ELIE Nicolas

Master 1 Chimie Fine

RIPOLL Lionel

Le Havre, 2007

LES PARABENS
UTILISATION

ET

TOXICIT

PHOTO : XEOPHIN

Table des matires

Introduction :............................................................................................................... 1
1. Que sont les parabens :............................................................................................. 2
1.1. Proprits et structures chimiques :...................................................................... 2
1.2. Emploi :............................................................................................................ 2
1.3. Mode d'action :.................................................................................................. 3
1.4. Lgislation :....................................................................................................... 3
2. Moyens d'obtention possibles :.................................................................................... 4
2.1. Synthse industrielle :........................................................................................ 4
2.2. Biosynthse :..................................................................................................... 5
3. Mthodes officielles de dosage et d'analyse :................................................................ 6
3.1. Identification :................................................................................................... 6
3.1.1. Solution de rfrence :................................................................................. 6
3.1.2. chantillon :................................................................................................ 6
3.1.3. Exploitation des rsultats :............................................................................ 7
3.2. Dosage :........................................................................................................... 7
3.2.1. Gamme talon :.......................................................................................... 8
3.2.2. chantillon :................................................................................................ 8
3.2.3. Exploitation des rsultats :............................................................................ 8
4. Toxicit :................................................................................................................. 9
4.1. DJA, DL50 et doses absorbes :........................................................................... 9
4.2. L'hydrolyse des parabens................................................................................... 10
4.3. Toxicit de l'acide p-hydroxybenzoique :.............................................................. 11
4.4. Bioaccumulation :............................................................................................. 11
4.5. L'effet oestrognisant :...................................................................................... 12
4.6. Parabens et cancer du sein :.............................................................................. 13
4.7. L'effet allergisant.............................................................................................. 13
5. Produits de substitution :.......................................................................................... 14
6. Conclusion :........................................................................................................... 15
Bibliographie

INTRODUCTION :
La famille des parabens regroupe les esters de l'acide p-hydroxybenzoque. Le nom de
parabens est d'ailleurs une compression du nom de PARAhydroxyBENzoates [1].
On peut les retrouver commercialement sous diffrentes appellations. Par exemple, le
mthylparaben se retrouve sous les noms de 4-(mthoxycarbonyl)phnol, nipagin,
mthyl-p-hydroxybenzoate, mthyl-4-hydroxybenzoate, p-hydroxybenzoate de mthyle, ...
Cependant, dans les produits alimentaires et cosmtiques, la lgislation prvoit une
appellation commune sous les noms de mthyl, thyl, propyl et butylparabens [2].
Leur premire utilisation en tant que conservateur remonte 1920. Selon la dfinition de
la Communaut Europenne [3], on entend par conservateur toute substance qui prolonge
la dure de conservation des denres alimentaires en les protgeant des altrations dues
aux micro-organismes .
L'absence de problmes lis leur utilisation depuis cette date en font des substances
considres comme sres.
Ce n'est que dernirement que des tudes ont remis en cause leur utilisation et lanc la
polmique actuelle, suite la dcouverte de leur effet oestrognisant et de leur prsence
dans des cellules cancreuses.
Notre travail consistera en la synthse de divers travaux sur le sujet afin de faire le point
sur l'tat des connaissances actuelles.

Page 1/15

OR

Structure
gnrale

HO
O

Methyl

Ethyl

Propyl

Butyl

N CAS

99-76-3

120-47-8

94-13-3

94-26-8

N EINECS

202-785-7

204-399-4

202-307-7

202-318-7

N INS/E
(ester / sel)

E218 / E219

E214 / E215

E216 / E217

Masse
Molaire
(g.mol-1)

152,05

166,06

180,08

194,09

Pf (C)

131

116-118

96-98

68-69

Peb (C)

270-280

297-298

Solubilit
dans l'eau
25C

0,25 %

0,17 %

0,05 %

0,02 %

pKa

8,17

8,22

8,35

8,37

Apparence
( 25C)

Cristaux incolores sans odeur et sans got

Tableau 1 : Proprits physico-chimiques des principaux parabens

1. Que sont les parabens :

1.1. Proprits et structures chimiques :
Comme nous l'avons dj vu, les parabens constituent la famille des esters de l'acide
p- hydroxybenzoque.
Les diffrentes proprits physico-chimiques des parabens les plus couramment utiliss
sont regroupes dans le tableau 1. Cependant, on trouve aussi l'isopropyl, l'isobutyl et le
benzylparaben qui ne sont pas dtaills dans le tableau du fait de leur faible emploi.
Les produits cosmtiques et alimentaires sont gnralement sous forme liquide ou gel et
ont un pH compris entre 5 et 7 (pour les produits H/E). Avec un pKa moyen de 8,2, les
parabens sont des acides faibles. Ils se trouvent donc sous leur forme acide dans ce
domaine de pH. temprature ambiante, ils se prsentent sous la forme de cristaux, il
faudra donc les solubiliser dans un solvant adquat pour les incorporer dans la matrice
souhaite. Leur solubilit dans l'eau tant assez faible, on emploie souvent des solubilisants
et on les substitue, notamment en alimentaire, par leurs sels.
Compte tenu de leurs hauts points d'bullition, suprieurs 270C, les parabens sont
stables la temprature, ils peuvent donc tre employs dans des produits destins la
cuisson [4].

1.2. Emploi :
Les parabens sont employs dans un grand nombre de produits alimentaires et
cosmtiques pour leurs proprits antifongiques et antimicrobiennes [5][6].
De plus, leur faible toxicit, leur large spectre d'activit (sur les bactries, levures,
moisissures et champignons), leur bonne stabilit chimique (vis--vis du pH et de la
temprature), leur biodgradabilit et leur faible cot en font des conservateurs trs
employs [4].
Ils peuvent tre utiliss dans des produits en contact avec la peau, les muqueuses, les
cheveux, les ongles, les aisselles. Ils sont actuellement utiliss dans 80 % des formulations
cosmtiques [2].
En alimentaire, on les trouve dans les ptisseries, les glaces, les boissons non
alcoolises, les crmes, les confitures et geles, les conserves, les sirops, ... Les parabens
mthyliques et propyliques sont les plus utiliss dans ce domaine [4].
Ils sont trs efficaces contre les champignons et les bactries. Cependant, ils sont plus
actifs contre les bactries Gram-positives que contre les Gram-ngatives. Ils sont souvent
employs en combinaison avec d'autres conservateurs comme des prcurseurs du

Page 2/15

formaldhyde, des isothiazolinones ou du phnoxythanol afin de complter leur spectre

d'action [7].
Leur solubilit dans l'eau dcrot et leur pouvoir antibactrien augmente avec la longueur
de leur chane alkyle. Ainsi, les mthyl et thylparabens, bien que prsentant les plus faibles
actions antimicrobiennes, sont les plus utiliss du fait de leur grande solubilit en phase
aqueuse. En effet, les attaques microbiennes sont majoritaires dans cette phase [6][8].
C'est pourquoi, en formulation, on prfre souvent utiliser une combinaison des
diffrents parabens, chanes alkyles courtes et moyennes, plutt qu'un seul. La protection
de toutes les phases (aqueuse et huileuse) est ainsi assure [9].

1.3. Mode d'action :

Le mcanisme d'action des parabens sur les bactries est l'heure actuelle encore mal
connu. Toutefois, certaines tudes proposent un modle expliquant la lyse cellulaire.
Les tudes actuelles permettent de postuler un mcanisme d'activation molculaire du
canal MscL [10]. Pour rappel, les organismes procaryotes possdent une membrane
plasmique constitue, entre autre, de trois familles de canaux mcanosensibles (MscM,
MscS et MscL). Ceux-ci sont impliqus dans la rgulation de la pression osmotique de la
bactrie.
Une tude mene par Nguyen et al. [6] explique que les parabens activeraient les
canaux MscL et MscS en diminuant leur seuil d'activation. Les canaux s'ouvrent alors
anormalement pour tenter de rguler la pression osmotique et une partie du contenu
cytoplasmique, indispensable la survie de la bactrie, est expulse. Ceci conduit la lyse
de la cellule.
Cependant, ce mode d'action n'est pas compltement admis et d'autres tudes proposent
des mcanismes diffrents de lyse cellulaire.

1.4. Lgislation :
Leur emploi en tant qu'additifs alimentaires est rgi par la directive Europenne 95/2/CE
du 20 Fvrier 1995 [3]. Ainsi, l'isopropyl, le butyl, l'isobutyl et le benzylparaben ne sont pas
autoriss pour cet usage et ne portent, par consquent, pas de numros d'additifs
alimentaires.
La directive 76/768/CEE du 27 Septembre 1976 [11] rgit, quant elle, l'utilisation des
esters de l'acide para-hydroxybenzoque et de ses sels dans les produits cosmtiques et fixe
leur emploi 0,4 % (en acide) pour un ester et 0,8 % (en acide) pour les mlanges
d'esters.

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Figure 2: Mcanisme (a) et diagramme d'nergie (b) de la raction de Kolbe-Schmitt. A et

E reprsentent respectivement les ractifs et les produits ; B, C et D reprsentent les
intermdiaires, alors que o-TS1, TS2 et TS3 sont les tats de transition (D'aprs Markovi
et al., 2002)

Pourcentage
Temprature
(C)

Acide Salicylique

Acide
p-hydroxybenzoque

Acide
4-hydroxyisophtalique

Na1

Na

Na

100

94

46

54

150

97

54

44

200

96

79

16

250

95

67

32

: Les symboles Na et K se rfrent respectivement la carboxylation du phnolate de

sodium et de potassium.
1

: Ces valeurs rapportent les pourcentages d'acides isols dans le mlange.

Tableau 2: Carboxylation du phnol (D'aprs Lindsey et Jeskey, 1957)

2. Moyens d'obtention possibles :

2.1. Synthse industrielle :
Les parabens, en tant qu'esters, sont prpars partir de l'acide p-hydroxybenzoque et
l'alcool correspondant la chane alkyle souhaite. Le procd industriel utilise le phnol
comme prcurseur de l'acide, selon la raction de Kolbe-Schmitt.
Cette raction consiste en la carboxylation chaud et sous pression du phnol en
prsence d'un sel mtallique et de dioxyde de carbone (figure 1).

Figure 1: Raction de Kolbe-Schmitt [12]

Un mcanisme probable de raction a t mis en vidence par les travaux de Z. Markovi
et al. [13]. Celui passe par la formation d'un complexe entre le phnol, le sel et le dioxyde
de carbone (figure 2a).
Cette publication comprend galement une tude thermodynamique de la raction de
Kolbe-Schmitt. Celle-ci suppose que la formation du para passe par un intermdiaire
ractionnel moins stable, ncessitant une nergie d'activation plus leve que dans le cas
de la formation de l'ortho (figure 2b). On assisterait alors une dformation du cycle
permettant la formation d'un chlate, orientant la raction en para. Cette dformation
pourrait tre l'origine de la formation prfrentielle du compos ortho.
Malgr tout, il reste possible d'orienter l'addition en ortho ou en para en fonction du sel
utilis. Lindsey et Jeskey, dans une de leurs tudes [14], ont ainsi compar l'influence du
sel mtallique utilis dans la rgioslectivit de la raction. Leurs rsultats montrent que
l'addition se fait prfrentiellement en para avec le sel de potassium. Dans le tableau 2, on
remarque que, pour des tempratures comprises en 100 et 150C, les proportions de l'acide
p- hydroxybenzoque sont au moins 13 fois suprieures lors de l'emploi de sel de potassium
la place du sel de sodium, d'o l'emploi de KOH comme base dans la synthse industrielle.
Dans cette mme tude, les auteurs ont aussi tudi l'influence de la pression et de la
temprature sur les proportions finales d'acide p- hydroxybenzoque. On dtermine ainsi les
conditions idales de synthse aux alentours de 140C sous une pression de 5 atm
(tableau 3).

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Pourcentage

Temprature
(C)

Pression
(atm)

Acide Salicylique

Acide
p-hydroxybenzoque

140

60

40

210

76

24

240

93

180
40
97
3
Le mlange ractionnel a t chauff pendant 4h la temprature indique, la priode de
prchauffage tant d'environ 15 heures.
Tableau 3: Carboxylation du phnolate de potassium (D'aprs Lindsey et Jeskey, 1957)

Figure 3: Concentrations en harmine, harmaline et mthylparaben contenus dans diffrentes

parties de la plante et de ses exsudats. Les traitements ont t les suivants : 1, plante
entire; 2, contenu intracellulaire des racines non-transformes; 3, contenu intracellulaire
des feuilles non-transformes; 4, contenu intracellulaire des pousses non- transformes; 5,
contenu intracellulaire des tubercules non-transforms; 6, exsudats des racines modifies;
7, contenu intracellulaire des racines modifies; 8, exsudats dans la terre de plants d'Oca
levs en serre. (D'aprs H. P. Bais et al., 2003)

L'acide p-hydroxybenzoque est ensuite engag dans une raction d'estrification. L'acide
sulfurique y est employ industriellement en tant que catalyseur [15]. En variant l'alcool
utilis, on peut ainsi obtenir toute la famille des parabens.
La raction s'effectue chaud, non pas pour amliorer le rendement car l'estrification
est une raction pratiquement athermique mais afin d'atteindre plus rapidement l'tat
d'quilibre [16].

2.2. Biosynthse :
Les parabens se trouvent l'tat naturel dans les plantes et certaines bactries.
L'tude de Ali et al. montre la prsence de mthylparaben et de propylparaben chez
Stocksia Brahuica (famille des Sapindaceae, qui compte galement les litchis) [17]. On
retrouve galement la prsence du mthylparaben dans les graines de pamplemousse [18],
le mrier, le passiflore, le myrtillier, la vanille [4] et dans les plants d'Oca (Oxalis
Tuberosa).
L'tude de Bais et al. [19] mene sur des plants d'Oca, non-modifis et modifis l'aide
de Agrobacterium rhizogenes, met en vidence la prsence de mthylparaben, ainsi que
d'harmine

et

d'harmaline.

Ces

trois

molcules

sont

reconnues

pour

leur

activit

antibactrienne et antifongique.
La figure 3 montre que celles-ci sont trouves principalement dans leurs racines, et plus
particulirement dans leurs exsudats. Les auteurs notent la prsence d'une concentration
leve de ces molcules dans la terre de culture. Ils ne montrent pas d'activit
antimicrobienne pour le mthylparaben, mais seulement une activit antifongique partir
d'une concentration de 40 g.mL-1. La figure 4 montre que la modification apporte par A.
rhizogenes permet la plante de produire le mthylparaben en plus grande quantit. Aprs
28 jours de culture, la concentration en mthylparaben est environ 10 fois plus importante
pour un plant modifi.
Peng et al. [15] montrent que les parabens peuvent aussi tre synthtiss par un certain
nombre de bactries marines (figure 5), notamment la souche A4B-17 pour laquelle la
production est la plus importante.
La biosynthse de l'acide p-hydroxybenzoque, en tant que mtabolite secondaire, peut
passer par deux voies distinctes. La premire passe par la transformation du chorismate par
l'intermdiaire de la chorismate lyase. La seconde transforme les cinnamates en benzoates
grce la coenzyme-A, puis A. niger fournit l'acide p-hydroxybenzoque. La spcificit de
A4B-17 rsiderait dans l'utilisation d'une enzyme de type estrase pour la production de
parabens.

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Figure 4: Une courbe typique de croissance et de production dans les racines de culture
d'Oca en fonction du temps : Harmine, harmaline et methylparaben contenus dans les
exsudats des racines modifies compars celles non- modifies. (D'aprs H. P. Bais et al.,
2003)

Figure 5: Cintique de la synthse de 4HBA et de ses esters par la souche

A4B-17. (D'aprs Peng et al., 2006)

Figure 6: Zone d'inhibition de la souche A4B-17 contre Bacillus

subtilis subsp. subtilis IFO1379 (D'aprs Peng et al., 2006)

La figure 6 montre que ces bactries utilisent les parabens comme moyen de dfense
vis--vis des autres micro-organismes. En effet, il n'y a pas de dveloppement de B. subtilis
dans un rayon de 0,4 cm autour de A4B-17.

3. Mthodes officielles de dosage et d'analyse :

Les mthodes de dosage et d'identification des parabens sont rglementes par la
directive Europenne 96/45/CE du 2 juillet 1996 [20], base sur les travaux de De Kruijf et
al. [21][22]. Celle-ci, en tant que directive, laisse toutefois le soin aux tats membres de
mettre en place les dispositions lgislatives, rglementaires et administratives ncessaires,
notamment la vrification, par des contrles officiels, de la bonne application des mthodes
qu'elle dcrit.

3.1. Identification :
L'identification des parabens se fait par Chromatographie sur Couche Mince (CCM).

3.1.1. Solution de rfrence :

Sept solutions diffrentes 0,1% m/v contenant respectivement les mthyl, thyl,
propyl, butyl et benzylparaben, le phnoxy-2-thanol et le phnoxy-1-propanediol sont
prpares afin de servir de point de comparaison pour le calcul des rapports frontaux.

3.1.2. chantillon :
L'chantillon est dans un premier temps acidifi pour liminer les sels puis mis en
solution dans de l'actone afin de solubiliser le plus grand nombre de composs.
L'chantillon est ensuite filtr.
Le filtrat est ensuite mlang de l'eau et le pH est ensuite amen 10 afin de faire
passer les conservateurs dans la phase aqueuse (formation de phnolates). Les parabens ne
sont pas hydrolyss lors de cette opration car celle-ci se droule froid.
Les acides gras sont ensuite prcipits en milieu alcalin sous forme de sels de calcium. La
solution est de nouveau filtre puis le filtrat est une premire fois extrait l'ther
dithylique afin d'liminer tous les produits organiques.
On rcupre la phase aqueuse, contenant les conservateurs, que l'on tamponne pH 2
avec de l'acide chlorhydrique. Les parabens repassent dans la phase organique et celle-ci
est une dernire fois extraite l'ther dithylique. L'chantillon est ainsi prt pour tre
analys.

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Compos

Rf x100

Couleur

Acide p- hydroxybenzoque

11

Rouge

mthylparaben

12

Rouge

benzylparaben

16

Rouge

thylparaben

17

Rouge

propylparaben

21

Rouge

butylparaben

26

Rouge

phnoxy-2-ethanol

29

Jaune

phnoxy-1-propanediol

50

Jaune

Tableau 4: Exemple de Rf pouvant tre obtenus (D'aprs la septime directive 96/45/CE du

2 Juillet 1996)

L'analyse se fait par CCM avec un luant apolaire afin d'amliorer la migration des
composs : la Commission Europenne prconise l'utilisation d'un mlange n-pentane/acide
actique 88:12. La plaque est rvle chimiquement en utilisant une solution commerciale
de ractif de Millon (nitrate mercurique).

3.1.3. Exploitation des rsultats :

Lorsque la plaque est correctement rvle, on peut calculer les rapports frontaux des
diffrentes taches obtenues et les comparer ceux des solutions de rfrence. Les
parabens ainsi que l'acide p- hydroxybenzoque apparaissent sous forme de taches rouges. Il
est possible qu'une colution existe entre l'acide et le mthylparaben ou bien entre le benzyl
et l'thylparaben. Le tableau 4 prsente titre indicatif des valeurs de Rf pouvant tre
obtenues.

3.2. Dosage :
Le

dosage

des

parabens

et

d'autres

conservateurs

(phnoxy-2-thanol

et

phnoxy-1-propanediol) s'effectue par HPLC en phase inverse. Il s'agit d'un dosage par
talonnage externe utilisant un talon interne : l'hydroxy-4-benzoate d'isopropyle.
Dimensions de la colonne

L = 12,5 cm ; = 4,6 mm

Phase stationnaire

Nuclosil 5C18 ou quivalent

Phase mobile

THF/MeOH/MeCN/H2O (5/10/25/60 v/v)

Dbit PM

1,5 mL.min-1

Dtecteur

UV 280 nm

Tableau 5: Caractristiques de l'appareillage HPLC utilis.

Les parabens sont des composs apolaires comportant un chromophore, l'utilisation

d'une colonne apolaire et d'un dtecteur UV sont donc particulirement adapts.
Le

tetrahydrofuranne

(THF)

est

utilis

comme

co-solvant,

permettant

alors

de

s'affranchir des diffrences de polarit entre les conservateurs. La sparation repose

maintenant

uniquement

sur

l'hydrophilie

des

composs

analyss.

Le

mthanol

et

l'actonitrile permettent de moduler la polarit de l'eau et, ainsi, d'optimiser les conditions
de sparation. Ils sont utiliss galement dans le but d'augmenter la viscosit de la phase
mobile de faon augmenter la rsolution en diminuant l'agitation molculaire (premire
Loi de Fick).

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Figure 7: Chromatogramme d'un shampooing. Prsence de PhEt (Rt=4,0 min), MePa

(Rt=4,6 min), EtPa (Rt=7,4 min), PrPa (Rt=13,4 min), BuPa (Rt=25,9 min). (D'aprs
Borremans et al., 2004)

Figure 8: Sparation des pics (D'aprs la

septime directive 96/45/CE du 2 Juillet
1996)

Figure 9: Facteur d'asymtrie des pics

(D'aprs la septime directive 96/45/CE du
2 Juillet 1996)

3.2.1. Gamme talon :

On prpare 5 solutions talons dilues dans un mlange thanol/eau (9/1 v/v) contenant
l'talon interne et les conservateurs suivants : mthyl, thyl, propyl, butyl, benzylparabens,
phnoxy-2-thanol et phnoxy-1-propanediol. Puis on effectue l'analyse HPLC de ces
solutions, ce qui permet d'obtenir les diffrentes courbes d'talonnage.

3.2.2. chantillon :
La prparation de l'chantillon pour le dosage HPLC est plus simple que celle ncessaire
pour l'identification. En effet, cette technique permet l'analyse d'un plus grand nombre de
composs. Ceci permet de s'affranchir des tapes de purification longues entranant la perte
possible d'une partie des produits doser.
L'chantillon est acidifi, notamment afin d'liminer les sels de parabens. Il est ensuite
mis en solution dans un mlange thanol/eau. On effectue un chauffage suivi d'un
refroidissement rapide sous un flux d'air froid puis il est stock pendant une heure au
rfrigrateur. On augmente ainsi la solubilit des conservateurs dans l'thanol. L'chantillon
est ensuite filtr afin d'liminer toute particule solide restante. Il est enfin inject aprs
avoir pris soin d'y ajouter l'talon interne.

3.2.3. Exploitation des rsultats :

La figure 7 est un exemple de chromatogramme pouvant tre obtenu grce cette
mthode. On remarque que la prparation de l'chantillon est efficace car il y a peu de pics
parasites.
La mthode est gnrale et s'applique donc tous les produits. Ceci implique que la
rsolution des pics ne soit pas toujours optimale. Un facteur de sparation des pics et un
facteur d'asymtrie sont donc introduits par cette directive.
Le facteur de sparation, dfini par la figure 8, doit tre d'au moins 0,90 pour que
l'analyse soit accepte, alors que le facteur d'asymtrie (As), dfini par la figure 9, doit lui
aller, pour tous les pics, de 0,9 1,5. Le texte prcise que la composition de la phase
mobile peut tre optimise dans le but d'obtenir la sparation souhaite.
Compte tenu de la qualit du chromatogramme obtenu et en se basant sur la thorie de
la rpartition gaussienne, le calcul des concentrations ne s'effectuera pas en tenant compte
des aires des pics mais en reportant les hauteurs des pics sur les courbes talons. Le
rsultat obtenu, exprim en pourcentage par rapport la masse, est, en toute rigueur,
minor mais les travaux de Borremans et al. [23] montrent que l'on peut considrer cette
minoration comme non significative.

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Figure 10: Chromatogramme illustrant l'interfrence de l'acide sorbique dans un chantillon

cosmtique ; MePa (Rt=4,7 min), acide sorbique (Rt=4,8 min) (D'aprs Borremans et al.,
2004)

Espces

Voie

Mthyl
paraben

thyl
paraben

Propyl
paraben

Butyl
paraben

Souris

Oral

>8000

6 322
>8000

13 200

Souris

Oral (sel de
sodium)

2000

1500

3700

950

Souris

Sous-cutane

1251200

1650

Souris

Sous-cutane
(sel de sodium)

1200

1650

1650

2500

Souris

Intra-pritonal

760960

640

Rat

Oral

21008000

4300

>8000

Lapin

Oral

3000

4000

6000

4000a

Chien
Oral
: DL100 ou dose lthale

3000a

5000a

Tableau 6: DL50 (mg/kg) des parabens sur diffrentes espces animales par diffrentes voies
d'admission. (D'aprs Soni et al., 2005)

Cette mme tude prouve la reproductibilit et la rptabilit de cette mthode qui

semblent significativement amliores en comparaison des rsultats originaux. Les auteurs
expliquent

ces

diffrences

par

les

performances

accrues

des

dernires

colonnes

chromatographiques, les travaux de De Kruijf et al. datant de 1989.

Elle met aussi en avant qu'il peut exister une colution entre le mthylparaben et l'acide
ascorbique ou le sorbate de potassium, qui sont eux-aussi des conservateurs utiliss dans
les formulations cosmtiques (figure 10). Ce phnomne est rsolu en utilisant un gradient
de phase mobile : MeOH/MeCN/H2O (10/15/75, v/v/v) pendant 10 min, puis gradient
linaire d'une minute jusqu' MeOH/MeCN/H2O (15/30/55, v/v/v) puis isocratique jusqu' la
fin de l'analyse. L'augmentation de la sparation s'explique par l'augmentation du caractre
hydrophile de la phase mobile : les conservateurs tudis tant hydrophobes, leur
interaction avec la phase stationnaire sera plus importante.

4. Toxicit :
4.1. DJA, DL50 et doses absorbes :
Soni et al., dans leur rapport sur la scurit des parabens [4], regroupent les rsultats
de diffrentes tudes portants sur la dtermination des DL50. Ces rsultats sont prsents
dans le tableau 6. En raison de problmes de solubilit des parabens, les tudes ont
principalement portes sur leurs sels sods. Pour cette raison, les valeurs concernant les
sels sont plus prcises que celles de leurs homologues non-sods, dont les valeurs sont
absentes, approximes ou contenues dans un intervalle relativement large. On remarque
que, dans le cas d'une administration orale, la DL50 diminue avec l'augmentation de la
chane alkyle alors que la tendance est inverse pour une administration sous-cutane.
Au vu de ces rsultats, les autorits europennes de scurit des aliments (EFSA) fixent
une DJA groupe de 10 mg/kg pour les esters mthylique et thylique de l'acide
p-hydroxybenzoque et de leurs sels de sodium, n'tant pas en mesure de fixer une DJA
pour le paraben propylique tant donn les tudes rcentes supposant sa toxicit. Elles
conviennent, ainsi que l'AFSSAPS, quil est peu probable que le propylparaben prsente un
risque pour la sant, compte tenu de son utilisation limite [2][24].
La commission de cosmtologie du 29 Septembre 2005 autorise, quant elle, la
poursuite de l'utilisation des parabens aux conditions prvues par la rglementation
actuelle, en excluant le benzylparaben compte tenu du manque de donnes le concernant et
de son manque d'intrt. Elle propose galement, cette poque, une inscription
nominative des esters valus favorablement la place de l'appellation gnrique ester de
l'acide p-hydroxybenzoque .

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Ces valeurs sont comparer avec les valeurs trouves par les diffrentes tudes qui se
sont penches sur les doses totales d'exposition quotidienne. l'heure actuelle, ces tudes
estiment cette exposition 76 mg/j (soit 1,26 mg/kg/j pour un individu de 60 kg). La
participation des produits alimentaires est estime 1 mg/j (soit 0,017 mg/kg/j), celle des
cosmtiques 50 mg/j (soit 0,833 mg/kg/j) et celle des mdicaments 25 mg/j (soit
0,417 mg/kg/j) [4].

4.2. L'hydrolyse des parabens

Les travaux de Ye [25] montrent que les parabens subissent une hydrolyse dans notre
organisme, dont le sous-produit majoritaire est l'acide p-hydroxybenzoque qui peut tre
ensuite excrt dans les urines sous sa forme propre ou sous forme de glycine, glucuronide
et de sulfates conjugus de l'acide p-hydroxybenzoque. Lors d'une tude sur le lapin [26],
l'administration par gavage d'une dose unique de mthylparaben (0,4 ou 0,8 g/kg) conduit
aprs 24h 39% d'acide p-hydroxybenzoque libre, 15% d'acide p-hydroxyhippurique, 22%
de p-hydroxybenzoyle glucuronide, 10% de sulfate de p-carboxyphnyle. Ils constatent
galement que lors de l'augmentation de la longueur de la chane alkyle, le taux d'excrtion
urinaire de l'acide p-hydroxybenzoque diminue.
O
O

HO

O
H
N

OH

OH
O

acide p-hydroxyhippurique

HO
OH

sulfate de p-carboxyphnyle

HO
OH

OH
OH

p-hydroxybenzoyle glucuronide

Figure 11: Les diffrentes formes de l'acide p-hydroxybenzoque aprs hydrolyse des
parabens.
Diffrentes tudes, portant sur la cintique de l'hydrolyse des parabens montrent que la
dtoxification s'effectue en deux tapes. La premire consiste en l'hydrolyse proprement
dite des parabens pour les liminer rapidement dans les urines sous forme d'acide
p-hydroxybenzoque. La seconde passe par une excrtion mtabolique conduisant aux
autres produits prcdemment cits.
Les parabens peuvent galement subir une hydrolyse lors de leur administration par voie
cutane. Ainsi, Wooi et al. [27] et Seko et al. [28] rapportent que 70% du propylparaben
appliqu sur la peau de rats est mtabolis. En employant du diisopropyl fluorophosphate
(inhibiteur d'estrase), ils constatent l'absence de mtabolites et montrent ainsi que les
carboxyl estrases, prsentes dans la peau et la graisse sous-cutane [1], sont
responsables de cette mtabolisation.

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Figure 12: Rponse oestrognique d'une cellule soumise l'action de diffrents parabens.
Les rponses maximales (A540 ~ 2,7) la concentration maximale ne sont pas montres.
(A) Le graphe dcrit l'absorbance en fonction de la concentration logarithmique du 17estradiol dilu en srie de 10 nM 5 pM, et des methyl, ethyl, propyl, butyl et 4-ndodecylparabens dilus de 500 M 250 nM, mesure aprs 3 jours d'incubation. (B)
Comparaison de l'effet oestrognique du butylparaben avec ceux de l'acide
p-hydroxybenzoque (dilu de 500 M 250 nM) et du 4-nonylphnol (dilu de 2 mM 1
M). Le blanc montre la rponse de base dans l'essai. (D'aprs Routledge et al., 1998)

On sait galement que la capacit des parabens passer travers le stratum corneum
(barrire la plus externe de la peau) augmente avec la longueur de la chane
ester [8][29][30]. Mme si cette pntration reste faible, la surface d'application tant
importante, la dose administre ne peut tre nglige [9].
Cependant, il est frquent de leur associer des tensioactifs afin de mieux les solubiliser
dans les produits cosmtiques, ce qui a pour effet de diminuer leur pntration travers la
peau. En effet, une tude sur la peau du cochon de Guine [31] a montr que la prsence
de solubilisants tels que le polysorbate 80, le polyethylne glycol ou le PEG 400 diminue
l'absorption

des

parabens,

notamment

le

butylparaben,

alors

que

leur

activit

antimicrobienne augmente.

4.3. Toxicit de l'acide p-hydroxybenzoique :

Compte tenu de la quantit de mtabolites produits lors de l'hydrolyse des parabens, il
est intressant de se pencher en priorit sur la toxicit de l'acide p-hydroxybenzoque tant
donn qu'il reprsente lui seul la majeure partie des mtabolites.
D'aprs un rapport de l'Organisation de Co-opration et de Dveloppement Economique
[32], rassemblant les donnes actuelles sur l'acide p-hydroxybenzoque, sa DL50 est de
6000 mg/kg et sa NOAEL (No Observed Adverse Effect Level) est de 1000 mg/kg/jour.
Ce mme rapport indique qu'il est peu irritant pour la peau et moyennement pour les
yeux. C'est aussi un sensibilisant modr. Les tudes montrent qu'il est 100% biodgrad
aprs 28 jours. Son log(P) de 1,37 25C montre qu'il a une bioaccumulation assez faible.
Il prsente galement peu d'effets oestrognisant comme le suggrent les travaux
(figure 12B) de Routledge et al. [8], de Byford et al. [33] et de Darbre et al. [34]. Celui-ci
ne prsente donc pas d'effet sur la fertilit, le ratio des sexes ou la morphologie des
enfants.
L'acide p-hydroxybenzoque n'est pas tratogne, ni gnotoxique et est donc class dans
les substances priorit faible pour les travaux venir [32].

4.4. Bioaccumulation :
On a vu cependant que la totalit des parabens n'tait pas hydrolyse. Il faut donc
maintenant se pencher sur le devenir de ces parabens. D'aprs l'Agence Franaise de
Scurit SAnitaire et des Produits de Sant (AFFSAPS) : en raison de leur hydrolyse dans
l'organisme, ils ne sont pas susceptibles de s'accumuler dans les tissus .
Dans une tude, portant sur des chiens, des doses de 100 mg/kg/j de mthyl, thyl,
propyl et butylparaben ont t administres par intraveineuse. Les auteurs constatent la
prsence des esters dans le cerveau, la rate et le pancras et de mtabolites dans le foie et

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Tableau 7: Limites de confiance des concentrations moyennes (ng.g-1) de

parabens dans 20 tumeurs mammaires.(D'aprs Darbre et al., 2004)

les reins. Par contre lors de l'administration par voie orale de doses pouvant aller jusqu'
1 g/kg, les auteurs ne constatent aucune accumulation. D'autres tudes sur la toxicit
chronique et aigu portant sur le rat, la souris, le lapin et le chat ont montr qu'il n'y avait
aucune accumulation des parabens ou de leurs mtabolites dans l'organisme [35].
Ainsi, ce jour, aucune tude n'a prouv l'accumulation de parabens dans les tissus
sains. Cependant, il n'en est pas de mme pour des tissus cancreux. En effet, Darbre et al.
[34] publient en 2004 une tude qui sera l'origine de la polmique actuelle visant
interdire leur emploi. Celle-ci met en vidence la prsence de parabens dans des tissus
cancreux du sein. Ils trouvent ainsi des concentrations de parabens pouvant aller de 0
12,8 ng/g (tableau 7), ainsi qu'une concentration de PCBs (pesticide PolyChloroBiphnyls)
de 267 ng/g et de OCPs (Pesticides OrganoChlors) de 707,5 ng/g. Les auteurs ne
fournissent pas d'explications quant l'origine systmique ou non des parabens et ne
peuvent conclure une ventuelle corrlation entre la prsence de parabens et la formation
de la tumeur. C'est pourquoi, ils prconisent de refaire une tude avec un groupe plus large
que les 20 utiliss et avec la prsence d'un groupe tmoin. Par ailleurs, le mthylparaben
est celui qui est retrouv en plus forte quantit. Ceci s'explique soit par le fait qu'il fait
partie des deux parabens les plus employs (avec le propylparaben) [34][25], soit par le
fait qu'il s'absorbe mieux dans les graisses [34].
Selon le dernier rapport de scurit sur les parabens [4], les tudes de toxicologie aigu,
subaigu ou chronique actuelles ont montr que, leur pouvoir oestrognisant mis part, les
parabens ne montraient pas d'effets toxiques par les diffrentes voies d'administration.

4.5. L'effet oestrognisant :

Mme si les parabens sont reconnus comme des substances relativement sres
[4][8][36], leur effet oestrognisant est trs controvers l'heure actuelle. Celui-ci est
nanmoins

considr

comme

faible

par

les

tudes

toxicologiques

sur

le

sujet

[4][8][36][34]. Cet effet a t tudi du fait de leur structure similaire d'autres produits
connus pour tre oestrogne-like : les alkylphnols. En effet, la prsence d'un
groupement alcool en para sur le cycle aromatique est considr comme une condition
importante pour observer un effet oestrognique [36].
Leur effet oestrognisant augmente avec la longueur de la chane alkyle [33]. Routledge
et al. [8] ont compar l'effet oestrognique des quatre parabens les plus utiliss avec celui
du 17-estradiol, principal oestrogne naturel (figure 12A). Leurs rsultats indiquent que les
mthyl, thyl, propyl et butylparabens sont respectivement 2 500 000, 150 000, 30 000 et
10 000 fois moins oestrognique que le 17-estradiol. Ils remarquent sans pouvoir
l'expliquer que le 4-n-dodcylparaben se montre inactif dans la gamme de concentration
teste, ce qui est en contradiction avec l'effet observ prcdemment.

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Figure 13: Effets des administrations sous-cutane de methyl et butylparaben sur le poids
des utrus secs de rats immatures. Estradiol (E2) (0,04 mg/kg, sc) a t utilis pour un
contrle positif. Le groupe de contrle (C) a reu exclusivement de l'huile d'arachide.
(D'aprs Routledge et al., 1998)

Une autre tude mene par Byford et al. [33] sur des cellules du sein montre que la
concentration en paraben doit tre de 100 000 (butyl, propyl) 500 000 (thyl, mthyl) fois
suprieure celle du 17-estradiol pour que ceux-ci exercent leur effet.
Comme vu prcdemment, le butylparaben est celui qui prsente la plus forte toxicit.
Pour observer cet effet, Routledge et al. administrent des rats immatures des doses
variables de parabens et en mesure les effets sur l'utrus des animaux.
Pour une dose orale de 800 mg/kg/j, aucun effet n'est observ pour le mthyl alors que
le butyl provoque une faible augmentation du poids de l'utrus.
Pour des doses sous-cutane de butylparaben comprises entre 400 et 1200 mg/kg/j, on
on observe une augmentation pouvant atteindre 170%. La plus faible dose induisant une
rponse est de 200 mg/kg/j, alors qu'une dose de 800 mg/kg/j de mthylparaben n'induit
toujours aucun effet (figure 13).
L'exposition aux oestrognes naturels ou synthtiques peut affecter dfavorablement la
sant de l'homme, et particulirement les fonctions de reproduction. Oishi [36][37] montre
ainsi que les butyl et propylparabens ont un effet sur le systme de reproduction des souris
mles et qu'ils endommagent les dernires tapes de la spermatognese dans les testicules.
Pour des doses de 1504, 146 et 14,4 mg/kg/j, tous les groupes prsentent une
dtrioration de leurs spermatozodes. la plus forte dose, une augmentation du poids de
l'pididyme est observ alors qu'il n'y a aucun effet sur le foie, la prostate et les vsicules
sminales. Dans sa dernire tude [29], pour des doses de 1000 mg/kg/j, il n'observe pas
d'effet avec les mthyl et thylparabens.

4.6. Parabens et cancer du sein :

Darbre,

dans

un

de

ses

articles

tudiant

l'effet

des

diffrents

oestrognes

environnementaux sur l'apparition du cancer du sein [38], met l'hypothse d'une relation
entre la prsence de parabens dans des cellules cancreuses [34] et l'apparition de tumeurs
mammaires. Elle suppose que l'origine des parabens serait lie l'application de produits
cosmtiques sous les aisselles, tels que les antitranspirants.
Cependant, elle conclue, qu' l'heure actuelle, aucune tude n'a pu prouver une relation
entre la prsence de substances chimiques et le dveloppement du cancer du sein. Le CTFA
(Cosmetic, Toiletries and Fragrance Administration), la FDA (Food And Drug Administration)
et l'ACS (American Cancer Society) valident cette conclusion [39][40].

4.7. L'effet allergisant

De nombreux cas individuels d'allergies cutanes de type IV (retardes) ont pu tre
rapports. Les individus sensibles aux parabens sont souvent capables de les tolrer lors de

Page 13/15

leur emploi dans les produits cosmtiques s'ils sont appliqus sur une peau saine.
Cependant, les personnes prsentant dj un problme de peau l'endroit de l'application
peuvent subir une raction allergique. Ce paradoxe a t mis en vidence par Fischer qui le
nomme paraben paradox . Dans le cas d'ingestion d'aliments ou de mdicaments
contenant des parabens, seuls quelques rares cas d'allergies ont pu tre rapports. Le plus
souvent, cela provoque un eczma localis et sans gravit [1].
On observe galement des allergies de type I (immdiates) lors de l'application cutane
de solutions de parabens. Ces ractions allergiques provoquent des urticaires localiss pour
la plupart. Toutefois, dans certaines de ces tudes, les parabens sont mis en cause sans
preuve vritable de leur effet. En 1979, Henry et al. dcrivent un cas d'allergie immdiate
des solutions de parabens. Celles-ci comportent cependant des doses leves de mthyl et
thylparaben (5%) [41]. Les doses employes commercialement sont juges trop faible
pour induire une raction allergique sur une peau saine. Il existe galement des cas isols
d'allergie de type I lors d'administration parentrale (voie autre que l'ingestion). L encore,
les ractions sont localises et bnignes [1].

5. Produits de substitution :
Nous avons vu les diffrents problmes lis l'utilisation des parabens, il semble
maintenant important de regarder les diffrents produits dont nous disposons aujourd'hui
pour les substituer. A l'heure actuelle, la famille de l'alcool benzylique est une autre grande
famille de conservateur que l'on trouve dans les produits cosmtiques. On trouve aussi au
sein de cette famille l'acide benzoque et son sel, le benzoate de sodium. Ces produits ont
une DJA de 5mg/kg/j [42], plus faible que celle fixe pour les parabens. Nair [42] rapporte
que les conservateurs de cette famille ont des proprits cancrignes et tratognes
avres, et qu'ils sont galement allergnes des doses cutanes de 5%. L'auteur note
l'absence d'tude de toxicit chronique ainsi que le manque de donnes sur l'ingestion de
ces produits et encourage les recherches, compte-tenu des effets connus cours terme.
On emploie aussi souvent le phnoxy-2-thanol pour protger les produits formuls.
Celui-ci prsente une DL50 de 1,26 g/kg et est aussi considr comme tratogne, allergne
et irritant notamment pour les yeux. On lui connat aussi des effets sur le sperme des
poissons des doses de 0,05%. Toutefois, la pntration travers la peau reste assez
faible [43].
On peut galement utiliser des conservateurs naturels comme le linalol. Celui-ci a t
class comme substance allergne [44] par la Commission Europenne dans la directive
2003/15/CE [45], qui oblige ainsi les industriels signaler la prsence de ce produit dans
les formulations. De plus, son spectre d'action peu large en fait un conservateur peu
efficace et ses proprits organoleptiques peuvent parfois tre indsirables.

Page 14/15

6. Conclusion :
Les

parabens

sont

donc

largement

utiliss

dans

les

domaines

alimentaires,

pharmaceutiques et cosmtiques pour leurs proprits antifongiques et antibactriennes.

Leur emploi est strictement rglement au niveau Europen et les doses d'emploi sont
fixes 0,4% individuellement et 0,8% en mlange. Pour vrifier cela, une mthode de
dosage obligatoire a t dite. Celle-ci repose sur une mthode HPLC en phase inverse et
doit tre prcde d'une identification par CCM.
Les parabens sont obtenus industriellement partir du phnol, selon la raction de
Kolbe-Schmitt, puis par estrification avec l'alcool portant la chane alkyle voulue. Certaines
tudes montrent qu'ils sont galement trouvs l'tat naturel dans diffrents aliments et
plantes ainsi que dans certaines espces de bactries, ce qui pourrait ventuellement, selon
les auteurs, conduire une voie d'obtention biosynthtique.
L'emploi des parabens depuis plus de 80 ans en tant que conservateur, leur toxicit
relativement faible et leur hydrolyse rapide dans l'organisme en ont fait des substances
reconnues comme sres. Mme si leur effet oestrognisant est dmontr, celui-ci reste
considr comme faible, aux doses d'emploi, compar aux oestrognes naturels tel que le
17--estradiol.
La bioaccumulation des parabens dans les tissus sains n'a pu tre dmontre. Darbre et
al. ont, par contre, dmontr leur prsence dans les tissus cancreux. Aucune tude n'a,
ce jour, pu dmontrer une relation de cause effet entre la prsence de parabens et
l'apparition d'une tumeur cancreuse.
Comme pour toute substance, il existe des cas d'allergies aux parabens mais celles-ci
sont bnignes et localises. Depuis 1920 et malgr leur emploi massif dans les diffrents
produits, seuls quelques cas spcifiques ont pu tre rapports l'heure actuelle.
Les DJA, DL50 et toutes les doses utilises pour les tudes de toxicit sont largement
suprieures aux doses d'exposition quotidiennes estimes. C'est pourquoi, au vu de leur
rapport bnfice/risque, aucune autorit n'a interdit leur utilisation, d'autant plus qu'aucun
substitut prsentant un spectre d'action aussi large, une aussi bonne stabilit et un risque
moindre n'a t trouv. La substitution des parabens n'est donc pas si simple.
Toutefois, le manque d'tudes rcentes et la dcouverte, il y a peu, d'une possible
bioaccumulation require de nouvelles tudes plus larges et menes sur un plus long
terme ...

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[45] Directive 2003/15/CE du parlement Europen et du conseil du 27 fvrier 2003
modifiant la directive 76/768/CEE du Conseil concernant le rapprochement des lgislations
des tats membres relatives aux produits cosmtiques ; JO n L66/26 du 11 Mars 2003; 110

RSUM :
Les parabens sont les esters de l'acide p-hydroxybenzoque. Ce sont des substances
chimiques stables, aussi bien au pH qu' la temprature, largement employs pour leurs
proprits antibactriennes et antifongiques. Leur mode d'action est encore mal connu,
toutefois une hypothse sur leur action sur la membrane plasmique des cellules a t
formule. Le parlement Europen a mis en place un cadre lgislatif dcrivant leur emploi en
alimentaire et en cosmtique.
Ils sont obtenus industriellement par estrification de l'acide p-hydroxybenzoque, lui-mme
produit selon la raction de Kolbe-Schmitt partir du phnol. On les retrouve naturellement
dans diffrentes plantes et bactries, ce qui a permis de mettre en vidence leur
biosynthse.
Suite leur emploi massif dans les diffrentes industries, le parlement Europen a publi
une mthode d'identification et de dosage, reposant respectivement sur deux techniques
d'analyse chimique que sont la CCM et l'HPLC en phase inverse.
Leur effet toxique est faible. Ainsi, la DJA groupe est fixe 10 mg/kg, alors que la dose
d'exposition est estime 1,26 mg/kg/jour. Ils sont, par ailleurs, principalement hydrolyss
dans le corps en acide p-hydroxybenzoque et celui-ci ne prsente pas d'effet toxique
important. On les considre actuellement comme faiblement allergisants et on ne prouve
pas la prsence d'effets tratognes et cancrignes. Toutefois, rcemment la dcouverte
d'un effet oestrognique a remis en cause leur utilisation. Cet effet est 100 000 500 000
fois plus faible que le 17--estradiol. Il est l'origine de l'hypothse d'un possible lien entre
l'exposition aux parabens et l'apparition de cancer du sein, lien qui n'a pu tre dmontr
l'heure actuelle.
Au vu des connaissances actuelles, il semble que le rapport bnfice/risque favorise la
poursuite de l'emploi des parabens, car leur substitution n'est pas si simple, compte tenu
des effets des autres produits. Ce rsultat rclame des tudes toxicologiques plus larges et
la dcouverte de nouveaux conservateurs pourrait permettre de limiter leur utilisation.