RECEPTEUR A ACTIVITE SERINE THREONINE KINASE

RECEPTEURS DE LA FAMILLE TGFb

La famille du TGF-β est représentée par 35 membres parmi lesquels on peut citer:

- les TGF-βs
- les BMPs (Bone Morphogenetic Proteins)
- les GDFs (Growth Differentiation Factors)
- les activines
- les inhibines
- l'AMH (Anti-Müllerian Hormone).  
- GDNF (Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor)

 CARACTERISTIQUES DU RECEPTEUR ET DES LIGANDS 

RECEPTEUR
les membres de la super famille du TGF-β agissent par l’intermédiaire de deux types de récepteurs :
-Récepteur de type I : ALK ( Activin receptor-Like Kinase  ) qui comprend  7 membres (ALK1-7).
- Récepteur de type II : il comprend 5 membres.

Les deux récepteurs sont constitués par un domaine extracellulaire riche en résidus cystéines, un domaine
transmembranaire et un domaine intracellulaire sérine/thréonine kinase.

L’activation de la voie de signalisation (fig. 1)

Fig.1  : L’activation du récepteur du TGF-β

La voie d’activation est constituée par plusieurs étapes:

1. fixation du ligand sur le récepteur de type II  formé de deux sous unités (homodimère). 
2. association du récepteur de  type II (homodimère) avec le récepteur de type I (homodimère)avec
formation d’un complexe tetramérique.
3. phosphorylation du récepteur de type I par le type II dans une région riche en résidus
 sérine/thréonine
4. activation du site ser/thr kinase du récepteur du type I.
5. recrutement et phosphorylation de protéines intracellulaires appelées Smad.

La famille Smad est constituée de 8 membres  subdivisés en 3 classes:

* R-Smad   (Receptor-activated Smad): Smad1/2/3/5/8

*  Co-Smad (Common-partner Smad): Smad4

*  I- Smad  (Inhibitory Smad): Smad 6/7

les SMAD présentent 2 domaines, Mad homology 1 et 2(MH1 et MH2) (figure 2). Le domaine MH1 permet à la
protéine la liaison à l’ADN alors que le domaine MH2, siège de phosphorylation permet la liaison avec les
récepteurs du TGF-β1 et avec SMAD 4, permettant ainsi la translocation du dimère SMAD vers le noyau pour
réguler la transcription (fig. 2).

- possèdent deux domaines: MH1: permet la liaison à l'ADN, MH2: permet le recrutement soit: 
Fig.2  : Structure de la protéine SMAD

ACTIVATION DE LA VOIE DE SIGNALISATION PAR LE TGF-β (fig. . 3)

 phosphorylation du récepteur de type I par le type II

 recrutement et phosphorylation  de Smad 2 ou 3  (R-Smad) par le récepteur de type I.
 association de Smad 4  (Co-Smad) à Smad 2 ou 3  , ou autres selon le ligand
 translocation du complexe Co-Smad/ R-Smad vers le noyau.
 liaison du complexe Smads à l'ADN qui interagit soit avec des co-activateurs pour stimuler la
transcription, soit avec des co-répresseurs pour réprimer la transcription. 

Fig.3  : activation de la voie de signalisation du récepteur du TGF-β

Rétrocontrôle de la voie du récepteur du TGF  (fig. 4)

Trois mécanismes permettent l’arrêt du signal en réponse au TGF-β:

1- augmentation de la transcription des gènes qui codent pour les protéines Smad 7et 6  (protéines
inhibitrices: I-Smad)
La protéine interagit avec le récepteur de type I ce qui prévient le recrutement et la phosphorylation des R-
Smad (Smad2...)

2- recrutement d'ubiquitine ligases et/ou de phosphatases

*les ligases sont recrutées par Smad7 (elle joue le rôle de protéine adaptatrice) ce  qui permet
l'ubiquitinylation des complexes de récepteurs. Ils sont ensuite dirigés vers le protéasome pour être dégradés.
*les phosphatases déphosphorylent et déactivent les complexes de récepteurs.

3- inactivation des R-Smads (phosphorylées) localisées dans le noyau par phosphatases ou par

ubiquitinylation et dégradation par le protéasome.

Fig.3  : mécanisme de rétrocontrôle de la voie de signalisation du récepteur du TGF-β

 MUTATIONS DE MOLECULES DE LA VOIE DE SIGNALISATION

Une des causes du processus de tumorisation est l'altération de la voie de signalisation du TGF-β.
Des mutations inactivatrices des protéines (perte de fonction ) de la voie rendent la cellule  résistante  au
signal négatif de prolifération (rôle majeur du TGF-β).  Son effet antiprolifératif n'est plus une barrière à
l'émergence et la progression des tumeurs.

* RECEPTEURS 

- mutations  du récepteur de type II

Ces mutations sont observées dans les cancers:
* du colon (70 à 90% des cas)
* du pancréas (4 à 7% des cas)
* de l'estomac, le foie et certains cancers du sein.
Les cancers du colon ont une fréquence élevée .  Chez la femme, c'est la seconde cause de mortalité, après le
cancer du sein  et chez l'homme la troisième cause après le cancer du poumon et de la prostate. 

- mutations du récepteur de type I

Peu fréquentes. Observées dans certains cas de cancers pancréatiques (environ 4% des cas)

* SMAD

- mutations ou délétions de Smad4 (Co-Smad)

Nommées DPCA4 (deleted in Pancreatic Cancer 4)
Observées dans les cancers pancréatiques (50% des cas) et dans les cancers gastro-intestinaux, en proportion
plus faible.

- mutations de Smad7 
Dans certains cancers pancréatiques. Perte de la sensibilité au signal négatif de prolifération du TGF-β .

Fig4. Mutation des constituants de la voie des TGF b et conséquences pathologiques

DIALOGUE ENTRE DEUX VOIES DE SIGNALISATION

La protéine Smad 7 a un rôle central dans ce dialogue

* Dialogue entre les voies Interféron γ / TGF-β

Le traitement d'une cellule avec l'interféron γ induit l'expression de Smad 7 via la voie de signalisation
JAK/STAT (Janus kinase/Signal transduction and activator of transcription). Si dans un second temps on la traite
avec le TGF-β elle devient résistante à l'action de ce dernier. Cette perte de sensibilité s'explique par le fait que
la protéine Smad 7 qui a été transcrite avec l'interféron γ, exerce son effet inhibiteur de la voie du TGF-β (voir 
mécanisme d'atténuation du signal, ci-dessus).

* Dialogue entre les voies TNFα /TGF-β

Chez les diabétiques, il est reconnu qu'à long terme on observe au niveau du rein une fibrose et une
inflammation.  Smad 7 a  un rôle central en régulant la voie du TGF-β et du TNFα.

Smad 7 transcrite en réponse au TGF-β permet de réguler négativement:

1- la voie du TGF-β (voir atténuation du signal, ci-dessus) ce qui a pour conséquence de prévenir une sécrétion
excessive de matrice extracellulaire, responsable de la fibrose tissulaire. 
2- la voie du TNFα  responsable de l'inflammation. Sur le plan moléculaire, un des aspects de l'inflammation
est une augmentation de la transcription de gènes codant pour des  molécules pro-inflammatoires (IL1...) Le
rôle de Smad 7 est d'augmenter la transcription de IκB (Inhibitor of kB),  ce qui a pour conséquence de
séquestrer NFκB (Nuclear Factor kB), responsable de la transcription des molécules pro- inflammatoires.

 
 

REPONSES CELLULAIRES

Elles sont essentiellement le résultat de modifications de la transcription de gènes (environ 500) par les
complexes Co-Smad/R-Smad.

Le rôle des ligands de la superfamille du TGF-β s'exerce essentiellement dans: 

- la mise en place des plans du corps (axe antéro-postérieur et ventro-médian) et  de l'organogenèse au cours
de la vie embryonnaire
- le contrôle de l'homéostasie tissulaire et la régulation immunitaire chez l'adulte 

Les réponses cellulaires sont extrêmement variées, telles que:

- la prolifération et différenciation cellulaire
- l'apoptose, la migration cellulaire 
- la survie, l'angiogenèse
- la croissance tumorale, le processus métastasique...

EXEMPLES DE REPONSES CELLULAIRES AU TGF-β

1) Inhibition de la prolifération cellulaire 

Les cibles étant essentiellement :
- les cellules épithéliales, endothéliales, hématopoïétiques, neurales et certains types de cellules
mésenchymateuses 
Au plan cellulaire il inhibe la progression du cycle cellulaire.  Au plan moléculaire cela se traduit par une
augmentation de la transcription de gènes qui codent pour des protéines ( CKI = cyclin-dependent kinase
inhibitor) p21 et p15 qui bloquent l'activité des complexes cyclines /CDK (cyclin-dependent kinase)
responsables de la progression du cycle.
Le TGF-β étant un  puissant inhibiteur de la prolifération cellulaire c'est un suppresseur de tumeurs.

2) Induction de l'apoptose (mort cellulaire programmée)

Le phénomène est induit dans de nombreuses cellules en particulier:
- cellules embryonnaires ( cette réponse est cruciale au cours de l'embryogenèse).
- cellules tumorales (rôle de suppresseur de tumeur)

Au plan moléculaire  la cascade des événements est la suivante:

- augmentation de la transcription du gène qui code pour la protéine p53 (facteur transcriptionnel)
- la p53 augmente la transcription de gènes qui codent pour des protéines pro-apoptotiques de la famille Bcl2
(Bax..)

3) Transition épithélium-mésenchyme (TEM)

Elle permet aux cellules épithéliales de se transdifférencier en cellules fibroblastiques (les cellules
fibroblastiques dérivent des cellules mésenchymateuses). Ce processus initié par le TGF-β permet aux cellules
de quitter leur tissu d'origine (diminution de l'interaction cellule-cellule par perte de l'expression  des E-
cadhérines et augmentation des N-cadhérines)  pour migrer à distance.
Les TEM sont observées:
- au cours de la vie embryonnaire et font partie intégrante de certains processus morphogénétiques et
organogénétiques
- lors de la migration des cellules normales et cancéreuses (cancers métastasiques: des cellules cancéreuses
quittent la tumeur primitive pour coloniser d'autres tissus)

4) Angiogenèse
Le TGF-β est un puissant inducteur de formation de nouveaux vaisseaux à partir de vaissseaux pré-existants
dans les conditions normales et dans les stades avancés du développement des tumeurs. Dans ce dernier cas
l'angiogenèse est la conséquence d'une augmentation de la production de TGF-β par les cellules cancéreuses.
Ces cellules ayant des besoins accrus en nutriments sanguins la formation de nouveaux vaisseaux favorise leur
apport. Le TGF-β a donc un rôle (indirect) dans l'expansion du processus de tumorisation. 
Il possède une dualité fonctionnelle de suppresseur de tumeurs et de stimulant de la tumorigenèse.

5) Immunosuppression
C'est un régulateur négatif du système immunitaire. Il inhibe la production d'interleukine 2 qui est un puissant
stimulant de la prolifération des lymphocytes T (CD4+). 
Le TGF-β module aussi la prolifération, la différenciation et la fonction de toutes les classes de lymphocytes,
des macrophages et des cellules dendritiques.

6) Cicatrisation 
Elle requiert une coordination  de divers processus (migration de cellules immunitaires, TEM, mobilisation de
fibroblastes ...).  Les fibroblastes sont  stimulés par le TGF-β et en réponse ils produisent les molécules de la
matrice extracellulaire indispensable à la réorganisation du tissu cicatriciel.

REPONSES CELLULAIRES A D'AUTRES LIGANDS

BMPs
Ells ont d'abord été décrites comme inductrices de la formation des os et du cartilage. Ultérieurement il s'est
révélé que ces protéines ont  un spectre très large d'activités et agissent sur de nombreux types cellulaires. 

ACTIVINE
Originellement décrite comme un facteur stimulant la sécrétion de FSH (Folicle-Stimulating Hormone) de
l'hypophyse antérieure et un stimulateur de la différenciation de la lignée érythroblastique (formation du
globule rouge). 

AMH

En induisant l'apoptose elle  réprime le développement des canaux de Müller, qui représentent l'ébauche de
l'utérus. 

A noter que le TGF-β stimule, dans des cas plus rares, des voies de signalisation telles que JNK /p38 MAPK ,
Rho (petite protéine G). Les réponses, sont une stimulation de la migration cellulaire et une altération des
contacts intercellulaires.

  
  PATHOLOGIES

En général une dérégulation de l'activité du TGF-β est due à:

- une production anormale du ligand TGF-β
- des mutations de molécules de la voie de signalisation

Exemples de pathologies 
-1)  EXCES DE LIGAND
* Fibrose
Lorsque  le  processus de cicatrisation se prolonge ( dû en général à une inflammation chronique) il y a un
excès de production de TGF-β ce qui a pour conséquence de stimuler excessivement la production de
molécules de la matrice extracellulaire. Leur accumulation dans l'espace intercellulaire entraîne une fibrose
(tissu fibrotique).
* Stimulation des myofibroblastes 
Après une angioplastie (opération qui consiste à augmenter le diamètre d'une artère coronaire rétrécie, à
l'aide d'un ballonnet). Cette intervention est toujours suivie d'une augmentation de la sécrétion de TGF-β qui
stimule la prolifération des myofibroblastes.

2) MUTATIONS DE MOLECULES DE LA VOIE DE SIGNALISATION

Ces mutations mettent en exergue son rôle majeur de suppresseur de tumeurs

Une des causes du processus de tumorisation est l'altération de la voie de signalisation du TGF-β.
Des mutations inactivatrices des protéines (perte de fonction ) de la voie rendent la cellule  résistante  au
signal négatif de prolifération (rôle majeur du TGF-β).  Son effet antiprolifératif n'est plus une barrière à
l'émergence et la progression des tumeurs.

* RECEPTEURS 

- mutations  du récepteur de type II

La cause initiale des mutations est l'instabilité de séquences microsatellites  (GT) du récepteur. Ces séquences 
répétées sont naturellement plus difficiles à répliquer et elles introduisent des erreurs de réplication. Elles sont
cependant corrigées par des  complexes protéiques de réparation  des mésappariements (MisMatch Repair).
Dans ce type de cancer un des gènes qui code pour une protéine de réparation est muté et inactivé (mutation
constitutive et mutation somatique). La conséquence de ce défaut de réparation est à l'origine d'un récepteur
tronqué  ou muté dans le domaine kinasique.
Ces mutations sont observées dans les cancers:
* du colon (70 à 90% des cas)
* du pancréas (4 à 7% des cas)
* de l'estomac, le foie et certains cancers du sein.
Les cancers du colon ont une fréquence élevée en France. Chaque année on découvre environ 33000 cas et
16000 en meurent.  Chez la femme, c'est la second cause de mortalité, après le cancer du sein  et chez
l'homme la troisième cause après le cancer du poumon et de la prostate. 

Des mutations du récepteur de type II de l'AMH est responsable de la persistance des canaux de Müller

- mutations du récepteur de type I

Peu fréquentes. Observées dans certains cas de cancers pancréatiques (environ 4% des cas)

* SMAD

- mutations ou délétions de Smad4 (Co-Smad)

Nommées DPCA4 (deleted in Pancreatic Cancer 4)
Observées dans les cancers pancréatiques (50% des cas) et dans les cancers gastro-intestinaux, en proportion
plus faible.

- mutations de Smad7 
Dans certains cancers pancréatiques. Perte de la sensibilité au signal négatif de prolifération du TGF-β .
* CAS PARTICULIER DU GDNF (glial cell line-derived neurotrophic factor)

Il appartient à la superfamille du TGF-β et a la particularité de se lier à un récepteur a activité tyrosine

kinase, contrairement aux autres membres qui se lient à un récepteur à activité sérine-thréonine kinase. 
Le récepteur du GDNF est un proto-oncogène: c-Ret  (Rearranged during Transfection). 
Le ligand a la particularité de se lier d'abord a un co-récepteur et c'est ce complexe (par sa structure
tridimensionnelle) qui dans un second temps se lie à c-Ret.

Rôle:
il est impliqué dans de nombreux aspects de la vie des neurones  (prolifération, migration, libération de
transmetteur et excitabilité neuronale). Entre autres, on peut souligner son rôle dans  la différenciation et la
survie des neurones dopaminergiques du midbrain.

Son rôle est surtout illustré par dans des pathologies qui peuvent être dues à:

- la perte de fonction du ligand GDNF et/ou de c-Ret, due à des mutations (non sens, faux sens, délétions).
Cest la maladie de Hirschprung qui se traduit par un défaut de migration des neuroblastes le long du tube
digestif, d'ou absence de ganglions dans le tractus gastro-intestinal (environ1cas/5000 naissances).

- un gain de fonction de la protéine c-Ret (activation constitutive) due à des mutations ponctuelles. A
l'origine de  néoplasies endocriniennes multiples de type 2, de cancer médullaire de la thyroïde et de
phéochromocytome (cancer des cellules chromafines de la médullo-surrénale).