Master

Biotechnologie Végétale pour l’amélioration des plantes

Module M8
Biotechnologie végétale

UE8.2
Haplométhodes et création de lignées fixées:
Gynogenèse

Pr. Souad Cherkaoui

Faculté des Sciences de
Rabat

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 4.2/ Gynogenèse
4.2.1/ Définition

- TK qui consiste à mettre en culture des ovules ou des

ovaires non fécondés, le plus svt immatures, sur un milieu
artificiel.
- Obtention de plts haploïdes doublées artificiellement
pour la production de pls diploïdes fertiles.
- TK utilisée chez les espèces récalcitrantes à
l’androgenèse car l’objectif est le même.

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 4.2.2/ Principe de la technique de la culture d’ovaires

- Dissection des fleurs sous la loupe binoculaire en conditions aseptiques

- Prélèvement des ovules et mise en culture dans des boites de Pétri
contenant un milieu d’induction
- Dépôt des boites de Pétri dans des chambres de culture sous des conditions
contrôlées ( T°, lumière et humidité)
- Germination des embryons après 3 à 4 semaines
- Transfert sur milieu de régénération pour permettre leur développement en
plantules.

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 Gynogenèse de l’orge in vitro
A: ovaire après 3j de culture B: ovaire après 10j de culture
C: plusieurs plantes issues d’un ovaire D: plante chlorophyllienne avec racines
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 4.2.3/ Avantages et inconvénients

L’haploïdie est due au dvpt anormal du gamétophyte femelle qui a

pour conséquence la formation de cals et d’embryons.
• Avantages
-Risque d’obtention de plts albinos très faible.
-Réduction des délais de création variétale
• Inconvénients
-TK moins étudiée que l’androgenèse à cause du faible nbre de
cellules constituant le gamétophyte femelle.
- Taux d’induction et d’obtention de plantes haploïdes très faibles
(1 à 5%)
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 4.2.4/ Principaux facteurs influençant la gynogenèse
➢ Génotype
- Facteur très important pour la réussite de la gynogenèse

Stade favorable de prélèvement des ovaires

➢

- Généralement, les ovaires sont prélevés lorsque le sac embryonnaire

est très proche de la maturité (derniers stades de la gamétogenèse
femelle).
A ce stade les grains de pollen sont au stade mononucléé tardif ou
binucléé (schémas).

Nr: noyau reproducteur

nr: nucléole noyau reproducteur
Nv: noyau végétatif
nv: nucléole noyau végétatif
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 ➢ Prétraitement des épis au froid

- Le traitement par le froid de la plante donneuse ou des explants peu de

temps après la culture influe fortement sur la réponse gynogénétique.
- La T° et la durée du prétraitement au froid varient d’une espèce à l’autre.

- Ex d’effet bénéfique d’un traitement au froid chez certaines espèces

Beta vulgaris: 4°C pdt 5j
Oryza sativa: 8°C pdt 15j
Helianthus: 4°C pdt 2j

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 ➢ Milieux de culture
+ Milieux d’induction

• Milieux C17, MS, P2, N6.

L’addition d’acides aminés, de vitamines (biotine) ou de quelques

substances aminées (bétaine, choline) sur milieu MS augmente le
rendement en cals et en embrs (enrichissement nutritif pour les
cellules du sac embryonnaire).

+ Milieux de régénération
• Milieux de base testés: MS, MS/2, MSx2 et R9 additionnés
d’hormones de croissance.
Meilleurs rendements obtenus en présence de 1 mg/l d’AIA et1 mg/l
de BAP quelque soit le milieu de base.
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 Régénération de plantes par gynogenèse in vitro chez le maïs
a) Ovaires 3 sem après la mise en culture b) Induction d’embryons
c) Régénération de plantules haploïdes d) Plantule haploïde chlorophyllienne
e) Plaque métaphasique d’une cellule haploïde (n=10) f) Plantes haploïdes sous-serre
g) Plaque métaphasique d’une cellule diploïde (2n=20) h) Uniformité d’une lignée
HD de maïs dans le champ (Feiyu et al.,2006)
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