UNIVERSITE DE DOUALA THE UNIVERSITY OF DOUALA

FACULTE DES SCIENCES FACULTY OF SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE

Travaux dirigés de BHS 263

Exercice 1 : Définir génie génétique
Exercice 2 :
Quelles sont les étapes de l’extraction de l’ADN ?
Exercice 3 :
Décrire l’extraction et la purification d’un ADN :
a) D’une cellule bactérienne :
-à partir d’un échantillon
-à partir d’une culture en milieu solide
-à partir d’une culture en milieu liquide
b) D’une cellule eucaryote (cas d’un leucocyte)
Exercice 4 : Choisir la ou les réponses correctes
1) Le rôle de l’EDTA dans l'extraction et la purification de l'ADN est :
a- Affaiblissement de l'interaction histones-ADN
b- Fixation des ions divalents pour bloquer l'activité des kinases
c- Fixation des ions divalents pour bloquer l'action des DNases
d-Adsorption et précipitation des polyphénols
e- Contribution à la dénaturation des protéines

2) Le rôle des concentrations élevées en sels (comme NaCl) dans l'extraction et la purification
de l'ADN des plantes est:
a- Stabilisation de l'ADN
b-Affaiblissement de la liaison ionique entre l'ADN et les protéines par compétitivité aux
molécules d'eau entre les sels et les protéines
c-Rupture des structures membranaires
d-Elimination des polyphénols et polysaccharides

3) Le rôle du mélange chloroforme-alcool isoamylique dans l'extraction et la purification de

l'ADN est :
a- Formation de phases pour récupérer l'ADN dans la phase organique
b-Séparation de l'ARN copurifié avec l'ARN
c-Formation de phases pour récupérer l'ADN dans l'interface
d- Formation de phases pour récupérer l'ADN dans la phase aqueuse
e- Précipitation de l'ADN à -20°C

4) Le(s) critère(s) d'une solution d'ADN bien purifié est (sont):

 a- Contenu riche en ADN non altéré et en protéines associées
b- Contenu riche en ADN peu importe son état de conservation
c- Contenu riche en ADN non altéré avec des protéines dénaturées
d- Contenu riche en ADN non altéré avec très peu de protéines
e- Contenu riche en ADN peu importe son état mais avec très peu de protéines
Exercice 5 :
a) Choisir l'information fausse concernant les étapes d'extraction et de purification de l'ADN
i)Les acides nucléiques sont précipités par l'isopropanol ou par le mélange éthanol et sels
ii)Les protéines sont solubles dans les solvants organiques comme le chloroforme
iii)Les acides nucléiques sont solubles dans l'eau pure et dans les solutions aqueuses à faibles
concentrations en sels
iv)Les protéines sont solubles dans les solutions aqueuses à concentrations élevées en sels

b) Choisir l'information fausse concernant l'évaluation de la pureté de l'ADN purifié à partir

d'une plante:
i)Ce sont les bases azotées qui donnent l'absorption de l'ADN à 260 nm
ii)La recherche de contamination des acides nucléiques par des protéines s'effectue en mesurant
le rapport DO à 280 nm sur DO à 260 nm.
iii)Celui-ci doit être de l'ordre de 1,8 - 2,0 pour une pureté optimale
iv)Les protéines présentent un pic d'absorption maximal à 280 nm
v)Le rapport DO à 260 nm sur DO à 280 nm de l'ordre de 1,8 - 2,0 renseigne sur une purification
meilleure de l'ADN

Exercice 6 :
Vous avez réussi à extraire l’ADN à partir des cellules épithéliales d’un patient, et vous devez
le quantifier et le purifier afin de pouvoir utiliser l’ADN extrait.
1-Quelle méthode utiliserez-vous pour contrôler la pureté de votre ADN et dans quel but?
2-A partir de cette méthode, comment saurez-vous que votre ADN est pur et comment identifier
de possibles contaminations ?
3-Quelles méthodes de quantification d’ADN que vous pouvez utiliser ?