet de l'évolution rapide de la démographie, de l'amélioration continue des conditions de
vie des populations, de l'urbanisation accélérée, de l'introduction de l'irrigation intensive et du
développement de l'industrie. Cette évolution socio-économique rapide a entrainé une
pression croissante sur les ressources en eau, et l’apparition de disparités régionales et de
problèmes aigus de pollution.
Au Maroc, avec près de 90%, l’irrigation est de loin le principal secteur consommateur
d’eau, le reste est utilisé pour l’approvisionnement des populations en eau potable et pour le
secteur industriel. L’industrie, tous secteurs confondus, consomme plus de 1,088 milliards de
m3 d’eau dont 81% constitués par l’eau de mer, 14% provient des eaux superficielles, 4% de
l’eau potable et 1% des eaux souterraines (MINENV, 2002). Les industries agro-alimentaires
rejettent près de 22 millions de m3 d’eaux résiduaires, constituant 90% de l’utilisation d’eau
de ce secteur (MINENV, 2002).
Du fait de la croissance de la demande en eau et de la rareté des ressources, le
traitement et la réutilisation des eaux usées deviennent une nécessité stratégique pour le
Maroc. Pour cela, la réutilisation des eaux usées au Maroc – qui représentent un volume
d’environ 400 106 m3 (MINENV, 2002) contribuerait significativement à l’allègement de la
pénurie en cette ressource et poserait les bases d’un développement durable préservant nos
ressources naturelles en cette substance stratégique.
Au Maroc, comme partout dans tout le bassin Méditerranéen, l’industrie oléicole
constitue une activité économique très importante fournissant de l’emploi et des revenus
d’exportation d’huile d’olive et d’olives de table. Cependant, l’extraction d’huile d’olive
génère jusqu’à une tonne d’effluents liquides par tonne d’olives traitées. Ces eaux usées
appelés margines sont constituées des eaux de végétation et des eaux ajoutées lors du procédé
1
d’extraction de l’huile. La totalité des effluents générés par cette industrie dans le bassin
méditerranéen est estimée à environ 30 millions m3 annuellement dont environ 500 000
tonnes produites au Maroc. Les margines sont dans la plupart des cas déversées sans aucun
traitement dans le milieu naturel, soit directement soit à travers le réseau d’égouts public. Ces
effluents sont responsables de sérieux problèmes de pollution à savoir l’acidification du
milieu, l’émission des odeurs nauséabondes, la destruction de la microflore bactérienne du
sol, le déséquilibre de la flore tellurique, la pollution des oueds et barrages, le déséquilibre des
écosystèmes aquatiques, …etc.
Le traitement biologique, technique largement appliquée pour la dépollution des eaux
usées domestiques, ne permet pas de traiter tous les types de contaminants, en particulier ceux
des eaux usées industrielles qui contiennent pour la plupart des composés organiques non
biodégradables et/ou bactéricides comme c’est le cas pour les margines. L’élimination de ces
polluants toxiques est nécessaire avant tout recyclage ou traitement dans une station
d’épuration. De nombreux procédés chimiques ou encore physiques sont en application. La
recherche de méthodes alternatives ou complémentaires pour le traitement des eaux usées a
conduit depuis quelques années à l’émergence de nouvelles technologies. Parmi ces
technologies, les procédés membranaires sont en plein essor. Il s’agit de technologies basées
sur la séparation d’espèces polluantes par des membranes de différentes natures et tailles des
pores qui vont permettre un transfert sélectif de masse sous un gradient de pression
(ultrafiltration, nanofiltration, etc.), de température (distillation membranaire) ou de
concentration (distillation osmotique). Les avantages de ces procédés, comparés aux
techniques conventionnelles, sont nombreux. Dans la plupart des cas:
- le procédé est réalisé à température ambiante ou légèrement élevée, ce qui permet la
conservation des produits thermosensibles ;
- le fractionnement se fait sans changement de phase;
- les installations sont modulables et peuvent fonctionner en continu ;
- les installations sont compactes.
Afin de développer un procédé intégré de traitement des margines produisant une eau
dépolluée tout en en récupérant des composés à haute valeur ajoutée, le présent travail s’est
fixé pour objectifs :
- La mise au point d’une technique de dépollution des margines et de concentration de
leur contenu phénolique afin de minimiser les coûts d’une extraction subséquente. La
distillation membranaire (thermique et osmotique) et l’ultrafiltration assistée par
2
micelles sont appliquées aux margines après optimisation de l’effet des conditions
opératoires sur l’efficacité du traitement;
- Le développement d’une technique alternative d’extraction des polyphénols des
margines en employant des tensioactifs non-toxiques et biodégradables;
- L‘évaluation du pouvoir antioxydant des polyphénols des margines et l’étude de leur
profil phénolique.
Le présent manuscrit s’articule autour de cinq grands chapitres : le premier chapitre est
une synthèse bibliographique détaillée prétendant relater la majorité des informations
récemment publiées concernant le traitement et la valorisation des effluents de l’industrie de
production d’huile d’olive, communément connus sous le nom de « margines ». Le profil
phénolique des margines a été aussi présenté en rapportant les propriétés biologiques de leurs
principaux composés phénoliques;
Dans le 2ème chapitre nous présentons une étude du profil phénolique des margines en
association avec son activité antioxydante. Les résultats de différents tests d’évaluation de
l’activité antioxydante avec différents mécanismes d’action y sont exposés et commentés.
Dans le 3ème chapitre, nous présentons une méthode de traitement et de concentration
des margines combinant une ultrafiltration classique à la solubilisation micellaire des
composés organiques, pour la première fois appliquée pour le traitement d’un tel effluent
chargé en matières organiques. La séparation des composés phénoliques monocycliques –
naturellement présents dans les margines – dans des solutions modèles est aussi présentée en
démontrant la possibilité de retenir et de concentrer des composés à haute valeur ajoutée par
l’ultrafiltration assistée par micelles. Ensuite, le traitement des margines et la concentration de
leur contenu phénolique par ultrafiltration assistée par micelles d’un agent tensioactif
anionique (SDS) est présentée.
Dans le 4ème chapitre, d’autres procédés de séparation membranaires sont présentés à
savoir la distillation membranaire et la distillation osmotique. Ces deux dernières techniques
sont des procédés qui ont comme force motrice de transfert de masse, respectivement, la
température et la force osmotique. Nous présentons aussi l’effet des conditions opératoires
(température, nature de membrane, taille de pores des membranes, etc.) sur la perméabilité et
la sélectivité des membranes.
Le 5ème chapitre concerne l’application d’un procédé innovant pour l’extraction des
polyphénols à partir des margines prétraitées par ultrafiltration. Ce procédé d’extraction est
connue sous l’appellation de « Extraction par Point de Trouble » ou encore « Extraction à
3
Deux Phases Aqueuses ». Il s’agit d’une technique simple et propre, se basant sur les
propriétés de solubilisation micellaire des tensioactifs non-ioniques et de leur habilité à
précipiter au dessus d’une température dite point de trouble en formant deux phases : une
phase diluée et une phase concentrée (coacervat). Ces propriétés permettent l’extraction des
polyphénols des margines, ce qui pourra constituer une alternative à l’extraction par solvants
(Extraction Liquide-Liquide) des polyphénols.
4
CHAPITRE I
REVUE BIBLIOGRAPHIQUE
Chapitre 1 Revue Bibliographique
1. Introduction
Les margines ou eaux résiduaires des industries d’extraction de l’huile d’olive
comprennent les eaux de végétation constitutives des olives et les eaux additionnées lors des
procédés d’extraction de l’huile. Les volumes de ces eaux peuvent représenter jusqu’à 1,5 fois
la masse des olives triturées. La production marocaine moyenne des margines s’élève ces
dernières années à plus de 600 000 tonnes.
Durant ces dernières décennies, le Maroc a adopté des stratégies nationales (Plan
Oléicole National, Plan Maroc Vert) visant le développement du secteur agricole en général et
du secteur oléicole en particulier. L’accroissement visé de la production d’huile d’olive sera
inévitablement – sauf dans le cas d’un changement dans le procédé de trituration -
accompagné d’une augmentation des volumes des margines produites. Les systèmes
d’extraction de l’huile d’olive sont essentiellement de trois types :
- Les unités de trituration équipées de presses (Fig. 1a), selon la pression exercée, on
distingue ainsi : Les unités traditionnelles ou ‘‘maâsras’’ dont la pression est de l’ordre de 100
kg/cm², les unités semi-modernes dont la pression est aux environs de 200 kg/cm² et les unités
modernes équipées en super-presses pouvant développer une pression de 400 kg/cm².
- Les unités de trituration équipées d’une chaîne continue à trois phases avec deux
centrifugeuses, la première pour séparer les grignons et le fluide (huiles et margines) et la
deuxième pour séparer les huiles des margines (Fig. 1b).
- Les unités de trituration équipées d’une chaîne continue à deux phases permettant la
séparation de l’huile des grignons humidifiés (alperujo) par les eaux de végétation provenant
de l’olive (Fig. 1c).
Selon un rapport de développement de la région du moyen orient et de l’Afrique Nord
(MENA), le Maroc est classé parmi les pays qui connaissent un stress hydrique, ne pouvant
offrir annuellement plus de 1000 m3 d’eau par habitant (World Bank, 2007). L’exploitation
d’autres ressources d’eau non conventionnelles telles les eaux de mer, les eaux saumâtres et
les eaux usées deviendra bientôt une nécessité de premier ordre. Dans cette perspective, les
margines une fois traitées doivent être recyclées soit en agriculture ou en industrie. Elles
peuvent surtout, comme nous le présentons dans les sections suivantes d’une manière
détaillée, constituer une source de composés biologiquement actifs à haute valeur ajoutée.
5
Figure 1 : Schéma des différents procédés de production d’huile d’olive, (a) procédé à presses, (b) procédé à
trois phases, (c) procédé à deux phases.
2. Caractéristiques physico-chimiques des margines

Les margines sont caractérisées par une forte charge organique incluant différentes
substances organiques telles que les sucres, tannins, composés phénoliques, acides organiques
et lipides (Tableau 1). Ces effluents présentent, en autres, une couleur noire foncée due aux
lignines polymérisés avec les composés phénoliques, une acidité moyenne (pH d’environ 5),
et une conductivité électrique élevée (Tableau 1). Les margines sont très riches en composés
phénoliques avec des concentrations pouvant dépasser 10 g/l (Tableau 1). A coté des
composés phénoliques, les margines contiennent d’autres composés intéressants tels que les
sucres, protéines, et le phosphore, etc. (Tableau 1). Il a été aussi rapporté que les margines
contiennent des fibres alimentaires solubles spécialement des pectines d’une excellente
capacité gélifiante (Galanakis et al., 2010a, 2010b).
Le contenu inorganique des margines est présenté dans le Tableau 2. Les margines
contiennent des ions métalliques importants à savoir le magnésium et le calcium rapportés
comme minimisant les risques des maladies cardiovasculaire (Anne, 2011). D’autres métaux,
spécialement les métaux lourds, tels que le plomb (Pb) et le cadmium (Cd), sont très connus
6
pour leur toxicité. La contamination par ces métaux peut avoir lieu aussi bien lors de la
production des olives ou durant la récolte ou la transformation des olives.
La composition des margines varie largement en fonction de plusieurs paramètres
principalement la variété d’olive, la date de récolte, les conditions climatiques, et la méthode
d’extraction de l’huile d’olive (Kissi, 2002). Les caractéristiques de la matière première et les
techniques d’extraction ont un effet considérable sur la composition en substances
phénoliques. Cette variabilité a été souvent mise en avant pour critiquer toute possibilité
d’utilisation de ces extraits phénoliques naturels dans des procédés de fabrication industriels
qui préférerait des antioxydants synthétiques aux propriétés standardisées. A notre sens, les
scénarios de commercialisation vont dépendre de l’utilisation prévue, soit en tant que
composés purs, ou en mélange.
L’utilisation des extraits des margines dans l’alimentation humaine sera certainement
gouvernée par la qualité et la sécurité alimentaire de ces extraits. Certaines précautions
devraient être considérées durant la production, la récolte, le transport et le stockage des
olives, et aussi pendant l’extraction de l’huile. L’utilisation des pesticides organo-
phosphoriques devrait être évitée d’autant plus que des teneurs élevées en plomb dans les
fruits d’olive étaient corrélées avec l’utilisation de ce genre de pesticides (Dugo et al., 2002).
En outre, le transport et le stockage des olives avant trituration doivent être contrôlés pour
minimiser la contamination par des métaux. L’emploi des cagettes en plastique pour le
stockage doit aussi prendre en considération une éventuelle contamination des olives par les
phthalates qui migrent à la surface des plastiques (Dugo et al., 2011). De plus, les eaux de
rinçage des olives ne doivent pas être mélangées avec les margines pour assurer une bonne
qualité des extraits phénoliques.
7
Tableau 1 : Composition physico-chimique des margines (issues du procédé de trituration à trois phases) selon différents auteurs :
Steegmans Andreozzi Paredes Vlyssides Ben-Sassi Paraskeva Asses Karpouzas El-Abbassi Intervalle
Paramètre Unité
(1992) et al. (1998) et al. (1999) et al. (2004) et al. (2006) et al. (2007) et al. (2009) et al. (2010) et al. (2011) des valeurs
pH - 5.3 5.1 5.17 4.8 4.85 5.2 5.1 5.7 5.3 4.7-5.7
Conductivité mS/cm - - 5.50 12 13-41 5 - 11 24 5-41
DCO g/L 108.6 121.8 - 93 97-190 16.5 95 48 156 16.5-190
DBO5 g/L 41.3 - - 46 - - - - - 41.3-46
Résidu sec g/L 19.2 102.5 71.9 63.5 - 11.5 84.2 - 90 11.5-102.5
Matière organique g/L 16.7 81.6 46.5 - - - - 26 - 16.7-81.6
Lipides g/L 2.33 9.8 3.1 1.64 - - - - 7 1.64-9.8
Polyphénols g/L 0.002 6.2 1.6 10.7 7-11.5 0.8 4.82 8.8 4.1 0.002-11.5
sucres g/L - - 8.79 - - 1.3 - - 4.3 1.3-8.79
Acides organiques g/L 0.78 1 - - - - - - - 0.78-1
Azote total g/L 0.6 0.95 0.63 0.76 - 0.06-0.3 - 0.9 - 0.06-0.95
Tableau 2: Composition minérale des margines
Paraskeva Mahmoud Karpouzas Moraetis Danellakis Piotrowska Intervalle des

Elément Unité et al. (2011) et al. (2011)
et al. (2007) et al. (2010) et al. (2010) et al. (2011) valeurs
Pb µg/l - - - 6.7 10 - 6.7-10
Cd µg/l - - - 0.03 1 - 0.03-10
Fe mg/l 0.45-0.6 - 65 - 8.88 20 0.45-20
Zn mg/l 1.7-4 - 3.4 2.94 4.98 - 1.7-4.98
Cu mg/l 0.49-0.84 - 2.4 - 2.96 - 0.49-2.96
Mn mg/l 0.46-1.17 - 0.9 1.61 2.7 20 0.46-20
Mg g/l 0.06-0.09 0.17 0.12 0.11 0.11 0.03 0.03-0.17
Ca g/l 0.05-0.08 0.14 1.1 0.15 0.29 0.03 0.03-0.29
K g/l - 1.05 6.1 4.22 0.73 3.47 0.73-6.1
Cl g/l - 0.76 - - - 1 0.76-1
Na g/l 0.03 0.13 0.07 - 0.15 0.05 0.03-0.13
8
Chapitre 1 Revue bibliographique
3. Les problèmes environnementaux engendrés par les margines

Au Maroc, mais également dans d’autres pays oléicoles, les margines sont dans la
plupart des cas déversées sans aucun traitement dans le milieu naturel, soit directement soit à
travers le réseau d’égouts public. Ces effluents sont responsables de sérieux problèmes de
pollution (Zenjari, 2002 ; El Hajjouji, 2007):
- Acidification du milieu ; odeurs nauséabondes, coloration foncée (Fig. 2) ;
- Destruction de la microflore bactérienne du sol ;
- Déséquilibre de la flore tellurique ;
- Salinisation des sols ;
- Pollution des oueds et barrages et déséquilibre des écosystèmes aquatiques;
- Pollution de la nappe souterraine ;
- Forte agressivité, vis-à-vis des matériaux constituant les canalisations ;
- Réduction du débit et parfois bouchage des canalisations par le dépôt des matières en
suspension ;
- Perturbations des stations de traitement par voies biologiques.
Les caractéristiques des margines présentées au tableau 1 leur confèrent une toxicité
élevée contre les bactéries (Capasso et al., 1995 ; Ramos-Cormenzana et al., 1996), les
mycètes (Fodale et al., 1999), les algues (DellaGreca et al., 2001), les plantes (Capasso et al.,
1992 ; Casa et al., 2003), les insectes (Capasso et al., 1994), et contre même les animaux
(Niaounakis et Halvadakis, 2004) et les cellules humaines (Capasso et al., 1995). Cependant,
les extraits fractionnés des margines et les polyphénols isolés démontrent une toxicité
sélective ou minimale (Capasso et al., 1995).
Figure 2: Au Maroc, la méthode principale de gestion des margines est de les stocker dans des bassins
d’évaporation ou de filtration sur sable (gauche) mais dans la plupart des cas les margines sont jetées dans le
milieu récepteur sans aucun traitement préalable (droite).
9
4. Les composés phénoliques

4.1. Nature et diversité
Les composes phénoliques sont des métabolites secondaires, avec une diversité
structurelle et une large distribution phylogénétique (Harborne, 1989). Plusieurs milliers de
composés phénoliques on été caractérisés jusqu’à présent chez les végétaux. Bien qu’étant
très diversifiés, ils ont tous en commun la présence d’un ou de plusieurs cycles benzéniques
portant une ou plusieurs fonctions hydroxyles.
Les composés phénoliques peuvent être regroupés en différentes classes (Tableau 3)
qui se différencient d’abord par la complexité du squelette de base (allant d’un simple C6 à
des formes très polymérisées), ensuite par le degré de modification de ce squelette (degré
d’oxydation, d’hydroxylation, de méthylation…), enfin par les liaisons possibles de ces
molécules de base avec d’autres molécules (glucides, lipides, protéines, autres métabolites
secondaires pouvant être ou non des composés phénoliques…).
Tableau 3: Les différentes classes des composés phénoliques

Squelette
Classe Exemple Origine (exemple)
carboné
C6 Phénols simples Catéchol
C6-C1 Acide hydroxybenzoïques p-hydroxybenzoïque Epices, Fraise
C6-C3 Acide hydroxycinnamiques Acides caféique, Férulique Pomme, Olive
Coumarines Scopolétine, esculétine Citrus
C6-C4 Naphtoquinones Juglone Noix
C6-C2-C6 Stibènes Resvératrol Vigne
C6-C3-C6 Flavonoïdes
- Flavonols Kaempférol, Quercétine Fruits, légumes
- Anthocyanes Cyanidine, pélargonidine Fruits rouges
- Flavanols Catéchine, épicatéchine Pomme, raison
- Flavanones Naringénine Citrus
(C6-C3)2 Lignanes Pinorésinol Pin
(C6-C3)n Lignines Bois, noyau des fruits
(C15)n Tannins Olive, Raisin rouge
Les margines peuvent contenir plus de 30 composés phénoliques (Tuck et al., 2002;
Paraskeva et al., 2007). Les principaux composés phénoliques des margines sont rapportés
dans le tableau 4. Les classes les plus importantes des polyphénols des margines sont les
acides phénoliques, les alcools phénoliques, les flavonoïdes et les sécoiridoïdes (Macheix et
al., 1990; Ryan & Robards, 1998; Soler-Rivas et al., 2000) (Tableau 3).
Les alcools phénoliques des margines sont le 3,4-dihydroxyphenyl éthanol
(hydroxytyrosol) et le p-hydroxyphenyl éthanol (tyrosol). Les flavonoïdes des margines les
plus rapportés sont le lutéoléine 7-Oglucoside, la rutine et l’apigénine 7-O-glucoside, et les
10
anthocyanines, cyanidine 3-O-glucoside et cyanidine 3-Orutinoside. L’oleuropéine et le

ligustroside sont les principaux secoiridoïdes des margines, ils proviennent de la pulpe des
olives. Certains dérivés de l’oleuropéine ont été également rapportés, tels le
démethyloleuropeine, l’oleuropéine aglycone et l’acide élénolique (Amiot et al., 1989; Esti et
al., 1998; Romani et al., 1999; Soler-Rivas et al., 2000). Le verbascoside est le principal
dérivé de l’acide hydroxycinnamique présent dans les margines (Romani et al., 1999; Ryan &
Robards, 1998; Servili et al., 1999).
Tableau 4 : Les composés phénoliques majeurs présents dans les margines
Composé Structure Références
Obied et al. 2007a

Hydroxytyrosol glucoside
Ryan & Robards, 1998 ;

Hydroxytyrosol Romero et al., 2002 ;
Schaffer et al., 2007

Tyrosol Romero et al., 2002 ;
Tuck et al., 2002 :
Obied et al., 2007a ;

Oleuropéine Obied et al., 2007b ;
Tuck et al., 2002
Obied et al., 2007a

Acide caféique

Romani et al., 1999 ;
Verbascoside
Servili et al., 1999
Lutéoléine Obied et al., 2007a
Obied et al., 2007a

Quercétine
Obied et al., 2007a

Apigénine
11

Esti et al., 1998 ;
Rutine
Ryan & Robards, 1998
Obied et al., 2007a

Alcool homovanillique
Obied et al., 2007a

Acide p-coumarique
Acide élénolique à cycle Tuck et al., 2002

ouvert

Acide cinnamique Ryan & Robards, 1998 ;
Servili et al., 1999
3,4-Dihydroxyphenyl
glycol Rodriguez et al., 2009
4.2. Activités antioxydantes et bienfaits des polyphénols des margines

Les Espèces Réactives de l'Oxygène (Reactive Oxygen Species ou ROS) endogènes
ou exogènes sont une des causes potentielles de diverses maladies humaines, telles que les
maladies coronaires, le diabète et le cancer (Willcox et al., 2004). Les concentrations
intracellulaires des ROS sont généralement régulées par les systèmes de défense antioxydants
des cellules. Toutefois, la production de grandes quantités de ROS peut déborder les systèmes
de défense antioxydant intracellulaires et provoquer l'activation des neutrophiles, la
peroxydation des lipides, la modification des protéines, ou même des cassures d’ADN. In
vitro, il a été démontré que les polyphénols, peuvent intervenir dans la récupération des ROS
telles le superoxyde, le peroxyde d'hydrogène (Pannala et al., 1997) ou l’acide hypochloreux
(Binsack et al., 2001). Les polyphénols peuvent agir comme un tampon et capter les
électrons des ROS, les rendant moins actives (Cotelle et al., 1996). En outre, certains
composés phénoliques tel la quercétine peuvent agir comme des chélates de métaux (ex. le
fer) qui peuvent être impliqués dans la formation de radicaux libres (Korkina et Afanas’ev,
1997 ; Nijveldt et al., 2001). Les polyphénols peuvent aussi interférer avec les systèmes
cellulaires de désintoxication tels que le superoxyde dismutase, les catalases, peroxydases ou
12
le glutathion (Sies 1991 ; Krinsky 1992). Les composés phénoliques peuvent inhiber ainsi les
enzymes génératrices des ROS comme la xanthine oxydase et le nicotinamide adénine
dinucléotide phosphate oxydase (Sies 1991 ; Krinsky 1992).
Des travaux de recherches récents se sont intéressés aux propriétés antioxydantes des
composés phénoliques de l’huile d’olive et des margines (Redrigez et al., 2009).
Généralement, les composés qui partagent une structure orthodiphénolique (catécholique)
possèdent une activité antioxydante. Dans les margines, plusieurs constituants phénoliques
possèdent cette structure, à savoir l’hydroxytyrosol et l’oleuropéine qui sont parmi les
constituants phénoliques majeurs des margines et de l’huile d’olive (Tuck et al. 2002). Une
évaluation in vitro des activités antioxydantes de l'huile d'olive et de ses constituants séparés a
été réalisée dans de nombreux travaux. Le tableau ci-après (Tableau 5) résume les principales
activités biologiques des quatre composés phénoliques majeurs des margines.
4.2.1. Intérêts agroalimentaires

En agriculture, les propriétés précitées des composés phénoliques leur attribuent un
effet pesticide et fongicide contre les ravageurs et les parasites. Obied et al. 2007b a prouvé
que les margines ont un effet molluscicide en étudiant l’effet des polyphénols sur Isidorella
newcombi, l’un des plus importants invertébrés parasites du riz irrigué (Stevens et al., 1996).
Jurberg et al. 1995 ont aussi démontré que les polyphénols ont un effet molluscicide vis-à-vis
du vecteur de la schistosomiase. Et grâce à leurs propriétés antioxydantes, les polyphénols
peuvent limiter l’oxydation des aliments et préserver l’aspect attractif des fruits et des
légumes. L’hydroxytyrosol l’un des composés phénoliques majeurs des margines est
actuellement reconnu par “European Olive Oil Medical Library” comme antioxydant naturel,
et peut être utilisé légalement en tant que complément alimentaire dans une large gamme de
produits tels que les produits laitiers, huiles et graisses, chocolats, boissons, etc.
13
Tableau 5 : Principales activités biologiques des composés phénoliques majeurs des margines
Composé
Bioactivité Remarques (référence)
phénolique
Hydroxytyrosol Antioxydant Isolé à partir des margines, antioxydant puissant dans le plasma du
rat (Visioli et al., 2001)
Antioxydant dans le foie du rat (Casalino et al., 2002)
Protège les érythrocytes humains contre les dommages oxydatifs
(Manna et al., 1999)
Cardioprotectif et Effets multiples (Visioli et al., 1997, Visioli et al., 2002)
Antiathérogénique Chasse et réduit la production des anions superoxydes dans les
cellules promonocytes humaines (Leger et al., 2000)
Chemopréventif Inhibe le dommage de l’ADN péroxynitrite-dépendant (Deiana et
al., 1999)
Induit l’apoptosie cytochrome C-dépendante (Della-Ragione et al.,
2000)
Inhibe la prolifération des cellules des tumeurs (Fabiani et al., 2002)
Antimicrobien Agit contre les microorganismes pathogènes chez l’homme
(Bisignano et al., 1999)
En agriculture, agit contre les bactéries phytopathogènes (Capasso
et al., 1995)
Anti-inflammatoire Inhibe la production des leucocytes leucotriene B4 (Petroni et al.,
1997)
Oleuropéine Antioxydant Extrait à partir de la pâte d’olive (Amro et al., 2002)

Activité in vivo et in vitro (Speroni et al., 1998)
Activité anti-radicaux libres dans des biomembranes (Saija et al.,
1998)
Antiathérogénique Inhibe l’oxydation des LDL (Petroni et al., 1995)
et Améliore la production de l’oxyde nitrique (Visioli et al., 1998)
cardioprotectif
Hypoglycémiant Chez le rat (normal et diabétique) (Trovato et al., 1993)
Antihypertensif Vasodilatateur (Duarte et al., 1993)
Antimicrobien et Antibactérien (Fleming et al., 1973)
antivirale Antimycoplasme (Furneri et al., 2002)
Effets antifongiques (Aziz et al., 1998)
Activité anti-VIH de l’extrait de feuilles d’olive (Lee-Huang et al.,
2003)
Anti-inflammatoire Inhibe le 5 lipoxygénase (Mulinacci et al., 2001)
Cytostatique Agit contre les cellules du McCoy (Saenz et al., 1998)
Molluscicide Agit contre le mollusque sud-américain Biomphalaria glabratus
(Kubo et Matsumoto 1984)
Activité stimulation des thyroïdes (Al-Qarawi et al., 2002); modulation de
endocrinienne l’activité hypolipidémiante -hypoglycémiante
Régulation des Activation de la pepsine et inhibition de trypsine, lipase, glycérol
enzymes déshydrogénase, glycérol-3-phosphate déshydrogénase, et
glycérokinase (Polzonetti et al., 2004)
Oleuropéine Agent Agent antimicrobien dans les maladies communes de l’olivier
antimicrobien (Amiot et al., 1989)
aglycone Antioxydant Activité antioxydante plus importante comparée à celle de
l’oleuropéine (Briante et al., 2001)
Tyrosol Antioxydant protection contre les LDL oxydés (Giovannini et al., 1999)
Réduction de l’oxydation de l’ADN à des concentrations élevées
(Quiles et al., 2002)
Anti-inflammatoire inhibition du 5-lipoxygénase (Mulinacci et al., 2001)
Antiathérogénique Pour les humains (Marrugat et al., 2004)
Cardioactif Antiarythmique et cardioprotectif (Soler-Rivas et al., 2000)
14
4.2.2. Intérêts pharmaceutiques

De nombreuses études ont prouvé que les polyphénols sont des inhibiteurs efficaces
d'oxydation in vitro des lipoprotéines LDL (Visioli et al., 1994, 1995). L'oxydation in vivo du
LDL est liée à la formation des plaques athérosclérotiques impliquées dans développement
des maladies coronaires ou athérosclérose.
Les composés phénoliques bloquent également les processus qui contribuent à la
pathogenèse de l’athérosclérose ou du cancer (Manna et al., 1997). En particulier
l’hydroxytyrosol, un des constituants phénoliques majeurs des margines, est capable de
réduire le risque des maladies coronaires (Salami et al., 1995). L’hydroxytyrosol inhibe la
lipoxygénase de l’acide arachidonique (Petroni et al, 1994, 1995, 1997), il peut pénétrer la
cellule en traversant la membrane plasmique et peut empêcher la production de la leucotriène
B4 produite à partir d’un acide arachidonique endogène (Kohyama et al., 1997). La
leucotriène est un médiateur de l’inflammation vraisemblablement impliqué dans des
maladies inflammatoires comme certaines formes d'arthrites.
Les polyphénols sont également rapportés actifs contre de nombreux cancers (colon,
estomac, foie, sein, prostate, poumons, peau, vessie,... etc.) à tous les stades de cancérogénèse.
Au stade d'initiation, ils agissent comme agent bloquant en empêchant l'activation de pro-
carcinogènes. Au stade de promotion et de progression, ils agissent comme agent suppresseur
de tumeurs. Les mécanismes impliqués peuvent être très variés: prévention du stress oxydant,
inhibition du métabolisme de l'acide arachidonique et des réactions inflammatoires associées,
inhibition de la protéine kinase C et de la prolifération cellulaire, induction de l'apoptose et
l'inhibition de l'angiogenèse.
Les polyphénols pourraient aussi exercer des effets protecteurs contre les maladies
hormono-dépendantes telle que l'ostéoporose en modulant la réponse aux œstrogènes
endogènes (Scalbert et Williamson, 2000). Bisignano et al. (1999) a examiné l’effet in vitro
de l'oleuropéine et de l’hydroxytyrosol sur plusieurs souches bactériennes agents causals des
infections intestinales ou respiratoires chez l'homme (Tableau 6). L’hydroxytyrosol a montré
une activité antibactérienne nettement supérieure à celle montré par l’oleuropéine.
Par ailleurs, des études réalisées sur des modèles animales ont montré que certains
extraits phénoliques pouvaient inhiber la promotion de tumeurs de la peau induites par le
diméthylbenzanthracène et le tétradécanoylphorbol acétate, chez la souris (Osakabe et al.,
2004).
15
Tableau 6: Concentrations inhibitrices minimales (en µg/ml) de l’hydroxytyrosol et de

l'oleuropéine vis-à-vis de certaines souches bactériennes (Tuck and Hayball, 2002)
Souche bactérienne Hydroxytyrosol oleuropéine

Hemophilus influenzae ATCC 9006 0,97 500
Moraxella catarrhalis ATTC 8176 1,92 >500
Salmonella typhi ATCC 6539 3,94 125
Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802 0,24 62,5
Staphylococcus aureus ATTC 25923 7,85 62,5
Hemophilus influenzae 0,96–15,60 >500
Moraxwlla catarrhalis 3,80–15,60 >500
Salmonella spp. 1,90–7,80 125–250
Vibrio parahaemolyticus 0,97 125
Vibrio alginolyticus 0,97–1,90 125
Vibrio cholerae 1,90 125
Staphylococcus aureus 3,9–31,25 62,5–125
4.2.3. Intérêts cosmétologiques

Les polyphénols luttent contre les radicaux libres responsables de 80 % du
vieillissement de la peau. Les polyphénols piègent les formes actives de l'oxygène et ont un
effet très bénéfique sur le collagène et l'élastine. Le resvératrol et ses dérivés sont employés
dans des compositions cosmétiques, comme agent d’éclaircissement de la peau et/ou agents
anti-tâches (Vercauteren et Castagnino, 2004). Il a également été démontré que des
oligomères d'épicatéchine peuvent protéger les cellules et les tissus cutanés contre les effets
des peroxynitrites qui sont des médiateurs de l'inflammation, jouant ainsi un rôle anti-
inflammatoire.
5. Principales méthodes de traitement et de valorisation des margines

Depuis plusieurs années, les margines ont été le principal polluant engendré par les
unités de trituration des olives. Pour cette raison, la gestion de ces effluents a été
extensivement étudiée. Certaines revues détaillées focalisant sur les méthodes de traitement et
de valorisation des margines ont été publiées durant la dernière décennie (Niaounakis and
Halvadakis, 2004; Azbar et al., 2004; Roig et al., 2006). A l’avènement au début des années
1990s, d’un nouveau procédé de trituration dit écologique ou à deux phases, un nouveau sous
16
produit apparaît. Ce dernier appelé « Alperujo », est constitué d’une pâte humide équivalent
au mélange des margines avec le grignon.
Plusieurs pays européens ont alloué des budgets énormes (Fig. 3) pour le financement
des projets portant sur le traitement, la réutilisation ou la valorisation des margines, ou bien
pour l’amélioration technique des procédés de trituration.
Figure 3 : Budgets alloués aux projets de recherches sur les margines en Europe. Les couleurs représentent les
pays où le projet est mené ou le pays du partenaire principal. Dans le cas où plusieurs projets sont menés durant
une même année, une ligne blanche sépare les budgets correspondants. Source: Service Communautaire
d'Information sur la Recherche et le Développement – UE (2009).
5.1. Application directe des margines brutes pour la fertilisation du sol

L’application directe des margines ou épandage des margines sur les sols a été l’une
des propositions les plus simples préconisée par certains chercheurs. Généralement, toute la
flore microbienne augmente avec l'humidification de sol. Les margines favorisent la rétention
d'eau du sol (Mekki et al. 2006). Toutefois, à moyen terme, elles entrainent de grandes
modifications des caractéristiques biologiques et physico-chimiques des sols. L’application
directe des margines sur le sol modifie sa texture ainsi que sa structure (Belaqziz, 2010).
L'acidité des margines est compensée par l'alcalinité de carbonate de sol. Les carbonates
deviennent des bicarbonates, se déplacent et s’accumulent dans des horizons plus profonds
(Sierra et al. 2001). Le chlorure du sodium et les sulfates des margines peuvent augmenter la
salinité du sol (Paredes et al., 1987 ; Sierra et al., 2001 ; Belaqziz, 2010). Pour des
applications à long terme, le calcium du sol est remplacé par les cations Na, K et Mg qui
pourraient dégrader la structure du sol et former des sols salins comme a été suggéré par
17
Zenjari et Nejmeddine (2001). La porosité serait réduite par l'effet combiné des solides
suspendus et des composés phénoliques fortement polymérisés tels que les tannins (Cox et al.,
1997). En conséquence, le sol devient imperméable aux échanges gazeux ce qui réduit la
prolifération de la flore aérobie.
5.2. Les traitements physicochimiques
Les traitements physicochimiques consistent à ajouter des substances chimiques
provoquant une coagulation, précipitation, ou destruction des composés organiques dissouts
ou en suspension. Tsonis et al. (1989) ont utilisé l’hydroxyde de calcium et le sulfate
d’aluminium pour réduire la Demande Chimique en Oxygène (DCO) de 20–30% des valeurs
initiales. D’autre part, Aktas et al. (2001) a proposé un prétraitement avec la chaux pour
réduire l’effet polluant des margines. Plusieurs chercheurs proposent une flocculation de la
matière organique des margines par différents poly-électrolytes. Ce procédé produirait une
eau utilisable en agriculture et une fraction solide ou boue des margines. Ces boues pourraient
être compostées en les mélangeant avec d’autres sous-produits (Negro and Solano, 1996;
Garcıa-Gomez et al., 2003).
Minh et al. (2007) rapportent la possibilité d’éliminer l’acide p-hydroxy-
phenylacétique et l’acide p-hydroxybenzoïque, deux polluants importants présents dans les
margines, par oxydation catalytique en utilisant un réacteur avec catalyseurs en platine et
ruthénium supportés sur des oxydes de titane et de zircon. L’utilisation des polymères de
polyacrylate de sodium pour dépolluer les margines a été rapportée par des études
relativement récentes (Davies et al., 2004). Cet adsorbant a été rapporté capable de retenir la
fraction phénolique sur la chaine polymérique, la toxicité des margines se trouve ainsi
considérablement réduite.
5.3. Les traitements biologiques
5.3.1. La transformation aérobie
Plusieurs auteurs ont montré la possibilité de traiter les margines microbiologiquement
et de produire des biopolymères tels le xanthane (Lopez et Ramos-Cormenzana, 1996), le
pullulane (Ramos-Cormenzana et al., 1995) et les polyhydroxyalcanoates (Gonzalez-Lopez et
al., 1995). Ces traitements se focalisent sur la dégradation des composés phénoliques, qui sont
le facteur principal responsable de la phytotoxicité des margines. Plusieurs microorganismes
ont été testés: des champignons : Pleurotus ostreatus, Phanerochaete chrysosporium et des
levures : Yarrowia Lipolytica, etc. (Tomati et al., 1991; Ramos-Cormenzana et al., 1996;
Scioli et Vollaro, 1997, Ben Sassi, 2007). L’utilisation des margines en tant que substrat pour
la croissance d’Azotobacter vinelandii et l’application d’effluents traités à des sols cultivés
18
comme fertilisant a été proposé par Ehaliotis et al. (1999) et Piperidou et al. (2000). Toutes
ces méthodes intéressantes d’un point de vue scientifique n’ont pas connues d’application à
grande échelle.
5.3.2. Le compostage
Le compostage est l’une des principales technologies utilisées pour le recyclage des
margines et des grignons et leur transformation en fertilisants (Ait Baddi, 2005). Les margines
sont absorbées dans un substrat solide (rejets lingocellulosiques) avant de procéder à leur
compostage. Tomati et al. (1995) a pu obtenir un fertilisant très humide et sans effets
phytotoxiques en compostant les margines avec la paille de blé. Aussi, Paredes et al. (2000) a
testé différents substrats pour le co-compostage des margines. Cegarra et al. (1996) ont testé
un compost issu des margines à l’horticulture et ont rapporté des rendements similaires et
parfois meilleurs à ceux obtenus avec des fertilisants minéraux. Tomati et al. (1996) ont
également observé une amélioration des productivités après addition du compost des
margines. Tomati et al. (1995) ont constaté une augmentation rapide des microorganismes,
une augmentation de la température, du pH et une diminution du carbone organique totale,
quand les margines sont compostés avec la paille du blé et l’urée. Par ailleurs, durant le
compostage des margines avec des déchets lignino–cellulosiques ou différents déchets
organiques riches en azote, Paredes et al. (2000) rapportent durant la phase bio-oxydative une
perte de l’azote par volatilisation sous forme NH3. En plus, une quantité substantielle de
nitrates NO3- a été enregistrée à la fin de la phase bio-oxydative du processus de compostage,
mais les valeurs maximales sont atteintes seulement après maturation (Paredes et al., 2000).
Pour des raisons de coûts, les margines sont le plus souvent simplement stockées dans
des bassins dans l’attente de leur évaporation naturelle. Les boues résultantes sont très
chargées en matières organiques et contiennent des quantités importantes en nutriments (N, P,
K, Ca, Mg et Fe) (Paredes et al., 1999). De ce fait, le traitement de ces boues par compostage
pour obtenir des fertilisants organiques est, en principe, très approprié. Lors du compostage,
les microorganismes dégradent en aérobie des composés organiques, telles les protéines, les
acides aminés et les peptides, pour produire le dioxyde du carbone, l’eau, les sels minéraux et
une matière organique très stable (Humic-like substances) (Senesi, 1989).
5.3.3. La digestion anaérobie

Outre le traitement des effluents, l’intérêt principal de la digestion anaérobie est la
production de l’énergie (biogaz) et l’utilisation subséquente des effluents à des fins
d’irrigation (Marques, 2001). La limitation majeure de ce traitement est l’inhibition des
19
bactéries méthanogènes par les composés phénoliques et les acides organiques présents dans
les margines (Hamdi, 1996). Selon Azbar et al. (2004), les filtres anaérobies ou les digesteurs
UASB (upflow anaerobic sludge bed reactors) seraient appropriés pour traiter les margines,
après une étape de prétraitement éliminant certains composés indésirables dont les composés
phénoliques.
5.4. Autres méthodes de valorisation des margines
Plusieurs méthodes moins communes, néanmoins très intéressantes, ont été proposées
pour valoriser les margines. Parmi celles-ci on peut citer :
- L’utilisation des margines en tant que milieu adsorbant des métaux lourds pour le
traitement des solutions aqueuses (Pagnanelli et al., 2002).
- L’application des margines aux sols agricoles pour l’adsorption des herbicides (simazine)
et des insecticides (imidaclopride) afin de réduire leur biodégradation et retarder leur
dispersion, et minimiser ainsi le risque de contamination des eaux souterraines (Albarran
et al., 2004; Cox et al., 2004).
- La production de nouveaux matériaux pour la fabrication de contenants en mélangeant les
margines avec des polymères thermoplastiques (Siracusa et al., 2001).
- La préparation de charbon actif (Baccar et al., 2009).
- La production d’une farine à base des margines, d’un biopolymère de nature
polysaccharidique d’origine végétale ou animale, et d’un agent émulsifiant. Cette farine
peut être employé en tant qu’additif pour la fabrication de pain à goût d’olive (Pina et al.,
2006, Brevet n° EP 1 378 491 B1).
- La production de bio-hydrogène par fermentation des margines (Kapdam et Kargi, 2006;
Eroglu et al., 2006; Gelegenis et al., 2007; Azbar et al., 2008).
- L’obtention d’un produit liquide similaire au pétrole après pyrolyse des margines (Pütün
et al., 2005).
- L’utilisation du compost des margines en tant que biopesticides pour lutter contre les
champignons, les nématodes et les parasites des cultures (Cayuela et al., 2008).
- Incorporation des margines dans la préparation des briques de construction (De la casa et
al., 2009).
5.5. Extraction de composés à haute valeur ajoutée
La récupération ou l’extraction des composés bioactifs, et spécialement les composés
phénoliques à partir des margines reste un moyen de valorisation très prometteur du fait qu’il
présente un double avantage. Premièrement, la récupération des composés phénoliques des
margines constitue une dépollution de ces dernières par réduction ou/et élimination de leur
20
toxicité et deuxièmement la valeur ajoutée de ces composés phénoliques réputés bioactifs

justifiera et rendra probablement rentable tout investissement dans un tel procédé de
traitement.
Durant les deux dernières décennies, plusieurs études ont été publiées concernant
l’évaluation de la faisabilité technique et économique de la récupération des composés
phénoliques à partir des margines (Capasso et al., 1999 ; Fernandez-Bolanos et al., 2002 ;
Romero et al., 2002 ; Fki et al., 2005). Les principaux systèmes proposés sont: l’extraction
par solvants; la chromatographie sur résine; la concentration sélective par ultrafiltration
(Turano et al., 2002) et l’osmose inverse; l’extraction solide-liquide ou liquide-liquide et
l’extraction par fluide supercritique (Gonzalez-Munoz et al., 2003). Briante et al., (2004)
proposent un bioréacteur pour la production d’antioxydants hautement purifiés. D’autres
systèmes, plus simples et plus économiques, pour la purification des antioxydants des
margines ont été développés, mais sont tous sous protection par des brevets internationaux
(Fernandez-Bolanos et al., 2005).
6. Les procédés de séparation membranaires

6.1. Généralités
Une membrane est une barrière sélective de quelques centaines de nanomètres à
quelques millimètres d'épaisseur, qui sous l'effet d'une force de transfert, va permettre ou
interdire le passage de certains composants entre deux milieux qu'elle sépare. La sélectivité
correspond à l'ensemble des taux de perméabilité aux différentes substances contenues dans
une solution. La force de transfert résiderait dans un gradient de pression, de concentration,
d'activité, de potentiel électrique ou encore de température. De ce fait les membranes incluent
une grande variété de matériaux et de structures qui forment autant de possibilités de
configuration et de classification. Bien que la majorité des procédés membranaires soit
relativement anciens, l’intérêt des industriels et des scientifiques pour la distillation
membranaire et pour l’ultrafiltration assistée par micelles est récent, et ne cesse de croitre.
Plusieurs applications des procédés membranaires au traitement des margines ont été
proposées. Canepa et al. (1988) ont étudié une application combinée des procédés
membranaires et d’adsorption pour traiter les effluents issues des unités de trituration d’huile
d’olive. Leur procédé est constitué d’une ultrafiltration à travers des membranes en
polysulfone combinée à l’action des polymères absorbants et l’amide poly pipérazine. Une
réduction de DCO d’environ 99% a pu ainsi être obtenue (Canepa et al., 1988). Turano et al.,
(2002) ont développé un système de centrifugation et d’ultrafiltration dans le but d’une
21
réduction de la pollution causée par les margines et d’une séparation sélective de certains
composés utiles (acides gras, sucres, polyphénols, etc.). Ils ont préconisé une étape de
centrifugation afin d’éliminer la matière en suspension, et une phase de séparation sélective,
par ultrafiltration (UF) du surnageant des margines centrifugées. L’efficacité d’élimination de
la DOC était d’environ 90% (Turano et al., 2002).
Afin de concentrer les composés phénoliques des margines en vue d’une extraction
ultérieure, la distillation membranaire et l’ultrafiltration assistée par micelles sont deux
techniques prometteuses, et qui peuvent constituer une alternative aux méthodes classiques de
traitement des eaux usées.
6.2. La distillation membranaire

La distillation membranaire (DM) est un procédé de séparation dont le gradient de
tension de vapeur ou/et la pression osmotique sont les forces motrices du transport de la
vapeur d’eau à travers une membrane microporeuse et hydrophobe. La membrane est
maintenue entre deux solutions aqueuses. En raison de la nature hydrophobe de la membrane,
l’eau sous forme liquide ne peut pas traverser les pores secs de la membrane à moins que la
pression hydrostatique transmembranaire dépasse la pression d’entrée de l’eau liquide (LEPw),
caractéristique de chaque membrane. En dessous d’une telle différence de pression
hydrostatique, des interfaces liquide-vapeur sont formées à l’entrée de chaque pore de la
membrane.
Si la différence de pression de vapeur, force motrice de la DM, est maintenue entre les
deux faces de la membrane en appliquant une différence de température, les molécules d’eau
s’évaporent de l’interface de liquide chaud/membrane, traversent les pores sous forme de
vapeur et se condensent à l’interface membrane/liquide du perméat maintenu à une
température plus basse. Au cas où les solutions contiennent des composés non-volatiles, seule
la vapeur d’eau passe à travers les pores. Par conséquent, le coefficient de rétention des
solutés sera d’environ 100%.
Les procédés de distillation membranaire peuvent être classés en quatre
configurations (Fig. 4) (Khayet et Matsuura, 2011 ; Khayet, 2011):
- Distillation membranaire à contact direct des liquides chaud et froid de chaque côté de la
membrane (Khayet et al., 2010).
- Distillation membranaire à intervalle gazeux (air gap) interposé entre l’aval de la
membrane et la surface de condensation. Ce système a pour avantage de limiter les pertes
thermiques à travers de la membrane;
22
- Distillation membranaire à pression réduite (sous vide) appliquée du côté de condensation

pour favoriser le transfert transmembranaire ;
- Distillation membranaire à entraînement gazeux ou gaz vecteur à l’aval de la membrane
pour augmenter le flux ;
Plaque de
a) b) refroidissement c) d)
de perméat
Entraînement
membrane
membrane
membrane
membrane
Perméat
Aliment
Aliment
Aliment
Aliment
gazeux
Vide
Eau
Vapeur Vapeur
de perméat de perméat
Figure 4 : Différentes configurations de la distillation membranaire, a) distillation membranaire à contact

direct, b) distillation membranaire à intervalle gazeux, c) distillation membranaire sous vide et d) distillation
membranaire à entraînement gazeux.
Dans la littérature scientifique, la DM est moins représentée par rapport aux autres
procédés de séparation membranaires. En comparant la DM aux autres procédés de séparation
membranaires, elle se dénote par plusieurs avantages très importants :
- Une rétention pratiquement complète des solutés et des espèces non volatiles ;
- opération sous pression faible ; espace d’évaporation très réduit (pratiquement égale
à l’épaisseur de la membrane) comparativement à la distillation conventionnelle ;
- Température de fonctionnement relativement basse (significativement inférieure à
la température d’ébullition) ;
- Possibilité d’utiliser la température des eaux usées comme source de chaleur (sans
chauffage) ;
- Possibilité d’utiliser des sources d’énergie alternatives telles que l’énergie solaire
ou géothermique (Tomaszewska, 2000).
Lawson et Lloyd (1997), Khayet (2011), Khayet et Matsuura (2011), ont présenté une
revue complète sur la technologie de la distillation membranaire et ont décrit la terminologie
et les concepts qui y sont associés, y compris les phénomènes de transport, les propriétés des
23
membranes et la conception des modules de DM. Sirkar a rapporté en 1997 une revue des
technologies de séparation membranaire, y compris la DM et les technologies hybrides qui
intègrent la distillation membranaire.
La DM a été testée dans le domaine de dessalement d’eau salée, la purification de l'eau
et l'amélioration de la qualité de l'eau potable (Khayet et al., 2005 ; Khayet et Matsuura,
2011 ; Khayet et Cojocaru, 2012a, 2012b). Elle a été étudiée à l’échelle de laboratoire pour de
nombreuses applications (Calabrò et al., 1991; Gryta et al., 2006) qui ont montré leurs
potentialités et leur intérêt pour le traitement des eaux usées de différents secteurs industriels,
parmi lesquelles on peut citer :
- La concentration de solutions radioactives de l’industrie nucléaire et le traitement des
eaux résiduaires pour la production d’eau pure (Khayet et al., 2006) ;
- Le traitement des eaux usées de l’industrie de textile (Calabrò et al., 1991) ;
- La concentration d’acides (Tomaszewska, 2000; Tang et al., 2003) et le traitement de
solutions aqueuses contenant des métaux lourds (Manna et al., 2010) générées par
l’industrie chimique.
L’application de la DM pour le traitement et la concentration des margines n’a jamais
été testée auparavant. Une étude menée par Gryta et Karakulski (1999) sur la faisabilité de la
DM pour concentrer des solutions huileuses démontre l’inefficacité de la DM pour des
solutions concentrées en huile. L’installation utilisée était une distillation membranaire à
contact direct avec des membranes capillaires de polypropylène à une taille de pores comprise
entre 0,2 et 0,6 µm. Le flux de perméat rapporté par les auteurs est autour de 6,2 L/m².h lors
du traitement d’une émulsion eau/huile (500 ppm) à une différence de température de 60°C
(Aliment à 80°C).
L’intérêt pour la distillation membranaire ne cesse de s’accroitre, ainsi de nouveaux
articles apparaissent continuellement décrivant de nouvelles applications de la distillation
membranaire (Khayet et Matsuura, 2011). Cependant, les applications industrielles du
procédé restent encore marginales.
6.3. L’Ultrafiltration Assistée par Micelle

L'ultrafiltration Assistée par Micelles (UFAM) est une technique de séparation
membranaire dans laquelle un tensioactif est ajouté à la solution à traiter pour permettre la
rétention des petites molécules organiques. Au-dessus d’un certain niveau de concentration
appelé Concentration Micellaire Critique (CMC), les molécules du tensioactif forment des
24
micelles d’environ 50 à 150 molécules avec un noyau hydrophobe et une surface hydrophile
(kaya et al., 2006).
Les composés organiques pourraient se solubiliser ainsi dans le noyau et/ou s’adsorber sur la
surface des micelles (Fig. 5). La solution peut être ultrafiltrée par la suite à travers une
membrane appropriée, les micelles chargées se trouveront retenues et concentrées. Le perméat
se trouvera débarrassé des molécules organiques ou minérales (polluants) à éliminer. Un
procédé efficace d’UFAM exige un flux de perméat élevé et une rétention élevée de l’agent
tensioactif et du composé organique ou minéral visé.
Figure 5 : Les molécules du tensioactif forment des micelles et solubilisent les solutés et les empêchent de
traverser les pores de la membrane. Les solutés restent en équilibre entre la phase aqueuse et la pseudo-phase
crée par les micelles, on parle d’un coefficient de partage entre les deux phases. La concentration des
monomères du surfactant qui passe à travers la membrane reste au voisinage de la CMC.
L’ultrafiltration classique est inefficace pour le traitement des margines car elle laisse
passer les composés phénoliques considérés comme l’agent polluant des margines. Par contre,
l’UFAM a montré sa performance pour l’élimination des ions métalliques et de certains
composés organiques (Zeng et al., 2008; Häyrynen et al., 2012). La démonstration de la
faisabilité de l’UFAM pour le traitement des eaux usées chargées de matières organiques
comme le cas des margines est l’objet de notre travail.
6.3.1. Généralités sur les tensioactifs
Les tensioactifs (ou surfactants) sont classés historiquement selon la charge qu’ils
libèrent en solution aqueuse. Quatre grandes classes peuvent se distinguer (Tableau 7):
25
- Les tensioactifs cationiques : Ils possèdent un ou plusieurs groupements qui s’ionisent en

solution aqueuse donnant naissance à un cation organique tensioactif et à un anion de
faible masse moléculaire. En pratique, ces tensioactifs appartiennent soit à la famille des
amines grasses soit à celle des hétérocycles azotés. La propriété qui les distingue des
autres tensioactifs et qui assure leur développement, est leur caractère bactéricide. De
plus, ils ont la propriété physicochimique de s’adsorber très facilement sur les surfaces
chargées négativement, normalement hydrophiles, les rendant ainsi lipophiles.
- Les tensioactifs anioniques : Les tensioactifs anioniques s’ionisent en solution aqueuse
pour fournir un anion organique tensioactif et un cation généralement de faible masse
moléculaire, souvent un métal alcalin, un ammonium quaternaire ou une éthanolamine.
Cette classe de surfactants est la plus importante industriellement : elle représente environ
55 % de la production mondiale. Dans ce groupe on trouve les alkylbenzènesulfonates, les
alkylsulfates, les lignosulfonates, etc. Cependant, les représentants les plus anciennement
connus et utilisés appartiennent aux sels d’acides gras, plus couramment appelés savons.
Leur partie hydrophile est un groupement carboxylique (sous forme de sel de sodium ou
de potassium) tandis que leur partie lipophile est une chaîne alkyle linéaire, saturée ou
non, comportant entre 7 et 21 atomes de carbone.
- Les tensioactifs zwitterioniques: ces tensioactifs dits amphotères possèdent deux groupes
fonctionnels, l’un anionique et l’autre cationique, comme par exemple les alkyl
aminoacides et les bétaïnes. Selon les conditions du milieu, ils peuvent s’ioniser en
solution aqueuse en conférant au tensioactif un caractère anionique aux pH alcalins et un
caractère cationique aux pH acides. Au voisinage du point isoélectrique leurs solutions
aqueuses ne sont pas conductrices car ils possèdent les deux charges à la fois. De plus,
dans ces conditions, ils présentent la particularité d’avoir une solubilité et des propriétés
tensioactives minimales.
- Les tensioactifs non ioniques : Ces tensioactifs sont constitués de substances qui ne
s’ionisent pas en solution aqueuse : leur charge est donc a priori nulle. Cependant, ils ont
la particularité de posséder de longues chaînes polaires capables de former des liaisons
hydrogène avec des molécules d’eau. Ainsi, les molécules individuelles de tensioactif
("monomères") et/ou les micelles peuvent établir des liaisons hydrogène avec les cations
présents dans la solution aqueuse (H3O+, par exemple) et posséder une charge légèrement
positive.
Les tensioactifs ioniques (anioniques et cationiques) sont les plus employés en
ultrafiltration assistée par micelles et ils sont aussi utilisés en floculation micellaire
26
adsorptive. Par contre les tensioactifs non ioniques n’aboutissent pas à des niveaux de
rétention satisfaisants lorsqu’ils sont appliqués en ultrafiltration assistée par micelles (Puasa et
al., 2011).
Tableau 7 : Exemples de différents types de tensioactifs
Tensioactifs anioniques
Dodécylsulfate de sodium (SDS) Sulfonate de perfluorooctane (PFOS)
Tensioactifs cationiques
Bromure de cétyltriméthylammonium (CTAB) Chlorure de cétylpyridinium (CPC)
Tensioactifs zwitterioniques
3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-
Cocamidopropyl betaine (CAPB) ammonio]-1-propane-sulfonate
(CHAPS)
Tensioactifs non ioniques

Ether de tert-octylphenol de polyéthylène
Décyl glucoside
glycol (Triton X-100)
Les tensioactifs non ioniques ont été récemment employés avec succès pour la
concentration et l’extraction de certains composés en exploitant leur propriété de former deux
phases aqueuses sous l’effet de la température.
6.3.2. Traitement des effluents par ultrafiltration assistée par micelles (UFAM)
27
L’UFAM a été rapporté pour la séparation de différents composés organiques tels que
l’alpha-phénylglycine (Escudero et al., 2006), des colorants (Ahmad et al., 2006), de l’acide
tannique (Cañizares et al., 2006), des alcools aromatiques (Purkait et al., 2005a) et du bleu de
méthylène (Zaghbani et al., 2007). Aussi, l'efficacité de l’UFAM pour la récupération des
dérivés phénoliques à partir des solutions modèles a été évaluée aboutissant à des taux de
rétention élevés (Purkait et al., 2005b). Jusqu'à présent, l’UFAM a été utilisée pour séparer les
différents composés organiques et inorganiques, employant des agents tensioactifs divers
(Purkait et al., 2006). Cependant, les études portant sur le traitement des milieux complexes
tels que les margines sont très rares dans la littérature scientifique.
7. Extraction par point de trouble

Certains chercheurs ont rapporté qu’à travers toutes les procédures employées pour la
récupération des antioxydants naturels, l’extraction liquide-liquide par solvants représente la
méthode la plus simple et efficace et la plus largement utilisée pour la production à une
échelle pilote et aussi pour la production commerciale (Tura et Robards, 2002).
Durant les deux dernières décennies, de nouvelles techniques d’extraction ont été
développées mais restent encore moins connues telles que l’extraction à l’aide des tensioactifs
non ioniques tirant profit des nombreuses propriétés de ces substances (adsorption aux
interfaces, micellisation, solubilisation et point de trouble). Ces tensioactifs commencent à
être employés dans de nombreux procédés d’extraction liquide-liquide (microémulsions,
micelles inverses, membranes liquides et point de trouble) et apparentés (ultrafiltration
micellaire).
Considérant la diversité de composition des sources naturelles des polyphénols, ainsi
que la structure et la propriété physicochimique de ces composés, un protocole universel
d’extraction ne pourrait pas être concevable. Des procédés spécifiques doivent être
développés et optimisés pour chaque source phénolique. En plus, la co-extraction de certains
composés indésirables tels que les sucres, les lipides, les terpènes ou les pigments, doit être
évitée. Cette limitation doit être prise en considération durant toute optimisation de procédé
d’extraction. Plusieurs facteurs contribuent à l’efficacité de l’extraction par solvant, tel le type
du solvant, le pH, la température, le nombre des étapes, le ratio volumique, et la taille des
particules.
Le point de trouble est défini comme étant la température au-dessus de laquelle les
solutions aqueuses de tensioactifs non ioniques deviennent hétérogènes par formation de deux
phases aqueuses. La connaissance du point de trouble est très importante car les propriétés
28
tensioactives varient très rapidement au voisinage de cette température, en particulier avec la

diminution du pouvoir moussant et l’augmentation des pouvoirs détergent et solubilisant. Au-
dessus de la température de trouble apparaissent deux phases une phase concentrée appelée
« coacervat » renfermant un maximum de tensioactif et de solutés et une phase diluée (Fig. 6).
Figure 6: Schéma du principe de l’extraction par point de trouble, au-dessus d’une température appelée « point
de trouble » apparaissent deux phases, une phase concentrée appelée « coacervat » riche en tensioactif et
solutés et une phase diluée.
L’extraction par point de trouble est appelée aussi extraction par coacervat ou
extraction à deux phases aqueuses. Watanabe et Tanaka (1978) et Bordier (1981) sont les
premiers chercheurs à étudier en détail cette méthode d’extraction en vue de la concentration
de chélates métalliques et l’extraction de protéines hydrophobes et hydrophiles à l’aide d’un
octylphénol polyéthoxylé. Postérieurement, de nombreux auteurs (Frankewich et Hinze, 1994;
Carabias-Martinez et al., 2000 ; Kimchuwanit et al., 2000 ; Bai et al., 2001) ont mis en
évidence l'efficacité de l’extraction par point de trouble dans l'élimination de polluants
organiques. Les travaux de Trakultamupatam et al. (2004) rapportent l’extraction par
coacervat de contaminants aromatiques (toluène et éthylbenzène) à une échelle pilote. Ces
auteurs ont étudié, dans une colonne à disques rotatoires, les aspects hydrodynamiques,
cinétiques et de transfert de matière de cette opération en vue d’une application industrielle.
L’extraction à deux phases aqueuses se présente donc comme une alternative aux
systèmes conventionnels d’extraction liquide-liquide (Huddleston et al., 1999; Raghavarao et
al., 2003), car elle offre l’énorme avantage d’exclure totalement l’intervention de solvants
organiques souvent volatils, inflammables et toxiques.
En plus de leurs propriétés d’adsorption, de micellisation et de solubilisation, les
tensioactifs non ioniques sont aisément biodégradables et peu coûteux, cela permet de
s’orienter vers une technologie séparative "verte" et le développement de procédés non
polluants et peu coûteux en énergie.
29
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40
CHAPITRE II
ETUDE DE L’ACTIVITE ANTIOXYDANTE DES EXTRAITS

PHENOLIQUES DES MARGINES
Chapitre 2 Activités antioxydantes des margines
Profil phénolique et activités antioxydantes des margines

(Phenolic profile and antioxidant activities of olive mill wastewater)
Résumé:
Il est maintenant établi que les bienfaits associés à la consommation de l’huile d’olive sont
dus à la richesse de cette huile en composés phénoliques qui agissent comme des antioxydants
naturels et contribuent ainsi à la prévention contre les maladies cardiovasculaires. La
proportion majeure (95-99%) des composés phénoliques des olives se trouve rejetée dans la
phase aqueuse (margines) lors de l’extraction des huiles d’olives.
Dans la présente étude, des échantillons de margines ont été analysés en terme de leur
composition phénolique en association avec leur activité antioxydante. Les contenus totaux en
polyphénols, en flavonoïdes, en flavanols, et en proanthocyanidines ont été déterminés.
L’activité antioxydante des margines microfiltrés et des extraits méthanoliques a été évaluée
en employant différents tests complémentaires (activité de chélatation de fer, activité
antioxydante totale, test au DPPH et en fin le test de peroxydation des lipides).
Les margines microfiltrés ont été préparées par filtration sur une membrane de
polyéthersulfone (MicrodynNadir, Allemagne) avec une taille de pore de 0,05 µm. La
microfiltration a été effectuée à une température ambiante avec une cellule d’ultrafiltration à
agitation magnétique (AMICON 8200, Millipore USA). La microfiltration des margines
montre des flux raisonnables (350 l/h.m²) avec un perméat moins coloré (80% de moins à 465
nm) comparé aux margines brutes. La demande chimique en oxygène, le résidu sec et le
contenu total en polyphénols ont été aussi réduits respectivement de 62%, 30% et 7%.
Des échantillons de deux margines différentes ont été analysées. Les margines (OMW1)
issues d’un procédé de trituration semi-moderne montrent une concentration en polyphénols
plus élevée, (9,82 g/l) par rapport aux margines issues d’un procédé moderne (OMW2, 6,11
g/l), les deux margines sont issues d’un procédé à trois phases.
Les constituants majeurs en polyphénols des margines sont des flavonoïdes. Il s’agit d’un
groupe des substances naturelles connus pour leurs propriétés antioxydantes, anti-
inflammatoires, antiallergiques, antivirales et anti cancers. Ce groupe phénolique correspond à
environ 66,8% du contenu phénolique total des margines OMW1. En revanche, il ne constitue
que 44,3% dans les margines OMW2. Les flavanols et proanthocyanidines représentent plus
ou moins les mêmes proportions dans les deux échantillons des margines. Toutefois, une
41
petite différence de concentration de ces biomolécules peut affecter considérablement leur

activité antioxydante car ces composés agissent à des concentrations très faibles. La
différence de composition phénolique des deux margines peut être attribuée au degré de
maturité des olives et/ou aux pratiques de collecte, de stockage et de trituration des olives.
Pour déterminer et comparer le profil phénolique de chaque échantillon, une analyse HPLC
des composés phénoliques a été réalisée. La teneur en polyphénols quantifiée par HPLC
représente seulement 55% et 63% de la teneur estimée par spectrophotométrie (dosage au
Folin). Lors du dosage par la méthode de Folin-Ciocalteu, les agents réducteurs présents dans
les extraits peuvent interférer avec les composés phénoliques donnant lieu à une surestimation
du contenu phénolique total. Les deux margines (OMW1 et OMW2) présentent des profils
phénoliques différents en termes de concentration et aussi de composition (l’oleuropéine
aglycone n’a été détecté que dans OMW2). Les résultats montrent que l’hydroxytyrosol est le
composé majoritaire parmi les composés phénoliques présents dans les margines, il représente
environ 70% et 55% des polyphénols totaux de OMW1 et OMW2, respectivement.
Pour comparer l’activité antioxydante d’un extrait, un seul test semble être insuffisant car
plusieurs mécanismes sont impliqués dans l’action antioxydante. Une évaluation
multidimensionnelle de la capacité antioxydante est alors nécessaire. Nos extraits ont été
soumis à quatre tests des propriétés antioxydantes, représentant des mécanismes
d’antioxydation différents. Le test dit de capacité antioxydante totale (CAT) est basé sur la
réduction du molybdène (VI) en Molybdène (V) et la formation d’un complexe vert de
phosphate/Mo (V) à un pH acide. Une absorbance élevée indique une activité antioxydante
importante. Dans ce test, la CAT des microfiltrâts des margines OMW1 et OMW2 et de leur
extraits phénoliques respectifs (extraction par acétate d’éthyle) a été mesurée et comparée
avec celle du BHT (antioxydant synthétique puissant). Selon les résultats obtenus, les
microfiltrâts des margines montrent une CAT très importante, deux fois plus supérieure que
celle mesurée dans les extraits. Par contre, la CAT obtenue reste inférieure à celle du BHT
d’environ 13% (OMW1) et 18% (OMW2).
Un autre test d’activité antioxydante a été réalisé (test au radical DPPH), les résultats obtenus
montrent que le microfiltrât des margines OMW2 présente l’activité d’inhibition du radical
DPPH la plus élevée (l’IC50 la plus petite). Elle s’est révélée plus élevée que l’activité
antioxydante de l’acide ascorbique. Le microfiltrât des margines OMW1 et l’extrait
phénolique de OMW2 viennent juste après en terme d’activité inhibitrice d u radical DPPH
42
(avec une activité comparable à celle de l’acide ascorbique) et finalement l’extrait phénolique
des margines OMW1 présente l’activité antiradicalaire la plus faible.
La capacité des extraits phénoliques et des microfiltrâts à entrer en compétition avec la

férrozine pour chélater les ions ferreux a été également estimée. Les résultats montrent qu’une
teneur élevée en composés phénoliques n’est pas forcément corrélée positivement avec
l’activité de chélatation des ions ferreux (Fe2+), surtout pour le cas des extraits phénoliques.
Le dernier test d’activité antioxydante a consisté en l’étude de l’inhibition de la réaction de

peroxydation des lipides induite par le fer. Ce dernier est un système validé pour générer des
espèces réactives d’oxygène. Dans les systèmes biologiques, la peroxydation des lipides, qui
se réfère à une dégradation oxydative des acides gras polyinsaturée dans la membrane
cellulaire, génère plusieurs produits de dégradation, tel le malondialdehyde (MDA). Les
concentrations de ce MDA sont utilisées comme indice de l’ampleur de la peroxydation des
lipides et comme un marqueur du stress oxydatif. L’extrait phénolique des margines OMW2 a
montré une activité d’inhibition de la peroxydation de lipides (LPI) plus élevée
comparativement à l’extrait issu de OMW1. Par contre, aucune différence significative
(p>0.05) entre les deux microfiltrâts n’a été observée en ce qui concerne la LPI.
D’une manière générale, nous avons noté que les microfiltrâts présentent des propriétés
antioxydantes plus importantes que leurs extraits phénoliques, ce qui semble indiquer que
l’activité antioxydante des margines ne peut pas être attribuée exclusivement à la présence des
composés phénoliques. Probablement, certains composés non-phénoliques contribuent à
l’activité antioxydante totale des margines ou améliorent l’activité antioxydante des composés
phénoliques (synergie) surtout dans les tests de la capacité antioxydante totale, l’activité de
chélatation de fer et l’activité antiradicalaire. L’activité antioxydante élevée mesurée dans les
microfiltrâts des margines peut être également attribuée à la différence de composition
phénolique entre les extraits et les microfiltrâts, puisque l’extraction liquide-liquide par
l’acétate d’éthyle est efficace pour les composés phénoliques de faibles et moyens poids
moléculaires. Ce solvant est inapproprié pour l’extraction des molécules de poids moléculaire
élevé tel les tannins qui restent dans la phase aqueuse.
En raison de la production conséquente et saisonnière des margines, leur stockage est

assez courant. Pour cela, nous avons jugé qu’une étude de l’effet de stockage sur le contenu
phénolique des margines et leur activité antioxydante est nécessaire. Ainsi, l’évolution des
polyphénols totaux ainsi que de leur IC50 a été suivie en fonction du temps de stockage des
margines à température ambiante. Le contenu des margines en composés phénoliques
43
augmente considérablement durant les premiers quatre mois et commence à chuter lentement
après le 5ème mois. En revanche, l’activité antioxydante la plus élevée a été observée au
troisième mois de stockage (IC50= 150 µg/ml). L’évolution de l’IC50 semble être corrélée à
l’évolution de la concentration en polyphénols durant le stockage. Ce résultat peut être
expliqué par le fait que les margines sont un milieu complexe qui contient plusieurs composés
antioxydants avec différentes capacités antioxydante. Durant le stockage certains antioxydants
peuvent disparaitre alors que d’autres issus d’hydrolyse de molécules plus complexes ou de
modification des composés initiaux vont apparaitre. Le changement du contenu phénolique et
de son activité antioxydante semble être affecté par plusieurs facteurs tels les paramètres
physicochimiques des margines de départ, les variations de température durant le stockage et
finalement la flore bactérienne et fongique présente dans les margines.
Peu d’études se sont intéressées aux variations ayant lieu au cours de stockage des margines.
Une étude publiée en 2006 a rapporté qu’une accumulation très importante de
l’hydroxytyrosol avait lieu après 5 mois de stockage. Sa concentration aurait augmenté de
257–302 %. Par contre, les concentrations des autres composés phénoliques ont
considérablement chuté. De plus, il a été aussi conclu que le stockage des margines pour
plusieurs mois améliore le rendement d’extraction de l’hydroxytyrosol. Ce dernier composé
aurait augmenté de 85 à 97 %.
L’ensemble de ces résultats démontre l’importance des margines en tant que source
potentielle bon marché de composés naturels dotés d’un pouvoir antioxydant comparable aux
antioxydants synthétiques communément utilisés dans différentes industries : alimentaire,
cosmétique et pharmaceutique. Nous comprenons ainsi l’intérêt et le caractère innovant que
revêt toute étude visant le développement de procédés d’extraction de composés phénoliques
responsables d’une grande partie des propriétés antioxydantes des margines.
44
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51
CHAPITRE III
APPLICATION DE L’ULTRAFILTRATION ASSISTEE PAR MICELLES

POUR LA SEPARATION DES COMPOSES PHENOLIQUES A PARTIR DES
SOLUTIONS MODELES ET DES MARGINES
Chapitre 3 Ultrafiltration Assistée par Micelles
Séparation des composés phénoliques monocycliques naturels par ultrafiltration assistée

par micelles à l’aide d’un tensioactif cationique
(Separation of natural monocyclic phenolic compounds by micellar-enhanced ultrafiltration
using a cationic surfactant)
Résumé:
Les composés phénoliques sont connus en tant que polluants récalcitrants présents
dans les eaux usées de certaines industries. Les margines contiennent des concentrations
énormes en composés phénoliques résistants à la biodégradation. Un traitement efficace est
alors nécessaire avant leur réutilisation ou leur décharge dans l’environnement. Quelques
composés phénoliques présents naturellement dans les margines, à savoir le tyrosol, l’acide
para-coumarique et l’acide vanillique ont été pris comme modèles pour tester l’efficacité de
rétention des polyphénols par ultrafiltration assistée par micelles (UFAM) en employant un
tensioactif cationique, le chlorure de cétylpyridinium (CPC), et deux membranes
polymériques en polyéthersulfone avec des seuils de coupure moléculaire de 20 et 50 kDa.
L’UFAM est une technique couplant la solubilisation micellaire des solutés à l’ultrafiltration
conventionnelle afin d’augmenter la sélectivité du procédé de séparation membranaire opérant
sous des pressions basses (inférieures à 5 bar).
Les expériences ont été conduites sous une température ambiante (25°C ± 2°C) en
utilisant une cellule de filtration frontale sous agitation magnétique. Le volume de l’aliment
(margines) était 200 ml. Le CPC a une concentration micellaire critique (CMC) de 0,91 mM.
Les expériences de l’UFAM des solutions modèles ont été conduites sous une pression
transmembranaire de 3 bars. Les flux de perméat ont été déterminés d’une façon continue en
utilisant une éprouvette graduée connectée à la sortie du perméat. Avant et après chaque
expérience, l’eau distillée a été filtrée sur la membrane pour déterminer et comparer sa
perméabilité.
Dans cette étude, l’effet de la concentration du tensioactif et des solutés sur la
rétention des composés phénoliques et les flux des perméats a été étudié, ainsi que
l’élimination et la récupération du tensioactif par précipitation à partir du retentât en
exploitant l’une des caractéristiques des tensioactifs ioniques à savoir l’habilité à précipiter à
une température inférieure au point de Krafft. Ce dernier étant la température sous laquelle la
52
concentration en tensioactifs en solution devient inférieure à la CMC. Le tensioactif se trouve

alors sous forme précipitée (cristaux).
Des rétentions importantes (>60%) ont été obtenues en utilisant 5 et 10 fois la CMC
du CPC et une membrane d’un seuil de coupure de 20 kDa. Le taux de rétention de l’acide
vanillique et l’acide p-coumarique était plus élevée que la rétention du tyrosol. Ces
différences en rétention indiquent clairement que les trois composés phénoliques sont
solubilisés dans/sur les micelles de CPC mais avec des coefficients de partage différents entre
la phase aqueuse et la pseudo-phase des micelles.
Un mélange de composés phénoliques a été filtré sur la membrane UP020 (20 kDa) en
employant différentes concentrations de CPC et une concentration finale de chaque composé
phénolique égale à 0,1 g/L. Les rétentions des différents composés se sont révélées
pratiquement équivalentes (86-90%). Ces composés phénoliques en mélange auraient un
comportement différent comparé aux composés traités individuellement. Les rétentions du
tyrosol et de l’acide vanillique ont été améliorées en présence de l’acide p-coumarique.
Les taux de rejet chutent de 51-54% à 31-33%, avec l’augmentation de la
concentration totale des composés phénoliques de 0,3 à 0,9 g/L. Les rétentions de l’acide p-
coumarique et l’acide vanillique étaient similaires mais plus élevées que celles enregistrées
pour le tyrosol. L’étude des flux du perméat en fonction de la concentration de l’aliment en
tensioactif a révélé que le CPC contribue considérablement au phénomène de colmatage de la
membrane.
La température de Krafft du CPC est d’environ 10°C. Les molécules du CPC dans le
retentât de l’UFAM obtenus après traitement de solutions de 5 et 10 CMC précipitent avec un
rendement d’environ 50% de leur concentration initiale au bout de deux heures de séjour à
9°C. L’élimination du CPC atteint environ 90% après 20 heures. Par contre, la concentration
du CPC dans le retentât obtenu après UFAM des solutions avec une concentration de 2 CMC
reste plus ou moins sans changement. Par ailleurs, la concentration en tensioactif des 3
rétentâts (2, 5 et 10 CMC) diminue suite à sa précipitation à 5°C. La formation des cristaux de
CPC était rapide durant les premières heures. L’élimination du tensioactif a dépassé 80%
après 6 heures. Des durées plus longues (jusqu’à 24 heures) n’améliorent pas
considérablement le taux d’élimination. Les taux d’élimination enregistrés sont d’environ
80%, 90% et 95% pour les rétentâts issus d’UFAM à 2 CMC, 5 CMC et 10 CMC,
respectivement. Le précipité peut être facilement récupéré par filtration à une température
basse ou par centrifugation. Après filtration sur membrane de cellulose avec une taille
moyenne de pore de 2 µm, la phase solide a été séchée à 105°C pendant 6 heures et le résidu a
53
été pesé. Ainsi, la précipitation du CPC à une température inférieure à son point de Krafft a
permis la régénération d’environ 92% du CPC du retentât.
Ces résultats démontrent que le procédé d’ultrafiltration assistée par micelles de CPC
peut être utilisé d’une façon efficace pour la récupération des composés phénoliques à partir
des eaux usées avec la possibilité de recyclage du tensioactif après isolement par précipitation
à une température basse.
54
SEPARATION OF NATURAL MONOCYCLIC PHENOLIC COMPOUNDS BY

MICELLAR-ENHANCED ULTRAFILTRATION USING A CATIONIC
SURFACTANT
Abdelilah El-Abbassi1 and Jan Hoinkis2, Abdellatif Hafidi1*
1
Food Science Laboratory, Faculty of Sciences-Semlalia, Cadi Ayyad University, 40090
Marrakech, Morocco.
2
Karlsruhe University of Applied Sciences, 76133 Karlsruhe, Germany.
Abstract
Phenolic compounds are known as recalcitrant pollutants in many industrial wastewaters, e.g.
olive mill wastewater. An efficient treatment is therefore needed before the discharge of
phenol-containing wastewaters into the environment. The possibility of removing some
natural occurring phenolics, namely tyrosol, p-coumaric acid and vanillic acid, by micellar-
enhanced ultrafiltration (MEUF) using a cationic surfactant, cetylpyridinium chloride (CPC),
and polyethersulfone membranes of 20 and 50 kDa molecular weight cut-off (MWCO), was
investigated. The effect of the surfactant and the solute concentrations on the retention and the
permeate fluxes were studied. The elimination and recovery of the surfactant from the
retentate stream under its Krafft point was also investigated. High rejections were obtained
using 5 and 10 times the critical micellar concentration (CMC) of CPC and a membrane of 20
kDa (MWCO). The rejection of vanillic acid and p-coumaric acid was higher than the
rejection of tyrosol. The CPC was found to contribute significantly to the fouling
phenomenon. The precipitation of CPC under its Krafft temperature allowed the recovery of
about 92% of the initial concentration of CPC from retentate streams. The obtained results
showed that the MEUF process can be used efficiently for the recovery of phenolic
compounds from wastewaters and that the surfactant can be recovered from the retentate
stream and reused.
Keywords: phenol-containing wastewaters; micellar-enhanced ultrafiltration; cationic
surfactant; Krafft temperature; surfactant recovery.
*Corresponding author: Abdellatif HAFIDI. E-mail: a.hafidi@ucam.ac.ma. Tel: +212 5 24 43

46 49 (Office: 515), Fax: +212 5 24 43 67 69.
55
Nomenclature
Symbols
V : volume (ml)
C : concentration of phenolic compounds (g/L)
R : rejection (%)
J : permeate flux (L.h-1.m-2).
Lp : membrane permeability (L.h-1.m-².MPa-1)
Rm : membrane hydraulic resistance (m-1)
Rs : membrane secondary resistance (m-1)
∆P : transmembrane pressure (bar and MPa)
µ : dynamic water viscosity (Pa.s)
Kow : octanol-water partition coefficient
Index
O : initial value
p : permeate
r : retentate
w : water
f : feed
56
1. Introduction
Wastewaters containing dissolved organics are a common problem in many industries. These
organics are often toxic and must be removed or degraded before the water can be discharged
into the environment or reused in the process. However, these organics could be of a high
added value such as in the case of polyphenols in some agro-industrial wastewater streams,
e.g. olive mill wastewater. Phenolic derivatives are a common class of organic pollutants and
are (more or less) toxic. Biological treatments are not suitable for these compounds due to
their toxicity. Furthermore, common ultrafiltration is ineffective for most of these substances,
especially those with low molecular weights which are generally known to be the most toxic.
Micellar-enhanced ultrafiltration (MEUF) could be a good alternative for the removal and
recovery of low molecular weight phenolics. A survey of literature related to MEUF reveals
that a number of studies have been carried out looking at the mechanisms of separation and
solubilization of the solute in micelles. MEUF was first introduced by Scamehorn et al. in the
1980s for the removal of dissolved organic compounds and metal ions from aqueous streams
[1,2]. Few years later, the MEUF process was widely used. However, limited works on
MEUF dealt with phenols and their derivatives (3–6), the great majority of works focused on
the MEUF separation of metal ions and heavy metals (7–10).
Sabaté et al. (6) studied a micellar-enhanced ultrafiltration (MEUF) separation of the phenol
using a cationic surfactant, cetylpyridinium chloride (CPC), and two polysulfone membranes
of 5 and 50 kDa molecular weight cut-off (MWCO) and two ceramic membranes of 15 and 50
kDa MWCO. They reported that the type of membrane material may affect the optimized
parameters in a MEUF process. Purkait et al. (4) studied the removal of four phenolic
derivatives (catechol, meta-nitrophenol, para-nitrophenol and beta-napthol) from their
mixtures using the CPC as a surfactant and an organic polyamide membrane with molecular
weight cutoff of 1000 Da. This revealed a maximum retention of solute at a concentration
ratio of surfactant-to-solute around 110 (4).
To make the MEUF system more economical, it may be necessary to recycle the surfactant
molecules that are present in permeate and retentate streams before final disposal. For
example, foam fractionation to recover valuable surfactant (SDS) in the permeate of micellar-
enhanced ultrafiltration was proposed by Qu et al. (7). Free CPC surfactants molecules can be
recovered from the permeate by a two-step chemical treatment, procedure studied by Purkait
et al. (4). The works interested in the removal of natural phenolic compounds by MEUF
process remain very scarce. In our previous work, we applied the MEUF for the rejection of
phenolic compounds from OMW using SDS at pH2 (11). The rejection rate reached 70%
57
when using a surfactant concentration 10 times the CMC. To the best of our knowledge, no
other works has been done on the MEUF separation of natural phenolic compounds.
In this study, we investigated the possibility of removing some natural phenolics, namely
tyrosol, p-coumaric acid and vanillic acid, using a cationic surfactant, cetylpyridinium
chloride (CPC), and two polyethersulfone membranes of different MWCO at an acidic pH
(pH2). The ultrafiltring behavior of the studied natural phenolics and CPC was also studied
for MEUF of individual phenolics and their mixture in view of reaching maximum retention
since it has been never studied previously. The concentrations of the studied phenolic
compounds in the model solutions were chosen to be more or less equivalent to the
concentrations found in some phenolic wastewaters mainly olive mill wastewaters and table
olive wastewaters. The effect of the surfactant and the solutes concentrations on the retention
and the permeate fluxes were studied. The elimination and recovery of the surfactant from the
retentate stream under its Krafft point was also investigated.
2. Experimental
2.1. Chemicals
Cetylpyridinium chloride (CPC), 4-Hydroxy-3-methoxybenzoic acid (vanillic acid, VA),
trans-4-Hydroxycinnamic acid (p-coumaric acid, CA) and 4-Hydroxyphenylethanol (tyrosol,
TY) were supplied by Sigma-Aldrich (Germany). Isopropyl alcohol was purchased from
Merck (Germany). Deionized water was produced by a water purification system DI4000
(TKA, Germany).
2.2. Apparatus, membranes and solutions
The ultrafiltration experiments were conducted in a 500 ml capacity stirred filtration cell.
Inside the cell, a circular membrane is placed over a base support (Fig. 1). The effective
membrane area is 50 cm². The permeate is collected from the outlet of the cell at the bottom.
The cell is pressurized by nitrogen. Two polyethersulfone membranes (Microdyn-Nadir,
Germany) with different molecular weight cut-offs (Table 1) were used.
Table 1. Main characteristics of the tested membranes

Membrane MWCO Water flux Processing
Membrane pH range
material (kDa) (L.h-1.m-2) temperature (°C)
UP020 PES 20 600* 0-14 5-95
UH050 PESH 50 1500* 0-14 5-95
*
Test conditions: 3 bar, 25°C, stirring rate 200 rpm, membranes were treated by isopropanol alcohol before use.
Abbreviations: PES, polyethersulfone; PESH, permanently hydrophilic polyethersulfone; MWCO, molecular
weight cut-off.
58
Feed solution for each experiment was prepared using specific amounts of the different
phenolic compounds (Fig. 2) and the CPC as a surfactant, dissolving them in 1000 ml of
deionized water. The pH of the model solutions was adjusted to pH 2 with a solution of HCl
(2M) using a pH-meter (WTW, model pH325).
Fig. 1. Scheme of ultrafiltration experimental set-up: 1. Feed inlet, 2. Connection to the

nitrogen cylinder, 3. Screw, 4. Membrane, 5. Permeate outlet, 6. Magnetic stirrer, 7. Magnetic
bar, 8. Temperature sensor.
Cetylpyridinium chloride Vanillic acid
Tyrosol p-Coumaric acid

Fig. 2. Chemical structures of the studied phenolic compounds and surfactant.
2.3. Procedures
59
The experiments were conducted under ambient temperature (25°C ± 2°C). The membranes
were left overnight in Isopropyl alcohol solution (50%) and then treated by filtering distilled
water under high transmembrane pressure (10 bar). The feed volume was 200 ml and the cell
was stirred at 200 rpm using a magnetic stirrer. The CPC surfactant, which is an ammonium
salt containing a long aliphatic chain (Fig. 2), has a critical micellar concentration (CMC)
equal to 0.91 mM (12). It is not considered to be affected by adding the phenolics. The MEUF
experiments of model solutions were carried out under transmembrane pressure at 3 bar.
Permeate fluxes were determined continuously using a graduated cylinder connected to the
permeate outlet. Before and after each run, deionized water was filtered to determine and
compare the permeability of the membrane.
The MEUF experiments were stopped on reaching a volume concentration (VCF) factor equal
to 2:
Vo
VCF = (1)
Vr
Rejection of phenols was calculated using the coefficient of rejection R according to the
following equation:
 Cp 
R = 1 −  × 100 (2)
 Cr 
The removal of surfactant from the retentate stream was performed by its precipitation below
its Krafft temperature at 9°C and 5°C. 50 ml of the retentate stream in a graduate cylinder was
placed in a bath with the temperature adjusted to the desired value. Samples of 100 µl were
taken against time at the same height (30 ml) and were diluted adequately prior to analysis.
2.3. Analysis
Feed and permeate concentrations of surfactant and solute were measured by UV-VIS
spectrophotometer (550S PERKIN-ELMER). The wavelengths at which maximum absorption
occurs and the molar extinction coefficients of different species were obtained from the
measurements of the pure components. The concentrations of different solutes and surfactant
in the mixture were calculated from the absorbance at different wavelengths using the molar
extinction coefficients.
3. Results
3.1. Ultrafiltration of surfactant solution
3.1.1. Hydraulic permeability and resistances
60
Ultrafiltration experiments were conducted under different transmembrane pressure (2 to 6

bar) using deionized water. The permeate flux was plotted against the operating pressure and
fitted with a straight line through the origin (Fig. 3).
Fig. 3. Initial permeate fluxes of deionized water and CPC solution (1.82 mM) on UH050
membrane against transmembrane pressure.
The slope of this straight line is the membrane permeability (Lp, L.h-1.m-2.MPa-1) and can be
calculated using the following equation:
Jw
Lp = (3)
∆P
where J w is the volumetric permeate flux of deionized water in L.h-1.m-2, and ∆P is the
transmembrane pressure in MPa. The membrane hydraulic resistance was calculated from the
permeability as:
1
Rm = (4)
µ Lp
In the case of surfactant solution, the CPC molecules create an additional resistance called the
secondary membrane resistance (Rs) which reduces the permeability of the membrane. The Rs
(in m-1) was calculated as:
∆P
Rs = −R (5)
µ JCPC m
61
The secondary membrane resistance average was found to be about 220 1010 m-1 which is
considerably higher than the intrinsic membrane resistance, 91 1010 m-1 (Table 2).
Table 3. Permeate fluxes and resistances of the membrane UH050 under different
transmembrane pressure conditions
∆P JW JCPC LP Rmem Rs
-1 -2 -1 -2 -1 -2 -1 10 -1
(MPa) (L.h .m ) (L.h .m ) (L.h .m .MPa ) (10 m ) (10 m-1)
10
0.2 1038 276 5190 83 230

0.3 1451 413 4836 89 224
0.4 1909 556 4772 91 220
0.5 2250 699 4500 96 213
0.6 2725 847 4542 95 211
The membrane resistance created by CPC molecules contributes to about 71% of the total
resistance. When considering the resistance-in-series model (13), the total resistance can be
written as:
Rtot = Rmem + Rcp + Rf = Rmem + Rs

(6)
where the total membrane resistance Rtot is composed of the resistances caused by: the
membrane itself (Rmem), concentration polarization (Rcp) and fouling (Rf). The most important
parameter for flux decline is fouling resistance (Rf), which contributes to a great part of the
secondary resistance. Nevertheless, Rf can be reduced by appropriate methods such as cross-
flow ultrafiltration. Talens-Alesson et al. [14] studied the effect of secondary resistance on
membrane permeability when rejecting two synthetic phenolics namely phenol and 4-
nitrophenol by mean of MEUF process using different surfactants. The results showed that
some adaptation of the forming gelation layer to gain permeability [14]. It was found also that
the presence of salt reduces the membrane resistant in presence of cationic (CTAB) and
nonionic (APG) surfactant [14].
The membrane fouling can be divided into reversible and irreversible fouling depending on
the attachment strength of solutes to the membrane material. In the case of CPC solution
ultrafiltration, a great part of the membrane fouling was reversible because the flux reduction
after external cleaning of the membrane did not exceed 5%. Thus, the membrane was reused
for several times.
3.1.2. Surfactant retention
It can be observed from the Figure 4 that the permeate concentration of CPC increases with
the progressing MEUF. The increase of CPC concentration in the feed increases the permeate
62
CPC concentration but remains under its CMC in all cases in the studied range of
concentrations (2 to 10 CMC) (Fig. 4). This increase in permeate concentration may be due to
the concentration polarization over the membrane surface, which promotes the convective
transport of CPC molecules through the membrane along with smaller size micelles to the
permeate side.
1
Surfactant Concentration
CMC
0,8 2 CMC
5 CMC
10 CMC
0,6
(mM)
0,4
0,2
0
1 1,2 1,4 1,6 1,8 2
Volume Concentration Factor (-)
Fig. 4. The CPC concentration in the permeate against the volume concentration factor for
ultrafiltration (on UP020 membrane) of surfactant solutions of different feed concentrations.
The retention of micelles by the membrane results in the concentration polarization and the
deposition of micelles on the membrane surface (12). Consequently, the concentration of CPC
adjacent to the membrane surface is higher than the bulk concentration of CPC. An
aggregation of micelles and rearrangement of molecules may occur resulting in a deformation
and change of micelle dimension and shape. This rearrangement can produce more free
monomers that pass through the membrane, so the permeate CPC concentration increases.
Some authors reported that micelles can pass through the membrane after changing shape due
to the fact that membranes have a distribution of pore sizes and micelles have a distribution of
sizes (15).
3.2. Micellar-enhanced ultrafiltration using UH050 PES membrane
The effect of surfactant concentration in the feed on the permeate flux and retention of p-
coumaric acid is shown in Fig. 5. In this case, p-coumaric acid concentration was kept
constant at 0.1 g/L while different CPC concentrations were tested. The results depicted in
Fig. 5 show that the initial fluxes in the permeate decrease considerably with the increase of
CPC surfactant. The permeate flux exceeds 1400 L.h-1.m-2 for the ultrafiltration of the
63
phenolic solution without surfactant but the permeate flux (520 L.h-1.m-2) decreases by 63%
when using 2 CMC (1.8 mM) of the CPC. Further increases in the surfactant concentration
significantly affect the permeate flux, which reaches values as low as 66 L.h-1.m-2 when using
CPC concentrations as high as 80 CMC (72 mM).
1600 100
Permeate Flux (L.h-1.m-2)
80
1200
Rejection (%)
60
800
40
400
20
0 0
0 2 5 10 20 40 80
Surfactant concentration (CMC)
Fig. 5. Permeate initial fluxes (column) and rejection rates (strait line) for the micellar-
enhanced ultrafiltration of p-coumaric solution (0.1 g/L) against surfactant concentration on
the membrane UH050.
It can also be observed from Figure 5 that the retention did not exceed 7% for the solution of
p-coumaric without any surfactant. This retention may result from adsorption on the
membrane surface. Susanto et al. (16) reported that phenolic compounds can be adsorbed on
the surface of polyethersulfone membranes. When surfactant is used (2 to 80 CMC) the
retentions increased significantly and reached 93% at the highest used surfactant
concentration (80 CMC). This clearly indicates that p-coumaric acid is solubilized on/in the
surfactant micelles, which are subsequently retained by the ultrafiltration membrane. Syamal
et al. [17] studied the solubilization of phenol on CPC micelles and reported that a maximum
solute solubilization within micelles was controlled by an optimum surfactant/solute ratio.
Theoretical development of the concentration profile within micelle suggested that there is a
uniform distribution of the solute throughout the micelle [17].
In aqueous solutions exempt from electrolytes, the reported micelle aggregation number for
CPC is 95 at a concentration close to 1 CMC (18,19). This gives the micelle an equivalent
molecular weight of about 32 kDa. However, the high p-coumaric acid retention values
indicate that CPC micelles were rejected by the membrane even if its nominal molecular
64
weight cut-off is 50 kDa. At higher CPC concentrations, aggregation of micelles and/or

formation of bigger micelles can occur. As a result, the rejection of CPC micelles is improved
and consequently higher retention of p-coumaric compound is observed (Fig. 5).
3.3. Micellar-enhanced ultrafiltration of phenolics using the UP020 membrane
3.3.1. Micellar-enhanced ultrafiltration of individual phenolic compounds
Figure 6 demonstrates that the three phenolic compounds showed similar behavior during
ultrafiltration at different CPC concentrations. The increase of the surfactant concentration
increased the rejection of the phenolics. p-Coumaric acid exhibits the highest rejection
coefficient followed by vanillic acid and tyrosol. This finding indicates clearly that the three
phenolics are solubilized into the CPC micelles but with different partition coefficients
between the water phase and micelles pseudo-phase most likely in respect to the
hydrophobicity degree of these phenolics.
100
80
Rejection (%)
60
40
para-coumaric acid
20 vanillic acid
Tyrosol
0
0 2 4 6 8 10
Fig. 6. Rejection rates of single phenolic compounds (0.1 g/L) by MEUF on UP020
membrane under different surfactant concentrations.
The hydrophobicity of a chemical can be estimated by the octanol-water partition coefficient

(Kow) expressed in log units. The log Kow of p-coumaric acid, vanillic acid and tyrosol are 1.6
(20), 1.42 and 0.69 (21), respectively. From these values we can notice that the rejection
coefficients of each phenolic compound are correlated positively to their octanol-water
partition coefficients (Kow).
It should also be noted that the retention of solutes decreases during the MEUF processing of
phenolic solution. During the ultrafiltration of p-coumaric acid solution (0.1 g/L) on UP020
65
using 10 CMC of CPC, the retention decreased from 92% at the start of the MEUF separation
to 78%, which is reached at a VCF of 2 (data not shown), most likely as a result of the
increase of phenolics concentration in the retentate with operating time. This increase of the
permeate phenolics concentration is related to the increase of the concentration of micelles-
unsolubilized phenolics in the feed which pass through the membrane. The phenolics are
involved to the same extent as the surfactant. Thus, when a change is introduced, the
equilibrium between phenolics in bulk water and in micelles is reestablished as fast as the
equilibrium between monomers and micellar CPC. Sabaté et al. [22] developed a
mathematical model to predict the permeate composition in continuous MEUF of phenol
using different surfactants and membranes with different MWCO. The micelle rejections for
different surfactants were correlated with the equivalent molecular weight of the micelles and
they are not affected by the addition of phenol [22]. However, the effect of the membrane
MWCO on the micelle rejection could not be quantitatively explained because of the lack of
knowledge about the concentration polarization layer [22].
3.3.2. Micellar-enhanced ultrafiltration of a phenolics mixture
A phenolic mixture was filtered through UP020 using different concentrations of the CPC and
a final concentration of each phenolic compound of 0.1 g/L. As revealed by the results
depicted in Fig. 7, rejections for the different compounds are more or less identical.
100
80
Rejection (%)
60
40
para-coumaric acid
20 vanillic acid
Tyrosol
0
0 2 4 6 8 10
Fig. 7. Rejection rates of phenolic compounds from their mixture (0.1g/L each) by MEUF on
UP020 membrane under different surfactant concentrations.
When mixed, these phenolic compounds behave differently to single phenolics. The rejections
of tyrosol and vanillic acid were enhanced in the presence of p-coumaric acid compared to
66
their rejections when processed separately. Figure 8 shows the MEUF of different total
concentrations of phenolic mixture using 2 CMC of the surfactant. The retention decreases
from the range of 51-54% to the range of 31-33% with the increase of the total phenolics
concentration from 0.3 to 0.9 g/L. The rejection rates of p-coumaric acid and vanillic acid
were found to be similar but higher than the rejection of tyrosol.
70
para-coumaric acid
60 vanillic acid
tyrosol
Retention (%)
50
40
30
20
10
0
0,3 0,6 0,9
Phenolics mixture (g/L)
Fig. 8. Rejection of phenolics by MEUF on UP020 membrane using 2 CMC surfactant
concentration and different concentrations of a phenolic mixture (the different phenolic
compounds concentrations were equivalent, wt. 1:1:1).
The increase in the concentration of phenolic compounds did not affect the permeate flux
which remains more or less unchanged (140 ± 8 L.h-1.m-2) (data not shown). This is due to the
fact that the major contribution of resistance against the solvent flux comes from the
deposited layer of CPC micelles, which are quite large, compared to the phenolics molecules.
Since CPC concentration remains constant and the total phenolics concentration varies over a
range between 0.3 and 0.9 g/L, the permeate flux remains almost unchanged (Fig. 8).
3.4. Surfactant recovery

An important characteristic feature of ionic surfactants is their tendency to precipitate from
aqueous solutions as solid hydrates. The temperature at which the solubility of the surfactant
falls below its critical micellar concentration is termed its Krafft temperature. The Krafft
temperature of CPC is about 10°C (23). At 9°C, the CPC molecules of the retentate streams of
the phenolics MEUF using 5 and 10 CMC precipitate to about 50% of the initial concentration
within two hours of low temperature treatment (Fig. 9a).
67
1,4
(a) 9°C 2 CMC
1,2 5 CMC
1 10 CMC
0,8
C/Co
0,6
0,4
0,2
0
0 5 10 15 20 25
Time (hour)
1,4
(b) 5°C 2 CMC
1,2 5 CMC
1 10 CMC
0,8
C/Co
0,6
0,4
0,2
0
0 5 10 15 20 25
Time (hour)
Fig. 9. Removal of surfactant from different retentate streams by precipitation at 9°C (a) and
5°C (b).
The CPC removal reached about 90% after 20 hours. However, the CPC concentration in the
retentate stream of MEUF with 2 CMC was still more or less unchanged (Fig. 9a).
Furthermore, the surfactant concentration decreased in the three retentate streams at 5°C (Fig.
9b).
The crystal formation was rapid within the first hours and the removal exceeded 80% after 6
hours. The treatment for longer durations (up to 24 hours) did not significantly enhance the
removal rate. This removal is about 80%, 90% and 95% for the 2 CMC, 5 CMC and 10 CMC
retentate streams, respectively. The precipitate can easily be recovered by filtration at low
temperature or centrifugation. After filtration on a 2 µm pore size cellulose membrane, the
68
solid phase was dried at 105°C for 6 hours and the residue was weighted. The recovered
surfactant was up to 92% of the initial concentration of CPC in the retentate stream.
4. Conclusion
The CPC molecules were found to reduce the permeate flux considerably and contribute to
the membrane fouling phenomenon. However, a great part of the membrane fouling caused by
CPC was reversible since the flux reduction after external cleaning of the membrane did not
exceed 5%. The rejection of phenolics by micellar-enhanced ultrafiltration using CPC was
positively correlated to their hydrophobicity, estimated by the octanol-water partition
coefficient. The relatively more hydrophobic compounds (vanillic acid and p-coumaric acid)
were rejected more by MEUF using CPC than tyrosol. The membrane of 20 kDa (MWCO)
exhibits higher rejection than the membrane of 50 kDa. The CPC was removed and recovered
efficiently from the retentate streams by precipitation under its Krafft temperature, especially
at 5°C. The surfactant recovery makes the MEUF process more economic. Further
investigations are needed to enhance the permeate fluxes and the rejection of phenolics.
Acknowledgments
The authors are grateful to GEA Wiegand GmbH for its support and greatly thank the
Deutscher Akademischer Austauschdienst (DAAD) for providing two scholarships to the
Moroccan authors as a support for this study.
69
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71
Elimination des composés phénoliques par ultrafiltration assistée par micelles en

utilisant un tensioactif anionique
(Removal of phenolic compounds by micellar enhanced ultrafiltration using an anionic
surfactant)
Résumé:
Dans le présent travail, la rétention des composés phénoliques (acide p-coumarique,
acide vanillique et tyrosol) par ultrafiltration assistée par micelles (UFAM) à partir de
solutions aqueuses modèles a été étudiée. Les expériences d’UFAM ont été conduites en
utilisant cette fois un tensioactif anionique (dodécyl sulfate de sodium SDS). Deux
membranes de polyéthersulfone (20 et 50 kDa) ont été testées. Les expériences
d’ultrafiltration ont été réalisées sur un module d’ultrafiltration frontale à agitation
magnétique. L’effet des variations de la concentration du tensioactif et des solutés sur le flux
du perméat ainsi que sur la rétention des solutés a été étudié. L’efficacité de rétention des
composés phénoliques par UFAM a été comparée avec la nanofiltration. Les flux enregistrés
de l’UFAM des solutions phénoliques avec différentes concentrations du tensioactif (2, 5 et
10 fois la concentration micellaire critique, CMC) varient entre 66 et 510 L.h-1.m-2.
Une rétention des composés phénoliques d’environ 15% a été observée en absence de
tensioactif. Cette rétention serait due principalement à l’adsorption des composés phénoliques
sur la membrane. Le phénomène d’adsorption des polyphénols sur les membranes de
polyéthersulfonate a été déjà rapporté par d’autres auteurs. Quand le tensioactif est employé,
la rétention des composés phénoliques augmente considérablement, en fonction de la
concentration du tensioactif, atteignant des valeurs allant de 16% à 67%, pour l’acide p-
coumarique, de 29% à 66% pour l’acide vanillique et de 8% à 51% pour le tyrosol. Ces
rétentions indiquent clairement que les composés phénoliques étudiés interagissent d’une
manière ou d’une autre avec les micelles du tensioactif, qui sont par la suite retenues par la
membrane lors de l’ultrafiltration. De plus, l’augmentation de la concentration du tensioactif
de 5 à 10 CMC améliore la rétention des composés phénoliques de 15% à 30%. Par contre,
lorsqu’une concentration de 2 CMC de SDS est employée, la rétention ne dépasse pas 33%,
30% et 22% pour l’acide p-coumarique, l’acide vanillique et le tyrosol, respectivement.
L’utilisation d’une membrane avec une taille de pores plus faible (20 kDa) améliore
considérablement la rétention des composés phénoliques même à une concentration faible de
72
tensioactif (2 CMC). Les rétentions observées varient de 61% à 83%, de 32% à 43% et de
22% à 26% selon les concentrations en acide p-coumarique, en acide vanillique et en tyrosol,
respectivement.
Dans une solution aqueuse et en absence d’électrolytes, le nombre d’agrégation d’une
micelle de SDS est rapporté égal à 64, ce qui aboutit à une micelle de poids moléculaire
équivalent à 18 kDa. Cependant, l’augmentation de la concentration du tensioactif peut
engendrer la formation d’agrégats micellaires plus grands capables de solubiliser plus de
solutés. Les résultats obtenus montrent que l’acide p-coumarique (APC) est le composé
phénolique le plus retenu par l’UFAM en employant le SDS, ce qui signifie que ce composé
interagit avec les micelles de SDS plus que les deux autres composés phénoliques étudiés.
L’acide vanillique (AV) vient en deuxième place en terme de rétention suivi du tyrosol (TY).
Ces résultats indiquent clairement que les trois composés phénoliques sont solubilisés
sur/dans les micelles du SDS mais avec différents coefficients de partage entre la phase
aqueuse et la pseudo-phase des micelles selon le degré d’hydrophobicité de ces composés
phénoliques.
L’hydrophobicité d’un composé chimique peut être estimée par le coefficient de
partage octanol-eau (Kow) exprimé en unités logarithmiques. Les Kow de l’APC, l’AV et le TY
sont 1,6, 1,42 et 0,69, respectivement. A partir de ces valeurs on peut conclure que les
coefficients de rétention de chaque composé phénolique sont positivement corrélés aux
coefficient de partage octanol-eau (Kow). Les caractéristiques ioniques et structurelles des
solutés jouent un rôle clé dans leur solubilisation dans les micelles. Par ailleurs, l’APC et
l’AV sont moins hydrophiles que le TY car leur solubilité dans l’eau ne dépasse pas 0,72, 1,5
et 124 g/l, respectivement. Pour cela, l’acide p-coumarique et l’acide vanillique sont les
composés les plus solubilisés dans la pseudo-phase hydrophobe des micelles et montrent par
conséquent des rétentions plus élevées.
Après avoir récupéré les rétentâts, riches en tensioactif et en solutés, des essais
d’élimination et de récupération du tensioactif par précipitation ont été conduits en employant
des électrolytes monovalents et divalents (K+ et Ca2+). La précipitation des molécules de
tensioactif au-dessus de la CMC a été évaluée en suivant les variations de la conductivité
électrique (σ ) en fonction du temps. Quand les ions forment des complexes ou incorporés
dans une matrice cristalline, la conductivité de la solution diminue. Dans le système
SDS/KCl/APC, les cations de potassium forment des liaisons avec les anions de dodécyl
sulfate pour former le dodécyl sulfate de potassium (KDS) qui précipite conduisant à une
chute de la conductivité électrique. Pour étudier la précipitation du SDS à des concentrations
73
en sels relativement faibles, la précipitation a été conduite à un ratio molaire de K+ par rapport
au SDS égal à 0,25 et la diminution de σ enregistrée durant cette dernière expérience ne
dépasse pas 5% de la conductivité initiale (σ o). Le KDS peut être réutilisé comme tensioactif pour
l’UFAM, avec possibilité de sa récupération en diminuant la température du système au-dessus du
point Krafft de KDS. Le KDS a un point Krafft plus élevé que le SDS (35°C). Par conséquent, il
précipite à la température ambiante.
Le cation divalent (Ca2+) testé à un ratio molaire de 0,25 par rapport au SDS donne
lieu à une diminution de conductivité beaucoup plus importante atteignant 18% de la valeur
initiale. La réaction du dodécyl sulfate de sodium avec le chlorure de calcium produit le
dodécyl sulfate de calcium (Ca(DS)2, CDS) qui précipite immédiatement. Un tel processus de
récupération de tensioactif rapide, propre, nécessite des petites quantités des électrolytes. La
précipitation était très rapide et s’est produite en moins de 2 minutes. Le temps d’induction,
qui est le temps nécessaire avant que la chute de la conductivité commence (précipitation),
était d’environ 45 s. La précipitation du dodécyl sulfate était plus rapide et efficace à des
ratios molaires Ca2+/SDS plus élevés. L’augmentation du ratio molaire entre Ca2+ et SDS
réduit le temps d’induction de 45 s à moins de 5 s. Cependant, la récupération du tensioactif à
une grande échelle, un ratio molaire optimal doit être déterminé pour assurer une précipitation
efficace afin d’éviter la création d’un problème de pollution secondaire lié à l’excès de sels.
Le rapport optimal entre les concentrations molaires du cation et du tensioactif avoisine 0,5,
au-dessus de ce ratio molaire le rendement de précipitation de SDS diminue. Ce résultat est en
concordance avec la stœchiométrie de la réaction qui est de 1:2 (Ca2+:DS).
Dans la perspective d’une réutilisation du tensioactif, les cristaux de CDS peuvent être
séparés par une filtration simple et séchés à une température élevée. Le CDS séché pourra être
employé après dans l’UFAM avec efficacité mais à une température relativement élevée car
sa température de Krafft est rapportée être égale à 50°C. De plus, le CMC de CDS est
approximativement 2,4 mM. En revanche, le CDS n’a qu’une solubilité faible dans les
solutions aqueuses. Il serait mieux de le transformer à un sel monovalent (ex. SDS en ajoutant
du Na2CO3) avant d’être re-solubilisé dans l’eau pour une réutilisation ultérieure.
A partir de ces résultats, il apparait clairement que la MEUF est un procédé prometteur pour
le traitement et la valorisation des effluents contenant des composés à haute valeur ajoutée
tels les composés phénoliques, surtout qu’elle permet un taux de rétention élevé et des flux de
perméat raisonnables en comparaison avec la nanofiltration qui a montré une rétention
maximale ne dépassant pas 40% pour l’acide vanillique et 13% pour le tyrosol.
74
REMOVAL OF PHENOLIC COMPOUNDS BY MICELLAR ENHANCED

ULTRAFILTRATION USING AN ANIONIC SURFACTANT
Abdelilah El-Abbassi1, Jan Hoinkis2 and Abdellatif Hafidi1*
1
Food Science laboratory, Faculty of Sciences-Semalia, Cadi Ayyad University, 40090
Marrakech. Morocco.
2
Karlsruhe University of Applied Sciences, 76133 Karlsruhe. Germany.
Abstract
Micellar Enhanced Ultrafiltration (MEUF) of different phenolic derivatives including para-
coumaric acid, vanillic acid, and tyrosol, in aqueous solutions has been studied. The MEUF
experiments were conducted using an anionic surfactant, namely, Sodium Dodecyl Sulfate
(SDS). Two polyethersulfone membranes with different molecular weight cut-off (50 kDa and
20 kDa) were used. Experiments were conducted in a stirred batch cell. The effects of
surfactant and solutes concentrations on the permeate flux and on the observed retention have
been investigated. The MEUF efficiency was compared to the nanofiltration in terms of flux
and rejection. Monovalent and divalent electrolytes were tested for precipitation and recovery
of the dodecyl sulfate anion from the retentate stream.
The obtained fluxes of the MEUF of phenolic solutions using different concentrations of the
surfactant (2, 5 and 10 CMC) vary from 66 to 510 L.h-1.m-² for the 50 kDa and 20 kDa
membranes, respectively. The retention of solutes without using any surfactant varies from
1.2 to 6.8% only, whereas, under the same operating conditions, retention increases to about
30 to 67% depending on the nature of solute, the surfactant concentration and the molecular
weight cut-off of the membrane. The rise of the surfactant concentration from 5 CMC to 10
CMC increases the phenolic compounds rejection by 15 to 30% only. Our tests demonstrated
that the SDS can be removed easily from the retentate by precipitation using CaCl2. The
MEUF appears as a promising process for the treatment and valorization of phenolic effluents
since it allows higher rejection and reasonable fluxes compared to the nanofiltration which
showed a maximum rejection of 40% for vanillic acid and 13% for tyrosol.
Keywords: Micellar Enhanced Ultrafiltration, phenolic compounds, anionic surfactant,
rejection.
*Corresponding author: Abdellatif HAFIDI, E-mail address: a.hafidi@ucam.ac.ma. Tel: +212 5

24 43 46 49 (Office: 515), Fax: +212 5 24 43 67 69.
75
Nomenclature
Abbreviations
MEUF : micellar-enhanced ultrafiltration.
CMC : critical micellar concentration.
PCA : p-coumaric acid.
VA : vanillic acid.
TY : tyrosol.
OD : optical density.
RFR : relative flux reduction (%)
VCF : volume concentration factor.
Symbols
J : permeate flux (l/h.m²).
R : rejection (%).
v : volume.
Kow : octanol-water partition coefficient.
Subscripts
o : initial value.
f : feed.
p : permeate.
r : retentate.
Greek letters
σ : electrical conductivity (mS/cm).
76
Introduction
Industrial wastewater pollution is a serious problem especially in the Mediterranean region
where water resources become more and more scarce. Phenolic derivatives are a class of
common pollutants of many industries. These organics are phytotoxic and bactericide which
consequently resist biodegradation. In the Mediterranean region, more than 30 million tons of
phenol loaded agro-food wastewaters (olive mill wastewater, table olive wastewaters, winery
and distillery wastewaters, etc.) are produced yearly [1].
Various techniques were tested for the removal of phenols and their derivatives from
wastewater, e.g., Photooxidation [2], different advance oxidation processes [3], ozonation [4],
nanofiltration [5] and adsorption on: low cost adsorbents [6], different bentonites [7], different
types of activated carbon [8], and on other materials [9,10]. Due to the low biodegradability
of phenolics, conventional biological wastewater treatment processes are generally found not
efficient in treating the phenolic-containing wastewaters [11].
Membrane processes have also been investigated for removing the phenolics from
wastewaters. Different kinds of membranes have been used: liquid membranes [12], anion
exchange membranes [13], nanofiltration/reverse osmosis membranes [14] and pervaporation
membranes [15]. Unfortunately, those processes often show low rejection levels for many
small organic molecules such as monocyclic phenolic compounds and are generally energy
intensive. As a solution hybrid processes have been developed that combine pressure driven
membrane and adsorption processes [16-18] for the separation and/or removal of phenols.
Because of their low molecular weights, simple ultrafiltration is ineffective for retaining these
compounds. Micellar Enhanced Ultrafiltration (MEUF) could be considered for the retention
of these pollutants. In such a process, a surfactant is added into the aqueous stream containing
organic matters. When the surfactant concentration rises above the critical micellar
concentration (CMC), surfactant monomers assemble and aggregate to form micelles. These
macromolecular structures can solubilize organic matters into their hydrophobic core or
adsorb on its surface. The aqueous stream is then filtered by an appropriate ultrafiltration
membrane with pore sizes smaller than the micelle size. The micelles along with the
solubilized organic matters are then rejected into the retentate stream.
The MEUF process has been recently reported to separate different organic compounds: a-
Phenylglycine [19], dye [20], tannic acid [21], aromatic alcohols [22], methylene blue [23],
and phenols [24]. As far as the surfactants used can generate some pollution and/or are costly,
recycling will be needed prior to final disposal. Different methods were proposed for such a
77
purpose. As an example, foam fractionation was reported as an efficient method for the SDS
recovery after a of micellar-enhanced ultrafiltration process [25].
In this study we investigated the possibility to remove some phenolic compounds from model
solutions using an anionic surfactant and PES membranes with different molecular weight
cut-off. The effects of surfactant and phenolics concentration on rejection and permeate flux
were studied. The removal and recovery of the surfactant by precipitation from the retentate
stream in the presence of p-coumaric acid (PCA) were also studied.
2. Experiments
2.1. Chemicals
Sodium dodecyl sulfate (SDS) was obtained from VWR International (Belgium). 4-Hydroxy-
3-methoxybenzoic acid (vanillic acid), trans-4-Hydroxycinnamic acid (p-coumaric acid) and
4-Hydroxyphenylethanol (tyrosol) were supplied by Sigma-Aldrich (Germany). KCl, CaCl2
and isopropyl alcohol were purchased from Merck (Germany). Deionized water produced by
a DI4000 (TKA, Germany) system was used in all experiments. The membranes were
supplied gratefully by GEA-Wiegand, G.m.b.H (Etlingen, Germany).
2.2. Model solutions
Phenolics were solubilized in deionized water. Solutions were stirred overnight before adding
the SDS at pre-determined concentrations. The CMC of SDS was measured at room
temperature (25°C ± 2°C) in deionized water using the electrical conductivity method and it
was found to be equal to 9.6 mM, which is similar to the value (9.7 mM) reported by Rosen
[26]. The pH of the model solutions was adjusted to 2 with a solution of HCl (2N) using a pH-
meter (WTW, model pH325). Some physicochemical characteristics of the three studied
phenolic compounds are shown in the Table 1.
2.3. Nanofiltration experiments
In nanofiltration experiments, the transmembrane pressure was monitored with pressurized
nitrogen gas using a pressure gauge. The experimental set-up is illustrated in Fig. 1.
A PES membrane (MicrodynNadir, Germany) with a nominal retention of Na2SO4 higher than
30% (NP030) was tested for phenolic compounds removal under a transmembrane pressure of
30 bars. The operating conditions (temperature, feed volume, volume concentration factor and
stirring rate) and the experimental set-up were the same as for the MEUF experiments. The
rejection coefficient was estimated using the Eq. (2).
2.4. Ultrafiltration experiments
Experiments were conducted under ambient temperature (25°±2°C) and under a
transmembrane pressure of 3 bar.
78
Table 1.
Physicochemical characteristics of the tree studied phenolic compounds
Phenolic Compounds Chemical structure Molecular Weight (g.mol-1) Purity Solubility Peak of absorbance
p. coumaric acid 164.16 ≥ 98 0.74 [27] 285
Vanillic acid 168.15 ≥ 97 1.50 [28] 288
Tyrosol 138.16 ≥ 97 124 [29] 275
79
Fig. 1. Scheme of the nanofiltration and ultrafiltration experimental set-up: 1. Connection to

the nitrogen cylinder, 2. Screw, 3. Feed, 4. Membrane, 5. Permeate outlet, 6. Magnetic stirrer,
7. Magnetic bar, 8. Temperature sensor, 9. Feed inlet.
The feed volume was 200 ml and the cell was stirred at 200 rpm using a magnetic stirrer. Two
polyethersulfone (PES) membranes (MicrodynNadir, Germany) with different molecular
weight cut-off (50 kDa: UH050 and 20 kDa: UP020, data sheet: http://www.microdyn-
nadir.de/cms/pdf/produkte/en/1_katalog_engl_rz_screen.pdf) were used. The effective surface
area of the membrane was 50 cm². Permeate fluxes were determined continuously using a
graduated cylinder connected to the permeate outlet. Before and after each run, deionized
water was filtered to determine and compare the permeability of the membrane. MEUF
experiments were stopped when the volume concentration factor (VCF) reached a value of 2:
vo
VCF = (1)
vr
where vo is the initial volume and vr is the volume of the retentate
Phenols rejection was determined by analyzing the permeate and the retentate
spectrophotometrically.
The SDS molecules do not absorb at any of the used wavelengths (285 nm, 288 nm, 275 nm)
and the rejection coefficient was calculated as follow:
 ODp 
R ( % ) = 1 −  ×100 (2)
 ODr 
80
where ODp stands for the optical density of the permeate and the ODr is the optical density of
the retentate at the wavelength corresponding to the peak of absorbance of the studied
phenolic compound (Table 1).
The relative flux reduction (RFR) was calculated from the difference between the permeate
fluxes measured at t=0 (Jo) and at the end of the experiment (Jf). The RFR was then calculated
as follow:
 Jf 
R F R (% ) =  1 −  × 100 (3)
 Jo 
After removing the feed solution, the membrane surface was externally rinsed twice by filling
the cell with pure water (200 ml) and leaving it under high stirring rate (800 rpm) for up to 10
min. The membrane was reused as the water flux reduction after use of membrane did not
exceed 5%.
2.5. Surfactant precipitation and recovery
The electrical conductivity (σ) measurements were used to follow the precipitation reactions
of the SDS on different systems (SDS/KCl/PCA and SDS/CaCl2/PCA). As precipitation
occurs, ions are removed from the solution, the conductivity decreased consequently. An SDS
solution (20mM) containing 1.2 mM of PCA was placed in a flask kept at 20°C. The solution
was stirred and nitrogen was blown into the flask to reduce the absorption of carbon dioxide
into the solution [30]. A salt solution of 8 mM and 16 mM containing 1.2 mM of PCA was
added to the SDS solution under stirring rate of 200 rpm. A WTW (Germany) conductivity-
meter model 3L5i was used to follow the conductivity of the solution as a function of time
during the precipitation reaction. The precipitation efficiency with each cation was compared
and the eventual loss of the PCA after the SDS precipitation was evaluated by comparing its
absorbance at 285 nm before and after precipitation.
3. Results and discussion
3.1. Nanofiltration
Nanofiltration on the NP030 membrane exhibits rejections up to 14% and 40% for tyrosol and
vanillic acid, respectively (Table 2). The permeate fluxes decreased considerably when using
phenolic solutions compared to the deionized water flux. The observed retentions of vanillic
acid (30% to 40%) are higher than those of tyrosol (9% to 13%). Conversely, the permeate
fluxes of the nanofiltration of tyrosol solutions were relatively higher. This may partly
originates from the difference of molecular weight between the two phenolics. The vanillic
acid (168 Da) is slightly bigger than tyrosol (138 Da). Furthermore, this difference in
rejection rates can be due in part to the charge exclusion effect since the vanillic acid has a
81
carboxyl group with a negative charge, so it may be rejected more efficiently by the PES
membranes (Table 2).
Table 2.
Permeate fluxes and rejection of phenolic compounds by nanofiltration using A PES
membrane (NP030).
Phenolic compound (g/l) Rejection (%) Flux (L/h/m²)
Tyrosol
0 -- 116
0.25 8.92 25
0.5 10.24 18
0.75 13.56 13
Vanillic acid
0 -- 116
0.25 40.06 18
0.5 29.89 9
0.75 33.43 7
3.2. MEUF processing of phenolic solutions

3.2.1. Permeate fluxes and membrane fouling
The UF permeate flux of the deionized water when using the UH050 membrane was about
2500 l/h.m². It is evident from the Fig. 2 that the permeate fluxes were higher in absence of
surfactant. The addition of the SDS above the CMC leads to the formation of large aggregates
which may deposit on the membrane surface. The membrane resistance to solvent transfer
consequently increased leading to a decrease of the permeate flux. As can be observed from
Fig. 2, the fluxes drastically decreased for the solutions containing the SDS. Reductions up to
97% were observed at the highest concentrations of the SDS and the phenolic compounds
(Fig. 2). When using the membrane UP020 the decrease of the permeate fluxes (77%-79%)
was not as important as that shown by UH050 (Table 3).
However, high fluxes were recovered after membrane cleaning inside the UF module by
deionized water at high stirring rate (≥800 rpm) for 10 min. The high water flux recovered
after external cleaning of the membrane with water (rinsing) indicates that reversible fouling,
caused by concentration polarization, contribute greatly to the overall flux decline. The
relative flux reduction (RFR) was estimated to 23% and 63% for UP020 and UH050,
respectively. However, longer operating times significantly affect the recovered fluxes
revealing that irreversible fouling takes place.
82
2400 (a) p-Coumaric acid 0.1 g/l

0.2 g/l
0.3 g/l
2000
Permeate flux (l/h.m²)

1600
1200
800
400
0
0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
2400 (b) Vanillic acid 0.1 g/l

0.2 g/l
2000 0.3 g/l
1600
1200
800
400
0
0 2 4 6 8 10
2400 (c) Tyrosol 0.1 g/l

0.2 g/l
0.3 g/l
2000
1600
1200
800
400
0
0 2 4 6 8 10
Fig. 2. Permeate fluxes against surfactant concentration for the MEUF of different model
solutions using UH050 membrane: (a) p-coumaric acid, (b) vanillic acid and (c) tyrosol.
The difference of RFR may originates from the nature of the membrane material and also the
larger pores of the UH050 membrane may facilitate the penetration of the small micelles into
83
the pores and the adsorption on the walls leading to a narrowing and to greater RFR. Susanto
et al. [31] reported significant water flux reductions and changes in polyethersulfone
membranes surface properties after static adsorption of phenolic compounds.
Table 3.
Rejections and permeate fluxes of the MEUF of phenolic compounds using membrane UP020
and 2 CMC of the SDS
p-Coumaric acid Vanillic acid Tyrosol
Concentration (g/L) R (%) Jo (L/h.m²) R (%) Jo (L/h.m²) R (%) Jo (L/h.m²)
0 0 600 0 600 0 600
0.1 83 129 32 125 26 127
0.2 63 131 43 134 27 126
0.3 61 129 39 130 22 129
3.3. Removal of phenolic compounds

A rejection up to 15% of phenolics was observed in absence of any surfactant (Figs. 3a, 3b
and 3c). Most likely some adsorptions of phenolic compounds occur on the membrane
material. When the surfactant is used, the retentions of phenolics are increased significantly,
depending on the surfactant concentration, to the range of 16%-67%, for the p-coumaric acid,
29%-66% for the vanillic acid and 8%-51% for the tyrosol, respectively. This clearly
evidences that the solutes are somehow linked to the surfactant micelles, which are
subsequently retained by the ultrafiltration membrane. It may also be observed from the
Figures 3a, 3b and 3c that the rise of the surfactant concentration from 5 to 10 CMC increases
the rejection of different phenolic compounds from 15% to 30%. When 2 CMC of the SDS is
used, the retention did not exceed 33%, 30% and 22% for the p-coumaric acid, vanillic acid
and tyrosol, respectively. However, the decrease of the MWCO of the membrane to 20 kDa
improves considerably the rejection at a low concentration of the surfactant (2 CMC) (Table
3). The observed retentions were in the range of 61%-83%, 32%-43% and 22%-26% for p-
coumaric acid, vanillic acid and tyrosol, respectively. Therefore, the SDS micelles are
retained more efficiently when using a membrane with lower MWCO. In aqueous solutions
not including electrolytes, the reported micelle aggregation number for SDS is 64 [32,33].
This gives the micelles an equivalent molecular weight of about 18 kDa. When increasing the
concentration of the surfactant, the micelles can aggregate and form bigger macrostructures
that can solubilize more solutes.
84
70
(a) p-Couamric acid
60
50
Rejection (%)
40
30
20
0.1 g/l
10 0.2 g/l
0.3 g/l
0
0 2 4 6 8 10
70
(b) Vanillic acid
60
50
Rejection (%)
40
30
20
0.1 g/l
10 0.2 g/l
0.3 g/l
0
0 2 4 6 8 10
60
(c) Tyrosol
50
40
Rejection (%)
30
20
0.1 g/l
10
0.2 g/l
0.3 g/l
0
0 2 4 6 8 10
Fig. 3. Rejection of phenolic compounds by MEUF against surfactant concentration for

different model solutions using UF050 membrane: (a) p-coumaric acid, (b) vanillic acid and
(c) tyrosol.
85
Table 3 shows also that the p-coumaric acid (PCA) is the most rejected phenolic compound
by MEUF using the SDS, it must be the most interacting or/and solubilized in SDS micelles.
PCA exhibits the highest rejection coefficient followed by VA and TY (Table 3, Figs. 3a, 3b
and 3c). This finding indicates clearly that the three phenolics are solubilized into the SDS
micelles but with different partition coefficients between the water phase and micelles
pseudo-phase most likely in respect to the hydrophobicity degree of these phenolics.
The hydrophobicity of a chemical can be estimated by the octanol-water partition coefficient
(Kow) expressed in log units. The log Kow of PCA, VA and TY are 1.6 [34], 1.42 and 0.69
[35], respectively. From these values we can notice that the rejection coefficients of each
phenolic compound are correlated positively to their octanol-water partition coefficients
(Kow).
The ionic and structural characteristic of the solutes plays a key rule on their solubilization in
the micelles. On the other hand, p-coumaric acid and vanillic acid are less hydrophilic
compounds than tyrosol since their respective solubility in water did not exceed 0.72 and 1.5
g/l (Table 3). Thus, the p-coumaric and vanillic acids are readily solubilized in the
hydrophobic core of the micelles and shows higher observed retention.
3.4. Surfactant recovery from the retentate stream
The precipitation of surfactant molecules above CMC was approached by measuring the
variation in the electrical conductivity (σ ) of the solution against time. When ions form
complexes or are incorporated into crystal lattices, the conductivity of the solution must
decrease. In the system SDS/KCl/PCA, The potassium cations bind to dodecyl sulfate anion
(Appendix A) to form the potassium dodecyl sulfate (KDS) which precipitate and
consequently the electrical conductivity decreases (Fig. 4). To test the precipitation of the
SDS at low relative concentration of salt, the precipitation was conducted at a mole ratio of
K+ to SDS equal to 0.25 and the decrease of the σ did not exceed 5% of the initial
conductivity, σ o (Fig. 4).
Wu et al., [36] reported that the KDS have similar CMC, water solubility, and ability to
solubilize organic solutes in micellar solutions as the SDS. KDS was proposed as a potential
surfactant for use in MEUF, with recovery of the surfactant to be accomplished by lowering
the system temperature below the Krafft point. KDS has a significantly higher Krafft point
than SDS (35°C) [36]. Consequently, it precipitates at ambient temperature. The Krafft point
of the SDS is 16°C [37].
86
1,04
[K+]/[SDS]=0.25
1,00
[Ca2+]/[SDS]=0.25
σ/σo 0,96
0,92
0,88
0,84
0,80
0 1 2 3 4 5 6
Time (min)
Fig. 4. Normalized electrical conductivity time course during the precipitation of the SDS at
30°C using KCl and CaCl2 in presence of 1.2 mM of p-coumaric acid.
The divalent cation (Ca2+) used at a mole ratio to SDS equal to 0.25 leads to a more
significant decrease of the conductivity down to 18% of the initial value (Fig. 4). Such a
recovery process is rapid, clean and requires only small amounts of the electrolyte. The
precipitation was very rapid and occurred during less than 2 minute (Fig. 4 and 5).
The induction time which is the time needed before the decrease of conductivity started
(precipitation) was about 0.75 min. The precipitation of dodecyl sulfate was more rapid and
effective at higher Ca2+/SDS mole ratio (Fig. 5). Furthermore, the increase of the Ca2+/SDS
mole ratio decreases the induction time from 0.75min to less than 0.08 min.
When using the precipitation process to remove and recover SDS at large scale, an optimal
mole ratio should be determined to assure an efficient precipitation without creating a
secondary pollution problem related to the excess of salt.
The optimum as shown by the Fig. 5 could be around a mole ratio of 0.5, since the increase of
the Ca2+/SDS mole ratio above this value leads to the decrease of the SDS precipitation rate.
This finding can be attributed to the fact that the reaction stoichiometry is shown to be 1:2
(Ca2+:DS)(Appendix B). The reaction of sodium dodecyl sulfate with calcium chloride
produces the calcium dodecyl sulfate (Ca(DS)2, CDS) which precipitates immediately.
Micelles act as sequestering agents for the calcium ions. As more Ca2+ is added to the system,
the additional cations tend to form more Ca(DS)2, reducing the dissolved SDS in the solution.
Although, the increase of Ca2+/SDS mole ratio beyond the value of 0.5 leads to a decrease of
precipitation rate as followed by electrical conductivity measurements (Fig. 5). The mole ratio
87
between surfactant and cation for the formation of precipitation results in different degrees of
charge neutrality of the precipitate. The degree of charge neutrality of the precipitate shows
different solubility. This is clearly shown by the decreasing yield of the precipitate with
increasing mole ratio of Ca2+ to SDS to from 0.5 to 1.7. This same phenomenon was observed
when precipitating SDS with a cationic surfactant (CPC) [38].
1,04
[Ca2+]/[SDS]=0.25
1,00 [Ca2+]/[SDS]=0.50
[Ca2+]/[SDS]=0.80
[Ca2+]/[SDS]=1.70
0,96
σ/σo
0,92
0,88
0,84
0,80
0 1 2 3 4 5 6
Time (min)
Fig. 5. Normalized electrical conductivity time course during the precipitation of the SDS at
30°C using CaCl2 at different mole ratios in presence of 1.2 mM of p-coumaric acid.
Micelles act as sequestering agents for the calcium ions. As more Ca2+ is added to the system,
the additional cations tend to form more Ca(DS)2, reducing the dissolved SDS in the solution.
Although, the increase of Ca2+/SDS mole ratio beyond the value of 0.5 leads to a decrease of
precipitation rate as followed by electrical conductivity measurements (Fig. 5). The mole ratio
between surfactant and cation for the formation of precipitation results in different degrees of
charge neutrality of the precipitate. The degree of charge neutrality of the precipitate shows
different solubility. This is clearly shown by the decreasing yield of the precipitate with
increasing mole ratio of Ca2+ to SDS to from 0.5 to 1.7. This same phenomenon was observed
when precipitating SDS with a cationic surfactant (CPC) [38].
However, CDS has a low solubility in solutions and cannot be directly recycled to the process.
It must be transformed to the monovalent salt (e.g. to SDS by adding Na2CO3) before it is re-
dissolved in water for recycle [39].
The crystals can be separated by a simple filtration and dried at high temperature or by silica
gel at room temperature overnight. The dried CDS can be then used in the MEUF process
88
efficiently but at high temperature since its Krafft temperature is 50°C [40]. The CMC of
CDS is approximately at 2.4 mM [29].
Conclusion
Micellar Enhanced Ultrafiltration was more effective to remove phenolic compounds from
model solution than nanofiltration. It was found that PES membranes adsorb phenolic
compounds. Consequently, the effect of pore size on adsorptive fouling was expected to be
very important. The rejection reached satisfactory levels (80%) under some conditions but the
use of the SDS involves a considerable decrease in the permeate fluxes.
A precipitation process was proposed to recover the surfactant from the retentate stream. Two
systems were tested, SDS/CaCl2/PCA and SDS/KCl/PCA. No substantial loss of p-coumaric
acid occurs during the precipitation since no significant change in the absorbance at the wave
length 285 nm before and after precipitation was observed for both systems. The elimination
and recuperation of the surfactant from the retentate will allow the recovery of pure phenolics
more efficiently. Further investigations are needed to enhance the rejection with small amount
of surfactant and to increase the permeate fluxes. Furthermore, the minimization of the
adsorption on the membrane surface can limit the adsorptive fouling.
Acknowledgments
The authors thank GEA Wiegand GmbH for its support and thank sincerely the Deutscher
Akademischer Austauschdienst (DAAD) which provided scholarships to the Moroccan
authors as a contribution to this work.
Appendix A
Reactions occurring though the dodecyl sulfate anion precipitation using KCl:
KCl K+ + Cl-
+ K+ +Na+
Appendix B
Reactions occurring though the dodecyl sulfate anion precipitation using CaCl2:
CaCl2 Ca2+ + 2Cl-
+ Ca2+
+2Na+
89
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91
Application de l’ultrafiltration assistée par micelles pour le traitement des

margines
(Micellar enhanced ultrafiltration process for the treatment of olive mill wastewater)
Résumé:
Les margines représentent un problème sérieux de pollution environnemental,
spécialement en Méditerranée, qui est la région principale de production d’huile d’olive à
l’échelle mondiale. L’impact environnemental des margines est lié à leur charge organique et
en particulier à l’action phytotoxique et antibactériale de leur contenu phénolique. Les
polyphénols sont également reconnus en tant qu’antioxydants puissants avec des propriétés
nutritionnelles et pharmacologiques intéressantes. Dans le présent travail, l’efficacité de
traitement des margines par ultrafiltration assistée par micelles (MEUF) pour la rétention et la
concentration des polyphénols, a été évaluée, en employant un tensioactif anionique
(dodécylsulfate de sodium, SDS) et une membrane hydrophobe de polyfluorure de vinylidène
(PVDF). La possibilité de rétention des composés phénoliques par ultrafiltration assistée par
micelles de SDS a été démontrée dans des travaux précédents sur des solutions modèles
contenant des composés phénoliques monocycliques à savoir le tyrosol, l’acide p-coumarique
et l’acide vanillique. Cette fois, la MEUF est testée sur des eaux usées réelles, les margines
issues d’une unité semi-moderne de trituration d’olive.
Les membranes de PVDF employées dans cette étude ont été préparées par la
technique d’inversion de phases, en utilisant le polyéthylène glycol (PEG) comme additif et le
N,N-diméthylacétamide (DMAc) comme solvant.
La concentration de gélation (Cg) de SDS a été déterminée théoriquement en suivant
les flux de perméat de l’UFAM en fonction de l’augmentation de la concentration de SDS
dans le rétentât en fonction du temps d’opération sous différentes pressions. La Cg moyenne
retrouvée était d’environ 28 fois la CMC (0,27 M). Cette valeur est plus importante
comparativement aux valeurs rapportées dans la littérature scientifique (0,87 M et 57 M).
Cette différence peut être justifiée par les variations des conditions expérimentales affectant la
concentration du tensioactif à la surface de la membrane (caractéristiques de la membrane,
température, pH, force ionique de la solution, …etc.). En outre, le PVDF possède des
propriétés ferroélectriques et il est électrostatiquement chargé. Par conséquent, certaines
interactions entre la membrane de PVDF et les solutés chargés peuvent avoir lieu favorisant
une formation rapide de gel.
92
L’effet des conditions opératoires sur le flux du perméat a été étudié. La résistance
membranaire secondaire crée par les molécules de SDS a été évaluée. Les flux initiaux
obtenus lors du traitement des margines par UFAM en employant 10 fois la concentration
micellaire critique (CMC) du SDS sont 25,7 et 44,5 l/m2.h respectivement sous une pression
transmembraine de 3,5 et 4,5 bar.
La rétention des polyphenols à différentes concentrations du tensioactif (0, 5 et 10
CMC) a été déterminée. Dans le cas du traitement des margines sans tensioactif (0 CMC de
SDS), la rétention ne dépasse pas 30%, et elle diminue en fonction de temps. Au cours de
l’UFAM, de plus en plus de solutés vont être déposées à la surface de la membrane
conduisant à une augmentation de la concentration des polyphénols et à une polarisation de la
concentration. Par conséquent, le transport convectif des composés phénoliques au coté de
perméat augmente, ce qui augmenterait la concentration des polyphénols dans le perméat.
Comme résultat, le taux de rétention diminue en fonction de temps. Le taux de rétention des
polyphénols sans tensioactif varie entre 5 et 28%, par contre, il atteint 74% avec l’emploi du
SDS à 10 CMC et à un pH optimal de 2.
Les flux initiaux obtenus lors du traitement des margines par UFAM sous une pression
transmembranaire de 3,5 bar et 4,5 bar étaient 25,7 et 44,5 l/m2.h, respectivement. Pourtant, le
flux de perméat mesuré après 160 min sous une pression de 4,5 bar montre une valeur plus
faible par rapport à celle enregistrée à 3,5 bar après la même durée. Le colmatage se
déclencherait entre 3,5 bar et 4,5 bar. La pression critique au dessous de laquelle le
phénomène de colmatage ne se manifeste pas se siturait dans cette zone. Dans notre cas cette
pression critique semble relativement élevée. Elle s’expliquerait par l’addition d’un tensioactif
anionique qui augmenterait la taille de particules suspensus des margines en favorisant leur
agrégation et floculation. Il a été démontré récemment que la distribution de taille de
particules peut avoir un effet considérable sur les valeurs de la pression critique.
En terme de dépollution, l’UFAM offre un perméat limpide (environ 88% de
décoloration), qui nécessite évidement moins de demande chimique en oxygène (DCO) pour
son oxydation (4,33% de la DCO initiale).
L’ensemble de ces résultats montre que la MEUF peut être appliquée efficacement
pour le traitement et la concentration des margines pour une récupération ultérieure de leur
contenu phénolique.
93
94
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102
CHAPITRE IV
TRAITEMENT ET CONCENTRATION DES MARGINES PAR

DISTILLATION MEMBRANAIRE ET OSMOTIQUE
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
Concentration des margines par distillation membranaire en vue d’une

récupération subséquente des composés phénoliques
(Concentration of olive mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery)
Résumé:
Dans cette partie, la possibilité de traiter et concentrer les margines par distillation
membranaire a été étudiée pour la première fois. L’objectif est d’obtenir un perméat d’eau
quasiment pure et un concentrât des margines enrichies en polyphénols, qui pourra servir pour une
extraction ultérieure. La distillation membranaire (DM) est un procédé de séparation dont la
température est la force motrice du transport de vapeur d’eau à travers une membrane microporeuse
hydrophobe.
Deux types des membranes polymériques commerciales, en polyvinilydène trifluroéthylène
(PTFE, TF200) et en fluorure de polyvinilydène (PVDF, GVHP), ont été testées. Les effets des
paramètres opératoires et des caracteristiques de chaque membrane sur la performance de la
distillation membranaire par contact direct (DCMD) ont été étudiés. L’efficience de la DCMD pour
le traitement et la concentration des margines a été évaluée en suivant le flux du perméat en
fonction du temps et les taux de rétention des composés phénoliques.
Les résultats obtenus démontrent la possibilité et l’efficacité du traitement et de
concentration des margines par distillation membranaire. La membrane TF200 montre un
coefficient de séparation élevé (99%) comparativement à la membrane GVHP (89%). Le facteur de
concentration des polyphénols des margines était 1,72 pour la membrane TF200, par contre pour la
membrane GVHP, le facteur de concentration ne dépasse par 1,4 après 9 heures de distillation.
Les coefficients de séparation des deux membranes diminuent en fonction du temps de
distillation. Cette diminution serait due aux phénomènes de colmatage et de polarisation de
concentration. Les margines étant un mélange complexe incluant des particules solides, huile,
sucres, protéines, macromolécules, polyphénols et beaucoup d’autres substances solubles, au cours
d’une opération de DM prolongée, des solutés vont être déposées sur la surface de la membrane en
conduisant à une augmentation de la concentration des polyphénols à la surface de la membrane
(polarisation de concentration), à un déclin des flux transmembranaire et à une diminution de la
selectivité de la membrane. Par conséquent, la concentration des polyphénols dans le perméat
103
augmente et le coefficient de séparation des polyphénols chute avec le temps. Ces résultats
démontrent pour la première fois la possibilité d’appliquer la distillation membranaire pour le
traitement et la concentration des margines en vue d’une valorisation ultérieure.
104
105
106
107
108
109
Traitement des margines par distillation membranaire en employant

différentes membranes de polytétrafluoroéthylène
(Treatment of olive mill wastewater by membrane distillation using polytetrafluoroethylene
membranes)
Résumé
Le procédé de distillation membranaire à contact direct (DMCD) a été appliqué pour
le traitement et la concentration des margines. Dans notre étude précédente, nous avons pu
constater les performances de la membrane de polytétrafluoroéthylène (PTFE) pour le
traitement des margines comparativement à la membrane en PVDF. Nous avons alors testé
trois membranes polymériques commerciales en PTFE avec différentes tailles de pores
(TF200 de 0.2 µm, TF450 de 0.45 µm et TF1000 de 1 µm) sous différentes températures
(différences de température et températures moyennes entre les deux cotés de la membrane).
L’objectif de cette étude est la sélection de la meilleure membrane en terme de taille
de pores pour le traitement des margines en vue d’une production d’eau quasiment pure et un
concentrât phénolique. Une bonne membrane pour la DMCD doit montrer une faible
résistance membranaire au transfert de masse, une pression d’entrée d’eau liquide élevée pour
garder les pores membranaires secs, une faible conductivité thermique pour éviter la perte de
chaleur à travers la matrice membranaire, une bonne stabilité thermique et en fin une
résistance chimique excellente. Dans cette étude, une vitesse d’agitation relativement faible
(500 rpm) a été appliquée dans les deux compartiments pour réduire l’épaisseur des couches
établies au voisinage des deux surfaces de la membrane (déposition de la particule, couche de
polarisation et de transition de température).
Une série d’expériences de DCMD de l’eau distillée comme aliment, a été réalisée à
différentes températures moyennes de 20°C à 50°C en gardant la
différence de température entre les deux cotés de la membrane constante et
égale à 10°C. Les résultats obtenus montrent que les flux de perméat augmentent avec
l’augmentation de la température moyenne pour les trois membranes étudiées, de moins de 5
L/h.m² à plus de 30 L/h.m² après une augmentation de la température moyenne de 20°C à
50°C. Aussi, quand la température de l’aliment (margines) a été augmentée de 25°C à 55°C
les flux ont aussi augmenté de 5 L/h.m² aux environs de 18 L/h.m². Cette augmentation est
due à un accroissement exponentiel de la pression de vapeur d’eau avec la température.
110
L’effet des variations de la différence de température entre les deux cotés de la

membrane sur les flux de perméat a été aussi évalué en changeant la température de l’aliment
(eau distillée) et en gardant la température de perméat constante à 20°C. Les résultats
démontrent que les variations des flux en fonction de la température suivent une équation
exponentielle d’Arrhenius. Aussi, nous avons enregistré des flux plus élevés pour les
membranes qui ont des pores plus larges. Les flux de perméat enregistrés étaient : 8,97 ; 9,03
et 10,62 L/h.m² pour TF200, TF450 et TF1000, respectivement.
Le traitement des margines par DMCD a été conduite sous différentes températures de
l’aliment (margines) de 30ºC à 70ºC, en gardant la température de perméat constant à 20ºC.
Les flux de perméat enregistrés par les expériences de DMCD des margines ont été nettement
inférieurs à ceux enregistrés durant les expériences avec l’eau distillée (7,68-8,84 L/h.m²
comparés à 8,97-10,62 L/h.m²). Ceci est attribué à la pression de vapeur faible des margines à
cause de la présence de différentes solutés en plus de l’effet de la polarisation de
concentration. De plus, l’accroissement exponentiel des flux de perméat en fonction de la
température pour l’eau distillée était plus importante par rapport aux expériences réalisées sur
les margines.
La diminution du flux de perméat en fonction du temps lors du traitement des
margines est due à l’effet cumulatif de la concentration des margines avec le temps, la
polarisation de concentration et de température, et le phénomène de colmatage. En outre, le
déclin observé des flux peut être aussi due partiellement aux interactions électrostatiques qui
peuvent avoir lieur entre la surface de la membrane et les solutés des margines en favorisant
le colmatage de la membrane par formation d’une couche adsorptive sur la surface de la
membrane. Pour comparer la performance des trois membranes, nous avons procédé au calcul
d’un indice de performance de membrane (IP) qui consiste en le produit du facteur de
concentration et le flux de perméat en fonction de temps.
Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes de PTFE
permet la concentration du contenu phénolique des margines jusqu’à 1,78 fois après 8 heures
de distillation, aboutissant à un indice de performance meilleur pour la membrane TF1000,
montrant la taille de pore la plus large. Le choix d’une membrane adaptée au traitement des
margines par DMCD doit prendre en considération à la fois la sélectivité et la perméabilité.
Les trois membranes testées montrent des flux raisonnables avec des facteurs de séparation
très élevés, au voisinage de 100 % durant les premières 8 heures de traitement des margines
par DMCD.
Par ailleurs, l’effet du traitement des margines à températures élevées sur le contenu
111
phénolique et son activité antioxydante (test de DPPH) a été évalué en fonction du temps de
traitement. Les résultats obtenus ne montrent aucun effet indésirable de la température élevée
sur le contenu phénolique ou sur son activité antioxydante.
Finalement, il est à noter que les trois membranes employées dans cette étude sont
conçues pour être appliquées à la microfiltration. Ces membranes montrent des flux de
perméat raisonnables lors de la DMCD et peuvent être appliquées avec succès pour le
traitement des margines. Ainsi, le perméat issu de la DMCD des margines peut être réutilisé
dans le procédé de trituration des olives.
112
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119
Traitement intégré des margines par distillation membranaire à contact direct

(Integrated direct contact membrane distillation for olive mill wastewater treatment)
Résumé:
Il parait clairement qu’une amélioration des flux de la DM des margines s’impose
avant d’envisager une application industrielle du procédé. Un tel objectif peut être atteint par
une optimisation des paramètres opératoires mais également par une réduction de la charge
colmatante des margines. Ainsi, des margines issues d’un procédé semi-moderne de
trituration d’olive ont été prétraitées par afin d’éliminer les matières en suspensions avant
d’être concentrées par distillation membranaire à contact direct (DMCD). Les expériences ont
été effectuées en utilisant des membranes plates commerciales de polytétrafluoroéthylène
(TF200) avec une taille de pore moyenne de 0.2 µm. L’effet de la température moyenne, de la
différence de température et de prétraitements (coagulation/floculation ou microfiltration,
MF) sur le flux du perméat a été étudié.
Dans le but d’améliorer les performances du procédé, de réduire le colmatage de la
membrane, et de produire un concentrât phénolique relativement propre, les particules larges
présentes dans les margines ont été éliminées avant le traitement des margines par DMCD.
Deux méthodes différentes de prétraitement ont été testées à savoir la coagulation/floculation
et la microfiltration. Les flux de perméat de la DMCD des margines brutes et des margines
prétraitées ont été comparés en vue de sélectionner le meilleur prétraitement. Les flux initiaux
de perméat, des margines brutes prétraitées par coagulation/floculation et prétraitées par
microfiltration (MF) sont 5,6 ; 6,9 et 7,7 L/m².h, respectivement. En conséquence, le flux de
perméat lors du traitement des margines par DMCD a été amélioré considérablement après
prétraitement par microfiltration comparée à la coagulation/floculation. Ce dernier
prétraitement a permis la réduction d’environ 23% des solides totaux (ST) des margines. Le
contenu phénolique des margines a été aussi réduit de 20%. Par contre, quant au prétraitement
des margines par MF en utilisant une membrane de TF200, les ST ont été réduits de 30% et
les composés phénoliques d’environ 5%.
Le colmatage de la membrane durant le traitement des margines par DMCD avec ou
sans prétraitement a été évalué en calculant la valeur absolue de la pente de la ligne de
régression du flux de perméat en fonction de temps. Les valeurs obtenues sont considérées
comme un indice de colmatage. Les petites valeurs indiquent une diminution faible du flux de
perméat durant le traitement des margines par DMCD. Les indices de colmatage des
120
membranes lors du traitement des margines brutes, des margines prétraitées par
coagulation/floculation et par MF sont : 0,39 ; 0,25 et 0,18, respectivement. Le prétraitement
des margines par MF a permis une réduction du phénomène de colmatage comparativement
au prétraitement par coagulation/floculation. Ainsi, la microfiltration a été adoptée comme
prétraitement optimale pour la suite des expériences. Les résultats obtenus pour les flux de
perméat montrent une augmentation avec l’accroissement de la température du compartiment
des margines. Les flux de perméat a augmenté de 5,0 à 29,6 L/m2h pour la distillation de l’eau
et de 4,6 à seulement 15,4 L/m2h pour les margines, lorsqu’on a augmenté la température de
l’aliment (margines) de 30ºC à 60°C, respectivement. La température du compartiment de
perméat a été gardée constante (20ºC).
Des facteurs de concentration de 1,5 et 1,7 fois ont été obtenus après 8 h de DMCD
quand la différence de température est ajustée à 20ºC et à 30ºC, respectivement. Le taux de
séparation était très proche de 100% durant les six premières heures de traitement des
margines. Après 8h de traitement, le facteur de séparation atteint environ 99% pour ∆T =
20°C. La concentration des polyphénols dans le perméat est restée pratiquement nulle durant
le traitement.
Le profil phénolique des margines avant et après concentration par DMCD a été
déterminé par HPLC. L’Hydroxytyrosol qui est l’un des antioxydants les plus puissant présent
dans les margines, représente environ 53% du contenu phénolique total des margines.
D’autres composés phénoliques (3,4-dihydroxyphénylglycol, acide gallique, acide acétique p-
dihydroxyphényl, tyrosol, oleuropéine et acide férulique) ont été aussi détectés. La
concentration de l’hydroxytyrosol était 4 g/L dans les margines avant traitement par DMCD.
Elle a augmenté considérablement (deux fois de plus) pour atteindre 8,18 g/L dans le retentât
après 76 h de traitement et concentration par DMCD. Le même profil phénolique (excépté
l’oleuropéine) a été observé dans le perméat mais à des concentrations très faibles.
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Traitement des margines brutes par distillation osmotique et

distillation membranaire osmotique
(Treatment of crude olive mill wastewaters by osmotic distillation and osmotic membrane
distillation)
Résumé:
Considérant la possibilité d’extraction des polyphénols des margines, et afin de palier
à l’inconvénient majeur (faiblesse des flux) dont soufre la distillation membranaire. La
distillation osmotique, tout en gardant les avantages de la distillation membranaire, pourrait
offrir des flux plus importants. Dans le cas de la distillation membranaire osmotique, la
différence de pression de vapeur des deux cotés de la membrane peut être générée par
différence de température et/ou par pression osmotique. Dans le cas où la pression osmotique
est la force motrice de transport de vapeur d’eau, le procédé est appelé distillation osmotique
(DO). La distillation osmotique (DO) est une variante de la distillation membranaire (DM),
opérée à des températures basses. Or, plusieurs auteurs considèrent le procédé de DO comme
un procédé différent de la distillation membranaire. Pour cela, on trouve dans la littérature
scientifique à coté de la distillation osmotique, d’autres appellations telles que la distillation
membranaire isothermique (DMI), la distillation membranaire osmotique (DMO),
l’évaporation osmotique (EO) ou bien la distillation osmotique membranaire (DOM).
Dans cette étude, nous avons vérifié la possibilité d’appliquer la distillation osmotique
pour le traitement et la concentration des margines en utilisant des membranes polymériques
en polytétrafluoroéthylène (PTFE) avec des tailles moyennes de pores différentes (TF200, 0,2
µm; TF450, 0,45 µm et TF1000, 1 µm) à 30°C (±0.1°C). Le chlorure de calcium (5 M) a été
employé en tant qu’agent osmotique dans le compartiment du perméat. L’effet des conditions
opératoires sur les flux de perméat, le colmatage de la membrane et sur la performance du
système en entier, a été étudié. Finalement, un procédé hybride couplant la distillation
membranaire à la distillation osmotique (distillation membranaire osmotique, DMO) a été
appliqué pour le traitement et la concentration des margines pendant 30 heures. L’efficacité
du procédé en termes de flux et de séparation et concentration des composés phénoliques a été
évaluée.
Les résultats montrent que les membranes en PTFE offrent des flux raisonnables (2,9-
4,2 L/h.m2). Les facteurs de concentration obtenus des margines étaient de l’ordre de 1,2
130
après 280 min de distillation osmotique des margines à 30°C. Le contenu phénolique total
(CPT) des margines a été suivi en fonction de temps lors de traitement des margines par
distillation osmotique et il a atteint une concentration de 9,7 g/L. Par contre, dans le perméat
la présence de composés phénoliques a été détectée après 15 heures de traitement des
margines. La concentration des composés phénoliques des margines à la fin de l’expérience
était d’environ 0,045 g/L. L’augmentation de CPT des margines (aliment) en fonction du
temps est devenue très lente après 20 h de distillation. Ce ralentissement est attribué à la chute
des flux de perméat durant les dix dernières heures de traitement.
Par ailleurs, durant la DMO, la solution saline du compartiment perméat se dilue d’une
façon continue par le permeat ce qui diminue la pression osmotique générée par la
concentration initiale en sels (CaCl2) et par conséquent le flux de perméat chute en fonction
de temps. En plus, les margines deviennent de plus en plus concentrées en fonction du temps
et l’évaporation de l’eau des margines sous l’effet du gradient osmotique devient de plus en
plus difficile avec l’augmentation de la viscosité et de la concentration de l’aliment (les
margines). Malgré ces limites, le facteur de concentration des polyphénols des margines
obtenu a atteint 1,9 et la séparation reste au voisinage de 100% jusqu’à la fin de l’expérience.
La solution de perméat reste presque incolore mais odorante témoignant de l’entrainement par
vapeur – à travers les pores de la membrane – des composés volatiles des margines.
Les flux initiaux de perméat des margines augmentent considérablement lorsqu’on
augmente la température de 20° à 40°C. Les variations observées des flux de l’eau à des
températures différentes sont dues principalement à la relation entre la température et la
pression de saturation de vapeur d’eau, et non aux changements intrinsèques de la
perméabilité de la membrane.
Le transfert de masse à travers les pores des membranes est directement proportionnel
à la taille des pores de la membrane, sa porosité est inversement proportionnel à l’épaisseur de
la membrane et sa tortuosité. Les résultats montrent que les flux de perméat augmentent
proportionnellement avec la taille des pores des membranes. Cette augmentation de flux était
très remarquable à 40°C où les flux de perméat des margines ont augmenté de 3,5 à 5,2
L/h.m², quand on a augmenté la taille de pores de 0,2 µm (TF200) à 1 µm (TF1000). Durant
le procédé de la DO, une couche de polarisation de concentration est créée à cause de
l’augmentation de la concentration des solutés sur la face de la membrane en contact avec les
margines. Sur la face opposée, la polarisation de concentration est due à la dilution
progressive de la concentration de l’agent osmotique ce qui engendre une chute de la pression
de vapeur d’eau et par conséquent une chute des flux.
131
Les flux de perméat diminuent en fonction de temps, mais cette diminution était plus
importante dans le cas de la membrane TF1000. Les flux de perméat ont chuté de 15%, 13%
et 26% des flux initiaux de DO, après 280 min de traitement des margines sur TF200, TF450
et TF1000, respectivement.
Dans les deux extrémités de pores membranaires, s’établi un équilibre liquide-vapeur
donnant lieu à une différence partielle de pression de vapeur d’eau qui diffuse à travers les
pores. En effet, le transport de l’eau implique une évaporation du côté des margines et une
condensation au côté de perméat. Par conséquent, une différence de température est créée en
réduisant la différence de pression de vapeur à travers la membrane ce qui génère une force
motrice de transport d’eau (vapeur). L’effet de la température sur l’évaporation à travers les
pores de la membrane sous des conditions isothermiquse peut être expliqué par le fait que la
densité de l’eau est dépendante de sa température. Pour cela, quand on augmente la
température de l’eau, elle devient moins dense et son évaporation à travers les pores devient
plus facile.
La DO et la DMO peuvent aussi être appliquées pour la production d’une eau
quasiment propre. L’eau produite est appropriée pour une réutilisation en agriculture ou en
industrie. Aussi, le concentrât des margines peut être considéré comme une source de
composés à haute valeur ajoutée tels les composés phénoliques. Le résidu obtenu après
extraction des composés phénoliques peut aussi être valorisé en agriculture en tant que
fertilisant grâce à sa charge en matières organiques.
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CHAPITRE V
EXTRACTION MICELLAIRE DES COMPOSES PHENOLIQUES DES

MARGINES
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
Extraction des composés phénoliques par point de trouble à partir des margines
prétraitées
(Cloud Point Extraction of Phenolic Compounds from Pretreated Olive Mill Wastewater)
Résumé:
Les margines constituent une source riche en antioxydants naturels puissants. Une méthode
d’extraction basée sur l’emploi des tensioactifs non-ioniques a été testée pour récupérer et
séparer les composés phénoliques à partir de margines prétraitées. Cette technique est appelée
extraction par point de trouble ‘cloud point’ (CPE) ou extraction à deux phases aqueuses. Les
tensioactifs employés dans cette technique sont biodégradables et présentent l’avantage d’être
moins toxiques comparativement aux solvants utilisés dans les méthodes classiques
d’extraction liquide-liquide.
Au-dessus d’une température appelée point de trouble, la solution aqueuse de
tensioactifs non-ioniques se sépare en deux phases : une phase concentrée dite « coacervat »
et une phase diluée. Grâce aux propriétés d’adsorption et de solubilisation micellaire, les
composés organiques moins hydrophiles se solubiliseront des les micelles des tensioactifs
non-ioniques et peuvent après séparation des phases à une température au dessus du point de
trouble être extraits des margines et concentrés dans le coacervat. Ce coacervat servira par la
suite à l’isolement des composés phénoliques après leur dissociation des micelles de
tensioactif.
Des échantillons de margines issues d’une unité semi-moderne de trituration d’olive
ont été prétraités par ultrafiltration sur des membranes de polyethersulphone (PES) d’un seuil
de coupure moléculaire de 50 kDa. L’efficacité de prétraitement des margines par
ultrafiltration à réduire l’intensité de la couleur foncée des margines (gênante pour la méthode
d’extraction par point de trouble), la matière en suspension, le résidu sec, et la demande
chimique en oxygène (DCO), a été évaluée. Tant que la valorisation des margines par
extraction de leur contenu phénolique est visée, un prétraitement efficace doit réduire au
maximum la charge organique des margines en produisant des margines limpides pour une
visualisation facile des phases. Cependant, la concentration des margines prétraitées en
composés phénoliques doit être gardée aussi élevée que possible.
L’ultrafiltration des margines a donné lieu à une réduction de l’intensité de couleur
d’environ 80 et 87 % telle qu’estimée par mesure de la densité optique à 395 et 465 nm,
139
respectivement. La DCO et le résidu sec des margines ont été aussi réduits de 31,4 % et 27,6
%, respectivement. Une faible réduction du contenu phénolique des margines a été enregistrée
(<10 %).
Le Triton X-100 (tensioactif non-ionique) a été employé dans des concentrations allant
de 1 à 10 % (p/p) et sous des températures au dessus de sa température de trouble (70°, 80° et
90°C). Après 30 minutes de séjour à la température choisie, le mélange se sépare en deux
phases: une phase diluée et une phase concentrée en tensioactif et petites molécules
organiques dont les composés phénoliques. L’efficacité de la méthode d’extraction par point
de trouble a été évaluée en déterminant le volume des deux phases et leur concentration en
composés phénoliques.
Les résultats obtenus montrent la possibilité d’extraire jusqu’à 66,5 % du contenu
phénolique des margines en un seul cycle d’extraction. Le rendement le plus élevé
d’extraction des polyphénols a été obtenu lors de l’emploi de 10 % du Triton X-100 à 90°C.
Les résultats de modélisation des fractions volumiques et du taux de récupération (R%) par la
méthodologie des surfaces de réponse étaient en parfaite corrélation avec les données
expérimentales.
Dans l’intervalle des concentrations de Triton X-100 étudiées (0 to 10%), le
coefficient de partage augmente avec l’augmentation de la concentration en tensioactif. A une
concentration donnée, l’élévation de la température améliore considérablement le coefficient
de partage. Ainsi, à 10 % de Triton X-100, le coefficient de partage obtenu est passé de 3,7 à
70°C pour atteindre 13,4 à 90°C. L’élévation de la température améliore davantage la
solubilité des composés phénoliques dans la phase de tensioactif et par conséquent améliore
leur extraction. En augmentant la température, des volumes plus petits de coacervat ont été
obtenus et également des coefficients de partage plus élevés ont été enregistrés. A des
températures dépassant 80°C, le taux d’extraction des composés phénoliques semble être
proportionnel aux concentrations de tensioactif. Par contre, à 70°C, et particulièrement à des
concentrations en tensioactif supérieures à 5 %, l’extraction montre moins de dépendance vis-
à-vis la concentration du tensioactif. Les taux moyens de récupération (R%) obtenus avec 10
% du Triton X-100, étaient 46,4 ; 63,9 et 66,5 % respectivement à 70° ; 80° et 90°C.
Le coacervat étant moins hydrophile que la phase aqueuse, l’extraction serait plus
favorable pour les composés organiques les plus hydrophobes présents dans les margines tels
les composés phénoliques. Le Triton X-100 peut engager des interactions type liaisons
hydrogène avec les composés phénoliques et contribuer à leur concentration dans la phase
riche en tensioactif. Une fois ces laissons hydrogènes brisées, les composés phénoliques libres
140
vont être resolubilisés dans la phase aqueuse du coacervat. Ainsi, une modification du pH du
coacervat vers un pH alcalin au dessus du pKa des composés phénoliques (qui sont en
majorité des acides faibles) favorisera la libération des composés phénoliques et leur
isolement de la phase concentrée. Les composés phénoliques sont ainsi récupérés du
coacervat en ajustant le pH à 10 par une solution de NaOH (2M) et en incubant la solution à
70°C pour 20 min pour obtenir deux nouvelles phases: une phase limpide claire riche en
tensioactif et une petite phase aqueuse de couleur marron rougeâtre foncée riche en composés
phénoliques. Environ 54 % des composés phénoliques ont été libérés du coacervat. Ainsi, le
rendement global d’extraction des composés phénoliques est estimé à 32 %.
A la lumière de ces résultats nous pouvons affirmer que l’extraction par point de
trouble se présente comme une alternative aux systèmes conventionnels d’extraction liquide-
liquide, car elle offre l’énorme avantage d’exclure totalement l’utilisation de solvants
organiques souvent volatils, inflammables et toxiques.
141
CLOUD POINT EXTRACTION OF PHENOLIC COMPOUNDS FROM
PRETREATED OLIVE MILL WASTEWATER
Abdelilah El-Abbassi, Hajar Kiai and Abdellatif Hafidi*
Food Sciences Laboratory, Department of Biology, Faculty of Sciences – Semlalia, Avenue of

Prince Moulay Abdellah, P.O. Box 2390, 40090 Marrakesh, Morocco.
Abstract
Olive mill wastewater (OMW) causes many environmental problems, mainly in the
Mediterranean area. The phenolic content of OMW is principally responsible for the
phytotoxicity and microbial growth inhibitory effects. However, these effluents can be
considered as a source of powerful natural antioxidants. Cloud Point Extraction method was
used to recover and separate phenolic compounds from pretreated olive mill wastewater. The
OMW samples were ultrafiltred on 50 kDa polyethersulfone (PES) membrane. The Triton X-
100 was used as surfactant at concentrations ranging from 1 to 10 % (w/w). Three
temperatures (70°, 80° and 90°C) above the cloud point temperature of the surfactant were
tested. After 30 minutes at the desired temperature the mixture form two phases: a diluted
phase and a concentrated phase called coacervate. The efficiency of the extraction was
evaluated by determining the phenolic compounds concentration and the volume of the both
phases. The obtained results show the possibility to extract up to 66.5 % of the phenolic
content from OMW using one step CPE. The highest yield was obtained when using 10 % of
Triton X-100 at 90°C. The results obtained for volume fraction (ϕc) and rate of recovery
(R%), by response surface methodology were in agreement with the experimental data. The
results show that the CPE can be an efficient alternative to the classic methods of extraction
since it can offer a mixture of natural antioxidants suitable for pharmaceutical, cosmetic or
food applications.
Keywords: olive mill wastewater, cloud point extraction, phenolic compounds, Triton X-100.
*Corresponding author. Tel.: +212 524 434 649 (Office: 515); fax: +212 524 436 769. E-mail
addresses: a.hafidi@ucam.ac.ma, hafidi.abdellatif@googlemail.com (A. Hafidi).
142
Abbreviations
Nomenclature
OMW olive mill wastewater
CMC critical micellar concentration
COD chemical oxygen demand
TPC total phenolic content
CPE cloud point extraction
Symbols
T temperature (°C)
C concentration of phenolic compounds (g/l)
V volume (l)
Tc cloud point temperature (°C)
R recovery (%)
ϕc volume fraction of the coacervate (-)
KC/D partition coefficient (-)
fc concentration factor (-)
143
1. Introduction
The continuous three-phase olive oil extraction generates large quantities of olive mill
wastewaters, which cause serious environmental problems. These extraction systems are still
widely used in olive oil mills, especially in Morocco. It is widely acknowledged that the
phytotoxic and antimicrobial effects of OMW are mainly related to the naturally-occurring
phenolic fraction. The olive fruit is very rich in phenolic compounds, but only about 2 % of
the total phenolic content of the olive fruit dissolves in the oil phase, while the remaining
amount is lost in the OMW (53 %) and the pomace (45 %) [1]. Partition coefficients
(oil/water) of most olive phenols, ranging from 6 × 10−4 to 1.5 [1], are clearly in favour of the
water phase.
Several methods have been developed aiming the extraction and purification of phenolics
from OMW, including membrane technologies, liquid-liquid extraction and solid-liquid
extraction, most of them are under patent protection [2-5].
The liquid-liquid extraction exhibits important restrictions and drawbacks related to the use of
expensive, toxic and inflammable organic diluents. Almost all methods proposed to treat and
valorise OMW remain not adopted mainly because of practical/economic reasons. Owing to
the small scale and dispersed nature of the olive mills and the seasonality of the process,
choosing a proper technique is a real challenge.
In the last decade, increasing interests on the use of aqueous micellar solutions in the field of
separation science have been observed. Above a specific temperature, aqueous solution of a
non-ionic surfactant becomes cloudy. With further increase of temperature, solution separates
in two phases: a phase containing high concentration of the surfactant called surfactant-rich
phase or coacervate and the other is bulk aqueous solution containing surfactant concentration
slightly above the critical micelle concentration (CMC) and called the diluted phase [6]. This
temperature is known as the cloud point temperature (Tc) of the surfactant. The solute present
in aqueous solution of non-ionic surfactant is distributed between the two phases [6]. This
phenomenon is known as cloud point extraction (CPE). During the last two decades, scientists
developed its potential, adding more applications. Thus, numerous studies were published
covering its theoretical background and especially proposing CPE methodology for the
preconcentration of trace elements prior to analysis mainly related to pollution, toxicology
and food quality assessments [7-13].
However, works related to the use of CPE for the extraction of valuable organic substances
remain relatively scarce. Gortzi et al. [14] tested the ability of a surfactant (Genapol X-080) to
recover individual and mixtures of phenols and tocopherols in various concentrations from
144
model aqueous solutions, before its application for the recovery of phenols from olive mill
wastewater. This unique work testing the CPE method directly on OMW reported extraction
yields up to 98 % for some phenolic compounds and up to 75 % of the total phenolic content
in a one step extraction. In the present work, we applied CPE method for the extraction of
phenolic compounds from an ultrafiltred sample of OMW. Response surface methodology
was applied for the optimization of the recovery of phenolic compounds from OMW using the
Triton X-100 as a non-ionic surfactant at different concentrations and at different
temperatures above its cloud point temperature.
2. Experimental
2.1. Chemical
Polyethylene glycol p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-phenyl ether (Triton X-100), Folin-ciocalteu
Reagent, ethyl acetate, hexane methanol anhydrous sodium carbonate (Na2CO3) were
purchased from Sigma-Aldrich (Germany). Hydrochloric acid (HCl) and sodium hydroxide
(NaOH) were purchased from Merck (France). All the other chemicals were also purchased
from Sigma-Aldrich and were prepared in distilled water except the Tyrosol standard
solutions that were prepared in methanol 80%.
2.2. OMW samples
Samples were collected from a continuous three-phase extraction system in the region of
Marrakech (Morocco) in the season of 2009/2010 and were stored in the dark at room
temperature until use. As far as OMW contains high amounts of total suspended solids, a
pretreatment is needed. These particles may affect phase separation, phenolic compounds
extraction and also may be extracted partially into the coacervate and consequently increases
its fraction volume, which is one of the main parameters used for the evaluation of the CPE
efficiency. For these raisons, the OMW samples were pretreated by ultrafiltration prior to the
CPE implementation. The characterization of OMW samples before and after pretreatment
was performed as follow:
- pH and electrical conductivity (CE): were determined directly on fresh olive mill wastewater
samples using Multilab P5 (WTW, Germany).
- Total phenolic content (TPC) was determined in samples following the Folin-Ciocalteu
spectrophotometeric method according to Singleton and Orthofer [15] using tyrosol as
standard. The methanolic extract (0.1 ml) in a volumetric flask was diluted with distilled
water (3.4 mL). Folin–Ciocalteu reagent (0.5 mL) was added and the contents of flask were
mixed thoroughly. After 3 min, 1 ml of 20 wt% anhydrous sodium carbonate solution was
added, and then the mixture was allowed to stand for 1 h in the dark. The optical density of
145
the blue-coloured samples was measured at 765 nm. The TPC was determined as tyrosol
equivalents (TYE) and values are expressed as g of TYE/L of OMW.
- Chemical oxygen demand (COD) was determined by the dichromate method as described by
LaPara et al. [16]. An appropriate amount of wastewater samples was diluted up to 100 times
and introduced into a lab-prepared digestion solution containing potassium dichromate,
sulphuric acid and mercuric sulphate, the mixture was then incubated for 120 min at 150°C in
a COD reactor (Model WTW CR3000, Germany). COD concentration was measured
colourimetrically at 600 nm using a MultiLab P5 (WTW, Germany). The standard solutions
of 1 to 4 g of O2 per litter were prepared using the potassium biphthalate. All measures were
done in triplicate.
2.3. OMW pretreatment by ultrafiltration
Ultrafiltration (UF) was carried out at room temperature in a stirred cross-flow ultrafiltration
cell (AMICON 8200, Millipore USA) with 200 ml of volume. A polyethersulfone membrane
(MicrodynNadir, Germany) with a molecular weight cut-off of 50 kDa (UH050, data sheet:
http://www.microdyn-nadir.de/cms/pdf/produkte/en/1_katalog_engl_rz_screen.pdf) was used.
The effective area of the membrane is 28.7 cm2. The transmembrane pressure was kept at 3
bar using a nitrogen cylinder and the stirring rate was set at 250 rpm.
2.4. Cloud point temperature determination
The cloud point temperature (Tc) is the temperature at which dissolved surfactant is no longer
completely soluble, precipitating as a second phase resulting in a decrease of the water phase
viscosity. Thus, the measurement of viscosity against temperature can be used for Tc
estimation. The determinations of the Tc in water and OMW was carried out using a SV-10
vibro-viscometer (Malvern Instruments Ltd, Japan), temperature of the sample placed in the
measurement cell was measured using a precise sensor placed in the apparatus. The
temperature of the solution was controlled using water jacket connected to a recirculating
water bath. The thermostat was set to 90°C and the recirculating flow was set to a low speed
to ensure a slow increase of the temperature in the measurement cell. The viscosity was then
monitored against temperature and the Tc was considered as the temperature at which the
viscosity drops suddenly.
2.5. Phenolic compounds recovery from OMW by CPE
A mother solution of 20 % Triton X-100 in ultrafiltred OMW was prepared and homogenized
by magnetic stirring (300 rpm) at 50°C over a night. This solution was used to prepare 3
series of tubes with 0 to 10 % of Triton X-100 in ultrafiltred OMW, the final volume of each
tube was 10 ml. The tubes were then vortexed and incubated for 30 min in a water bath at 70,
146
80 or 90°C. Once the tubes were taken out from the bath, they were left to settle for 4 hours at
room temperature until a clear separation of two phases. The volume of each phase was
measured and the total phenolic content of the diluted phase was extracted by ethyl acetate
and determined colourimetrically using Folin-Ciocalteu method.
The efficiency of the extraction was evaluated according to three parameters: percentage of
recovery (R%), volume fraction of the coacervate (ϕc), and finally partition coefficient of
phenolic compounds between the coacervate and the diluted phase (KC/D). The choice of
optimal operating conditions results from a compromise between all these five parameters.
The phenols recovery was calculated using the following equation:
CcVc C V − CDVD
R% = ×100 = o o ×100 (1)
CoVo CoVo
where Co represents the phenol initial concentration in the ultrafiltred OMW-surfactant
mixture of volume Vo, CD represents the phenol concentration in the water phase of volume
VD and CC represents the phenol concentration in the surfactant concentrated-phase of volume
VC.
The volume fraction is the volume ratio of the coacervate volume (VC) to the initial volume
(Vo):
VC
φc = (2)
Vo
The partition coefficient was calculated as the ratio of the total phenolic compounds
concentration in the coacervate to the total phenolics concentration in the diluted phase.
CC
KC / D = (3)
CD
Then, high partition coefficients reveal that more phenolic compounds were extracted in the
coacervate.
The concentration factor was calculated as the ratio of the phenolic compounds concentration
in the coacervate to the initial concentration of the phenolic compounds in the OMW:
CC
fC = (4)
Co
The major phenolic compounds naturally occurring in OMW are weak acids, which can be
deprotonated by increasing the medium pH leading to a complete dissociation of the phenols
and their dissolution in the aqueous phase. So, the coacervate treated with NaOH, can be
147
separated into two new phases at a temperature above Tc: a small aqueous phase and a new
coacervate containing the surfactant.
2.6. Experimental design
The optimization of the experimental conditions of the phenolic compounds recovery by CPE
from pretreated OMW was achieved using the response surface methodology (RSM). RSM
consists of (i) a design of experiments to provide adequate and reliable measurements of the
response, (ii) a development of a mathematical model showing the best fit to the data obtained
from the experimental design, and (iii) a determination of the optimal values of the
independent variables that produce maximum or minimum values of the response [17].
The RSM was used to evaluate the effects of surfactant concentration (CTX), and temperature
(T) on the coacervate volume fraction (ϕc) and phenolic compounds recovery (R%).
Surfactant concentration varied between 0 and 10 % (w/w) and the equilibrium temperature
varied between 70° and 90°C.
Data were adjusted using STATISTICA 8.0 software to a response surface Z (ϕc and R%):
Z = a0 + a1CTX + a2T + a11CTX

2
+ a12CTX T + a22T 2
where a0 is the value of the objective function under the central point conditions, a1, a2, a11,
a22, represent the principal effect associated with each variable and a12, represent the crossed
effects among variables.
3. Results and discussion

3.1. Pretreatment of OMW
The efficiency of OMW pretreatment to decrease the dark colour of OMW, the dry residue
and the chemical oxygen demand was evaluated by estimating the reduction rate of each
parameter. As far as a valorisation of the OMW through phenolic compounds extraction is
aimed, an efficient pretreatment should reduce as much as possible the organic load to allow
the most limpid OMW with an easy visualization of phases while, the total phenolic content
must remain as high as possible.
The ultrafiltration pretreatment using a 50 kDa MWCO membrane, resulted in a colour
intensity reductions of about 80 and 87 % as estimated at 395 and 465 nm, respectively (Table
1). The COD and the dry residue were reduced by 31.4 and 27.6 %, respectively. Our results
revealed a slight reduction of OMW phenolic content (<10 %, Table 1).
148
Table 1 – Main physicochemical characteristics of OMW before and after pretreatment by

ultrafiltration.
Parameter Unit Raw OMW Pretreated OMW Reduction (%)

pH - 4 4.1 -
Electrical Conductivity mS/cm 35.1 36.7 -
Dry Residue g/l 119 86 27.6
Total Phenolic Content g/l 10.13 9.15 9.6
Chemical Oxygen Demand g of O2/l 156 107 31.4
Color* (at 395nm) - 1.33 0.27 80
Color* (at 465nm) - 0.90 0.12 87
*absorbance was measured after dilution of samples 100 times against distilled water
3.2. Cloud point temperature (Tc) determination

The Tc of Triton X-100 in water is 67°C [18]. However, a lower value (64.9°C) was estimated
using viscosity measurements (Fig. 1). As shown in figure 1, the Tc of Triton X-100 in OMW
is significantly lower than in water (59°C versus 64.9°C). It has been reported that additives
may raise or lower the cloud point of non-ionic surfactants. Their effects may be linear or
nonlinear, and theoretically complicated phenomenon. Electrolytes usually lower the Tc
through dehydration and electrostriction [18].
2,4 Water + 5%TX100

OMW + 5%TX100
OMW
2,0 64.9°C
Water
Viscosity (mPa.s)
1,6
59°C
1,2
0,8
0,4
0,0
20 30 40 50 60 70 80 90 100
Temperature (°C)
Fig. 1. The evolution of viscosity of pretreated OMW and water with and without 5% Triton
X-100 against temperature.
149
The pretreated OMW samples show a high electrical conductivity (36.7 mS/cm), which is
mainly due to olive salting practices (by adding NaCl) often used in Morocco to preserve
olive fruits before oil extraction. This will facilitate the phase separation process during
phenolic compounds extraction using CPE by increasing the density of the bulk aqueous
phase [19], resulting in lower Tc (Fig. 1). Besides, NaCl is reported to reduce the Tc of the
Triton X-100 [18] as shown in Table 2.
3.3. Extraction of phenolic compounds from OMW using CPE
The results showed that the coacervate volume fraction (ϕc) depend on the surfactant
concentration and the equilibrium temperature (Fig. 2). ϕc increases with the increase of
surfactant concentration and decreases with the increase of temperature. At 5 % of Triton X-
100 the coacervate volume fraction decreased from 0.18 to 0.14 then to 0.11 at 70°, 80° and
90°C, respectively. Paleologos et al. [23] reported that elevated temperatures lead to some
dehydration of the micelle, decreasing the volume ratio of the coacervate to the diluted phase
and consequently the recovery increases. Equilibrium temperature is expected to be a decisive
factor during optimization and scale-up of the CPE of phenols from OMW.
0,24
70°C
80°C
90°C
0,20
Coacervate volume fraction
0,16
0,12
0,08
0,04
0,00
0 2 4 6 8 10 12
Surfactant concentration, CTX (% )
Fig. 2. Coacervate volume fraction against the Triton X-100 concentration at different
equilibrium temperatures. Solid line presents the trend line of experimental data and the
dashed line shows to the confidence interval of 95%.
The concentration factor (fc) and the coacervate volume fraction (ϕc) are important parameters
for the appreciation of the efficiency of the separation. For maximum efficiency the
150
coacervate volume should be the smallest and the phenolic compounds concentration in the
coacervate the highest. Thus, the phenolic compounds recovery (R%) and the fc should reach
maximum values, while the ϕc must be kept as low as possible. The obtained results showed
that in all cases the volume fraction of the coacervate is higher than the volume fraction of the
surfactant (the ratio of the surfactant volume to the total volume). A volume fraction of 18%
was registered when using 10% of the Triton X-100 at 90°C (Fig. 2). Evidently, the
coacervate contains other compounds than the surfactant. Phenols, water and most likely other
organic compounds showing a partition coefficient in favour of the surfactant phase may
solubilise in the coacervate.
The partition coefficient (KC/D) of the total phenolic content of OMW was determined for
each surfactant concentration at different equilibrium temperatures (Fig. 3). The KC/D was
found to be affected by the surfactant concentration (CTX).
1,4
70°C
1,2 80°C
90°C
1,0
Log(KC/D)
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Surfactant Concentration, CTX (%)
Fig. 3. Phenolic compounds partition coefficients versus surfactant concentrations in CPE

from OMW at different equilibrium temperatures. (Correlation coefficients: 70°C, r² = 0.9641; 80°C,
r² = 0.9574; 90°C, r² = 0.9587). Solid line presents the trendline of experimental data and the dashed line shows
to the confidence interval of 95%.
Within the studied range of Triton X-100 concentrations (0 to 10%), the partition coefficient
increases with the increase of surfactant concentration. At a given surfactant concentration,
the temperature enhanced considerably the partition coefficient. At 10 % Triton X-100, the
obtained partition coefficients were 3.69, 7.59 and 13.42 at 70°, 80° and 90°C respectively.
The increase of temperature enhances more the solubility of the phenolic compounds into the
151
surfactant phase and improves their recovery (Fig. 4). Furthermore, higher temperature is,
smaller the coacervate volume is, leading to higher partition coefficients. At temperatures
above 80°C, the phenolic compounds recovery seems proportional to the surfactant
concentration. At 70°C, particularly at surfactant concentrations above 5 %, the phenols
recovery showed a less dependent behaviour on the surfactant concentration. The average
recovery rate (R%) obtained with 10 % Triton X-100, were 46.4, 63.9 and 66.5 % at 70°, 80°
and 90°C, respectively.
80
70°C
70 80°C
90°C
60 90°C
Recovery, R (%)
50 80°C
40
30
20
70°C
10
0
0 2 4 6 8 10 12
Surfactant Concentration, CTX (%)
Fig. 4. Total phenolic compounds recovery (%) from OMW versus surfactant concentrations.
Solid line presents the trendline of experimental data and the dashed line shows to the confidence interval of
95%.
As the coacervate is less hydrophilic than the micellar aqueous phase, the extraction may be
increased for the most hydrophobic organic compounds in OMW including phenolic
compounds. As the Triton X-100 is a strong hydrogen-bond acceptor, such interactions may
contribute to the concentration of phenolic compounds among other solutes in the surfactant
rich phase [24]. Once, these hydrogen bonds broken, the free phenolics may solubilise in the
aqueous phase of the coacervate. Hence, changing the solution pH to alkaline conditions
above their pKa will lead to free phenolic compounds, which can be effectively stripped from
the coacervate [25]. Subsequently, the phenolic compounds are recovered from the coacervate
after adjusting the pH to 10 using with a NaOH 2M and re-incubation at 70°C for 20 min to
obtain two new phases: A clear surfactant-rich phase and a dark small aqueous phase
152
containing the phenols. About 54 wt% of the phenols was released from the coacervate into
the new small water phase. As a result, the overall phenolic compounds extraction yield is
about 32 %. Recycling the surfactant phase in multistage extractions will lead to higher
yields.
3.4. Optimization of the CPE using response surface methodology (RSM)
The RSM was applied to evaluate the effects of surfactant concentration (CTX), and
temperature (T) on the coacervate volume fraction (ϕc), and phenolic compounds recovery
(R%). The mathematical models obtained for each parameter using STATISTICA 8.0 are the
following:
φc = 0.192 + 0.0666CTX − 0.0036T − 0.0022CTX

2
− 0.0003CTX T + 0.000015T 2
R% = 153.1401− 6.5283CTX − 3.2852T + 0.0223CTX

2
+ 0.1541CTX T + 0.0168T 2
The coacervate volume fraction increases considerably with the increase of surfactant
concentration at surfactant concentrations not exceeding 8 % (Fig. 5). Above this
concentration, only slight increase can be observed at 70°C whereas a decrease of ϕc is
observed at high equilibrium temperatures (> 80°C) and high surfactant concentrations (> 8
%). The phenolic compounds recovery (R) is found to increase with the increase of
temperature and surfactant concentration (CTX). The increase against CTX is more significant
at high temperatures (Fig. 6).
Fig. 5. 3D Surface Plot of the coacervate volume fraction (ϕc) against surfactant concentration
and equilibrium temperature.
153
Temperature-induced losses of phenolic compounds during the CPE procedure are negligible.
Temperatures in the range of 70° and 90°C are found not to affect neither the total phenolic
content of OMW and nor its antioxidant activity after up to 24 hour of heating (data not yet
published). Furthermore, Rodriguez et al., [26] reported an increase of the concentrations of a
powerful antioxidant, (the 3,4-Dihydroxyphenylglycol (DHPG) in OMW as a result of heating
at a temperature as high as 90°C.
Fig. 6. 3D Surface Plot of polyphenol recovery against surfactant concentration and

equilibrium temperature.
The predicted values of the two studied CPE efficiency parameters were calculated using the
model and compared with experimental values. It can be seen from Fig 7 and Fig. 8 that the
experimental values were distributed relatively near to a straight line and a satisfactory
correlation between these values is observed. The determination coefficients (ϕc, r2 = 0.9597;
R%, r2 = 0.9552) indicates a sufficient adjustment of the model with the experimental data.
Subsequently, the mathematical models can be used for the determination of the optimal
extraction conditions that may allow a maximal recovery of phenolic compounds from OMW.
Three basic intermolecular forces governing the solubilisation of phenolic compounds into
surfactant phase (net intermicellar attraction; micellar excluded volume; and tendency of the
solute to solubilise in micelles) are hypothesized to control the important CPE efficiency
parameters [27]. As intermicellar attraction increases, micelles can coagulate into a coacervate
154
phase at a lower Tc. The micellar excluded volume – the volume that is inaccessible to other
molecules in the system as a result of the presence of micelles – determines the density and
the volume of the coacervate phase [27]. Wang et al. [28] reported that the solubilisation in
the coacervate phase is different from that in individual micelles. This may be explained by
different macromolecular arrangements of the surfactant molecules in the coacervate phases
[28].
Gortzi et al. [14] studied the CPE application to the extraction of individual phenolics from
model solutions using Genapol X-080. The obtained extraction yields were up to 98 % using
one step extraction. As mentioned earlier, the partition coefficient of the phenolic compounds
between the water phase and the surfactant phase plays an important role in the extraction
process. The total phenolic content of OMW contains a mixture of compounds with different
individual concentrations. Understanding the interactions between phenolic compounds and
the surfactant-rich phase seems to be of a decisive importance to design an efficient extraction
process.
Further research is needed to investigate the partition coefficient of each phenolic compound
between the water phase and different surfactant phase and elucidate the behaviour of each
phenolic compound in different systems. The surfactant that extracts the most bioactive and/or
the most desired compound can be then determined and an optimized process can be
designed.
Predected coacervate volume fraction
0,24
0,20
0,16
0,12
0,08
0,04
0,04 0,08 0,12 0,16 0,20 0,24

Experimental coacervate volume fraction
Fig. 7. Regression of the predicted values of coacervate volume fraction against the
experimental values (r² = 0.9597).
155
80
70
60
50
R predected
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
R experimental
Fig. 8. Regression of the predicted values of polyphenol recovery against the experimental
values (r²=0.9552).
4. Conclusion
The ultrafiltration of OMW was adopted as pretreatment prior to the CPE implementation.
The organic load and suspended solids were reduced and more limpid OMW was produced
with an easy visualization of phases during cloud point extraction, while the total phenolic
content remained as high as possible. The Tc of Triton X-100 in water and OMW was
determined and was found to be lower in OMW (59°C vs. 64.9°C). This low Tc in OMW is
attributed mainly to its salt content which facilitates the phase separation process during
phenolic compounds extraction using CPE by increasing the density of the bulk aqueous
phase. CPE with Triton X-100 was successfully applied to OMW and a quantitative extraction
of phenols was achieved. Up to 66.5 % of the phenolic content from OMW was extracted
using one step CPE. The highest yield was obtained when using 10 % of Triton X-100 at
90°C. Response surface methodology was applied to the CPE of phenolic compounds from
OMW using different concentrations of Triton X-100 at different equilibrium temperatures.
The predicted values of the two studied CPE efficiency parameters (volume fraction and
polyphenols recovery) were in good agreement with the experimental values. Subsequently,
the mathematical models can be used for the determination of the optimal extraction
conditions that may allow a maximal recovery of phenolic compounds from OMW.
The CPE procedure offers an interesting alternative to the liquid–liquid or liquid-solid
extraction of phenols due to its simplicity, less time, employment and equipment requirements
156
and the use of non-toxic chemicals. Cloud point extraction, as a clean technology, could be a
simple and economical solution for the dephenolisation of OMW and the preparation of
natural antioxidants concentrate, suitable for pharmaceutical, cosmetic and food applications.
Acknowledgement
This work was financially supported by the International Foundation for Sciences (IFS) under
the grant number W4749. The authors thank gratefully the Prof-Ing. Jan Hoinkis from
Karsruhe University of Applied Sciences (Germany) for the donation of membranes used for
OMW pretreatment.
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159
DISCUSSION GENERALE
Discussion générale
Les margines présentent une composition chimique très complexe et hétérogène. Elles
contiennent une variété de composés organiques et minéraux, (phénols, glucides, matières
azotées, matières grasses...etc.) de nature et de concentration très variables. Cette variation est
due essentiellement aux facteurs suivants: Stade de maturation des olives; Conditions
climatiques; Variété des oliviers; Système de culture; Situation géographique; durée et
techniques de stockage des olives avant la trituration et aux procédés d’extractions d’huile.
Au Maroc, mais également dans d’autres pays oléicoles, l’absence de contrôles et de
méthodes de traitements adaptées oblige les propriétaires de moulins à huile à rejeter ces eaux
polluantes dans la nature. La toxicité des margines est principalement due à la fraction soluble
et surtout aux composés phénoliques difficilement biodégradables. Durant ce travail, notre
ambition a été de transformer ce problème en avantage en isolant ces composés phénoliques à
haute valeur ajoutée. Nos études ont montré que les composés phénoliques des margines
possèdent une importante capacité d'inhibition des espèces réactives de l'oxygène. Un faisceau
de plus en plus consistant de preuves indiquent l’implication des radicaux libres dans
plusieurs processus pathologiques, comme le cancer et l'athérosclérose. Les margines
pourraient donc être une source d'antioxydants naturels à visées thérapeutiques. Les margines
renferment pas moins de 30 composés phénoliques différents. Les principaux constituants de
la fraction phénolique des margines sont l’hydroxytyrosol, le tyrosol, l'oleuropéine et leurs
dérivés.
Nous avons noté que les microfiltrâts des margines présentent des propriétés
antioxydantes plus importantes que leurs extraits phénoliques, ceci est probablement due au
fait que certains composés non-phénoliques contribuent à l’activité antioxydante totale des
margines ou améliorent l’activité antioxydante des composés phénoliques (synergie) surtout
dans les tests de la capacité antioxydante totale, l’activité de chélatation de fer et l’activité
antiradicalaire. L’activité antioxydante élevée mesurée dans les microfiltrâts des margines
peut être également attribuée à la différence de composition phénolique entre les extraits et les
microfiltrâts, puisque l’extraction liquide-liquide par l’acétate d’éthyle est inapproprié pour
l’extraction des molécules de poids moléculaire élevé tel les tannins qui restent dans la phase
aqueuse.
Les composés phénoliques peuvent intervenir par trois principaux mécanismes pour
lutter contre le stresse oxydatif : 1) piégeage direct des espèces réactives d’oxygène (ERO) ;
2) inhibition des enzymes impliquées dans le stress oxydatif et la chélation des traces
160
métalliques responsables de la production des ERO; 3) protection des systèmes de défense

antioxydants. Il est clair que le pouvoir antioxydant des polyphénols dépend de nombreux
facteurs selon le système considéré: pouvoir réducteur de l’antioxydant vis-à-vis des ions
métalliques (transfert d’électrons) et des radicaux oxygénés (transfert d’électrons et/ou
d’atomes H), sensibilité de l’antioxydant à l’auto-oxydation, stabilité des complexes
métalliques avec l’antioxydant et compétition avec d’autres agents complexants présents dans
le milieu, etc. Il est donc important d’étudier ces différents phénomènes à l’aide de systèmes
plus simples avant de tenter d’interpréter la capacité antioxydante observée dans le système
complet.
Le profile phénolique des margines dépends principalement de la variété et du stade de
maturation des olives triturées. Plusieurs études ont été consacrées à la caractérisation
biochimique des variétés d’olives et pour la compréhension des variations quantitatives et
qualitatives affectant le profile phénoliques des olives au cours de la maturation1,2. En outre,
lors de l’extraction de l'huile, les dérivés glycosylés présents dans les olives (surtout
l’oleuropéine) peuvent être hydrolysés par des glucosidases endogènes, probablement activées
lors de la macération et de la malaxation. L’oleuropéine aglycone passe dans l'huile, tandis
que l’oleuropéine glucoside reste dans les eaux usées. Au cours de la maturation des olives,
les dérivés secoiridoïdes de l’hydroxytyrosol diminuent davantage plus que ceux du tyrosol.
Ceci est très important, car l’hydroxytyrosol et ses formes dérivées complexes sont connus
pour avoir une activité antioxydante plus importante et une grande influence sur les propriétés
organoleptiques de l’huile que le groupe tyrosol3. Puisque les industriels cherchent une huile
de bonne qualité et un bon rendement d’extraction d’huile, il est préférable de triturer les
olives dans un stade de maturité avancée car les olives vertes sont peu riches en huile. Les
margines résultants auront moins de contenu phénolique. Par ailleurs, durant le stockage des
margine, les réactions enzymatiques de dégradation de l’oleuropéine et des dérivés
secoiridoïdes engendrent une augmentation de la concentration en composés phénoliques
monocycliques.
1
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161
Nos résultats révèlent que le contenu des margines en composés phénoliques

augmente considérablement durant les premiers quatre mois du stockage des margines et
commence à chuter lentement après le 5ème mois. En revanche, l’activité antioxydante la plus
élevée a été observée au troisième mois de stockage. L’évolution de l’activité antioxydante
des margines semble être corrélée à l’évolution de la concentration en polyphénols durant le
stockage. Ce résultat peut être expliqué par le fait que les margines sont un milieu complexe
qui contient plusieurs composés antioxydants avec différentes capacités antioxydantes. Durant
le stockage certains antioxydants peuvent disparaitre alors que d’autres issus d’hydrolyse de
molécules plus complexes ou de modification des composés initiaux vont apparaitre. Le
changement du contenu phénolique et de son activité antioxydante semble être affecté par
plusieurs facteurs tels les paramètres physicochimiques des margines de départ, les variations
de température durant le stockage et finalement la flore bactérienne et fongique présente dans
les margines.
Au Maroc, les margines sont produites pendant 4 à 5 mois seulement, par conséquent,
le stockage sera nécessaire dans le cas où des composés à haute valeur ajoutée doivent être
récupérés à partir de ces effluents pendant de longues périodes. Très peu d'études se sont
intéressés à l'effet du stockage des margines sur leur teneur en composés phénoliques. Feki et
al. (2006) a rapporté une accumulation importante de hydroxytyrosol après 5 mois de
stockage. La concentration correspondant a augmenté de 257 à 302%. Cependant, les
concentrations des autres composés phénoliques ont nettement diminué. En outre, il a été
déduit que le stockage des margines facilite la procédure d'extraction et améliore le rendement
d'extraction de hydroxytyrosol qui selon certain étude augmente de 85,5 à 96,8%4. En
pratique, il serait préférable pour les industriels désirant valoriser le contenu phénolique des
margines d’attendre la fin de la saison oléicole (5 à 6 mois de stockage) pour procéder à
l’extraction. Dans ce cas, les frais de stockage s’ajouteront aux frais liés à l’extraction. Seule
une étude comparative des gains en rendement et des pertes en fond d’investissement liées au
stockage pourra trancher sur l’utilité du stockage.
L’augmentation de la concentration des margines en composés phénoliques simples
pourra aussi s’effectuer sans recours au stockage en accélérant les processus de dégradation
de l’oleuropéine et les dérivés secoiridoïdes par hydrolyse acide (Ajout de l’HCl, par
exemple).
4
Feki, M., Allouche, N., Bouaziz, M., Gargoubi, A., Sayadi, S. (2006). Effect of storage of olive mill
wastewaters on hydroxytyrosol concentration. European Journal of Lipid Science and Technology, 108, 1021–
1027.
162
Jusqu'à présent, les composés antioxydants des margines n'ont pas pu être valorisés, en
raison du manque d’efficacité ou/et de praticité des technologies conventionnelles
d'extraction. L’ultrafiltration simple est inefficace pour la rétention de la plupart des
composés phénoliques en raison de leur faible poids moléculaire. Toutefois, l'ultrafiltration
assistée par micelles (UFAM) démontre une certaine efficacité pour leur isolement. Nos
travaux démontrent les potentialités d'un procédé intégré pour la concentration, l'élimination
et la récupération de composés phénoliques des margines. Le prétraitement des margines est
une étape clé dans tout procédé de traitement. La charge organique élevée des margines
bloque les pores des membranes et accélère le phénomène de colmatage. Deux procédés
membranaires (Ultrafiltration, UF et microfiltration, MF) ont été testés pour le prétraitement
des margines. L'avantage majeur de ces techniques réside dans un coût peu élevé par rapport à
la méthode traditionnelle de floculation/coagulation utilisant le sulfate d'aluminium, produit
chimique cher et polluant. Deux autres procédés membranaires différents, à savoir
d'ultrafiltration assistée par micelles (UFAM) et la distillation membranaire à contact directe
(DCMD) ont été appliquées avec succès pour la concentration préalable des margines avant la
récupération des composés phénoliques. La concentration des composés phénoliques des
margines permettra l’économie des produits chimiques employés lors d’une extraction
ultérieure.
Les principaux avantages de l’UFAM résident dans la production d’un flux de perméat
élevé avec une rétention raisonnable des composés phénoliques, mais le fait d’avoir recours à
une grande quantité de tensioactifs ioniques (toxiques et non biodégradables) constitue
l’inconvénient majeur de cette technique. En plus, ces tensioactifs aggravent le phénomène de
colmatage et réduit ainsi la vie de la membrane. En ce qui concerne la rentabilité et la qualité
du concentrât issu de l’UFAM des margines, il reste encore à étudier la composition de la
matière organique retenue par les micelles pour déterminer sa teneur en composés
phénoliques et identifier les composés qui sont les plus retenus.
La distillation membranaire est une technologie émergente encore à l'état
expérimental. Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes
de téflon (PTFE) a permis la concentration du contenu phénolique des margines jusqu’à 1,78
fois après 8 heures de distillation, en obtenant un indice de performance meilleure pour la
membrane TF1000, qui a la taille de pore la plus large (1 µm). En plus, l’effet de traitement
des margines par températures élevées sur leur contenu phénolique et leur activité
antioxydante (test de DPPH) a été évalué en fonction du temps de traitement. Les résultats
163
obtenus montrent qu’il n’y pas d’effets indésirables de la température élevée (jusqu’à 80°C)
sur le contenu phénolique et son activité antioxydant. La concentration de l’hydroxytyrosol
dans les margines a augmenté par 45% après 1200 min de séjour dans une température de
80°C. L’hydroxytyrosol (2-(3,4-dihydroxyphényl) éthanol) est l’un des composés les plus
recherchés parmi les composés phénoliques d’olives. En plus, l’hydroxytyrosol est le
composé phénolique le plus étudié pour ses propriétés antioxydantes et pharmacologiques5,6.
Ce compose se trouve dans les margines en une concentration relativement élevée, en forme
libre en tant que monomère, ou en forme lié comme dans l’oleuropéine ou verbascoside.
Récemment, un autre compose phénolique simple, le 3,4-dihydroxyphénylglycol (DHPG),
avec une structure similaire à celle de l’hydroxytyrosol mais il dispose d’un groupe hydroxyle
de plus et une activité antioxydante plus élevée a été trouvé dans des margines7. La
concentration de ce composé augmente de 237% après traitement des margines par une
température élevée (90°C) pour 120 min seulement7. Ces résultats confirment que l’utilisation
d’une température relativement élevée dans le procédé de la distillation membrane en vue de
traiter et de valoriser les margines pouvait avoir des effets positifs sur la quantité et la qualité
du concentrât phénolique récupéré.
En distillation osmotique isothermique, les membranes de PTFE offrent des flux
raisonnables (2,9-4,2 L/h.m2) avec des facteurs de concentration du contenu phénolique des
margines de l’ordre de 1,2 après 280 min de distillation osmotique à 30°C. La distillation
osmotique est relativement lente en terme de concentration des margines comparée à la
distillation membranaire thermique. Par contre, la distillation osmotique isothermique est
mois couteuse en terme d’énergie.
Le choix d’une membrane adaptée au traitement des margines par distillation
membranaire doit prendre en considération à la fois la sélectivité et la perméabilité. Les trois
membranes testées montrent des flux raisonnables avec des facteurs de séparation très élevés,
au voisinage de 100 % durant les premières 8 heures de traitement des margines par
distillation.
5
Manna C., Migliardi V., Sannino F., De Martino A., and Capasso R., Protective effects of synthetic
Hydroxytyrosol acetyl derivatives against oxidative stress in human cells, Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 2005, 53, 9602-9607.
6
Schaffer, S., Podstawa, M., Visioli, F., Bogani, P., Müller, W. E., & Eckert, G. P. Hydroxytyrosol-rich olive
mill wastewater extract protects brain cells in vitro and ex vivo. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55
(2007) 5043–5049.
7
Rodrìguez G., Lama A., Trujillo M., Espartero J.L., Fernàndez-Bolanos J., Isolation of a powerful antioxidant
from Olea europaea fruit-mill waste: 3,4-Dihydroxyphenylglycol, Food Science and Technology 42 (2009) 483–
490.
164
La distillation membranaire pourra constituer une solution efficace pour le traitement

des margines en produisant de l’eau propre et un concentrât de matière organique riche en
polyphénols. L’énergie requise pour l’élévation de la température des margines pourra être
fournie par l’énergie solaire pour rendre le procédé plus économique et écologique. Le
procédé dispose de nombreux avantages comparé aux autres procédés de séparation:
possibilité de travailler à des températures inférieures à la température d'ébullition de l'eau à
traiter ; faible colmatage; grande sélectivité (taux de rejet au voisinage de 100%) ; Surface
au sol demandée faible; procédé est moins sensible à la concentration en alimentation
contrairement, par exemple, à l'osmose inverse. En plus de ces avantages, il est possible de
coupler ce procédé avec une énergie renouvelable.
La distillation osmotique ou membranaire présente des inconvénients qui font que
pour le moment cette technologie est restée à un stade expérimental : aucune membrane ni
module n'ont été conçus spécifiquement pour ce procédé hybride ; la productivité (flux de
perméat) est faible comparé à l’ultrafiltration ou l’osmose inverse ; le procédé consomme
beaucoup d'énergie. La consommation énergétique et le coût élevé de ce procédé ne peuvent
pas être rentabilisés par sa faible productivité. Les flux de perméat enregistré durant la
distillation membranaire et surtout de la distillation osmotique des margines demeurent très
faibles ce qui empêcherait toute application industrielle de ce procédé. Ces flux rendent la
rentabilité de ce procédé sujette à questions. Néanmoins, la distillation membranaire et la
distillation osmotique sont des procédés en cours d’expérimentation d’investigations très
actives et on ne pourra pas encore trancher sur leur utilité et leur viabilité économique.
Nos travaux ont démontré que l’UFAM permet - dans des conditions optimales – la
rétention de 88% de la couleur sombre des margines et de 95% de la DCO initiale avec un
taux de rejet à 70% des composés phénoliques. Le rejet de composés phénoliques individuels
à partir des solutions modèles a été étudié en utilisant différentes tailles des pores
membranaires (20 et 50 KDa) et en employant différents types d'agents tensioactifs
(cationiques et anioniques). Le rétention a été très élevée lors de l'utilisation de 10 fois la
concentration micellaire critique (CMC) du chlorure de cétylpyridinium (CPC) et atteint 95%
pour l'acide p-coumarique. L’UFAM montre des retentions variables selon la structure
moléculaire des composés phénoliques. Le tensioactif a été récupéré efficacement du retentât
par précipitation sous sa température de Krafft, surtout à 5 °C, où le taux de récupération a été
supérieur à 90%. La récupération du tensioactif (SDS) par précipitation avec des électrolytes a
été aussi étudiée et a montré son efficacité. Mais, la précipitation physique (par abaissement
165
de température) est la plus pratique et efficace par rapport à la précipitation chimique qui
nécessite l’addition des sels aux solutions. Le recyclage du tensioactif du perméat et du
retentât rendra le procédé plus écologique et économique et permettra ainsi de réduire toute
pollution secondaires générés par des agents tensioactifs.
Les tensioactifs ioniques peuvent avoir une toxicité directe (tensioactifs cationiques)
ou indirecte (tensioactifs anioniques) en favorisant la solubilisation voire la pénétration
digestive dans l'organisme de certains toxiques tels que les hydrocarbures aromatiques
polycycliques dont certains sont de puissants cancérogènes8,9. Pour ces raisons-là, il est
indispensable d’éliminer les traces résiduelles de tensioactifs (ou les recycler dans le procédé)
présente dans le perméat même s’elle inférieure 1 CMC, car la plus part des tensioactifs
ioniques ont montré une toxicité vis-à-vis des micro-organismes même à des concentrations
inférieures à leur CMC10. Aussi, avant de se débarrasser de tout déchet ou effluent issu du
procédé, on sera obligé de penser au devenir des tensioactifs qu’il contient.
Au-delà d'une température appelée point de trouble, les solutions aqueuses de la
plupart des tensioactifs non ioniques se séparent en deux phases liquides en équilibre : le
coacervat, riche en tensioactif, et la phase diluée. Grâce à la solubilisation micellaire de
composés hydrophobes, amphiphiles ou même ioniques et à leur concentration dans le (faible)
volume de coacervat, une extraction à deux phases aqueuses (extraction par point de trouble
ou par coacervat) peut être réalisée et appliquée à des opérations de dépollution d'effluents
industriels ou à la concentration ou encore à la séparation de substances à haute valeur
ajoutée. Cette technique peut donc conduire à un procédé de "chimie verte", c'est-à-dire non
polluant et peu coûteux en énergie.
Nous avons également évalué la possibilité d’extraire les composés phénoliques des
margines par extraction par point de trouble (cloud point Extraction) (CPE) à l’aide d’un
tensioactif non ionique (Triton X-100). Le procédé d’extraction par point de trouble appliqué
à la récupération des composés phénoliques à partir des margines microfiltrées, démontre la
possibilité d'extraire jusqu'à 66,5% de la teneur totale en composés phénoliques des margines
en utilisant un seul cycle d’extraction par CPE. Le rendement le plus élevé a été obtenu lors
de l'utilisation de 10% de Triton X-100 à 90 °C.
8
Margesin R., Schinner, F. (1998), Biodegradation of the anionic surfactant sodium dodecyl sulfate at low
temperatures, International Biodeterioration and Biodegradation, 41, 139–143.
9
de Melo, E. D., Mounteer, A. H., de Souza Leão, L. H., Bahia, R. C. B., Campos, I. M. F. (2013). Toxicity
identification evaluation of cosmetics industry wastewater. Journal of Hazardous Materials, 244–245, 329-334.
10
Rodrìguez G., Lama A., Trujillo M., Espartero J.L., Fernàndez-Bolanos J., Isolation of a powerful antioxidant
from Olea europaea fruit-mill waste: 3,4-Dihydroxyphenylglycol, Food Science and Technology 42 (2009) 483–
490.
166
En utilisant un plan d'expériences (méthodologie de surface de réponse) et un lissage

empirique des courbes tridimensionnelles, nous avons cherché le meilleur compromis entre
les paramètres qui gouvernent l’efficacité de l’extraction des polyphénols en fonction de la
concentration initiale en tensioactif (Triton X-100) et de la température. Cette étude met ainsi
en évidence l’évolution du pourcentage des composés phénoliques extraits, du facteur de
concentration, du coefficient de partage et de la fraction volumique de coacervat, celle-ci à
réduire au minimum. Le choix des conditions opératoires optimales résultera donc d'un
compromis entre ces paramètres. Ainsi, on a intérêt à utiliser moins de tensioactif afin d'avoir
un volume moindre de coacervat même si le rendement d'extraction se trouvera diminué.
D’un point de vue industriel, il serait fortement conseillé d'envisager un procédé multi-cycles
(cycles multiples d’extraction).
Les polyphénols des margines sont structurellement diversifiés et appartiennent à
différentes classes de composés phytochimiques. Cela rend le développement de procédures
standardisées pour l'extraction simultanée de tous les composés phénoliques une tâche très
difficile. Presque toutes les procédures d'extraction, rapportés dans la littérature scientifique,
présentent à la fois une faible sélectivité et de faibles rendements d'extraction, sinon les
processus les plus efficaces impliquent des coûts élevés. Par conséquent, il y a toujours un
besoin pour une recherche systématique pour élaborer un processus rentable pour la
récupération des composés phénoliques des margines en améliorant à la fois la sélectivité et
les rendements d'extraction.
Les résultats montrent que la CPE peut être une alternative efficace aux méthodes
classiques d'extraction, car elle peut aboutir à l’isolement d’un mélange d'antioxydants
naturels adaptés pour des applications pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires.
La CPE, comparée aux méthodes conventionnelles d’extraction, gagne de plus en plus
un intérêt croissant grâce à son rendement élevé et l’emploi de faibles quantités de
tensioactifs. En plus, les tensioactifs utilisés sont biodégradables et ont une toxicité limitée.
Le procédé d’extraction ne présente aucun risque puisque qu’il utilise des tensioactifs non
volatiles et non inflammables. Un autre avantage en faveur de l’extraction par point de trouble
est le fait que le procédé ne comporte par une étape de concentration de solvant qui peut
constituer une source de perte d’une proportion des composés à extraire.
Pour qu’un procédé soit transposable à une plus grande échelle (industrielle), son
produit doit être standard et avec des caractéristiques bien précises. Ce produit ne doit pas
être sujet à des changements qualitatifs suite aux variations qui peuvent toucher la matière
167
première (les margines). Le défis majeur face au procédé développé dans cette étude est la
possibilité de fournir un produit stanrdadisé de bonne qualité. Les industriels ne peuvent pas
facilement intégrer un produit dans leur formulations cosmétiques ou pharmaceutiques si ce
produit ne présente des caractéristiques standardisées identiques d’un lot à l’autre et d’une
saison à l’autre. Ainsi, après une optimisation du procédé et son adaptation aux conditions de
travail dans une échelle industrielle, il sera indispensable de focaliser les travaux de
recherche futurs sur le produit afin de cerner les facteurs jouant sur sa qualité et sa stabilité et
la constance de sa composition.
À la lumière de tous nos résultats, nous pouvons proposer un procédé intégré pour la
valorisation et le traitement des margines (Schéma ci-après). Un tel procédé comprendra:
1. Une étape de prétraitement par microfiltration ou/et ultrafiltration. L'élimination des

matières en suspension avant tout isolement des composés phénoliques est fortement
recommandée afin d'obtenir un concentrât limpide. Les margines sont particulièrement
riches en matières en suspension qui peuvent dépasser 15%.
2. L'effluent prétraité sera soumis à une opération de concentration par ultrafiltration
assistée par micelles ou par distillation membranaire. A ce stade, les composés
phénoliques peuvent être retenus. Un concentrât riche en composés phénoliques peut
être récupéré. Selon la concentration restante des composés phénoliques et les normes à
respecter, le perméat peut être directement rejeté ou réutilisé dans l'irrigation, ou
recyclé. Le retentât de l’ultrafiltration assistée par micelles sera traité par température
basse (inférieure à la température de Krafft du tensioactif employé) pour éliminer une
grande partie de tensioactif. Ce dernier pourra être récupéré et réutilisé.
3. Un procédé d'extraction finale des composés phénoliques du retentât peut être effectué
par CPE. Cette méthode d’extraction offrira un mélange des composés phénoliques à
haute valeur ajoutée, qui pourra être commercialisé tel quel ou après purification.
Des essais semi-pilotes de ce procédé sont nécessaires avant toute application
industrielle. Des travaux de recherche supplémentaires son en cours de réalisation dans notre
laboratoire pour l’optimisation des paramètres opératoires (température, pression, vitesse
d’agitation, type de configuration d’ultrafiltration, type de tensioactif et sa concentration,...)
pour une isolation efficace des composés phénoliques naturels à partir des margines. Ce
procédé pourra toutefois être appliqué aux autres effluents agroindustriels telles les saumures
168
générées par la préparation des olives de table. Cet effluent est également très riche en
composés phénoliques à haute valeur ajoutée (hydroxytyrosol, oleuropéine, etc.).
Vu la petite taille des unités d’extraction de l’huile d’olive, leur dispersion
géographique et la saisonnalité de la production, nous pensons que seule des unités mobiles
de traitement et de valorisation des margines peuvent offrir la possibilité de résoudre le
problème de pollution que posent ces effluents. Le développement d’un tel système aura le
potentiel de réaliser des économies substantielles dans les investissements en capital par
rapport aux usines de traitement stationnaires. De ce fait les questions qui sont autour
l’élaboration des solutions rationnelle et adaptées de traitement des margines, concernent de
façon plus large l’ensemble des pays producteurs d’olive du bassin méditerranéen, mais
touchent aussi à de véritables débats de société tels que ceux suscités par la prise en compte
des pollutions agricoles : qui est responsable ? Qui doit payer selon le principe pollueur-
payeur ? Est ce l’agriculteur, le consommateur, le contribuable, ou bien les trois à la fois ?
Il semble que la recherche de solutions au problème de la pollution engendrée par les
margines doit se placer sous le signe de solidarité et de la répartition équitable des charges
financières de la dépollution. Jusqu'à présent, dans ce domaine, la discontinuité est la règle,
mais il semble que le maintien d’une activité oléicole performante repose en partie sur
l’unification des efforts de tous les acteurs concernés : les pouvoirs publics, ainsi que les
agences des bassins hydrauliques et les collectivités locales. C’est donc en confortant la place
des petites structures de transformation (maâsras traditionnelles), en améliorant leurs
compétences commerciales sur un marché concurrentiel, que l’on contribuera le plus au
développement de cette production.
169
Schéma montrant les différentes étapes du procédé proposé en vu du traitement et de la

valorisation des margines par extraction de leur contenu phénolique.
Certainement, il n’y aura pas une seule solution pour le traitement et la valorisation
des margines. Plusieurs solutions peuvent être adaptées à la fois pour répondre aux besoins de
chaque type d’unité de trituration en termes d’économie d’eau, de dépollution et de
valorisation des ressources. Durant ces deux dernières décennies, le système de trituration à
deux phases s’est largement répondu au Maroc. Il s’agit d’un procédé biphasique dit
« écologique » puisqu’il ne produit qu’un faible volume des margines, dix fois moins comparé
au procédé à trois phases. L’intensification en cours et en perspective du système biphasique
remette en question l’utilité du développement d’un procédé de traitement des margines. En
revanche, le système n'est pas vraiment une solution définitive aux problèmes
environnementaux générés par les margines car le procédé présente un autre problème lié au
traitement et à la valorisation des grignons qui sont très humides et elle nécessite une étape de
dessiccation par séchage au soleil ou par évaporation forcée.
170
CONCLUSION GENERALE
Conclusion Générale
Conclusion générale
L’industrie d’extraction d’huile d’olive constitue une activité économique majeure
dans plusieurs pays méditerranéens comme l'Italie, l’Espagne, la Turquie, la Tunisie, la Grèce
et le Maroc. Les deux systèmes de trituration des olives les plus répondus au Maroc (le
système traditionnel à presse et le système à centrifugation à trois phases) génèrent jusqu’à
une tonne d’effluents liquides par tonne d’olives traitées. Ces eaux usées appelés margines
sont constituées des eaux de végétation et des eaux ajoutées lors du procédé d’extraction de
l’huile. Ces effluents oléicoles sont dans la plupart des cas déversées brutes sans aucun
traitement dans le milieu naturel, soit directement soit à travers le réseau d’égouts public,
conduisant à de sérieux problèmes de pollution (destruction de la microflore bactérienne du
sol, pollution des oueds et barrages et disparition de la vie aquatique, pollution de la nappe
souterraine, etc.).
Aujourd’hui, l’industrie oléicole marocaine se trouve confrontée aux nouvelles
réglementations en matière de l’environnement, de plus en plus exigeantes. D’où la nécessité
d’adopter une solution efficace et non couteuse pour le traitement et/ou la valorisation des
margines. La recherche d’usages secondaires pour les margines contribuera à leur valorisation
et permettra aux procédés de traitements employés à être économiquement viables. Ainsi, ces
effluents pourraient constituer des sources bon marché et abondantes de composés à haute
valeur ajoutée tels des antioxydants naturels, des agents antimicrobiens, des biopesticides,
etc., d'un grand intérêt pour les industries pharmaceutiques, cosmétiques et alimentaires.
Les méthodes physiques de traitements des margines telles que l'incinération impliquent
des coûts énergétiques élevés. Les procédés physico-chimiques tels que la floculation et la
coagulation offrent seulement une solution partielle et doivent être compléter par un
traitement secondaire et produisent de grandes quantités de boues qui peuvent causer d'autres
problèmes environnementaux. D’autres traitements, quoique efficaces, osmose inverse,
évaporation forcée, ozonation, etc., restent très coûteux et demandent parfois une technicité
élevée.
Les résultats présentés dans cette thèse, démontrent clairement que les procédés
membranaires intégrés pourraient être appliqués avec succès pour le traitement et la
concentration des margines. L'utilisation de la méthodologie du CPE offre une alternative aux
systèmes conventionnels d'extraction et permet la conception de systèmes d'extraction
simples, bon marché, très efficace et d'une plus faible toxicité que les systèmes d'extraction
liquide-liquide. Par ailleurs, la CPE peut être appliquée soit sur des margines prétraitées par
171
MF ou UF, ou sur le concentrât de la distillation membranaire (ou osmotique). La

récupération des constituants phénoliques des effluents oléicoles, éliminera les risques
environnementaux de ces dernièrs, tout en les rendant facilement biodégradables. les margines
traitées pourront être réutilisées en tant que fertilisant, comme elles pourront servir à d'autres
applications (compostage, additif pour la préparation de matériaux de construction, …etc.).
Vu leur intérêts économiques les composés phénoliques récupérés, constitueront une source
de revenus suplémentaires pour les huileries.
En raison des nombreux avantages qu’elles offrent (exigences énergétiques plus faibles,
conditions opératoires douces, facilité de transposition à des échelles industrielles)
l’application des méthodes de séparations membranaires pour le traitement des margines
suscite de plus en plus d'intérêt. Nos travaux ont clairement démontré les potentialités de deux
procédés membranaires différents à savoir la distillation membranaire directe et
l’ultrafiltration assistée par micelles pour le traitement et la concentration des composés
phénoliques des margines. Si la simple ultrafiltration est inefficace pour la rétention des
composés phénoliques à faible poids moléculaires, nous avons prouvé pour la première fois
que l’UFAM est une méthode alternative et efficace pour la rétention des composés
phénoliques naturels. La rétention des composés phénoliques a été démontrée dans des
solutions modèles en utilisant des membranes avec différentes tailles de pores (5, 10, 20 et 50
kDa) et deux types de tensioactifs (anioniques et cationiques). La rétention s’est révélée très
élevée et a atteint 95 % pour l'acide p-coumarique en utilisant 10 CMC du PCC (chlorure de
cétylpyridinium). La rétention a été différentielle en fonction de la structure moléculaire des
composés phénoliques. L'agent tensioactif est récupéré de manière efficace (> 90%) à partir
des flux de rétentât par précipitation à 5 ° C. La récupération de l’agent tensioactif à partir du
perméat et du rétentât rendra le procédé plus économique permettra de réduire toute pollution
secondaire. L'efficacité du traitement par UFAM pour l’isolement et la concentration des
composés phénoliques des margines a permis des flux initiaux entre 25,7 et 44,5 l/m2.h sous
des pressions transmembranaires de 3,5 et 4,5 bar respectivement. Le taux de rétention des
polyphénols a atteint 74 %. L’UFAM permet de grandes réductions de couleur (-88 %), et de
la DCO (-95 %). La distillation membranaire à contact direct (DCMD) a également été
étudiée pour le traitement et la concentration des margines. Comparativement aux procédés
membranaires classiques, la DCMD montre les avantages de la diminution de la température
de distillation et de la pression hydrostatique (les températures appliquées dans DCMD sont
beaucoup plus basses que le point d’ébullition de l'eau tandis que la pression est proche de
l'atmosphère). En outre, DCMD est un processus non-destructif des composés phénoliques.
172
Deux types de membranes ayant la même taille de pores, le polytétrafluoroéthylène ( TF200 )

et de fluorure de polyvinylidène (GVHP) ont été testés sous une différence de température
transmembranaire de 20°C. La TF200 de membrane a montré le facteur de séparation des
polyphénols le plus élevé. Il est resté proche de 100% pendant 8 h de séparation alors que le
facteur de concentration a atteint 1,8. Le meilleur indice de performance a été obtenu pour la
TF1000 qui présente la plus grande taille des pores. En outre, l'effet des températures élevées
sur la teneur en composés phénoliques des margines, les températures utilisées dans la DMCD
ont été prouvées de ne pas altérer la capacité de ces antioxydants naturels à piéger les
radicaux libres (test au DPPH). Deux procédés de prétraitement, la coagulation / floculation et
de microfiltration (MF), ont été évalués. MF a été jugée la meilleure pour être intégrée à la
DCMD.
Si les solutions proposées dans cette thèse sont prometteuses, elles suscitent néanmoins,
plusieurs questions scientifiques qui ouvrent la voie pour d’autres travaux de recherches
visant l’adaptation du procédé aux conditions d’une application industrielle. La sélection des
membranes, l’étude du colmatage, l’évaluation des coûts de nettoyage et des couts
énergétiques doivent être évalués et optimisés avant toute application industrielle. Il reste
également à mettre au point une méthode efficace de prétraitement qui réduit la charge
organique des margines en gardant leur contenu phénolique intacte. Tous ces éléments
constituent autant de pistes de recherche qui mériteraient que l’on s’y attarde. Toutefois, toute
solution proposée doit tenir compte des particularités de ce secteur (petites tailles des
entreprises, de leur dispersion et de la saisonnalité de la production).
173

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366 UNIVERSITÉ CADI AYYAD N° d’ordre : 366

FACULTÉ DES SCIENCES

Spécialité : Biochimie & Traitement des Eaux Usées

VALORISATION DES MARGINES PAR ISOLEMENT DES

Soutenue, le 30 Mars 2013 devant la commission d’examen :

Abdellatif Hafidi P.E.S. Faculté des Sciences – Semlalia, UCA- Marrakech

Nom et Prénom de l’auteur : Abdelilah EL ABBASSI

Lieux de réalisation des travaux :

Période de réalisation du travail de thèse : Mars 2007- Décembre 2010

Rapporteurs autres que les encadrants :

Cadre de coopération et sources de financement:

1. Action Intégrée Maroco-Espagnol numéro A/016076/08, intitulé « Préparation des

Communications dans des congrès nationaux et internationaux

Publications et communications hors sujet de thèse:

Keywords : Olive mill wastewater ; polyphenols ; antioxidant activities ; micellar-enhanced

CHAPITRE 3. APPLICATION DE L’ULTRAFILTRATION ASSISTEE PAR MICELLES POUR

- Séparation des composés phénoliques monocycliques naturels par 52

CHAPITRE 4. TRAITEMENT ET CONCENTRATION DES MARGINES PAR DISTILLATION

CONCLUSION GENERALE 171

2. Caractéristiques physico-chimiques des margines

Tableau 2: Composition minérale des margines

Paraskeva Mahmoud Karpouzas Moraetis Danellakis Piotrowska Intervalle des

3. Les problèmes environnementaux engendrés par les margines

4. Les composés phénoliques

Tableau 3: Les différentes classes des composés phénoliques

anthocyanines, cyanidine 3-O-glucoside et cyanidine 3-Orutinoside. L’oleuropéine et le

Composé Structure Références

Obied et al. 2007a

Ryan & Robards, 1998 ;

Ryan & Robards, 1998 ;

Obied et al., 2007a ;

Obied et al., 2007a

Obied et al., 2007a ;

Lutéoléine Obied et al., 2007a

Obied et al., 2007a

Obied et al., 2007a

Obied et al., 2007a ;

Obied et al., 2007a

Obied et al., 2007a

Acide élénolique à cycle Tuck et al., 2002

Romani et al., 1999 ;

4.2. Activités antioxydantes et bienfaits des polyphénols des margines

4.2.1. Intérêts agroalimentaires

Oleuropéine Antioxydant Extrait à partir de la pâte d’olive (Amro et al., 2002)

4.2.2. Intérêts pharmaceutiques

Tableau 6: Concentrations inhibitrices minimales (en µg/ml) de l’hydroxytyrosol et de

Souche bactérienne Hydroxytyrosol oleuropéine

4.2.3. Intérêts cosmétologiques

5. Principales méthodes de traitement et de valorisation des margines

5.1. Application directe des margines brutes pour la fertilisation du sol

5.3.3. La digestion anaérobie

toxicité et deuxièmement la valeur ajoutée de ces composés phénoliques réputés bioactifs

6. Les procédés de séparation membranaires

6.2. La distillation membranaire

- Distillation membranaire à pression réduite (sous vide) appliquée du côté de condensation

Figure 4 : Différentes configurations de la distillation membranaire, a) distillation membranaire à contact

6.3. L’Ultrafiltration Assistée par Micelle

- Les tensioactifs cationiques : Ils possèdent un ou plusieurs groupements qui s’ionisent en

Tensioactifs non ioniques

7. Extraction par point de trouble

tensioactives varient très rapidement au voisinage de cette température, en particulier avec la

El Hajjouji H. Evaluation des caractéristiques physico-chimiques, spectroscopiques et

Sirkar K.K. Membrane separation technologies: current developments. Chemical Engineering