Exploration biochimique

des protéines plasmatiques

Dr KIHEL. I
Maitre assistante en biochimie médicale
 Plan du cours :
• Introduction
• Rôles des protéines plasmatiques
• Méthode d’évaluation des protéines sériques
• Méthode de fractionnement des protéines:
électrophorèse des protéines .
• Étude des différentes fractions .
• Protéines de la réaction inflammatoire .
 introduction :
• Le plasma renferme plus de 125protéines
différentes, presque toutes fabriquées dans le
foie .(sauf les Ig=plasmocytes) .
• les protéines plasmatiques sont pour la plupart des
glycoprotéines .
• l’albumine de son coté est une holoprotéine .
• il existe aussi dans le plasma quelques
lipoprotéines .
 principaux rôles des protéines plasmatiques

Les protéines plasmatiques jouent des rôles très variés .

1-Maintien de la pression oncotique :
C’est l’albumine en tant que protéine majoritaire qui assure le
maintien de l’eau à l’intérieur des vaisseaux .

2-Transport des molécules :

qui sont +/-solubles dans le plasma .

3-La défense immunitaire humorale :

grâce aux différentes classes d’immunoglobulines .
• 4-Rôle métabolique :
• Grace aux protéines enzymatiques qui catalysent des
réactions d’hydrolyse d’oxydoréductions….
• certaines jouent le rôle de coenzyme tel l’orosomucoide
cofacteur de la lipoprotéine lipase.

• D’autres sont des inhibiteurs de protéases: alpha1

antitrypsine inhibant la trypsine la chymotrypsine,la
thrombine , la plasmine.
 Dosage des protéines sériques totales :
• A-Dosage :
• En routine ,le dosage des protéines sériques totales repose
presque exclusivement sur la réaction du biuret
• B-Principe de la réaction :
• En solution alcaline, l’ion cuivrique se fixe sur la liaison
peptidique pour donner un produit de chélation de couleur
violette(560 nm)
• La réaction se développe avec tout peptide possédant au
moins deux liaisons peptidiques.
• c-valeurs de référence :
• L’intervalle des valeurs de référence pour les
protéines sériques =60-80g/l .
• Dans le plasma ,le taux augmente de
2à4g/l(fibrinogène).
 La dysprotéinémie :

Définition:

Affections accompagnées de perturbations

quantitatives des protéines plasmatiques.
- Soit diminution
- soit augmentation des concentrations
plasmatiques de protéines ou de groupes
protéiques.
 variations de la protidémie :

• A-Variations physiologiques :
Variations avec l'âge: dans le sens de l'hypoprotidémie
- prématuré: ~40g

- nouveau-né: ~60g , avec chute à 45-50g au bout de 4 jours

- nourrisson (2 ans):~ 60g

- après 70 ans: ~65g par diminution de l'albumine et/ou des Ig .

- grossesse: ~60g par hémodilution et diminution de 1'albumine

et/ou des Ig.
B-Variations pathologiques

Variations relatives
Elles sont liées à des modifications dans l'état d'hydratation du
sujet.
- Hyper-protidémie par hémoconcentration:
Se voit dans les DEC= déshydratation extra-cellulaire.

- Hypo-protidémie par hémodilution:

Se voit dans les HEC= hyper hydratation extra-cellulaire
Variations absolues

Hyper-protidémies absolues
-par augmentation des immunoglobulines
maladie de Kahler: augmentation IgA, IgG, IgD ou IgE
maladie de Waldenstrom: augmentation IgM
=> ce sont des g -pathies

- par augmentation du fibrinogène:

hyperfibrinogènémie, notamment dans les syndromes
inflammatoires
Hypo-protidémies absolues : Alb et Ig

- par carence d'apport alimentaire en protéines (malnutrition,

déséquilibre en AA)

- par malabsorption intestinale (insuffisance pancréatique)

- par diminution de la synthèse, en cas d'insuffisance hépatique

- par catabolisme exagéré dans les dénutritions sévères

- par augmentation des pertes:

. d'origine rénale (syndrome néphrotique)
. d'origine cutanée (brûlures)
. d'origine digestive (entéropathie exsudative)
FRACTIONS DIMINUTIONS AUGMENTATIONS
PROTEINES TOTALES -HIE -Déshydratation extracellulaire
-Défaut d’apport alimentaire :
malnutrition, - Hyper gammaglobulinémie
- polyclonale : parasitose,
- Défaut d’absorption : maladies auto-immunes (LES,
insuffisance pancréatique hépatite auto-immune),
sarcoïdose, purpura
- Défaut de synthèse hypergammaglobulinémique
hépatique : insuffisance hépato- - monoclonale
cellulaire,hépatite aiguë sévère,
subaiguë ou chronique
- Fuite de protéines :
hémorragie, fuite urinaire, fuite
digestive (entérocolite, maladie
de Crohn), fuite cutanée
(brûlure)
 fractionnement des protéines
1-Sur la base de leur solubilité dans l’eau pure
Albumine: soluble .
Globulines: insolubles .

2- Sur la base de leur charge électrique (électrophorèse)

• L’électrophorèse des protéines sériques est une technique
permettant la séparation des protéines en fractions= la mobilité
différente

• elle met en jeu le déplacement des protéines ionisées lorsqu’elles

sont soumises à un champ électrique dans des conditions définies
de force ionique, de pH, de durée et d’intensité du courant
électrique appliqué.
Electrophorèse des protéines sériques

Parmi la centaine de protéines que

le sérum contient, une
quinzaine seulement est
responsable de la coloration
sur l’électrophorèse.

Cependant ces protéines rendent

compte à elles seules d’environ
95%de la protidémie.

5/6 grandes fractions apparaissent

sur le diagramme
d'électrophorèse classique
Protéines sériques responsables de la coloration de
l’électrophorégramme sur électrophorése capillaire :
fraction protéines % et concentrations

Pré-albumine Transthyrétine et RBP -1%(à peine visible)

Albumine albumine 56–66% (39–47g/l)

α 1-globulines α 1-antitrypsine, 3–5% (2,1–3,5g/l)
orosomucoïde

α 2-globulines céruléoplasmine, 7–12% (5–8,5g/l)

α 2-macroglobuline,
haptoglobine,
α-lipoprotéines

β 1-globulines Hémopexine, transferrine, β- 5–7% (3,4–5,2g/l)

lipoprotéines

β 2-globulines Complément C3 3–7% (2,3–4,7g/l)

γ-globulines IgG, IgA, IgM, IgD, IgE 11–19% (8–13,5g/l)
 Intérêt de l’électrophorèse

• apporte de nombreux renseignements en particulier

sur l’état inflammatoire, nutritionnel, et permet le
dépistage et le suivi d’une immunoglobulinopathie.

• oriente vers les examens complémentaires

nécessaires (immunofixation et/ou dosages
spécifiques des protéines, bilan hématologique,
exploration rénale ou digestive).
 Pré_albumine :

transthyrétine (PA) et Rétinol-Binding Protéin (RBP)

Protéines de transport ; synthetisée par le foie
fractions protéiques mineures
à l'électrophorèse (migre le plus vite),
augmentée:
maladie de hodjkin
trt hormonaux
Diminuée:
- Hépatopathie
- néoplasie
- états inflammatoires
 Rétinol binding protéin
• RBP
• Synthèse :hépatique
• Zinc indipensable
• Holoprotéine(tryptophane)
Transport du rétinol(vit A)
• Valeurs physiologiques :35 à 90 mg/l
• Néphropathies chroniques
• 1-Carence en zinc,vitA 2-état de mal
nutrition
 Albumine :
• C'est la protéine majeure du plasma : 55-60 % des protéines
totales.
• C'est une holoprotéine de masse moléculaire de 66kDa.
uni peptidique et globulaire (17 ponts disulfure S-S).
• Synthèse exclusivement hépatique
• Maintien de la pression oncotique (Ponc) du plasma .
• Transport plasmatique de ligands variés
 Variations pathologiques :
1- Anomalies acquises :
• Hyper albuminémie :hémocentration-une perfusion d’albumine
• Hypo albuminémie:
Carence d’apport en AA
Diminution de la synthèse hépatique
Catabolisme excessif
Pertes
Bisalbuminémies transitoires
-malnutrition prolongée -
malabsorption
-Crises inflammatoires
-maladies hépatique chroniques
-stress -
diabète non contrôlé
-glomérulonéphrite
-syndrome néphrotique -
entéropathies exsudatives -brulures
-trt antibiotique β-lactamines
-faux kyste du pancréas fistulisé dans les
espaces interstitiels (la trypsine )
 Anomalies génétiques
• - Analbuminémie de Bennhold:
• Ces individus sont incapables d'assurer la synthèse d'albumine
• A l'électrophorèse pas de pic d'albumine.

• - Bisalbuminémie héréditaire:
• coexistence de 2 formes d'albumines différentes (2 gènes
différents)
• Cette anomalie est découverte à l'électrophorèse.
• sans traduction pathologique et bien supportée. L'expression
des 2 gènes se fait pour 50 % chacun : expression co-
dominante.
La transmission de cette anomalie se fait sur le mode
autosomique
Analbuminémie de
Bennhold:

1 Aspect sur gel d’agarose -

Hydragel Protéine β1-β2 ®
Sebia – et intégration
densitométrique d’un sérum
analbuminémique (sérum
n° 2) par rapport à un sérum
humain normal (sérum n° 1).
Bisalbuminémie héréditaire:
détecté sur électrophorèse
capillaire.
FRACTION DIMINUTIONS AUGMENTATIONS
ALBUMINE - Défaut de synthèse : carence d’apports -Déshydratation extracellulaire ou globale
azotés, insuffisance hépatique, - Exercice violent
inflammation, diabète de type 1, - Temps de garrot prolongé
hyperoestrogénies, insuffisance rénale, - Obésité chez l’homme
hyperthyroïdie, médicaments - HTA chez le sujet âgé.
hépatotoxiques
- Fuite protéique : au niveau du tube
digestif, du rein, de la peau
- Redistribution compartimentale :
hypervolémie, épanchement, perméabilité
capillaire
 α1
globulines :
• C’est une fraction hétérogène qui contient principalement,
l’alpha-1 antitrypsine et l’alpha-1 glycoprotéine
acide(orosomucoïde).
alpha 1 antitrypsine est le constituant principal des
α1globulines : elle en représente 90 %.
 l’alpha-1 antitrypsine

• glycoproteine d’origine hepatique

• Elle présente une action antiprotéasique.
• variations physiologiques
augmente pendant la grossesse et lors de la prise d’oestroprogestatifs.
• Variations pathologiques.
Augmentation :
Lors de la phase aiguë de la réaction inflammatoire .
Diminution:
cours de bronchopneumopathies et d'emphysèmes, des déficits très
importants en alpha1-antitrypsine ont été observés dans ces maladies
génétiques.
 orosomucoide ou alpha1glycoprotéine acide :

• C’est une protéine de la phase aiguë de la réaction inflammatoire

(PRI+)
• Diminution :
-états de malnutrition
-insuffisances hépatiques sévères
-syndrome néphrotique
-entéropathies exsudatives
• Augmentation :
-réaction inflammatoire aiguë (rhumatisme articulaire aigu chez
l’enfant)
-lésions tissulaires (infarctus du myocarde)
-certaines néoplasies malignes
FRACTIONS DIMINUTIONS AUGMENTATIONS

α1-GLOBULINES - Insuffisance hépatocellulaire, - Inflammation : orosomucoïde, α1-

dénutrition, fuite protéique cutanée, antitrypsine
digestive
- Déficit en a1-antitrysine
 a2 globulines :
- l’alpha-2 macroglobuline (A2M)
- l’haptoglobine (Hp)
- et la céruloplasmine.
haptoglobine a2macroglobuline céruloplasmine

- Glycoproteine - Glycoproteine de haut - protéine de transport et

PRI+ poid moleculaire de redistribution du
-Valeur est plus elevée -peut se lier avec diverses cuivre.
chez la femme/homme molécules : ions,  PRI+
hormones possède l'activité d'une
oxydase où le cuivre
-Elle possède un rôle anti- serait le coenzyme
protéasique .
-Valeur plus elevée chez
le NNé
FRACTIONS DIMINUTIONS
α2-GLOBULINES - Insuffisance hépatocellulaire,
dénutrition, fuite protéique
cutanée, digestive
- Hémolyse intravasculaire :
haptoglobine
-Maladie de wilson:
Deficit en ceruloplasmine
AUGMENTATIONS
-Inflammation : haptoglobine,
céruléoplasmine
- Syndrome néphrotique : α2-
m
-Traitement par les
oestrogenes: ceruloplasmine
-Dédoublement du pic :
haptoglobine de phénotype
différent
- β-lipoprotéine anormale
- Sérum hémolysé(in vitro
complexe Hb-haptoglobine)
- Chaînes légères
d’immunoglobulines.
acroglobuline
Dans le syndrome néphrotique :

(jusqu’à20 à 30 g/l)
liée à une synthèse hépatique accrue et
à une rétention (partielle) du fait qu'elle
ne franchit pas facilement la membrane
glomérulaire pathologique. Ainsi se
comprend l'augmentation de la fraction
électrophorétique alpha2 dans les
syndromes néphrotiques,
accompagnant et contrebalançant peut-
être la baisse importante de l'albumine
et de nombreuses autres protétines ;
 β-globulines
La fraction bêta-1 globulines
Cette fraction contient principalement la transferrine,
l’hémopexine et les bêta-lipoprotéines

Transferrine Hemopexine

-transferrine ou sidérophiline est Le rôle essentiel dans l'élimination de

une bêta globuline.
- Elle permet le transport du fer de
l'intestin vers les réserves hépatiques
et vers les réticulocytes
l'hématine→(hémoglobine libre
oxydée en méthHb=hématine et
globine .
l'hémopexine permet d'apprécier la
sévérité de l'hémolyse.
 FRACTIONS DIMINUTIONS AUGMENTATIONS

- Insuffisance - Hémoconcentration
hépatocellulaire, dénutrition, (augmentation conjointe de
β1- fuite protéique cutanée, l’albumine)
GLOBULINES digestive
(≈ transferrine) - Carence martiale
- Surcharges en fer
(génétique ou secondaire) - Traitement hormonal substitutif
(oestroprogestatifs) : ≈1,2N
- Inflammation
- Grossesse (3ème trimestre) :
jusqu'à 2,5N
 β-globulines
La fraction bêta-2 globulines
Elle renferme les fractions du complément C3 et les IgA

FRACTIONS DIMINUTIONS AUGMENTATIONS

Disparition de la fraction C3
- Cholestase
β2- dans les sérums prélevés plus
- Inflammation
GLOBULINES de 24H avant l'analyse
- Oestrogènes
(≈ fraction C3 du
complément)
 γ globulines
Elle correspond aux immunoglobulines (Ig)
prépondérantes IgG, IgA et IgM et celles de
très faibles concentrations de classe IgD et
IgE.
Ce sont des (glycoprotéines
Ce sont les agents de l'immunité humorale, ce
sont des protéines douées d'activité anticorps.
Structure générale des immunoglobulines
 γ globulines
:
Variations physiopathologiques
Hypoimmunoglobulinémies < 6 g/l s’observe dans :
• l’hypogammaglobulinémie du nourrisson (physiologique)

• les déficits immunitaires primitifs isolés ou portant sur les IgA,

IgG ou IgM de l’enfant ou de l’adulte .

• les déficits secondaires (traitement immunosuppresseur,

corticoïdes, chimiothérapie ou radiothérapie)

• le myélome à chaînes légères, caractérisé par une protéinurie de

Bence-Jones très importante, et une répression de synthèse des
IgG, IgA et IgM.
• Hyperglobulinémies
L’augmentation des g-globulines (> 15 g/l) peut
être :
- d’origine polyclonale : dans les pathologies
infectieuses, autoimmunes ou hépatiques ;
• d’origine monoclonale
dans les gammapathies malignes (myélome multiple ou maladie
de Kahler,maladie de Waldenström), les gammapathies
associées à une leucémie lymphoïde chronique ou à un
Lymphe
ou les gammapathies sans signification clinique (MGUS ou
monoclonal gammapathy of undertermined significance) ;
dans ce contexte, la quantification de la protéine monoclonale
par intégration à l’électrophorèse fait partie du suivi semestriel
puis annuel d’une gammapathie.
 FRACTION DIMINUTIONS AUGMENTATIONS
- Déficits héréditaires - Polyclonales :
primitifs - Syndromes infectieux et
- Déficits secondaires : inflammatoires chroniques,
- Myélome multiple et affections hépatiques, maladies
maladies du système auto-immunes
γ-GLOBULINES lymphoïde - Oligo-monoclonales :
- Chimiothérapie - - Myélome multiple
radiothérapie - - Syndromes infectieux et
immunosuppresseurs inflammatoires importants
- Syndrome néphrotique (cancers, SIDA)
- Hyperstimulations
immunitaires
- PR
- Cirrhose
Les protéines de l’inflammation
 l’inflammation
• La réaction d’inflammation est la réponse de l’organisme à
une agression tissulaire ,Tout en empêchant la propagation de
l’agression quelque soit la nature de l’atteinte:

infectieuse;immunitaire;tumorale;traumatique…..

• Dans LE PROCESSUS INFLAMMATOIRE; s’observe une

réaction localisée et une réaction systémique

Réaction localisée: rougeur;chaleur,douleur;tuméfaction .

La réaction systémique: augment de la synthèse
de certaines protéines dites Protéines de la
Réaction Inflammatoire +
(sérumalbumine, transferrine, préalbumine…)
 Les Protéines de l'inflammation

• Un certain nombre de protéines plasmatiques voit leur taux

augmenter fortement et de manière non spécifique au cours des
états inflammatoires.
• On les appelle « protéines de la phase aiguë ».

• Leur élévation est due à une augmentation de synthèse

hépatique, médiée par l'interleukine 1, qui n'a pas de
retentissèment sur la protéinémie totale. Cette élévation est liée à
un tropisme particulier de ces protéines pour le foyer inflammatoire
mais ne peut avoir de valeur en terme de diagnostic étiologique.

• Cependant elles permettent de suivre l'évolution de la maladie

inflammatoire.
 Fonctions des PRI+
Les protéines de la Reaction Inflammatoire (RI) remplissent des
fonctions variées
On peut les partager en 4 catégories
1-Protéines chargées de neutraliser les protéases lysosomiales
régurgités des cellules lésées et PN lésées ou activées:
α 1antitrypsine(l’élastase)

2- neutraliser les produits de déchets +/- toxiques

céruloplasmine(O2-)
l’haptoglobine(Hb);SAA(lipoprotéine=évacuation du cholestérol
macrophagique .
3-protéines responsables des effets biologiques de la
RI
CRP=tempère l’activité des lymT
complément= destruction des
organismes étrangers et cellules endommagées .

4-protéines responsables de la cicatrisation:

α1glycoprotéine acide=croissance des
fibroblastes
 Exploration du syndrome inflammatoire
• test d’orientation
• VSmm/h
• EPP α1α2 élevée
• FNS=hyperleucocytose
• Test spécifiques
• PRI+= Α1glycoprotéine
acide,α1antitrypsine,α1antichymotrypsine
haptoglobine,céruloplasmine,CRP,SAA
 La vitesse de sédimentation

• La VS est mesurée grâce à un tube d'environ 25 cm

de hauteur, rempli de sang citrate et donc
incoagulable, maintenu verticalement. Au bout d'une
heure

• la hauteur de la colonne plasmatique est mesurée

avec un décimètre. Elle représente la sédimentation
des globules rouges sous l'influence de la gravité

• elle est normalement < 5 mm.

- Toute augmentation, en dehors d'une anémie, est
habituellement le fait d'une
inflammation ou d'un cancer (VS souvent > 100 mm), ce
qui lui donne une valeur de dépistage grossier intéressante.
- Elle est cependant non spécifique, peu sensible.

- Les facteurs diminuant la VS sont la polyglobulie, la

macrocytose, l'hypoprotéinémie.

- Au contraire, l'anémie, la microcytose, l’augmentent

- elle est simple à réaliser et peu coûteuse et reste donc très

utile .
 Les PRI +
LA PROTEINE C REACTIVE « CRP »
• Glycoprotéine de poids moléculaire 120 KDa, formée par l'union
de 5 sous- unités identiques

• elle Forme un précipité avec le polyssacharides C du

pneumocoque un précipité .

• Absente ou très faible dans le sérum à l’état normale inf à 6 mg/l.

• Marqueur de choix : rapidité ,intensité de réponse.

• Son élévation est précoce ; |dans les 2 à 4 heures après le début du

processus inflammatoire
Rôle de la CRP

• Elle a un rôle d'activation du complément,

de facilitation de la phagocytose des
bactéries et de modulation de la
multiplication des lymphocytes T.

• Du fait de sa demi-vie très courte (24 heures),

la CRP est aussi un témoin précoce de
l'efficacité thérapeutique, lors d'une
antibiothérapie par exemple.
Les élévations de la protéine C réactive sont observées :

• dans tous les états inflammatoires où l'augmentation

précède celles de l'orosomucoïde et de l'haptoglobine (2 à 3
jours) et du fibrinogène (après 13 jours);

• dans les infections bactériennes néonatales, renseignant sur

l'efficacité de l'antibiothérapie ;

• dans la surveillance post-opératoire où la CRP s'élève

systématiquement après l'intervention chirurgicale et atteint
son pic en 2 à 3 jours. Si sa concentration sérique continue à
s'élever au 4e jour, il faut craindre une complication
infectieuse.
 PRI +

Sérum amyloïde A protéine SAA

• La sérum amyloïde A protéine ou SAA est la
plus petite des protéines de la phase aiguë
(poids moléculaire 12 000 Da).

• Elle apparaît précocement dans toute

inflammation aiguë.
 PRI+
Fibrinogène :
• le fibrinogène est aussi une protéine de la phase aiguë

• C'est une glycoprotéine de PM=330 000 Da constituée de 6 chaînes

peptidiques

• synthétisé dans le foie essentiellement

• faiblement par les mégacary ocytes.

• Le dosage=méthode immunologique (immunodiffusion radiale ou

immunoprécipitation)
• méthode de mesure de sa transformation en fibrine sous l'influence de la
thrombine
 Fibrinogène :

• Les valeurs de référence chez l'adulte sont 2 à 4,0 g/l.

• L'intérêt du dosage du fibrinogène sera donc mixte:

- dans tout processus inflammatoire, où son élévation

accompagnera celle de la VS et PRI

- en hémostase, où le temps de thrombine explore plus

particulièrement la fibrinoformation.
Merci de votre
attention