Master

Biotechnologie Végétale pour l’amélioration des plantes

Module M8
Biotechnologie végétale

UE8.2
Haplométhodes et création de lignées fixées:
Introduction

Pr. Souad Cherkaoui

Faculté des Sciences de
Rabat

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 I/ Culture in vitro
1/ Définition
• Les biotechnologies végétales sont des techniques qui
reposent principalement sur la culture in vitro (CIV).
• La CIV chez les végétaux est la régénération de plantes à
partir d’explants, sur un milieu nutritif artificiel, en
condition stérile, dans un environnement contrôlé (T°,
humidité, éclairement) et dans un espace réduit.

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 Hotte à flux laminaire

Autoclave

Chambre de culture climatisée Phytotron

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
 2/ Caractéristiques
• Le but de la CIV est de permettre la régénération
d’une plante entière et fertile à partir de la propriété
des cellules végétales: la totipotence.
• Principe de la totipotence cellulaire:
« Toute cellule végétale est capable de régénérer un
autre individu identique à celui dont elle est issue
(plante mère) ».

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 La totipotence repose sur l’aptitude à la dédifférenciation:
les cellules peuvent redevenir des cellules simples, non spécialisées
et se différencier ensuite pour donner à nouveau les différents types
de cellules spécialisées.

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
 • Tout type d’organes peut être utilisé pour la CIV.
➢ organes entiers (tige, feuille, racine, fleurs…)
➢ parties d’organes,
➢ tissus,
➢pièces florales,
➢ graines ou embryons,
➢ bourgeons ou apex ou méristèmes,
➢ cellules somatiques ou sexuelles,
➢ protoplastes.

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 • La réactivité des explants est variable et dépend de nbs
facteurs comme:
➢L’âge de la plante mère
➢La date de prélèvement de l’explant
➢La localisation de l’explant sur la plante
➢La taille et la nature de l’explant
➢L’espèce végétale sur laquelle il est prélevé

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 • L’explant doit trouver dans le milieu de culture tout ce dont il a
besoin pour survivre, se multiplier et régénérer un nouvel individu.

Composition d’un milieu de culture:

➢Eau
➢Sels minéraux:-macroéléments (en g/l)
N, Ca, K, S, Mg, P
-microéléments (en mg/l)
Fe, Cu, Zn, Mn, Mo, B, Co, Ni
➢Fer chélaté
➢Vitamines
➢Source carbonée
➢Agent gélifiant pour les milieux solides: Agar-agar, gelrite

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 Parmi les phytohormones, les auxines et les cytokinines sont
capables d’orienter les explants vers la formation de nouveaux
organes.
➢Les auxines:
- Stimulent la croissance
- Régulent la division et différenciation cellulaire
- Favorisent la rhizogenèse et l’élongation cellulaire

➢Les cytokinines:
- Stimulent la division cellulaire
- Favorisent la croissance cellulaire
- Induisent la différenciation des bourgeons
- Activent la production de la chlorophylle
- Inhibent la sénescence des feuilles
M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
 3/Avantages et inconvénients de la CIV
3.1/Avantages
- Obtention de clones sélectionnés pour leur vigueur, leur caractères
intéressants, leur rareté.
- Assainissement des végétaux.
- Production rapide et en masse à n’importe quel moment de l’année.
- Raccourcissement des cycles de développement.
- Facilité de stockage et conservation d’un grand nombre de plantes.

3.2/ Inconvénients
- Coût du plant élevé.
- Main d’œuvre qualifiée et spécialisée.
- Plantes récalcitrantes.
M8
- Variations génétiques. Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes
 Il existe plusieurs techniques de culture in vitro qui
permettent une multiplication en masse et la
régénération de plantes entières et saines:
➢Micropropagation in vitro
➢Culture de méristèmes
➢Embryogenèse somatique
➢Haplodiploïdidation
➢Culture de protoplastes

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 II/ L’haplodiploïdisation
1/ Définition
• Méthode utilisée pour fixer plus rapidement le matériel
génétique en cours de sélection.
• Repose sur l'obtention de plantes haploïdes (n) à partir
d’organes ♂ ou ♀ puis sur le doublement du stock
chromosomique.
• Après dédoublement des chromosomes, production de
plantes diploïdes (2n) homozygotes où l'ensemble
du génome est fixé.
(homozygote: qui possède deux gènes identiques sur chaque chromosome de
la même paire.

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 • Technique rapide de production de lignées pures en une
seule étape la durée d'un cycle de sélection est raccourcie
de 3 à 4 ans.

• TK utilisée actuellement pour l’amélioration de nombreuses

espèces comme le blé, le riz, l’orge, le maïs, le chou, le colza, le
tabac…

• Rq: l’amélioration des variétés par les méthodes de sélection

classique est onéreuse et demande plusieurs cycles
d’autofécondation et de sélection pour atteindre l’homozygotie
d’où l’utilisation des techniques de biotechnologie et
particulièrement les haplométhodes.

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
 Comparaison entre la méthode généalogique et l’haplométhode
pour la production de lignées pures
M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5
 2/ Caractéristiques
Il existe 2 types d’haplodiploïdisation:
- haplodiploïdisation spontanée
- haplodiploïdisation par culture in vitro

➢ haplodiploïdisation spontanée:
- Parthénogenèse in vivo: développement de l’oosphère en
embryon sans fécondation.
- Apogamie: formation d’embryon sans fécondation à partir
de cellules autres que l’oosphère telles que les synergides ou
antipodes

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 • Dans la nature, ces haploïdes spontanés sont le résultat
d’anomalies de fécondation.
• Chez certaines espèces, ces anomalies de fécondation ont
montré beaucoup d’intérêts pour leur utilisation dans les
programmes de sélection et en amélioration des plantes.
• Dans cet objectif, de nombreuses techniques in vitro
d’haplodiploïdisation ont été développées.
➢ haplodiploïdisation par culture in vitro:
- Androgenèse
- Gynogenèse
- Culture d’embryons après hybridation
interspécifique et intergénérique

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 3/ Intérêts et facteurs limitants de l’haplodiploïdisation
3.1/ Intérêts de l’haplodiploïdisation
• Production de lignées pures, dans un délai très court
permettant la création de nouvelles variétés fixées directement
à partir d'hybrides.
• Sélection d’un nouveau matériel de manière plus facile et plus
fiable. Tous les gènes (dominants et récessifs) sont exprimés.
• Etude des gènes et de leurs interrelations.
• Etude de la cartographie génétique et identification de
marqueurs moléculaires liés à des caractéristiques
phénotypiques, à un gène ou à une région d'un chromosome

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5

 3.2/ Facteurs limitants de l’haplodiploïdisation
• Faibles taux d’induction d’embryons.
• Obtention d’une proportion élevée de plantes albinos
régénérées limitant l'utilisation de cette technique dans le
secteur de l'amélioration des céréales.
• Chez certaines espèces, doublement chromosomique difficile
à réaliser.
• Modifications de garniture chromosomique (polyploïdie,
aneuploïdie, remaniements chromosomiques).

M8 UE 8-3 Biotechnologie et amélioration des plantes Pr Souad Cherkaoui FSR UM5