CS1TP3 - Dosage spectrophotométrique du bleu de méthylène dans

un collyre

Objectifs
- Réaliser un dosage par étalonnage.
- Exploiter une courbe d'étalonnage.

1 Principe du dosage
Le collyre bleu Laiter contient de l’hydroxyde de méthylthioninium. Le bleu de méthylène est le chlorure de
méthylthioninium. Les spectres d’absorption des solutions de collyre bleu Laiter et de bleu de méthylène sont
identiques.
La manipulation consiste à :
- tracer le spectre d'absorption du bleu de méthylène afin de déterminer la longueur d'onde de travail ;
- tracer la courbe d’étalonnage donnant l'absorbance A en fonction de la concentration massique c en bleu de
méthylène ;
- mesurer l’absorbance de la solution de collyre et déduire de la courbe d’étalonnage la concentration massique
correspondante ;
- cette concentration massique équivalant à celle d’un collyre qui contiendrait du bleu de méthylène, déterminer
la concentration massique en hydroxyde de méthylthioninium.

Formules topologiques du bleu de méthylène et de l’hydroxyde et méthylthioninium :

N N

,Cl- , HO
N S N N S N

bleu de méthylène : chlorure de méthylthioninium hydroxyde de méthylthioninium

2 Préparation de l'échelle de teinte

À partir d'une solution mère de bleu de méthylène de concentration massique c0 = 5,00 mg.L-1, réaliser une
échelle de teintes constituée par 10,0 mL de chacune des solutions filles suivantes. Compléter le tableau.

Solution n° 1 2 3 4 5 6
Concentration
massique 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0
(mg.L-1 )
Volume V0 de
solution mère

Réaliser les dilutions dans des tubes à essais à l’aide de burettes pour prélever les volumes d’eau et de solution
mère.

3 Tracer du spectre d'absorption du bleu de méthylène

Il est indispensable de faire une mise en milieu chaque fois que la cuve spectrophotométrique
est remplie par une solution. Le remplissage d'une cuve est réalisé hors spectrophotomètre.
- Lancer le logiciel « spectrophotomètre ».
- Sélectionner l'onglet latéral « spectre ».
3.1 Mesure de l'absorbance du solvant (eau distillée )
Cette opération revient à faire « le blanc » ou « le zéro ».
- Introduire dans la cellule de l'eau distillée et positionner là dans le trou prévu à cet effet dans le
spectrophotomètre en respectant le sens indiqué par les flèches.
- Appuyer sur le bouton « mesure ».
3.2 Tracer du spectre d'absorption du bleu de méthylène
- Sélectionner la case « absorbance » et décocher la case « transmitance ».
- Remplir maintenant la cuve avec la solution mère de bleu de méthylène.
- Appuyer sur le bouton « mesure » de « solution ».
L'appareil trace alors le spectre de l'absorbance de la solution en fonction de la longueur d'onde λ.
Choisir à partir de la courbe, la valeur de la longueur d'onde la plus adaptée aux mesures
spectrophotométriques.

4 Tracer de la courbe d’étalonnage et mesure de l'absorbance de la solution de collyre

- Sélectionner l'onglet « Acquisition manuelle ».
- Entrer la valeur de λmax au niveau du « choix de longueur d'onde ».
- Compléter la « grandeur mesurée en abscisse ».
- Refaire un blanc en remplissant la cuve d'eau distillée.
- Faire les « acquisitions manuelles » des différentes solutions filles, en commençant par les moins diluées.
Pour cela, entrer dans le cadre « valeur en X » la concentration de la solution fille et appuyer sur « validation ».
L'absorbance de la solution est alors portée sur la courbe en fonction de la concentration.
Une fois l'absorbance de toutes les solutions filles mesurée, il faut tracer la courbe à partir des points obtenus.
- Sélectionner « modélisation » dans l'onglet « affichage » du menu.
- Si nécessaire, sélectionner la « grandeur à modéliser ».
- Choisir dans les « modèles prédéfinis » la droite.
- Cocher les cases correspondant à « a » et « b » et cliquer sur modéliser.
La courbe A=f(c) est tracée.

5 Mesure de l’absorbance de la solution de collyre

- Revenir dans la partie « acquisition manuelle en cliquant sur l'icone « spectrophotométrie » aux couleurs de
l'arc en ciel.
- Mettre la solution de collyre dans la cuve et appuyer sur le bouton « mesure » de la partie « solution
inconnue ».
Relever la valeur de l'absorbance.

6 Détermination de la concentration massique supposée en « bleu de méthylène » du collyre

- Revenir sur la courbe d'étalonnage.
- Par un clic droit sur celle-ci, sélectionner le « pointeur » et relever la concentration massique cd correspondant
à l'absorbance de la solution inconnue.
Sachant qu'il a été dilué 100 fois, quelle serait la concentration massique cc d’un collyre qui contiendrait du bleu
de méthylène ?

7 Détermination de la concentration massique en hydroxyde de méthylthioninium du collyre

Le bleu de méthylène utilisé pour réaliser la solution mère a pour masse molaire moléculaire 373,90 g.mol-1.
Sachant que la masse molaire moléculaire de l’hydroxyde de méthylthioninium est 301,35 g.mol -1, en déduire
la concentration massique en hydroxyde de méthylthioninium du collyre étudié.
Comparer à l’indication portée sur l’emballage.