Olympiades de la chimie 2012 académie de Besançon dosage des ions nitrites dans l'eau

Dans les cours d'eau, notamment canalisés, et dans les régions densément habitées ou d'agriculture intensive, les nitrites
sont souvent un paramètre important de déclassement des cours d'eau. Chez l'homme et les mammifères, la présence de nitrites
dans le sang empêche l'hémoglobine de fixer convenablement l'oxygène. C'est l'une des causes de la « maladie bleue du nourrisson
», plus savamment appelée « méthémoglobinémie ». C'est pourquoi la teneur en nitrites dans l'eau potable est réglementée
(notamment pour la préparation des biberons) et, indirectement celle des nitrates en raison de leur capacité à se transformer en
nitrites. En milieu acide, comme c'est le cas dans l'estomac, les nitrites, souvent présents dans la charcuterie comme additifs (E250
et E249), forment avec les amines secondaires des nitrosamines toxiques, très vraisemblablement cancérigènes. La D.J.A de ces
deux additifs est de 0,06 mg/kg de masse corporelle

La formule de l'ion nitrite est NO 2–. La teneur en nitrite dans l'eau destinée à la consommation humaine est donc
règlementée, elle ne doit pas dépasser 0,1 mg/L (l'OMS préconisait 0,2 mg/L en 2006).
d'après http://fr.wikipedia.org/wiki/Nitrites

Le but du TP est de doser les ions nitrite dans une eau afin de savoir si elle est potable ou non. Pour cela, on va utiliser deux
techniques de dosage spectrophotométriques :
– la première (partie A) est adaptée de la technique décrite par la norme AFNOR NF T 90-013, c'est une méthode utilisant une
gamme d'étalonnage.
– la seconde (partie B) utilise la méthode des ajouts dosés.

I. Principe des dosages :

En milieu acide, les ions nitrite réagissent avec une amine aromatique (composé comprenant une fonction amine –NH2 fixée
sur un noyau benzènique –C6H5), pour former un sel de diazonium selon une réaction appelé diazotation.
Ici on utilise le chlorure de N-(naphtyl-1) diamino-1,2-éthane ou NED :

NED sulfanilamide

L'ion diazonium, en présence d'un dérivé de l'acide sulfanilique, l'amino-4-benzenesulfonamide ou sulfanilamide, donne un
complexe rose.
Cette réaction est très sensible ; elle permet de détecter de très faibles quantités d'ions nitrite. La limite de détection de la méthode
se situe aux environs de 1µg/L d'ions nitrite.
Elle est applicable directement à des échantillons dont la concentration massique en ions nitrite est inférieures à 1 mg/L.

II. Données de sécurité :

réactifs formule pictogrammes Masse molaire divers

chlorure de N-(naphtyl-
1) diamino-1,2-éthane C12H14N2 , 2 HCl 259,2 g/mol CAS n° 1465-25-4
ou NED
H319 - H315
amino-4-
benzenesulfonamide C6H8N2O2S 172,2 g/mom CAS n° 63-74-1
ou sulfanilamide

Consignes de récupération :

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- toutes les solutions seront vidées dans un bidon de récupération prévu à cet effet.

III. Données diverses :

Masses molaires atomiques ( g.mol-1) :
H : 1,0 N : 14,0 O : 16,0

Couleur Longueur d'onde (nm) Couleur complémentaires

Violet extrême 400
Violet moyen 420 vert-jaune
violet-bleu 440
Bleu moyen 470 Jaune
Bleu-vert 500
Vert moyen 530 pourpre
vert-jaune 560
Jaune moyen 580 Bleu
jaune-orangé 590
Orange moyen 600 bleu-verdâtre
orangé-rouge 610
Rouge moyen 650 vert-bleu
Rouge extrême 780
Source : http://semsci.u-strasbg.fr/rouedes.htm

IV. partie A : dosage par la méthode de la gamme d'étalonnage :

1. Préparation de la gamme :

À partir d'une solution mère (Sm) à la concentration Cm = 10,0 mg/L en ions nitrite, vous allez devoir préparer par dilution
100 mL de solution étalon (Se) à 1,00 mg/L.
Attention : toute la suite du TP dépend de la précision avec laquelle vous aller préparer cette solution étalon !

1. Quel matériel, disponible sur votre paillasse, allez-vous utiliser ?

Il faudra utiliser une pipette jaugée de 10 mL, une fiole jaugée de 100 mL, de l'eau distillée et une propipette.

2. Indiquer brièvement les différentes étapes de la dilution.

- Mettre un peu de solution mère dans un bécher.

- Rincer la pipette à l'eau distillée puis avec la solution mère.
- Rincer la fiole à l'eau distillée.
- Prélever 10,0 mL de solution mère, placer dans la fiole jaugée.
- Compléter au trait de jauge avec de l'eau distillée, boucher, puis homogénéiser.

✔ Une fois que ces réponses ont été validées par un enseignant, réaliser la solution étalon Se.
✔ Numéroter 7 tubes à essais de 0 à 6.
✔ Introduire dans les 6 premiers tubes 0, 2, 4, 6, 8, 10 mL de solution étalon. (cf. tableau ci-dessous en cas de doute !)
✔ Compléter chaque tubes à 10 mL avec de l'eau distillée.
✔ Dans le tube n°6, introduire 10 mL d'eau à doser
✔ Ajouter dans chaque tubes 0,2 mL de réactif de diazotation, boucher et homogénéiser.
✔ Laisser la coloration se développer pendant environ 30 minutes.

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Pendant ce temps, vous pouvez répondre à quelques unes des questions suivantes et préparer le dosage de la partie B.

3. Compléter le tableau ci-dessous en expliquant le calcul de la concentration en ions nitrite pour la solution du tube n°1 :

0
tubes 1 2 3 4 5
(témoins)
Solution étalon
0 2 4 6 8 10
Se (mL)
Eau distillée
10 8 6 4 2 0
(mL)
Réactif (mL) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Concentration
en ions nitrite 0,000 0,196 0,392 0,588 0,784 0,980
(mg/L)

Calcul de la concentration dans le tube n° 1 :

On a mis 2 mL de solution étalon, puis on a ajouté 8 mL d'eau et 0,2 mL de réactif. Le volume final de la solution est donc 10,2
mL.

2
C1 = C e x = 0,196 mg/L
10,2

2. Mesures et exploitations :

On donne le spectre d'une des solutions obtenues :

spectre diazoïque
olympiades 2011-2012
A 2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0
350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
longueur d'onde (nm)

4. À quelle longueur d'onde doit-on mesurer l'absorbance des solutions ?

On observe un pic d'absorbance à 540 nm, c'est à cette longueur d'onde qu'il va falloir travailler.

5. À quoi sert la solution préparée dans le tube n°0 ?

C'est un tube dans lequel il n'y a pas d'ion nitrite. Il va servir à « faire le blanc ».

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6. pourquoi la solution est-elle rose ?

La solution absorbe autour de 540 nm, ce qui correspond à la lumière verte. Elle nous apparaît donc de la couleur
complémentaire, c'est à dire le pourpre (rose !)

✔ Au bout de 30 minutes de repos, préparer 7 cuves spectrophotométriques avec un peu de chacune des solutions
contenues dans les tubes 0 à 6.
✔ Mesurer les absorbances à l'aide du spectrophotomètre réglé à la « bonne » longueur d'onde et compléter le tableau
de la question 7.

7. tableau de mesures (cf. question 3 pour la première ligne) :

0
tubes 1 2 3 4 5 6
(témoins)
Concentration
en ions nitrite 0,000 0,196 0,392 0,588 0,784 0,980 ?
(mg/L)
Absorbance 0,000 0,071 0,169 0,270 0,371 0,469 0,227

8. Tracer la graphe de l'absorbance en fonction de la concentration en ions nitrite (sur papier millimétré ou dans un
tableur selon le matériel mis à votre disposition) :
A A=f(C)
0,500

0,450

0,400

0,350

0,300

0,250

0,200

0,150

0,100

0,050

0,000
0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 1,200
C (mg/L)

8. Que peut-on dire des points expérimentaux ? À quelle loi cela correspond-il ?

A A=f(C)
0,500

0,450 f(x) = 0,482x - 0,009

R² = 0,999
0,400

0,350

0,300

0,250

0,200

0,150

0,100

0,050

0,000
0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 1,200
C (mg/L)

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Les points expérimentaux sont sur une droite qui passe par l'origine. Il s'agit de la loi de Beer Lambert : l'absorbance
est proportionnelle à la concentration de l'espèce absorbante A = k x C.
9. déterminer la concentration en ions nitrites dans l'eau.

• si on utilise un tableur, on peut utiliser l'équation de la droite de régression : A = 0,482 x C

pour l'eau, on a mesuré A = 0,227, ce qui donne C = 0,471 mg/L
• Si on utilise du papier millimétré, on trace l'horizontale A=0,227 sur le graphique. Cette horizontale coupe la
droite d'étalonnage pour C = 0,471 mg/L

10. L'eau est-elle potable ?

La concentration en ions nitrite est de 0,471 mg/L, or la limite autorisée est de 0,1 mg/L. L'eau n'est pas potable.

V. partie B : dosage par la méthode des ajouts dosés :

1. Préparation de la gamme :

On utilisera la solution étalon (Se) à 1,00 mg/L et le tube témoins (tube n°0) que vous avez préparé dans la partie A.

✔ Numéroter 5 tubes à essais de 1 à 5.

✔ Préparer les tubes, de la même manière que pour la partie A, mais selon les indications données dans le tableau ci-
dessous.

tubes 1 2 3 4 5
Solution étalon Se (mL) 0 2 3 4 5
Eau à doser (mL) 5 5 5 5 5
Eau distillée (mL) 5 3 2 1 0
Réactif de diazotation
0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
(mL)

✔ Laisser la coloration se développer pendant environ 30 minutes.

Pendant ce temps, vous pouvez terminer le dosage de la partie A.

11. Quelle est la différence essentielle entre cette technique est celle de la partie A ?

Dans cette partie, on ajoute l'eau que l'on veut doser dans les tubes à essais.

12. Dans le tableau ci-dessous, calculer les concentrations en ions nitrite (notées C aj) provenant de la solution étalon Se
seulement. Faire apparaître les calculs pour le tube n°5.

tubes 1 2 3 4 5
Caj (mg/L) 0,000 0,196 0,294 0,392 0,490

Calcul de la concentration dans le tube n° 5 :

On a mis 5 mL de solution étalon, puis on a ajouté 5 mL d'eau à doser et 0,2 mL de réactif. Le volume final de la solution est donc
10,2 mL.

5
Caj5 = Ce x = 0,490 mg/L
10,2

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2. Mesure et exploitations :

✔ Au bout de 30 minutes de repos, préparer 5 cuves spectrophotométriques avec un peu de chacune des solutions
contenues dans les tubes 1 à 5. Utiliser le tube 0 de la partie A pour « faire le blanc ».
✔ Mesurer les absorbances à l'aide du spectrophotomètre réglé à la « bonne » longueur d'onde et compléter le tableau
suivant :

tubes 1 2 3 4 5
A 0,111 0,206 0,251 0,296 0,343
Caj (mg/L) 0,000 0,196 0,294 0,392 0,490

13. Tracer la graphe de l'absorbance en fonction de la concentration en ions nitrite (sur papier millimétré ou dans un
tableur selon le matériel mis à votre disposition) :
A=f(Caj)
A 0,400

0,350

0,300

0,250

0,200

0,150

0,100

0,050

0,000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
C(mg/L)

14. Que peut-on dire des points expérimentaux ?

A=f(Caj)
A 0,400
f(x) = 0,472x + 0,112
0,350 R² = 1,000

0,300

0,250

0,200

0,150

0,100

0,050

0,000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
C(mg/L)

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Les points expérimentaux sont sur une droite qui ne passe pas par l'origine.
15. À l'aide de la réponse à la question 8, donner la relation liant l'absorbance A d'une des solutions préparée dans cette
partie et les concentrations C aj et Ci (concentration en ions nitrite provenant de l'eau à doser). On notera k le coefficient
de proportionnalité.

A = k x (Caj + Ci)

16. Que peut-on dire de Ci dans le cas de cette expérience ?

On a mis 5mL d'eau dans chaque tubes et le volume final est le même (10,2 mL). On peut donc en conclure que C i est
la même pour chaque tubes : c'est une constante !

17. Montrer que dans ce cas, on a A = a x Caj +b, où a et b sont des constantes que l'on explicitera.

A = k x (Caj + Ci) = k x Caj + k x Ci = a x Caj + b

avec a = k et b = k x Ci

18. Déterminer les valeurs des constantes a et b à l'aide de la courbe tracée à la question 13.

on a a = 0,472 L/mol et b = 0,112

19. Calculer Ci et en déduire la concentration CN en ions nitrite dans l'eau.

b
D'après la question 17, on a Ci =
a
5
et d'après le protocole, on a Ci = CN x car on a mis 5 mL d'eau à doser pour un volume final de solution de 10,2
10,2
mL.

b 10,2
Donc on a CN = x = 0,484 mg/L.
a 5

VI. Comparaison des résultats.

20. calculer l'écart entre les résultats trouvés par les deux méthodes.

Méthode A : C = 0,471 mg/L

Méthode B : C = 0,484 mg/L
e = (0,484 – 0,471) / 0,484 = 3%

21. Quelles sont les sources d'erreurs pouvant expliquer cet éventuel écart ?

- essentiellement les dilutions imprécises.

Sources :
– partie A : activités technologiques en biochimie 2 – CRDP d'aquitaine
– partie B : adaptée de « Utilisation d’un tableur dans l’exploitation des courbes de dosage spectrophotométrique » - S.
LECLERC, ENCPB / RNChimie.

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