Optimisation D'extraction Des Alcaloïdes Tropaniques À Partir Des Feuilles de Datura Stramonium Assistée Par Champ Électrique Pulsé Et Ultrasons

‫الجــمــهوريـــة الجـــزائـــريـــة الــديــمـــقـــراطيــــة الشعــــبيــــــة‬
République Algérienne Démocratique et Populaire

‫وزارة التعليم العالي و البحث العلمي‬
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
‫المدرسة العليا في علوم الغذاء والصناعات الغذائية‬

École Supérieure des Sciences de l’Aliment et des Industries
Agroalimentaires (ESSAIA)
N° d’ordre :…………
N° de série :…………
Mémoire de Fin d’Études

Présenté en vue de l’obtention du diplôme d’Ingénieur d’État en
Spécialité : Sciences de l’Aliment et des Industries Agroalimentaires
Option : Science et Technologie des Aliments Fonctionnels (STAF)
Thème
Optimisation d’extraction des alcaloïdes tropaniques à partir des
feuilles de Datura stramonium assistée par champ électrique pulsé
et ultrasons
Travail réalisé par : Mlle. CHEBOUT Afaf
et Mlle. DERDER Anissa
Soutenu le : 15 / 09 / 2021
Devant le Jury composé de :

Président : DAHMANI.K M.A.A ESSAIA, Alger
Examinateur : AISSIOU.M.Y.E M.C.B ESSAIA, Alger
Promoteur : BELALOUI.D M.A.A ESSAIA, Alger
Co-promoteur : AMIALI.M Professeur ENSA, Alger
Co-promoteur : AZZOUZ.L M.C.B ESSAIA, Alger
Promotion : 2016/2021
_______________________________________________________________ Remerciement
Remerciement
Tout d’abord, nous remercions Dieu le tout Puissant de nous avoir donné la santé, le
courage, la patience, la volonté, et la force pour arriver à ce stade et à réaliser ce modeste
travail malgré tous les conditions difficiles que nous avons été passé, surtout durant cette
situation sanitaires très sensible.
Nous adressons nos remerciements les plus distingués à notre encadreur Madame
BELALOUI Djahida, maitre assistance de classe A à l’Ecole Supérieure des Sciences de
l’Aliment et des Industries Agroalimentaires (ESSAIA), pour sa confiance, sa coopération,
ses encouragements et surtout ses précieux conseils et sa compétence pour assurer le succès
de ce travail. Nos profondes gratitudes.
Nous exprimons nos profonds remerciements et respects aux membres de jury qui vont
commenter, discuter et juger le présent travail :
À notre présidente de mémoire Madame DAHMANI Khira, maitre assistance de
classe A à l’Ecole Supérieure des Sciences de l’Aliment et des Industries Agroalimentaires
(ESSAIA), qui nous ont fait l’honneur d’accepter de présider notre jury. Et à notre
examinateur MonsieurAISSIOU Mohammed Yehya El-amine, maitre de conférences de
classe B à l’Ecole Supérieure des Sciences de l’Aliment et des Industries Agroalimentaires
(ESSAIA), pour nous avoir accepté d’examiner ce travail.
Nous tenons à remercier notre co-encadreur Monsieur AMIALI Malek, professeur et

directeur du laboratoire de recherche des technologies alimentaire et de nutrition humaine à
l’Ecole Supérieure en Sciences Agronomiques (ENSA), pour nous avoir accueillis au sein de
son laboratoire, et de nous avoir permis à réaliser une partie de ce travail de thèse dedans.
Nos remerciements sont s’adressés également à notre co-encadreur Madame

AZZOUZ Latifa, maitre de conférences de classe B à l’Ecole Supérieure des Sciences de
l’Aliment et des Industries Agroalimentaires (ESSAIA), pour ses encouragements et son aide
à réaliser ce travail.
ii
_______________________________________________________________ Remerciement
Nos pensées vont également à toutes les ingénieures des laboratoires de l’ESSAIA
ainsi que la responsable des laboratoires Madame OUNAR, pour leur gentillesse et leur aide
si précieuse tant sur le plan pratique que moral.
Sans oublier Madame DEKHIR Hayate, ingénieur de laboratoire de recherche des

technologies alimentaire et de nutrition humaine à l’ENSA, pour sa disponibilité, sa patience
et ses conseils, nous l’adressons notre profonde gratitude.
Nous adressons nos remerciements les plus distingués à toute personne ayant
contribué de près ou de loin dans la réalisation de ce modeste travail.
iii
___________________________________________________________________ Dédicace
Dédicace
Avec toutes mes gratitudes, je dédie ce modeste travail à :
Les plus chers, mes parents, que nulle dédicace ne puisse
exprimer mes sincères sentiments, pour leur confiance,
encouragement, patience illimitée, et pour leurs sacrifices
durant toute ma vie pour me permettre de suivre mes
études dans les meilleures conditions possibles.
Mes sœurs et mon petit frère, qui m’ont accompagné, motivé,
et soutenu sans cesse.
A ma formidable amie et binôme Anissa, qui avec elle j’ai
partagé tous les bons et les mauvaise moments durant la
réalisation de ce travail, pour son esprit motivant, sa
patience et son soutien.
Toute ma famille, proches, mes enseignants, mes amies et
mes collègues de promotion.
À tous ceux qui me sont chers, et tous ceux qui ont souhaité
me voir arriver à ce stade.
Afaf
iv
___________________________________________________________________ Dédicace
Dédicace
Je dédie ce modeste travail et ma profonde gratitude
A ceux qui me sont chers au monde :
A mes chers parents, pour tous leurs sacrifices, leur amour,
leur tendresse, leur soutien et leurs prières tout au long de
mes études.
À mes chères sœurs, pour leurs encouragements dans les
moments difficiles ; merci pour votre amour.
À mon cher petit frère, je lui souhaite tout le succès pour
arriver à ce jour.
À mon adorable binôme Afaf, qui avec elle j’ai partagé tous
les bons et les mauvaise moments durant la réalisation de ce
travail, pour son esprit motivant, sa patience et son soutien.
À mes enseignants, mes amies et mes collègues de promotion
2016-2021.
 Anissa 
v
______________________________________________________ Table des matières
Table des matières
Remerciement ................................................................................................................ii
Dédicace ........................................................................................................................ iv
Table des matières......................................................................................................... vi
Liste des tableaux .......................................................................................................... ix
Liste des figures ............................................................................................................. x
Liste des abréviations ................................................................................................. xiii
Liste des Annexes ........................................................................................................ xv
Résumé........................................................................................................................ xvi
Introduction .................................................................................................................... 1
PARTIE I: Synthèse bibliographique
CHAPITRE I : Datura stramonium L
1. Présentation de la plante ......................................................................................... 3
2. Classification systématique ................................................................................. 4
3. Origine et répartition .............................................................................................. 4
4. Datura stramonium en Algérie ............................................................................... 6
5. Usage de Datura stramonium L.............................................................................. 6
CHAPITRE II: Molécules bioactives
1. Les molécules bioactives de la Datura stramonium L ........................................... 7
1.1. Les alcaloïdes .................................................................................................. 7
1.2. Les alcaloïdes tropaniques .............................................................................. 7
1.2.1. Atropine (D, L-hyoscyamine) .................................................................. 8
1.2.2. Hyoscyamine............................................................................................ 9
1.2.3. Scopolamine (L- hyoscine) ...................................................................... 9
1.3. Stade et taux de sécrétion des alcaloïdes par le Datura stramonium L ....... 9
vi
CHAPITRE III: Les techniques d’extraction des alcaloïdes
1. Généralités ............................................................................................................ 11
1.1. Les méthodes conventionnelles ..................................................................... 11
1.1.1. Extraction par solvants ........................................................................... 12
1.1.2. Inconvénients des méthodes conventionnelles ...................................... 13
1.2. Les méthodes non conventionnelles .............................................................. 13
1.2.1 Extraction assistée par ultrasons (EAU) ................................................ 14
1.2.2. Extraction assistée par champ électrique pulsé (EA-CEP) .................... 19
CHAPITRE IV: Optimisation de l’extraction
1. Optimisation de l’extraction ................................................................................. 27
2. Plan expérimental ................................................................................................. 27
CHAPITRE V: Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques
1. Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques ................................................ 30
1.1. Dosage des alcaloïdes tropaniques par la chromatographie phase liquide à

haute performance (HPLC) ...................................................................................... 31
PARTIE II: Matériel et méthodes
1. Objectif du travail expérimental ........................................................................... 32
2. Matériel végétal .................................................................................................... 32
3. Méthodes analytiques ........................................................................................... 33
3.1. Détermination de la teneur en eau ................................................................. 33
3.2. Extraction des alcaloïdes totaux .................................................................... 33
3.2.1. Optimisation de l’extraction assistée par l’ultrason (EAU) ................... 34
3.2.2. Optimisation de l’extraction assistée par champ électrique pulsé (EA-

CEP) 36
3.2.3. La suite de l’extraction par la méthode conventionnelle solide -liquide

en milieu acide puis en milieu alcalin .................................................................. 40
4. Dosage et identification de l’atropine et de scopolamine par la chromatographie à

phase liquide de haute performance (HPLC) ............................................................... 45
vii
4.1. Préparation des solutions des standards ........................................................ 46
4.2. Préparation des échantillons .......................................................................... 46
5. Analyses statistiques ............................................................................................ 47
PARTIE III: Résultats et discussions
1. Optimisation de l’extraction assistée par ultrason ................................................ 49
1.1. Les facteurs et domaines étudiés ................................................................... 49
1.2. Rendements expérimentaux de l’extraction des alcaloïdes totaux selon un

plan factoriel complet ............................................................................................... 49
1.3. Analyse de la variance et ajustement du modèle........................................... 51
1.4. Les surfaces de réponse pour les interactions entre les facteurs ................... 53
1.5. Discussion des résultats de l’US ................................................................... 56
2. Optimisation de l’extraction assistée par champ électrique pulsé ........................ 56
2.1. Les facteurs et domaines étudiés ................................................................... 56

plan Box-Behneken .................................................................................................. 57
2.3. Analyse de la variance et ajustement du modèle........................................... 59
2.4. Les surfaces de réponse pour les interactions entre les facteurs CEP ........... 61
2.5. Discussion des résultats de CEP ................................................................... 66
3. Dosage des alcaloïdes tropaniques par HPLC ...................................................... 67
Conclusion ................................................................................................................... 68
Références bibliographiques ........................................................................................ 70
Annexes........................................................................................................................ 72
viii
______________________________________________________ Liste des tableaux
Liste des tableaux
Tableau 1 : Tableau représente la classification systématique de l’espèce de Datura

stramonium L. ................................................................................................................ 4
Tableau 2 : Taux de l’atropine et la scopolamine des différentes parties de la plante de
Datura stramonium quantifiés par GC/SM.................................................................. 10
Tableau 3 : les différents types des plans expérimentaux. ........................................... 28
Tableau 4 : Echantillons à traités par les US en fonction du temps de traitement et la
fréquence de sonication selon le plan factoriel complet. ............................................. 35
Tableau 5 : Echantillons à traités par les US organisés en fonction de la fréquence de
sonication. .................................................................................................................... 36
Tableau 6 : Plan d’expérience des 3 paramètres variables du traitement assisté par
CEP. ............................................................................................................................. 39
Tableau 7 : Plan d’expérience du traitement par CEP organisé en fonction de la
fréquence électrique. .................................................................................................... 40
Tableau 8 : Facteurs et domaines étudiés et leurs niveaux lors de l’extraction par US.
...................................................................................................................................... 49
Tableau 9: Résultats de l’optimisation de la teneur en alcaloïdes totaux par l’US...... 50
Tableau 11 : Facteurs et domaines étudiés et leurs niveaux lors de l’extraction par
CEP. ............................................................................................................................. 57
Tableau 12: Résultats de l’optimisation de la teneur en alcaloïdes totaux par CEP. ... 58
ix
________________________________________________________Liste des figures
Liste des figures
Figure 1: Morphologie du Datura stramonium : Plante, Fleur, Capsule et Graines. ..... 3

Figure 2 : Distribution de Datura stramonium dans le monde ...................................... 5
Figure 3 : Datura stramonium naturalisée en Afrique tropicale .................................... 5
Figure 4 : La structure chimique des principaux alcaloïdes tropaniques de Datura
stramonium. ................................................................................................................... 8
Figure 5: Domaine d’utilisation des ultrasons en fonction de la fréquence adapté de
Veillet, 2010. ................................................................................................................ 15
Figure 6 : Mécanisme de cavitation acoustique ou ultrasonique. ................................ 15
Figure 7 : Stress membranaire généré lors de passage d’une onde ultrasonique . ....... 16
Figure 8 : Effet des sonications sur la taille des cellules végétales. ............................ 16
Figure 9 : Effet des sonications sur la paroi des cellules végétales. ............................ 17
Figure 10 : Schémas des dispositifs à ultrason: bain (a) et sonde (b). ......................... 18
Figure 11 : Electroporation et rupture mécanique de la membrane. ............................ 20
Figure 12 : Perméabilisation cellulaire selon la théorie de l’éléctrocompression. ...... 21
Figure 13 : Représentation schématique du dispositif expérimental utilisé dans l’étude
par CEP. ....................................................................................................................... 24
Figure 14 : Le domaine de variation du facteur. .......................................................... 28
Figure 15 : Représentation schématique de la technique analytique par HPLC ......... 31
Figure 16 : Préparation de la poudre de feuilles de Datura stramonium L.................. 32
Figure 17 : Dessication de la poudre pour la détermination de la teneur en eau. ........ 33
Figure 18 : Evolution d’une bulle de cavitation à proximité d’une cellule végétale. .. 34
Figure 19 : Bain à ultrason à gauche, et des échantillons à traités dans le bain à droite.
...................................................................................................................................... 35
Figure 20 : Instrumentation du CEP. ........................................................................... 37
Figure 21 : Préparation de la chambre de traitement. .................................................. 38
Figure 22 : Les échantillons après étuvage. ................................................................. 41
Figure 23 : Les échantillons après filtration et addition du chloroforme. .................... 42
Figure 24 : Les échantillons après centrifugation. ....................................................... 42
Figure 25 : Récupération des alcaloïdes totaux après rotavaporation.......................... 43
Figure 26 : Schéma global explicatif du protocole expérimental de l’extraction des
alcaloïdes totaux à partir de la poudre des feuilles de la Datura stramonium L. ......... 44
x
Figure 27 : Appareil HPLC. ......................................................................................... 45

Figure 28 : Schéma de la préparation des standards (atropine et scopolamine) et des
dilutions........................................................................................................................ 46
Figure 29 : Préparation des standards et des dilutions. ................................................ 46
Figure 30 : Les alcaloïdes totaux récupérés dans le méthanol. .................................... 47
Figure 31 : Les échantillons à l’intérieur de l’appareil HPLC. .................................... 47
Figure 32 : Histogramme du rendement en extrait sec d’alcaloïdes obtenus par
extraction assisté par l’US. .......................................................................................... 50
Figure 33 : Diagramme de Pareto des paramètres de l’US. ......................................... 52
Figure 34 : Estimation de la qualité d’ajustement des points expérimentaux de l’US.53
Figure 35 : La surface de réponse en 3D de la variance du rendement en alcaloïdes
totaux en fonction des deux facteurs étudiés pour l’US. ............................................. 54
totaux en fonction des deux facteurs étudiés pour l’US. ............................................. 55
extraction assisté par l’US. .......................................................................................... 58
Figure 38 : Diagramme de Pareto des paramètres du CEP. ......................................... 60
Figure 39 : Estimation de la qualité d’ajustement des points expérimentaux (la teneur
en alcaloïdes par rapport au modèle mathématique) par CEP. .................................... 61
totaux en fonction de nombre de pulsations et la fréquence électrique (kv) du CEP. . 62
totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et la fréquence électrique (kv)
du CEP. ........................................................................................................................ 63
totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et le nombre de pulsations du
CEP. ............................................................................................................................. 64
totaux en fonction du nombre de pulsations et de la fréquence électrique (kv) du CEP
...................................................................................................................................... 65
totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et de la fréquence électrique
(kv) du CEP.................................................................................................................. 65
xi

totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et du nombre de pulsations du
CEP .............................................................................................................................. 66
Figure 46 : Table de Gay- Lussac affiché dans le laboratoire. .................................... 73
Figure 47 : Ensemble des solutions préparées. ............................................................ 73
xii
___________________________________________________ Liste des abréviations
Liste des abréviations
°C: Dgrée Celsius
CCM: Chromatographie En Couche Mince
CCMHP: Chromatographie En Couche Mince Haute Performance
CEP: Champs Electrique Pulsé
CG: Chromatographie En Phase Gazeuse
CG-SM: Chromatographie En Phase Gazeuse-Spectrométrie De Masse
CHCl3: Chloroforme
cm: Centimètre
E: Intensité du champ électrique
EACEP: Extraction Assistée par Champ Electrique Pulsé
EAM: Extraction Assistée Par Micro-Ondes
EAS: Extraction Accélérée Par Solvant
EAU: Extraction Assistée par Ultrason
EFS: Extraction Par Fluide Supercritique
ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
EPL: Extraction Par Pression De Liquide
f: Fréquence
g/mol: gramme/mol Poids Moléculaire (M)
h: Heure
H%: Humidité
HCl: Acide Chlorhydrique
HPLC: Chromatographie Liquide Haute Performance
I: Courant
kg/ha: Kilogramme / Hectare
kHz: Kilo Hertz
xiii
___________________________________________________ Liste des abréviations
kV: Kilo Volte
MEB: Microscope Electronique A Balayage
mg: Miligramme
MHz: Méga Hertz
min: Minute
ml: Mililitre
MS %: Matière Sèche
n: Nombre D’impulsions
N: Normalité (G/Mol)
Na2SO4: Sulfate de sodium (sel d'anydre)
NH3: Ammoniac
n m: Nanomètre
PA: Préssion Acoustique
pH: Potentiel Hydrogène
RP-HPLC: RP chromatographie phase lisuide à heute performance
RSM: Méthode de Surface de Réponse
t: Durée de pulsation
UV: Ultraviolet
v: Volume
V: Tension, Volte
V/cm: Volte/Centimètre
W: Watt
Δt: Intervalle entre les pulsations
xiv
_______________________________________________________ Liste des annexes
Liste des Annexes
Annexe 1 : Produits chimiques.
Annexe 2 : Traitement par CEP affiché sue l’écran de l’oscilloscope.
Annexe 3: Effet et coefficients estimés pour la réponse du rendement de l’extraction

des alcaloïdes par US.
Annexe 4 : Effet et coefficients estimés pour la réponse du rendement de l’extraction

des alcaloïdes par CEP.
xv
______________________________________________________________ Résumé
Résumé
La stramoine « Datura stramonium L » est une solanacée largement utilisée en

médecine traditionnelle pour ses propriétés biologiques attribuées essentiellement aux
alcaloïdes. Ce travail a pour but d’étudier et optimiser les paramètres d’extraction des
alcaloïdes à partir des feuilles séchées de Datura en utilisant deux techniques
innovantes : extraction assistée par champ électrique pulsé (CEP) et l’extraction
assistée par l’ultrason (US).
Une approche méthodologique pour la modélisation des procédés de

l’extraction des alcaloïdes a été suivie afin de trouver les paramètres optimaux pour
obtenir le meilleur rendement, par l’utilisation de deux plans d’expériences.
Les teneurs en alcaloïdes totaux les plus élevées ont été obtenues dans les
conditions suivantes : une fréquence électrique de 10 kv, une concentration de 50% de
solvant avec 10 pulsations pour la technique CEP ; et une fréquence de sonication de
40 kHz avec un temps de traitement de 50 min pour l’US.
Les résultats de cette étude montrent que les méthodes innovantes et les
modèles expérimentaux d’optimisation appliqués peuvent augmenter les rendements
d’extraction des alcaloïdes totaux de manière significative.
Mots clés : Datura stramonium L, champ électrique pulsé, ultrason,

optimisation, extraction, alcaloïdes totaux, plan d’expérience.
xvi
______________________________________________________________ Abstract
Abstract
«Datura stramonium L» is a solanaceous plant widely used in traditional

medicine for its biological properties attributed mainly to alkaloids. This work aims to
study and optimize the extraction parameters of alkaloids from dried leaves of Datura
using two innovative techniques: extraction assisted by pulsed electric field (PEF) and
extraction assisted by ultrasound (US).
A methodological approach for the modeling of alkaloid extraction processes

was followed in order to find the optimal parameters to obtain the best yield, by using
two experimental designs.
The highest total alkaloid contents were obtained under the following
conditions: an electrical frequency of 10 kv, a concentration of 50% solvent with 10
pulses for the PEF technique; and a sonication frequency of 40 kHz with a time of 50
min for the US.
The results of this study show that the applied innovative methods and
experimental optimization models can significantly increase the extraction yields of
total alkaloids.
Keywords: Datura stramonium L, pulsed electric field, ultrasound,

optimization, extraction, total alkaloids, experimental design.
xvii
‫ملخص ________________________________________________________________‬
‫ملخص‬
‫عشبة" داتورة سترامونيوم "هي عشبة من الباذنجانيات تستخدم على نطاق واسع في الطب التقليدي‬
‫لخصائصها البيولوجية التي تُعزى بشكل أساسي إلى االلقلويدات‪ .‬يهدف هذا العمل إلى دراسة وتحسين معامالت‬
‫استخالص االلقلويد من أوراق الداتورة المجففة باستخدام طريقتين مبتكرتين‪ :‬االستخالص بمساعدة المجال‬
‫الكهربائي النبضي واالستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية‪.‬‬
‫تم إتباع منهج لنمذجة عمليات االستخالص االلقلوي من أجل إيجاد المعامالت المللى للحصول على‬
‫أفضل مردود‪ ،‬من خالل استخدام تصميمين تجريبيين‪.‬‬
‫تم الحصول على أعلى محتويات القلويد إجمالية في ظل الظروف التالية‪ :‬تردد كهربائي قدره ‪ 01‬كيلو‬
‫فولت ‪ ،‬وتركيز ‪ ٪01‬من المذيب مع ‪ 01‬نبضات لتقنية المجال الكهربائي النبضي ؛ وتردد صوتي يبلغ ‪ 01‬كيلو‬
‫هرتز بزمن ‪ 01‬دقيقة للموجات فوق الصوتية‪.‬‬
‫بينت نتائج هذه الدراسة أن األساليب المبتكرة ونماذج التحسين التجريبية المطبقة يمكن أن تزيد من‬
‫إنتاجية االستخالص للقلويدات الكلية بشكل كبير‪.‬‬
‫الكلمات المفتاحية ‪ :‬الداتورة سترامونيوم ‪ ،‬المجال الكهربائي النبضي ‪ ،‬الموجات فوق الصوتية ‪ ،‬التحسين ‪،‬‬
‫االستخالص ‪ ،‬االلقلويات‪ ،‬التصميم التجريبي‪.‬‬
‫‪xviii‬‬
INTRODUCTION
___________________________________________________________ Introduction
Introduction
Les plantes médicinales sont utilisées depuis des siècles comme remède à
diverses maladies humaines grâce à leur pouvoir thérapeutique.
Cette matière végétale est devenue par la suite une source principale de
découverte des nouveaux principes actifs, dont environ 170000 molécules bioactives
ont été déjà identifiées. Elles sont donc de plus en plus utilisées dans l’industrie
pharmaceutique afin de développer des médicaments plus efficaces (Bruneton J. ,
1999).
Plusieurs études ont démontré que certains genres appartient à la famille de

Solanaceae, particulièrement Datura stramonium L, une plante toxique qui pousse à
l’état sauvage (ALLOUNI, 2011), elle produit des substances actives y compris les
alcaloïdes tropaniques (Sato, et al., 2001), dont les plus majeurs sont l’hyoscyamine
(généralement le plus abondant), la scopolamine, et l’atropine (Sato, et al., 2001).
Ces substances ont un grand intérêt en raison de leurs multiples

applications, mais leurs études et leurs utilisations optimales requièrent une
nécessité d’une disposition de la méthode la plus appropriée et la plus standard pour
avoir une extraction globale (Azmir, et al., 2013).
Il a souvent été reporté que les extractions conventionnelles solides-liquides

ou bien liquide-liquides sont des processus ardus et chronophages, nécessitant une
forte consommation de solvant avec un faible rendement.
Sachant que l’extraction de ces composés est une étape critique dans leur
isolement, aussi bien que dans leur identification (MAHMOUDI, KHALI, &
MAHMOUDI, 2013) ; De nouvelles techniques d’extractions non conventionnelles
telles que l’extraction assistée par champs électrique pulsé (CEP) et l’extraction
assistée par ultrasons (US) sont avérées d’être une alternative viable aux procédures
conventionnelles pour l’extraction d’alcaloïdes bioactifs de Datura stramonium, car
elles sont plus efficientes, plus rapides, écologiques et utilisent moins de solvants
toxiques (Chhavarath, et al., 2017).
1
___________________________________________________________ Introduction
C’est ce qui a motivé l’orientation de notre travail dans l’optimisation de

l’extraction par ces deux techniques innovantes « Ultrason » et « Champ électrique
pulsé » dans le souci d’apporter des solutions aux problèmes d’évaluation de la
qualité et la quantité des molécules bioactives extraites à base de plantes
médicinales (TAHOUO , 2016)
L’objectif de notre travail est de mettre en œuvre une technique extractive

verte, efficiente et optimisée par des méthodes innovantes qui pourrait remplacer
l’extraction conventionnelle classiques des alcaloïdes tropaniques.
Après une introduction faisant le point sur la question, notre travail est devisé
en trois parties :
 La première partie relative à la synthèse bibliographique, qui est subdivisée en

cinq chapitres :
- Le Datura stramonium L ;
- Les molécules bioactives de la stramoine ;
- Les techniques d’extraction ;
- L’optimisation d’extraction et les plans d’expérience ;
- Les méthodes de dosage.
 La deuxième partie concerne l’étude expérimentale qui comprenne :
- L’extraction Assistée par Ultrason (EAU) ;
- L’extraction Assistée par Champ Electrique Pulsé (EA-CEP) ;
- Dosage par Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC).
 Enfin la troisième partie présente les résultats obtenus ainsi que leurs discussions.
2
PARTIE I : Synthèse
bibliographique
CHAPITRE I : Datura
stramonium L
_______________________________________ CHAPITRE I : Datura stramonium L
1. Présentation de la plante
Le Datura stramonium L appartient à la famille de Solanaceae est une plante

herbacée peut atteindre 1 mètre de hauteur, annuelle, peu exigeante en termes
d’habitat, considérée comme mauvaise herbe de jardins, de bords de route, de déchets
ou de terre cultivée, elle a une période de floraison qui s’étale de juillet à
septembre. Son fruit est une capsule épineuse remplie de très nombreuses graines
(Fig.1).
Elle est toxique pour l’Homme causant des intoxications lors des usages abusifs
comme drogue ou par une exposition accidentelle, ainsi que pour les animaux par des
intoxications moins fréquentes (BOUCHER & LAGARCE, 2010; BOUZIDI,
MAHDEB, KARA, & BENOUADAH , 2011; Nayyar, Muhammad, Muhammad,
Muhammad, & Rafia, 2020).
Figure 1: Morphologie du Datura stramonium : Plante, Fleur, Capsule et Graines

(Gaire, 2008).
 Etymologie
Datura : vient du nom arabe de la plante « Tatôrah » qui proviendrait du

mot « dhatura » chez les hindoustanis qui signifie « pomme épineuse » ou « pomme
de la mort » (MARTEL, 2012).
stramonium : vient de « Strymonios » une région de Thrace en Grèce, ou de
« stremmamonia » = « gâteau insensible » pour ses propriétés stupéfiantes et
enivrante (MARTEL, 2012). Le mot est aussi pensé pour être de « Struma » ce qui
signifie quelque chose gonflé (ALLOUNI, 2011).
3
Le Datura stramonium est connu sous de nombreux noms : « taturah » en arabe,

« tabourzigt » en berbère, « jimsonweed » ou « thornapple » (Mairura & Setshogo,
2008) chez les anglais, et datura, stramoine (Molino, 2005) ou herbe de diable
(Mairura & Setshogo, 2008) en français.
2. Classification systématique
Tableau 1 : Tableau représente la classification systématique de l’espèce de Datura

stramonium L (Gaire, 2008).
Règne Plantae (plantes)
Sous règne Tracheobionta (plantes vasculaires)
Embranchement Spermatophyta (plantes à graine)
Sous embranchement Magnoliophyta(plantes à fleurs)
Classe Magnoliopsida (dicotylédones)
Sous classe Asteridae
Ordre Solanales
Famille Solanaceae (famille de pomme de terre)
Sous famille Solanoideae
Genre Datura
Espèce Datura stramonium L
3. Origine et répartition
Des études phylogénétiques récentes ont montré que toutes les espèces de
Datura seraient originaires d’Amériques.
Après le 16e siècle, ces espèces ont était rapportées par les européens durant
leur voyage de découverte de l’Amérique, ou importée par les courants
4
océaniques de l’Amérique du Sud à la Polynésie puis à l’Asie, et par le biais de

l’Homme vers le reste du monde (MARTEL, 2012). Elle est largement distribuée dans
la plupart des régions tempérées du monde (Fig.2) (El Bazaoui, Ahmed Bellimam, &
Soulaymani, 2011).
Figure 2 : Distribution de Datura stramonium dans le monde (Gaire, 2008).
C’est une plante adventice naturalisée dans de nombreux pays africains (Fig.3),
mais les données sur sa présence sont certainement très lacunaires (Mairura &
Setshogo, 2008).
Figure 3 : Datura stramonium naturalisée en Afrique tropicale (Mairura & Setshogo,

2008).
5
4. Datura stramonium en Algérie
Le Datura stramonium var. eu stramonium avec des fleurs blanches qui se

caractérise par une tige verte, alors que le Datura stramonium var. tatula avec des
tiges et des fleurs violette, sont les deux variétés de Datura stramonium signalées en
Algérie (Houmani & Cosson, 2000).
Elles poussent à l’état spontané, aux bords des routes, dans les décombres et
dans les cultures, où il y a des sols argileux, légèrement basiques, humides, riches en
azote, dans des terrains vagues et bien ensoleillés qui fait une répartition jusqu’à la
limite du Sahara (Houmani & Cosson, 2000).
5. Usage de Datura stramonium L
C’est une plante à usage médicinale et pharmacologique, y compris le

traitement pour soulager l’asthme, la toux, la tuberculose, la bronchite, traiter la
maladie de Parkinson, soigner les douleurs rhumatismales, les œdèmes, les brûlures,
les tumeurs, et autres.
Mais à une surdose, elle provoque des maux de tête, des nausées, des
vomissements, et affecte le système nerveux central en entrainant des désorientations,
jusqu’à une perte de mémoire et le coma (Mairura & Setshogo, 2008).
En plus de ses intérêts agricoles comme biopesticide, antifongique,
et écologiques pour la bioremédiation des sols et des eaux pollués, qui sont démontrés
par plusieurs études (Morsli, Setbel, Guendez-Karmia, Hammache, & Doumandji,
2017).
6
CHAPITRE II : Molécules
bioactives
_______________________________________ CHAPITRE II : Molécules bioactives
1. Les molécules bioactives de la Datura stramonium L
Les composés phytochimiques et pharmacologiquement actifs sont des

molécules issues du métabolisme des végétaux, surtout les métabolites secondaires.
Ces métabolites sont repartis en trois grandes familles chimiques : les
alcaloïdes ou composés azotés, les composés phénoliques ou phénoloïdes, et les
terpénoïdes (JABER, 2017; VU, 2018).
1.1. Les alcaloïdes
Le terme d’alcaloïde a été introduit par W. MEISNER au début du XIXe

siècle pour désigner des substances naturelles qui réagissent comme des bases, et qui
se cristallisent avec les acides comme des alcalis dérivé de l’arabe « al kaly » qui
signifie « aigre », et de la soude du grec « eidos », qui signifie « aspect » (Bruneton J.
, 1999).
Les alcaloïdes sont les métabolites les plus importants et les plus diversifiés
du règne végétal. Définis comme des composés organiques naturels (principalement
d’origine végétale), de distribution restreinte, basiques, de 12 000 structures
différentes complexes hétérocycliques avec un atome d’azote comme hétéroatome. Ils
possèdent une activité pharmacologique significative grâce à leurs propriétés
physiologiques même à faibles doses (Bruneton J. , 1999; Chintapakorn & D. Hamill,
2007; H. Zenk & Juenger, 2007).
Trois classes d’alcaloïdes qui sont : les alcaloïdes vrais qui sont à l’état de
sels et biosynthétiquement formés à partir d’un acide aminé, en plus des proto-
alcaloïdes et des pseudo-alcaloïdes (Bruneton J. , 2009).
1.2. Les alcaloïdes tropaniques
Englobe environ 200 alcaloïdes dans la famille de Solanaceae. Sont des

esters d’alcools tropaniques et d’acides organiques qui est l’acide tropique à structure
variable et à carbone asymétrique liés par des liaisons esters (Fig.4) (Bruneton J. ,
1999).
Les alcaloïdes tropaniques font partie des plus de 70 alcaloïdes qui ont été
identifiés dans les différentes parties de la plante de Datura stramonium L. Ils sont
7
produits à proximité des apex racinaires, ils sont cependant, accumulés dans les
vacuoles des racines et des feuilles (Koné, 2018).
Les plus abondants dans le Datura stramonium sont l’hyoscyamine qui est
généralement le plus abondant dans la plante à la maturité, la scopolamine (hyoscine)
comme prédominant dans la plante jeune et le seul alcaloïde présent dans la racine
(ALLOUNI, 2011).
Figure 4 : La structure chimique des principaux alcaloïdes tropaniques de Datura

stramonium.
1.2.1. Atropine (D, L-hyoscyamine)
L’atropine (Fig.4) est une combinaison racémique de D et L-hyoscyamine

dont la formule brute est de C17H23NO3, un poids moléculaire de 289,37g/mol et d’un
point de fusion de 108,5°C. Il s’agit de l’ester du tropanol et de l’acide tropique
(Jakabová, Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
Cette substance est une toxine puissante qui provoque une mydriase (dilatation
de la pupille), caractérisée par son amertume et sa saveur forte. C’est une forme
inactive qui prend naissance par transformation de son isomère hyoscyamine qui est
deux fois plus actif, ce qui la rend la forme acceptée en médecine grâce à son état
stable et moins sensible aux enzymes hydrolytiques.
Extrêmement soluble dans deux solvants qui sont l’alcool et le chloroforme,
moins soluble dans l’éther et le benzène, et très peu soluble dans l’eau froide
(PICTET, 1897).
8
1.2.2. Hyoscyamine
Résultat d’association d’ester de tropanol et d’acide L-tropique, à une formule

générale de C17H23NO3, assez soluble dans l’alcool et l’eau contrairement à l’atropine,
un peu moins dans l’éther, mais elle se cristallise dans l’alcool à 108,5 °C (Jakabová,
Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
L’hyoscyamine est convertie en son isomère l’atropine une fois exposé à la
chaleur ou lorsqu’elle entre en contact avec des alcalis durant le processus
d’extraction (PICTET, 1897).
Elle possède la même saveur forte et persistante ainsi que les mêmes
caractéristiques physiologiques que l’atropine, la principale distinction est l’action
optique lévogyre élevée de l’hyoscyamine (PICTET, 1897).
1.2.3. Scopolamine (L- hyoscine)
La scopolamine est le troisième alcaloïde tropaniques de Datura stramonium à

une formule de C17H21NO4, probablement nommée à partir de la plante Scopolia
japonica Maxim d’où elle a été isolée pour la première fois en 1888 par M. Schmidt
de ses racines, mais également de sa composition chimique d’ester de l’acide L-
tropique et du scopanol.
Cette substance a un point de fusion de 59°C, assez soluble dans les solvants
organiques comme l’éthanol, l’éther et le chloroforme, et modérément soluble dans
l’eau où elle se cristallise. En plus de sa propriété de saponification avec les alcalis, la
barytine ou l’acide chlorhydrique, elle présente des caractéristiques mydriatiques
(PICTET, 1897).
1.3. Stade et taux de sécrétion des alcaloïdes par le Datura stramonium L
La plante aura une forte concentration d’alcaloïdes dans les organes

végétatifs : tiges, pétioles et feuilles au stade de fruit immature en période estivale,
donc les parties les plus jeunes contiennent plus d’alcaloïdes que les parties anciennes
(Jakabová, Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
Cette concentration en alcaloïdes tropaniques biosynthétisés est variable d’un
organe à autre dans les différentes parties de la plante (Tab.2).
9
Le tableau suivant montre que la partie de la plante la plus riche en alcaloïdes

est la partie aérienne dont les feuilles en premier et le pétiole en deuxième lieu, et que
le stade de sécrétion optimale est dans la phase végétative.
Tableau 2 : Taux de l’atropine et la scopolamine des différentes parties de la plante

de Datura stramonium quantifiés par GC/SM (IRANBAKHSH, OSHAGHI, &
MAJD, 2006).
Organe et phase de développement Atropine(%) Scopolamine(%) Total(%)
Feuilles dans la phase végétative 0.037 0.090 0.127
Feuilles dans la phase générative 0.030 0.020 0.050
Pétiole dans la phase végétative 0.080 0.042 0.122
Pétiole dans la phase végétative 0.062 0.020 0.082
Tige dans la phase végétative 0.070 0.023 0.093
Tige dans la phase générative 0.070 0.023 0.093
Racine dans la phase végétative 0.045 0.000 0.045
Racine dans la phase générative 0.056 0.013 0.069
Capsule 0.064 0.034 0.098
Graines 0.000 0.020 0.020
Les rendements les plus élevés en scopolamines et en hyoscyamine de Datura

stramonium ont été obtenus en Algérie, avec 7,5 kg/ha pour la scopolamine et 21
kg/ha pour l’hyoscyamine (Mairura & Setshogo, 2008).
10
CHAPITRE III : Les
techniques d’extraction des
alcaloïdes
_____________________ CHAPITRE III : Les techniques d’extraction des alcaloïdes
1. Généralités
Le procédé d’extraction est une technique permet une séparation sélective

d’un ou plusieurs composés d’un mélange, sur la base de la différence des propriétés
chimiques ou physiques tel que la solubilité dans les solvants (Luque de Castro &
Garcia-Ayuso, 1998; PENCHEV, 2010; KALLA, 2012).
Toutes les techniques d’extraction ont pour objectif de :
 Extraire et isoler des composés bioactifs ciblés à partir d’échantillons complexes
de plantes ;
 Augmenter la sélectivité des méthodes analytiques ;
 Augmenter la sensibilité des essais biologiques en augmentant la concentration en
composés ciblés ;
 Convertir les composés bioactifs en une forme plus appropriée pour la détection et
la séparation ;
 Fournir une méthode puissante, reproductible et indépendante des variations de la
matrice d'échantillon (Smith, 2003) ;
 Extraction et purification des impuretés du composé d’intérêt ;
 Concentration en composés ciblés par élimination d’une partie du solvant ;
 Fractionnement et séparation d’un mélange complexe en plusieurs mélanges
différents, afin de détecter les composés bioactifs (KALLA, 2012).
Parmi les techniques d’extraction des alcaloïdes, on trouve les méthodes
conventionnelles et les méthodes non-conventionnelles :
1.1. Les méthodes conventionnelles
Des méthodes classiques utilisées depuis longtemps pour l’extraction des

composés bioactifs à partir des plantes.
Les alcaloïdes tropaniques sont généralement extraits par une extraction
liquide-liquide et solide-liquide en utilisant des solvants organiques (Jakabová,
Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
Il existe plusieurs techniques conventionnelles d’extraction, la plupart de ces
techniques sont basées sur :
11
 Le pouvoir d’extraction de différents solvants (extraction par solvants organiques,

extraction par un solvant en milieu alcalin, extraction par un solvant en milieu
acide) ;
 L’application de chaleur et / ou de mélange (comme l’extraction par pression à
froid, l’extraction par Soxhlet, la macération et l’hydro-distillation) (Azmir, et al.,
2013; Jabbar, et al., 2015).
1.1.1. Extraction par solvants
Deux types d’extraction par solvant peuvent avoir lieu : extraction liquide-
liquide et extraction solide-liquide. Cela dépend de l’état des composés ou du
mélange de substance à extraire qui est liquide ou solide, ainsi que l’état du solvant
qui peut être liquide ou fluide supercritique.
L’efficacité de l’extraction par les méthodes conventionnelles est basée sur le
choix des solvants, qui doit prend en considération le facteur de la polarité de la
molécule ciblée, l’affinité moléculaire entre le solvant et le soluté, le transfert de
masse, l’utilisation d’un co-solvant, la sécurité environnementale, la toxicité humaine,
et la faisabilité financière (Azmir, et al., 2013).
Cette technique consiste à extraire les alcaloïdes par solubilisation dans un
solvant à partir de son milieu solide ou liquide (mélange ou solution) qui doit être non
miscible avec le solvant utilisé. Ce dernier peut être de l’eau, mais généralement
d’un solvant organique polaire si l’extraction est faite dans un milieu acide ou
apolaire si le milieu est alcalin. Exemples des solvants organiques utilisés : éthanol,
cyclohexane, éther de pétrole, toluène, méthanol… etc (Bruneton J. , 2009).
Le procédé d’extraction des alcaloïdes par solvant est basé sur deux méthodes
d’extraction conventionnelles successivement dans le but d’obtenir des molécules
bioactives hautement purifiées (CHEOK, SALMAN, & SULAIMAN, 2014).
A. Extraction par solvant en milieu acide

L’extraction en milieu acide consiste à épuiser la plante entière, une partie de
la plante ou la poudre de la plante (l’échantillon), soit directement par l’eau acidifiée,
soit dans une solution alcoolique ou hydro-alcoolique acidifiée en utilisant des
mélanges alcool-eau à une concentration d’alcool précise ou de différentes
concentrations (des rations liquide-liquide) acidifiés par des acides forts (Bruneton J. ,
2009).
12
Les alcaloïdes devient des sels en solution aqueuse dans le milieu acide, dont
ils seront facile à être purifier par une distillation sous vide qui élimine l’alcool
(Bruneton J. , 2009).
B. Extraction par solvant en milieu alcalin

L’addition d’un agent d’alcalinisation qui est très souvent l’ammoniaque, sert
à extraire et à purifier les alcaloïdes à l’aide d’un solvant organique apolaire non
miscible à l’eau, peut être un solvant chloré (dichlorométhane, chloroforme,
benzène ou dioxyde d’éthyle) (Bruneton J. , 1999)
Cette étape est suivie par une filtration pour séparer le solvant organique
contenant les alcaloïdes bases, et débarrasser les traces du solvant polaire du milieu
acide, renforcé par une déshydratation. Il reste alors un résidu sec qui représente les
alcaloïdes totaux (Bruneton J. , 2009).
1.1.2. Inconvénients des méthodes conventionnelles
 Combinaison de températures élevées, de vitesse d’agitation, de durée

d’extraction prolongée, et de quantités élevées de solvants, qui créent une charge
sur l’environnement ;
 Décomposition thermique de composés thermolabiles ;
 Nécessité de procédures supplémentaires et coûteuses pour la séparation et la
purification des substances bioactives extraites ;
 Nécessité des solvants coûteux et d’une grande pureté et peuvent provoquer la
décomposition ou la dégradation de substances bioactives (Azmir, et al., 2013;
Jabbar, et al., 2015; Vorobiev & Lebovka, 2016).
Pour cela, les scientifiques se sont orientés vers l’innovation dans le domaine
d’extraction en cherchant de nouvelles techniques permettant d’éliminer ou de réduire
les obstacles et les risques liés aux anciennes méthodes.
1.2. Les méthodes non conventionnelles
Des nouvelles méthodes dites innovantes sont développées pour avoir une
détermination rapide de la quantité maximale des alcaloïdes tropaniques à partir de la
matière végétale d’intérêt. L’efficacité de ces méthodes a été caractérisée par une
évaluation rapide d’un certain nombre de paramètres de validation. Ces méthodes
13
analytiques actuelles ont de meilleures limites de détection et de quantification que

les autres méthodes (Jakabová, Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
Les techniques vertes innovantes « greens technologies » les plus utilisées sont
généralement des extractions assistées par l’application de méthodes hybrides
combinant à différentes étapes entre l’extraction conventionnelle et non
conventionnelle pour but d’améliorer la sélectivité et l’efficacité d’extraction dans un
temps réduit (LIGOR, RATIU, KIEŁBASA, AL-SUOD, & BUSZEWSKI, 2018).
Elles se résument essentiellement en extraction assistée par ultrasons (EAU),
extraction assistée par enzymes (EAE), extraction assistée par micro-ondes (EAM),
extraction assistée par champ électrique pulsé (EA-CEP), extraction par fluide
supercritique (EFS), extraction par pression de liquide (EPL), et extraction accélérée
par solvant (EAS) (Azmir, et al., 2013; Vorobiev & Lebovka, 2016).
L’objectif principal de la chimie verte est d’intégrer la sécurité, la
prévention de la pollution, la minimisation des déchets et l’optimisation
énergétique dans les processus chimiques existants (VACCARO, 2016).
1.2.1 Extraction assistée par ultrasons (EAU)
A. Généralités
Les ultrasons sont des ondes vibrationnelles mécaniques pouvant se propager
dans les milieux solides, les liquides et les gaz à une fréquence supérieure à la limite
maximale de l’audience humaine (˃16 kHz). Elles produisent une série de fronts de
hautes et de basses pressions à une certaine fréquence dans le milieu liquide, puis font
vibrer les surfaces qu’ils traversent à la même fréquence que la source (Wang &
Waller, 2006; Veillet, 2010).
Les ultrasons sont de deux catégories (Fig.5) :
 Les ultrason de basse intensité ou de haute fréquence de 2 à 10 MHz (les
ultrasons de diagnostic) qui sont utilisés comme une méthode non-destructive
d’évaluation des propriétés physico-chimiques du milieu qu’ils traversent,
principalement dans le domaine médical .
 Les ultrasons de haute intensité ou de basse fréquence de 20 kHz à 100 kHz
(les ultrasons de puissance), sont appliqués dans des domaines industriels
variés, notamment agro-alimentaire, du fait de leur capacité à générer des
bulles de cavitation (Brianceau, 2015).
14
Figure 5: Domaine d’utilisation des ultrasons en fonction de la fréquence adapté de

Veillet, 2010.
L’extraction des composés bioactifs par ultrasons est un processus simple, non
thermique, efficace, permet d’avoir une extraction douce en empêchant la dégradation
thermique de l’extrait, avec des frais abordables. Consiste à traiter sous ultrasons un
solide, sec ou humide, en contact avec un solvant (Azmir, et al., 2013).
B. Principe et mode d’action

Lors d’une fréquence assez élevée qui dépend du liquide utilisé, les fronts de
hautes et de basses pressions produits par la source du bruit dans le liquide tel que
l’eau, engendrent des bulles microscopiques d’une durée de vie de quelques
microsecondes, qui sont créées et qui se propagent dans la phase de dépression (basse
pression ou PA négative) par l’évaporation spontanée du liquide, suivie par une
condensation du gaz qu’elles contiennent pendant la phase de compression (haute
pression ou pression positive) (Fig.6) (Wang & Waller, 2006).
Figure 6 : Mécanisme de cavitation acoustique ou ultrasonique (Jean-Paul & Martine,

2004).
15
Lorsque les ondes des ultrasons traversent la surface solide de la cellule

végétale, une pression acoustique est générée au moment de la phase de compression,
qui permet d’améliorer les transferts de chaleur et de matière avec une meilleure
quantité à une courte durée (Fig.7).
Figure 7 : Stress membranaire généré lors de passage d’une onde ultrasonique (Nait
Sidi Ahmed A. , 2012).
Des observations par microscope électronique à balayage (MEB) (Fig.9)

(Corinne, 2016), ont montré l’effet de cavitation des parois des cellules végétales par
le mécanisme des ultrasons, ce qui conduit à un meilleur rendement d’extraction et
une réduction du ratio solvant /soluté (Fig.8) (CHEOK, SALMAN, & SULAIMAN,
2014; J. Barba, Brianceau, Turk, Boussetta, & Vorobiev, 2015).
Figure 8 : Effet des sonications sur la taille des cellules végétales.
16
Figure 9 : Effet des sonications sur la paroi des cellules végétales.
L’application des ultrasons a été développée dans les industries et reste un

domaine de recherche actif de l’optimisation du phénomène de transfert de chaleur et
de masse.
C. Les paramètres opératoires influençant l’efficacité de l’US

Pour obtenir une extraction efficace il est important d’étudier les paramètres et
les facteurs déterminants de l’action des ultrasons, et qui permettent de connaitre les
conditions optimales à utiliser lors des extractions par cette méthode (Azmir, et al.,
2013).
La teneur en humidité de l’échantillon et sa viscosité, la taille des particules et
les propriétés physico-chimiques du solvant utilisé ex : la tension superficielle
(Boistier-Marquis, Lagsir-Oulahal, & Callard, 1999; Azmir, et al., 2013). De plus, la
température, la pression, la fréquence, la durée de sonication ou temps de traitement,
l’amplitude des ondes acoustiques et le ratio solvant / biomasse.
L’aspect le plus important pour une extraction assistée par ultrasons réussie
consiste à établir des valeurs appropriées pour les paramètres d’extraction relatifs aux
propriétés biologiques du matériel végétal à extraire (Toma , Vinatoru, Paniwnyk, &
Mason, 2001).
17
D. Instrumentation de l’US
Un équipement à ultrasons est constitué de :
- Un générateur qu’il s’agit d'un oscillateur électronique ou mécanique.

- Un transducteur qui est un dispositif permet de convertir l’énergie mécanique ou
électrique en énergie sonore à des fréquences ultrasonores.
En fonction du transducteur, deux types d’extracteurs à ultrasons sont
distingués et couramment utilisés dans les laboratoires (Fig.10).
 Le bain à ultrasons : Composé d’une cuve remplie d’eau pour accélérer la
propagation des ondes sonores, permet donc de produire la même puissance
d’ultrasons et de disperser le champ acoustique uniformément dans le liquide bain,
en utilisant des verreries classiques contenant l’échantillon qui est déposé dans un
panier au fond de la cuve, ainsi que de traiter plusieurs solutions de même
fréquence en même temps. L’équipement est accompagné d’un thermomètre
automatique permet d’afficher la température de traitement.
 La sonde à ultrasons ou système à cornet : C’est une sonde plongée directement
dans la solution. Un système largement utilisé pour la sonication de petits volumes
d’échantillon après avoir une propagation des ultrasons sur une petite surface,
pour but de limiter les interférences. Mais des précautions particulières doivent
être prises en raison de la montée rapide de la température dans l’échantillon
(Mandal, Mandal , & Das, 2015).
Figure 10 : Schémas des dispositifs à ultrason: bain (a) et sonde (b) (Brianceau,
2015).
E. Les applications principales de l’US

Des applications dans des domaines très divers tels que l’automobile,
l’électronique, l’optique, les semi-conducteurs, le biomédical, la chimie et autres.
18
Les ultrasons sont également développés dans les industries alimentaires

durant les procès de fabrication ou bien pour l’emballage.
Couramment utilisé pour l’extraction, la séparation et la dépolymérisation, la
dispersion de solides dans des solvants, mélange et homogénéisation, et le dégazage
des solutions en laboratoire ou des boissons carbonatées en industries
agroalimentaires. La stérilisation et la détérioration des cellules bactériennes sont
aussi améliorées par l’application des US.
Les ultrasons sont aussi utilisés pour le nettoyage, les premières applications
industrielles sont apparues à la fin des années 50 comme solution efficace, non
polluante et alternative du nettoyage mécanique en brosse. Leurs puissances permet
de décrocher les fines particules afin d’éliminer toute trace de contaminants (Boistier-
Marquis, Lagsir-Oulahal, & Callard, 1999).
F. Les avantages de l’US

L’extraction assistée par ultrasons est une alternative simple, peu coûteuse et
efficace (Mandal, Mandal , & Das, 2015). Les principaux avantages par rapport aux
techniques d’extraction conventionnelles :
 Nouvelle technique d’extraction utilisée afin de permettre la réduction des temps
d’extraction, la consommation de solvant et de l’énergie avec un faible coût de
l’appareillage (Mandal, Mandal , & Das, 2015) ;
 Reproductibilité élevée d’extraction, avec une meilleure qualité ;
 Une technologie économiquement viable pour l’extraction des composés
thermolabiles grâce à la réduction des gradients thermiques et de la température
de fonctionnement (U. Kadam, K. Tiwari, J. Smyth, & P. O’Donnell, 2015) ;
 Manipulation simple avec un contrôle facile du procédé de l’extraction en toute
sécurité, sans exigence du type de solvant ;
 Taille réduite de l’équipement (Mandal, Mandal , & Das, 2015).
1.2.2. Extraction assistée par champ électrique pulsé (EA-CEP)
A. Généralités
La rupture des membranes cellulaires par des traitements physiques,
chimiques ou biologiques est essentielle dans la préparation des matières premières
pour les processus d’extraction, parmi ces techniques il y a le traitement électrique par
19
CEP, appelé « électroplasmolyse » ou « électroperméabilisation » (Bazhal, Lebovka,

& Vorobiev, 2003).
Zimmermann et al. (1974), considère la membrane cellulaire comme un
condensateur qui sépare les espèces ioniques et les charges libres sur le côté interne et
externe de la membrane.
Selon Knorr et al. (2005), les membranes cellulaires sont stables aux faibles
valeurs de voltage mais lorsque celui-ci dépasse une valeur seuil (de l’ordre 0,2 à 1
V), elles deviennent perméables, puis au-delà d’une valeur critique (comprise entre
0,7 et 2,2 V pour les cellules végétales et animales respectivement) les membranes
sont complètement endommagées.
Le champ électrique pulsé (CEP) est d’origine utilisé comme technique non
thermique, en utilisant de courtes impulsions électriques caractérisées par leurs
durées, amplitudes et leurs formes, pour inactiver la plupart des micro-organismes et
certaines enzymes à la température ambiante, afin de préserver et d’améliorer la
qualité des produits alimentaires (Wu, Zhao, Yang, & Chen, 2014). Il a également été
appliqué comme méthode efficace pour détruire les membranes cellulaires afin de
faciliter et améliorer l’extraction des métabolites ou des substances ultérieures, mais à
une application qui doit être combinée à des procédés d’extraction solide / liquide,
pour avoir une meilleure sélectivité des molécules extraites (Bazhal, Lebovka,
&Vorobiev, 2003).
B. Mode d’action
Le principe du CEP est de détruire la structure de la membrane cellulaire pour
augmenter l’extraction. Pendant la suspension d’une cellule vivante dans le champ
électrique, un potentiel électrique traverse la membrane de cette cellule (Fig.11). En
raison de la nature dipolaire des molécules de la membrane, le potentiel électrique
sépare les molécules en fonction de leurs charges dans la membrane cellulaire (Azmir,
et al., 2013).
Figure 11 : Electroporation et rupture mécanique de la membrane (Dimitrov , 1984).
20
Cette méthode est basée sur l’effet des changements de caractéristiques

texturales et l’électro-perméabilisation à travers la formation et de la croissance
électro-induite de pores dans les membranes cellulaires (électroporation) suite à
l’application d’un champ électrique qui provoque une diminution de la résistance à la
compression dans les tissus (Bazhal, Lebovka, & Vorobiev, 2003).
Les différentes charges des deux côtés de la membrane provoquent un
potentiel transmembranaire naturel dans la cellule. Lorsque la cellule est soumise à un
champ électrique externe, l’accumulation de charges sur les surfaces membranaires
induit l’augmentation du potentiel transmembranaire des deux côtés de la membrane
cellulaire (Fig.12). Après avoir dépassé une valeur critique d’environ 1 V du potentiel
transmembranaire, une répulsion se produit entre les molécules porteuses de charge
provoquant la réduction de l’épaisseur de la membrane qui forment des pores dans les
zones faibles. Cela induit une augmentation drastique de la perméabilité, facilitant
ainsi la libération de composés intracellulaires (Azmir, et al., 2013; J.Baraba,
Brianceau, Turk, Boussetta, & Vorobiev, 2015).
Figure 12 : Perméabilisation cellulaire selon la théorie de l’éléctrocompression

(Zimmermann , 1986).
21
La perméabilisation de la membrane dans un tissu végétal est temporaire

dans le cas d’une électroporation réversible et une formation des pores temporaires,
les molécules ne peuvent pas donc passer à travers elle (Fig.12). Une électroporation
irréversible se produit lorsque le champ électrique appliqué entraîne un changement
conformationnel, une fuite des composants cellulaires, une augmentation de taille et
de nombre de pores par rapport à la surface de la membrane, et donc une
déstabilisation conduit à la perte de vitalité cellulaire, ce qui provoque la libération
d’eau intracellulaire et de solutés y compris des métabolites secondaires, pour
migrer dans un milieu externe (ZELMAT, 2017).
L’électroporation des membranes cellulaires peut être réversibles ou
irréversibles selon l’intensité et la durée de l’application du traitement par champ
électrique pulsé (BOUSSETTA, LEBOVKA, VOROBIEV, ADENIER, BEDEL-
CLOUTOUR, & LANOISELLE, 2009).
Il dispose d’une chambre de traitement composée de deux électrodes où sont
placés les matériaux végétaux. Selon la conception de la chambre de traitement, le
procédé CEP peut fonctionner en mode continu ou discontinu (Azmir, et al., 2013).
C. Les paramètres opératoires influençant l’efficacité du CEP

L’efficacité du traitement CEP dépend strictement des paramètres du
processus, notamment :
1) Facteurs technologiques liés au processus

 L’intensité du champ électrique (E) et la consommation total d’énergie, qui
influence la cinétique de rupture. Il devrait donc exister une certaine valeur
optimale de E qui minimise la consommation d’énergie du traitement CEP
(Azmir, et al., 2013; ZELMAT, 2017). Les modes de CEP ont été classifiés
selon l’intensité comme étant faibles (E≤ 100 – 200 V/cm), modérés (E= 300
– 1500V/cm), et élevés (E ˃ 1500V/cm) (Bazhal, Lebovka, & Vorobiev,
2003) ;
 Durée de pulsation (t), intervalle entre les pulsations (Δt), nombre d’impulsions
(n), et forme d’impulsion. Donc le temps de traitement réel est : la durée × le
nombre d’impulsions, car il n’y a pas de traitement dans l’intervalle entre les
impulsions (Vorobiev & Lebovka, 2016). Dans le cas d’impulsions longues ou de
très forte amplitude, la membrane cellulaire est totalement détruite par une lyse
22
cellulaire, car la longue durée d’exposition à des fortes intensités d’impulsions

cause l’augmentation du nombre de charges électriques et de la pression
électrostatique de part et d’autre de la membrane, ce qui réduit encore l’épaisseur
de cette dernière et conduire à l’apparition des pores (Chopinet-Mayeux, 2013;
HAMDI , 2013).
 La température, peut causer des dommages aux éléments thermosensibles de
la structure cellulaire et peut conduire à la détérioration de la qualité du
produit (Bazhal, Lebovka, & Vorobiev, 2003; Azmir, et al., 2013; ZELMAT,
2017) ;
 La distance entre les deux barres du switch (Amiali, O. Ngadi, & Vijaya, 2006).
2) Facteurs physico-chimiques du produit traité ou du milieu
 Les constituants des aliments ou du milieu (Vorobiev & Lebovka, 2016) ;

 Les propriétés des matériaux à traiter (Azmir, et al., 2013);
 La conductivité électrique (ZELMAT, 2017) ;
 Le ph et la force ionique ;
 Type de solvant et sa concentration ;
 La présence de bulles d’air à l’intérieur de la chambre durant le traitement
(Vorobiev & Lebovka, 2016).
3) Facteurs biologiques
 Type et taille des cellules (Vorobiev & Lebovka, 2016).

Ces paramètres sont essentiels pour améliorer les procédés technologiques et
dans le choix d’un protocole optimal pour le traitement par CEP.
Si l’énergie E est faible, le temps total d’application du courant électrique
doit être assez long pour l’électroplasmolyse du tissu cellulaire (de l’ordre de 1s
ou plus) (ZELMAT, 2017).
D. Instrumentation du CEP
Pour traiter un échantillon par un champ électrique pulsé il faut réaliser
une installation électrique qui doit comporter les éléments suivants (Fig.13) :
(1) : Un générateur comprend à une source d’alimentation à haute tension de
champ électrique pulsé de 220V à 10 kV, génère le courant en alternatif. À cause
d’une haute tension à sa sortie, il est redressée par des diodes (12 diodes de 1 kV pour
23
chacune), qui règle le courant en mode alternatif au continu pour charger le

condensateur de stockage d’énergie, en plus d’une résistance pour limiter la charge
de courant, switch, une enceinte de sécurité et une sonde à haute tension (Amiali, O.
Ngadi, & Vijaya, 2006; Zelmat, Hadi, Tilmatine, & Benzohra, 2017; ZELMAT,
2017) ;
(2) : Une chambre de traitement en polypropylène, accompagnée de deux
électrodes en acier inoxydable. La fonction principale de cette chambre est de
délivrer un champ électrique pulsé aux matériaux traités. La forme et la construction
de la chambre de traitement dépendent du type de matériau qui va être traité.
Plusieurs modèles électriques différents ont été développés au cours de ces
dernières années (Amiali, O. Ngadi, & Vijaya, 2006; AOUIR, 2017) ;
(3) : Un oscilloscope digital est utilisé pour l’affichage et la lecture des
paramètres, à savoir : la tension (V), le courant (I), la fréquence (f) et la durée de
pulsation (t) grâce à une sonde de tension et de courant (ZELMAT, 2017).
Compteur LCR
Enregistreur de
données
Impulseur
Thermocouple
Echan
-tillon
Électrodes
Cellule de traitement
Figure 13 : Représentation schématique du dispositif expérimental utilisé dans

l’étude par CEP (Bazhal, Lebovka, & Vorobiev, 2003).
E. Les applications principales du CEP

L’emploi de champ électrique pulsé a fait l’objet de beaucoup des
travaux de recherches , dont il a été associé à des procédés de traitement et la
transformation des aliments solides en tant qu’alternative de prétraitement ou de
traitement non thermique et comme un utile pour améliorer ces processus.
Parmi ces traitements : le séchage à l’air libre et le séchage par

déshydratation osmotique assisté par CEP des fruits et légumes, l’extraction des
24
jus des fruits et légumes, le procédé de traitement des betteraves à sucre et des
noix de coco, l’extraction des métabolites intracellulaires de grande valeur, et le
pressage (Bazhal, Lebovka, & Vorobiev, 2003; Azmir, et al., 2013).
En outre, les possibilités d’application de la technologie de champ

électrique pulsé sont vastes dans des secteurs allant de l’agroalimentaire à la
médecine. Le CEP est considérée comme l’une des méthodes non thermiques les
plus prometteuses pour l’inactivation des microorganismes dans les aliments, la
pasteurisation, l’applications en médecine par exemple dans la thérapie de cancer par
l’électrochimiothérapie (ZELMAT, 2017).
Le CEP est également applicable aux matières végétales comme processus de

prétraitement avant l’extraction conventionnelle afin de réduire l’effort d’extraction,
et pour l’amélioration du rendement (Azmir, et al., 2013).
Cependant, le degré d’efficacité obtenu en utilisant le CEP ainsi que
l’optimisation des variables électriques étaient différents dans chaque application.
F. Les avantages du CEP

Les avantages évidents des applications du traitement électrique par CEP dans
l’industrie alimentaire sont :
 Méthode rentable : permet d’obtenir un rendement et un taux d’extraction plus

élevés, d’améliorer l’efficacité de certains extraits à basse température et
d’obtenir une stabilité élevée des composants bioactifs thermosensibles en mode
« froid » sans détérioration de la couleur, de la saveur, des vitamines et d’autres
nutriments importants (technologie à l’avantage d’être pratiquement isotherme :
l’augmentation de la température au cours du traitement est très faible, moins de
5°C) (Azmir, et al., 2013; Vorobiev & Lebovka, 2016) ;
 Méthode économique : dont elle permet de réduire le temps d’extraction, réduire
l’énergie consommable, des coûts d’exploitation faibles, méthode est simple et
ne nécessite pas d’équipement complexe et coûteux (ZELMAT, 2017) ;
 Méthode écologique : c’est une technologie verte sans déchets ;
 Technique permet une extraction « pure » et sélective, réduisant ainsi les étapes
de purification ultérieures (Vorobiev & Lebovka, 2016) ;
25
 Le CEP a été appliqué pour améliorer la libération des composés

intracellulaires des tissus végétaux en augmentant la perméabilité de la
membrane cellulaire (Azmir, et al., 2013).
26
CHAPITRE IV :
Optimisation de l’extraction
________________________________ CHAPITRE IV : Optimisation de l’extraction
1. Optimisation de l’extraction
Optimiser, selon Larousse est de donner à quelque chose, le rendement

optimal en créant les conditions les plus favorables. Qui fait donc que l’optimisation
de l’extraction des molécules bioactives à partir des végétaux consiste à trouver les
paramètres optimaux du traitement permettant d’assurer une haute qualité des produits
traités et extraites avec une consommation d’énergie minimale dans une courte durée
(Vorobiev & Lebovka, 2016).
Mais il reste encore un problème technique compliqué, c’est pour ça il est
nécessaire de travailler avec des « plans d’expérience » lorsqu’il s’agit d’une étude
pareil.
2. Plan expérimental
- Définition
Correspond à toutes les mesures d’organisation prises pour effectuer une
étude, donc il comprend le schéma expérimental qui englobe des essais bien organisés
d’une ou des études préliminaire, de manière à déterminer un nombre réduit d’essais
avec un maximum de précision. En résumé, le plan d’expérience organise la manière
dont les différents niveaux d’une ou des variables indépendantes sont répartis entre
les groupes de sujets (Jean-Paul L).
- Terminologie
Les termes universellement employés dans le domaine des plans d’expériences
sont : La grandeur d’intérêt, qui est la réponse à laquelle s’intéresse
l’expérimentateur, elle dépend de plusieurs variables qui sont appelés des facteurs.
Cette variance de la réponse est en relation avec les valeurs données aux facteurs pour
réaliser un essai, ces valeurs sont appelées niveaux (Fig.14), et qui vont être utilisé
pour limiter ses variations entre deux bornes : la borne inférieure est le niveau bas, et
la borne supérieure est le niveau haut (Goupy, 2006).
27
Figure 14 : Le domaine de variation du facteur.
- Types des plans d’expériences

Plusieurs types de plans expérimentaux selon le nombre de facteurs et le
nombre de niveaux dans chaque facteur (Tab.3), parmi ces plans :
Tableau 3 : les différents types des plans expérimentaux.
Type de plan Principe

Le plan factoriel complet Consiste à choisir des valeurs pour chacun des
facteurs en faisant varier simultanément tous les
facteurs, le nombre d’essais peut alors devenir très
grand.
Matrices de Hadamard Un plan pour 2, 3, 4 et 7 facteurs, permet d’avoir une
première évaluation des influences des facteurs sur la
réponse expérimentale avec très peu d’essais à
réaliser.
Réseaux de Doehlert Ils correspondent à un pavage hexagonal de
l’hyperespace de l’expérience.
Plan de Box-Behnken Il ne s’utilise qu’à partir de 3 facteurs, avec une
précision des points centraux.
Matrice de Hoke Permet des plans d’expériences à trois niveaux.
- Principe
La fixation des variables (facteurs) de l’étude expérimentale, et le choix des
valeurs de variances (niveaux) à partir des études préliminaire afin d’optimiser le
résultat de la grandeur d’intérêt (réponse).
28
- Intérêt d’utilisation
La fixation d’un plan d’expérience dans une étude d’optimisation est une étape
primordiale, pour la détermination de l’influence de multiples paramètres (facteurs)
sur une ou plusieurs propriétés étudiées (réponses) à travers d’une modélisation fiable
permet de réduire le nombre d’essais à ce qui est strictement nécessaire, avec comme
effet direct de minimiser les dépenses, en plus du gain de temps et d’amélioration de
la qualité du travail (GENDRE, SAVARY, & SOULIER, 2009). Il sert aussi à
déterminer des valeurs optimales de réglage de différents paramètres, pour obtenir une
valeur souhaitée sur un produit ou un service à mettre au point.
- Etapes
Pour fixer un plan d’expérience, il faut :
 Réaliser une recherche bibliographique pour identifier les différents paramètres
qui influencent le résultat, puis définir le nombre de valeurs à étudier pour chaque
facteur étudié à partir des études préliminaires ;
 Déduire le type de plans à réaliser qui dépend du nombre de facteurs, du nombre
de valeurs et les interactions possibles entre les facteurs ;
 Effectuer des essais en application le plan d’expérience choisit ;

 Analyser et interpréter les résultats par l’analyse de variance et le calcul de
régression linéaire en utilisant des logiciels spécifiques ;
 Modéliser la réponse en fonction de tous les paramètres ;
 Valider la modélisation par des expériences aléatoires de vérification ;
 Ajuster les facteurs pour optimiser la réponse en fonction de la modélisation

retenue.
- Application
La méthodologie du plan d’expérience s’applique dans de nombreux
processus, comme les essais cliniques dans le domaine médical, la mise au point des
produits agroalimentaires ou l’optimisation des procès.
29
CHAPITRE V : Techniques
de dosage des alcaloïdes
tropaniques
______________________________ Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques
1. Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques
Quelle que soit la méthode choisie pour extraire les alcaloïdes, ce ne sont pas
des produits purs qui sont obtenus mais des alcaloïdes totaux, mélanges complexes de
bases qui nécessitent une séparation (Bruneton J. , 2009).
Les mesures physiques dans les techniques analytiques ont été employées pour
l’analyse de l’hyoscyamine (atropine) et de la scopolamine car sont souvent plus
spécifiques et plus sensibles, et couramment appliquées sur des quantités inférieures
au milligramme comme les méthodes spectrométriques (ex : UV), les méthodes
électrochimiques (ex : l’électrophorèse), les tests immuno-enzymatiques (ex :
ELISA), mais il est fait appel de plus en plus, surtout pour des dosages dans les
milieux biologiques aux méthodes chromatographiques (Boros, Farkas, Jakabovà,
Bacskay, Kilàr, & Felinger, 2010).
Les méthodes chromatographiques utilisées pour étudier les quantités
d’alcaloïdes dans divers échantillons biologiques ont été représentées par la
chromatographie en couche mince (CCM), la chromatographie en couche mince haute
performance-densitométrie (CCMHP-densitométrie), la chromatographie en phase
gazeuse (CG), la chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (CG-
SM), et la chromatographie liquide haute performance en phase inversée avec
détection UV (RP-HPLC) (Boros, Farkas, Jakabovà, Bacskay, Kilàr, & Felinger,
2010; Jakabová, Vinczec, Farkasd, Kilár, Borosf, & Felingera, 2012).
Toutes ces méthodes chromatographiques ont le même principe de séparation
qui est basé sur les différentes affinités des composés à l’égard des deux phases de la
colonne de l’appareil (stationnaire et mobile).
L’échantillon est entrainé par la phase mobile au travers de la phase
stationnaire qui a tendance à retenir plus ou moins les composés de
l’échantillon à l’aide d’interactions comme les forces de Van der Waals ou les
liaisons hydrogène qui dépond de la nature des phases mobile et stationnaire , ce qui
crée une différence des vitesse de progression et de séparation des composés.
30
______________________________ Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques
1.1. Dosage des alcaloïdes tropaniques par la chromatographie phase liquide

à haute performance (HPLC)
L’analyse des alcaloïdes tropaniques par chromatographie liquide à haute

performance (HPLC) est devenue de plus en plus courante. Elle est considérée comme
une méthode fiable et sensible pour l’identification et la confirmation de l’atropine et
de la scopolamine dans des échantillons biologiques (Boros, Farkas, Jakabovà,
Bacskay, Kilàr, & Felinger, 2010), permet une bonne séparation du produit analysé et
son dosage sélectif à la sortie de l’appareil (Jakabováa, Vinczec, Farkasd, Kilár,
Borosf, & Felingera, 2012).
Une installation d’HPLC comporte divers modules spécialisés (Fig.15), reliés
entre eux par l’intermédiaire de canalisations de très faible diamètre interne pour
assurer la circulation de la phase mobile.
Elle est donc constituée d’un réservoir de phase mobile (solvants), une pompe,
un injecteur permet d’introduire le produit à analyser comporte couramment une
vanne à boucle d’échantillonnage, une colonne thermostatée sous forme de tube en
acier, un détecteur qui suit en continu l’apparition des solutés, et en fin un micro-
ordinateur permet de figurer les signaux captés sous forme de pics (Brand, 2014).
Figure 15 : Représentation schématique de la technique analytique par HPLC (Brand,

2014).
31
PARTIE II : Matériel et
méthodes
_________________________________________ PARTIE II : Matériel et méthodes
1. Objectif du travail expérimental
Le travail réalisé est pour but d’optimiser les rendements d’extraction des
alcaloïdes tropaniques à partir des feuilles de l’espèce végétale Datura stramonium L,
en utilisant deux nouvelles méthodes dites innovantes qui sont les ultrasons et les
champs électriques pulsés, hybridées à une extraction classique par solvant en milieu
acide puis dans un milieu alcalin pour renforcer l’extraction, ceci est fait à l’aide des
plans d’expériences qui vont permettre à la fin de mettre en évidence les paramètres
et les conditions expérimentaux du traitement qui ont donnés des meilleurs
rendements.
2. Matériel végétal
L’espèce végétale choisie est le Datura stramonium L connue par son nom
commun de stramoine, qui représente une source pratiquement illimitée de
métabolites secondaires en présentant un intérêt pharmaceutique majeur.
L’échantillon utilisé pour réaliser l’expérience est les feuilles de cette plante
qu’elle a été cultivée au niveau de la station expérimentale de l’ENSA (Ecole
Nationale Supérieure d’Agronomie), et récoltées en automne 2018.
Les feuilles récoltées ont été séchées dans l’étuve à 50 °C pendant 48 h
(Morsli A. , 2013), finement broyées par un broyeur électrique pour obtenir une
poudre fine (Fig.16), puis conservée dans un dessiccateur jusqu’à leur utilisation.
les feuilles de séchage dans l’étuve broyage la poudre des feuilles

Datura stramonium
Figure 16 : Préparation de la poudre de feuilles de Datura stramonium L.
32
3. Méthodes analytiques
3.1. Détermination de la teneur en eau
La teneur en eau dans l’échantillon utilisé dans ce travail est déterminée après
dessiccation de la poudre des feuilles met dans des plats d’évaporation en céramique
(Fig.17) par évaporation à la température de 100°C dans une étuve ventilée jusqu’à
poids constant.
Mesure du poids M1 Etuvage à 100°C Mesure du nouvel

par une balance de précission poids M2
Figure 17 : Dessication de la poudre pour la détermination de la teneur en eau.
La détermination du taux d’humidité se fait par le calcul de la différence de

poids avant et après la dessiccation selon la formule suivante :
H % = (M1-M2) / PE×100
H% : Teneur en eau (humidité).

M1 : Poids de la capsule + échantillon avant dessiccation.
M2 : Poids de la capsule + échantillon après dessiccation.
PE : La prise d’essai.
Nous avons déterminé la moyenne des pourcentages d’eau de 3 essais dans les
mêmes conditions.
La matière sèche (MS) est obtenue comme suit : MS % = 100- H% (Halmi,
2015).
3.2. Extraction des alcaloïdes totaux
Le protocole expérimental suivie dans notre étude est fixé sur la base d’un
travail qui a été fait par des étudiants de l’ESSAIA en 2019 sur l’extraction des
33
alcaloïdes tropanique à partir des feuille de la même plante Datura stramonium L, en

plus du protocole d’Amdoun (2009) et celui de Bruneton (2009) basé sur le principe
que les alcaloïdes se comportent comme des sels dans une solution acide et sont sous
forme organique dans une solution basique, complété par le protocole suivie par
l’étude de Shekhar, Brijesh, Thomas, & Colm (2015).
3.2.1. Optimisation de l’extraction assistée par l’ultrason (EAU)
L’extraction assistée par l’ultrason est une méthode hybride entre l’extraction
par les ultrasons, comme un prétraitement, et la méthode conventionnelle adaptée
(extraction solide-liquide) d’Amdoun (2009) pour but d’accélération et d’amélioration
du processus.
Le principe de l’extraction par ultrasons est donc de créer des bulles de

cavitation dans le solvant permettant d’accélérer l’extraction par la dénaturation,
destruction et la rupture des parois cellulaires des végétaux en modifiant la
perméabilité cellulaire par création de pores dans la membrane (sonoporation), et
donc la libération du contenu cellulaire en composés bioactifs dans le solvant
(Fig.18).
Figure 18 : Evolution d’une bulle de cavitation à proximité d’une cellule végétale

(Brianceau, 2015).
Cette étape a été effectuée au sein de Laboratoire de Recherche de

Technologies Alimentaires et Nutrition Humaine au niveau de l’Ecole Nationale
Supérieure d’Agronomie (ENSA).
Le traitement par les US est réalisé en utilisant un bain à ultrason
(KQ100DB, Chine) ayant une puissance de chauffage de 100 W et une fréquence de
42kHz (Fig.19).
34
Figure 19 : Bain à ultrason à gauche, et des échantillons à traités dans le bain à droite.
- Démarche de l’expérience :
 Des béchers en verre contenant la suspension de 200 mg de poudre de feuille de

Datura stramonium L avec 10 ml du mélange acidifié par l’HCl (à 0,1N)
d’éthanol-eau à 50% (Anx.1), et de quelques billes en verre pour renforcer
l’extraction, suivie par une légère agitation. Sont partiellement émergés dans le
bain ultrasonique à une température de 20°C , puis traités à des fréquences
théoriques de 20 kHz à 40 kHz pendant des durées de traitement allant de 20 min
à 80 min, en suivant les données du « plan factoriel complet » à deux variables
figurés dans les tableaux 4 et 5, afin d’obtenir un lot de 3 béchers pour chaque
fréquence.
 L’extraction des alcaloïdes totaux va être complétée par la méthode
conventionnelle solide-liquide.
Tableau 4 : Echantillons à traités par les US en fonction du temps de traitement et la

fréquence de sonication selon le plan factoriel complet.
Fréquence de sonication (KHz) / Temps de traitement (min)

Echantillons
valeur codée / valeur codée
US1 20 (-1) 70 (+1)
US2 20 (-1) 30 (-1)
US3 30 (0) 70 (+1)
US4 30 (0) 30 (-1)
US5 40 (+1) 30 (-1)
US6 40 (+1) 50 (0)
US7 30 (0) 50 (0)
US8 20 (-1) 50 (0)
US9 40 (+1) 70 (+1)
35
Tableau 5 : Echantillons à traités par les US organisés en fonction de la fréquence de

sonication.
Echantillons Fréquence de sonication (KHz) / Temps de traitement (min)
valeur codée / valeur codée
US2 30 (-1)
US8 20 (-1) 50 (0)
US1 70 (+1)
US4 30 (-1)
US7 30 (0) 50 (0)
US3 70 (+1)
US5 30 (-1)
US6 40 (+1) 50 (0)
US9 70 (+1)
3.2.2. Optimisation de l’extraction assistée par champ électrique pulsé

(EA-CEP)
L’objectif principal du prétraitement CEP est la destruction des cellules, la

plasmolyse et l’augmentation de la libération de liquide intracellulaire.
Sont des intensités de kilovolts qui sont envoyés à partir de l’appareil du CEP
à travers un champ de haute tension pendant des microsecondes sous forme
d’impulsions courtes à l’échantillon placé entre deux électrodes (Amiali, O. Ngadi, &
Vijaya, 2006).
Son application entraîne une augmentation de la conductivité électrique, de la
perméabilité de l’échantillon entier et de la diffusivité locale des solutés. Ce
traitement élimine donc la composante turgescence cellulaire de la texture et exerce
un effet estimable sur les propriétés viscoélastiques du tissu végétal (Vorobiev &
Lebovka, 2016).
Ce prétraitement a été effectué au sein de laboratoire de recherche de

technologies alimentaires et de nutrition humaine au niveau de l’Ecole Nationale
Supérieure d’Agronomie (ENSA).
L’équipement CEP utilisé dans cette expérimentation était ELCRACK®
HVP 5 (DIL, Quakenbrück, Allemagne) (Fig.20) composé de :
- Un générateur (1) de champ électrique pulsé de 10 kV ;
- Une chambre de traitement (2) en polypropylène à une distance de 0,5 cm entre
les deux électrodes en acier inoxydable, avec une tension d’impulsion maximale
36
variait de 1 à 6 kV, entraînant une intensité de champ électrique de 2 à 12 kV / cm

dans la cellule de traitement ;
- Une sonde de haute tension (3) (Tektronix, modèle P6015A 40 kV. 75 MHz, 100
M Ohm, USA) et à une sonde de courant (Pearson current monitor 410, USA) ;
- Un oscilloscope digital (4) (Siglent, SDI 102CML. Chine) utilisé pour l’affichage
et la lecture des paramètres: la tension (V), le courant (I), la fréquence(f), et la durée
de pulsation (t).
(1) (4)
(3)
(2)
Figure 20 : Instrumentation du CEP.
- Démarche de l’expérience :
Le traitement par CEP nécessite une préparation de l’échantillon dans la
chambre de traitement :
 Une prise d’essai de 200 mg de la poudre de feuille de Datura stramonium L est
mise dans la chambre de traitement (Fig.21), puis remplie par un volume de
7,5ml de la solution éthanol-eau acidifié par l’HCl (à 0,1N) de différentes
concentrations allant de 10 % à 90% selon l’essai et les conditions d’extraction de
chaque échantillon ;
37
Figure 21 : Préparation de la chambre de traitement.
 Après avoir bien fermer la chambre de traitement et régler l’échelle de lecture des
résultats de tous les paramètres sur l’oscilloscope, le traitement par le champ
électrique est commencé à des valeurs de 3kv/cm à 13kv/cm, avec une série de
nombre de pulsations appliqué pour chaque intensité de 5 à 35 impulsions
(Anx.2).
L’intensité du champ électrique, la concentration du solvant, le temps de
traitement et le nombre de pulsations pour le traitement statique de chaque
échantillon sont indiqués dans les tableaux 6 et 7 en suivant les données du plan
d’expérience à trois facteurs de « Box-Behnken ».
38
Tableau 6 : Plan d’expérience des 3 paramètres variables du traitement assisté par

CEP.
Fréquence Nombre de Concentration du

Echantillons électrique (KV) / pulsations/ valeur solvant (%) /
valeur codée codée valeur codée
CEP1 4 (-1) 20 (0) 30 (-1)
CEP2 7 (0) 20 (0) 50 (0)
CEP3 4 (-1) 20 (0) 70 (+1)
CEP4 10 (+1) 20 (0) 30 (-1)
CEP5 4 (-1) 10 (-1) 50 (0)
CEP6 10 (+1) 20 (0) 70 (+1)
CEP7 7 (0) 30 (+1) 30 (-1)
CEP8 7 (0) 30 (+1) 70 (+1)
CEP9 7 (0) 10 (-1) 70 (+1)
CEP10 7 (0) 20 (0) 50 (0)
CEP11 10 (+1) 30 (+1) 50 (0)
CEP12 7 (0) 20 (0) 50 (0)
CEP13 4 (-1) 30 (+1) 50 (0)
CEP14 7 (0) 10 (-1) 30 (-1)
CEP15 10 (+1) 10 (-1) 50 (0)
39
Tableau 7 : Plan d’expérience du traitement par CEP organisé en fonction de

la fréquence électrique.
Fréquence Nombre de Concentration du
Echantillons électrique (KV) / pulsations / valeur solvant (%) /
valeur codée codée valeur codée
CEP1 4 (-1) 20 (0) 30 (-1)
CEP3 20 (0) 70 (+1)
CEP5 10 (-1) 50 (0)
CEP13 30 (+1) 50 (0)
CEP2 7 (0) 20 (0) 50 (0)
CEP7 30 (+1) 30 (-1)
CEP8 30 (+1) 70 (+1)
CEP9 10 (-1) 70 (+1)
CEP10 20 (0) 50 (0)
CEP12 20 (0) 50 (0)
CEP14 10 (-1) 30 (-1)
CEP4 10 (+1) 20 (0) 30 (-1)
CEP6 20 (0) 70 (+1)
CEP11 30 (+1) 50 (0)
CEP15 10 (-1) 50 (0)
 Les échantillons traités par le CEP ont été récupéré dans des béchers, rincé avec
le même volume du solvant de concentration adéquate qu’ils y ont traité pour
récupérer le maximum de poudre ;
 Les échantillons récupérés vont ensuite subir une extraction solide-liquide selon
la même procédure d’extraction conventionnelle suivie pour les échantillons
prétraités par les US.
3.2.3. La suite de l’extraction par la méthode conventionnelle solide -

liquide en milieu acide puis en milieu alcalin
La suite du protocole d’extraction a été effectuée au sein de laboratoire de

valorisation à l’annexe de l’Ecole Supérieure des Sciences de l’Aliment et des
Industries Agroalimentaires (ESSAIA) au site BOURAOUI.
40
La méthode utilisée dans notre travail est une extraction solide-liquide pour
avoir déplacer les molécules actives de leur milieu solide (les cellules végétales) vers
le milieu liquide représenté par le solvant extractif. Ce dernier va permet de
sélectionner les molécules d’intérêt à travers des réactions chimiques et de les rend
facile à récupérés.
Le protocole avec une légère modification est le suivant :
 Récupération des échantillons traités par les US et le CEP ;
 Evaporation de l’éthanol dans l’étuve à 80°C pendant 15 à 30 min (Fig.22) ;
Figure 22 : Les échantillons après étuvage.

 Acidifier par une solution d’HCl à 0.1N jusqu’à un pH ≈1,88 ;
 Ajustement du pH du mélange à une valeur proche de 10 à l’aide d’un pH mètre
par une solution d’ammoniac (NH3) et laisser le mélange au moins 8 heures, le
temps pour que tous les alcaloïdes soient repassés du milieu acide sous la forme
des sels vers le milieu alcalin sous la forme organique ;
 Filtration sous vide à l’aide du papier filtre, et récupération du filtrat dans une
éprouvette pour mesurer le volume récupéré ;
 Addition au filtrat du chloroforme (CHCl3) à volume égal (v : v) suivi d’une
agitation pendant 10 min (Fig.23) ;
41
Figure 23 : Les échantillons après filtration et addition du chloroforme.

 Séparation des deux phases (chloroforme et solution minérale) dans une centrifuge
à 5000 tours pendant 10 min à 24°C ;
 Répétition des deux dernières étapes (1 fois) pour récupérer le maximum
d’extraits ;
 Mélange des deux phases organiques obtenues (les deux solutions contenant du
chloroforme + alcaloïdes) (Fig.24) ;
Figure 24 : Les échantillons après centrifugation.

 Addition d’une pincée de sel anhydre (Na2SO4 ou sulfate de sodium) pour
absorber les dernières microgouttelettes d’eau qui restent ;
 Filtration sous vide ;
 Le filtrat recueilli dans un ballon taré et évaporé à sec, afin de concentrer les
alcaloïdes à l’aide du rotavapeur réglé à 61 °C. Dans ces conditions le séchage
complet se fait après environ 5-10 min ;
 Après refroidissement, le ballon est pesé à nouveau. Le résidu sec (différence de
poids) représente les alcaloïdes totaux (Fig.25);
42
Figure 25 : Récupération des alcaloïdes totaux après rotavaporation.
Un schéma récapitulatif du protocole expérimental suivi est bien figuré dans la

figure 26 suivante.
43
Figure 26 : Schéma global explicatif du protocole expérimental de l’extraction des

alcaloïdes totaux à partir de la poudre des feuilles de la Datura stramonium L.
44
4. Dosage et identification de l’atropine et de scopolamine par la

chromatographie à phase liquide de haute performance (HPLC)
Afin de déterminer les alcaloïdes tropaniques, suivant le protocole

expérimental de (DEMIRCI, Albayrak, & Baydar, 2021), un système HPLC
(KNAUER) a été utilisé au niveau de laboratoire de recherche de technologie
alimentaire et sciences humaines à l’ENSA (Fig.27).
Figure 27 : Appareil HPLC.

La séparation de l’atropine et de la scopolamine a été effectuée par la colonne
HPLC C18 Dans le processus de séparation avec programme de gradient à un débit de
0,8ml /min, volume d’injection était de 20µl, température de la colonne était réglée à
40°C, longueur d’onde de lecture de 220 nm, de l’acide acétique de grade HPLC à 2%
(phase mobile A), et de l’acétonitrile grade HPLC à 100% (phase mobile B) ont été
utilisés. Le programme de gradient était le suivant :
Concentration du solvant 0-12% B 12-20% B 20-28% B 28-100%B
Temps 0-12min 12-13min 13-33min 33-48min
Les standards analytiques de scopolamine et d’atropine ont été préparés en différentes

dilutions et analysée par HPLC (Fig.28).
45
4.1. Préparation des solutions des standards
Figure 28 : Schéma de la préparation des standards (atropine et scopolamine) et des

dilutions.
Figure 29 : Préparation des standards et des dilutions.
4.2. Préparation des échantillons
 L’extrait sec a ensuite été dissous dans 20µl de méthanol (CH3OH) à grade
HPLC, pour l’analyse chromatographique par l’HPLC (Fig.30).
46
Figure 30 : Les alcaloïdes totaux récupérés dans le méthanol.

 Les standards et les échantillons ont été mis dans des petits flacons, puis placés
dans l’appareil pour être injectés automatiquement selon le programme de
gradient suivie (Fig.31).
Figure 31 : Les échantillons à l’intérieur de l’appareil HPLC.
5. Analyses statistiques
Les différents résultats de l’optimisation de l’extraction des alcaloïdes

totaux à partir de feuilles de Datura stramonium L par les plans d’expérience ont
été traités et complétés par une étude statistique de la variance en utilisant le
logiciel Statistica 10.
47
Pour l’optimisation, l’analyse a été effectuée par la Méthode de Surface de

Réponse (RMS) en utilisant le modèle du premier degré qui adapte un modèle
mathématique polynomial de premier degré dont l’équation est la suivante :
Où :
- Xi et Xj sont des variables (ou facteurs) indépendantes influençant la réponse Y ;
- β0, βij, βij, sont les coefficients de régression des paramètres pour des limites
d’interception, linéaires et d’interaction, respectivement ;
- k est le nombre de paramètres.
48
PARTIE III : Résultats et
discussions
_______________________________________ PARTIE III : Résultats et discussions
1. Optimisation de l’extraction assistée par ultrason

Dans le but d’optimiser et de déterminer les meilleurs conditions
opératoires donnant le meilleur rendement de l’extraction des alcaloïdes totaux
dans les feuilles de Datura stramonium L après traitement par ultrason. Nous avons
appliqué la méthodologie de la surface de réponse on choisissant le plan factoriel
complet.
1.1. Les facteurs et domaines étudiés

Nous avons choisi dans cette étude deux facteurs qui sont la fréquence de
sonication (kHz) et le temps de traitement (min), qui avait chacun trois niveaux codés
-1, 0, et +1 pour les niveaux faible, moyen et élevé respectivement (Tab.8).
Tableau 8 : Facteurs et domaines étudiés et leurs niveaux lors de l’extraction par US.
Les facteurs Les niveaux

(-1) (0) (+1)
Fréquence de 20 30 40
sonication (kHz)
Temps de 30 50 70
traitement (min)

plan factoriel complet
Les résultats obtenus du plan d’expérience sont exprimés en mg équivalent des

extraits sec des alcaloïdes totaux par gramme de la matière sèche (mg / g de MS), ils
sont présentés dans le tableau 9 et dans la figure 32 suivants.
49
Tableau 9: Résultats de l’optimisation de la teneur en alcaloïdes totaux par l’US.
Fréquence de
Temps de
sonication Extraits totaux
Expériences traitement (min)
(KHz) / valeur (mg/g de MS)
/ valeur codée
codée
1 -1 +1 29,994
2 -1 -1 39,992
3 0 +1 99,98
4 0 -1 19,996
5 +1 -1 49,99
6 +1 0 149,97
7 0 0 109,978
8 -1 0 19,996
9 +1 +1 79,984
Extraction
conventionne / / 9,998
lle
Extraits totaux (mg/g de MS)

180
160
140
120
100
80
60 Extraits totaux
40 (mg/g de MS)
20
0

extraction assisté par l’US.
Nous constatons d’après nos résultats de l’extraction assistée par ultrason

qu’elle est plus efficace que la méthode conventionnelle (témoin). En effet, les
rendements des alcaloïdes totaux extraits par l’US sont supérieurs au rendement
obtenu par la méthode conventionnelle.
50
D’après ces résultats on peut remarquer à priori que les réponses obtenus du
sixième, septième et troisième essai sont les plus élevés, donc on peut prétendre que
l’interaction entre les deux facteurs : en niveau élevé pour la fréquence et central de
l’intervalle pour le temps de traitement de l’essai 6, où la concentration est de
149,97mg/g de MS qui représente la meilleur teneur en alcaloïdes totaux.
1.3. Analyse de la variance et ajustement du modèle
La signification et la bonne fit du modèle ont été évaluées selon le test

ANOVA et les résultats sont présentés dans l’annexe 3, qui montre l’effet de chaque
paramètre sur le résultat final.
D’après les résultats obtenus, le « p » de la moyenne des résultats est inférieur

à 0,2 ce qui montre la signification du modèle utilisé, donc il y a un effet significatif
des paramètres choisis (fréquence de sonication et temps de traitement) sur le
rendement de l’extrait total des alcaloïdes. Ce qui est également prouvé par la valeur
de R² qu’elle est de 67%.
Nous remarquons aussi d’après le tableau des effets (Anx.3) que la fréquence
de sonication des ultrasons est le paramètre le plus influent sur le modèle.
L’équation du modèle est :
Extrait totaux= 66,65+ 63,32 F+ 14,99 F²+33,32T+39,99 T²
51
Figure 33 : Diagramme de Pareto des paramètres de l’US.

Le diagramme de Pareto (Fig.33) confirme les résultats obtenus dans le
tableau des effets : la fréquence de sonication est le paramètre le plus influent, et
montre son effet significatif en linéaire. Suivi du temps de traitement qui est à la
limite de la ligne d’influence des effets.
52
Figure 34 : Estimation de la qualité d’ajustement des points expérimentaux de l’US.

Le graphe (Fig.34) représente la courbe de la teneur en alcaloïdes par rapport
au modèle mathématique, montre les valeurs prévues par le modèle (la ligne rouge) et
les valeurs expérimentales (cercle bleu). À l’exception de la valeur dont les points
sont 0 et 40, toutes les autres valeurs expérimentales sont proches des valeurs prévues
par le modèle, prouvant la justesse du modèle.
1.4. Les surfaces de réponse pour les interactions entre les facteurs
Les diagrammes de surface des modèles quadratiques sont obtenus en

maintenant une variable constante et en faisant varier les autres paramètres
dans les limites expérimentales que nous avons choisi. Ils permettent d’illustrer les
effets linéaires, quadratiques et interactifs sur chaque variable de sortie.
Les diagrammes de surface des réponses que nous avons obtenues d’après le
plan d’expérience sont présentés dans la figure 35 en 3D, et la figure 36 en 2D.
53

totaux en fonction des deux facteurs étudiés pour l’US.
Le graphe de la surface de réponse en 3D montre bien l’influence des deux

variables sur la réponse ou nous constatons l’effet linéaire de la fréquence et l’effet
quadratique du temps de traitement.
- Quand la fréquence augmente, le résultat augmente ;
- Le résultat est au maximum quand le temps est proche sa la valeur centrale.
54

totaux en fonction des deux facteurs étudiés pour l’US.
La surface de réponse en 2D nous permet de constater que la réponse optimale

est à l’intérieur du domaine expérimental pour le temps de traitement prouvant la
justesse des niveaux des variables choisies avec une réponse optimale de 0,2. Et pour
la fréquence de sonication, sa réponse optimale est légèrement supérieure à la limite
maximale de notre intervalle, elle doit être environ 1,1 au lieu de 1.
Nous remplaçons les valeurs optimales des deux facteurs obtenus par le graphe
de la surface de réponse pour trouver le rendement optimale de l’extrait total des
alcaloïdes : qui égale à 159 mg /g de MS.
Extrait totaux= 66,65+ 63,32 F+ 14,99 F²+33,32T+39,99 T²
Extrait totaux= 66,65+ 63,32 *1,1+ 14,99 (1,1)²+33,32 *0,2 +39,99 *(0,2)²= 159 mg
/g de MS.
Il sera donc préférable de fixer la limite supérieure de la fréquence de sonication à une

valeur plus de 40 kHz en gardant le même intervalle pour le temps de traitement.
55
1.5. Discussion des résultats de l’US
La meilleure fréquence de sonication dans notre étude est de 40 KHz, avec un

temps de traitement de 50 min, donnent un meilleur rendement égale à 149,97 g/mg
de MS.
Les résultats de l’optimisation obtenus présentent une grande différence avec
des travaux de référence des autres méthodes :
Le meilleur rendement de Togolo et al. (2019) obtenu par une extraction
conventionnelle à partir des feuilles de Datura Innoxia Mill, était de 0,59 %. Et de
3,47mg/g MS après une extraction assistée par US faite par Bai et al. (2013).
D’après Djilani et al. (2006), le meilleur rendement en utilisant des solutions
de tensions actifs dans l’extraction assistée par US était de 0,25 g/ 100g, et de 0,22
g/100g dans l’extraction par Soxhlet.
En comparant notre étude avec celles de Djilani et al. (2006), Bai et al. (2013)
et Togolo et al. (2019), nous remarquons que notre résultat est beaucoup plus
supérieur à ceux des travaux précédents.
Nous pouvons conclure que le modèle expérimental pour l’optimisation choisi
dans notre travail est très rentable et efficace.
2. Optimisation de l’extraction assistée par champ électrique pulsé
Dans le but d’optimiser et de déterminer les meilleurs conditions

opératoires donnant le meilleur rendement de l’extraction des alcaloïdes totaux
dans les feuilles de Datura stramonium L après traitement par CEP. Nous avons
appliqué la méthodologie de la surface de réponse on choisissant le plan Box-
Behnken.
2.1. Les facteurs et domaines étudiés
Nous avons choisi dans notre étude trois facteurs qui sont la fréquence
électrique (kv), le nombre de pulsations et la concentration du solvant (%) qui avait
chacun trois niveaux codés -1, 0, et +1 pour les niveaux faible, moyen et élevé
respectivement (Tab.11).
56
Tableau 10 : Facteurs et domaines étudiés et leurs niveaux lors de l’extraction par

CEP.
Les facteurs Les niveaux

(-1) (0) (+1)
Fréquence électrique (kv) 4 7 10
Nombre de pulsations 10 20 30
Concentration du solvant (%) 30 50 70

plan Box-Behneken
Les résultats obtenus du plan d’expérience sont exprimés en mg équivalent des
extraits sec des alcaloïdes totaux par gramme de la matière sèche (mg / g MS), ils sont
présentés dans le tableau 12 et dans la figure 37 suivants.
57
Tableau 11: Résultats de l’optimisation de la teneur en alcaloïdes totaux par CEP.
Fréquence Nombre
Concentration Extraits
électrique de
du solvant totaux
Expériences (KV) / pulsations
(%) / valeur (mg/g de
valeur / valeur
codée MS)
codée codée
1 -1 0 -1 9,69766
2 0 0 0 13,59728
3 -1 0 1 3,69926
4 1 0 -1 14,89702
5 -1 -1 0 14,39752
6 1 0 1 13,19736
7 0 1 -1 11,9976
8 0 1 1 8,9982
9 0 -1 1 9,998
10 0 0 0 12,79744
11 1 1 0 15,29834
12 0 0 0 22,29474
13 -1 1 0 12,9974
14 0 -1 -1 11,79804
15 1 -1 0 32,59108
Extraction
/ / / 5,39892
conventionnelle
Extraits totaux (mg/g de MS)

40
35
30
Extraits
25
totaux
20 (mg/g de
15 MS)
10
5
0
EC

extraction assisté par l’US.
58
Nous constatons d’après nos résultats de l’extraction assistée par CEP, qu’elle
est plus efficace par rapport à la méthode conventionnelle (témoin).
D’après ces résultats on peut remarquer à priori que les réponses obtenus du
quinzième et douzième essai sont les plus élevés, donc on peut prétendre que
l’interaction entre les trois facteurs : en niveau élevé pour la fréquence, faible pour le
nombre de pulsationset central pour la concentration du solvant dans l’essai 15, où la
concentration est de 32,59108 mg/g de MS qui représente la meilleur teneur en
alcaloïdes totaux.
2.3. Analyse de la variance et ajustement du modèle
La signification et la bonne fit du modèle ont été évaluées selon le test

ANOVA et les résultats sont présentés dans l’annexe 4, qui montre l’effet de chaque
paramètre sur le résultat final.
D’après les résultats obtenus, le p˂0,2 ce qui montre la signification du

modèle utilisé, donc il y a un effet significatif des paramètres choisis (fréquence
électrique, le nombre de pulsations et la concentration du solvant) sur le rendement de
l’extrait total des alcaloïdes. Ce qui est également prouvé par la valeur de R² qu’elle
est de 71%.
Nous remarquons aussi d’après le tableau des effets que la concentration du

solvant du CEP est le paramètre le plus influent sur le modèle (le « p » le plus bas).
L’équation du modèle est :
ES= 13,29729+ 8,79799 F-1,13307 F²-4,87328 N-1,45820N²-3,12438C+6,99006 C²
59
Figure 38 : Diagramme de Pareto des paramètres du CEP.

Le diagramme de Pareto (Fig.38) confirme que la concentration du solvant est
le paramètre le plus influent avec un effet significatif en quadratique, suivi par la
fréquence électrique en linéaire et le nombre de pulsations aussi en linéaire.
60
Figure 39 : Estimation de la qualité d’ajustement des points expérimentaux (la teneur

en alcaloïdes par rapport au modèle mathématique) par CEP.
Le graphe (Fig.39) montre les valeurs prévues par le modèle (la ligne rouge) et
les valeurs expérimentales (cercle bleu). Toutes les valeurs expérimentales sont
proches des valeurs prévues par le modèle, prouvant la justesse du modèle.
2.4. Les surfaces de réponse pour les interactions entre les facteurs CEP
Les diagrammes de surface des réponses que nous avons obtenues d’après le
plan d’expérience sont présentés dans les figures suivantes.
61

totaux en fonction de nombre de pulsations et la fréquence électrique (kv) du CEP.
Le graphe de la surface de réponse en 3D (Fig.40) montre bien l’influence des

deux variables qui sont le nombre de pulsations et la fréquence électrique (kv) sur la
réponse où nous constatons l’effet linéaire de la fréquence et du nombre de
pulsations :
- Quand la fréquence augmente, le résultat augmente (relation proportionnelle) ;
- Quand le nombre de pulsations augmente, le résultat diminue (relation inversement

proportionnelle).
62

totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et la fréquence électrique (kv)
du CEP.

deux variables qui sont la concentration du solvant (%) et la fréquence électrique (kv)
sur la réponse ou nous constatons l’effet linéaire de la fréquence et l’effet quadratique
de la concentration du solvant :
- Quand la fréquence augmente, le résultat augmente (relation proportionnelle) ;
- Le résultat est au maximum quand la concentration du solvant est proche de sa

valeur centrale (relation quadratique).
63

totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et le nombre de pulsations du
CEP.

deux variables qui sont la concentration du solvant (%) et le nombre de pulsations sur
la réponse où nous constatons l’effet linéaire du nombre de pulsations et l’effet
quadratique de la concentration du solvant :
- Quand le nombre de pulsations augmente, le résultat diminue (relation inversement

proportionnelle) ;
- Le résultat est au maximum quand la concentration du solvant est proche de sa

valeur centrale (relation quadratique).
64

totaux en fonction du nombre de pulsations et de la fréquence électrique (kv) du CEP

totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et de la fréquence électrique
(kv) du CEP.
65

totaux en fonction de la concentration du solvant (%) et du nombre de pulsations du
CEP
D’après les surfaces de réponses en 2D (Fig.43, Fig.44 et Fig.45), nous

constatons que le résultat optimal est à l’extérieur du domaine expérimental.
Donc, pour atteindre l’optimum du rendement des alcaloïdes totaux par

l’extraction assistée par CEP, il sera nécessaire de modifier les niveaux des variables
en augmentant la fréquence plus de notre limite supérieure de 10 kv, en diminuant le
nombre de pulsations que notre limite inférieure de 10 pulsations, et en gardant les
mêmes niveaux pour la concentration du solvant.
2.5. Discussion des résultats de CEP
La meilleure fréquence électrique dans notre étude est de 10 kv, avec un

nombre de pulsations de 10 et une concentration de solvant de 50 %, donnent un
meilleur rendement égal à 32,59108 g/mg de MS.
Les résultats de l’optimisation obtenus présentent une grande différence avec
les travaux de référence des autres méthodes :
66
Selon les études de Baiet al. (2013) sur les racines de Aconitum coreanum, la
quantité des alcaloïdes totaux extraits par le champ électrique pulsé est de 3,94 mg / g
MS.
Les résultats obtenus dans notre étude sont meilleurs que les ceux des études
précédentes, ce qui affirme la fiabilité du modèle expérimental pour l’optimisation
choisi dans notre travail.
Les différences observés entre les résultats de la présente étude (US et CEP) et
celles rapportées peuvent être attribuées à divers facteurs tel que la méthode
d’extraction utilisée, le degré de maturité, les conditions climatiques et géométriques,
la technique de conservation de la plante.
3. Dosage des alcaloïdes tropaniques par HPLC
Le dosage des alcaloïdes tropaniques n’a pas donné de résultats à cause d’un
problème de réglage de l’appareil récemment installé.
67
CONCLUSION
____________________________________________________________ Conclusion
Conclusion
Le Datura stramonium est une plante médicinale de la famille de Solanaceae

intéressante par sa composition alcaloïdique qui a un très large éventail d’activités
biologiques.
L’extraction des alcaloïdes est une étape cruciale pour la valorisation de ces
principes actifs, elle dépond du choix de la méthode et du solvant les plus efficaces et
les plus standards pour leur extraction optimale.
Dans ce travail, nous avons procédé à l’extraction d’alcaloïdes totaux à partir
des feuilles de Datura stramonium L, assistées par deux méthodes innovantes : le
champ électrique pulsé (CEP) et l’ultrason (US). Ceci dans le but, d’élucider l’effet
des variations des paramètres de chaque méthode innovante sur les rendements en
extrait sec d’alcaloïdes totaux, en se basant sur deux plans d’expériences : Plan de
Box-Behnken et le plan factoriel complet respectivement.
L’analyse des résultats ont révélés que les feuilles de Datura stramonium L
sont très riches en alcaloïdes totaux :
Le meilleur rendement 149,97 g/mg de MS, obtenu par la méthode

d’extraction assistée par ultrason (40 KHz, 50 min), suivie par la méthode
d’extraction assistée par champs électrique pulsé (10 kV, 10 pulsations, et 50% de
solvant) avec un rendement de 32,58108 g/mg de MS.
Pour une extraction optimale et efficace des alcaloïdes totaux il est préférable
de garder les mêmes paramètres avec les mêmes niveaux de notre étude concernant
l’extraction assistée par US, et en augmentant la fréquence, diminuant le nombre de
pulsations, et en gardant les mêmes niveaux pour la concentration du solvant durant
l’extraction assistée par CEP.
Pour cela, ce model pourrait être exploitable dans plusieurs applications

industrielles afin d’obtenir les meilleurs rendements en alcaloïdes.
En tenant compte que la teneur des alcaloïdes totaux dépond de nombreux

facteurs intrinsèques (génétique) et extrinsèques (conditions climatiques et facteurs
géographiques).
Au terme de ce travail, il serait préférable de :
68
____________________________________________________________ Conclusion
- Réajuster les limites des paramètres étudiés en se basant sur les résultats
donnés par les plans d’expérience.
- Evaluer et identifier les différents composés bioactifs de nos extraits totaux

d’alcaloïdes en utilisant des techniques chromatographiques (HPLC, CPG, CG-
MS…).
- La purification de ces extraits afin de son servir dans plusieurs domaines

médicales, pharmaceutiques et industriels.
- Etudier d’autres paramètres qui peuvent influencer le rendement de

l’extraction.
69
Références bibliographiques
______________________________________________ Références bibliographiques
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77
ANNEXES
______________________________________________________________ Annexes
Annexes
Annexe 1 : Produits chimiques
L’ensemble des solutions et des solvants utilisés dans l’extraction sont :

- Les solutions : Le chloroforme pur, le dichlorométhane pur, l’ammoniac pur, une
solution d’acide chlorhydrique (HCl) à 0,1N, et en fin des solutions d’éthanol-eau
acidifiés à trois concentrations : 30%, 50%, et 70%.
- Les produits chimiques : le sel d’anhydre (sulfate de sodium Na2SO4).
Tous les produits chimiques sont obtenus à partir des laboratoires de notre
école (ESSAIA).
1.1. Préparation de la solution d’HCl à 0,1N
En prenant en considération les propriétés physico-chimiques de l’HCl

commercial trouvé dans le laboratoire (sa densité « d », sa masse molaire « M », et sa
pureté « P »), la préparation de la solution d’HCl à 0,1N consiste à calculer le volume
« Vi » prélevé de la solution mère afin d’obtenir une solution fille de concentration
égal à 0,1N en basant sur l’équation suivante :
𝐂𝐟 × 𝐕𝐟 × 𝐌
𝐕𝐢 (𝐜𝐦𝟑) =
𝛒𝟎 × 𝐝 × 𝐏
1.2. Préparation des solutions éthanol-eau acidifié
Sur la base de la « Table de Gay- Lussac » (Fig.46), appelée aussi « Table de

mouillage de l’alcool », c’est une table pour la dilution de l’alcool en indiquant la
quantité en ml de l’eau ajouté à 100ml d’alcool, en prenant en considération la
concentration initial de ce dernier (sa pureté indiquée sur l’étiquette), et la
concentration final (dans notre cas 30%,50%, et 70%). Les solutions obtenues
d’éthanol-eau ont été par la suite acidifiées par la solution de l’HCl à 0,1N (Fig.47).
______________________________________________________________ Annexes
Figure 46 : Table de Gay- Lussac affiché dans le laboratoire.
Figure 47 : Ensemble des solutions préparées.

______________________________________________________________ Annexes
Annexe 2 : Traitement par CEP affiché sue l’écran de l’oscilloscope.

Annexe 3 : Effet et coefficients estimés pour la réponse du rendement de
l’extraction des alcaloïdes par US.
EffectEstimates; Var.:Extraits totaux (mg/g de MS); R-sqr=,6746;

Adj:,34921 (Spreadsheet34) 2 3-level factors, 1 Blocks, 9 Runs; MS
Residual=1366,12 DV: Extraits totaux (mg/g de MS)
Factor -80,% +80,% Std.Er -80,% +80,%
Std.Er
Effect t(4) p Cnf.Li Cnf.Li Coeff. r. Cnf.Li Cnf.Li
r.
mt mt Coeff. mt mt
66,653 12,320 5,4100 0,0056 47,763 85,543 66,653 12,320 47,763 85,542
Mean/Interc.
33 35 18 54 7 0 33 35 7 98
(1)Fréquence
63,320 30,178 2,0981 0,1038 17,050 109,59 31,660 15,089 54,795
de sonication 8,5253
67 58 99 64 7 07 33 29 33
(KHz)(L)
Fréquence de - -
14,997 26,135 0,5738 0,5968 55,068 7,4985 13,067 27,533
sonication 25,074 12,537
00 42 19 13 0 0 71 99
(KHz)(Q) 0 0
(2)Temps de -
33,326 30,178 1,1043 0,3314 79,596 16,663 15,089 - 39,798
traitement 12,943
67 58 15 16 7 33 29 6,4717 33
(min)(L) 3
Temps de
39,992 26,135 1,5301 0,2007 - 80,063 19,996 13,067 - 40,031
traitement
00 42 84 15 0,0790 0 00 71 0,0395 49
(min)(Q)
Annexe 4 : Effet et coefficients estimés pour la réponse du rendement de
l’extraction des alcaloïdes par CEP.
EffectEstimates; Var.:Extraits totaux (mg/g de MS); R-sqr=,71599;

Adj:,50297 (Spreadsheet63) 3 3-level factors, 1 Blocks, 15 Runs; MS
Residual=21,1109 DV: Extraits totaux (mg/g de MS)
Factor -80,% +80,% Std.Er -80,% +80,%
Std.Er
Effect t(8) p Cnf.Li Cnf.Li Coeff. r. Cnf.Li Cnf.Li
r.
mt mt Coeff. mt mt
Mean/Interc 13,297 1,3263 10,025 0,0000 11,444 15,149 13,297 1,3263 11,444 15,149
. 29 64 37 08 60 98 29 64 60 98
(1)Fréquenc
8,7979 3,2489 2,7079 0,0267 4,2598 13,336 4,3989 1,6244 2,1299 6,6680
e électrique
9 15 8 42 6 12 9 58 3 6
(KV)(L)
Fréquence - - - - -
2,3911 0,6482 2,2069 1,1955 1,1034
électrique 1,1330 0,4738 4,4730 0,5665 2,2365
37 62 1 68 6
(KV)(Q) 7 6 4 3 2
(2)Nombre
- - - - - - -
de 3,2489 0,1720 1,6244
4,8732 1,4999 9,4114 0,3351 2,4366 4,7057 0,1675
pulsations 15 11 58
8 7 1 4 4 0 7
(L)
Nombre de - - - - -
2,3911 0,5588 1,8817 1,1955 0,9408
pulsation 1,4582 0,6098 4,7981 0,7291 2,3990
37 90 8 68 9
(Q) 0 4 8 0 9
(3)Concentr
- - - - -
ation du 3,2489 0,3643 1,4137 1,6244 0,7068
3,1243 0,9616 7,6625 1,5621 3,8312
solvant 15 79 6 58 8
8 7 1 9 5
(%)(L)
Concentrati
on du 6,9900 2,3911 2,9233 0,0191 3,6500 10,330 3,4950 1,1955 1,8250 5,1650
solvant 6 37 2 93 8 04 3 68 4 2
(%)(Q)

Optimisation D'extraction Des Alcaloïdes Tropaniques À Partir Des Feuilles de Datura Stramonium Assistée Par Champ Électrique Pulsé Et Ultrasons

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‫الجــمــهوريـــة الجـــزائـــريـــة الــديــمـــقـــراطيــــة الشعــــبيــــــة‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

‫المدرسة العليا في علوم الغذاء والصناعات الغذائية‬

Mémoire de Fin d’Études

Devant le Jury composé de :

Nous tenons à remercier notre co-encadreur Monsieur AMIALI Malek, professeur et

Nos remerciements sont s’adressés également à notre co-encadreur Madame

Sans oublier Madame DEKHIR Hayate, ingénieur de laboratoire de recherche des

Avec toutes mes gratitudes, je dédie ce modeste travail à :

Les plus chers, mes parents, que nulle dédicace ne puisse

exprimer mes sincères sentiments, pour leur confiance,

encouragement, patience illimitée, et pour leurs sacrifices

durant toute ma vie pour me permettre de suivre mes

études dans les meilleures conditions possibles.

Mes sœurs et mon petit frère, qui m’ont accompagné, motivé,

et soutenu sans cesse.

A ma formidable amie et binôme Anissa, qui avec elle j’ai

partagé tous les bons et les mauvaise moments durant la

réalisation de ce travail, pour son esprit motivant, sa

patience et son soutien.

Toute ma famille, proches, mes enseignants, mes amies et

mes collègues de promotion.

me voir arriver à ce stade.

Je dédie ce modeste travail et ma profonde gratitude

A ceux qui me sont chers au monde :

A mes chers parents, pour tous leurs sacrifices, leur amour,

leur tendresse, leur soutien et leurs prières tout au long de

À mes chères sœurs, pour leurs encouragements dans les

moments difficiles ; merci pour votre amour.

À mon cher petit frère, je lui souhaite tout le succès pour

les bons et les mauvaise moments durant la réalisation de ce

travail, pour son esprit motivant, sa patience et son soutien.

À mes enseignants, mes amies et mes collègues de promotion

Table des matières

Table des matières......................................................................................................... vi

Liste des tableaux .......................................................................................................... ix

Liste des figures ............................................................................................................. x

Liste des abréviations ................................................................................................. xiii

Liste des Annexes ........................................................................................................ xv

PARTIE I: Synthèse bibliographique

CHAPITRE I : Datura stramonium L

1. Présentation de la plante ......................................................................................... 3

2. Classification systématique ................................................................................. 4

3. Origine et répartition .............................................................................................. 4

4. Datura stramonium en Algérie ............................................................................... 6

5. Usage de Datura stramonium L.............................................................................. 6

CHAPITRE II: Molécules bioactives

1. Les molécules bioactives de la Datura stramonium L ........................................... 7

1.1. Les alcaloïdes .................................................................................................. 7

1.2. Les alcaloïdes tropaniques .............................................................................. 7

1.2.1. Atropine (D, L-hyoscyamine) .................................................................. 8

1.2.3. Scopolamine (L- hyoscine) ...................................................................... 9

CHAPITRE III: Les techniques d’extraction des alcaloïdes

1.1. Les méthodes conventionnelles ..................................................................... 11

1.1.1. Extraction par solvants ........................................................................... 12

1.1.2. Inconvénients des méthodes conventionnelles ...................................... 13

1.2. Les méthodes non conventionnelles .............................................................. 13

1.2.1 Extraction assistée par ultrasons (EAU) ................................................ 14

1.2.2. Extraction assistée par champ électrique pulsé (EA-CEP) .................... 19

CHAPITRE IV: Optimisation de l’extraction

1. Optimisation de l’extraction ................................................................................. 27

2. Plan expérimental ................................................................................................. 27

CHAPITRE V: Techniques de dosage des alcaloïdes tropaniques