Master

Biotechnologie Végétale pour l’amélioration des plantes

Module M8
Biotechnologie végétale

UE8.2
Haplométhodes et création de lignées fixées
Hybridations interspécifiques

Pr. Souad Cherkaoui

Faculté des Sciences de
Rabat

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 4.3/ Croisements interspécifiques et sauvetage d’embryons
4.3.1/ Définition
L’hybridation interspécifique est un outil important permettant la création de nouvelles
espèces, l’introgression de gènes nouveaux et la production de pl. haploïdes.

4.3.2/ Les barrières naturelles à l’hybridation interspécifique

-Le succès de l’hybridation sexuée dépend de :
*barrières pré-fécondation :
- Germination du pollen sur le stigmate du parent femelle
- Croissance du tube pollinique
- Fécondation de l’ovule et des noyaux polaires
* barrières post-fécondation :
- Dévpt de l’embr. et de l’endosperme
- Maturation des graines

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 + Barrières pré-fécondation
- Chez le blé, l’incompatibilité avec le seigle et d’autres espèces:
l’orge (Hordeum bulbosum, H vulgare) est contrôlée par 2 gènes, Kr1
et Kr2, situés respectivement sur les chromosomes 5B et 5A.
- Les allèles dominants inhibent la croissance du tube pollinique à la
base du style et sa pénétration à travers la paroi de l’ovaire.
Cependant, ces gènes Kr n’ont aucun effet sur blé x maïs et blé x
triticale.
Ex de blé tendre possédant les gènes récessifs kr1 et kr2 : blé chinois
« Chinese Spring » bonne aptitude au croisement mais peu
d’attrait au point de vue agronomique.

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 Comment surmonter cette incompatibilité ?
• Sélection de parents compatibles ou possédant les allèles favorables
au croisement interspécifique.
• Utilisation de régulateurs de croissance en pollinisation
• Fécondation in vitro

+ Barrières post-fécondation
• Responsables de la non-viabilité des embr. hybrides et sont dues à :
- arrêt du développement de l’albumen ou sa dégénérescence après la
fécondation.
- arrêt du développement de l’embr. avortement au stade
globulaire
- développement anormal des tissus ovariens
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 4.3.3/ Production de plantes haploïdes après croisement
interspécifique
- Due à l’élimination des chrom. du parent mâle au cours des
divisions cellulaires de l’embr.
- Elimination progressive due soit à la désynchronisation des cycles
mitotiques des 2 espèces, soit à l’inactivation du génome étranger, soit
à des anomalies du fuseau mitotique.
- Après élimination chromosomique, développement normal de la
graine pendant qqs jours comme s’il y avait eu fécondation.
- Puis, récupération de l’embr. sur un milieu de culture artificiel pour
éviter sa dégénérescence (sauvetage d’embr.) (endosperme non
fonctionnel).

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 Ex : Méthode bulbosum
Cette méthode fait appel à un croisement interspécifique où les fleurs
de l’orge cultivée Hordeum vulgare sont émasculées et fécondées avec
le pollen d’ Hordeum bulbosum, une espèce sauvage apparentée.

Quelques jours après la fécondation, le lot chromosomique

d’Hordeum bulbosum est complètement éliminé

un embryon haploïde commence son développement

sur la plante-mère

cet embryon immature est prélevé et cultivé in vitro

(sauvetage d’embryon)

production de plante haploïde

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 Différentes étapes de la méthode bulbosum (croisement H. vulgare x H. bulbosum)
(a) épi de H. bulbosum prêt pour récolter le pollen. (b) pollinisation des épis de H. vulgare.
(c) prélèvement d’embryons haploïdes 12-14 jours après la pollinisation. (d) embryons cultivés in
vitro en germination . (Esteves., 2014).
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 Production de plante haploïde et HD d’orge cultivé par la méthode
d’hybridation interspécifique suivie d’élimination chromosomique
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 + Méthode applicable aussi chez le blé :
- croisement entre blé et Hordeum bulbosum élimination
des chromosomes de Hordeum production de pl. haploïdes
de blé
- La réussite des croisements du blé avec H. bulbosum est
entravée par les gènes d’incompatibilité interspécifique Kr.
Toutes les pl. produites sont en général haploïdes et
chlorophylliennes.
.

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 4.3.4/ Exemples d’hybridations interspécifiques par
utilisation d’espèces sauvages pour l’introduction de gènes
de résistance

+ Résistance à la cécidomyie par des croisements Aegilops sp

x T. aestivum ou T. durum. Aegilops ventricosa résistant à
la cécidomyie, maladie causée par la mouche de Hesse.
- méthode de croisement indirecte :
Aegilops ventricosa (2n=14) x T.turgidum (2n=28) suivi
du doublement chromosomique obtention d’un blé
synthétique hexaploïde (espèce pont) croisement avec
le blé tendre (2n=42) la résistance a été transférée au
T. aestivum.
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 + Résistance à la rouille foliaire :
- La rouille foliaire (causée par Puccina recondita) réduit
considérablement le rendement en blé. Des croisements avec
Aegilops ont permis le transfert de cette résistance au blé.

+ Résistance au mildiou poudreux:

- Le gène de résistance au mildiou a été transféré de H.
bulbosum à H. vulgare (espèce cultivée).

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 + Résistance aux rouilles brune, jaune, noire et au puceron
Schizaphis graminum
- Résistances dues à la translocation 1BL/1RS (blé-seigle): le bras
court 1RS du seigle apporte plusieurs qualités au blé.
- Après croisement blé x seigle, si une cassure centromérique se
produit pour les chrom. 1B et 1R dans la même cellule mère du
pollen, le bras long 1BL du blé fusionne avec le bras court 1RS du
seigle.
- Cette translocation permet:
➢la résistance aux rouilles et au puceron Schizaphis graminum chez
le blé
➢ un grand potentiel et stabilité en rendement.
➢une amélioration du rendement en régénération verte après
androgenèse chez le blé.

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 4.3.5/ Sauvetage d’embryons
- Pas de dévpt de l’albumen incapable d’assurer la nutrition de l’embr
nécessité de sauver l’embr pour éviter son avortement précoce
culture sur milieu synthétique pour assurer l’apport en éléments nutritifs
nécessaires.
+ Aspects morphologiques de l’embryogenèse in vitro
Stades successifs du dévpt embryonnaire :
stade globulaire, cordiforme, pince, torpille, canne et fer à cheval.

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 - Le sauvetage des embr. doit être effectué avant leur avortement
- Il faut les extraire sous la loupe avant de les déposer dans le
milieu de culture (embr. de petite taille)

+ Milieux de culture utilisés pour le sauvetage

d’embryon.
Les milieux de culture les plus utilisés sont:
- Milieu MS (Murashige et Skoog, 1962)
- Milieu B5 (Gamborg et al., 1968)

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