Analyses Des HE

Projet de Fin d’Études
État et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez

les herboristes du Nord du Maroc et caracterisation du
Laurus nobilis
Préparé par : JELLOULI Kaoutar Encadré par : M.LAGLAOUI Amin (FSTT)
AKHRIF Ibtihal M.ZANTAR Saïd (INRA)
Soutenu le 22 juin 2016 en vue de l’obtention du Licence Sciences et techniques
Filière : Biotechnologie végétale
Année universitaire : 2015/2016

W°w|vtvxá
A l’aide de dieu tout puissant, qui m'avoir donnée la force et la patience, j’ai pu
réaliser ce travail que je dédie :
Aux étoiles qui éclairent ma vie, à ma source de tendresse :
<<Mes parents>>
Ces deux êtres qui m’ont su m’éduquer, qui s'étaient toujours sacrifiés pour me voir
réussir qui étaient toujours derrière moi et qui m’ont poussé à aller de l’avant.
Que Dieu vous préservent et vous procurent bonne santé et longue vie.
A mon cher oncle par alliance : Redouane
Et ma chère tante : Nadia
Que vous m’avez toujours soutenu durant toutes mes études
Sachez que Vous occupez une place particulière dans mon cœur
A mes chers amis
(Aziza, Mounia, Youssra, Ali, Rida, Tiko, Othmane, Ali…)
Qui m’ont permis d’oublier les moments de stress et de découragement,
Qui m’ont apporté leurs aides
En souvenir de nos éclats de rire et des bons moments, en souvenir de tout ce qu’on
a vécu ensemble.
A mon binôme Kaoutar
A tous ceux qui me sont chers
Akhrif Ibtihal
W°w|vtvxá
Que ce travail témoigne de mes respects :
A Dieu qui m’a donné la force d’affronter chaque jour
A mes parents :
Grâce à leurs tendres encouragements et leurs grands sacrifices, ils ont pu créer le climat
affectueux et propice à la poursuite de mes études. Aucune dédicace ne pourrait exprimer
mon respect, ma considération et mes profonds sentiments envers eux.
A mes frères Omar et Adil.
Pour leur amour infini et leur soutien tout au long de ce parcours
A la famille Akhrif
Pour leur soutien et leur gentillesse
A mes amis Ibtihal, Youssef, Houria, Safae, Nabila, Fadoua, Imane et à ma chère
famille
Dont l’amitié et le soutien, n’ont jamais défailli
A tous mes professeurs :
Leur générosité et leur soutien m’oblige de leurs témoigner mon profond respect et ma
loyale considération.
Jellouli Kaoutar
exÅxÜv|xÅxÇà
Un stage n’est jamais un travail individuel, il s’inscrit dans
une démarche globale de recherche qui bénéficie des travaux déjà
réalisés, est en relation avec les travaux en cours et sera peut être
repris par la suite.
Nous tenons à remercier en tout premier lieu notre encadrant Mr.
LAGLAOUI Amin, Enseignant à la Faculté des sciences et techniques
Tanger, qui a dirigé ce travail de recherche de Licence. Nous avons eu
l’honneur d’être parmi vos élèves et de bénéficier de votre riche
enseignement. Vos qualités pédagogiques et humaines sont pour nous
un modèle. Votre gentillesse, votre patience, et votre disponibilité
permanente ont toujours suscité notre admiration. Veuillez bien
monsieur recevoir notre remerciement pour le grand honneur que
vous nous avons fait d’accepter l’encadrement de ce travail.
Nos remerciements s'adressent également à Mr. BAKKALI
Mohammed et Mr. ARAKRAK Abdelhay, Enseignants à la Faculté
des sciences et techniques Tanger, pour avoir accepté de juger ce
travail. Nous adressons nos reconnaissances à tous nos enseignants
pendant nos études notamment ceux du Licence.
Nous exprimons notre reconnaissance à Mr. ZANTAR Said
encadreur de stage à L’ INRA pour nous donné ses conseils et ses avis.
Nous le somme aussi reconnaissant pour le soutien technique qu'il nous
a apporté tout en répondant à nos interrogations à tout moment. Nos
profondes gratitudes s’orientent vers Mr ZERROUK Mounir,

Enseignant à la Faculté polydisciplinaire de Larache pour ses
judicieux conseils et son support permanent.
Spéciale remerciement à notre amie Mme. SSEBBAGH Chaimae,
étudiant du Master à la Faculté des sciences et techniques Tanger
spécialité Chimie, pour le temps qu'il a passé avec nous pour discuter
nos propositions et pour ses aides. Ainsi pour l'intérêt qu'il a porté à
notre travail et ses conseils sur nos propositions, Nous la remercie
aussi pour ses conseils occasionnels et ses aides.
Nos remerciements vont aussi à Mr. JELLOULI Omar doctorant à
la Faculté des sciences et techniques Tanger département
mathématiques appliquées et informatique pour le temps qu'il a passé
avec nous pour discuter nos propositions et pour son aide et ses
remarques.
Enfin, nous présentons nos sincères reconnaissances et nos
remerciements à tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la
réalisation de ce travail.
Résumé
Ce rapport a été réalisé à la Faculté des Sciences et Techniques de Tanger (FSTT), et en
collaboration avec le Centre Régional de
d la Recherche en Agronomie de Tanger (CRRA). Il
comporte deux volets : Le premier a été consacré à l’étude d’état et lieu des plantes aromatiques et
médicinales d’origine du nord du Maroc chez les herboristes de la région de Tanger –Tétouan. Le
deuxième a été consacré à l’étude de l’huile essentielle
essentielle obtenue par hydrodistillation des feuilles
de Laurus nobilis,, provenant de la région de Moulay Abdeslam,, cette huile a été analysée par
Chromatographie en phase gazeuse couplée à la Spectrométrie de masse. L’huile extraite de
sente 25 composés chimiques avec un rendement de (0,66%). Les
matière végétale étudiée présente
l’H.E sont : (1,8 Cineole (42%), Caryophyllene (11,74%),
entifiés dans l’H
composés majoritaires identifiés
α -Terpinyl acétate (9,98%).
oxydante par le test du DPPH a révélé un pouvoir antioxydant
L’étude de l’activité anti-oxydante
maximal (87%) obtenu à la concentration [1000mg/l] de l’extrait méthanolique.
thanolique.
L’étude de l’activité l’
ctivité antibactérienne de l’huile essentielle de Laurus nobilis sur des souches
Staphylococcus aureus et Enterococcus faecium) et gram négatif
bactériennes gram positif (Staphylococcus
(Escherichia coli et Salmonella seftemberg), montre qu’elle possède un effet antibac
antibactérien
important surtout sur deux souches de bactéries à savoir : E. coli et S. aureus.
Mots-clés : plantes aromatiques et médicinales, huile essentielle, Laurus nobilis

nobilis, nord du Maroc.
PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE

Sommaire
Résumé
Liste des tableaux

Liste des figures
Liste des abréviations
Introduction………………………………………………………….………………...……………1
Chapitre 1 : Etude bibliographique…………………………………………………………………2
I. Les plantes aromatiques et médicinales ......................................................................................2

1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales ...............................................................2
2. Domaines d’application des plantes médicinales ...................................................................2
3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc ........................................................................3
II. Les huiles essentielles ...............................................................................................................4
1. Définition ...............................................................................................................................4
2. composition chimique générale des huiles essentielles ..........................................................5
3. Techniques d’extraction des huiles essentielles ....................................................................5
5. Les activités biologiques des huiles essentielles ....................................................................9
III. L’enquête ................................................................................................................................11
1. À propos ...............................................................................................................................11
2. Région d’étude .....................................................................................................................11
3. Objectifs ................................................................................................................................11
IV. La plante à étudier .................................................................................................................11
1. Généralités ............................................................................................................................11
2. Origine et distribution ...........................................................................................................12
3. Description botanique ...........................................................................................................12
4. Classification botanique: ......................................................................................................13
Chapitre 2 : Matériel et Méthodes................................................................................................14
I. Matériel Biologique: .................................................................................................................14
1. Matériel végétal ....................................................................................................................14
2. Matériel microbiologique .....................................................................................................15
II. L’extraction d’huile essentielle ...............................................................................................15
III. Détermination d’humidité et du rendement en huiles essentielles .........................................16
1. Calcul d’humidité .................................................................................................................16
2. Calcul du rendement en huile essentielle .............................................................................17
IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie
de masse (CPG/ SM) ...................................................................................................................17
V. Indices physico-chimiques .....................................................................................................18
1. Les propriétés organoleptiques ............................................................................................18
2. Le PH ...................................................................................................................................18
3. Indice d’acide .......................................................................................................................19
4. Pouvoir rotatoire ..................................................................................................................19
VI. Évaluation de l’activité antioxydante ....................................................................................20
VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E .........................................................................20
1. Milieu de culture: ..............................................................................................................20
2. Obtention des suspensions bactériennes ...............................................................................21
3. Méthodes de diffusion sur disques ......................................................................................21
Chapitre 3 : Résultats et Discussion ............................................................................................22
I.L’enquête ...................................................................................................................................22
1. Commentaires ......................................................................................................................27
2. Remarques ...........................................................................................................................27
II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles ..............................................................28
1. Rendement en huile essentielle ............................................................................................28
2. Taux d’humidité....................................................................................................................28
III. Indices physico-chimiques .....................................................................................................29
VI. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle ...................................................31
V. Activité anti-oxydante .............................................................................................................33
VI. Activité antibactérienne ........................................................................................................34
Conclusion et perspectives.............................................................................................................38
Références bibliographiques .........................................................................................................39
Annexes ...........................................................................................................................................43
Liste des tableaux
Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord

du Maroc.
Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L.
Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.
Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiques des

H.E.
Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’HE

étudiée.
Tableau 6 : L’activité anti-oxydante de l’H.E.
Tableau 7 : L’activité anti-oxydante de la Vitamine C.
Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches
bactériennes testées.
Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches

testées.

Liste des figures
Figure 1 : Montage d’hydrodistillation (Clevenger).
Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau.
Figure 3 : Schéma du montage de l’expression à froid.
Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis.
Figure 5 : Situation géographique de la région de la récolte.
Figure 6 : Montage d’hydro-distillation du type Clevenger.
Figure 7 : Chromatographie en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie de

Masse (GC/MS).
Figure 8 : Diffusion sur disques.
Figure 9 : Teneur en eau des trois différentes parties de la plante.
Figure 10 : Activité anti-oxydante de l’huile essentielle de L.nobilis comparée à

Celui de la vitamine C à des concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L.
Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis sur les Souches
testées.

Liste des abréviations
ADN : Acide Désoxyribonucléique.
AFNOR : Association Française de la Normalisation.
CG/SM : Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de

masse.
CPG : Chromatographie en phase Gazeuse.
DPPH : 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle.
E.Coli : Escherichia coli.
H.E : Huille essentielle.
L. Nobilis : Laurus Nobilis.
MHA : Muller Hinton Agar.
NB : Nutritif Broth.
NIST : National Institute of Standards and Technology.
OMS : Organisation Mondiale de la Santé.
PAMs : Plantes Aromatiques et Médicinales.
S. Aureus : Staphylococcus aureus.

Avant propos
L’institut national de recherches agronomiques (INRA) est placé au service du
développement agricole et relève de Ministère de l’Agriculture et de la Pêche Maritime. Elle est
représentée par dix centres régionaux parmi lesquels il y a le centre régional de la recherche
agronomique de Tanger qui couvre la zone d’action des Directions Provinciales d’Agriculture
(DPA) de Tanger, Tétouan , Chefchaouen, Al Hoceima et la partie nord de l’office régional de
mise en valeur agricole de (ORMVA) Loukkos.
Le centre régional de la recherche agronomique de Tanger est organisé en deux unités de

recherche, l’unité de recherches sur les techniques nucléaires, l’environnement et la qualité et,
l’unité de recherche sur la Production Animale. Il inclut un service administratif, un service de
recherche de développement et le domaine expérimental de Boukhalef.
Notre stage a été réalisé à La station d’ionisation de BOUKHALEF (SIBO).
La station d’ionisation de BOUKHALEF SIBO est une unité de traitement par

rayonnement ionisant des produits alimentaires et non alimentaires. Elle est gérée par le
programme des techniques nucléaires au centre régional de la recherche agronomique du Rif à
Tanger.
Cette station créée en 1995, est équipée d’une source radioactive de cobalt 60.
La vocation de la station SIBO est de traiter les produits alimentaires d’origines animales
et végétales en vrac ou emballés ainsi que d’autres produits comme les produits pharmaceutiques
et médicaux.

Introduction
Les plantes médicinales constituent un patrimoine précieux pour l’humanité et plus

particulièrement pour la majorité des communautés démunies des pays en voie de développement.
Elles permettent d’assurer le soin de la santé primaires et subsistances. Elles utilisent la plupart
des espèces végétales (ligneuses, herbacées, …) comme médicaments.
Une croyance bien répondue est que ‘‘toute plante soigne’’. Selon l’OMS, plus de 80% des
populations africaines ont recours à la médecine et à la pharmacopée traditionnelle pour faire face
aux problèmes de sante. Le continent africain regorge de plantes médicinales très diversifiées. En
effet, sur les 300.000 espèces végétales recensées sur la planète plus de 200.000 espèces vivent
dans les pays tropicaux d’Afrique et ont des vertus médicinales {1}.
Le Maroc par sa position biogéographique, offre une très grande diversité écologique et
floristique. Il est l’un des pays méditerranéens qui ont une longue tradition médicale et un savoir-
faire traditionnel a base de plantes médicinales {2}. Par ailleurs, une forte tradition ethno-
médicinal et encore vivante dans toutes les régions du Maroc et nul ne soupçonne la richesse du
savoir ethno-médicinal accumule durant des siècles et qui, de plus en plus risque de ne plus être
transmis, en cas ou aucune sauvegarde n’est entreprise.
La flore médicinale marocaine reste jusqu’à présent connue de manière simplement
empirique. Devant cette parcelle de notre savoir, plusieurs volontés concourent, actuellement, à la
préserver et à la mettre en valeur. Par ailleurs, des enquêtes ethnobotaniques contribuent, de leurs
parts, à rassembler et constituer une source d’information très précieuse, prête à être exploitée sur
le plan scientifique.
Dans le cadre de notre projet de fin d’étude et vu la variété de ces plantes présentes dans
notre région, une enquête sur l’état et le lieu des Plantes Aromatiques et Médicinales (PAM) est
proposée chez les herboristes de la région Tanger-Tétouan, ceci nous a amené aussi à nous
pencher sur l‘étude des caractères physico-chimiques, activité anti-oxydante et l’activité
antibactérienne d’une huile essentielle obtenue par hydrodistillation à partir d’une plante
aromatique et médicinale de la région de Moulay Abdeslam (Nord du Maroc) : c’est le Laurus
nobilis, qu’elle est une épice utilisé surtout dans la cuisson des aliments ou pour l’assaisonnement
et elle possède différentes caractéristiques aromatique culinaire et médicales.
PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE Page 1

Étude Bibliographique
Chapitre 1
Étude bibliographique
I. Les plantes aromatiques et médicinales :

1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales :
Plantes médicinales :
La plante médicinale est une plante utilisée pour ses propriétés thérapeutiques,
qui contient une ou des substances susceptibles d’un traitement médical d’une maladie à
réduire l’incidence de la ou des matières premières utilisées dans la préparation de
matériel médical. Leur efficacité relève de leurs composés très nombreux et très variés
en fonction des espèces, qui sont autant de principes actifs différents {3}.
Plantes aromatiques :
La plante aromatique est toute plante contient suffisamment de molécules aromatiques avec
plusieurs organes producteurs comme les feuilles, les fruits, les racines, l’écorce, … etc. {3}.
2. Domaines d’application des plantes médicinales :

Les substances naturelles issues des végétaux ont des intérêts multiples mis à profit dans
l’industrie : en alimentation, en cosmétologie et en pharmacie.
- En pharmacie : on utilise une forte proportion de médicaments d’origine végétale,
selon l’OMS 75% des médicaments ont une origine végétale et 25% d'entre eux contiennent au
moins une molécule active d'origine végétale. Parmi les composés utilisés dans la médecine, on
retrouve dans une grande mesure les métabolites secondaires.
- En alimentation : les épices et les herbes sont très utilisées dans l’alimentation. La
notion de flaveur des épices et aromates recouvre l’ensemble des perceptions olfactogustatives.
Ces perceptions résultent de stimulations générées par un multiple des composés organiques dont
certains sont volatils : les huiles essentielles; les autres non volatils sont plus particulièrement
responsables de la saveur et de la couleur {4}.

- En agriculture : les huiles de certaines plantes ont des utilisations dans le contrôle de
certains insectes et nématodes {5}.
- En cosmétique : beaucoup de plantes médicinales sont à l’origine des produits de
beauté parfums et articles de toilettes, produits d’hygiène {6}.
3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc :

3.1. Généralités :
L'importance du secteur des PAM ne cesse d'augmenter en relation, d'une part, avec la forte
augmentation de la demande mondiale enregistrée ces dernières décennies pour les PAM et leurs
produits dérivés et, d'autre part avec le nombre croissant d'utilisateurs et la diversité des domaines
de leur valorisation.
Situé à l'angle Nord-ouest du continent Africain entre 21° et 36° de latitude de Nord et entre le
1er et le 17ème degré de longitude Ouest, et avec une façade maritime de 3446 Km de long
s'ouvrant sur la méditerranée et l'océan atlantique {7}. Le Maroc jouit d'une position privilégiée et
offre une gamme variée de bioclimats permettant l’installation d’une flore riche (plus de 4200
espèces) et une diversité de ressources phylogénétiques en PAM (600 espèces) {6}
Le Maroc est un producteur traditionnel de PAM, et un fournisseur exclusif de plusieurs

huiles essentielles comme l’armoise, et la camomille sauvage {8}. Il est le 12ème exportateur
mondial avec près de 30 millions de dollars pour les PAM cultivées et 40 millions de dollars pour
celles cueillies {9}. Cette production se révèle ainsi riche et diversifiée, ce qui constitue un
important atout pour l’établissement et le développement du secteur. Plusieurs produits sont
connus sur le marché international comme étant des produits typiquement marocains. Cela signifie
que la profession d’exploitation des PAM au Maroc, malgré ses faiblesses, a réussi à introduire sur
le marché international plusieurs produits nouveaux {10}.
3.2. Plantes aromatiques et médicinales du nord du Maroc :
Grâce aux conditions climatiques et géomorphologiques, le nord du Maroc présente une très
grande diversité spécifique de plantes spontanées des zones méditerranéennes et qui ont un
potentiel important en plantes aromatiques et médicinales souvent endémiques. Ce caractère

orographique original lui confère des conditions pédoclimatiques qui se reflètent sur sa végétation
très diversifiée {7}.
Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord du

Maroc {3}
Nom scientifique Nom français Nom vernaculaire
Origanum compactum Origan Sahtar, Zaatar

Mentha pulegium Menthe pouliot Fleyou
Lavandula stoechas Lavande Halhal
Myrtus communis Myrte Rayhane
Eucalyptus camaldulensis Eucalyptus Kellette
Rosmarinus officinalis Romarin Azir
Mentha rotundifolia Menthe à feuilles rondes Mchechtro
Artemisia absinthium Absinthe Chiba
Rubus ulmifolius .schott Ronce EL Olique
Pistacia lentiscus Pistachier Lentisque Dro
Laurus nobilis Laurier noble Rande
Calamintha ascendens Sarriette ascendent Mantha
II. Les huiles essentielles :
1. Définition :
Une huile essentielle est un extrait volatile odorant, de composition chimique complexe,
obtenu à partir d'une matière première végétale botaniquement définie, soit par entrainement à la
vapeur d'eau, soit par distillation sèche, soit par un procédé mécanique sans chauffage {11}.
En 1987 ; l’AFNOR (Association Française de la Normalisation) donne une définition
officielle des huiles essentielles : « Produit obtenu à partir d’une matière première végétale, soit
par entrainement à la vapeur d’eau, soit par des procédés mécaniques à partir de l’épicarpe des
Citrus, soit par distillation à sec. L’huile essentielle est ensuite séparée de la phase aqueuse par
procédés physiques » {12}.

2. Composition chimique générale des huiles essentielles :
La composition chimique de l'huile essentielle est souvent influencée par plusieurs facteurs
externes comme : les conditions climatiques, géographiques et agronomiques qui peuvent
intervenir dans la composition chimiques de l’huile essentielle, mais il est généralement admis que
les constituants des huiles essentielles sont repartis en trois groupes provenant de trois voies de
biosynthèse :
• Le groupe des terpénoïdes ;
• Le groupe des phénylpropanoïdes ;
• Le groupe des lipides, issus de la dégradation d’acides gras et de terpènes {13}.
3. Techniques d’extraction des huiles essentielles :

Le choix de la technique dépend principalement de la matière première: son état originel, ses
caractéristiques et sa nature proprement dite. Le rendement « H.E/matière première végétale »
peut être extrêmement variable selon les plantes {14}.
Parmi de nombreuses techniques d’extraction des huiles essentielles, la distillation est la

méthode la plus ancienne et également la plus utilisée. D’autres techniques plus récentes ont été
développées afin d’améliorer le rendement ou la qualité des huiles essentielles extraites, diminuer
le temps d‘extraction, réduire la quantité du solvant utilisé et accélérer la cinétique d‘extraction
{15}.
3.1. La Distillation :
Dans un premier temps, l’extraction des huiles essentielles s’est faite en plongeant la matière
première dans l’eau qu’on porte ensuite à ébullition, il s’agit de :
L’HYDRODISTILLATION:
La matière première est en contact direct avec l’eau. Elle peut flotter à la surface ou être
immergée, en fonction de sa densité et de la quantité traitée. Le chauffage de l’ensemble est
effectué à la base de l’alambic, à l’aide de combustibles divers comme le bois (alambic à feu nu)
ou par la vapeur surchauffée injectée dans une double enveloppe entourant l’alambic.

La présence de l’eau engen

gendre notamment des phénomènes d’hydrolys
lyse. Ces phénomènes
d’hydrolyse seront d’autant plus
us importants quand la durée d’hydro-distillatio
ation sera longue. Par
ailleurs, dans le cas de l’alambic
ic à feu nu, la matière première située à la supe
perficie peut connaître
une certaine surchauffe, ce quii est négatif pour l’huile essentielle ainsi obtenue.
ob Étant gorgée
d’eau, le produit solide résiduell n’est
n’ pas utilisable comme combustible {15}.
Figure 1 : Montage
M d’hydrodistillation (Clevenger) {16}
6}
LA VAPO-DISTILLA
LATION :
A la différence de l’hyd
hydro-distillation, cette technique ne met pas
as en contact direct de
l’eau et la matière végétale à traite
aiter.
De la vapeur d’eau fournie

fou par une chaudière traverse la matière
ère végétale située au
dessus d’une grille. Durant le passage
pa de la vapeur à travers le matériel, les cellules éclatent et
libèrent l’huile essentielle qui est
es vaporisée sous l’action de la chaleur pour
ur former un mélange
« eau + huile essentielle ». Le mélange
mé est ensuite véhiculé vers le condenseur
eur et l’essencier avant
d’être séparé en une phase aqueus
euse et une phase organique : l’huile essentielle
lle {17}.
PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE

GIE VEGETALE Page 6
Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau {17}
3.2. L’expression à froid :
Ce mode d’obtention ne s’applique qu’aux fruits d’agrumes par des procédés

mécaniques à température ambiante. L'expression à froid consiste à soumettre la substance
végétale à une forte pression à l'aide d'une presse hydraulique {14}.
Moteur
Aiguille
Collecteur
Figure 3: Schéma du montage de l’expression à froid {18}
3.3. Distillation sèche :

L’huile essentielle est obtenue par distillation des bois, écorces ou racines, sans addition
d’eau ou de vapeur d’eau {14}.

4. Méthodes d’analyses des huiles essentielles :

L’analyse chimique des huiles essentielles permet d’identifier et quantifier ses constituants.
Les progrès des méthodes analytiques permettent d’identifier rapidement un très grand nombre de
composés chimiques. En effet, la CPG est la méthode de référence utilisée pour analyser les
huiles essentielles {19}, elle permet l’analyse de mélanges, qui peuvent être très complexes, de
nature et de volatilité très variées {20}.
La chromatographie en phase gazeuse (CPG) :

La CPG est une méthode d’analyse par séparation qui s’applique aux composés gazeux ou
susceptibles d’être vaporisés par chauffage sans décomposition. C’est la technique de séparation la
plus utilisée pour l’analyse de la composition chimique des huiles essentielles, car elle permet
d’effectuer l’individualisation des constituants à partir d’échantillons de l’ordre du millilitre voire
du microlitre. Les progrès technologiques réalisés dans le domaine des colonnes capillaires, des
phases stationnaires et des détecteurs à ionisation de flamme ont contribué à rendre la CPG
incontournable pour l’analyse des huiles essentielles {21}.
Chaque constituant est caractérisé par un indice calculé à partir d’une gamme d’alcanes ou
plus rarement d’esters méthylique linéaires, dans les mêmes conditions d’analyse des échantillons
{16} ou en programmation de la température {23}. Les temps de rétention, bien que spécifiques
d’un composé, ont tendance à varier d’une analyse à l’autre, notamment du fait du vieillissement
des colonnes {24}.
Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de masse

(CG/SM) :
La simplicité du couplage entre ces deux techniques, les progrès accomplis dans le
traitement en temps réel du signal, la constitution de banques de données de spectre de masse et le
développement des algorithmes de comparaison entre le spectre d’un composé inconnu avec ceux
répertoriés dans la banque sont à l’origine de la généralisation de l’usage de la CG/SM dans les
laboratoires d’analyse des composés aromatisants. La CG sur colonne capillaire constitue une
excellente méthode d’introduction de l’échantillon dans le spectromètre de masse. Ainsi, la
colonne capillaire est directement couplée à la source d’ions permettant l’ionisation en impact
électronique {19}.

5. Les activités biologiques des huiles essentielles :

L’activité des H.E et des extraits aromatique est souvent réduite à l’activité de leurs
composés majoritaires, ou ceux susceptibles d’être actifs. Évalués séparément sous la forme de
composés synthétiques, ils confirment ou infirment l’activité des H.E de compositions semblables.
Il est cependant probable que les composés minoritaires agissent de manière synergique. De cette
manière, la valeur d’une H.E tiennes à l’intégrité de ses composants et non seulement à ses
composés majoritaires {26}.
Les composés chimiques de plus grande efficacité et à plus large spectre sont les phénols, les
alcools, les aldéhydes, les cétones et plus rarement des terpènes {27}.
5.1. Activité anti-oxydante :

Le phénomène d'oxydation consiste à rouiller les métaux, flétrir les légumes et les fruits,
rancir les graisses et modifier le goût et la couleur des aliments.
De point de vue chimique l'oxydation est générée par la présence des radicaux libres;
espèces chimiques instable, neutres ou chargées qui cherchent toujours à récupérer un électron
dans sa couche externe pour retrouver son état stable, très rapide et se propage en cascade.
Ils pointent surtout les corps gras comme les phospholipides des membranes cellulaires ainsi
que les protéines. L’oxydation entraine une modification ou une perte d'activité biologique de la
molécule, en cas d’enzyme, ce qui conduit à des désorganisations cellulaires irréversibles qui
provoque la mort cellulaire. Il en est de même quand l'oxydation touche l'ADN {29}.
Les antioxydants sont des molécules qui fixent les radicaux libres et protègent les protéines
essentielles et qui diminuent ou empêchent l'oxydation d'autres substances {30}.
La méthode d’évaluation de l’activité anti-oxydante est :
Test de réduction du DPPH :

Le DPPH ou 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle agit en tant qu'un radical libre stable efficace
réduit par un antioxydant, montrant un spectre d'absorption à 517 nm avec une couleur violette, la
réduction de ce radical nous donne la coloration jaune.
La méthode est basée sur la dégradation du radical DPPH. Un antioxydant aura la capacité de
donner un électron singulier au radical synthétique DPPH de coloration violette pour le stabiliser

en DPPH de coloration jaune. {31}, cette activité est facilement mesurable par spectrophotométrie
à 517 nm.
Dans ce test les antioxydants réduisent le diphénylpicryl-hydrazyle ayant une couleur violette
en un composé jaune, le diphénylpicryl-hydrazine, dont l'intensité de la couleur est inversement
proportionnelle à la capacité des antioxydants présents dans le milieu à donner des protons {32}.
5.2. Activité antibactérienne :

Du fait de la variabilité des quantités et des profils des composants des huiles essentielles, il
est probable que leur activité antimicrobienne ne soit pas attribuable à un mécanisme unique, mais
à plusieurs sites d’action au niveau cellulaire.
De façon générale, il a été observé une diversité d’actions toxiques des huiles essentielles
sur les bactéries comme la perturbation de la membrane cytoplasmique, la perturbation de la
force motrice de proton, fuite d’électron et la coagulation du contenu protéique des cellules.
Le mode d’action des huiles essentielles dépend en premier lieu du type et des
caractéristiques des composants actifs, en particulier leur propriété hydrophobe qui permet de
pénétrer dans la double couche phospholipidique de la membrane de la cellule bactérienne. Cela
peut induire un changement de conformation de la membrane {33}.
Les méthodes d’évaluation de l’activité antibactérienne sont :
Méthode des disques :
Cette méthode est nommée aussi technique de l’antibioaromatogramme a été pratiqué

pour tester et mettre en évidence l'activité antimicrobienne {34}.
Une suspension bactérienne de 18 à 24 heures de chaque souche microbienne est préparée
avec le bouillon nutritif dilué. Des boîtes de pétri contenant la gélose sont inoculées par la
suspension bactérienne, les boîtes sont ensuite séchées sous hotte à flux laminaire.
Un disque de papier filtre de 6 mm de diamètre est arrosé de l'huile essentielle puis
conservé sur une boîte de pétri et le tout est entretenu pendant 18 à 24 heures à 30°C pour les
bactéries gram négatif et 37°C pour les bactéries gram positif.
Après 18 à 24 heures d'incubation, on remarque la constitution d’une zone ou un halo clair
autour du disque si l'huile essentielle entrave le développement microbien. Plus la zone
d'inhibition est importante, plus le germe est sensible.

Méthodes des puits :

Cette méthode assure une diffusion radiale de l'H.E à l’aide d'un puits contenant l’huile
essentielle à étudier en donnant une zone d'inhibition claire et facilement mesurable. La méthode
consiste à créer un trou circulaire vertical dans le milieu gélosé. Chaque puits est remplis l’huile
solubilisé dans un solvant spécifique {35}.
III. L’enquête:
1. À propos :
Au cours de notre enquête, une série de visites ont été effectuées chez des herboristeries à la
fois traditionnelles et sophistiquées, à l’aide d’un questionnaire préétablie (Annexe 2) comportant
des questions sur l’identité vernaculaire de la plante ainsi que la partie utilisée, les modes de
préparation les usages thérapeutiques et traditionnelles, la qualité des produits dérives et leurs
prix.
2. Région d’étude :
L’enquête a été menée auprès des herboristes des deux villes principales de la région
Tanger-Tétouan située au nord du Maroc. Il s’agit de Tanger et Tétouan.
3. Objectifs :
Les principaux objectifs de cette enquête sont :
Valoriser les PAM d’origine du Nord du Maroc.
Évaluer la valeur économique de ces plantes.
Savoir la situation du marché de ces plantes au niveau régional.
IV. La plante à étudier :
1. Généralités :
Laurus nobilis L., membre de la famille des lauracées qui renferme 32 genres et environ
2000-2500 espèces {36}. Laurus, nom latin, d’origine celte qui veut dire « toujours vert » allusion
au feuillage persistant de la plante {37}.

Les feuilles sont largement appliquées et connues comme assaisonnement et herbe

médicinale depuis les périodes antiques grecs et romain {38}. Il est intéressant de noter que cette
herbe, qui était pendant longtemps employée dans la nourriture comme condiment et en médecine
traditionnelle, a des propriétés qui peuvent suggérer de nouvelles applications {39}.
2. Origine et distribution:
Originaire du bassin méditerranéen, Laurus nobilis pousse dans les lieux humides et
ombragés, mais également dans les jardins, où elle est cultivée comme condiment {40}.
Actuellement, dans beaucoup de pays tels que la Turquie, l’Algérie, la France, la Grèce, le
Maroc, l’Amérique centrale et les États-Unis Méridionaux, la plante est largement cultivée
comme plante ornementale et pour la production commerciale {38,36}.
3. Description botanique:
Laurus nobilis, Arbuste ou arbre aromatique de 2 à 10m de haut à tige droite grise dans sa
partie basse et verte en haut. Ses feuilles sont alternés, coriaces, légèrement ondulées sur les
bords, longues de 16 cm sur 8 cm de large, persistantes vert foncé et glacés sur leur face
supérieure et plus pale en dessous. Les fleurs sont dioïques (petites fleurs mâles et femelles sur
des pieds séparés), jaunes, groupées par 4 à 5 en petites ombelles. Le fruit est une petite baie
ovoïde de 2cm de longueur sur 1cm de largeur, noir vernissé à maturité {40, 38,41}.
Rameau
Feuille
Fruit
Fleur
Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis {41}.

4. Classification botanique:
Le Tableau 2 illustre la classification botanique de Laurus nobilis L.
Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L {42}.
Règne Plantes
Sous règne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotylédones
Sous classe Dialypétales
Ordre Laurales
Famille Lauracées
Genre Laurus
Espèce Laurus nobilis L.

Matériel et Méthodes
Chapitre 2
Matériel et Métho
thodes
I. Matériel Biologi
ogique:
1. Matériel
el végétal
La plante du laurier noble a été récoltée la 25 mai 2016 à partir dee la

l région de Moulay
Abdeslam, au nord du Maroc.
Les feuilles de cette plantee est

es la partie végétale choisie pour l’extraction.
n.
Figure 5 : Situati
ation géographique de la région de la récolte {43}.
{

GIE VEGETALE Page 14
2. Matériel microbiologique
Les souches utilisées dans notre étude font partie des groupes des microorganismes
pathogènes.
Les souches bactériennes utilisées dans notre travail proviennent de l’Équipe de Recherche
en Biotechnologies et Génie des Biomolécules de la FST de Tanger. Elles sont présentées et
caractérisées dans le Tableau 3.
Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.
Les souches Principales

caractéristiques
Escherichia coli Bacille à Gram -
Salmonella Seftenberg Bacille à Gram -
Staphylococcus aureus Coque à Gram +
Enterococcus faecium Coque à Gram +
II. L’extraction d’huile essentielle :

Les feuilles sont séparées minutieusement de leurs pédoncules et nettoyées. Elles sont
mises par la suite à sécher dans l’étuve pendant 48 heurs à 40˚C. Après séchage, 100g de
feuilles séchée ont subit une hydro-distillation. L’extraction de huiles essentielles a été effectuée à
l’aide d’un hydro-distillateur de type Clevenger. L’hydro-distillation est arrêtée après 3 heures.
L’huile est conservé dans des tubes de verre fermés hermétiquement et couverts par un papier
aluminium pour la préserver de l’air et de la lumière et mise à 4˚C dans un réfrigérateur à
l’obscurité jusqu’au l’analyse chimique de leurs composants et l’évaluation de leurs activités.

Figure 6 : Mo
ontage d’hydro-distillation du type Clevenger
er :
III. Détermination d’humid

idité et du rendement en huiles essent
ntielles :
1. Calcull d’humidité
d :
Le taux d’humidité, danss notre
n échantillon, à été déterminé par le procé
océdé de dessiccation à
une température de 105° C pen
endant 24 heures dans une étuve jusqu'à l’obtention
l’o d’un poids
constant. Après refroidissementt dans
d un dessiccateur, la moyenne des pertess en
e poids est calculée
et le taux d’humidité est détermin
iné par la relation suivante :
H(%
%) = (MF-MS)/MS×100
Avec:
MF: Matière Fraîche (g).
H(%): taux d’humidité.
MS: Matière Sèche (g)

2. Calcul du rendement en huile essentielle :
Le rendement de l’huile essentielle des différentes provenances est calculé par rapport à
la matière totale sèche par la relation :
R(%) =MH.E/MS×100
Avec:
R: Rendement en huile essentielle en pourcentage (%).
M H.E: Masse de l’huile recueilli (g).
MS : Matière sèche en (g)
IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse

couplée à la spectrométrie de masse (CPG/ SM) :
La séparation et l’identification des différents composés chimiques du H.E extraite des

feuilles de Laurus nobilis a été réalisée par la chromatographie en phase gazeuse (Ultra GC
Trace), couplée à un spectromètre de masse de type (PolarisQ) à l’unité d’analyse GC/MS et GC,
Trappe d’ions en mode impact électronique avec une énergie d’ionisations de 70 eV. La colonne
utilisée est une colonne capillaire apolaire en silice. Le volume de l’échantillon injecté est de 1 µl
de l’huile diluée dans l’hexane. En combinant les deux techniques, on obtient les spectres de
masse des différents composés des échantillons des huiles essentielles. L’identification des
composants des huiles essentielles est réalisée en comparant leurs temps de rétention et leurs
spectres de masse avec ceux dans la base de données.

1 2 3
Figure 7 : Chromatographie en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie

ie de
d Masse (GC/MS)
1 : Spectrométrie de masse
sse
2 : Chromatographie en phase
ph gazeuse
3 : Lien informatique
V. Indices physico-ch
chimiques :
Pour obtenir des données
es sur la composition et le degré de pureté dee l'huile
l essentielle et,
dans certains cas, pour l'identifier
ier, on procède à l'étude de ses propriétés physiq
sique et chimique.
Dans cette étude, les mét

éthodes d'analyse physico-chimique (proprié
riétés organoleptiques,
pH, indice d'acide, pouvoir rotato
atoire, indice de réfraction), des H.E extraites ont
on été réalisé suivant
les protocoles expérimentaux édic
dictés par l'association Française de Normalisat
sation {12}.
1. Les propri
riétés organoleptiques :
Il s’agit des caractéristiq

tiques d'un critère d'un produit pouvant être apprécié
a par les sens
humains (toucher, saveur, odo
dorat). Les différentes caractéristiques organole
oleptiques de l'essence
de Laurus nobilis prise en comp
mpte sont: aspect, couleur et odeur.
2. Le PH :
La mesure l'activité chimiq

mique des ions hydrogènes (H+) en l'H.E extrai
trait a été établie par le
biais d'un pH-mètre.

3. Indice d’acide :
La détermination de l'indice d'acide renseigne généralement sur le degré d'hydrolyse. Les

H.E ne contiennent pas d'acide gras libre à courte chaine carbonique (voir négligeable). Ce
paramètre est une variable qui dépend essentiellement des conditions de conservation et surtout
des conditions d'extraction.
L'indice d'acide (la), est le nombre de milligrammes d'hydroxyde de potassium (KOH)

nécessaire pour neutraliser les acides libres renfermés dans (01) grammes d'H.E. Cette
neutralisation par (KOH) se traduit par la réaction chimique suivante :
O O
R-C + KOH + H2O
R-C
OH OK
Le protocole expérimental de la détermination de l'indice d'acide est le suivant:
1g d'H.E ,5mL d'éthanol à 95 % et environ 3 gouttes d'indicateur coloré (phénophtaléine)

sont introduits dans une fiole. Le mélange ainsi formé est titré par une solution éthanolique de
potasse (KOH) (0,1N) jusqu'à ce que la couleur du mélange vire à une couleur rose.
L'indice d'acide (la) est déterminé par la formule suivante :
Ia = (56, 11×N×V)/m
Avec :
N : normalité de KOH
V : Volume en ml de la solution éthanolique de KOH utilisé pour le titrage.
M : masse en grammes de l'huile essentielle.
4. Pouvoir rotatoire :
Le pouvoir rotatoire du H.E a été mesure à l’aide d’un polarimètre.

VI. Évaluation de l’activité antioxydante :
L’activité anti-oxydante a été évaluée par la mesure du pouvoir de piégeage du radical

DPPH. Un millilitre d'une solution de 1mM du radical DPPH dans du méthanol est ajouté dans des
tubes contenant 3 ml de différentes concentrations du H.E de Laurus nobilis (1000-100 mg) de
méthanol. Après agitation au vortex, les tubes sont maintenus à température ambiante dans
l'obscurité pendant 30 min. La mesure de l’absorbance est réalisée à 517 nm en utilisant un
spectrophotomètre. La vitamine C (un antioxydant standard) est utilisée comme contrôle positif.
Le pourcentage de l’activité du piégeage du radical DPPH est calculé comme suit:
% Piégeage du radical DPPH = [(Acontrol – Atest) / Acontrol] × 100
Avec:
Acontrol : l’absorbance de la réaction contrôle (contenant tous les réactifs excepté le produit à
tester)
Atest : est l’absorbance du produit à tester.

VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E :
L'activité antibactérienne des huiles essentielles a été évaluée en utilisant la méthode de
diffusion sur disques.
1. Milieu de culture:
Dans notre travail nous avons utilisé comme milieu de culture les suivants:
Pour l’obtention des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu Nutritif Broth
(NB) : 13g du milieu déshydraté fondue dans un 1L d'eau distillée.
Pour tester l’activité biologique des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu
gélose Muller Hinton Agar (MHA), Ce milieu est composer de:
2 g d'infusion de viande de bœuf.
17,5 g de peptone de caséine.
1,5 g d'amidon.
17 g d'agar.
38g de ces compositions sont fondues dans 1L d'eau distillée.

2. Obtention des suspensions bactériennes :

La remise en culture des souches a été effectuée par ensemencement d’une colonie isolée à
partir des boites d’agar nutritif dans 5 ml du milieu NB. Le bouillon a ensuite été incubé 24 h à
37°C.
3. Méthodes de diffusion sur disques :
La méthode de diffusion sur disque est utilisée comme test pour une détermination
qualitative de l’activité antibactérienne du H.E de Laurus nobilis. Après l’obtention des souches
bactériennes 100µl de la suspension bactérienne de chaque souche d’intérêt a été inoculé à la
surface d’une boîte de gélose de Muller Hinton Agar (MHA) à l’aide d’un étaloir de façon à avoir
une croissance répartie de façon homogène sur toute la boîte. Des disques stériles de papier filtre
ont été imprégné avec 15µl du H.E et ensuite placés à l’aide d’une pince stérile à la surface des
boîtes de pétri de MHA préalablement ensemencée avec les microorganismes. Les boîtes de Pétri
ont été conservées à 4°C pendant 20min pour permettre la diffusion des huiles essentielles. Elles
sont ensuite incubées à 37°C pendant 18 à 24 h sauf pour les boîtes inoculées.
Les diamètres des zones d'inhibition résultants ont été mesurés en mm. Les tests ont été
effectués en double. Les résultats sont exprimés en moyenne de deux déterminations (+/-) écart
type.
Croissance
bactérienne
Zone
Disque d’inhibition
Imbibé par
H.E
Figure 8 : Diffusion sur disques

Résultats et Discussion
Chapitre 3
I. L’enquête :
Fiches d’information des herboristes :
Durant la période de l’enquête, on a effectué un tour de plusieurs herboristes de la région
Tanger- Tétouan et on a organisé les informations sous forme de fiches. Elles sont représentées
présentées comme suit :
Herboriste Rass Msalla
La plus
Mode de Prix/ Type
Nom Type/origine Usage Fournisseur commer-
préparation d'emballage
cialisée
Arbustive/ Infusion
Erica
De forêt
Médicinale Bio-vert (ste)
Décoction/Cru
--------
⁺
Plantes Pin Arbre/ De forêt Médicinale Bio-vert (ste) -------- -------- --------
Médicinale/ Décoction/ -------- --------
Laurier noble Arbustive Bio-vert (ste)
Alimentaire Cuit
Extrait / 90dh/boite des
Capsules
Erica -------- Médicinale Bio-vert (ste) --------
capsules ⁺⁺
Médicinale /
H.E
Pin --------
Cosmétique
Bio-vert (ste) -------- 10 ml ⁺
Laurier noble -------- Médicinale Bio-vert (ste) -------- 10 ml
H.Végétale Laurier noble -------- Médicinale Bio-vert (ste) -------- 10 ml ⁺

Les huiles les plus
Huile d’argan, huile du ricin, huile d'amande
commercialisés
Meilleurs clients Jeunes femmes
La distillation chez
NON
l'herboriste

Herboriste Marrakech
Herboriste Centre Yasmina

Herboriste Lalla Chafia Résultats et Discussion

Herboriste Traditionnel
Herboriste Kenfaoui

Résultats
RésultatsetetDiscussion
Discussion
Herboriste Laoun de Tetouan

Herboriste Centre Omar
Mode de Prix / Type Vérification de

Nom Type/Origine Usage Fournisseur Partie utilisées
préparation d'emballage la qualité
Errachidia/ Thérapeutique/
Romarin -------- -------- -------- --------
Nord Cosmétique
Plantes Couleur
Arbustive/ Cosmétique/ -------- Infusion/ --------
Sauge Tige
Spontanée Alimentaire Tisane
Romarin -------- Thérapeutique -------- -------- -------- --------
H.E
Sauge -------- Cosmétique -------- -------- -------- --------
Poudre Romarin
Meilleurs client Jeunes femmes
1. Commentaires :
On a remarqué qu’il existe une grande différence des prix des plantes médicinales d’un
herboriste traditionnel comme ceux que l’on trouve dans les quartiers populaires et ceux qui se
vendent par des herboristes cultivés.
La qualité de ces plantes intervient dans les prix ainsi que l’aspect du lieu par exemple
chez un herboriste moderne on s’aperçoit que les plantes sont conservées dans des boites fermées
par contre chez les herboristes traditionnels, ces plantes sont exposées à l’air et à la poussière ce
qui altère la qualité de ces plantes.
2. Remarques :
On remarque que les prix sont différents même d’un herboriste cultivés à un autre, par
exemple, chez l’herboriste Rass Msalla le prix des Capsules de la plante Erica est de 90dh par
contre chez l’herboristerie Laoun le prix varie de 100 à 120dh.
Pour les huiles, on note que les prix de Le thym et de la camomille sont chers chez certains
herboristes, par contre les autres types des huiles sont presque de même prix qui ne sont pas très
chers.
D’un point de vue régional, on a remarqué que la ville de Casablanca constitue la source
principale des fournitures des plantes médicinales et de leurs produits dérivés, alors que dans la
région Tanger-Tétouan, on trouve rarement un herboriste qui utilise ses plantes.
On note aussi que la plante sèche reste la forme la plus commercialisé malgré la présence
des autres dérivés.

II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles :
1. Rendement en huile essentielle :
Le rendement moyen de l’huile essentielle, obtenu à partir de la plante Laurus nobilis est
exprimé en 1000 ml de distillat pour 100g de matière sèche, exprimé en pourcentage, est de :
0,66 ±0,11 %
Par comparaison du rendement en H.E obtenu pour cette plante par rapport à un autre
résultat cité dans la littérature scientifique : (OUIBRAHIM et al., 2015), ont obtenu un rendement
en H.E de L.nobilis de 0,71%. Ce rendement s’avère en concordance avec le résultat obtenu par
notre plante {45}. Cependant, d’après (Haddouchi et al., 2009), ont trouvé un rendement de 1,2%
{46}.
Cette différence en matière de rendement en H.E de Laurus nobilis, pourrait être due à la
forte humidité qui caractérise la région de Moulay Abdeslam Il sachant que les rendements
maximaux sont obtenus par temps sec, elle pourrait aussi être due à la période de récolte et la
méthode d’extraction employée. Ce sont des facteurs entre autres qui peuvent avoir un impact
direct sur le rendement en huile essentielle.
2. Taux d’humidité :
Les résultats obtenus ont révélé un taux d‘humidité important compris entre 39% et 51%,
cela signifie que approximativement la moitié ou moins de la moitié du poids frais de la plante est
constituée par l’eau.
Les feuilles du laurier montrent la grande teneur en eau 51%, c'est-à-dire la moitié du poids
frais, respectivement la plante totale avec une teneur de 47%, par contre les tiges du laurier ne
présente qu’une teneur de 38%.

Feuilles Plante totale

tot
49%
9% 53%
Ms MS
51% Eau 47% Eau
Tiges
62%
38
38% MS
Eau
Figure 9 : Teneur
eur en eau des trois différentes parties de la plante.
pla
III. Indices physico-cchimiques :

Les résultats des propriété
iétés physico-chimiques et les caractéristiques
es organoleptiques de
l’huile essentielle extraite de la plante
pl sont regroupés dans le Tableau 4.
Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiq

iques des H.E
Aspect Couleur Odeur pH Indice d’acide Pouvoir Indice de

H.E
r
rotatoire réfraction
Liquide
Jaune aromatique 0,561mg -21,66
Laurus nobilis mobile 5.37 1,476
très pâle épicée KOH/1gd’H.E (°.
(°.cm/g.dm)
limpide

Les résultats du Tableau 4 indiquent que les H.E de L.nobilis est liquide, de couleur jaune
très pâle aromatique, ayant un pouvoir rotatoire de -21,66°.cm/g.dm et un indice de réfraction de
1,476.
Selon Afnor (2000) les huiles essentielles sont habituellement liquides odorants à
température ambiante, volatiles, et légèrement acide, ce qui les différencie des autres huiles
végétales. Elles sont plus ou moins colorées, le pouvoir rotatoire du Laurus nobilis varie du (-10) à
(-22).
Les résultats des caractéristiques organoleptiques, de pouvoir rotatoire, d’indice de

réfraction et de pH, obtenus pour l’H.E Laurus nobilis sont donc conforme à celle édictées par la
norme d’Afnor (2000).
L'indice d'acide indique le comportement de la quantité des acides libres présents dans
l'H.E. Il peut aussi nous renseigner sur la susceptibilité de l'huile à subir des altérations,
notamment l'oxydation. D'après les résultats du Tableau 4 : l'H.E de L.nobilis a présenté
respectivement une valeur égale à 0,561mgKOH/1g d'H.E. Cette valeur obtenue, est très inférieure
par rapport à celles préconisées par la norme d’Afnor (2000), qui est de l'ordre de 4,5 à
6,5mgKOH/1g.
L’écart remarqué pour la valeur de l'indice d'acide de H.E de L.nobilis par rapport aux
valeurs promulguées par la norme d’Afnor (2000), peut être expliqué par la méthode de
conservation de plante, sa durée de stockage, la composition chimique de sa H.E, des éventuelles
réactions phytochimiques lors de l'hydrodistillation, … etc. Ce sont des facteurs entre autres qui
peuvent avoir des influences sur le comportement et les caractéristiques des H.E.
En effet, un stockage de la plante pendant 24 heures suffit pour induire des changements
sensibles de composition d'H.E {47}. Au cours de l'hydrodistillation, l'eau, l'acidité et la
température peuvent induire des réactions : d'hydrolyses, hydratations et cyclisation, mais aussi
réarrangements, isomérisations, oxydations, … etc. et ce d'autant plus que la distillation est longue
et le pH acide {48}.
Toutes ces observations montrent les difficultés que l'on peut rencontrer lors de la
préparation et de la conservation des huiles essentielles.

La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais non
suffisante pour caractériser les huiles essentielles. Il est donc nécessaire de la compléter par des
analyses chromatographiques « CG/SM ». Ces dernières sont souvent utilisées comme moyen
analytique complémentaire pour l'analyse structurale des substances volatiles, elles ont été
employées pour identifier qualitativement l'H.E de Laurus nobilis.
IV. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle :

La composition chimique de l’huile essentielle de Laurus nobilis a été déterminée par la
chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) conformément
aux indices de Kovats et en comparant avec les données de la bibliothèque NIST.
Le Tableau 5 représente les différents constituants chimiques identifiés de l’H.E. Les

composés fondamentaux et majoritaires apparaissent en gras.
L’analyse de l’H.E a permis de mettre en évidence 25 substances dominées par la présence

de 1,8 Cineole (42%),Caryophyllene (11,74%),α -Terpinyl acétate (9,98%), ce qui représente
89,42% de l’huile.
Par comparaison de la composition chimique de notre échantillon à celle décrite par :

(OUIBRAHIM et al., 2015) {45}, pour l’H.E originaire de l’Algérie, on constate que le 1,8
Cineole reste toujours le constituant majoritaire avec une teneur de 35,31%. Par ailleurs, cet
échantillon ressort une teneur considérable en β-Linalol 22,52%, et en Camphene 7,37%.
Nos résultats concordent aussi avec ceux rapportés par (Mediouni Ben Jemâa et al., 2012)
{39}, qui ont démontré que les principal composé commun des H.Es de laurier provenant de
l’Algérie, de la Tunisie et du Maroc est le 1,8-Cinéole. (Marzouki et al., 2009) {40} ont
également signalé que les H.Es de L. nobilis cultivé en Tunisie et en Algérie n'ont pas révélé de
différences dans leur composition chimique. En outre, (Ozcan et Chalchat, 2005) {41} soulignent
que la variation quantitative et qualitative des huiles essentielles de L. nobilis concerne
principalement les composés mineurs. La composition chimique des H.Es est influencée par des
facteurs géographiques, bioclimatiques ainsi qu’aux conditions de récolte et de stockage de la
plante {42,43}.

Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’H.E étudiée
Temps de
Composants Abondance(%)
rétention(min)
7,65 2,59
α-Pinene
8,05 0,24
Camphene
8,70 4,64
Sabinene
8,82 1,99
β -Pinene
9,11 0,32
α -Phellandrene
9,71 0,53
3-Carene
9,88 0,40
p-cymene
10,13 0,19
Limonene
10,38 42
1,8-Cineole
11,08 0,79
cis-Sabinene hydrate
12,20 0,72
Linalool
14,23 0,58
Terpinen-4-ol
14,53 1,73
α -Terpineol
Myrtenol 14,91 2,69
δ -Elemene 18,31 0,25
19,20 9,98
α -Terpinyl acetate
19,44 3,63
Eugenol
Methyl eugenol 20,33 0,64
Caryophyllene 20,60 11,74
21,12 0,36
trans-α -Bergamotene

23,60 0,31
β -Elemol
24,27 1,83
Spathulenol
26,19 0,20
β -Eudesmol
26,35 0,23
α -Eudesmol
26,71 0,83
Cis-Farnesol
89,42%
V. Activité anti-oxydante :
On remarque expérimentalement, le changement de couleur de la solution du DPPH
de la coloration violet intense à une coloration jeune pâle, cela montre déjà la présence d’une
activité anti-oxydante.
Notre série de dilution est analysé par un spectrophotomètre à une longueur d’onde de
517nm, les résultats sont présentés dans le Tableau 6.
Tableau 6: L’activité anti-oxydante de l’H.E
Concentration L’absorbance en % Piégeage du radical Ecartype

(mg/l) 517nm DPPH
1000 0,257 87,98 % 0,08
500 0,618 71,10 % 0,03
250 1,21 43,43 % 0,04
100 1,71 20,05 % 0,06
Tableau 7: L’activité anti-oxydante de la Vitamine C
Concentration L’absorbance en % Piégeage du

Ecartype
(Mg/L) 517nm radical DPPH
1000 0,083 96,11% 0,0026
500 0,086 95,97% 0,0037
250 0,095 95,55% 0,0043
100 0,097 95,46% 0,0049

Les résultats du Table

bleau 6 et Tableau 7, montre que le pourcent
entage de piégeage du
radical DPPH s’accentue avecc l’augmentation
l de la concentration soit pour
po l’antioxydant de
comparaison, La vitamine C, ou
u pour
p l’huile essentielle.
D’ailleurs, l’activité anti-oxydante

an de l’H.E de Laurus nobilis est inférieure
in à celui de la
vitamine C pour toutes les conce
ncentrations utilisées. Or, pour les concentratio
ations de 1000Mg/L et
500Mg/L en huile essentielle le % de piégeage du radical DPPH dépasse 87%
%.
Pour toutes les concen

centrations utilisées, La vitamine C, s’impos
pose avec un pouvoir
antioxydant élevé comparé à celle
cel de L’H.E, ce pouvoir est de 96,11% à une
u concentration de
1000Mg/L.
120,00%
100,00%
Piégeage du radical DPPH%
80,00%
60,00%
Laurus nobilis
40,00%
Vitami C
Vitamine
20,00%
0,00%
1000 500 250 100
Concentration (Mg/L)
Concentration (Mg/l)
Figure 10 : Activité antioxyda

ydante de l’huile essentielle de L.nobilis compa
parée à celui de la
vitamine C à des
d concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L g/L
VI. Activité antibactérie

rienne :
La méthode de diffusion
on des disques en agar nous a permis de mettre
me en évidence le
pouvoir antibactérien d’huile esse
ssentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis quatre souches
so bactériennes.

D’après la Figure 11 nous constatons que l’huile essentielle du Laurus nobilis a présenté
une certaine activité modérée dont les diamètres des zones d’inhibitions n’ont dépassé 24,45 mm.
30
Diamètre de zone d'inhibition (mm)
25
20
Escherichia coli
15 Salmonella Seftenberg
Staphylococcus aureus
10
Enterococcus faecium
5
0
Les souches testées
Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches testées.
Les résultats du test de sensibilité microbienne à l’huile essentielle sont regroupés dans le
Tableau 9. Les valeurs indiquées sont les moyennes de deux mesures.
Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches testées.
Diamètres de la zone Sensibilité à l’huile essentielle

Les souches testées
d’inhibition (mm) de Laurus nobilis L
Escherichia coli 24,45 ± 3,18 +
Salmonella Seftenberg
12,6 ± 3,67 +
Staphylococcus aureus
18,9 ± 0,98 +
Enterococcus faecium
9,6 ± 0 -
(+) sensible, (-) résistant

Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches bactériennes
testées.
Escherichia coli Salmonella Seftenberg
Staphylococcus aureus Enterococcus faecium

A partir des résultats obtenus, on peut observer le pouvoir antibactérienne d’huile

essentielle du Laurus nobilis L le plus élevé a été contre Escherichia coli dont le diamètre,
d’environ 24,45 ± 3,18mm, les autres souches Staphylococcus aureus, Salmonella Seftenberg,
Enterococcus faecium, ont des diamètres des zones d’inhibitions moins de 19 mm, 18,9 mm ; 12,6
mm et 9,6 mm respectivement. Il est difficile de comparer les résultats obtenus dans les différentes
études sur l’effet antimicrobien des huiles essentielles en raison de la diversité des méthodes et des
conditions appliquées.

Conclusion et perspectives
Conclusion et perspectives
Dans le présent travail, on s’est intéressé à la valorisation des plantes médicinales et

aromatiques au Nord du Maroc, plantes très utilisées en médecine traditionnelle, et qui sont déjà
exploitées par la population du Nord.
Dans une première partie, on a réalisé une enquête sur les herboristes de la ville de Tanger
et Tétouan, et comme résultat on a constaté que la majorité d’entre eux n’utilisent pas les plantes
de la région malgré sa richesse en plantes médicinales et aromatiques.
Dans une deuxième partie, on a réalisé une étude des indices physico-chimiques, de
composition chimique, de pouvoir antioxydant et pouvoir antibactérien du produit obtenu, à partir
de l'extraction par hydrodistillation de Laurus nobilis cueilli de la région de Moulay Abdeslam.
L’étude quantitative a révélé que l’huile essentielle obtenue à partir de L.nobilis représente
0,66 ±0,11%.
L’étude qualitative par CG/SM, de constituants chimiques a permis l’identification de 25
composés dominés par le 1,8-cineole 42%.
L’étude de l’activité antioxydante a révélé que l’extrait méthanolique de l’huile essentielle
de Laurus nobilis est actif comme piégeur du radical DPPH.
L’étude de l’activité antibactérienne de cette huile essentielle de laurier sur des souches de
bactéries gram positif et gram négatif montre que ces huiles possèdent une activité
antibactérienne surtout contre le E.coli et Staphylococcus aureus.
En terme de perspective et à la suite des résultats obtenues, il serait intéressent de mener une suite
plus détaillée de l’enquête dans les autres villes de la région du Nord de Maroc, en vue de bien
évaluer l’état des PAM d’origine du Nord.
Les résultats de ce travail peuvent être complétés aussi par :
La réalisation des tests antibactériens sur une large gamme de microorganismes ;

L’étude de l’effet insecticide et antifongique de l’huile essentielle de L.nobilis ;
L’étude de l’effet de la zone géographique, la période de récolte et la méthode de
conservation sur le rendement et la composition chimique de l’H.E ;
L’extraction de laurier à l’aide des solvants organiques, pour but de la comparaison de
différentes activités biologiques de ces extraits à celles obtenues par hydro-distillation.

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Annexes
Annexes
Annexe 1 : Questionnaire pour l’enquête

Annexes

Annexes
Annexe 2 : Chromatogramme de l'huile essentielle de Laurus nobilis.
RT: 0,00 - 38,80 SM: 7B

10,38 NL:
100 2,20E8
TIC MS
90
laurier
80
70
Relative Abundance
60
50
40
20,60
30
20
8,70
10 14,91 25,00
3,14 5,72 30,41 34,87
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Time (min)

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Projet de Fin d’Études

État et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez

Préparé par : JELLOULI Kaoutar Encadré par : M.LAGLAOUI Amin (FSTT)

AKHRIF Ibtihal M.ZANTAR Saïd (INRA)

Soutenu le 22 juin 2016 en vue de l’obtention du Licence Sciences et techniques

Filière : Biotechnologie végétale

Année universitaire : 2015/2016

A Dieu qui m’a donné la force d’affronter chaque jour

A mes frères Omar et Adil.

Pour leur amour infini et leur soutien tout au long de ce parcours

Pour leur soutien et leur gentillesse

Dont l’amitié et le soutien, n’ont jamais défailli

A tous mes professeurs :

une démarche globale de recherche qui bénéficie des travaux déjà

repris par la suite.

Nous tenons à remercier en tout premier lieu notre encadrant Mr.

LAGLAOUI Amin, Enseignant à la Faculté des sciences et techniques

Tanger, qui a dirigé ce travail de recherche de Licence. Nous avons eu

l’honneur d’être parmi vos élèves et de bénéficier de votre riche

enseignement. Vos qualités pédagogiques et humaines sont pour nous

un modèle. Votre gentillesse, votre patience, et votre disponibilité

permanente ont toujours suscité notre admiration. Veuillez bien

monsieur recevoir notre remerciement pour le grand honneur que

vous nous avons fait d’accepter l’encadrement de ce travail.

Nos remerciements s'adressent également à Mr. BAKKALI

Mohammed et Mr. ARAKRAK Abdelhay, Enseignants à la Faculté

des sciences et techniques Tanger, pour avoir accepté de juger ce

travail. Nous adressons nos reconnaissances à tous nos enseignants

pendant nos études notamment ceux du Licence.

Nous exprimons notre reconnaissance à Mr. ZANTAR Said

Nous le somme aussi reconnaissant pour le soutien technique qu'il nous

a apporté tout en répondant à nos interrogations à tout moment. Nos

profondes gratitudes s’orientent vers Mr ZERROUK Mounir,

judicieux conseils et son support permanent.

Spéciale remerciement à notre amie Mme. SSEBBAGH Chaimae,

étudiant du Master à la Faculté des sciences et techniques Tanger

notre travail et ses conseils sur nos propositions, Nous la remercie

aussi pour ses conseils occasionnels et ses aides.

Nos remerciements vont aussi à Mr. JELLOULI Omar doctorant à

la Faculté des sciences et techniques Tanger département

mathématiques appliquées et informatique pour le temps qu'il a passé

Enfin, nous présentons nos sincères reconnaissances et nos

remerciements à tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la

Mots-clés : plantes aromatiques et médicinales, huile essentielle, Laurus nobilis

PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE

Liste des tableaux

Chapitre 1 : Etude bibliographique…………………………………………………………………2

I. Les plantes aromatiques et médicinales ......................................................................................2

Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord

Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L.

Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.

Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiques des

Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’HE

Tableau 6 : L’activité anti-oxydante de l’H.E.

Tableau 7 : L’activité anti-oxydante de la Vitamine C.

Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches

PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE

Figure 1 : Montage d’hydrodistillation (Clevenger).

Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau.

Figure 3 : Schéma du montage de l’expression à froid.

Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis.

Figure 5 : Situation géographique de la région de la récolte.

Figure 6 : Montage d’hydro-distillation du type Clevenger.