Rapport de la sortie

L’Institut National de Recherche et

d’Analyse Physico-chimique
(INRAP)

Réaliser par :
Khemiri Khalil
MP1SGIE
I. Remerciement..........................................................................................................3
II. Introduction.............................................................................................................4
III. Cadre géographique.............................................................................................5
IV. Objectifs de la sortie............................................................................................5
V. La chromatographie.................................................................................................5
1. Définition................................................................................................................6
2. Types de chromatographies.....................................................................................6
a. Selon la nature de la phase mobile......................................................................6
b. Selon le type d’interaction...................................................................................6
c. Selon le type du support......................................................................................6
d. Selon les méthodes couplés.................................................................................6
VI. Laboratoire d’analyse par spectrométrie de masse..............................................7
1. Structure d’un spectromètre de masse.............................................................7
2. Domaines d’applications.................................................................................8
VII. Laboratoire d’analyse par chromatographie en phase gazeuse...........................8
1. Principe........................................................................................................9
2. Appareillage................................................................................................9
a. Le gaz vecteur........................................................................................10
b. Système d’injection...............................................................................10
c. La colonne.............................................................................................10
d. Le Four..................................................................................................11
e. Le détecteur...........................................................................................11
3. Domaine d’application..............................................................................12
VIII. Laboratoire d’analyse par chromatographie ionique.........................................12
1. Principe et définition..........................................................................12
2. Appareillage.......................................................................................12
3. Domaines d’application......................................................................13
IX. Conclusion.........................................................................................................13
 I. Remerciement

Je tiens à remercier vivement mon professeur à la faculté Madame Houyem Snani

pour son accueil, le temps passé ensemble, le partage de ses connaissances et aussi à sa
confiance.

Je veux aussi exprimer mes remerciements à tous les professeurs et aux cadres
administratifs de ma faculté, qui m’ont fourni les outils nécessaires au bon
déroulement des leçon set pour la qualité de l’enseignement.
II. Introduction
L’Institut National de Recherche et d’Analyse Physico-Chimique (INRAP) a été crée
en janvier 1995 (loi n°95-4 du 2 janvier 1995) dans le but de doter la Tunisie de
moyens humains et matériels nécessaires pour effectuer des analyses complexes,
améliorer le niveau du savoir-faire tunisien en matière d’analyse, réaliser des
expertises dans les domaines de sa compétence et développer la coopération avec
d’autres pays dans le domaine de l’analyse physico-chimique. Etant à vocation
nationale, l’INRAP met les moyens dont il dispose au service des secteurs socio-
économiques tunisiens, qu’ils soient publics ou privés. De ce fait, il est appelé à
répondre aux demandes exprimées par ces secteurs pour réaliser les analyses physico-
chimiques dont ils ont besoin à différents titres.

Laboratoire est accrédité par la norme internationale iso 17025

III. Cadre géographique
Itinéraire : faculté des sciences de Bizerte Institut national de recherche et
d’analyse physico-chimique

*Notre trajet est représenté sur la carte ci-dessous par la couleur bleue

IV. Objectifs de la sortie

- Connaitre les différents types de chromatographie, leurs principes et leurs
domaines d’application
- Reconnaissance des appareils de chromatographies
- La structure et le domaine d’application du spectromètre de masse

V. La chromatographie
 1. Définition
La chromatographie est une méthode séparative qui permet l'identification et le dosage
des différents composés d'un mélange. Le rôle de la chromatographie est la séparation
des composés selon leurs affinités vis-à-vis la phase stationnaire et la phase mobile.
Ces composés sont ensuite arrivés à un détecteur qui est le spectromètre de masse.

2. Types de chromatographies

a. Selon la nature de la phase mobile

 Chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC).
 Chromatographie en phase gazeuse (CPG ou) également appelée CPV
(chromatographie en phase vapeur).
 Chromatographie en phase liquide (CPL ou LC).
 Chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP ou HPLC).
 Chromatographie en phase supercritique (CPS ou).

b. Selon le type d’interaction

 Chromatographie d'adsorption/d'affinité.
 Chromatographie de partage.
 Chromatographie à échange d'ions.
 Chromatographie chirale (qui est, soit de la CPG, soit de la CPL).
 Chromatographie d'exclusion stérique (CES ou SEC).

c. Selon le type du support

 Chromatographie sur colonne, regroupant notamment chromatographie en
phase liquide à haute pression (HPLC) et chromatographie en phase
gazeuse (CPG) : la phase stationnaire est dans un tube étroit et la phase mobile
progresse par gravité ou différence de pression.
 Chromatographie planaire (qui recouvre CCM et chromatographie sur papier) :
la phase stationnaire est sur la surface d'un support plat (CCM) ou dans une
feuille de cellulose poreuse (chromatographie sur papier) ; la phase mobile se
déplace par capillarité ou par gravité.

d. Selon les méthodes couplés

 Pour améliorer la qualité de la séparation et de l'identification, de nouveaux
appareils permettent :
 de coupler deux types de chromatographies (chromatographie
bidimensionnelle)
 d'associer la séparation chromatographique à une autre technique d'analyse telle
que la spectrométrie de masse (méthodes GC-MS et LC-MS).
VI. Laboratoire d’analyse par spectrométrie de masse
Dan ce premier laboratoire en va étudier le spectromètre de masse, connaitre sa
structure et ses domaines d’applications.

La spectrométrie de masse est une technique physique d'analyse permettant de détecter

et d'identifier des molécules d’intérêt par mesure de leur masse, et de caractériser
leur structure chimique. Son principe réside dans la séparation en phase gazeuse de
molécules chargées (ions) en fonction de leur rapport masse/charge

Ainsi les techniques de séparation dépend de molécule qu’on souhaite analyser, on a

soit :

 La chromatographie en phase liquide couplé à une spectrométrie de masse

(molécule non volatile)
 La chromatographie en phase gazeuse couplé à une spectrométrie de masse
(molécule volatile)

Le spectromètre de masse est un détecteur universel.

Chromatographe en phase gazeuse couplé à un spectromètre de masse (GC-MS)

1. Structure d’un spectromètre de masse

Les molécules qui sont élué du chromatographe seront par la suite analyser par le
détecteur en 3 phases alors que le spectromètre de masse est composé de 3 parties :

 La source d’ionisation qui assure l’ionisation : elle consiste à vaporiser les

molécules et à les ioniser. Une source d'ionisation peut être utilisée soit en
mode positif pour étudier les ions positifs, soit en mode négatif pour étudier les
 ions négatifs. Plusieurs types de sources existent et sont utilisés en fonction du
résultat recherché et des molécules analysées :
 l'ionisation électronique (EI), l'ionisation chimique (CI) et la désorption-
ionisation chimique (DCI),
 le bombardement par atomes rapides (FAB), atomes métastables (MAB) ou
ions (SIMS, LSIMS),
 le couplage plasma inductif (ICP),
 l'ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI) et la photo-ionisation à
pression atmosphérique (APPI),
 l'électro nébulisation ou électro spray (ESI),
 la désorption-ionisation laser assistée par matrice (MALDI), activée par une
surface (SELDI) ou sur silicium (DIOS),
 l'ionisation-désorption par interaction avec espèces métastables (DART),
 la désorption-ionisation sur silicium (DIOS)

 Analyseur : il sépare les ions en fonction de leur rapport masse/charge (m/z). Il

existe des analyseurs basse résolution : le quadripôle ou quadripôle (Q), le piège
à ions 3D (IT) ou linéaire (LIT), et des analyseurs haute résolution, permettant
de mesurer la masse exacte des analytes.
 Détecteur : le détecteur transforme les ions en signal électrique. Plus les ions
sont nombreux, plus le courant est important. De plus, le détecteur amplifie le
signal obtenu pour qu'il puisse être traité informatiquement.

Le spectromètre de masse est un détecteur universel.

Les avantages de la spectrométrie de masse, par rapport aux autre techniques

d’analyse, sont sa versatilité, sa sensibilité sa capacité à être couplée aux techniques
séparatives.

Il existe différents types d’analyseurs de masse : simples quadripôle (SQ), triple

quadripôle (QQQ), temps de vol (TOF), piège à ions (IT) nous les utilisons selon
l’utilité.

2. Domaines d’applications

 Analyse des résidus des médicaments vétérinaires

 Analyse des contaminants

VII. Laboratoire d’analyse par chromatographie en phase gazeuse

La chromatographie en phase gazeuse (CPG) (GC) est une technique de séparation
d’un mélange de molécules volatiles, appelées ici « analytes ».
Elle est utilisée dans des domaines très variés, tels que la parfumerie, l’œnologie,
l’industrie pétrolière, la biologie, la chimie fine et l’industrie des matières plastiques.

1. Principe
La CPG repose sur l’équilibre de partage des analytes entre une phase stationnaire et
une phase mobile gazeuse. La séparation des analytes repose sur la différence
d’affinité de ces composés pour la phase mobile et pour la phase stationnaire.

Le mélange à analyser est vaporisé puis transporté à travers une colonne renfermant
une substance liquide ou solide qui constitue la phase stationnaire. Le transport se fait
à l'aide d'un gaz inerte, appelé « gaz vecteur », qui constitue la phase mobile.

Plus la molécule a d’affinité pour la phase stationnaire, moins elle est entraînée par le
gaz vecteur et donc plus elle est retenue sur la colonne. Ainsi, sur colonne polaire, les
analytes apolaires sortent en premier, alors que sur colonne apolaire, les analytes
polaires sortent en premier.

2. Appareillage
L’appareil utilisé pour réaliser une analyse par chromatographie en phase gazeuse est
appelé chromatographe.

Chromatographe en phase gazeuse

 Schéma d’un chromatographe

a. Le gaz vecteur
Le gaz vecteur est le gaz qui circule à l’intérieur du chromatographe, entraînant les
analytes à travers la colonne, depuis l’injecteur jusqu’au détecteur. Son choix dépend
du type de détecteur utilisé ; cela peut être par exemple de l’hélium, de l’azote, de
l’argon ou de l’hydrogène.

b. Système d’injection
Ce système permet à la fois l’introduction de l’échantillon dans la colonne du
chromatographe, ainsi que la volatilisation des analytes.

Certains injecteurs peuvent être munis d’une fonction « Split/Splitless ». La fonction

« split » permet de ne pas injecter la totalité de l’échantillon (division)

Split : avec division

Splitless : sans division

c. La colonne
Il existe deux types de colonnes :

 les colonnes remplies

 les colonnes capillaires
 Colonne capillaire

d. Le Four
La colonne est contenue dans un four de type chaleur tournante, dont la température
est précisément ajustable (typiquement entre 20 °C et 350 °C) et programmable. Les
températures utilisables en pratique dépendent des domaines de stabilité en
température de la colonne utilisée, et de ceux des composés analysés.

e. Le détecteur
En sortie de colonne, les analytes rencontrent le détecteur, aujourd’hui généralement
couplé à un enregistreur numérique du signal qui permet son traitement. Cet élément
mesure en continu une grandeur proportionnelle à la quantité des différents analytes. Il
en existe de nombreux modèles, tels que :

 Le FID
 ECD
 TCD

- le diagramme obtenu par chromatographie est appelé chromatogramme.

- L e temps (axe des abscisses) et l’intensité du signal (axe des ordonnes).

 3. Domaine d’application
Ce labo assure :

- l’analyse des pesticides dans les produits d’origines végétales

- Analyse des solvants résiduels dans les produits pharmaceutique
- Analyse des promoteurs de croissance

VIII. Laboratoire d’analyse par chromatographie ionique

1. Principe et définition
Le principe de la chromatographie ionique est basé sur les propriétés des résines
échangeuses d’ions qui permettent une fixation sélective des anions ou des cations
présents dans une solution. Sur la résine échangeuse d’ions conditionnée sous forme
d’une colonne chromatographie circule en permanence un éluant. La solution à
analyser est injectée et les ions sont fixés sélectivement sur la colonne. Les ions sont
ensuite progressivement décrochés en fonction de leur taille, leur charge et leur degré
d’hydratation. Chaque espèce ionique est séparée et est détectée par conductimétrie à
la sortie de la colonne. La concentration de l’espèce dans la solution est directement
proportionnelle à la conductivité. Des colonnes différentes sont utilisées pour analyser
les anions et cations.

Le principe de fonctionnement est basé sur la séparation des ions au travers d’une
colonne chargée soit positivement, dans le cas d’une colonne de séparation des anions,
soit négativement dans le cas d’une colonne de séparation de cations. Les ions à doser
sont séparés sur la colonne. Chaque ion a un temps de rétention dans la colonne qui lui
est caractéristique.

2. Appareillage
Tout appareil de chromatographie ionique comporte les éléments suivants :
  Un ou plusieurs réservoirs de phase mobile contenant soit une base (analyses
des anions) soit un acide (analyse des cations) et de l’eau ultra pure pour les
dilutions.
 Un système d'injection comportant une boucle d'échantillonnage calibrée, un
passeur o Une colonne composée d’une résine chargée positivement pour
séparer les anions et négativement pour séparer les cations.
 Un suppresseur qui permet d’éliminer la conductivité de l’éluant. o Un
détecteur : un conductimètre thermostaté

Chromatographe ionique

3. Domaines d’application
Les analyses en chromatographie ionique (CI) sont principalement réalisées sur trois
types d’échantillons afin d’analyser :

 Des eaux de pluies (ions majeurs organiques et inorganiques)

 Des filtres imprégnés collectés par des capteurs passifs pour la détermination
des concentrations des gaz : SO2, NH3, NO2, HNO3 et O3.
 La partie soluble minérale et organique des aérosols collectés sur filtres téflon.

IX. Conclusion
La chromatographie est une technique qui se décline selon de multiples variantes pour
séparer des constituants dans un but soit analytique, soit préparatif. Cet ensemble de
techniques, parfois très différentes dans leur mise en œuvre, est très utilisé en
laboratoire comme dans les établissements scolaires