Université des Sciences et de la Technologie d’Oran « 

MB »
Faculté de Chimie Module : MPCA
L3 GP 2018-2019

Fiche TD 2 (CPG - HPLC)

Exercice 1 :
Deux espèces chimiques, A et B sont séparées par chromatographie en phase gazeuse, à l’aide
d’une colonne de longueur L= 2 m ayant 5000 plateaux théoriques au débit de 15,0 ml/min et
utilisant l’air comme phase mobile.
Le pic de l’air non absorbé apparaît au bout de 30 s ; le pic de A apparaît au bout de 5 min et
celui de B au bout de 12 min.
- Calculer le volume mort VM de la colonne, et les volumes de rétention VA et VB.
- Calculer les coefficients de rétention k’A et k’B.
- Quelle est la valeur de HEPT (en cm) pour cette colonne ?
- Déterminer la valeur de la sélectivité α de cette séparation.
- Quelles sont les largeurs à la base des pics A et B (en sec) ? (Nth(A) =Nth(B) = 5000).
- Calculer la résolution Rs de la séparation. Discuter.
- Quelle est la longueur de colonne qu’il faut utiliser pour avoir une résolution de Rs’ = 17,5
sachant que Rs est proportionnel à la racine de L
Exercice 2 :
Le chromatogramme de la nicotine a été obtenu dans les conditions suivantes :
CPG. Colonne remplie Phase stationnaire: 10% Carbowax 20M/2% KOH sur
80/100 Chromosorb W AW.
Dimensions de la colonne: Longueur 183cm x 2mm (diamètre intérieur)
Débit de la phase mobile: 20mL/min.  Quantité injectée:1µL
- Four: 200°C. Temps de rétention de la nicotine = 3,20 mn
- Four: 180°C. Temps de rétention de la nicotine = 6,60 mn
1- Calculer la vitesse linéaire (en cm/sec) de la phase mobile dans la colonne.
2- En déduire le temps mort de cette analyse.
3-Calculer le temps de rétention de la nicotine à 160°C.
4- Peut-on éluer la nicotine en 55 sec, sachant que la température limite d’utilisation de la
colonne et de 250°C ?
5- Le pic de la nicotine a une largeur à demi – hauteur de 10sec. Calculer le N et le H (en µm)
à différentes températures ; Discuter ….. Application pour étudiant.
Exercice 3 :
Les conditions opératoires pour une analyse HPLC sont les suivantes :
Longueur de la colonne 10cm Température : 20°C
Débit : 1ml/mn Teneur en méthanol : 35%
Pression en tête de la colonne : 69 105Pa Temps mort : 41s

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Le tableau des résultats est le suivant :

Nom du soluté Largeur à mis hauteur (s) Temps de rétention réduit (s)
Uracile (a) 10,9 28
Phénol(b) 13,1 141
Alcool benzylique(c) 13,4 158

Déterminer pour chaque composé :

2-les temps de rétention tr
3-les nombres de plateaux théoriques Nth et efficaces Neff
4- les hauteurs équivalentes aux plateaux théoriques Hept
5-le facteur de séparation α, le facteur de résolution Rs et le facteur de capacité k’.
Exercice 4 :
L’analyse des sucres (saccharose, glucose et fructose) présents dans un jus d’orange est
réalisée au moyen d’une chromatographie équipée d’une colonne de 15 cm de longueur. La
phase stationnaire est une phase apolaire de porosité de 0,5 et diamètre de particule dp de
5µm. La phase mobile est composée d’un mélange acétonitrile/eau, son débit est de
1mL.min-1. Le chromatogramme obtenu après injection de 100µL de jus est schématisé sur la
figure 1 (A).

Figure 1 :
Chromatogrammes de : (A) jus d’orange et (B) jus d’orange traité à l’invertase.

Après une action de l’invertase sur le jus d’orange, le saccharose s’hydrolyse et se transforme
en glucose et fructose. Le chromatogramme correspondant, obtenu dans les mêmes conditions
analytiques, est représenté sur la figure 1 (B). ( S est la surface relative des pics).

- Quelle est le type de chromatographie et la nature de la phase utilisée lors de cette

analyse ?
- Déterminer la nature du composé indiqué par le pic 3 sur la figure 1 (A). Donner sa
masse relative par rapport au deux autres composés. Justifier votre réponse.
- Sachant que le fructose est plus polaire que le glucose, donner l’ordre d’élution des
trois composés 1, 2 et 3. Justifier votre réponse.
- Déterminer la vitesse linéaire. En déduire le diamètre interne de la colonne.

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- Quelle est la valeur du facteur de capacité (K’) du composé (3).