1 Evaluation de la teneur et du chemotype des huiles essentielles de Corymbia

2 citriodora (Benth.) K.D.Hill & L.A.S.Johnson produites au verger à graines de

3 Nkama sur le Plateau des Cataractes au Congo-Brazzaville
4

5 Titre abrégé :Teneur et chemotype des huiles essentielles de C. corymbia du

6 verger à graines de Nkama
7
8
9 Thomas Silou(1)(2), Jaynereuse P. Nombault Nienzy(1)(2), Celestin Baou Andouene(1)(2),
10 Jean Claude Chalchat(3)
(1)
11 CRI2E/Ecole Supérieure de Technologie des Cataractes (EPrES), BP 389, Brazzaville, Congo
(2)
12 Faculté des Sciences et Techniques (UMNG) BP 69, Brazzaville, Congo
(3)
13 AVAHEA, La Haye 7, 63500 Saint Babel, France
14
15
16
17 RESUME
18
19 Description: En vue d’accompagner les producteurs d’un projet national de développement de la
20 filière huiles essentielles de Corymbia citriodora au Congo, un verger à graines a été mis en place.
21 Objectif : La présente étude vise à évaluer les performances de ce verger (quantité et qualité de l’huile
22 produite)
23 Matériel et méthodes : Les huiles essentielles des arbres du verger ont été analysées par CPG/SM et
24 les résultats traités par des méthodes statistiques multivariées (ACP, CAH) pour évaluer
25 l’homogénéité du chemotype de la future semence. Le procédé d’extraction a été modélisé par la
26 méthode de plan d’expériences pour explorer les possibilités de son optimisation.
27 Résultats et discussion : L’huile essentielle produite, avec des rendements pouvant atteindre 4 %, est
28 constituée de citronellal, citronellol et isopulégols à plus de 90 % avec une teneur en citronellal
29 pouvant dépasser 80 %. Au laboratoire, la durée de distillation et l’hydrodistillation ont des effets
30 positifs sur le rendement tandis que le tassement du matériel végétal dans le distillateur a un effet
31 négatif. La teneur en citronellal est moins sensible aux effets des facteurs. Un rendement de 3,25 %
32 avec une teneur en citronellal de 75 % sont attendus de l’hydrodistillation de 160 g de feuilles de C.
33 corymbia pendant 2h15 min.
34 Conclusion : au vu des normes en vigueur, c’est une huile d’excellente qualité, produite de façon très
35 rentable.
36
37 Mots Clés : Corymbia citriodora, verger à graines, chemotype, modélisation,
38
39
40

1
41
42
43 Assessment of yield and chemotype of essential oils produced in the Corymbia
44 citriodora seed orchard at Nkama in the « plateau des cataractes»
45 Congo-Brazzaville
46
47 Running title : Yield and chemotype of C. corymbia essential oils from the
48 Nkama seed orchard
49 Description: In order to support producers involved in a national project to develop the essential oils
50 sector of Corymbia citriodora in Congo, a seed orchard has been set up.
51 Objective: This study aims to assess the performance of this orchard (quantity and quality of oil
52 produced)
53 Materials and methods: The essential oils of orchard trees were analyzed by GC/SM and the results
54 processed by multivariate statistical methods (ACP, CAH) to assess the homogeneity of the
55 chemotype of the future seed. The extraction process was modeled by the design of experiment
56 (DoE) to explore the possibilities of its optimization.
57 Results and discussion: The essential oil produced, with yields of up to 4 %, consists of citronellal,
58 citronellol and isopulegols at more than 90 % with a citronellal content of up to 80 %. In the
59 laboratory scale, distillation time and hydrodistillation have positive effects on yield, while the
60 packing of plant material in the distiller has a negative effect. The citronellal content is less sensitive
61 to the effects of the factors. A yield of 3.25 % with a 75 % citronellal content is expected from
62 hydrodistillation of 160 g of C. corymbia leaves for 2 hours 15 minutes.
63 Conclusion: by the current standards, it is an oil of excellent quality, produced in a very cost-effective
64 way.
65
66 Keywords: Corymbia citriodora, seed orchard, chemotype, modeling,
67
68

69

70

2
71 1. INTRODUCTION

72 Depuis plus d’une décennie le Congo s’est engagé dans le développement d’une filière rurale de

73 production d’huiles essentielles à travers un projet intitulé « Développement des filières de

74 commercialisation des huiles essentielles de Eucalyptus citriodora à forte valeur ajoutée, par les

75 communautés villageoises du Congo (Projet CFC/ITTO/80/PD 364/ 05 Rev.4 (I)) », donnant ainsi une

76 formidable opportunité à la valorisation des résultats de la recherche sur Eucalyptus citriodora menée

77 au Congo depuis au moins deux décennies (Silou et al. 2019). Pour soutenir cette initiative nationale

78 sur le plateau des Cataractes, l’Ecole Supérieure de Technologie des Cataractes de Brazzaville été

79 sollicitée pour un appui technique aux futurs producteurs d’huiles essentielles.

80 C’est ainsi que le Campus Rural de Loukoko (CRL), centre de ressources en développement rural de

81 l’Ecole Supérieure de Technologie des Cataractes (ESTc), installé dans le district de Louingui,

82 Département du Pool, a servi de structure de terrain pour l’activité de formation des futurs formateurs

83 et producteurs dudit projet. De même un verger à graines a été mis en place pour contrôler la qualité

84 de la semence à distribuer aux participants au projet.

85 En effet, des 4 chémotypes mis en évidence par Penfold et al. (1948), Virmani et Datta (1967) pour

86 Corymbia citriodora (ex Euclyptus citriodora) à savoir : (i) chemotype à aldéhyde avec le citronellal

87 majoritaire 60-80 % ; (ii) chemotype à alcool (et esters correspondants) avec le citronellol majoritaire ;

88 (iii) chemotype intermédiaire aldéhyde /alcool ; (iv) chemotype à hydrocarbure, trois chémotypes ont

89 été identifiés au Congo: (i) Huile à citronellal majoritaire, (ii) huile à citronellol majoritaire et (ii) huile

90 mixte citronellal/citronellol (Mapola, 2006 ; Silou et al., 2019).

91 On sait également que l’extraction d’une huile essentielle dépend aussi bien du matériel végétal que

92 des procédés mis en jeu, nous avons donc évaluer les effets de différents facteurs techniques sur

93 l’extraction quantitative et qualitative de l’huile essentielle.

94 Le présent article rend compte de: (i) l’évaluation quantitative et qualitative des huiles essentielles

95 produites par ce verger afin de déterminer leur chémotype et (ii) explore des voies d’optimisation du

96 procédé d’extraction utilisé, pour garantir une exploitation rentable dudit procédé.

97
3
 98 2. MATERIEL ET METHODES

99 2.1. Site et matériel végétal

100 Une parcelle de 0,5 ha de Corymbia citriodora à été mise en place à la station de Nkama du Campus

101 Rural de Loukoko (CRL) avec l’appui technique de la station du Service National du Reboisemment

102 (SNR) de Kinkala. Cet essai, qui a approvisionné en matière première l’activité de la formation à la

103 distillation et d’optimisation du matériel et des procédés, deviendra , par la suite, un verger à graines

104 pour la mise en place de la filière C. citriodora dans les District de Boko, Louingui et Loumo,

105 Département du Pool au Congo-Brazzaville.

106 La station de Nkama (latitude 4°26’ E, longitude 14°44’, 10 m altitude) est située dans le district de

107 Louingui, à 15 km de Kinkala au Sud-Est et à 14 km de Louingui au Nord Est et à 9 km du site

108 administratif du CRL.

109 Le site est soumis à un climat du type bas-congolais (Samba Kimbata, 1987).

110 La pluviosité annuelle oscille entre 1270 et 1350 mm, la température moyenne annuelle sur le plateau

111 des cataractes peut osciller entre 10,5 °C à 23,5 °C.

112 Le site est caractérisé par des sols sablonneux avec 95 % de sable, 1 % de limon, 3,5 % de d’argile, un

113 pHeau 5,3 ; 2 g/kg de carbone organique et de l’humus de l’ordre de 1 %.

114 Le champ a été installé après une jachère avec pour récent antécédent une culture de pois d’angole

115 pour l’alimentation animal.

116 Les plants de Corymbia citriodora, acquis auprès de l’antenne de Kinkala du SNR, ont été plantés, en

117 saison de pluie, dans de trous de de 20 cm de diamètre et 30 cm de profondeur avec un écartement

118 de 3 m x 1 m sur un terrain désherbé à la houe et nettoyé après brulis. Le taux de mortalité a été

119 relativement élevé à cause de la présence des criquets sur la station. La mise en place de la plantation a

120 donc été étalée sur 2 ans, avec le remplacement des plants morts, la saison suivante.

121 L’extraction en laboratoire et l’analyse chromatographique ont été réalisées sur des feuilles récoltées

122 sur des arbres âgés de deux ans au moins du verger à graines (NK1 àNK5) et sur des arbres d’une

123 quinzaine d’années de la bordure de la station (NK6 et NK7), en vue d’évaluer le rendement

124 d’extraction et la qualité des huiles extraites.

4
125

126 2.2. Extraction des huiles essentielles

127 Les huiles essenteilles étudiées ont été extraites par hydrodistillation (HD) ou par vapo-

128 hydrodistillation (VHD) sur un appareil de Clevenger à partir de feuilles séchées à l’air libre pendant

129 une semaine. L’huile essentielle a été extraite du distillat dans une ampoule à décanter et a été séchée

130 avec du sulfate de sodium. Soit m1 la masse de feuilles distillée et m2 la masse de l’huile essentielle

131 obtenue, le rendement de l’extraction est donnée par la formule :

132 % HE = (m2/m1)100

133 2.3. Analyse chromatographique des huiles essentielles

134 2.3.1. Chromatographie en Phase Gazeuse (CPG)

135 L’analyse quantitative de l’huile essentielle est réalisée sur un chromatographe en phase gazeuse

136 Agilent, modèle 6890, équipé d’une colonne DB5 (20m x 0,18mm x 0,18µm). La température du four

137 est de 50°C pendant 3,2 minutes puis augmente jusqu’à 300°C à la vitesse de 10°C par minute, celle

138 de l’injecteur est de 280°C. Cet appareil est équipé d’un Détecteur à Ionisation de Flamme (FID)

139 dihydrogène (40 ml/min) / air (450 ml/min). Le débit du gaz vecteur (dihydrogène) est de 1 ml/minute.

140 2.3.2. Couplage CPG/Spectrométrie de Masse (SM)

141 L’analyse qualitative est réalisée à l’aide d’un chromatographe en phase gazeuse Agilent, modèle 7890

142 couplé à un spectrophotomètre de masse Agilent, modèle 5975, équipé d’une colonne DB5 (20 m x

143 0,18 mm x 0,18 µm). La température du four est de 50°C et reste constante pendant 3,2 minutes puis

144 augmente jusqu’à 300°C à la vitesse de 8°C par minute, celle de l’injecteur est de 280°C. L’ionisation

145 est faite par impact électronique à 70 eV. L’échelle de balayage de masse m/z varie de 33 à 450

146 unités. Le débit de gaz vecteur (hélium) est réglé à 0,9 ml/minute.

147 L'identification des composés a été réalisée par comparaison de leurs spectres de masse et de leurs

148 indices de retention (IR) avec ceux des banques de données Adams et al. (2012), NIST (2008), König

149 et al. (2001) et ceux du laboratoire (http//lexva-analytique.com).

150 2.4. Modélisation de l’extraction de l’huile essentielle

151 Le rendement de l’extraction (y) a été étudié en fonction de la durée de la distillation (X1), de la
5
152 masse du matériel végétal (X2) et de la méthode de distillation (X3).

153 Ceci qui se traduit mathématiquement par :

154 y = f(X1, X2, X3)

155 avec : y : réponse ; f : la fonction de réponse ; X1, X2, X3, les facteurs pris en compte.

156 L’expérimentation consistera donc à mettre en évidence les effets de ces facteurs sur la réponse.

157 En fin de compte, on doit répondre à la double interrogation suivante : un facteur a-t-il un effet

158 spécifique donné sur la réponse et quelle relation existe-t-il entre ce facteur et la réponse.

159 Le plan factoriel à deux niveaux tel que développé par Davies (1954) semble suffisamment adapté à la

160 résolution de ce type problème et il l’avantage de ne faire appel qu’à des connaissances mathématiques

161 très élémentaires (Ortigosa, 1993).

162 La formule générale du nombre (N) d’expériences pour un plan factoriel complet est :

163 N = 2k, avec k, le nombre de variables du plan factoriel.

164 Si k = 3, N = 2K = 23 = 8 expériences

165 Pour construire la matrice d’expériences, on définit :

166  des variables réduites xi tel que : xi = (Xi – Xio) /X, avec (Xi0) = la valeur de base, valeur

167 au centre du domaine expérimental (niveau 0) et X : le pas de variation = l’unité de variation

168 des variables ;

169  et les 2 niveaux de variables : le niveau haut (+1) et le niveau bas (-1).

170 Le domaine d’étude est ainsi remplacé par le domaine (-1, +1) et les 8 réponses décrites par la matrice

171 sont réalisées après randomisation. Pour un modèle du premier degré avec interactions, les points

172 représentatifs d’un plan d’expériences à trois variables sont situés dans un espace à 3 dimensions (un

173 cube). La fonction de réponse correspondante est un polynôme du premier degré par rapport à chacun

174 des facteurs pris indépendamment. Elle se note :

6
175 y = a0 + a1x1 + a2x2 + a3x3 +a12x1x2 + a13x1x3 + a23x2x3 +a123x1x2x3

176 Le modèle mathématique associé au plan factoriel étant établi avec les variables centrées et réduites,

177 les coefficients du polynôme ont alors, une signification très simple : moyenne, a0 ; effets principaux,

178 ai ; interactions aij,et aijk (Goupy , 2001). Ces effets ont été calculés avec le logiciel JMP SAS.

179 2.5. Traitements statistiques

180 La statistique descriptive et les représentations graphiques ont été réalisées sur Excel de Microsoft

181 Office Professional Plus 2010. La statistique multi-variée (Analyse en Composantes Principales, ACP)

182 sur XLSTAT (www.xlstat.com).

183 3. RESULTATS ET DISCUSSION

184 3.1. Adaptation de C. citriodora sur le plateau des Cataractes

185 La délimitation du terrain de la station de Nkama avait été réalisée, 15 ans auparavant, par des arbres

186 de l’espèce C. citriodora plantés à intervalle de 10 m.

187 Avant la mise en place du verger à graines, nous avons donc procédé à l’évaluation de la production

188 quantitative et qualitative d’huiles essentielles des arbres d’une quinzaine d’années parfaitement

189 adapté sur plan morphologique (figure 1). Le tableau 1 reporte la composition chimique de l’huile

190 essentielle type de ces arbres parfaitement adaptés.

191 Sur 45 produits détectés, 42 ont été identifiées par leurs indices de rétention et leurs spectres de

192 masse. Les constituants d’indices de rétention 1044, 1258, 1259 et 1781 non identifiés (NI), qui sont à

193 l’état de traces, ne représentent que moins de 0,55 % de l’huile essentielle totale.

194
195

7
196
197 Figure 1. C. citriodora (15 ans) acclimatée sur le plateau des Cataractes (Station de Nkama, CRL) - C.
198 citriodora (15 years old) acclimatized on the plateau des Cataractes (Nkama Station, CRL)
199
200
201 Tableau 1. Composition de l’huile essentielle type* des C. citriodora acclimatées à Nkama (CRL) -
202 Composition of typical essential oil* of C. citriodora acclimatized to Nkama (CRL)
203
204
TR IRc IRlit Constituants Teneur (%)
1 5.550 911 908 Isobutyrate d'isobutyle 0,03
2 5.899 928 932 α-Pinène 0,20
3 6.678 968 969 Sabinène 0,04
4 6.767 972 974 β-Pinène 0,48
5 6.999 984 988 Myrcène 0,16
6 7.498 1010 1014 α-Terpinène 0,03
7 7.642 1019 1020 p-Cymène 0,06
8 7.722 1023 1024 Limonène 0,24
9 7.786 1027 1026 1,8-Cinéole 1,02
10 7.841 1030 1032 (Z)- β-Ocimène 0,21
11 8.082 1044 - NI 0,06
12 8.155 1048 - 2,6-diméthyl-Hept-5-ènal 0,30
13 8.234 1052 1054 γ-Terpinène 0,30
14 8.454 1065 1068 p-Mentha-3,8-diène 0,33
15 8.695 1078 1086 Terpinolène 0,15
16 8.947 1093 1095 Linalol 0,11
17 9.110 1102 1106 cis Oxyde de rose 0,04
18 9.417 1124 1122 trans Oxyde de rose + 0,25
19 9.767 1149 1145 Isopulégol 12,55
20 9.859 1156 1148 Citronellal 65,52
21 9.924 1160 1155 Iso Isopulégol 5,92
22 10.086 1172 - Néo Isopulégol 0,84
23 10.222 1182 - Néo iso Isopulégol 0,27
24 10.454 1198 1195 α- Terpinéol 0,11

8
 25 10.701 1215 - Nérol 0,05
26 10.902 1230 1223 Citronellol 6,44
27 11.065 1241 1235 Néral 0,06
28 11.220 1252 1249 Géraniol 0,27
29 11.309 1258 - NI 0,07
30 11.326 1259 - NI 0,06
31 11.474 1270 1264 Géranial 0,07
32 12.007 1308 1312 Acide citronellique 0,24
33 12.055 1311 1309 p-vinyl-Guaiacol 0,03
34 12.485 1344 1328 p-Menthol-3,8-diol cis 1,10
35 12.562 1350 1350 Acétate de citronellyle 0,37
36 12.612 1354 1356 Eugénol 0,09
37 12.773 1366 - p-Menthol-3,8-diol trans 0,38
38 13.119 1393 1389 β-Elémène 0,04
39 13.154 1395 1393 Isobutanoate de phénylethyle 0,05
40 13.530 1426 1417 β-Caryophyllène 1,09
0 13.976 1461 1452 α-Humulène 0,06
42 14.283 1486 1484 Germacrène-D 0,06
43 15.066 1552 1558 Elémol 0,04
44 15.491 1588 1582 Oxyde de caryophyllène 0,07
45 17.604 1781 - NI 0,09
Total 99,92
205
206

207 Sept composés à teneur individuelle supérieure à 1 % constituent 93,64 % de l’huile totale et la figure

208 2 donne une image du mélange que constitue l’huile étudiée.

209
210 Figure 2. Représentation circulaire de la composition de l’huile essentielle étudiée (NK6).- Circular
211 representation of the studied essential oil composition(NK6).
212
213 Les chromatogrammes des figures 3 et 4 illustrent une très bonne séparation des constituants par

214 agrandissement d’échelle ; ce qui permet une bonne attribution des pics sur la base des des indices de

9
215 rétention (IR) et des spectres de masse.

216

217
218 Figure 3. Chromatogramme (TR : 5-10,3min) de l’huile essentielle étudiée. - Chromatogram (RT: 5-
219 10.3min) of the essential oil studied.
220
221

222
223 Figure 4. Chromatogramme (TR : 9-16 min) de l’huile essentielle étudiée. – Chromatogram (RT: 9-16
224 min) of the essential oil studied
225

226 3.2. Evaluation de la qualité de l’huile essentielle

227 3.2.1. Profil chimique

228 Le tableau 2 donne la composition chimique de 9 échantillons étudiés. Les huiles essentielles obtenues

229 contiennent une trentaine de constituants, avec une très grande majorité, en très faible quantité (<1 %)

230 voire à l’état de traces (<0,1 %). Cinq constituants (citronellal, citronellol, iso isopulégol, néo-iso

10
231 isopulégol et béta-caryophyllène) représenent plus de 85-95 % de l’huile essentielle totale. Ce qui

232 conduit à un chromatogramme extrêmement simple (figure 5).

233 Tableau 2. Composition chimique des huiles essentielles de C. corymbia acclimatées au CRL (station
234 de Nkama - Chemical composition of essential oils C. corymbia acclimatized to CRL (Nkama station)
235
Echantillon NK2 NK3 NK4 NK6 NK7 NK2* NK3* NK4* NK5*
Procédé Hydrodistillation Vapo-hydrodistillation*
IRc IRlit % HE 1,28 2,05 2,75 1,65 2,00 2, 32 2,59 1,97 2,43
933 932 α-Pinène 0,07 0,07 0,12 0,2 - 0,06 0,05 - 0,05
971 969 Sabinène 0,22 - - 0,04 - - - - -
977 974 β-Pinène - 0,18 0,53 0,5 0,64 0,15 0,13 - 0,15
986 988 Myrcène 0,08 0,08 0,07 0,16 - 0,06 0,06 - 0,09
1022 1020 p-Mymène 0,05 - - 0,06 - 0,04 - -
1027 1024 Limonène 0,09 - - 0,24 0,24 0,03 0,08 - 0,02
1031 1026 1,8-Cinéole 0 0,02 0,04 1,02 0,24 0,07 - 0,05 -
1043 1044 E- β-Ocimène - - 0,03 0,21 - - - - 0,04
1049 - Berganal 0,26 0,1 0,14 - - 0,12 0,17 0,45 0,32
1056 1054 γ-Terpinène 0 0 0 0,3 0,23 0 - 0
1068 1068 Mentha-3,8-diène 0,11 0 0,08 0,33 0,53 0,12 0,08 - 0,1
1083 1086 Terpinolène 0,06 - 0,06 0,15 0,31 0,08 - - -
1096 1095 Linalol 0,21 - 0,34 0,11 0,27 0,16 - 0,27 0,2
1124 1122 trans Oxyde de rose - - - 0,25 - - 0 0,36 -
1445 Isopulégol tr tr tr 12,55 16,04 tr tr tr tr
1159 1148 Citronellal 74,35 79,41 80,38 65,52 57,26 75,99 78,83 69,41 78,34
1166 1155 Iso Isopulégol 6,77 4,78 4,5 5,92 8,83 6,3 4,62 6,58 6,63
1175 1167 Néoiso Isopulégol 1,11 0,67 0,64 0,27 1,12 1,13 0,77 0,95 -
1179 - NI 0,24 0,14 0,15 - - 0,23 0,14 0,19 1,11
1198 1200 γ-Terpinéol 0,05 0,1 - - - 0,04 - - 0,2
1229 1223 Citronellol 11,59 8,92 7,56 5,44 6,43 9,64 7,65 10,98 7,37
1312 1312 Acide citronéllique 0,12 0,79 0,43 0,24 1,03 0,51 0,5 1,87 0,16
1347 1350 Acétate de Citronellyle 0,14 0,62 0,45 - - 0,14 0,46 0,74 0,21
1355 1356 Eugénol 0,16 0,05 0,1 - - 0,23 0,04 0,13 -
1395 - NI 0,29 0,25 0,29 - - 0,35 0,3 0,41 0,2
1429 1417 β- Caryophyllène 0,49 1,12 1,68 1,09 2,46 1,59 2,14 2,72 2,18
1434 1434 γ-Elémène - 0,03 0,04 - - 0,05 0,06 0,05 0,03
1465 1452 α-Humulène - 0,07 - - 0,1 - 0,17 0,12
1490 1484 Germacrène-D 0,09 0,1 0,06 0,21 0,16 0,19 0,07 0,06
1504 1500 Bicyclogermacrène - 0,09 0,07 - - 0,12 0,13 0,08 0,03
1524 1522 δ-Cadinène - 0,04 0,04 - - 0,01 0,07 0,07 -
1588 1576 Spathulénol 0,07 0,09 0,03 - - - 0,07 0,1 0,03
1593 Oxyde caryophyllène 0,18 0,15 0,22 0,07 - 0,15 0,26 1,11 0,22
Total 96,70 97,9 98,09 94,73 95,84 97,59 96,80 96,80 97,90
236
237 NI : non identiié ; tr : traces

238

11
239
240
241 Figure 5. Chromatogramme type de l’huile essentielle de Corymbia citrodora acclimatée à Nkama
242 (CRL) - Typical Chromatogram of Corymbia citrodora essential oilacclimatized to Nkama (CRL)
243

244 L’Analyse en Composantes principales, construites sur les 5 premiers constituants majeurs de l’huile,

245 met en évidence, à travers le cercle de corrélation (figure 6), une bonne représentation des variables :

246 citronellal, citronellol, isopulégol, iso-isopulégol et teneur en huile essentielle (%) ; elle indique par

247 ailleurs que le citronellol qui est fortement corrélée à l’iso isopulégol, de même le citronellal est

248 corrélé à la teneur en huile essentielle. Le citronellol est anti correlé à béta- caryophyllène tandis que

249 le citronellal et à isopulégol et à iso isopulégol. Ceci signifie que, dans une huile donnée, le béta-

250 caryophyllène et le citronellol aungmente en même temps tandis que la teneur en citronellal augmente

251 lorsque la teneur en huile augmente et les quantités des isomères du pulégol diminuent.

252 La répartition des individus sur le premier plan principal F1F2 (qui contient 71,43 % d’information)

253 met en évidence une classe très homogène pour les huiles essentielles du verger qui exclut 2 individus

254 (NK6 et NK7, venant des arbres des 15 ans) ; ces 2 derniers forment une deuxième classe caractérisée

255 entre autres pas un niveau assez bas de citronellal et un niveau élevé d’isopulégol (figure 7). Par

256 rapport au constituant très largement majoritaire : le citronellal, la valeur de séparation entre ces 2

257 classes peut être située à 69-70 %. En effet : 65, 52% et 57, 26% (classe 2) < 69 % < 70 -80% (classe

258 1). Le procédé d’extraction (HD ou VHD) n’impacte pas de façon significative la composition des

259 huiles extraites puisque ces dernières se retrouvent toutes dans une même classe.

12
260

261
262 Figure 6. Cercle de corrélation en ACP pour les huiles essentielles des C.citrodor acclimatées à
263 Nkama (CRL) - PCA correlation circle for essential oils C.citrodora acclimatized to Nkama (CRL)
264
265

266
267 Figure 7. Répartition des individus en ACP sur le premier plan principal F1F2 (71,43 % de
268 l’information) - Distribution of individuals in CPA on the main plan F1F2 (71.43 % of information)
269

270 La Classification Ascendante Hiérarchique (CAH) confirme les 2 classes suggérées par l’ACP (figure

271 8, tableaux 3 et 4).

13
272
273
274

275
276 Figure 8. Répartition en 2 Classes par CAH des huiles esentiellesde C. citriodora aclimatées à Nkama
277 CRL (dendrogramme) - Distribution in 2 Classes by HCA of Esential Oils C. citriodora aclimatized at
278 Nkama CRL (dendrogram)
279

280
281 Tableau 3. Répartion en 2 Classes par CAH des huiles esentielles de C. citriodora aclimatés à
282 Nkama (CRL) - Distribution into 2 classes by CAH of Esential Oils C. citriodora
283 acclimatized in Nkama (CRL)
284
285
Classe 1 2
Objets 7 2
NK2* NK6
NK2 NK7
NK3*
NK3
NK4*
NK4
NK5*
286
287
288 Tableau 4. Objets centraux des 2 classes des huiles essentielles de C. corymbia acclimatés à Nkama
289 (CRL) - Central objects of the 2 classes of Essential Oils C. corymbia acclimatized to Nkama (CRL)
290
Iso-iso- Néo-iso Béta
Classe Citronellal Isopulégol pulégol isopulégol Citronellol Caryophyllène % HE
1 (NK2*) 75,99 0,00 6,30 1,13 9,62 1,59 2,32
2 (NK6) 65,52 12,55 5,92 0,27 5,44 1,09 1,65
291
292
14
293 En fin de compte, les 7 huiles essentielles du verger parmi des 9 huiles essentielles de C. corymbia

294 étudiées et acclimatées à la station de Nkama présentent une teneur en citronellal égale ou supérieure à

295 69 %. Ce sont des huiles de première qualité d’après les normes AFNOR (2000) reportées dans le

296 tableau 5. Elles sont extraites avec un rendement de l’ordre de 2 %, pouvant atteindre 4 % comme le

297 montrera l’étude sur modélisation de l’extraction. Ce qui en fait un excellent verger à graines pour le

298 développement de l’activité de production de l’huile essentielle de C. citriodora sur le plateau des

299 Cataractes.

300 Tableau 5. Caractéristiques de l’huile essentielle de C. citriodora selon les normes AFNOR (2000) -
301 Characteristics of C. citriodora essential oil according AFNOR (2000)
302
 Aspect : liquide mobile ;
 Couleur : variant de l’incolore au jaune pâle ;
 Odeur : rappelant celle de citronellal, son composant majoritaire ;
 Taux minimum en citronellal : 70% (m/m) ;
 Densité relative à 20°C : 0,860 – 0,870 ;
 Pouvoir rotatoire à 20°C : compris entre –1 et 3° ;
 Indice de réfraction : 1,450 à 1,459 ;
 Indice de carbonyle : minimum à 254.
303

304 3.4.2. Modélisation de l’extraction de l’huile essentielle au laboratoire

305 Le tableau 6 et 7 donnent la matrice d’expériences, et le plan d’expérimentation du plan factoriel 2 3 de

306 l’extraction de l’huile essentielle de C. citriodora au laboratoire , avec respectivement : X1, la durée de

307 la distillation, X2, la masse matériel végétal et X3, la méthode de distillation.

308 Le tableau 8 regroupe les réponses (% HE, % citronellal, % citronellol) générées par le plan

309 d’expériences utilisé.

310 Tableau 6. Matrice d’expériences de l’extraction des huiles essentielles de C. citriodora acclimaté au
311 CRL (station de Nkama) - Experiment matrix of essential oil extraction experiments C. citriodora
312 acclimatized to CRL (Nkama station)
313
Exp X1 X2 X3
1 -1 -1 -1
2 1 -1 -1
3 -1 1 -1
4 1 1 -1
5 -1 -1 1
6 1 -1 1
7 -1 1 1
8 1 1 1

15
314
315
316
317
318 Tableau 7. Plan d’expérimentation de l’extraction des huiles essentielles de C. citriodora acclimatée
319 au CRL (station de Nkama) - Design of experiments for the extraction of essential oils C. citriodora
320 acclimatized to CRL (Nkama station)
321
Essai Durée (h) Masse végétale (g) Méthode
1 1,5 118 HD
2 3 118 HD
3 1,5 220 HD
4 3 220 HD
5 1,5 118 VHD
6 3 118 VHD
7 1,30 220 VHD
8 3 220 VHD
322
323 HD: Hydrodistillation; VHD: Vapo hydrodistillation
324
325 Tableau 8. Teneur en huile et composition chimique des huiles issues du plan d’expériences - Oil
326 content and chemical composition oils from the design of experiments
327
328
N° Expérience 1 2 3 4 5 6 7 8
Procédé HD HD HD HD VHD VHD VHD VHD
% HE 3,60 4,10 2,41 2,86 2,71 3,14 1,72 2,4
α-Pinène 0,00 0,05 0,04 0,00 0,00 0,05 0,09 0,10
β-Pinène 0,08 0,00 0,12 0,00 0,09 0,13 0,00 0,20
Myrcène 0,00 0,09 0,00 0,00 0,05 0,09 0,11 0,10
Limonène 0,05 0,00 0,00 0,00 0,31 0,07 0,08 0,00
1,8-Cinéole 0,35 0,29 0,31 0,00 0,04 0,31 0,32 0,00
Berganal 0,3 0,14 0,16 0,7 0,21 0,14 0,14 0,30
Linalol 0,31 0,3 0,26 0,39 0,26 0,28 0,26 0,20
Citronellal 77,00 78,09 83,66 62,22 84,10 83,13 78,26 78,00
Iso Isopulégol 6,36 6,2 5,01 7,76 4,4 4,66 6,17 6,6
Neo iso Isopulégol 0,00 0,88 0,49 1,03 0,29 0,41 0,81 0,00
γ -Terpinéol 0,06 0,08 0,05 0,95 0,04 0,05 0,05 0,20
Citronellol 9,27 9,33 7,67 13,61 7,49 7,11 8,56 7,40
Acide citronéllique 0,86 0,51 0,37 2,43 0,66 0,58 0,49 0,20
Acétate de citronellyle 0,27 0,09 0,09 0,64 0,07 0,08 0,15 0,20
Eugénol 0,00 0,04 0,07 0,26 0,05 0,06 0,11 0,00
β-Caryophyllène 0,11 0,5 0,32 0,7 0,37 0,84 1,57 2,20
α-Humulène 0,00 0,04 0,00 0,00 0,00 0,06 0,1 0,10
Germacrène-D 0,00 0,04 0,00 0,00 0,00 0,09 0,12 0,10
Bicyclogermacrène 0,00 0,05 0,00 0,00 0,00 0,1 0,12 0,00
Spathulénol 0,05 0,1 0,05 0,39 0,05 0,07 0,06 0,00
Oxyde caryophyllène 0,06 0,12 0,06 1,06 0,08 0,09 0,11 0,20
Total 95,13 96,94 98,73 92,14 98,56 98,4 97,68 96,10

16
329
330

331 Le traitement du plan à l’aide du logiciel JPM SAS conduit, pour le rendement de l’extraction, au

332 modèle mathématique suivant :

333 y = 2,90+0,26x1-0,52x2-0,38x3+0,03x1x2 - 0,02x1x3 - 0,09x2x3

334 Les effets des facteurs sont reportés dans le tableau 9 et figure 9.

335 Tableau 9. Effets de facteurs et d’interactions sur l’extraction de l’huile essentielle de C. citriodora -
336 Effects of factors and interactions on the extraction of C. citriodora essential oil
337
Terme Estimation Erreur t ratio Prob. > |t|
Des effets de facteurs standard
Constante (a0) 2,8675 0,0375 76,47 0,0083
Durée (a1) 0,2575 0,0375 6,87 0,0921
Masse(a2) -0,52 0,0375 -13,87 0,0458
Méthode(a3) 0,375 0,0375 10,00 0,0635
Durée*Masse (a1a2) 0,025 0,0375 0,67 0,6257
Durée*Méthode (a1a3) -0,02 0,0375 -0,53 0,6881
Masse*Méthode (a2a3) -0,0875 0,0375 -2,33 0,2578
338

339 Cette étude permet d’établir que : (i) le rendement moyen de l’extraction est de 2,90 % ; (ii) les effets

340 des 3 facteurs sont du même ordre de grandeur avec deux positifs (a1 et a3) et un négatif (a2) : La

341 prolongation de la durée d’extraction et la vapo-hydrodistillation améliorent le rendement d’extraction,

342 alors que le tassement du matériel végétal qui a l’effet de facteur le plus important, abaisse ce

343 rendement ; (iii) les effets d’interaction, tous positifs sont beaucoup plus faibles que ceux des facteurs;

344 ils peuvent donc être négligés devant ces derniers.

345 L’équation du modèle, notamment avec un procédé domestique, peut se réduire à :

346 y = 2,90+0,26x1-0,52x2+0,38x3

347 Un traitement analogue conduit aux modèles suivants pour la teneur en citronellal et la teneur en

348 citronellol (tableau 10).

17
349 Tableau 10. Estimation des effets des facteurs sur les réponses : < citronellal > et <citronellol> -
350 Effect of factor estimation on responses : <citronellal> and <citronellol>
351
Terme Estimation des effets de facteurs
Citronellal Citronellol
Constante (a0) 70,5575 8,805
Durée (a1) 4,8025 0,5575
Masse(a2) -10,0225 0,505
Méthode(a3) 4,685 1,165
Durée*Masse (a1a2) 4,7725 0,6375
Durée*Méthode (a1a3) -9,89 0,9425
Masse*Méthode (a2a3) 7,72 0,165
352

353 % citronellal = 70,56-4,80 x1-10,02x2+ 4,69x3-4,78x1x2-9,89x1x3+7,72x2x3

354 % citronellal = 8,81+0,558x1+0,51x2-1,17x3+0,64x1x2-0,94x1x3-0,17x2x3

355 La figure 9 résume l’ensemble des effets de facteurs et les résultats attendus dans les conditions

356 optimales (désirabilité).

357

358 Figure 9. Effets des facteurs et désirabilité au cours de l’extraction de l’huile essentielle de C.
359 citriodora. - Effects of factors and desirability during the extraction of C. citriodora essential oil.

360

18
361 Les effets des facteurs sont soit légèrement positifs soit légèrement négatifs mais généralement très

362 faibles et tendent tous vers 0 (axe des abscisses). Il ne sont donc pas significatifs à l’intérieur du

363 domaine d’étude retenue , Toutefois on peut espérer extraire de l’huile essentielle avec un rendement

364 de 3,25 % contenant environ 75 % de citronellal et 10 % de citronellol en partant de 169 g de matériel

365 végétal pendant 2h15min et par hydrodistillation.

366

367 5. CONCLUSION

368 Les huiles essentielles des arbres du verger du projet national de développement de la filière huiles

369 essentielles de Corymbia citriodora au Congo, mise en place à Nkama par l’Ecole Supérirure de

370 Technologie des Cataractes (ESTc) en appui aux participants au projet, sont de très bonne qualité avec

371 des rendements pouvant atteindre 4 % ; trois à quatre constituants font plus de 90 % de l’huile

372 essentielle totale, avec comme chemotype % citronellal > % citronellol > % isopulégols, et une

373 teneur en citronellal pouvant dépasser 80 %. Le procédé d’extraction a été modélisé à l’aide d’un plan

374 factoriel complet 23 pour explorer les possibilités de son optimisation. Au laboratoire, la durée de

375 distillation et l’hydrodistillation ont des effets positifs sur le rendement tandis que le tassement du

376 matériel végétal dans le distillateur a un effet négatif. La teneur en citronellal est moins sensible aux

377 effets des facteurs. Un rendement de 3,25 % avec une teneur en citronellal de 75 % sont attendus de

378 l’hydrodistillation de 160 g de feuilles de C. corymbia pendant 2h15 min. Au vu des normes en

379 vigueur, c’est une huile d’excellente qualité, produite de façon très rentable.

380

381 REMERCIEMENTS

382 Ce travail a été réalisé avec le soutien logistique et technique de l’Ecole Supérieure de Technologie

383 des Cataractes et du Service National de Reboisement. Les auteurs expriment leurs sincères

384 remerciement aux autorités et agents de ses structures.

385

386

19
387 BIBLIOGRAPHIE

388 Adams, R.P. 1995. Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography/Mass

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