Phytothérapie
DOI 10.1007/s10298-015-0976-5
PHYTOCHIMIE
Étude quantitative des polyphénols dans les différents organes
de l’espèce Papaver rhoeas L.
Quantification study of polyphenols in different organs of Papaver rhoeas L.
M. M. Dif · H. Benchiha · Z. Mehdadi · F. Benali-Toumi · M. Benyahia · K. Bouterfas
© Lavoisier SAS 2015
Résumé Le présent travail porte sur une étude phytochi-
mique du coquelicot (Papaver rhoeas L) poussant dans la
région de Tessala (wilaya de Sidi Bel Abbes ouest Algérien).
Cette étude porte sur le dosage phénols totaux, flavonoïdes
totaux et des tanins dans les sépales, les pétales, les feuilles
et la racine suivie par une étude statistique. La différence
entre les concentrations des composés phénoliques est signi-
ficative et montre que les pétales sont les plus riches en
composés phénoliques, ce qui explique leur usage dans la
médecine traditionnelle.
Mots clés Étude phytochimique · Papaver rhoes L. ·
Tessala · Phénols totaux · Flavonoïdes totaux · Tanins
Abstract The present work deals with a phytochemical study
of the poppy (Papaver rhoeas L.) growing in the region Tes-
sala (wilaya of Sidi Bel Abbes western Algeria). This study
focuses on the determination of some polyphenols in Total
phenols, total flavonoids and tanins in sepals, petals, leaves
and root of Papaver roeas followed by a statistical study. The
differences between results are significant and show that the
petals are the richest in phenolic compounds, which explains
their use in traditional medicine.
Keywords Phytochemical study · Papaver rhoes L. ·
Tessala · Total phenols · Total flavonoids · Tanins
M. M. Dif (*) · Z. Mehdadi · F. Benali-Toumi · M. Benyahia
Laboratoire d’écodéveloppement des Espaces,
Université Djillali Liabès,
BP 89, Haï Larbi Ben M’Hidi,
Sidi Bel Abbés 22000, Algérie
e-mail : mustitus17@hotmail.com
H. Benchiha · K. Bouterfas
Laboratoire de biodiversité végétale : conservation et valorisation,
Université Djillali Liabes, BP 89, Haï Larbi Ben M’hidi,
Sidi Bel Abbés 22000, Algérie
Introduction
Tessala est une région située dans la wilaya de Sidi bel Abbes
dont l’inventaire montre que la biodiversité végétale rencon-
trée est riche avec 193 espèces distribuées sur 49 familles et
146 genres. Cette même flore recense 103 plantes à caractère
médicinal et aromatique et à usages très diversifié au niveau
de la zone et par les populations riveraines [1].
Parmi ces plantes, nous nous sommes intéressés au
coquelicot (Papaver rhoeas L.) (Fig. 1), plante connue sous
différents noms vulgaires : ponceau, pavot rouge, etc. Mais
elle est désignée le plus communément sous le terme de
coquelicot ou simplement coq. Elle est annuelle, de 20-80
cm, à floraison remarquable, couverte de poils hirsutes,
poussant souvent en groupes. La tige unique est dressée,
non rameuse, très mince. Les feuilles sont en rosette à la
base, alternes sur la tige, profondément divisées en seg-
ments, lancéolés, incisées-dentées, velues. Les racines (sont
pivotantes, fibreuses, blanchâtres. Le fruit est une capsule
ovoïde et conique, trapue, rainurée qui s’ouvre par une ran-
gée de petits pores sous le disque, libérant de nombreuses
petites graines [2]. Autrefois, les fleurs s’utilisaient en sirop
ou en infusion (trois ou quatre pincées de pétales par tasse)
pour calmer la toux et supprimer les spasmes tout en favori-
sant l’expectoration [3]. Le genre de cette espèce fait l’objet
de plusieurs publications dans le monde [3-6].
Tous les végétaux contiennent des composés phénoliques
mais, comme c’est le cas de la plupart des substances naturel-
les qualifiées de métabolites secondaires, leur répartition qua-
litative et quantitative est inégale selon les espèces, les orga-
nes, les tissus et les stades physiologiques [7]. Ces composés
sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques
comme la croissance cellulaire, la rhizogénèse, la germination
des graines et la maturation des fruits [8]. Ces substances
jouent un rôle important dans l’interaction de la plante avec
son environnement biologique et physique. Les fonctions
principales attribuées à ces composés sont la protection contre
les pathogènes et les herbivores ainsi que la limitation des
dommages dus aux radiations UV [9].
2 Phytothérapie
Fig. 1 Vue globale de la plante Papaver rhoeas L
La présente étude a pour but de quantifier les phénols
totaux, les flavonoïdes totaux, les tanins condensés et les
tanins hydrolysable par la méthode spectroscopique en
comparant les racines, les feuilles, les sépales et les pétales
de Papaver rhoeas L.
Matériel et méthode
Matériels biologique
Un échantillon de l’espèce Papaver rhoeas L qui pousse
dans la région de Tessala a été récolté en avril 2012 et
reconnu à l’aide du professeur Zoheir Mehdadi enseignant
en biologie végétale dans l’université de Djilali Liabes. Les
organes végétaux prélevés ont soigneusement été lavés à
l’eau courante, puis mis à sécher au laboratoire à l’abri de la
lumière, de l’humidité et de la poussière. Après une dizaine
de jours, chaque organe végétal a été broyé à l’aide d’un
broyeur à maille1 et conservé dans un petit flacon en plas-
tique bien fermé et étiqueté.
Méthode d’étude
Dosages des phénols totaux et flavonoïdes
• Technique d’extraction et de quantification
0,2 g de chaque organe végétal a été broyé à froid (4°C) dans
un mortier contenant 10 ml de méthanol 80%. Après agitation
au vortex, le mélange a été centrifugé par une centrifugeuse2 à
une vitesse de 4000 tr /min pendant une durée de 10 min et le
premier surnageant (Su 1) est ainsi récupéré [10].
Cette opération est répétée 2 fois pour épuiser le contenu
en composés phénoliques solubles de l’échantillon. Les trois
surnageants (Su 1, Su 2 et Su 3) sont regroupés et constituent
l’extrait hydroalcoolique qui a été conservé à -20°C jus-
qu’aux analyses.
Dosage des phénols totaux par spectrophotométrie
Le principe de dosage des phénols totaux repose sur les
capacités réductrices des complexes ioniques polymériques
formés à partir des acides phosphomolybdiques et phospho-
tungstique (réactif de Folin-Ciocalteu) par les composés phé-
noliques [11]. Il en résulte la formation d’un complexe
bleu qui accompagne l’oxydation des composés phénoli-
ques et qui est stabilisé par l’addition de carbonate de
sodium (NaCO3).
Le dosage des phénols totaux est effectué par la compa-
raison de l’absorbance observée à celle obtenue par un étalon
d’acide gallique de concentration connue.
Une prise d’essai de 50 μl d’extrait hydroalcoolique est
diluée dans 2,5 ml de l’eau distillée, nous y ajoutons 250 μl
de réactif de Folin-Ciocalteu, le mélange est soumis à une
agitation au vortex puis nous le laissons reposer 5 min à
température ambiante. Après agitation, 500 μl de carbonate
1
De type I K A WERKE ME 10 BASIC
2
De type Hettich UNIVERSAL/K2S
Phytothérapie
de sodium 20% (20 g de carbonate de sodium dans 100 ml
d’eau distillée) sont ajoutés. Les tubes sont ensuite bien agi-
tés puis incubés à une température de 40°C pendant 30 min.
Le mélange est gardé à température ambiante et à l’obscurité
pendant 60 min, l’absorbance est lue au spectrophotomètre
UV (de type TECHCOMP VIS 7200) à une longueur d’onde
(λ) de 765 nm.
Nous réalisons une gamme étalon en milieu aqueux
(6 points de concentration de 0 à 500 mg/l) avec un polyphé-
nol témoin de l’acide gallique. Á 50 μl d’acide gallique à
différentes concentrations (0-100-200-300-400-500 mg/l)
Dosage des flavonoïdes
La quantification du contenu flavonoïdes des différents orga-
nes de la plante est estimée par la méthode du trichlorure
d’aluminium (AlCl3) [11]. Le principe de la méthode est
basé sur l’oxydation des flavonoïdes par ce réactif (AlCl3),
elle entraîne la formation d’un complexe brunâtre qui
absorbe à 510 nm. La comparaison de l’absorbance observée
à celle obtenue par un étalon de catéchine de concentration
connue permet d’évaluer la teneur totale en flavonoïdes.
Le dosage des flavonoïdes s’effectue par la méthode sui-
vante : 500 μl d’extrait hydro-alcoolique sont mélangés avec
1500 μl d’eau distillée et 150 μl de nitrate de sodium à 5%,
nous laissons reposer le mélange 5 min à température
ambiante et à l’obscurité. Ce mélange est ensuite additionné
à 150 μl de trichlorure d’aluminium 10% (10 g d’AlCl3 dans
100 ml eau distillée); après un repos de 11 min à l’obscurité ;
500 μl de soude à 1 M est ajouté. Le mélange est soumis à
une agitation au vortex, la densité optique est lue au spec-
trophotomètre UV à une longueur d’onde (λ) de 510 nm.
Une courbe d’étalonnage réalisée par un standard étalon (la
catéchine) à différentes concentrations (0-10-20-30-40-50
mg/l) et pratiquée dans les mêmes conditions opératoires
que celles des échantillons servira à la quantification des
flavonoïdes.
Quantification des tanins
Tanins hydrolysables
Cette méthode est basée sur une réaction avec le trichlorure
de fer, le mélange d’extrait tannique plus le réactif du trichlo-
rure ferrique (FeCl3) provoque une coloration rouge violette
du complexe d’où la formation des ions de (Fe 3+) [11,12].
Pour le dosage des tanins hydrolysable 0,2 g de chaque
organe broyé de notre plante est macéré pendant 18 h dans
10 ml de méthanol à 80%. Après macération, le mélange est
filtré. 1 ml du filtrat est additionné à 3,5 ml d’une solution
préparée à base de trichlorure ferrique (FeCl3) à 0,01 M dans
l’acide chlorhydrique (HCl) à 0,001 M. L’absorbance du
3
mélange est lue 15 secondes après addition du réactif, à une
longueur d’onde (λ) de 660 nm sur spectrophotomètre UV.
Les tanins hydrolysables sont exprimés par la formule
suivante :
TH (%) = (Abs x M x V) / E mole x P
Avec : TH : tanins hydrolysables, Abs : l’absorbance, E
mole : 2169 de l’acide gallique (constante exprimée en
mole), M : masse = 300, V : volume de l’extrait utilisé, P :
poids de l’échantillon
Tanins condensés (test de vanilline avec H2SO4)
Cette méthode de détermination du taux des tanins conden-
sés est basée sur la condensation des composés polyphéno-
liques avec la vanilline en milieu acide qui donnera un com-
posé brun. Pour le dosage des tanins condensés, 0,2 g de
chaque organe broyé de notre plante est macéré pendant
18 h dans 10 ml de méthanol à 80%. Après macération, le
mélange est filtré, 1 ml de filtrat est additionné à 2 ml d’une
solution préparée à base de vanilline à 1% dans l’acide sul-
furique H2SO4 à 70% (1 g de vanilline dans 77,77 ml de
H2SO4 complété avec de l’eau distillée pour avoir 100 ml).
L’ensemble du mélange est placé dans un bain marie pendant
15 min à 20 °C à l’abri de la lumière, l’absorbance (Abs) du
mélange est lue à une longueur d’onde (λ) de 500 nm sur
spectrophotomètre UV.
Les tanins condensés sont exprimés par la formule :
TC (%) = (5,2 x 10-2 x Abs x V) / P
Avec :
TC : tanins condensés, 5,2 x 10-2 : constante exprimée en
équivalent de cyanidines, Abs : l’absorbance, V : volume de
l’extrait utilisé, P : poids de l’échantillon
Traitement statistique des résultats biochimiques
Les résultats de dosage des différents composés phénoliques
sont exprimés en moyenne des trois essais ± l’écart-type
ainsi ils sont soumis au test de l’analyse de la variance à un
seul critère de classification (ANOVA 1), au seuil de 5%,
pour mettre en évidence l’effet d’un seul facteur qui est dans
notre cas les organes de la plante étudiée. Cette analyse est
réalisée pour la comparaison entre les valeurs moyennes cor-
respondantes aux différentes concentrations et aux différen-
tes teneurs des composés phénoliques dosés sur les feuilles,
sépales, pétales tiges et racines.
Résultat et discussion
Teneur en phénols totaux (en mg/g de matière sèche)
Les concentrations moyennes en phénols totaux caractéri-
sant les extraits (Fig 2) obtenus à partir des différents
4 Phytothérapie
organes de la plante ont été évaluées à partir de l’équation de
régression de la gamme d’étalonnage établie avec l’acide
gallique (0 à 500 mg/l) et sont exprimées en g équivalent
d’acide gallique par litre d’extrait (Fig. 3).
Nous remarquons d’après les résultats de la figure 1 que
les pétales contiennent une quantité importante (31,86 ±
1,31) de phénols totaux, les feuilles contiennent une quantité
moyenne (11,12 ± 0,623), tandis que les sépales et les raci-
nes en contiennent une faible quantité (3,15 ± 0,28, 1,99 ±
0,04). La répartition inégale des polyphénols dans les diffé-
rents organes d’une plante a été rapportée par plusieurs
auteurs [13,14].
De ce fait, nous pouvons procéder au classement décrois-
sant des différents organes de la plante selon leurs concen-
trations en phénols totaux : pétales>feuilles> sépales>
racines.
Fig. 2 Concentration moyenne en phénols totaux(en mg EAG/g
de matière végétale) des différents organes de la plante
Fig. 3 Droite d’étalonnage des phénols totaux réalisée par l’acide
gallique
L’analyse de la variance au seuil de 5% a montré que la
différence entre la teneur en phénols totaux des organes
(racine, feuille, sépale, pétale) est significative :
F calculée >Fthéorique (36.4673867>6.59138212)
Teneurs en flavonoïdes (en mg /g de matière végétale)
La quantité des flavonoïdes dans les différents extraits de
Papaver rhoeas L. (Fig. 4) a été déterminée à partir de la
courbe d’étalonnage établie à partir de solutions de différen-
tes concentrations de catéchine (Fig. 5). Les résultats obte-
nus sont exprimés en milligrammes par gramme de matière
végétale en équivalent de la catéchine. Les résultats illustrés
dans la figure 4 montrent que les sépales et les pétales
contiennent des concentrations importantes en flavonoïdes
Fig. 4 Concentration moyenne en flavonoïdes des différents orga-
nes de la plante
Fig. 5 Droite d’étalonnage des flavonoïdes réalisée par la catéchine
Phytothérapie
(60,65 ± 3,42, 66,22 ± 4,93) alors que les feuilles et les raci-
nes contiennent des faibles concentrations (15,43 ± 0,28,
12,28 ± 1,25).
De ce fait, nous pouvons classer selon un ordre décrois-
sant les différents organes de la plante quant à leur concen-
tration moyenne en flavonoïdes comme suit : pétales > sépa-
les> feuilles> racines.
L’analyse de la variance au seuil de 5%, a montré que la
différence entre la teneur en flavonoïdes des organes (racine,
feuille, sépale, pétale) est significative :
F calculée >Fthéorique (175.383823>6.59138212)
Quantification des tanins
Les tanins condensés (en %)
L’analyse des résultats (Fig. 6) obtenus montre que les diffé-
rents organes de la plante contiennent un faible pourcentage
en tanins condensés, les pétales et les feuilles présentent un
pourcentage important (0,21 ± 0,01, 0,15 ± 0,00), les sépales
en contiennent un taux moyen (0,11 ± 0,01) et les racines un
faible taux (0,15 ± 0,00).
De ce fait, nous pouvons classer selon un ordre décrois-
sant les différents organes de la plante selon leurs teneurs en
tanins condensés : pétales >feuilles >sépales >racines.
L’analyse de la variance au seuil de 5%, a montré que la
différence entre la teneur en tanins condensés des organes
(racines, feuilles sépales, pétales) est significative :
F calculée >Fthéorique (44 >6.59138212)
Les tanins hydrolysables (en %)
L’analyse des résultats obtenus (Fig. 7) montre que les dif-
férents organes de la plante contiennent un faible pourcen-
Fig. 6 Teneur moyenne en tanins condensés (en %) des différents
organes de la plante
5
Fig. 7 Teneur moyenne en tanins hydrolysables (en %) des diffé-
rents organes de la plante
tage en tanins hydrolysables, ce sont les pétales et les feuil-
les qui en contiennent plus (0,235 ± 0,007, 0,225 ± 0,007),
les sépales et les racines se placent les derniers (0,021 ±
0,002, 0,037 ± 0,002).
De ce fait, nous pouvons classer selon un ordre décrois-
sant les différents organes de la plante selon leurs teneurs en
tanins hydrolysables : pétale >feuille >racine >sépale. L’ana-
lyse de la variance au seuil de 5 %, a montré que la diffé-
rence entre la teneur en tanins hydrolysables des organes
(racine, feuille, sépale, pétale) est significative :
F calculée >Fthéorique (987.847095 >6.59138212)
Conclusion
Le coquelicot est une plante qui présente un effet thérapeu-
tique, utilisée pour calmer les irritations de la gorge et sup-
primer la toux. Sa richesse en alcaloïdes et en flavonoïdes
facilite l’endormissement et apaise tout l’organisme [15].
L’analyse quantitative des extraits du Papaver roheas L. a
révélé la richesse de notre plante en métabolites secondaires
notamment les polyphénols et précise que les pétales sont les
plus riches en composés phénoliques.
Cette étude valide scientifiquement l’usage traditionnel
de cette plante surtout la fleur et peu révèle leur intérêt dans
le cadre d’une exploitation en pharmacie.
Liens d’intérêts : les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
d’intérêts.
Références
1. Baraka D (2009) Inventaire et caractérisation des plantes médici-
nales de djebel Tessala (w. de Sidi Bel Abbes). Mémoire de SBA,
140 p
6 Phytothérapie
2. Couplan F, Styner E (1994) Guide des plantes comestibles et
toxiques. Edition Delauchaux et Nestlé. Paris, 415 p
3. Bardeaux F (2009) La Pharmacie du bon Dieu. Edition Lanore,
Paris, 233 p
4. Matyášová1 E, Novák1 J, Stránská I, et al (2011) Production of
morphine and variability of significant characters of Papaver
somniferum L. Thèse de doctorat, Université de Prague, 2009,
428 p
5. Bilková A, Bilka, F, Bezáková L(2004) Characterization of
Papaver somniferum l. Amine oxidase. Acta Facult Pharm Univ.
Comenianae 51-9
6. Zakaria R.A., S.Razmi, Madadi R, et al (2011) Karyological
study of the medicinal plant Papaver rhoeas from northwest of
Iran. Afr J Biotechnol 10: 1173–7
7. Middleton P, Stewart F, Al-Qahtani, et al (2005) Antioxidant,
Antibacterial Activities and General Toxicity of Alnus glutinosa,
Fraxinus excelsior and Papaver rhoeas. Iran J Pharmaceut Res 2:
81–6
8. Sarni-Manchado P, Cheynier V (2006) Les polyphénols en agroa-
limentaire, Editions Lavoisier, Paris, 398 p
9. El Hadrami L, Ramos T, El Bellaj M, et al (1997) A sinapic deri-
vative as an induced defense compound of date plam against
Fusarium oxysporum sp. albedinis, the agent bayoud disease.
J Phytopathol 145 :329–33
10. Mole S, Waterman PG (1987) A critical analysis of techniques
for measuring tanins in ecological studies II, Techniques for bio-
chemically defining tanins. Oecologia72:148–56
11. Swain T, Hillis WE (1959) The phenolics constituants of Prunus
domestica -I- the quantitative analysis of phenolics constituents.
J Sci Food Agric 10: 63–81
12. Falleh H, Ksouri R, Abdelly C (2006) Activité antioxydante et
contenu en polyphénols dans les différents organes de l’artichaut
sauvage Cynara cardunculus. Institut des région arides, Revue
des régions arides, Tunisie, 344 p
13. Gehin A, Guyon C, Nicod L (200) Glyphosate-induced antioxi-
dant imbalance in HaCaT: The protective effect of Vitamins C
and E. Environ Toxicol Pharmacol 22: 27–34
14. Bouterfas K (2011) Etude de Marrubium vulgare L. du mont de
Tessala (Algérie occidentale) autoécologie, histologie, quantifica-
tion de quelques polyphénols et évaluation du pouvoir antimicro-
bien des flavonoïdes. Mémoire de magister, université de Sidi Bel
Abbes, 244 p
15. Lucienne AD (2010) Les plantes médicinales d’Algérie. Edition
Berti Editions, Alger, 240 p