6 ème

CONGRÈS INTERNATIONAL DE PHARMACIE HOSPITALIÈRE ET ONCOLOGIQUE

Oran les 20, 21 et 22 Octobre 2022

COMPARABILITÉ STRUCTURALE DES IOSIMILAIRES

M. AICHAOUI1, A. BOUDIS2.
Agence Nationale des Produits pharmaceutiques
1

2
Université d’Alger– Faculté de Pharmacie - Laboratoire de Chimie Analytique.

INTRODUCTION DÉFINITION D’UN BIOSIMILAIRE

Une caractérisation structurale physico-chimique complète est requise pour les fabricants qui souhaitant obtenir
Selon L’EMA: « Un biosimilaire est un médicament biologique hautement similaire à un
l'approbation réglementaire pour commercialiser un médicament biosimilaire.
les autorités réglementaires ont identifié un certain nombre de propriétés structurelles qui doivent être étudiées autre médicament biologique déjà approuvé dans l’union Européenne (le « médicament de
et un profile de comparabilité analytique doit être établit avec le produit de référence, de nombreux textes référence »). Les biosimilaires sont approuvés selon les mêmes normes de qualité
règlementaires publiés par un nombre d’autorités s’inscrivent dans ce contexte. pharmaceutique, de sécurité et d'efficacité qui s'appliquent à tous les médicaments
biologiques.».

Guidelines de l ’EMA relatifs aux Biosimilaires Démonstration de la biosimilarité selon les

guidelines de la FDA
5.3. considérations analytiques :
Des études approfondies de caractérisation doivent être
appliquées en parallèle aux médicaments biosimilaires et
• Structures primaires : séquences
de référence, afin de démontrer avec un niveau élevé
d’acides aminés
d'assurance que la qualité du biosimilaire est comparable
à celle du médicament de référence.
• Structures d’ordre élevé : secondaire, tertiaire,
quaternaire(y compris l’agrégation.

• Modifications enzymatiques post-traductionnelles (ex:

glycosylation, phosphorylation)
6. Spécifications :
Comme pour tout produit dérivé de la biotechnologie, la
sélection des tests à inclure dans les spécifications (ou la • Autres variations potentielles, telles que la
stratégie de contrôle) pour la substance médicamenteuse désamidation et l'oxydation des protéines
et le produit pharmaceutique est spécifique au produit et
doit être définie comme décrit dans ICH Q6B. • Modifications chimiques intentionnelles, telles que les sites et
les caractéristiques de PEGylation

Etablissement de la comparabilité structurale des biosimilaires

Séquence primaire Sélection des clones Purification

Caractérisation structurale :
Caractérisation structurale et conformation: Collecte des données pour choix du clone
Développement et qualification d’une méthode de
• Détermination de la séquence d’ADN codant la purification
1. Séquences d’acides aminés molécule d’intérêt • Différentes méthodes analytiques sont employées pour le choix
• Détemination de la structure primaire d’acides du meilleur clone qui donnerait les produit le plus similaire
2. Composition en acides aminés aminés du médicament de référence • Les excipients du tampon peuvent interférer avec l’analyse
• Les produits à partir des clones choisis peuvent être utilisés par (notamment la sm)
3. Séquence terminale d’acide aminé la suite pour donner une évaluation complète de la • Il serait par conséquent important de purifier le produit avant
comparabilité avec le produit de référence analyse.
4. cartographie peptidique • une méthode de purification appropriée doit être développée et
qualifiée avant d'être utilisée pour la caractérisation et
5. Groupements sulfhydryle et ponts disulfure Comparabilité des sequences primaires l’évaluation de comparabilité
6. Structure carbohydrique Vérification que principalement les séquences du
biosimilaire et de la référence sont identiques Évaluation de la comparabilité
Propriétés physico-chimiques
• Vérification que principalement les séquences du biosimilaire et de la référence sont identiques
Détermination de la structure primaire du biosimilaire et
1. Le poids moléculaire ou la taille comparaison avec le produit de référence
• L’analyse est effectuée de la même façon qu’avec le produit de
2. isoformes référence • Démonstration que le biosimilaire est structuralement comparable au produit de référence
• Les séquences identifiées doivent être identiques • Effectuer une évaluation structurale complète et une analyse des propriétés physico-chimiques en suivant les
3. Coefficient d’extinction
guidelines de l’ICH Q6B
4. Profiles électrophorétiques
• Le nombre de lots à analyser pour chaque produit est fonction du produit.
5. Chromatographie liquide • Le nombre de lots à analyser pour chaque produit est fonction du produit.
6. Profiles spectroscopiques

Caractérisation structurale et conformation Propriétés physico-chimiques Conclusion

Séquençage des acides aminées : Poids moléculaire/Taille :
Tableau 01. Concentration du Neupogen® et biosimilairesà par spectrophotométrie UV / VIS et Établir la comparabilité analytique avec le produit innovant pour prouver la
Le séquençage des acides aminés d’un biosimilaire doit être le même masses observées par RPC-ESI-MS.
biosimilarité est une tâche difficile
que celui du produit de référence

Pour garantir un degré élevé de similarité, un biosimilaire doit faire l'objet d’études
Méthode de choix : (LC-ESI-MS/MS) de comparabilité à chaque étape de son développement afin de démontrer que les
différences potentielles par rapport au produit de référence ne sont pas significatives

Digestion protéolytique
Isoformes :
Les attente actuelle de la réglementation est que des outils analytiques appropriés et
des technologies de pointe doivent être utilisés pour évaluer les attributs de qualité
critiques, pour établir la comparabilité en termes de structures primaires, secondaires
Fragments d’Acides Aminés
et tertiaires, et donc des propriétés biologiques fonctionnelles similaires

Analyse (LC-ESI=SM/SM) RÉFÉRENCES

Peptide mapping :
Figure 03. analyse par SDS-page des chaines lourdes glycosylés et déglycosylés pour le trastuzumab
Figure 01. Peptid mapping des biosimilaires du Trustizumab montrant des profil
chromatographiques comparable des biosimilaires 1et 4 avec le chromatogramme de référence
Figure 03. Comparaison des Structures d'ordre supérieur : spectre infrarouge à transformation de
Figure 02. Analyse EC-UV représentative des 4 produits d’Érythropoétine
- Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived
Profile électrophorétique : (essai sur un lot)
proteins as active substance: quality issues (revision 1)
(EMA/CHMP/BWP/247713/2012) EMA. 2014.
- Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Product-
Guidance for Industry. FDA. 2015
- ICH Topic Q 6 B. Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for
Biotechnological/Biological Products - NOTE FOR GUIDANCE ON
Specifications: test procedures and acceptance criteria for biotechnological/biological
products (CPMP/ICH/365/96). ICH. 1999
- THILL M. Biosimilar trastuzumab in clinical trials: differences or not?. Breast Care,
de référence et ses biosimilaires pour les lots 1 et 2. 2019, vol. 14, no 1, p. 17-22.
- Joshi S, Khatri LR, Kumar A, Rathore AS. Monitoring size and oligomeric-state
distribution of therapeutic mAbs by NMR and DLS: Trastuzumab as a case study. J
Pharm Biomed Anal. 2021
- Nupur N, Singh SK, Narula G, Rathore AS. Assessing analytical comparability of
biosimilars: GCSF as a case study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci.
2016 .
- Halim LA, Brinks V, Jiskoot W, Romeijn S, Haselberg R, Burns C, Wadhwa M,
Schellekens H. Quality and Batch-to-Batch Consistency of Original and Biosimilar
Epoetin Products. J Pharm Sci. 2016 Feb;105(2):542-550.
- Liu J, Eris T, Li C, Cao S, Kuhns S. Assessing Analytical Similarity of Proposed
fourrier de l’Adalimumab et de son similaire
Amgen Biosimilar ABP 501 to Adalimumab. BioDrugs. 2016 Aug;30(4):321-38.