TD d’outils biotechnologiques

Exercice 1 : Ci-dessous la séquence d’un brin d’ADN :

5’ ACTTGCAAGCTAG 3’
3' TGAA CGTT CG ATC 5'
-Réaliser le séquençage de cette molécule d’ADN (ADN synthétisé) étape par étape
sachant que l’amorce est définit comme suit : ATC ?

- Réaliser le profil électrophorétique et déduire la séquence synthétisée ?

Exercice 2 :

La séquence d’un ADN bicaténaire (double brin), correspondant à un gène, est

partiellement reportée ci-dessous.

3' TATGCCCTA GGCTCGAGAGCT AGCAGACGT CTTTAAGG 5' ADN

1) Ecrire la séquence et l’orientation du second brin de ce fragment ?

2) Donner le brin complémentaire d’ARN ? 5' AUACGGGAUCCGAGCUCUCGAUCGUCUGCAGAAAUUCC 3'
3) Sur une représentation détaillée de l’enchainement de deux nucléotides d’un
brin d’ADN, un site de restriction « site BamH I » dont les bases seront représentées
par les lettres correspondantes (voir ci-dessous), quelle liaison est rompue sous
l’action de l’enzyme BamH I ?

5' ATACGG GATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC 3'

3' TATGCCCTAG GCTCGAGAGCTAGCAGACGTCTTTAAGG 5'

4) Soient les enzymes de restriction BamH I , Pst I, Xho I et Mbo I dont les sites
reconnus sont :

-Recopier la séquence de l’ADN et encadrer les sites de trestriction en indiquant

la position des coupures ?

5) Pour chaque enzyme, écrire les séquences des extrémités des molécules d’ADN
digérées et préciser le type d’extrémités obtenu.

6) On mélange ce brin d’ADN apparié avec son brin complémentaire à un autre

fragment d’ADN double brin. La solution est portée à une température supéieure
à leurs Tm respectives, puis refroidie. Que peut –on attendre ?

7) Voici la séquence d’une amorce (ou primer) : 5 ‘-TTTCTGCA-3’

Ou’ cette amorce se fixera t- elle sur la séquence d’ADN ? Quelle séquence
obtiendra t- on après élongation par la DNA-polymérase ?
Exercice 03 : Le séquençage d'un ADN monobrin est effectué par la technique de
Sanger, avec une amorce sens. En examinant le schéma représentant une partie de
l'autoradiogramme du gel de migration, écrire :
1- la séquence nucléotidique lue directement sur ce schéma du film ? 5' AAGATTTCT 3'

2- la séquence réelle du segment d'ADN monobrin correspondant ? 3' TTCTAAAGA 5'