Anglais scientifique II master 2

spécialité : Biochimie appliquée

Présenté par : Groupe 01/№02

 Ben salem feryal
 Boucif rayan
 Ben aifa imad
2022-2023
 Title in English

Ant-diabetic Activity of Nigella sativa Seed Extract in Cultured

Pancreatic β-cells, Skeletal Muscle Cells, and Adipocytes.

Theme en francais

Activité antidiabétique de extrai de graines de Nigelle Sativa

dans culture de cellules pancréatiqueβ et cellules musculaires
squelettiques et d'adipocytes.
 Problématique

Les effets antidiabétiques de Nigella Sativa sont

connus, mais quels sont les mécanismes d'action de
l'extrait de NS et comment les cellules cibles
éliminent le glucose ?
 Objectif

 Le but de cette étude est:

1- évalué les effets de l'extrait éthanoïque brut de graines

de NS sur la sécrétion d'insuline dans cellules β pancréatiques.

2- l'élimination du glucose par les cellules musculaires

squelettiques et les adipocytes.
 Aperçu générale
1
 Le diabète type 2 est un trouble de la secretion de
l'insuline induit une glycémie chronique élevée.

 Plus de 150 millions de personnes dans le monde

sont touchées par cette maladie, ce chiffre
doubler au cours des 20 prochaines années.

 Les médicaments actuels pour le traitement du

cette maladie sont limités
 Parce qu'il peut améliorer la sécrétion d'insuline
et la sensibilité.
 Aperçu générale
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 Un traitement de 18 h par NS : pour tester les effet

de cette extrait

Augmente la sécrétion d'insuline par les cellules β pancréatiques

Améliorer la sensibilité à l'insuline des myoblastes

Reduit la production de glucose par les adipocytes

Pour trouver une solution efficace, utilisons des plantes aux effets
anti-hyperglycémiants a consommer depuis des siècles pour traiter
le diabète comme:
 Nigelle Sativa:

Famille
de plant Pousse
Espèce le nom
spontanément
Runan-
culaceae Nigella graine noire ou
sativa L de cumin noir
  Nigelle Sativa:

utilisées en médecine traditionnelle en Afrique du

Nord et au Moyen-Orient pour le traitement du
diabète.
  Un traitement de 18 h par NS :

amplifié la sécrétion d'insuline stimulée

a.Effet sur insuline:
par le glucose de plus de 35% .

accéléré la prolifération des cellules β et

b.Effet sur les cellules β:
conservé de la masse des β.

augmenté l'absorption basale de glucose

c.Effet sur les cellules de 55% (équivalent à environ deux fois
musculaires: l'effet de 100 nM d'insuline) dans les
cellules musculaires .
 l'extrait de graines NS accéléré
l'accumulation des triglycérides par
d.Effet sur les Adipocytes:
rapport au traitement par 10 µM de
rosiglitazone.
 Méthodologie

1) Les graines de NS ont été obtenues auprès d'un herboriste à

Rabat, en août 2003 et authentifiées par un botaniste
expérimenté.

 Un spécimen de référence:
a) déposé dans l'herbier de l'Institut Scientifique de Rabat.
b) Les graines ont été :lavées et séchées puis réduites en poudre
avec Microniseur électrique.
1)La poudre a été extraite 3 fois avec de l'éthanol à 80%.
2)le solvant a été évaporé à 40◦ C sous pression réduite a la fin obtenir
un extrait biphase de Nigelle Sativa.
3)L'extrait Les phases huileuse et solide ont été recombinées en
proportion de leur rendement.
4)solubilisées fraîchement dans du DMSO avant le traitement des
cellules.
5)les extraits ont été conservés à 4◦ C dans un dessiccateur et
protégés contre la lumière et de l'humidité.
 les étapes de teste de sécrétion d’insuline:

A- Les cellules INS832/13 : Les lignées cellulaires INS832/13 et βTC-tet ont été
utilisées pour tester les effets du NS sur la potentialisation de la sécrétion
d'insuline stimulée par le glucose (GSIS).
1) ont été ensemencées dans des plaques à 12 puits et incubées
dans un milieu de croissance pendant 24 h complet jusqu'à 80
% de confluence.

2) été traitées pendant 18 h avec ou sans NS et avec du glucose

ajusté à 3 mM pour conférer une sensibilité au glucose aux
cellules.

3) 48 h pour arrêter la prolifération et éliminer toute influence des

effets prolifératifs potentiels sur la mesure de la sécrétion
d'insuline.
B- La lignée cellulaire βTC-tet:La lignée cellulaire βTC-tet est développée à partir
de souris transgéniques exprimant l'antigène T du SV40 (Tag) sous le contrôle
du promoteur de l'insuline II.

1) ont été rincées et pré-incubées avec le tampon Krebs pendant

1 h à 37◦ C en présence ou en l'absence de l'extrait .

2) ont été traitées avec 2 mM sécrétion basale d'insuline pendant

1 h en présence ou en l'absence d'extrait dans un tampon
supplémenté avec 0,5% d'IBMX.

3) La sécrétion d'insuline a été exprimée par puits pour les

cellules βTC-tet. L'insuline a été extraite dans du HCl à 1,25 % .

4) éthanol, et les échantillons ont été conservés pendant une nuit

à 4◦ C. Ces échantillons ont été soniqués et centrifugés 5 min
avant la mesure de l'insuline dans le surnageant par RIA.
5) les échantillons ont été placés sur la glace et les dilutions
appropriées ont été réalisées avec un tampon phosphate.

6) Les échantillons dilués ont été incubés dans des récipients de

12 × Tubes RIA avec de l'insuline I de rat et un anticorps
primaire contre l'insuline de rat à 4◦ C pendant la nuit dans
l'obscurité.

7) La radioactivité dans le culot a été mesurée par un compteur

gamma.