Biologie cellulaire 

/ bases moléculaires du développement du xénope

PASS (première année commune aux études de santé)
Définitions :
 Cellule totipotente : -Peut donner naissance à tous les types cellulaires de l’organisme.
-Indice mitotique élevé et cycles cellulaires très courts
-Génome inexprimé mais accessible à tous les mécanismes de contrôle auxquels il
répond rapidement
-Pas de caractères morphologiques spécialisés.
Ex : zygote

 Détermination : -Peut donner naissance à une gamme limitée de types cellulaires (champ
morphogénétique)
-Etat déterminé transmis au fil des divisions de mitose
-Limitation progressive de la capacité d’expression du génome (hétérochromatinisation)

 Champ morphogénétique : Groupe de cellules déterminées qui s’associent pour former un territoire qui
ne présente aucun caractère morphologique spécialisé mais dont le devenir est orienté de manière
irréversible
Ex : champ morphogénétique de l’œil

 Différenciation : -Présente des caractères morphologiques discernables

-Cycles cellulaires longs voire perte totale de la capacité de mitose
-S’établit au cours de la phase G1 du cycle cellulaire
-Notion de gènes codant des « protéines de luxe » tissus-spécifiques

 Compétence : capacité non passive à répondre à un signal inducteur, selon une concentration seuil.
L’acquisition de la compétence est progressive et transitoire. Les cellules doivent être en nombre suffisant
pour répondre à l’induction (effet communauté).

 Induction : détermination d’un groupe de cellules par une molécule (les mouvements morphogénétiques
de la gastrulation sont essentiels à l’induction)

/!\ La phase G1 est inexistante dans le cycle des cellules embryonnaires aux stades précoces du développement

Déterminants cytoplasmiques :
Déterminants maternels : présents dans l’œuf/ovocyte
Exemples :
 VegT et Vg1 et Dsh localisés dans le cortex végétatif de l’œuf
VegT = essentiel à la détermination de l’endoderme, code un facteur de transcription
Vg1 = rôle clé dans l’induction du mésoderme dorsal, est un facteur de croissance

 Ectodermine localisée dans l’hémisphère animal

Impliquée dans la spécification des cellules de l’ectoderme

Les coupes :
Méridienne : passe par le plan pôle animal – pôle végétatif et est perpendiculaire au plan équatorial
Equatoriale : passe au milieu de la cellule
Latitudinale : est parallèle au plan équatorial
Sagittale : plan céphalo-caudal, il passe par le plan de symétrie bilatéral de l’organisme étudié

Caractères généraux de l’œuf  (totipotent):

Le pôle animal est le pôle supérieur de l’œuf et correspond au lieu d’émission des globules polaires. Le
noyau du zygote/la vésicule germinative se situe dans l’hémisphère animal.
L’hémisphère est pigmenté.

/!\ Il existe néanmoins une tâche de maturation dépigmentée correspondant à

l’endroit où a été expulsé le 1er GP lors de la maturation et où sera
expulsé le 2e GP à la fécondation.

Le pôle végétatif est à l’opposé, son hémisphère correspond à l’endroit où se

trouvent les réserves nutritives (vitellus = phosvitine et lipovitelline).
L’hémisphère est dépigmenté et l’hyaloplasme y est relativement réduit. Forte concentration de protéine
Dsh (Dishevelled) associée aux vésicules.

Il existe 2 gradients opposés : vitellin vers le pôle végétatif, ribosomal vers le pôle animal.
Le cytoplasme cortical ne contient pas de plaquettes vitellines.
Impact du spermatozoïde  séparation de l’œuf des enveloppes  rotation d’orientation de 30°  croissant
dépigmenté à l’opposé du point d’impact et disparition de la tâche de maturation  plan de sym bilatérale

Traitement aux UV ou traitement à la colchicine  : bloque rotation de symétrisation corticale et organisation correcte
des microtubules  embryon ventralisé

Développement embryonnaire = 4 étapes : fécondation, segmentation, gastrulation, organogénèse

Segmentation de type holoblastique / totale

Définition
= Suite de divisions rapides et rapprochées durant lesquelles le génome s’exprime peu (peu d’activité
transcriptionnelle) et où le diamètre de l’œuf reste le même
=Les noyaux sont totipotents mais il y a perte de la totipotence des cellules à la fin de la segmentation (à cause de
la diffusion des dét cytoplasmiques et du fait que l’endoderme est totalement déterminé au stade 32 cellules)
L’œuf devient une morula puis se creuse d’un blastocœle excentré vers le pôle animal et devient une blastula.
Acquisition de la diversité :
Déterminant cytoplasmique réparti de manière hétérogène lors des divisions asymétriques

Règle de Balfour
Une cellule se multiplie d’autant plus vite qu’elle est moins chargée de vitellus

Segmentation inégale pour les œufs hétérolécithes à partir du 3 e cycle  embryon didermique
= différence marquée de taille entre les blastomères filles
Les micromères sont situés au pôle animal de l’œuf et ont des cycles cellulaires courts (phase synchrone puis
asynchrone après la transition blastuléenne)
Les macromères sont situés au pôle végétatif et ont des cycles cellulaires longs.

Plan de segmentation :
La segmentation est dite rotationnelle : le premier plan de segmentation est méridien et a lieu 90min après la
fécondation, il passe par le croissant dépigmenté (il le coupe en deux parfaitement), puis au cours du 2 e cycle de
division, les plans de segmentation des deux blastomères sont l’un méridien, l’autre latitudinal
Stade 8 cellules : blastocèle dans le pôle animal = cavité dont les cellules du toît ont une activité de synthèse ++ de la
MEC
Stade 16 cellules : Morula
La blastula est caractérisée par la présence des cellules progénitrices des 3 feuillets (calotte animale, zone marginale,
macromères végétatifs).
Stade 32 cellules à 128 cellules : Zone marginale acquiert capacité de se différencier en mésoderme (avant ça, elle se
différencie en ectoderme)

Expérience de recombinaison de blastomères au stade 32 cellules  :

Association calotte animale et blastomère végétatif dorsal --> cellules ectodermiques et mésodermiques dorsales
(muscle et chorde)
Association calotte animale et blastomère végétatif ventral --> mésenchyme et cellules sanguines
Observation : Les formations mésodermiques dérivent des cellules de la calotte animale, non des m. végétatifs
 Conclusion : Induction du mésoderme par l’endoderme dès le stade 32 cellules, grâce au centre de Nieuwkoop

Expérience de Spemann
Un blastomère qui a subi une segmentation perpendiculaire au plan de symétrie bilatérale et qui n’a pas de croissant
dépigmenté ne donnera pas un embryon fini (pas de formation dorsale, mésodermique ou nerveuse)
D’autres expériences : si on ligature une jeune gastrula suivant le plan bilatéral, les deux embryons seront complets.
A l’inverse, au stade gastrula âgé, la régulation ne se fait plus.

Expérience de Mangold
Après avoir associé deux embryons au stade 2 blastomères, si les croissants dépigmentés ne sont pas en continuité,
ils programmeront chacun la formation d’une lèvre du blastopore d’un côté de l’embryon, et donc aboutira à deux
embryons avec un ventre en commun.

Centre de Nieuwkoop (centre inducteur du mésoderme dorsal)

Centre de Nieuwkoop (région dorso-végétative de l’embryon en D1 au stade 32 cellules uniquement) : produit un
gradient de concentrations pour plusieurs membres de la famille des TGF beta  mise en place des régions
dorsales, latérales et ventrales de la zone marginale de l’embryon

Remarque : transplanter D1 sur un embryon traité aux UV restaure la rotation corticale et l’axe dorso-ventral =
embryon harmonieux

Transition blastuléenne (stade 11 avant la formation de la morula – entre le stade 16 et 64 cells):

Deux phases : synchrone (cycles rapides, pas de G1 et G2) et asynchrone (allongement des cycles)
Le génome embryonnaire s’exprime de manière importante : on retire les répresseurs de la transcription
 Contrôle du cycle cellulaire
Cdk1 et cycline B = MPF = déclenchement de la phase M
Après la transition blastuléenne, le MPF provoque sa propre phosphorylation/destruction en fin de mitose 
déclenchement interphase

Gastrulation (7 heures)
= Mise en place dans l’embryon des feuillets fondamentaux (ectoderme externe, mésoderme, endoderme interne)
L’activité mitotique des blastomères se ralentit et les cycles cellulaires s’allongent
 Perte progressive de la totipotence (plus du tout au stade de neurulation) même si Gurdon démontre que les
cellules différenciées ont toujours une capacité de totipotence mais faible (1,5%). Il place des noyaux de
cellules différenciées dans des embryons en segmentation, les forçant à décondenser leur chromatine.

Point feuillets :
Endoderme déterminé tôt (stade 32 cellules)  Mésoderme  Ectoderme (induit par mésoderme dorsal)
 = induit

L’ectoblaste correspond à la calotte animale (micromères pigmentés) au-dessus de la limite d’invagination

Les blastomères végétatifs deviennent quant à elles de l’endoderme  épithélium digestif
Le mésoblaste se forme dans la zone marginale entre l’ectoblaste et l’endoblaste

L’endoderme est déterminé précocement tandis que le mésoderme est encore capable de régulation.

Les mouvements de la gastrulation :

Il existe différents modes de gastrulation : invagination, épibolie, élongation, extension/convergence et divergence
1) Invagination : hémisphère végétatif s’enfonce dans le blastocèle et l’orifice d’invagination = blastopore 
feuillet externe = ectoderme et feuillet interne = endoderme qui limite l’archentéron
Explications :
Début de la gastrulation = apparition de l’encoche blastoporale dans la région sous-équatoriale (entre croissant et
pôle végétatif sur le méridien dorsal)
Encoche blastoporale = invagination de blastomères végétatifs = cellules en bouteille

La formation de cellules en bouteille, évènement initial de la gastrulation, est contrôlée par des molécules
inductrices du mésoderme comme Vg1, l’activine ou Nodal.

Encoche blastoporale devient sillon incurvé horizontal = lèvre du blastopore qui se referme en un cercle entourant le
bouchon vitellin (macromères végétatifs pas encore invaginés) qui va lui-même se fermer
 Stade Anse de Panier : le mésoblaste somitique s’invagine aux lèvres latérales
Le premier élément à s’invaginer est le territoire au niveau de la limite dorsale supérieure de l’endoblaste, qui
donnera le pharynx.
Les mouvements les plus actifs sont dorsaux et les mouvements les plus réduits sont latéro-ventraux.

1) Epibolie/recouvrement : les micromères du pôle animal se multiplient et enveloppent les macromères du

pôle végétatif. Le volume de l’œuf n’est pas modifié.
Explications :
Toit du blastocoele = épithélium tristratifié. Les deux couches profondes vont subir un phénomène
d’intercalation radiaire entre les cellules sus-jacentes. A la fin les deux couches ne deviennent qu’une seule
couche profonde, ce qui provoque une augmentation de la surface, et un rapatriement de la couche superficielle
vers la zone marginale = épibolie de l’ectoblaste à 2 couches finales.

2) Extension/convergence : Mouvement qui conduit le mésoderme de la zone marginale (mésoderme chordal

et somitique) à converger vers le blastopore puis à s’invaginer
Explications :
Ce mouvement correspond à un phénomène d’intercalation médio-latérale (des côtés vers le milieu) contribuant
à un allongement antéro-postérieur (en longueur). Les protéines Wnt participent à ses mouvements (voie non
canonique de polarité planaire)

Wnt 11  récepteur Frizzled et co-récepteur LRP6  Dsh  GTP-ase  Cascade JNK cytosquelette

3) Mouvement de tapis roulant : S’involuent tour à tour l’endoblaste pharyngien, le mésoblaste préchordal, la
chorde et le mésoblaste caudal (future queue).

Carte des territoires présomptifs au stade jeune gastrula de l’amphibien

Centre de Spemann au stade lèvre dorsal du blastopore (jeune gastrula)
 Induit par le centre de Nieuwkoop
 Rôle clef dans l’induction neurogène et dans la régionalisation du feuillet mésodermique
 Met en place les 3 axes : antéro-postérieur, dorso-ventral, gauche-droit
Expérience de Spemann et Mangold :
Lèvre dorsale transplantée sur mésoderme ventral d’un embryon : deux plaques neurales puis deux embryons reliés
par leur ventre
Conclusions : lèvre dorsale = territoire déterminé au stade jeune gastrula (champ morphogénétique du
chordomésoderme) qui fait une induction neurogène sur le feuillet ectoblastique par contact
Conclusions 2 : lèvre dorsale greffée = fait une induction mésoblastogène d’ordre supérieur sur les lames latérales
qui se dorsalisent au lieu de former une partie de la chorde, les somites et les pièces intermédiaires

Centre de Spemann = lèvre dorsale = région du croissant dépigmenté = au dessus du centre de Nieuwkoop
Il est composé d’une population de cellules différentes : celles à l’origine de l’endoderme pharyngien, mésoderme
préchordal, mésoderme chordal
Marqueur du centre de spemann : goosecoïd

Glycoprotéines intervenant dans la migration cellulaire

 Mise en place des lamellipode/filopode permettant le déplacement cellulaire

 Fibronectine
-Deux sous-unités identiques reliées entre elles par 2 ponts disulfures en C-ter
-Domaine de liaison au collagène, fibrine, héparine
-Domaine tripeptide Arg-Gly-Asp (RGD) = domaine de liaison à la cellule par l’intermédiaire des intégrines
-Sécrétée par les micromères de la région animale en contact avec la blastocèle
-Permettent la migration des cellules mésodermiques jusqu’au toit de la blastocèle
  Laminine
-Trois chaines polypeptidiques distinctes
-Structure cruciforme stabilisée par des ponts disulfures
-Domaine de liaison au collagène ou à la cellule grâce aux intégrines

 Intégrines
-Héterodimère avec sous-unité alpha et sous-unité beta
-Côté cytoplasme, l’intégrine s’associe avec l’actine par l’intermédiaire de beta et de taline, vinculine, alpha actinine

Fin de la gastrulation : allongement de l’embryon (axe antéro-postérieur) et aplatissement en région dorsale

Méthodes d’étude de l’embryo moléculaire

In vitro : inducteur potentiel du mésoderme (« marqueur du mésoderme ») doit induire l’expression de gènes
spécifiques du mésoderme selon un effet-dose
In vivo : injection d’ARNm codant un inducteur du mésoderme dorsal au stade 32 cellules doit induire des structures
mésodermiques dorsales ou un axe surnuméraire
Ex : XWnt-8 induit un axe embryonnaire surnuméraire lorsqu’injectée au niveau végétatif au stade 32 cellules mais
est exprimée lors de la gastrulation in vivo
On utilise souvent des stratégies de perte de fonction pour vérifier l’effet inducteur de ces molécules : on utilise des
oligomormorpholinos plus stables que les ARN anti-sens
ARN anti-sens : détruisent l’ARNm cible
Oligo : empêche la traduction de l’ARNm par encombrement stérique

Chlorure de lithium : inhibiteur de GSK3 = dorsalisant

Organogénèse
Première étape : mise en place du système nerveux = neurulation

Neurulation= tube neural et régionalisation du mésoderme

/ !\ Pas de contact spemann et épiderme = pas de neurulation (expérience de la solution saline provoquant
exogastru)
Le chordomésoderme induit l’ectoderme postérieures lors de sa migration sur le toît de la blastocèle
Mésoderme préchordal (s’invaginant avant) induit structures antérieures

Deux types de signaux nécessaires à la neurulation  :

- Verticaux (centre organisateur du tronc = spemann durant son invagination / centre organisateur tête =
cerberus, dkk1, frzb)
 - Horizontaux / induction planaire (spemann dans le plan de l’ectoderme avec FGF et Wnt3A)

Autres moyens de neuruler :

Dissocier les cellules de la calotte animale au stade blastula en l’absence de calcium et magnésium crée des tissus
nerveux
Conclusions : existence d’un signal inhibiteur du tissu nerveux BMP4 en faveur de l’épiderme (état neural = état par
défaut)
Nécessité d’inhiber ce signal inhibiteur (noggin, chordin, follistatin, Xnr3)

Création de la tête : nécessité de neutraliser les voies Wnt, BMP et Nodal

Cerberus, Dickkopf Dkk1 et Frzb : inducteur de la tête (endoderme pharyngien et mésoderme préchordal soit les
premiers territoires à s’invaginer dans la lèvre du blastopore)
IGF exprimés par l’endoderme dorsal, chorde, région antérieure de la plaque neurale
 Inducteur de la tête en phosphorylant Smad 1, bloquant sa translocation dans le noyau et inhibant la voie
BMP4

Neurectoderme devient plaque neurale, limitée par le bourrelet neural, qui s’étend et s’élargit en région
antérieure céphalique en raquette
Plaque neurale devient gouttière neurale en soudant ses bords latéraux d’abord dans la région du tronc puis dans
la région caudale et enfin plus tardivement dans la région céphalique  tube neural
Le neuropore postérieur se ferme avant le neuropore antérieur.
La partie caudale du tube nerveux communique avec la partie caudale de l’archentéron par le canal neurentérique
 Crêtes neurales deviennent ganglions nerveux/rachidiens
Partie céphalique = futur encéphale et partie caudale = moelle épinière

Mésoderme chordal devient la chorde et le mésoderme somitique/para-axial se métamérise en paire creuse

Mésoderme latéral forme deux lames qui se rejoignent ventralement entre l’ectoderme et
l’endoderme, et qui se creusent d’une cavité appelée cœlome : ces lames ne se
métamérisent pas
Feuillet interne en contact avec endoderme = splanchnopleure et feuillet externe en
contact avec épiderme = somatopleure
Entre les somites et les lames latérales il y a les pièces intermédiaires qui se
métamérisent et donnent le pronéphros puis le mésonéphros en contact avec le
cœlome embryonnaire et qui donnera l’appareil uro-génital

L’archentéron en forme de croissant se referme sous le chordomésoderme ce qui forme la cavité digestive (tube
digestif).
L’endoderme est au contact direct de l’épiderme dans la région de la future bouche et du futur anus.
Au terme de la neurulation, l’embryon totalement recouvert d’épiderme est appelé « bourgeon caudal » en
référence à la masse de mésoderme caudal qui donnera la queue, dans la région postérieure de l’embryon.

Gènes/protéines et leurs fonctions :

 VegT, Vg1 et Wnt11 localisés dans le cortex végétatif de l’œuf (facteurs maternels)
VegT = essentiel à la détermination de l’endoderme = facteur de transcription

 Ectodermine localisée dans l’hémisphère animal

Impliquée dans la spécification des cellules de l’ectoderme

 BMP4 = inducteur de l’épiderme

 noggin et chordin antagonistes des BMP = produits par le centre de Spemann et induit un gradient de BMP4
ventro-dorsal

 SHH = notochorde

 Impliqués dans la formation de la chorde : -HNF3 beta

-Xnot

 Impliqués dans la mise en place de l’endoderme : -Sox

VegT

 Impliqués dans la mise en place du mésoderme : -

- siamois (express zygotique)
-Xbra (marqueur pan-mésodermique de tt la zone marg
puis se restreint à la chorde après gastrulation)
-famille des TGFb (activines, BMP, Xnr Nodal, Vg1)
 du mésoderme dorsal : -Vg1 (facteur de croissance responsable aussi des
cellules bouteilles)
-B-caténine (transloquée au stade 16 cells)
-goosecoïd (marqueur de Spemann)

du mésoderme ventral : BMP4

Wnt8 (réprimé par goosecoïd, cerberus, dickkopf
Et frizbee, d’origine zygotique)
Facteurs de croissance :
-FGF

Impliqué dans le phénomène d’extension-convergence du mésoderme dorsal : -Protéine Wnt (voie non
canonique)
 Wnt11 = stade 32 cellules (nieuwkoop)

 Impliqué dans l’induction de la tête : cerberus (antagoniste de Nodal), Dickkopf et Frzb, IGF
 Impliqué dans l’induction neurale : Xnr3, chordin, follistatin, noggin, FGF (tronc)

Point FGF : récepteurs tyrosine kinase

Origine Voie de signalisation Localisation Effets Contrôle

Maternelle FGF  Protéine Macromères Tous types de Expression de Xbra
RAS membranaire végétatifs mésodermes sauf (tout le
 Protéine Raf mésoderme dorsal mésoderme)
cytoplasmique 
cascade de Inducteur de la
phospho  plaque neurale sur
activation de ERK l’ectoderme en
transloquée dans amplifiant l’effet de
le noyau  Wnt3A
contrôle du cycle
cellulaire de la
transition G1/S

Point famille des TGFb

Origine Récepteurs Voie Effet
Exprimé par centre de I et II : à activité Phosphorylation et Induction du mésoderme
Spemann (sauf BMP) sous sérine/thréonine kinase activation des protéines selon un effet-dose in
forme inactive Smad 1, 2, 3, 5 ou 8 vitro
formant un complexe
avec Smad 4 pour être Ventral et exprimant Xbra
transloquées (mésenchyme, sang):
faible dose
Nodal, Vg1, activine 
Smad 2/3 Dorsal exprimant
goosecoïd (chorde,
BMP  Smad 1 muscle): forte dose
Premier TGF beta : l’activine

Origine Types d’activine Effet Contrôle

Zygotique A et B Mésoderme dorsal (mais Goosecoid
pas suffisante à son
induction contrairement à
Nodal)

Deuxième TGF beta : protéine Vg1

Origine Co-facteur Effet Active
Maternelle : exprimé par EGF-CFC Mésoderme dorsal : Avec Xnr, active Cerberus
blastomères végétatifs participe à la mise en dans l’endoderme
place de Nieuwkoop pharyngien

Troisième TGF beta : Protéines Nodal (Xnr)

Origines Activé par Co-facteur Antagoniste Effets Exceptions

Endodermique VegT végétatif à EGC-CFC Cerberus Mésoderme Xnr3 : impliqué
(centre de partir de la TB dorsal dans
Nieuwkoop) et neurulation (pas
zygotique d’act indu du
mésoderme)

Quatrième TGF beta : Protéine BMP

Organogénèse 4 protéines Effets Voie de la neurulation
Formation de cartilage et BMP2, BMP4, BMP7 et Mésoderme ventral et Organisateur de
os ADMP (anti-dorsalizing latéral + épiderme Spemann : prod des
morphoprotein)  Facteur ventralisant facteurs noggin, chordin
antagonistes de BMP4

Point B-caténine
Origines Indice Effets Nature Voie canonique Frizzled
temporel
Maternelle et Transloquée Mésoderme Co-activateur de Wnt 11  7 domaines
centre de au stade 16 dorsal la transcription Récepteur transmembranaires
Nieuwkoop blastomères fonctionnant Frizzled + LRP6 + 1 domaine
avec TCF3  Dsh  extracellulaire
inhibition de amino-terminal
 GSK3 impliquée riche en cystéines
ds dégradation appelé CRD
de la B-cat  nécessaire à la
complexe Axine- liaison à Wnt
APC-GSK3
débarassé  B-
cat <3 TCF3

Groucho (co-répresseur) est lié à TCF3 avant la transition blastuléenne

Siamois est transcrit après la transition B

Inhibiteurs de la voie Wnt :

Frizbee = récepteur qui peut aussi se lier à Wnt (compétition) et inhibe la voie Wnt non-canonique (=> dorsalisation)
Dkk1 = internalise co-récepteur LRP6 après complexation avec Kernen
Cerberus
Gènes suffisants ou non à la dorsalisation de l’embryon

Noggin
Inducteur de structures musculaires (dérivés dorsaux)
Mise en place du neurectoderme

Chordin
Formation du mésoderme paraxial somitique
Mise en place du neurectoderme
Surexprimé grâce à goosecoïd

Follistatin
Formation de tissu nerveux
Théorie des 3 signaux : centre organisateur ventral du mésoderme
L’endoderme émet deux types de signaux inducteurs du mésoderme pendant la segmentation :
-Signal ventral engendrant mésoderme ventral
-Signal dorsal (en partance du centre de Nieuwkoop pour induire le centre de Spemann)
Par la suite, le centre de Spemann provoquera la régionalisation du mésoderme