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Université Abbès Laghrour de Khenchela-

Khenchela Département de Biologie moléculaire et cellulaire.


Module : Technologie de la biochimie Année
née universitaire : 2017-2018

Travaux Dirigés N° 01 (CCM)

Solution exercice 01:

TGD TGD TGD

AG AG
AG

DGD 1 DGD 1 D
DGD 1
DGD 2 DGD 2 D
DGD 2

MGD

MGD MGD

1. La tache en position spot 1: est un témoin TGD (triglycéride). Ce TGD se distingue par sa
concentration élevée (grosse tache). Cette molécule de faible polarité se déplace loin de la
plaque du gel de silice car la phase stationnaire est polaire.

α 1 CH2–O–C–R1
I
2 CH–O–CO–R2
I
α' 3 CH2–O–CO–R3

2. La tache en position spot 2: se sont deux témoins DGD (di glycéride) différents
différents,
possédant une fonction alcool.
alco De ce fait, ils sont une polarité supplémentaire (moins de
déplacement).
CH2-O-CO-R1
|
CH-O-CO-R2
|
CH2-OH

Solution TD N° 1 -1- Enseignant : M. BOUFENNARA S.


Université Abbès Laghrour de Khenchela- Département de Biologie moléculaire et cellulaire.
Module : Technologie de la biochimie Année universitaire : 2017-2018

3. La tache en position spot 3: est un témoin mono glycéride. Ce MGD se distingue aussi
par sa concentration élevée (grosse tache). C’est une molécule qui ne bouge absolument
pas de sa position initiale car elle est très polaire (très grande affinité avec la phase
stationnaire) à cause de la présence de 2 groupements OH. De ce fait, ils ont une polarité
encore plus forte ( encore moins de déplacement par rapport au diglycéride).

CH2-O-CO-R1
|
CH-OH
|
CH2-OH

4. La tache en position spot 4 montre la position du témoin, acide gras. C’est une molécule
relativement polaire grâce à sa fonction acide COOH.

5. Le spot en position 5 est un échantillon composé de 5 taches. Donc 5 molécules. Un


MGD, deux di glycérides DGD différents de concentration faible, un acide gras libre et
enfin un tri glycéride TGD de concentration faible. Dans cet échantillon, il semble que la
lipase pancréatique a exercé son action sur le corps gars naturel. Cette enzyme permet
donc l'hydrolyse des acides gras (TGD) en position 1 et 3 des TGD (libération de 2
DGD), ce qui mène à des acides gras libres (AGL) et des 2-monoglycérides (2-MG). On
peut dire que la réaction est totale.

6. Le spot en position 6 correspond à l’échantillon, le lypolysat. Il a été soumis à une


chromatographie De ce fait, au lieu d’avoir 5 taches, on remarque qu’il se compose de 4
taches (4 molécules). Un MGD, deux di glycérides DGD différents de concentration
faible (action de l’enzyme en position 1 et 3) et un tri glycéride TGD. L’acide gras libéré
(COO-) dans le spot 5 a été retenu par la résine échangeuse d’anions (phase stationnaire
qui capte les molécules chargées négativement).

7. Le spot en position 7 montre une seule tache correspondant au seul acide gras de
concentration importante (grosse tache). Il correspond au lypolysat débarrassé de toutes
les matières grasses.

Solution exercice 02 :
1. La tache en position spot 1: est un témoin tri-stéarine. Ce TGD se distingue par sa
concentration élevée (grosse tache). Cette molécule de faible polarité se déplace loin de la
plaque du gel de silice car la phase stationnaire est polaire. C’est une molécule
hydrophobe (apolaire)

α 1 CH2–O–C– (CH2)16 – CH3


I
2 CH–O–CO – (CH2)16 – CH3
I
α' 3 CH2–O–CO – (CH2)16 – CH3

Solution TD N° 1 -2- Enseignant : M. BOUFENNARA S.


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Khenchela Département de Biologie moléculaire et cellulaire.
Module : Technologie de la biochimie Année
née universitaire : 2017-2018

2. La tache en position spot 2: est un témoin di-oléo-stéarine.. Ce TGD se distingue par sa


concentration élevée (grosse tache)
tache et une polarité moyenne, d’où un déplacement plus
faible (molécule lente et hydrophile) que celui du témoin 1.
CH2-O-CO-(CH2)16 – CH3
|
CH-O-CO-(CH2)7 – CH CH - (CH2)7 – CH3
|
CH2-O-CO--(CH2)7 – CH CH - (CH2)7 – CH3

tri-stéarine

apolarité
Polarité

3
di-oléo
oléo-stéarine

3. La tache en position spot 3 correspond à l’échantillon. On remarque qu’il se compose de


5 taches (5 triglycérides).
triglycéride

-Tache N° 1 : Cette tache correspond au composé le plus polaire, probablement un


triglycéride composé de 3 acides oléiques (tri-oléiques).
(tri

-Tache N° 2 : Cette tache correspond à un composé moins polaire que le triglycéride de la


tache 1. Il s’agit probablement d’un
d’un triglycéride composé de 2 acide
acides laurique et 1 acide
myristique, ou un triglycéride composé de 3 acide laurique…etc.

-Tache N° 3 : Cette tache correspond au triglycéride du spot 2 (di--oléo-stéarine) mais de


concentration plus faible que celle du témoin 2.

-Tache N° 4 : Cette tache correspond à un composé moins polaire. Il se déplace donc plus
loin le long de la plaque CCM. Il s’agit probablement d’une combinaison d’un
triglycéride composé de 2 acide laurique et 1 acide myristique, ou au tri
tri-palmitique.

-Tache N° 5 : Cette tache correspond au triglycéride du spot 1 (tri


(tri-stéarine) mais de
concentration plus faible que celle du témoin 1.

Solution TD N° 1 -3- Enseignant : M. BOUFENNARA S.


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Module : Technologie de la biochimie Année universitaire : 2017-2018

Solution de l’exercice 03 :

La sortie se fera en fonction de la polarité. Le moins polaire sortira le premier et le plus polaire
sortira le dernier. L’ordre d’élution est : CH3CH2CH3, CH3COOCH3 ,CH3CH2COOH.

Solution de l’exercice 04 :

T1 X T1 T2 X T1 T2 T3 X

Expérience 1 Expérience 2 Expérience 3

- Expérience N°1 :

 T1 : Présence de deux taches, l’une correspond à l’essai, l’autre non identifiée.


 Essai : Présence de deux taches, l’une correspond au témoin, l’autre non identifiée.

- Expérience N°2 :
 T2: Présence d’une tache qui correspond à l’essai.
 Essai: Présence toujours de deux taches dont l’une correspond au témoin.

- Expérience N°3 : (0,5 point)


 T3: Présence d’une tache qui correspond à la deuxième tache de l’essai.
 Essai: Présence toujours de deux taches dont l’une correspond au témoin.

Conclusion :

 T1 : Ce témoin ne doit pas être utilisé à cause de son impureté (Présence de deux taches),
C’est pour cette raison que l’analyste était obligé d’utiliser un autre témoin T2.
 T2 : Excellent témoin (une seule tache) et qui correspond à la première tache de l’essai.
 T3 : Ce témoin est employé pour mettre en évidence de la présence d’un produit de
dégradation de l’essai (Présence d’une tache qui correspond à celle de l’essai).

- Résultat de l’analyse : Cette matière première n’est pas pure, elle est par conséquent non
conforme.

- La pureté des témoins est une condition obligatoire, donc le témoin T1 doit être écarté de
la liste des témoins (références) et par conséquent, on ne doit jamais l’utiliser car il n’est
pas pur.

Solution TD N° 1 -4- Enseignant : M. BOUFENNARA S.