Filière SVI

Semestre 6

Module Biochimie III

Coordonnateur du Module : Pr Ahmed Adlouni

Année Universitaire 2020-2021

 Biologie clinique

Biochimie clinique Hématologie Microbiologie Parasitologie

ADLOUNI
 Analyses en biochimie clinique

Des analyses de base: Marqueurs de fonction et état clinique d’organes tels reins, foie, muscles,
système cardiovasculaire. Marqueurs de l’état inflammatoire, formule sanguine, gaz sanguins,
analyses d’urines.

Des analyses spécialisées: - dosages hormonaux

- marqueurs tumoraux
- recherche d’Ac spécifiques
- étude de voies métaboliques
- médicaments

Moyens: techniques diverses (spectrophotométrie, immunologie, immunochimie,

chromatographie, électrophorèse, …) aujourd’hui majoritairement automatisables

UTILITE: Les résultats de biochimie clinique complètent ceux des examens cliniques: combinaison indispensable
pour un diagnostic correct

La qualité des résultats des analyses biochimiques dépend de la précision avec laquelle les manipulations en
laboratoire sont effectuées mais également du soin avec lequel les prélèvements sont réalisés.
ADLOUNI
 Exemples de paramètres de Biochimie clinique

Electrophorèse des protéines sériques

Calcium

Phosphore

Magnésium

Electrolytes sanguins

Urée, Glycémie, Hémoglobine Glyquée

Bilan lipidique (EAL)

Explorations biologiques des fonctions hépatiques et pancréatiques

Dosages biochimiques des hormones: la parathormone (PTH), la thyréostimuline (TSH), la

thyroxine T4, la tri-iodo-thyroxine T3/FT3 , la testostérone, la progestérone

Marqueurs cardiaques: Troponine et CPK

Marqueurs tumoraux

Vitamines
29-mai-21 Protéines plasmatiques
 Chapitre 1
Prélèvement et phase pré-analytique
Feuille de prescription
• Quel est l’avantage de bien rédiger la feuille de prescription des
analyses ?

Il convient d’indiquer le plus de détails possible sur la demande, pour aider le

technicien et le biologiste dans l’interprétation des résultats, dans le diagnostic

ou le suivi du patient.
L’échantillon biologique
Quel est le rôle des additifs des récipients de prélèvement ?

Concernant l’échantillon sanguin, tube avec anticoagulant :

• utilisé essentiellement lorsque la substance à analyser est instable

Concernant l’échantillon urinaire, le récipient peut comporter :

• un conservateur afin d’inhiber la multiplication bactérienne.

• un acide pour stabiliser certains métabolites.

1- Hémocultures : le prélèvement doit être stérile
2- Tube sec : sans additif, avec éventuellement un activateur de la
coagulation
3- Tube citraté
4- Tube avec gel séparateur
5- Tube héparinate de Lithium
6- Tube EDTA
Indication d’utilisation de chaque anticoagulant
1. Hémocultures : culture bactérienne
2. Tube sec : en premier pour éviter toute contamination par
un anticoagulant
usage général (enzymes, protéines, hormones, marqueurs
tumoraux, marqueurs sérologiques).
3. Tube citraté : bilan d’hémostase (hématologie)
4. Tube avec gel séparateur : réduisent la diffusion des
substances et facilitent la décantation
usage général
5. Tube héparinate de Lithium : usage général (ionogramme,
ammonium, cortisol, enzymes)
6. Tube EDTA: perturbe le résultat du Potassium
analyse sur sang total
1. Numération des hématies (hématologie)
2. Lipides et lipoprotéines
3. Hémoglobine glyquée
Autres :
• Gris (Fluorure de sodium) : glucose, lactates, cycles et
épreuves.
• Noir : vitesse de sédimentation (hématologie)
• Seringue héparinée : anaérobie
Exemples d’erreurs d’échantillonnage.

Technique de prélèvement sanguin :

Le risque est l’hémolyse avec libération du potassium et
autres compositions des hématies.
Certains paramètres de ces analyses seront faussement
élevés: K, enzymes.
Stase prolongée pendant la ponction veineuse :
L’eau du plasma diffuse dans le liquide interstitiel et
l’échantillon sérique ou plasmatique obtenu sera concentré.
Les protéines et les composants liés aux protéines comme le
calcium et la thyroxine seront faussement augmentés.
Echantillon insuffisant :
Il peut s’avérer difficile au laboratoire d’effectuer tout les dosages
demandés sur un petit volume : bilan incomplet.

Erreurs de temps :
Dosage du cortisol : rythme circadien
Prélèvement des urines des 24h : erreurs dans la mesure, si les horaires
pour le recueil de l’échantillon ne sont pas respectés.
Jêune de 12h non respecté
Récipient incorrect pour l’échantillon :

Le récipient et l’anticoagulant ou le conservateur doivent être adaptés au

paramètre à analyser.

Ex : Glucose : l’anticoagulant contient du fluore qui inhibe la glycolyse lors de

l’acheminement.

Si un échantillon est recueilli dans un récipient incorrect, il ne doit pas être

transvasé dans un autre tube. Ex : sang veineux prélevé sur tube EDTA, aura

une concentration de calcium fortement réduite.

Prise de médicaments : les céphalosporines interférent positivement sur le dosage de la créatinine (réaction

de Jaffé)

Rythme de production :

Cycle circadiens : 20-24h (Cortisol : taux maximal à 8h et minimal à 20h)

Rythme saisonnier : Mélatonine

Production pulsatile, ex pic toute les 20 minutes : prolactine.

Stress : augmentation du taux de cortisol et de prolactine.

• Par sensibilité aux agents extérieurs :
• Chaleur : dégradation des enzymes sériques
• Lumière : (conservation à l’abri de la lumière)
Bilirubine, vitamine B, catécholamines
 Chapitre 2

Les protéines plasmatiques

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Protéines plasmatiques

Groupe hétérogène sur différents plans:

 PLAN STRUCTURAL:

Environ 300 protéines dans le plasma:

• Holoprotéines: structures uniquement
peptidiques (albumine)
• Hétéroprotéines:
• Glycoprotéines: protéines liées à des glucides
• Lipoprotéines: protéines liées à des lipides
• Chromoprotéines
• Phosphoprotéines
• Métalloprotéines
Protéines plasmatiques ADLOUNI
c
 Protéines plasmatiques

 PLAN FONCTIONNEL: différentes fonctions et rôles

• Enzymes et cofacteurs d’enzymes

• Protéines de Transport spécifique / non spécifique
• Inhibition de protéases plasmatiques ou tissulaires
• Facteurs de la Coagulation (fibrine, thrombine,..)
• Immunité (fractions du complément,…)
• Anticorps
• Hormones
• Maintient de la pression oncotique
• Système tampon du sang (pression osmotique colloidale)
Protéines plasmatiques ADLOUNI
 Protéines plasmatiques

 PLAN CONCENTRATION:

• « prédominantes » 10 - 40 g / L albumine, IgG

• « majeures » 1 - 10 g / L Fibrinogène, Transferrine, IgA, IgM

...
• « mineures » 0,1 - 1 g / L Plasminogène ...

• « traces » 0,1 g / L CRP, IgE ...

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Protidémie: dosage des protéines plasmatiques

Utile en clinique pour aider au diagnostic de:

- Affections gastro-intestinales
- Maladies hépatiques
- Maladies néoplasiques
- Troubles rénaux
- Evaluation des œdèmes (accumulation anormale de liquide)

Valeurs usuelles: en g/l

- Nouveau né 46-74
- 1mois-1an 51-73
- 1-2 ans 56-75
Protéines plasmatiques ADLOUNI
- enfant adulte alité 60-78
- enfant adulte actif 65-80
Protéines plasmatiques ADLOUNI
c
 Protidémie

Variations physiologiques
- personne âgée: légère diminution
- grossesse: diminution de 10 % (hémodilution)
- exercice physique prolongé: augmentation de 10%
(hémolyse, inflammation, hémoconcentration…)

 Variable selon: Etat d’hydratation

En cas d’hémoconcentration: déshydratation extra-cellulaire
hyperprotidémie fonctionnelle

En cas d’hémodilution: hyperhydratation extra-cellulaire (eau plasmatique

accrue) hypoprotidémie fonctionnelle
IFTAB Protéines plasmatiques 29-mai-21
Protéines plasmatiques ADLOUNI
c
 HYPOPROTIDEMIES
< 60 g/L et peuvent atteindre 15 g/L

Mécanismes physiopathologiques
Diminution des apports
- Carence en apports protéiques (malnutrition)
- Malabsorption intestinale, insuffisance pancréatique
- Défaut de synthèse: insuffisance hépatique
- fuite anormale:
Augmentation des o hémorragie massive
pertes o au niveau cutané (exzéma exsudatif)
o rénal (s’accompagne d’une protéinurie massive)
o tissulaire (brûlures, …)
o digestif (maladies diarrhéiques)

- Catabolisme exagéré (infections,processus tumoral)

Protéines plasmatiques ADLOUNI
c
 HYPERPROTIDEMIES
> 80 g/l et peuvent atteindre 120 g/L

-Portent surtout sur les globulines, rarement sur l’albumine

Mécanismes pysiopathologiques mis en jeu:

- diminution de l’eau plasmatique (hémoconcentration,
déshydratation, choc hypovolémique)
- Hyperglobulinémie (analysée par l’électrophorèse des
protéines sériques)

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Comment mesurer la protidémie ?
Prélèvement

- à jeun (pour limiter la lipémie préjudiciable au dosage)

- sérum (tube sec)
- plasma hépariné (dosage modérément augmenté)
- Stable 1 semaine à + 4°C

Analyses
de
Biochimie

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Protidémie

Différentes méthodes de dosage:

Dosage difficile du fait de l’hétérogénéité des protéines dosées
Colorimétrie: Réaction du Biuret +++
En milieu alcalin (NaOH), les liaisons peptidiques des protéines réagissent avec le sulfate de
Cuivre:
Complexe bleu-violet
Absorbance à 540 nm
Technique recommandée/ Société
Francaise de Biologie Clinique

Mesure en cinétique préférable à la mesure en point final: Les protéines ont des structures
différentes et réagissent selon des cinétiques différentes

Etalon international. : Serum Albumine bovine (BSA)

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Protidémie

Interférences dans le dosage:

- Sérum lipémique (troubles)
- Substances absorbant à 540 nm
(Hémoglobine, médicaments...) erreurs par excès
- Substance réagissant avec la technique du Biuret
(carbamazépine, Antibiotiques..) erreurs par excès

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Electrophorèse des protéines sériques ‘’EPS’’

- Analyse des protéines en fonction de leur charge électrique

- sur du SERUM (aspect du fibrinogène qui peut être confondu avec un pic
monoclonal)
- intégration de l’intensité de la coloration de chaque bande par un
densitomètre
-  analyse quantitative relative (%) ou absolue (à partir de la protidémie)

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Principe et Historique de l’EPS

 Séparation des constituants d’un mélange protéique sous l’action d’un

champ électrique

 Utilise le caractère amphotère des protéines ( radicaux amines et

carboxyliques)

 pH tampon de migration 8,2: comportement anionique (ionisation des

groupements carboxyliques  migration vers l’anode (+))

 Vitesse de migration dépend: taille des particules, force ionique et porosité

du support

 Technique développée depuis 1930 selon le système de Tiselius

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Principe de l’électrophorèse

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Interprétation de l’EPS

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Electrophorèse des protéines
sériques sur gel

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Electrophorèse des protéines sériques (EPS)

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Electrophorèse des protéines sériques: les pièges

Artéfacts avec aspect de pics monoclonaux

Le Fibrinogène migre en 
l’Hémoglobine migre en 2 (hémolyse)

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Interprétation de l’EPS

Albumine
 Hypo albuminémie < 35 g/l (sévère si < 25 g/l)
 Dénutrition ou malnutrition protéique
 Hépatites graves (Cirrhose)
 Syndrome inflammatoire
 Syndrome de malabsorption
 Syndrome néphrotique

 Hyper albuminémie : > 45 g/l

 Déshydratation

Protéines plasmatiques ADLOUNI

c
 Interprétation de l’EPS

Alpha 1 globulines

 Diminution :
 Emphysème
(déficit en α1 antitrypsine)
 Pathologies hépatiques sévères

 Augmentation :
 Syndrome inflammatoire aigu ou chronique
(orosomucoïde)

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Interprétation de l’EPS

Alpha 2 globulines

 Diminution :
 Hyperthyroïdie
 Pathologies hépatiques sévères
 Hémolyse (haptoglobine)
 Malnutrition

 Augmentation :
 Syndrome inflammatoire aigu ou chronique
 Syndrome néphrotique

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Interprétation de l’EPS

Béta globulines
 Diminution :
 Malnutrition
 Insuffisance hépatique
 Syndrome néphrotique

 Augmentation :
 Cirrhose (bloc béta gamma)
 Hyperlipidémie
 Certains myélomes
 Hypothyroïdie
 Carence martiale (transferrine)

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Interprétation de l’EPS

Gamma globulines (1)

 Diminution : < 6 g/l

 Corticothérapie +++
 Immunosuppresseurs
 Myélome à chaînes légères
 Atteintes médullaires (néoplasiques, toxiques)
 Déficit immunitaire génétique

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Interprétation de l’EPS

Hypo-gammaglobulinémie < 6 gr/l

En l’absence de corticothérapie ou de traitement

immunosuppresseur, il faut continuer l’exploration en
réalisant :
 Un dosage pondéral des Immunoglobulines
 Immunoélectophorèse des protéines plasmatiques et urinaires
 Si présence de chaînes légères ou confirmation d’une réduction
quantitative, avis spécialisé+++

ADLOUNI Protéines plasmatiques

 Interprétation de l’EPS

Gamma globulines (2)

Augmentation Poly-clonale (> 16 gr/l)
 Infections ++
Gammapathies polyclonales
 Maladies inflammatoires chroniques Type Gougerot- Sjöjgren

 Maladies auto-immunes (Sjögren, lupus…)

Présence d’un pic Monoclonal :

 Myélome, Lymphome, syndrome de Waldenström,
 Gammapathie de signification indéterminée
 Infections
 Maladies auto-immunes

ADLOUNI Protéines plasmatiques