OVOGENESE

FOLLICULOGENESE

Catherine Poirot
Unité de préservation de la fertilité
CHI Poissy-St Germain, site de St Germain en Laye
Université Pierre et Marie Curie
Indissociables
OVOGENESE
Finalité de l’ovogenèse

Obtenir un gamète féminin de qualité

OVOCYTE II
ovocyte mature
OVOCYTE MATURE

Hautement spécialisée
Porteur de la moitié du patrimoine génétique
féminin
être capable de fusionner avec un SPZ,
décondenser son noyau, d’assurer le début du
développement embryonnaire
sa croissance et sa différenciation grâce aux
cellules folliculaires (jonctions perméables)
« Une cellule souche totipotente » :
reprogrammation nucléaire
Ovocyte mature

Cellule la plus rare de l’organisme

350 à 400

Devenir particulier (fécondation)

Grande quantité d’ARN

OVOGENESE

Phénomène discontinu
OVOGENESE

3 phases
Multiplication Ovogonies
Début méiose Ovocytes I

Croissance Ovocytes I
Maturation
Poursuite
méiose Ovocytes I ->Ovocytes II
1- Multiplication

Division des ovogonies par mitoses

Du 4ème au 7ème mois vie foetale
2N chromosomes

Ovogonies : synthèse d’ADN

Entrée en méiose : ovocyte I
Fin de la phase de multiplication

Début de la méiose réductionnelle

1er BLOCAGE EN FIN DE PROPHASE I

Constitution des follicules primordiaux

Croissance ovocytaire
Phase de croissance

Volume augmente : 3 à 4 fois sa taille initiale

Phase de croissance
35 à 40 µm de diamètre
≈ 120 µm
vésicule germinative double

Synthèses +++
Phase de croissance

Débute après la naissance

Très longue

Se termine au moment de la maturation finale

du follicule (ex : follicule tertiaire Ø 10 mm :
ovocyte : 80% de sa taille finale)
Croissance ovocytaire
Transcription intense
Accumulation d’ARN (x 300)
Synthèses spécifiques : ZP1, ZP2 et ZP3,
protéines du cycle cellulaire (compétence
méiotique)….
Modifications cytoplasmiques
mitochondries
golgi (activité)
granules corticaux
zone pellucide (glycoprotéines)
Acquisition des compétences ovocytaires

Compétence méiotique

Compétence au développement
Compétence méiotique
Compétence au développement
(fin : après la décharge ovulante)
Fin de la phase de croissance

Réorganisation de la chromatine
Périnucléolaire
Arrêt de la transcription

Relocalisation de certaines protéines

Maturation ovocytaire
étape finale d’une longue évolution

Maturation nucléaire (méiose « discontinue »)

Maturation cytoplasmique

Maturation membranaire
MEIOSE
MEIOSE
Discontinue

Toulouse
OVOCYTE EN PROPHASE I
Ovocyte en métaphase I
OVOCYTE EN METAPHASE 2
Inhibition folliculaire de la reprise de
la méiose
Extraovocytaire
In vitro : meilleure inhibition lors de coculture :
cellules de la thèque et CG
OMI (oocyte meiotic inhibitor)
Pas connu de façon précise

Intraovocytaire :
concentration élevée d’AMPc empêche la reprise
de la méiose
Phase finale : maturation ovocytaire

In vivo : décharge ovulante de LH

Rupture des jonctions perméables
Blocage transmission du signal OMI
Synthèse de stérols activateurs de méiose (MAS) par les
cellules du cumulus
libération de calcium intracellulaire
AMPc
diminution : reprise de la méiose
cascade phosphorylations/déphosphorylations
Maturation ovocytaire
(nucléaire)
Aspects morphologiques
Plissement de l’enveloppe nucléaire
disparition des pores nucléaires
rupture de la membrane nucléaire
EN PARALLELE
condensation des chromosomes
organisation du fuseau de division
EXPULSION DU PREMIER
GLOBULE POLAIRE
Aspects moléculaires

Reprise de la méiose : transition G2/M

Activité MPF (M-Phase Promoting Factor)

MPF Hétérodimère
p34cdc2 sérine/thréonine kinase : CDK1
p 45 : cycline B
 ACTIVATION DU MPF
*Cyclin B + p34cdc2 + phosphorylation en 161 (Thr) = pré MPF
*Déphosphorylation (Thr14 et Tyr15) = MPFactif

Régulation des déphosphorylations : wee 1 et cdc 25

Modes d’action du MPF : cibles
Diversité des cibles phosphorylées par le
MPF

MPF a des affinités pour

protéines comme les histones 1
certaines protéines associées aux
microfilaments
ARN polymérase
…...
Actions du MPF

GVBD
condensation des chromosomes
remodelages du cytosquelette : fuseau
méiotique
induction des modifications de la synthèse
protéique observées lors de la reprise de la
méiose
Pas d’interphase

Activité résiduelle du MPF

maintien de l’état de condensation des
chromosomes

Autres kinases (MAP kinases)

maintien de la phosphorylation des substrats du
MPF
INHIBITION DE L ’INTERPHASE
Niveau d’activité du MPF

Activité MPF

VG MI AI MII
TI
* *
Blocage en Métaphase II
CSF : facteur cytostatique
pas purifié à ce jour
mais produit du proto-oncogène c-mos
participe à l’activité du CSF
kinase bloquant la dégradation des cyclines
maintien d’un taux élevé de MPF
souris mos -/- : activation parthénogénétique
spontanée
Expansion du cumulus

Présence de cellules du cumulus est

importante
Expansion +++
Production par les cellules d’une matrice
viscoélastique (acide hyaluronique)
Production d’acide hyaluronique sous
dépendance FSH par les cellules du cumulus
Facteurs ovocytaires (produit du gène GDF 9)
 LH : rupture des jonctions perméables
Cascades
Phosphorylations-déphosphorylations

MPF inactif MPF actif

+
Reprise de la méiose VG MI
Pas d’interphase : MPF +
MAPK
+ +
CSF MPF M2

OVOCYTE MATURE
FOLLICULOGENESE

Succession des différentes étapes du

développement folliculaire de la sortie de la
réserve jusqu’à l’ovulation ou involution
Introduction

Production chaque mois : un ovocyte unique

Evolution en grande partie indépendante des
GT
Evolution la plus commune : ATRESIE
Rôles FSH et LH et rétrocontrôles
Système paracrine
Pathologies : mutations
Organisation de l’ovaire

Cortex

Médullaire
Réserve

Follicule primordial
> 95%
Follicule primaire

Follicule secondaire
Follicule préantral

Follicule tertiaire
Follicule tertiaire
Evolution du nombre de follicules
en fonction du temps
7 millions de cellules souches in utero
Naissance : 1 million de follicules
Puberté : 300 000 follicules
Ménopause : 1 000 follicules

400 ovulations

Apoptose (croissance folliculaire de base, recrutement,

sélection)
A Gougeon
APOPTOSE

Responsable de l’épuisement de la
réserve ovarienne.
Souris : gène Bax -/- multiplication par 3 du
nombre de follicules ; Bax : facteur
proapoptotique
Souris : gène Bcl2 -/- diminution le nombre de
follicules primordiaux ; Bcl2 : facteur
antiapoptotique
FOLLICULOGENESE

PHENOMENE CONTINU
Ovaire
activité propre et régulation locale
où
l’axe hypothalamo- hypophysaire
contrôle et module les étapes finales de la
croissance folliculaire et l ’ovulation
Différentes étapes de la
folliculogenèse
5 phases

Quiescence
[Initiation de la croissance folliculaire]
Croissance folliculaire de base

Recrutement
Sélection
Dominance
Initiation de la croissance
folliculaire
Primordial Primaire
Nombre sortant de la réserve par jour est
proportionnel à la réserve ( avec l’âge)
Femme ≈ 20 à 20 ans
Evolution lente des follicules primordiaux vers
le stade primaire
de la taille de l’ovocyte puis augmentation
du nombre des GC
Initiation de la croissance
folliculaire
Indépendante des gonadotrophines
Facteurs impliqués
KL : synthétisé par les GC, son récepteur C-kit
(au niveau de l’ovocyte)
Souris KL : plus de transformation des follicules
primordiaux
Administration Ac anti-C-kit : plus de sortie du
pool
KL dans milieu de culture : sortie du pool
Autres facteurs

LIF : en culture production de follicules primaires

anticorps anti-LIF : nombre de primaires

AMH, produite par les cellules de la granulosa des

follicules primaires et préantraux, inhibe l’initiation
de la croissance des primordiaux
5 phases

Quiescence
[Initiation de la croissance folliculaire]
Croissance folliculaire de base

Recrutement
Sélection
Dominance
Croissance folliculaire basale

Indépendante des gonadotrophines

Stade terminal de cette croissance dépend
de l’espèce
Souris : début d’antrum
Brebis : follicules à antrum jusqu’à un diamètre de
2 mm
Femme : stade follicule à antrum : diamètre de 2 à
5 mm
Croissance folliculaire basale

Facteurs impliqués (paracrine)

GDF9 : Growth Differenciation Factor 9
BMP 15 : Bone Morphogenetique Protein 15
sont nécessaires à la croissance des follicules primaires
et à la formation des follicules secondaires

Tous les 2 :
origine ovocytaire
détectables chez la plupart des espèces à
partir du stade primaire
5 phases

Quiescence
[Initiation de la croissance folliculaire]
Croissance folliculaire de base

Recrutement
Sélection
Dominance
Développement folliculaire
terminal
Phase dépendante des gonadotrophines
Follicule de 2 mm de diamètre chez la femme
jusqu’à l’ovulation
2 semaines
Activé dès la régression du corps jaune
3 événements : * recrutement
* sélection
* dominance
Régulation
Entre puberté et ménopause

GnRH Hypothalamus
(pulsatile)

LH FSH
(pulsatile) (pulsatile)

OVAIRE : fonction cyclique

Développement folliculaire
terminal

CARACTERISTIQUES

Multiplication très importante des cellules de

la granulosa

Phases du développement folliculaire

RECRUTEMENT
RECRUTEMENT

Les follicules gonado-dépendants présents

dans les ovaires entrent en croissance
terminale

COHORTE

Coïncide avec l’apparition d’une activité

aromatase dans la granulosa
Sélection
SELECTION

Coïncide avec l’apparition des récepteurs

à la LH sur les cellules de la granulosa

Forte production d’inhibine

DOMINANCE
Dominance
DOMINANCE
Grande taille
Follicule dominant : seuil de réponse à
FSH le plus bas

Pendant la dominance :
* croissance et maturation du
follicule préovulatoire
* régression par atrésie des
autres follicules de la cohorte
* blocage du recrutement de
nouveaux follicules
SELECTION et DOMINANCE
Mi-phase folliculaire Fin de phase folliculaire

Cohorte folliculaire est réduite au nombre

R d’ovulation caractéristiques de l’espèce
Régulation des mécanismes de la
folliculogenèse terminale
2 niveaux

Endocrine FSH - LH et les rétrocontrôles

(Stéroïdes et peptides)

Local : affine les messages endocrines

(paracrine et autocrine)
OVULATION

Expulsion de l’ovocyte hors du follicule

Phénomène rare
Réponse à une forte élévation des GT : LH
Cascades d’étapes biochimiques : inflammation
Follicule mature : quand concentration adéquate
de LHr
35 à 36 heures après décharge ovulante
Remaniements morphologiques

Thèque externe : oedémateuse

CG : arrêt des divisions cellulaires
Dissociation des cellules du cumulus
oophorus (sécrétion importante d’acide
hyaluronique pilotée par l ’ovocyte) sous
l’effet du pic de LH (GDF9 et BMP15)
Corona radiata
Pénétration des VX dans la granulosa
Cellules de l ’épithélium ovarien s’étirent et
s’aplatissent
Dissociation des cellules sous-jacentes, de
la granulosa, des thèques et de
l’albuginée.
Le liquide folliculaire s’échappe
Rupture folliculaire
Contraction du follicule
REMANIEMENTS VASCULAIRES
augmentation du flux sanguin
augmentation de la perméabilité vasculaire
CORPS JAUNE
Facteurs intervenant au moment
de l’ovulation
Stéroïdes :
E2 rétrocontrôle sur GT
Progestérone (récepteur P4)
Facteurs intervenant sur le système
vasculaire
NO (vasodilatateur puissant)
endothéline
Rénine-angiotensine….
Facteurs intervenant sur la perméabilité
des vaisseaux et l’angiogenèse
VEGF
histamine, bradykinine, prostaglandines……
Activités enzymatiques
plasmine
collagénase
métalloprotéinase : ADAM TS-1 (coupe la
matrice extracellualire)
cathepsine L….
Facteurs intervenant dans les réactions
inflammatoires
IL-1β
TNF α
Bradykinine
histamine…..
Ovulation et corps jaune
Applications cliniques

Stimulation de l ’ovulation
Fécondation in vitro
……
Croissance folliculaire in vitro

Maturation ovocytaire in vitro (MIV)

Croissance folliculaire in vitro
Croissance folliculaire in vitro

Connaissance de la folliculogenèse

Un des modes d’utilisation du cortex

ovarien congelé

……….
Croissance folliculaire in vitro

IMPERATIF

Du follicule primordial
au
follicule préovulatoire
 Résultats

Primordial I aire II aire Antrum MIV (M2)

Baker, 1974
Roy, 1993
Zhang, 1995 (fœtus)
Abir, 1997 (25%)
Hovatta, 1997
Wu, 1998
Wright, 1999 (25%)
Abir, 1999
Hovatta, 2000
Telfer, 2008 10 jours

Explant Isolé CCO

Telfer E, 2008 : 2 étapes
Culture in situ (6j) et isolement folliculaire (4j) + Activine : primordial
jusqu’à antral
Xu M, 2009 (Hum Reprod)

Résultats encourageants
 Chez l’humain :
PAS encore d’ovocytes matures