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Mmoire

Prsent
LUNIVERSITE BADJI-MOKHTAR, ANNABA
Facult des sciences
Dpartement des Sciences de la Mer
Laboratoire dEcobiologie des Milieux Marins et Littoraux

En vue de lobtention du diplme de


Magistre en Sciences de la Mer
Option : Syncologie fonctionnelle des communauts
et parasitisme en milieu aquatique

Analyse de la qualit bactriologique des eaux


du littoral Nord-Est algrien travers un
bioindicateur la moule Perna perna.
Par
Mme Dahel Zanat Amina-Tania
Soutenue le 22 juin 2009 devant le jury compos de :
M. Ouzrout Rachid : Professeur lUniversit dEl Taref (Prsident)
M. BENSOUILAH Mourad : Professeur lUniversit Annaba(Promoteur)
Mme BOUSLAMA Zihad : Maitre de confrence lUniversit Annaba
(Examinatrice)
M. OUALI Kheireddine: Maitre de confrence lUniversit Annaba
(Examinateur)
M. MERAD Tarek : Maitre de confrence l Universit Annaba (Examinateur)

Ddicaces
Je ddie ce travail :

A ma grand-mre

A mes parents

A mon mari

A mes enfants Rayan et Lyria

A mon frre et ma sur

Et ma belle famille

Remerciements
Je tiens exprimer ma profonde estime et ma sincre reconnaissance Monsieur
OUZROUT Rachid, Professeur lUniversit dEl Taref, qui malgr ses nombreuses
responsabilits, ma fait lhonneur de prsider mon jury.
Mes respectueux remerciements vont Monsieur BENSOUILAH Mourad, Professeur
au dpartement des Sciences de la mer de lUniversit dAnnaba et Directeur du laboratoire
dEcologie des Milieux Marins et Littoraux (EMMAL), qui a dirig avec attention ce
travail. Grce sa grande exprience, il ma fait bnficier de ses remarques constructives et
de ses connaissances scientifiques, quil trouve dans ces quelques mots, le tmoignage de mon
estime et de ma profonde gratitude.
Jadresse mes vifs remerciements Madame BOUSLAMA Zihed, Maitre de
confrences lUniversit dAnnaba, qui a eu lamabilit dexaminer ce modeste travail et de
participer mon jury.
Je suis trs reconnaissante Monsieur OUALI Kheireddine, Maitre de confrence
lUniversit dAnnaba, qui a patiemment rpondu mes questions en statistiques et ma fait
honneur de sa prsence dans mon jury.
Jexprime ma profonde gratitude Monsieur MERAD Tarek, Maitre de confrences
lUniversit dAnnaba, qui ma honor en acceptant de porter un regard expert sur mon
travail.
Mes vifs et sincres remerciements, sadresse Monsieur KADRI Skender pour son aide
prcieuse, ses encouragements, ses conseils et sa bonne humeur durant la ralisation de ce
mmoire.
Je tiens aussi remercier Monsieur TAHER Ali, Professeur lUniversit dAnnaba,
qui par sa disponibilit, ma permis de mener bien ltude statistique.
En fin, mes remerciements toutes les personnes qui mont aides, de prs ou de loin,
llaboration de ce travail, en particulier Aicha, Imen , Nadira et toute lquipe du
laboratoire EMMAL.

Rsum
Cette tude porte sur lvaluation de la qualit bactriologique des eaux et des
mollusques bivalves (Perna perna) du littoral Nord-Est Algrien. Pour cela nous avons
procd des prlvements deau et de moules partir de 5 sites, choisis en fonction de leur
localisation, par rapport diffrentes sources de pollution et lhydrodynamisme qui y rgne
(Cap de Garde ; Rezgui Rachid ; Sidi Salem ; Hnaya et Aouinate).
Les rsultats des paramtres physico-chimiques de l'eau montrent des variations
saisonnires. La temprature est l'un des facteurs qui rpond le mieux au changement
climatique, avec des carts de 16 C. La salinit montre des carts d'environ 5 g/l entre la
saison froide et la saison chaude. En ce qui concerne les teneurs en oxygne dissous, elles
prsentent des fluctuations fortement influences par les variations saisonnires de la temprature
de l'eau et le brassage engendr par les vents importants en priode hivernale. Quant au pH, il est
lgrement alcalin durant toute la priode d'tude.

Les rsultats des analyses bactriologiques de l'eau, font apparatre que dans
lensemble des sites tudis, la contamination fcale est sporadique ; elle varie d'un mois
l'autre et d'un site l'autre. Les coliformes thermotolrants, prsentent des valeurs infrieures
aux valeurs guides retenues sauf en mai et en septembre dans le site Sidi Salem avec
galement des teneurs proches des valeurs guides (93 E. coli/100ml), notes en mars, juillet et
octobre. Dans les sites Hnaya et Aouinate, cest en avril que des teneurs gales 1100 et
2400 germes/100ml deau, sont enregistres respectivement. Quant aux Streptocoques
fcaux, les valeurs restent infrieures aux valeurs guides au Cap de Garde, alors que les taux
de contamination dpassent les limites Rezgui Rachid (en octobre), Sidi Salem (en
novembre et dcembre), et Hnaya et Aouinate (en Avril).
Par ailleurs, les concentrations bactriennes dans les moules, font apparaitre des
niveaux de contamination en E. coli, dpassant assez souvent les valeurs guides ; quant aux
streptocoques fcaux, les valeurs releves restent suprieures aux valeurs limites dans les 5
sites et pendant toute la priode dtude, ce qui ncessiterait avant leur consommation un
reparcage et une purification plus au moins longue avant la rcolte.
Cette forte contamination de leau et des moules du site Sidi Salem, trouve son
explication dans la forte anthropisation laquelle est soumise cette zone du fait de sa
proximit aux divers effluents tels que Oued Bedjima, Oued Seybouse et les rejets urbains
Mots cls : Bactriologie; bivalve ; contamination fcale; Littoral Nord-Est algrien ; Perna
perna.

Abstract
This study relates to the evaluation of the bacteriological quality of water and bivalvular
molluscs (Perna perna) of the Algerian North-eastern littoral. For that we proceeded to taking
away of water and moulds starting from 5 sites, chosen according to their localization,
compared to various sources of pollution and with the hydrodynamism which reigns there
(Cape de Garde; Rezgui Rachid; Sidi Salem; H' naya and Aouinate). Results of the
physicochemical parameters of l' water show seasonal variations. The temperature is l' one of
the factors which answers the climate change best, with variations of 16 C. Salinity shows
variations d' approximately 5 g/l between the cold season and the hot season. With regard to
the oxygen contents dissolved, they present fluctuations strongly influenced by the seasonal
variations of the temperature of l' water and the mixing generated by the important winds in
wintry time. As for the pH, it is slightly alkaline during all the period d' study.
Results of the bacteriological analyses of l' water, reveal that in the whole of the studied
sites, the fecal contamination is sporadic; it varies d' one month with l' other and d' a site with
l' other. The coliformes thermotolrants, present values lower than the values guides retained
except in May and September in the site Sidi Salem with also of the contents close to the
values guides (93 E. coli/100ml), noted of March, July and October. In the sites H' naya and
Aouinate, it is in April that contents equal to 1100 and 2400 water germes/100ml, are
recorded respectively. As for Streptocoques fecal, the values remain lower than the values
guides in the Cape de Garde, whereas the rates of contamination exceed the limits with
Rezgui Rachid (in October), in Sidi Salem (in November and December), and in H' naya and
Aouinate (in April). In addition, the bacterial concentrations in the moulds, reveal levels of
contamination in E. coli, exceeding rather often the values guides; as for the streptocoques
fecal ones, the recorded values remain higher than the limiting values in the 5 sites and for all
the study period, which would require before their consumption a reparcage and a purification
at least long before harvest.
This strong contamination of the water and the moulds of the site Sidi Salem, finds its
explanation in the strong anthropisation to which this zone because of its proximity is
subjected to the various effluents such as the urban Oued Bedjima, Oued Seybouse and
rejections.
Key words: Bacteriology; bivalve; fecal contamination; Algerian North-eastern littoral;
Perna perna.

:
Perna perna
.
) Cap de Garde
(.
.
16 . 5/




. Coliformes fcaux
" " ) 100 /93 E.coli(
1100 2400
100 / . Streptocoques fcaux
" "Cap de Garde ) ( )
( ) (.
E.coli
. Streptocoques fcaux
.
) (Anthropisations
.
:
Perna perna

Table des matires


Introduction1
Matriel et mthodes...................................3
1. Prsentation de la zone dtude .3
1.2. Le Golfe dAnnaba...3
1.3. Le littoral dEl Kala.....4
1.4. Les sites dchantillonnages....6

2. Mesure des paramtres physico-chimiques de leau.9


3. Analyse bactriologique des chantillons..9
3.1. Prlvement de leau...10
3.2. Rcolte des bivalves et prparation des chantillons...10
3.3. Analyse bactriologique de leau..11
3.3.1. Prparation des dilutions dcimales...11
3.3.2. Recherche et dnombrement des Coliformes totaux et recherche
d'Escherichia coli...12
3.3.4. Recherche et dnombrement des Streptocoques (Entrocoques) et identification
des Streptocoques de groupe srologique D de Lancefield...14
3.4. Analyse bactriologique des bivalves....17
3.4.1. Prparation des dilutions dcimales..17
3.4.2. Recherche et dnombrement des Coliformes totauxet recherche
d'Escherichia coli...17
3.4.3. Recherche et dnombrement des Streptocoques (Entrocoques) et identification
des Streptocoques du groupe srologique D de Lancefield20
3.5. Recherche des germes pathognes chez les bivalves.....22
3.5.1. Recherche et dnombrement des germes anarobies sulfito- rducteurs...22
3.5.2. Recherche des Salmonelles......24
3.5.3. Recherche des Staphylocoques pathognes...26
3.5.4. Recherche de Pseudomonas....27
3.5.6. Recherche des caractres biochimiques pour confirmation des
rsultats prsomptifs obtenus...29

4. Analyse statistique des donnes......31


4.1. Modle linaire gnralis (GLM)....31

4.2. Test de lanalyse des moyennes.31


4.3.Analyse des composantes principales ACP).31

Rsultats....33
1. Les paramtres physico-chimiques de leau......................................................33
1.1. La Temprature..33
1.2. La salinit....34
1.3. Le pH..35
1.4. Loxygne dissous...36
1.5. Les matires en suspension37

2. Distribution des germes dans leau de mer....38


2.1.Les Coliformes totaux.38
2.2. Les Coliformes thermotolrants (Escherichia coli).39
2.3. Les Streptocoques totaux.......40
2.4. Les Streptocoques fcaux. 41

3. Distribution des germes chez les moules.....42


3.1. Les Coliformes totaux....42
3.2. Les Coliformes thermotolrants (Escherichia coli)....43
3.3. Les Streptocoques totaux.......44
3.4. Les Streptocoques fcaux......45
4. Dtermination de la source probable de la contamination46
4.1. Origine de la contamination de leau...........46

5. Distribution des germes pathognes chez les moules.47


6. Rsultats de lanalyse statistique.......47
6.1.Modle linaire gnralis (GLM).....48
6.1.1. Eaux......48
6.1.2. Moules.......48
6.2.Test de lanalyse des moyennes......49
6.2.1. Eaux..49
6.2.1. Bivalves.49
6.3. Analyse des composantes principales (ACP)50
6.3.1.Eaux...........50
6.3.2.Moules...50

Conclusion et perspectives.60
Rfrences bibliographiques..61
Annexes..69

Liste des symboles


Symboles
TC

Dfinitions
Temprature (en degr Celsius)

Heure

mm

Minute

O2

Oxygne dissous

fig

Figure

tab

Tableau

Gramme

mg

Milligramme

ml

Millimtre

cm

Centimtre

et al

Et collaborateurs

fig
E.coli

Figure
Escherichia coli

CF

Coliforme fcaux

SF

Streptocoque fcaux

ACIA
AWWA

Agence Canadienne dInspection des


Aliments
Water quality and treatment American Water
Works Association

AFNOR

Agence de Normalisation franaise

FAO

Food and Agriculture Organisation

OMS

Organisation Mondiale de la Sant

CCME

Conseil Canadien des Ministres de


de lEnvironnement

CSOMB

Comit Scientifique Officiel de la MaisonBlanche


pour
la
protection
de
lenvironnement

DHWA

Direction de lHydraulique de la Wilaya


dAnnaba
Direction de lEnvironnement de la Wilaya
dAnnaba
Journal Officiel de la Rpublique Algrienne

DEWA
JORA
MeHSIP

NPP

Elaboration of a Mediterranean Hot Spot


Investment Programme
Ministre des Solidarits de la sant de la
famille
Nombre le plus probable

WA

Wilaya dAnnaba

MSSF

Liste des figures


Figures
1

Titres
Reprsentation du Golfe dAnnaba.

Pages
3

Reprsentation du Littoral dEl Kala.

Positionnement des sites dtude.

Image satellitaire montrant le site 1 : Cap de Garde.

Image satellitaire montrant le site 2 : Rezgui rachid.

Image satellitaire montrant le site 3 : Sidi Salem.

Image satellitaire montrant le site 4 : Hnaya.

Image satellitaire montrant le site 5 : Aouinate.

Prparation des dilutions.

11

10

Recherche et dnombrement des Coliformes totaux (test


prsomptif).
Identification d'Escherichia coli dans l'eau (test confirmatif).

13

Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux (test


prsomptif).
Confirmation de la prsence des Streptocoques du groupe
srologique D (test confirmatif).
Prparation des dilutions des chantillons analyser.

15

18

21

Recherche et dnombrement des Coliformes totaux chez la moule


Perna perna (test prsomptif).
Recherche des Coliformes thermotolrants et identification
d'Escherichia coli chez la moule Perna perna (test confirmatif).
Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux chez la
moule Perna perna (test prsomptif).
Confirmation de la prsence des Streptocoques du groupe
srologique D chez la moule Perna perna (test confirmatif).
Recherche et dnombrement des germes
anarobies sulfito- rducteurs.
Identification des germes
anarobies sulfito-rducteurs.
Recherche des Salmonelles.

22

Recherche des Staphylocoques pathognes.

27

23

Recherche de Pseudomonas.

28

11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

14

16
17

19
20
21
23
24
26

24

Recherche des caractres biochimiques.

30

25

Inoculation de la galerie API 20 E.

31

26

Variations mensuelles de la temprature de leau


(Janvier 2008-dcembre 2008).
Variations mensuelles de la salinit de leau
(Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations mensuelles du pH de leau
(Janvier 2008- dcembre 2008).
Variation mensuelles des teneurs en oxygne dissous de leau
(Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations mensuelles des matires des teneurs en suspensions
dans leau (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes totaux
dans leau (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes
thermotolrants (Escherichia coli) dans leau (Janvier 2008dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques totaux
dans leau (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques fcaux
dans leau (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes totaux
releves chez Perna perna (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes
thermotolrants (Escherichia coli) releves chez Perna perna
(Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques totaux
releves chez Perna perna (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations spatio-temporelles des Streptocoques fcaux
chez Perna perna (Janvier 2008- dcembre 2008).
Variations temporelles de lorigine de la contamination de leau

33

49

42

Calcul de lintervalle de confiance des Coliformes et des


Streptocoques de leau
Calcul de lintervalle de confiance des Coliformes et des
Streptocoques des moules
Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation) Eaux

43

Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Eaux

52

44

Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation)- Moules

53

45

Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Moules

54

46

Escherichia coli (E .coli) en coloration Gram

75

47

Les Streptocoques germes indicateurs dune contamination fcale

76

27
28
29
30
31
32

33
34
35
36

37
38
39
40
41

34
35
36
37
38
39

40
41
42
43

44
45
46

50
51

48

Vibrion du cholra en coloration Gram.

77

49

Salmonella typhimurium en rouge.

78

50

Les Staphylocoques en coloration Gram.

80

51

Clostridium botulinum en coloration Gram.

82

52

Pseudomonas aeruginosa en coloration de Gram.

83

53

Shigella flexnarii en rouge.

83

54

Structure et anatomie dune moule.

85

55

Disposition des insertions musculaires sur la coquille de Perna perna


(A) et de Mytilus galoprovencialis (B).
Charnire de la valve gauche.

88

56

89

Liste des tableaux


Tableaux
1
2
3
4

Titres
Le calcul du nombre probable de germes (exemple dchantillon
deau).
Le calcul du nombre probable de germes (exemple de la moule).

pages
22
22

Rsultat des tests prsomptifs destins la recherche et


lidentification des bactries pathognes chez les bivalves.
Critres microbiologiques pour les mollusques bivalves et niveau de
salubrit des zones de production (Communaut Europenne,1991).

47

Principaux agents pathognes pour les animaux sang chaud et


pour lhomme, frquents dans les eaux pollues (Creteur, 1998)

71

59

Comportement de quelques groupes microbiens en fonction du


milieu (Guiraud, 2003)

74

Dtermination de lorigine de la pollution fcale selon le rapport de


Bourgeois (1980).

76

Dtermination de lorigine de la pollution fcale selon le rapport


CF/SF. Borrego et Romero (1982).

76

Importance des principales espces du genre Salmonella (numro


dordre sur 20 espces) chez lhomme, les animaux, dans les gouts
et en eau de mer et toxi-infections associes. (Equinoxe (1990)

79

10

Caractres distinctifs entre la musculature de M. galloprovincialis et de


Perna perna (Lubet, 1973)

87

11

Table de Mac Grady pour 3 sries de 3 tubes (Eau).

90

12

Table de Mac Grady pour 3 sries de 3 tubes (bivalves).

90

13

91

14

Normes de la qualit requise des eaux de baignades du dcret


xecutif N :93-1964 de 10/07/1993 du JORA N 46.
Normes de la qualit des eaux conchylicoles

15

Critres microbiologiques pour les coquillages bivalves

92

16

Principale industrie dversant dans le Golfe dAnnaba.

92

17

Reprsentations des rejets domestiques de la wilaya DAnnaba et de


leurs milieux rcepteurs.
Localisation des stations de relevage des eaux uses de la wilaya
dAnnaba.
Donnes mtorologiques (Office National de la Mtorologie,
2008)

93

18
19

91

93
94

Introduction
Pendant longtemps, les hommes se sont peu proccups de leur milieu naturel,
singrant dans la nature et usant delle sans compter, amnageant tour de bras, et rejetant
largement effluents et dchets de toutes sortes.
Croyant aux proprits purificatrices sans limite de l'environnement aquatique, ils
lont utilis sans crainte comme poubelle du monde, dversant dans les eaux littorales tous
les rejets, toxiques ou non, radioactifs ou ptroliers, aussi bien dans les estuaires qu'
proximit des ctes. Le constat a t dramatique.
Selon Lacaze et Ramade (1993), l'ocan, lui-mme, n'est plus considr officiellement
comme un rservoir infini. On a enfin ralis les limites de sa taille comme celles de son
pouvoir, ces limites qui ne sont pas loin d'tre atteintes pour plusieurs zones ctires (lagunes,
baies, anses, ports, estuairesetc).
Pour les mers fermes, les menaces sont inversement proportionnelles leur dimension
(Lacaze et Ramade, 1993), Bordes par des nations industrieuses et industrielles, la mer
Baltique, la mer du Nord, la Manche, la Mditerrane... sont en danger. Leurs surfaces et leurs
volumes sont limits et les brassages par les courants y sont faibles (Arrignon, 1991).
La Mditerrane qui ne reprsente que 1% de la surface des ocans (Gallini, 2008), est
lun des milieux marins et ctiers les plus riches mais aussi l'un des plus vulnrables au
monde du fait de son exposition tout un ensemble de nuisances dont 80 % sont d'origine
terrestre. Ses eaux baignent 22 pays riverains qui comptent plus de 4. 108 habitants dont 143.
106 rsident dans les zones ctires ; a ceux-ci s'ajoutent chaque anne quelque 175.106 de
visiteurs, dont plus de la moiti de ses agglomrations urbaines ne disposant pas de stations
d'puration de leurs eaux rsiduaires, 60 % d'entre elles dversent directement leurs eaux
uses dans la mer et plus de 80 % des dcharges de ces pays mridionaux et orientaux ne sont
pas contrles, (MeHSIP, 2008).
Le milieu marin mditerranen est particulirement expos au dversement de dchets
agricoles, de particules en suspension dans l'air et d'eaux de ruissellement charges d'agents
pathognes, de mtaux lourds, de matires organiques polluantes, d'huiles et de substances
radioactives, (MeHSIP, 2008), dont lorigine sont les activits industrielles,le transports
maritimes (30% du trafic maritime mondial) et les activits domestiques avec des rejets en
mer estims 6.105 tonnes chaque anne, soit l'quivalent de 30 catastrophes de type "Erika"
(Gallini, 2008).
Le littoral Algrien avec une faade maritime longue de 1200 Km, est caractris par
une concentration de populations et des activits industrielles; ces dernires s'accaparent les
meilleurs sites littoraux et se dveloppent au dtriment des autres usages lis la mer,
entranant des risques rels pour les agglomrations limitrophes et les milieux marins
(Kacemi, 2006).
Le golfe dAnnaba et le littoral dEl kala connaissent au mme titre que le reste du
littoral Algrien, les mmes problmes environnementaux; Ils sont exposs aux risques des
diffrents types de pollutions d'origine anthropique qui ont un impact sur les organismes qui y
vivent et sur lhomme.

Leau pollue par les diffrents rejets (industriels, domestiques, agricoles,etc),


hberge et vhicule des bactries en transit (Encarta, 2003). Le transfert physique de ces
dernires (li au ruissellement) dpendra des conditions climatiques, pdologiques et
gographiques. Par ailleurs, leur survie sera fonction de leur capacit physiologique
d'adaptation des environnements divers ; les conditions hivernales apparaissent les plus
risque, compte tenu du ruissellement induit par les pluies sur des sols nus et du faible
ensoleillement favorisant la survie bactrienne.
Beaucoup dorganismes marins accumulent les contaminants de trs fortes concentrations dans leurs
tissus. Les bivalves filtrent leau de mer (de 100 650 l/heure /Kg d'animal vivant) pour en
tirer les lments ncessaires leur survie (plancton), ils retiennent en mme temps bactries
(de 100.000 plus de 10l5de germes par gramme de broyt), virus, et les concentrent (Brissou et
Denis, 1980). Cette Bio-accumulation est variable selon les espces de coquillages, leurs
situations (immersion ou non) et bien sr, selon la nature du contaminant. Les coques et
palourdes, coquillages fouisseurs, se contaminent plus facilement que les autres. Leurs tubes
digestifs plus longs favorisent un temps de rtention plus lev (MSSF, 2003). En raison de
cette capacit de filtration et daccumulation importante des particules et polluants du milieu,
les bivalves ont t retenus comme Bio-indicateur de la contamination, par excellence
(Jorgensen, 1960).
La consommation des bivalves contamins, expose le consommateur un risque de toxiinfection : Fivre typhode, Salmonellose, Shigellose, Campylobactriose, Cholra, Gastroentrite virale et Hpatite A (Smith De Waal et al ., 2001 ; Potassman et al., 2002, Herv et
al., 2003). En France, des pidmies de gastro-entrites lies la consommation de
coquillage, ont t enregistres en 1983 (4000 cas) et en 1992 (hutres de l'tang de Thau).
Aux USA, entre 1990 et 2000, il a t rpertori 66 sortes dpidmies, dont 3299 cas ont
pour origine l'ingestion de mollusques bivalves (Smith De Waal et al., 2001).
Pour prserver le consommateur, la communaut europenne (1991) tout d'abord
dicte des normes de concentration en coliformes fcaux, pris comme indicateur de
contamination potentielle des eaux par des germes pathognes : 102 E. coli /100ml dans les
eaux de baignades et 2.3 102 E. coli /100ml dans les eaux de conchyliculture.
Par la suite, la directive europenne 91/492/EC (Communaut europenne, 1991) dfinit
les critres microbiologiques pour les bivalves; cette dernire tablit que la qualit
microbiologique de ces aliments doit tre contrle en mesurant les Coliformes fcaux (moins
de 300 pour 100g), Escherichia coli (230 pour 100g), et les salmonelles (absence).
Notre travail entre dans le cadre d'un projet de recherche portant sur la bio-surveillance
des plans d'eau et les risques de contaminations bactriologiques.
Ltude a pour objectifs :
o De dterminer la qualit bactriologique de l'eau et des bivalves par la recherche et le
dnombrement des indicateurs de contamination et leur distribution spatio-temporelle.
o De suivre l'volution des paramtres physico-chimiques (Temprature, pH, Oxygne
dissous, salinit et matires en suspensions) de l'eau mer.
o De dterminer la source probable de la contamination.

Matriel et mthodes
1. Prsentation de la zone dtude :
La zone dtude correspond la partie extrme, Nord- Est du littoral algrien,
dlimite lOuest par le cap de Garde et lEst par le cap Segleb et comprend le Golfe
dAnnaba et le littoral dEl kala.
1.2. Le Golfe dAnnaba :
Le Golfe dAnnaba est limit lOuest par le Cap de Garde (57 16' E 36 58 N) et
lEst par le Cap Rosa (815 E et 36 58 N). La faade maritime de cette zone stend sur
une longueur denviron 21,5 milles (40 Km) de ctes reprsentant un potentiel halieutique
trs important (fig.1).

Figure 1 : Reprsentation du Golfe dAnnaba.

Le plateau continental est troit et accident dans son ensemble avec un fond htrogne
surtout au voisinage des deux Caps. Il est nettement restreint au Nord du Cap de Garde
(4,5milles), puis slargit dans le Golfe jusqu 14,5 milles avant de se rtrcir lgrement
lEst au voisinage du Cap Rosa (Vaissiaire et Fredj, 1963).
Entre les deux Caps, la profondeur moyenne est estime 50 m avec une profondeur
maximale de 63 m. La plate-forme continentale savance jusqu 10 milles seulement au large
(Gruvel, 1926).

La bathymtrie entre les deux caps limitant le Golfe dAnnaba est estime 65m. Les
isobathes-10 m et -20 m sont trs rapproches de la cte nord du Cap de Garde, les deux
lignes sloigne lune de lautre, au niveau de loued Seybouse jusquau port (sud du golfe)
Lisobathe -50 m est dtache des isobathes prcites (Vaissiaire et Fredj, 1963).
Concernant les caractres physico- chimiques, la temprature joue un rle majeur dans
les variations de la densit de leau.
Daprs Frihi (1995) au Sud-Est du Golfe dAnnaba, la temprature moyenne varie
entre 16C en hiver et 28,8 C en t avec une amplitude de 12,8 C. Comme pour la
temprature, la salinit diffre entre les deux secteurs, les valeurs varient de 31.4 37.5 mg/l
avec une amplitude de 6.5 mg/l. Au Nord-Ouest, la salinit est sensiblement stable et varie
entre 36.9 et 37.6 mg/l avec une amplitude rduite de 0.7 mg/l. Ces variations de salinit entre
les deux rgions sont dues aux rythmes du dbit des oueds Seybouse et Boudjema.
Daprs les travaux de Lacombe (1973), se rapportant laspect physique des eaux
mditerranennes, la vitesse du courant atlantique circulant dans cette mer est de 0.5 0.7
m/s.
En gnral lhydrodynamisme sur le littoral Est Algrien est marqu par des
mouvements de faible amplitude. Dans le golfe, il existe un courant dirig dOuest vers lEst
avec des vitesses fluctuantes selon les saisons (0,8 2,5 noeuds), qui passe quelques milles
au large. Un autre de plus faible intensit (0,5 1,5 nuds) circule proximit de la rive
Ouest (Anonyme, 1976).
Les houles sont dorigine Nord-Ouest Est-Nord- Est. Elles peuvent tre classes en
trois catgories : deux directions du large Nord-Est et Est-Nord- Est avec amplitude de 1.2 6
m ; deux directions Ouest et Ouest Nord Ouest avec une amplitude de 1 5 m et des houles
venant de diffrentes directions avec une amplitude de 1 2 m.
Le Golfe dAnnaba reoit des rejets directs de plusieurs industries installes sur la cte
(tab. 16) en particulier celle des produits phytosanitaires (Fertial), il reoit galement les eaux
uses urbaines (tab. 17) qui ne subissent quun traitement sommaire au niveau de la station de
Sidi Brahim ; Les autres stations sont destines la collecte des eaux uses (Tab. 18). Il existe
aussi beaucoup dautres sources de contaminations qui sont rparties tout au long du littoral
(Oued Seybouse, Oued Mefrag, Oued Bedjma, missaires Rezgui Rachid et Rizi Amor).

1.3. Le littoral dEl Kala:


Le littoral dEl Kala est situ lextrme Est de la cte Algrienne ; il stend du Cap
Rosa lOuest (815 E et 36 58 N), au Cap Segleb (la frontire Tunisienne) lEst.
Le plateau continental est relativement troit lEst et slargit lOuest ; les
isobathes -20 m et -100m sont en effet situs 7 Km lEst et atteignent 30 Km lOuest
(Fig.2).
Le littoral gnralement intgr au dtroit de Sardaigne duquel il est trs proche, est le
sige dintenses transports de lEau Atlantique Modifie, coulant en surface vers lEst et de
lEau Levantine Intermdiaire qui coule en profondeur vers lOuest (Manzella et la Violette,
1990 ; Perkins et Pistek, 1990).

Il reoit trs peu dextrusions continentales en raison des faibles apports deau douce
(rivire); toutefois, le lac El Mallah vacue dans le littoral 180 millions de m3 deau saumtre
dune salinit comprise entre 3 et 25 %0 ; de ce fait, ce plan deau qui effectue des changes
hydrodynamiques avec le littoral au rythme des mares, a tendance fertiliser ce milieu en
sels nutritifs tout en diminuant la salinit de la bande ctire (Retima, 1999).
Selon Ghaidalia et Bourgeois, (1961), la Mditerrane est une mer chaude o les carts
de tempratures entre les couches superficielles et les couches profondes sont relativement
accentus (jusqu' moins de 400m 500m) ; cette profondeur la temprature se stabilise
autour de 13C- 14C. Par ailleurs, Ounissi et al, (1996), rapportent que lcart de temprature
entre leau de surface et celle se trouvant 50m de profondeur, dpasse 4C ; quant la
salinit, la diffrence entre leau de surface et cette profondeur, elle nexcde pas 1 g/l.

Figure 2 : Reprsentation du Littoral dEl Kala


(Benyacoub, 1996 modififie)

1.4. Sites dchantillonnages :


5 sites ont t retenus dans le cadre de cette tude (fig.3).

Figure 3 : Positionnement des sites dtude (Google, 2008 modifie).


o Site 1 : Cap de Garde:
Il se situe lOuest de la zone dtude (365759.94 N 74738.30 E), il est
suppos ntre expose aucune source de pollution du fait de sa localisation assez loigne
des divers rejets, mis a part la prsence de quelque habitations, non relies au rseau
dassainissement ainsi que son accessibilit en saison estivale (fig.4).

Figure 4: Image satellitaire montrant le site 1 : Cap de Garde (Google, 2008 modifie).

o Site 2 : Rezgui Rachid (Ex St Cloud) :


Il est situ dans la zone ctire centre (36552.68N 7464.83E). Il reoit les
rejets urbains des quartiers centre et Ouest dAnnaba sans traitement pralable ainsi que les
eaux de pluie. Il est, par ailleurs, trs frquent en priode estivale (fig.5).

Figure 5: Image satellitaire montrant le site 2 : Rezgui rachid (Google, 2008 modifie).
o Site 3 : Sidi Salem :
Il se situe lEst de la ville dAnnaba (365218.13N 7468.32E) dans la commune
dEl Bouni entre oued Seybouse et Bedjima, il reoit les rejets industriels du complexe
dengrais phosphatis de Fertial ainsi que les rejets urbains dune grande partie de la ville
dAnnaba par le biais de oued Bedjima et des agglomrations situes dans le bassin versant
de oued Seybouse. Bien que non autoris la baignade, il est trs frquent en priode
estivale (fig.6).

Figure 6: Image satellitaire montrant le site 3 : Sidi Salem (Google, 2008 modifie).

o Site 4 : Hnaya :
Il se situe lEst du Golfe dAnnaba (36536.59N 848.70E), il est suppos ntre
expos aucune source de pollution du fait de sa localisation assez loigne des divers rejets;
il est frquent par les pcheurs et les animaux ainsi que quelques estivants en t (fig.7).

Figure 7 : Image satellitaire montrant le site 4 : Hnaya (Google, 2008 modifie).


o Site 5 : Aouinate :
Il se situe dans la partie Est du littoral dEl Kala (365426.89N-83030.68E), il
nest expos aucune source de pollution du fait de sa localisation assez loigne des divers
rejets. Cependant, il est frquent par les estivants en t. (fig.8).

Figure 8 : Image satellitaire montrant le site 5 : Aouinate (Google, 2008 modifie).

2. Mesure des paramtres physico-chimiques de leau:


Une mesure mensuelle, des paramtres physico-chimiques de leau a t effectue de
janvier dcembre 2008.
La mesure de la temprature, du pH, de la salinit et de loxygne dissous, leur mesure
a t ralise in situ, laide dun multi paramtres de terrain (Consort C535) ; ce dernier doit
tre pralablement talonn puis calibr ; La sonde est ensuite immerge dans lchantillon
deau pendant quelques secondes, le rsultat obtenu, saffiche lcran avec lunit de mesure
correspondante.
Quant la dtermination des matires en suspension (MES) de l'eau, on a utilis la
mthode par filtration sur disque filtrant. Elle repose sur la sparation des matires particulaires en
suspension grce au filtre wattman GF/C de 0,45 p.m pour des volumes dfinis ; Dans le cadre
de cette tude, nous avons utilis 100 ml d'eau de mer.
Pralablement pess, puis schs 105C pendant une heure, les filtres sont pess une
deuxime fois, ce qui nous permet d'estimer par la suite la part des matires en suspension, et ceci
en faisant la diffrence du poids des filtres avant et aprs filtration.
La teneur en matires en suspension est exprime en milligramme par litre (mg/1) (Rodier,
1978), et donne par la formule suivante :
M.E.S (mg /1) = (M '- M ) 1000
V
M0 = masse du filtre avant utilisation (mg).
Mi = masse du filtre aprs utilisation (mg).
V = volume filtr (ml).

3. Analyse bactriologique des chantillons:


Dans cette tude, nous avons recherch les bactries indicatrices de pollution
(Coliformes, Streptocoques et anarobies sulfito-rducteurs), et les bactries pathognes
strictes ou pathognes opportunistes.
Pour la recherche des bactries indicatrices de pollution, nous avons procd un
dnombrement en utilisant une mthode simple, qui est la colimtrie. Celle-ci dsigne la
technique de numration en tubes multiples (TNTM) avec dtermination du nombre de
germes le plus probable (NPP) partir de la table de Mac Grady extraite de la norme NF T90413, prconise par lunit de coordination de PAM (Plan dAction pour la Mditerrane)
(Anonyme 1987). Cest lexamen le plus important et le plus pratiqu dans les analyses de
leau ou de fruits de mer, rpondant des proccupations sanitaires (Rodier, 1978).
Pour la mise en vidence des bactries anarobies sulfito- rductrices, considres
aussi comme des tmoins de pollution fcale, nous avons utilis, la recherche et le
dnombrement par incorporation en glose.
Quant la recherche des bactries pathognes (Salmonelles, pseudomonas et
staphylocoques), elle a t effectue par ensemencement sur glose spcifique.

3.1. Prlvement de leau :


Les prlvements deau sont effectus mensuellement durant la priode stalant de
janvier dcembre 2008.
Pour cela, nous utilisons des flacons en verre dune capacit de 250 ml soumis au
pralable a un nettoyage rigoureux (un rinage a l'eau potable puis 3 rinage l'eau distille)
schs, bouchs, envelopps sparment dans un morceau de papier filtre (Rodier, 2005) puis
striliss lautoclave une temprature de 121 C pendant 15mn (O.M.S.1983). Les flacons
striles sont plongs une profondeur denviron 50 cm de la surface de leau puis ouverts
contre courant. Une fois remplis, ils sont referms sous leau pour viter la formation de
bulles dair et tout risque de contamination lors du transport.
Une fois les prlvements effectus, les flacons sont tiquets et placs dans une
glacire l'abri de la lumire et une temprature de 4C car la teneur en germes des eaux
risque de subir des modifications dans les flacons, aprs le prlvement. Lvolution est
dailleurs assez difficile prvoir et dpend de nombreux facteurs ; temprature, concurrence
bactrienne des espces prsentes, composition chimique de leau. Cest pour cela que toute
analyse doit tre effectue le plus rapidement possible.
La norme NF T 90-420 de fvrier 1987 indique que les chantillons doivent tre
maintenus une temprature comprise entre 1et 4C ds leur prlvement. Ils doivent tre
analyss le jour mme, il est donc admis que le dlai maximum entre le prlvement et le
dbut de lanalyse ne doit pas excder 24 heures, aussi il est prfrable de le raccourcir
lorsque leau est prsume tre trs pollue (Rodier, 2005)
En ce qui concerne, la surveillance des eaux ctires, l'analyse au laboratoire dbute
dans un dlai maximum de 8 heures aprs le prlvement de l'chantillon selon les
recommandations de Rodier (1984).
Tout prlvement doit tre accompagn d'une fiche de renseignement sur laquelle on
note :
o Lieu de prlvement.
o Date et heure de prlvement.
o L'tat de la mer.
o Le vent (la direction).
3.2. Rcolte des bivalves et prparation des chantillons :
Lespce Perna perna est retrouve au niveau des zones rocheuses des sites prcits.
La rcolte seffectue manuellement et de faon alatoire. Les bivalves rcolts sont au
nombre de 4 7 selon la taille; ils sont placs dans des sacs de conglations propres et
tiquets, sur lesquels on note la date, le site et lespce.
Ensuite, ils sont entreposs dans des glacires une temprature comprise entre 4C
10C (A.C.I.A, 2004) pour tre achemins au laboratoire.
Une fois au laboratoire, les moules sont dbarrasses des byssus et des pizoaires
prsents sur leurs coquilles, puis brosses sous l'eau du robinet et enfin dsinfectes
superficiellement par un jet d'alcool et flambage rapide.

Aprs ouverture aseptique, le contenu entier : chair et liquide inter-valvaire est recueilli
strilement, puis dilu, et soumis au broyage par un broyeur homogniseur, Ultra-Turrax,
pralablement nettoy (15 000 t/mn pendant 30 secondes), afin dobtenir un broyat
homogene considr comme la dilution mre de lchantillon tester (OMS, 1983).
L'analyse porte donc sur la chair et le liquide inter-valvaire (Guiraud, 2003).
3.3. Analyse bactriologique de leau
3.3.1. Prparation des dilutions dcimales:
Conformment aux normes AFNOR NF VO8-010 et ISO 6887-1, on effectue des dilutions
dcimales pour chaque chantillon l'aide d'eau distille strile; ou tampon phosphate. Elles doivent
tre effectues dans des conditions aseptiques et minutieuses. Les dilutions suivent des sries
logarithmiques dont les termes sont en progression gomtriques : 0.1 ; 0.01 ; 0.001 ;etc.
*Les dilutions :
o Dilution 10 : consiste la prise directe de la solution mre.
o Dilution 10-l: dans un tube essai contenant 9ml d'eau distille strile, on ajoute 1ml d'eau
analyser (10).
o Dilution I0-2: Dans un deuxime tube essai, on ajoute 1ml de la dilution 10-l 9ml d'eau distille
strile (fig.9).
NB : L'agitation du contenu est ncessaire avant de prparer chaque dilution.

Dilution 10

Dilution 10

1 ml

Dilution 10

1 ml

100 ml
Eau analyser

9 ml d'eau

9 ml d'eau

distille

distille strile

strile
Figure 9 : Prparation des dilutions

3.3.2. Recherche et dnombrement des Coliformes totaux et recherche d'Escherichia coli :


*Principe :
Conformment la norme NF T90- 413, il consiste utiliser des milieux liquides de bouillon
lactose bili au vert brillant (BLBVB), dans des tubes munis de cloches de Durham. La prsence des
germes recherchs se traduit par :
o Un virage de couleur dans toute la masse liquide.
o Un dgagement de gaz dans les cloches.
*Mode opratoire :
La colimtrie comporte deux tests: - Un test prsomptif.
- Un test confirmatif.
Le dnombrement est effectu suivant la mthode du nombre le plus probable (NPP) de la
table de Mac Grady (Annexe).

*Test prsomptif: Recherche et dnombrement des coliformes totaux:


On prpare 3 sries de 3 tubes chacun contenant 9 ml de bouillon lactose bili au vert brillant
(BLBVB) simple concentration, munis de cloches de Durham.
Chacun des 3 tubes de la premire srie reoit 1 ml de la dilution 10 (solution mre).Les
tubes de la deuxime et troisime srie reoivent respectivement 1 ml de la dilution 10-l et 1 ml de la
dilution 10-2.
Nous agitons pour homogniser, sans faire pntrer l'air dans la cloche de Durham.
L'ensemble des tubes ainsi prpars est incub 37 C pendant 24 48 h (fig.10).

Remarque :
Cette phase de la colimtrie se base sur la proprit commune des Coliformes fermenter
le lactose tout en produisant du gaz ; elle ne permet que de prsumer de la prsence des coliformes
dans leau analyser. De ce fait, l'application du test confirmatif simpose.

Dilution 10

Dilution 10

Dilution 10

Solution mre
100ml d'eau

analyser

1ml

9 ml de bouillon
lactos bili au
vert brillant BLBVB
+ cloche de
Durham

INCUBATION 24 - 48 H 37 C
Figure 10 :

Recherche et dnombrement des Coliformes fcaux


(test prsomptif)

*Test confirmatif : Identification des Coliformes thermotolrants (Escherichia coli) :


Les tubes positifs prsentent un virage de couleur ainsi quun dgagement de gaz dans la
cloche de Durham ; ces derniers sont rensemencs dans des tubes d'eau peptone exempte dindole
(preuve Deikman). Pour cela nous prlevons 2 3 gouttes que nous rajoutons dans des tubes contenant
de l'eau peptone exempte d'indole. Les tubes sont referms et incubs 44 C pendant 24 48 h
(fig.11).

*Lecture:
- Formation danneau rouge la surface des tubes deau pptone aprs addition de 2 3 gouttes
du ractif de kovacs tmoignant de la production dindole par E.coli, suite la dgradation du
Tryptophane grce la Tryptophanase.
- Production de gaz dans les cloches des tubes de BLVBVB
* Nous notons le nombre de tubes positifs et nous exprimons le nombre le plus probable de
germes dans 100 ml dchantillon deau, selon la table de Mac Grady (annexe).

3.3.4. Recherche et dnombrement des Streptocoques (Entrocoques) et identification des


Streptocoques de groupe srologique D de Lancefield:
La recherche des Streptocoques (Entrocoques) est associe celle des Coliformes d'o la
ncessit de les combiner ensemble (Rodier, 1978).
*Principe :
Conformment la norme NF T 90-411, le principe se rsume la recherche et au
dnombrement des Streptocoques du groupe D en milieu liquide. Alors que les tubes primaires
contiennent dj une certaine quantit d'azide de sodium (milieu de Rothe), le repiquage des tubes
positifs se fait sur un milieu nettement inhibiteur avec une concentration plus leve en azide

de sodium et de cristaux violets (milieu Litsky), ne laissant se dvelopper que les Streptocoques
ou Entrocoques.
*Test prsomptif : Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux.
On prpare 3 sries de 3 tubes contenant chacun 9 ml de milieu Rothe (simple
concentration). Dans la premire srie de tubes nous rajoutons 1ml de la solution mre (10).On
ralise la mme opration avec les 2 autres sries en ajoutant aux 3 premiers l ml de la dilution 10-1 et aux
3 autres 1 ml de la dilution 10-2, l'ensemble des tubes ainsi prpars sont incubs 37 C pendant 24
48 h (fig.12). Les tubes prsentant un trouble bactrien sont considrs comme positifs.

Dilution 10

Dilution 10

Dilution 10

100 ml d'eau
analyser

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

9 ml du milieu
de Rothe S/C

INCUBATION 24 - 48 H 37 C
Figure 12: Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux
dans l'eau (test prsomptif)

*Test confirmatif : Identification des Streptocoques du groupe srologique D.


Nous prlevons 2 3 gouttes de chaque tube positif prsentant un trouble bactrien, que nous
repiquons dans des tubes contenant 9 ml de milieu Litsky. Par la suite les tubes sont incubs 37 C
pendant 24 48 h
(fig. 13).

*Lecture:
Nous considrons comme positifs les tubes dans lesquels il y a apparition d'un trouble bactrien
qui confirme la prsence des streptocoques fcaux; parfois, la culture s'agglomre au fond du tube en
fixant le colorant et en formant une pastille violette de signification identique celle du trouble
bactrien. (Rodier, 1975).

3.4. Analyse bactriologique des bivalves :


Lanalyse des chantillons de moules Perna perna, doit se faire dans les heures qui
suivent leur rcolte afin dviter une prolifration et une modification de la communaut
bactrienne. Aucun chantillon ne doit tre conserv pendant plus de 24h (ACIA, 2004).
3.4.1. Prparation des dilutions dcimales :
Conformment la norme NF VO8-010
o Dilution 10- : Dilution mre (25g de chair et de liquide inter valvaire + 225 ml deau distille strile).
o Dilution 10-1 : Dans un deuxime tube essai contenant 9ml d'eau distille strile, on ajoute
1ml du broyat (10).

o Dilution 10-2 : Dans un troisime tube essai, on ajoute 1 ml de la dilution prcdente (10-1) 9 ml
deau distille strile (fig. 14).
NB : L'agitation du contenu est ncessaire avant de prparer chaque dilution.

1 ml

1 ml

9 ml
deau
distille
strile
Dilution mre
25g de chair+liquide inter
valvaire
+225ml deau distille strile

10-1

10-2

Figure 14 : Prparation des dilutions des chantillons analyser

3.4.2. Recherche et dnombrement des Coliformes totaux et recherche d'Escherichia coli:


*Principe :
Conformment la norme NF T90- 413 et de la mme faon que pour leau, la recherche
consiste utiliser des milieux liquides de bouillon lactose bili au vert brillant (BLBVB), dans des
tubes munis de cloches de Durham. La prsence des germes recherchs se traduit par le virage de la couleur
avec dgagement de gaz.

*Test prsomptif: Recherche et dnombrement des Coliformes totaux:


On prpare 3 sries de 3 tubes chacun contenant 9 ml de bouillon lactose bili au vert brillant
(BLBVB) simple concentration, munis de cloches de Durham. Chacun des 3 tubes de la premire
srie reoit 1 ml de la dilution 10 (dilution mre).Les tubes de la deuxime et troisime srie
reoivent respectivement 1 ml de la dilution 10-l et 1 ml de la dilution 10-2.
Nous agitons pour homogniser, sans faire pntrer l'air dans la cloche de Durham. Le tout est
incub 37 C pendant 24 48 h (fig. 15).

10-1

10-2

Le broyat

1 ml

1 ml

1 ml

9ml de BLBVB
+ cloche

Incubation 24 48 h 37C
Figure 15 : Recherche et dnombrement des Coliformes totaux chez la moule Perna perna
(test prsomptif)

*Test confirmatif: Identification des Coliformes thermotolerants (E. coli) :


Nous prlevons 1 ml des tubes positifs prsentant un virage de couleur, ainsi qu'un
dgagement de gaz dans la cloche de Durham, que nous rajoutons un tube contenant 9ml de bouillon
lactose bili au vert brillant (BLBVB) et 1ml que nous additionnons un tube contenant 9ml d'eau
peptone exempte dindole. Les tubes ainsi prpars sont incubs 44 C pendant 24 48 h (fig. 16).

3.4.3. Recherche et dnombrement des Streptocoques (Entrocoques) et identification des


Streptocoques du groupe srologique D de Lancefield .
*Test prsomptif: Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux.
Conformment la norme NF T 90-411, noue avons ensemenc 3 sries de 3 tubes contenant
9ml de bouillon de Rothe simple concentration (fig. 17).
- Une 1ere srie de 3 tubes avec 1ml de broyt analyser de dilution mre
- Une 2eme srie de 3 tubes avec 1ml de la deuxime dilution (10-l).
- Une 3 eme srie de 3 tubes avec 1ml de la troisime dilution (10-2).
Nous homognisons par agitation du contenu des tubes de faon ce que les bactries et
la concentration en inhibiteurs soient identiques en tout point.

Nous incubons les tubes pendant 24 48h 37 C,les tubes prsentant un trouble bactrien sont
prsums contenir des streptocoques et sont soumis un test confirmatif.

Dilution 10

Dilution 10

Dilution 10

Broyat
de bivalves

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

9 ml du milieu
de Rothe S/C

INCUBATION 24 - 48 H 37 C
Figure 17: Recherche et dnombrement des Streptocoques totaux
chez la moule Perna perna (test prsomptif)

*Test confirmatif : Identification des Streptocoques du groupe srologique D.


Aprs agitation des tubes positifs nous prlevons 2 3 gouttes de chaque tube positif, et nous
les repiquons dans un tube contenant du milieu Litsky; nous incubons 37C pendant 24 48 h (fig. 18).
Nous notons le nombre de tubes positifs et nous exprimons le nombre le plus probable de germes
dans l'chantillon selon la table de Mac Grady (annexe).

Techniques de quantification bactrienne:

Le calcul du nombre probable de germes est effectu en se rapportant la table de Mac


Grady (Annexe).
1- Cas de linoculation de chaque dilution deau dans 3 sries de 3 tubes de milieu de
culture :

Tableau 1 : Le calcul du nombre probable de germes (exemple dchantillon deau).

Tubes
Tube 1
Tube 2
Tube 3
Rsultat

1/10
+
+
+
3

Dilutions
1/100
+
+
+
3

1/1000
0

(+) : Tube positif, (-) : Tube ngatif.


o Si nous avons 3 tubes positifs dans la premire srie 1/10 et 3 tubes positifs dans la
deuxime srie 1/100, et aucun tube positif dans la troisieme1/1000, alors nous lisons
"3.3.0".

o Daprs la table de Mac Grady (annexe), "330" correspond 240 germes /100ml deau
(tab.1).
2-Cas de linoculation de chaque dilution de bivalves dans 3 sries de 3 tubes de milieu de
culture :
Tableau 2 : Le calcul du nombre probable de germes (exemple de la moule).
Dilutions
Tubes
Tube 1
Tube 2
Tube 3
Rsultat

1/10
+
1

1/100
0

1/1000
0

o Daprs la table de Mac Grady (Annexe), le nombre caractristique 100 correspond


0.4 germes dans la dilution 10-1
o Multipliant 0.4 par le facteur de dilution (10), donc on aura comme rsultat 4 germes/g
de broyat
o Donc 400 germes/100ml de broyat dans la dilution10-1 (Brissou et Denis ; 1978)
3.5. Recherche des germes pathognes chez les bivalves
Cette tude qui porte sur la recherche et le dnombrement des Coliformes et des
Streptocoques fcaux, a t complte par la recherche des germes pathognes chez les
bivalves prsents dans les 5 sites dtudes.
3.5.1. Recherche et dnombrement des germes anarobies sulfito- rducteurs :
Le milieu Viande Foie est un milieu de culture. Il est principalement utilis en tube
profond pour la dtermination du type respiratoire des micro-organismes, mais aussi pour la
culture de germes anarobies stricts tels que les Clostridium.

*Principe:
Conformment la norme NF T 90-415, aprs destruction des formes vgtatives par un
chauffage 80C, l'chantillon est incorpor un milieu de base fondu, additionn de sulfite
de sodium et de sel de fer.
Aprs solidification et incubation, la prsence de germes sulfito - rducteurs se traduit
par un halo noir autour des colonies.
*Mode opratoire :
Les colonies sont identifies sur milieu glos VF (viande - foie) solide additionn 1
ml de sulfite de sodium 10 % et 4 gouttes d'alun de fer 5 %.
Un chauffage de la dilution mre est ralis 80 C pendant 10 minutes : il permet de
slectionner les formes sporules. Plusieurs tubes contenant 15 ml de milieu en surfusion
reoivent respectivement 1ml de suspension. L'incubation dure 24 48 heures 37 C. Les
colonies noires sont identifies (fig.19).

4gouttes
dalun de fer

1ml sulfite de
sodium

5 ml de
dilution
mre

10mn 80C

Paraffine

5 ml de
Glose
viande-foie

Incuber
16 h 37C

Colonies

Figure 19: Recherche et dnombrement des germes


anarobies sulfito- rducteurs

A : Culture sur toute la hauteur : aro-anarobie


B : Culture seulement en haut : arobie stricte
C : Culture limite entre 0,5 et 1,5 cm du haut : micro-arophile
D : Culture seulement 1 cm au dessous du haut : anarobie stricte
Figure 20 : Identification des germes
anarobies sulfito-rducteurs

3.5.2. Recherche des Salmonelles :


*Principe:
Le slnite prsent dans le milieu denrichissement, inhibe la croissance des Coliformes
et les Entrocoques et enrichit les Salmonella et Proteus.
*Mode opratoire :
Conformment la norme NF V ISO 7218, nous avons procd comme suit :
- Prenrichissement : on met 25g de chair et de liquide inter valvaire broys lgrement dans 10
fois son volume deau peptonne tamponne. Incubation 37 C pendant 20 h au plus.
- Enrichissement : on prlve 1 ml du bouillon de prenrichissement et on ensemence deux
tubes de 20 ml chacun de milieux slectifs liquides (cystine-Slnite et bouillon ttrathionate).
Incubation 37C pendant 24 h.
- Isolement : on ensemence partir des bouillons denrichissement, la glose SS (glose
Salmonella - Sighele), qui est un milieu solide utilis pour l'isolement des salmonelles et des
Shigelles.
Le dveloppement de la flore secondaire dans le vert brillant, les sels biliaires, les fortes
concentrations en thiosulfates et en citrates, le lactose, sucre ractif du milieu, permet de dceler
la croissance ventuelle des coliformes (colonies rouges)
En outre, les bactries capables de produire de l'H2S par rduction du thiosulfate
donnent en prsence des ions de fer des colonies centre noir.
L'ensemencement sur glose SS se fait par stries dans des boites de Ptri, aprs 24
heures d'incubation 37 C (fig.21).

*Lecture :
On observe soit :
o Des colonies rouges :Enterobacter,Klebsiella et autres coliformes tels E.coli
o Des colonies incolores transparentes : Salmonella H2S -, Shigella,Serratia ,E.Hafniae,
Alkalescens, Proteus morganii.
o Des colonies incolores centre noir : Salmonella H2S +, Proteus vulgaris et mirabilis
o Des colonies centre orang :Proteus rettgeri, Providencia
o Des colonies rouges centre noir : Citrobacter freundii (en ralit seul le centre noire
est visible do confusion avec Salmonella), Arizona (mme remarque).
o

*Tests d'identifications :
On fait une coloration de Gram (annexe) partir des colonies suspectes dveloppes
sur la glose SS (btonnet Gram ngatif).
-Identification sur milieu TSI : (glose - glucose - saccharose - H2S ou glose aux trois sucres
et de fer) :
Ce milieu est utile pour diffrencier les bactries donnant des colonies lactose ngatives
et apparaissant donc comme suspectes sur les milieux d'isolement pour la recherche des
salmonelles et des shigelles. Ces bactries fermentent rapidement le saccharose.
La diffrenciation principale entre les Salmonella et Shigella ainsi que les Proteus
mirabilis et vulgaris, se fait grce au culot jaune, la pente rouge et au gaz qui apparaissent
aprs 24 heures d'incubation 37C.

25 g

1 ml

1 ml

Anse de platine

Glose SS
Stries

Broyat
=
25g de chair
et de liquide
inter
valvaire

10 fois son
volume
deau
peptonne
tomponne

20 ml
bouillon
ttrathionate

20 ml
Bouillon
de Slinite

Incuber 20h 2h 36 2C
couvercle en bas

Incuber 48 h 37 C

Incuber
20 h 37 C
Figure 21 : Recherche des Salmonelles

3.5.3. Recherche des Staphylocoques pathognes :


*Principe:
Le milieu Chapman est un milieu classique, il permet dune part l'isolement slectif des
staphylocoques sur la base de leur tolrance de fortes teneurs de Na Cl, et dautre part la
diffrenciation de souche Staphylococcus aureus, par la mise en vidence de la dgradation
du mannitol.
*Mode opratoire :
Selon la norme NF T 90-421 et la norme NF ISO 7218, le milieu Chapman doit tre
considr essentiellement comme le milieu d'isolement : l'ensemencement s'effectue par
culture en masse. L'incubation 37C pendant 24-48 h (fig.22).

*Lecture :
Sur ce milieu, les colonies de Staphylococcus aureus s'entourent d'un halo jaune du
l'attaque du mannitol et laborent souvent leur propre pigment dont la production s'accentue
aprs la sortie de l'tuve.
Les autres espces de Staphylococcus donnent des colonies gnralement plus petites,
roses et n'entranant pas de virage du milieu.
Le milieu Chapman permet la slection des staphylocoques et une orientation pour
l'identification de Staphylococcus aureus, mais il ne s'agit que d'un test de prsomption et une
confirmation par des tests plus spcifiques (coagulase, DNase, ...etc.) reste obligatoire.
D'autres bactries, Streptococcus D, Bacillus, peuvent se dvelopper sur ce milieu.

Anse de platine

Glose Chapman

Stries

Dilution
mre

Incuber 24 44h 4h 36 2C
Couvercle en bas

Figure 22 : Recherche des Staphylocoques pathognes

3.5.4. Recherche de Pseudomonas :


Les pseudomonas sont trs rpandus dans la nature (lair, sol, le monde vgtal), ils
contaminent les produits alimentaires et peuvent les dgrader.
C'est un bacille, coccobacille, Gram (-), asporul, oxydase (+), ne fermente pas le
glucose (mtabolisme respiratoire), arobie stricte, catalase (+), temprature de croissance est
de 20C 30C.
*Principe :
Conformment la norme NF EN 12780 et la norme NF V ISO 7218, on utilise un
milieu slectif : King A spcifique pour Pseudomonas aeruginosa et le milieu King B pour
Pseudomonas fluorescens et autres espces.
*Mode opratoire :
On ensemence les milieux King A et King B en surface laide dune anse de platine, et
on incube pendant 24 48 h 30 C (fig.23).
*Lecture :
Les colonies de Pseudomonas aeruginosa ont un diamtre de 1.5 2 mm avec une
couleur blanc- crme, un aspect muqueux et parfois il y a production de pigment bleu-vert.
Dans le milieu King B, quelques espces produisent la fluorescine (pigment).
Sur ce milieu on utilise directement la source de lumire de Wood, cette fluorescence
n'est parfois pas immdiatement visible la sortie de l'tuve.
Anse de platine

Stries

Dilution
mre

Glose
King B

Glose King A

Incuber 24h 37C


Figure 23 : Recherche de Pseudomonas

3.5.6. Recherche des caractres biochimiques


prsomptifs obtenus.

pour confirmation des rsultats

Il existe plusieurs systmes :


o Systme classique : on utilise des milieux combins : Kligler, TSI, source de lumire
de Wood, coagulase, DNase etc.
o Systme moderne : techniques rapides utilisant des galeries tels que : Galerie API qui
est la version miniaturise et standardise des tchniques biochimiques
conventionnelles, seulement elle ne permet que lidentification des Entrobacteraceae
et autres Gram ngatif.

Identification par galerie API 20 E :


La galerie est utilise comme test confirmatif

*Principe :
Les galeries Api, utilisent plusieurs types de tests : tude de la fermentation de divers
glucides, auxanogramme, recherche directe d'un enzyme. Chaque tubule contient un substrat
diffrent sur lequel le micro-organisme considr va ragir. Ils sont remplis d'une suspension
bactrienne calibre (fig.24).
*mode opratoire :
A laide dune pipette, on ralise une suspension de la souche tudier partir dune seule
colonie isole sur milieu glos et 5 ml deau distille strile ou deau physiologique, puis on
remplit les cupules de la galerie en vitant les bulles dair.
En ce qui concerne les substrats dont le sigle est encadr, la cupule doit aussi tre
remplie de manire crer un mnisque. Quant aux substrats dont le sigle est soulign, la
cupule doit tre remplie d'huile de paraffine soit pour crer l'anarobiose (absence d'oxygne),
soit pour maintenir en solution les ions volatils produits par la raction et ainsi assurer le
virage de l'indicateur color de pH.
Les creux du support de la galerie doivent tre remplis d'eau pour former une chambre
humide, puis la galerie est pose dans le support et le couvercle par dessus. L'ensemble est
incub une temprature adapte pendant 24 48 h (fig.25).
*Lecture :
Aprs addition des ractifs ncessaires la rvlation de diffrents tests, la galerie est
lue conformment aux indications du fabricant et code. Pour cela, les tests sont groups par
trois successivement de gauche droite, les derniers triplets pouvant inclure des caractres
bactriens comme la morphologie, le Gram, la mobilit, l'oxydase, la catalase, etc. ncessaire
linterprtation. Les tests ngatifs sont toujours cods 0 alors que le code affect aux tests
positifs varie selon la position du test dans le triplet : 1 pour le premier test, 2 pour le second,
4 pour le troisime.

Les 3 rsultats du triplet sont additionns (il existe seulement huit possibilits pour la
somme d'un triplet : 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7). Les sommes de chaque triplet lues de gauche
droite forment un code d'au moins 7 chiffres qui correspond au profil biochimique du microorganisme tudi. La comparaison de ce code ceux rfrencs dans la base de donnes gre
par Biomrieux, permet en gnral d'identifier ce micro-organisme. Si le code numrique
obtenu ne figure pas dans cette base de donnes, il peut s'agir d'un profil ou d'un microorganisme non rfrenc, mais la cause la plus frquente reste un problme technique :
inoculum non respect, paraffine oublie, ractifs prims etc (Biomrieux, 2006).

Figure 24: Recherche des caractres biochimiques (Biomrieux, 2006).

Figure 25: Inoculation de la galerie API 20 E (Biomrieux, 2006).

4. Analyse statistique des donnes.


Lanalyse statistique des donnes t ralise par 3 mthodes statistiques diffrentes :
Le Modle linaire gnralis, le test de lanalyse des moyennes et lanalyse des composantes
principales.
4.1. Modle linaire gnralis (GLM).
Le modle linaire gnralis (GLM) est une technique descriptive permettant danalyser
la variance, la covariance et la rgression, il repose sur la rponse et la comparaison des
diffrents paramtres choisis au cours dune exprimentation.
4.4. Test de lanalyse des moyennes.
Le test de lanalyse des moyennes est une technique qui permet destimer lintervalle de
confiance des frquences des contaminants.

4.5.Analyse des composantes principales (ACP).

Lanalyse des composantes principales (ACP) est une technique descriptive permettant
dtudier les relations qui existent entre variables quantitatives, sans tenir compte, a priori,
dune quelconque structure, ni des variables, ni des individus (Palm, 1998).
Daprs Dagnelie (1982), le premier objectif de lACP est bien de remplacer les
variables initiales, gnralement corrles, par des variables non corrles. Le second objectif
est de rduire autant que possible le nombre de variables prendre en considration, c'est-dire, le nombre de dimensions de lespace dans lequel les variations doivent tre tudies.

Rsultats
3. Les paramtres physico-chimiques de leau
3.1. La Temprature:
La temprature prsente des variations similaires dans lensemble des sites. Les valeurs
les plus leves sont enregistres durant la saison estivale avec un maximum en juillet et aot
(28C) au niveau du Cap de garde et Sidi Salem (fig.26).
Ds le dbut de lautomne (Septembre), on assiste a une baisse progressive de la
temprature de leau qui se prolonge jusqu la priode hivernale ou elle atteint une valeur
minimale de 12.5C en fvrier (Cap de Garde et Rezgui Rachid).
Rezgui Rachid

Cap de Garde
30

30

25

25
20

20

TC

T C

15

15

10

10

25

25

20

20
TC

30

15

H'naya

15

10

10

Aouinate
30
25
20
TC

TC

Sidi Salem
30

15
10
5
0

Figure 26: Variations mensuelles de la temprature de leau


(Janvier - dcembre 2008).

3.2.La salinit:
La salinit atteint des valeurs maximales, variant entre 39 g/l et 41.8g/l dans lensemble
des sites, en priode estivale et automnale.
La valeur la plus basse (36.5 g/l) est enregistre en janvier Aouinate (fig. 27).
43

Cap de Garde

Rezgui Rachid
42
41

41

Salint (g/l)

Salinit (g/l)

42

40
39
38

39
38

37

37

36

36

42

Sidi Salem
42

41

41
Salinit (g/l)

40
39
38
37

40
39
38

36

37

35

36

34

35

Aoui

Salinit (g/l)

Salinit (g/l)

40

43
42
41
40
39
38
37
36
35
34
33

Figure 27: Variations mensuelles de la salinit de leau


(Janvier - dcembre 2008).

1.3. Le pH :
Le pH est lgrement alcalin dans lensemble des sites. La valeur la plus basse (7.6)
est enregistre Hnaya au mois de mai.
La valeur la plus leve (8.75) est note en juin au niveau du Cap de Garde (fig.28).
Rezgui Rachid

pH
Sidi Salem

pH

8,2
8,1
8
7,9
7,8
7,7
7,6
7,5
7,4

pH

pH

Cap de
9
8,8
8,6
8,4
8,2
8
7,8
7,6
7,4
7,2
7

8,3
8,2
8,1
8
7,9
7,8
7,7
7,6
7,5

8,3
8,2
8,1
8
7,9
7,8
7,7
7,6
7,5
7,4
7,3

H'naya

pH

Aouinate
8,5
8,4
8,3
8,2
8,1
8
7,9
7,8
7,7
7,6
7,5

Figure 28 : Variations mensuelles du pH de leau


(Janvier - dcembre 2008).

1.4. Loxygne dissous :


Les teneurs en oxygne dissous montrent des fluctuations en fonction des priodes.
Elles sont relativement leves en hiver o elles varient entre 6 et 12 mg/l et basses en t et
en automne, variant de 1 6 mg/l.
En effet, nous notons, une baisse significative des teneurs en oxygne en priode
estivale, atteignant 1.9 mg/l au mois daot au Cap de Garde et Hnaya et une meilleure
oxygnation de leau en priodes hivernale avec des valeurs maximales de 11 et 11.79 mg/l
respectivement Hnaya en mars et Aouinate en janvier (fig.29).

10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

Oxygne dissous (mg/l)

Oxygne dissous (mg/l)


Oxygne dissous (mg/l)

Cap de Garde
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

Rezgui Rachid

H'naya
12
Oxygne dissous (mg/l)

Sidi Salem

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

10
8
6
4
2
0

14

Aouinate

Oxygne dissous (mg/l)

12
10
8
6
4
2
0

Figure 29 : Variation mensuelles des teneurs en oxygne dissous de leau


(Janvier - dcembre 2008).

1.5. Les matires en suspension :


Les teneurs en matires en suspension varient de 0.128 mg/l en juin au Cap de Garde
0.3789 mg/l en dcembre Aouinate.
Les valeurs les plus leves sont gnralement releves en priode automnale.
Par ailleurs, cest en juin que la teneur en MES atteint sa valeur minimale dans
pratiquement lensemble des sites (Fig.30).
Rezgui Rachid
0,35

0,25

0,3
MES (mg/l)

MES (mg/l)

Cap de Garde
0,3

0,2
0,15
0,1

0,25
0,2
0,15
0,1

0,05

0,05

Sidi Salem

H'naya
0,35

0,3

0,3
MES (mg/l)

0,2
0,15
0,1

0,25
0,2
0,15
0,1

0,05

0,05

Aouinate
0,4
0,35
0,3
MES (mg/l)

MES (mg/l)

0,25

0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0

Figure 30: Variations mensuelles des matires des teneurs en suspensions dans leau
(Janvier - dcembre 2008).

4. Distribution des germes dans leau de mer :


4.1.Les Coliformes totaux :

600

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Le dnombrement des Coliformes totaux montre que leur teneur varie dun site
lautre et dun mois lautre.
Nous notons, des valeurs en Coliformes totaux, inferieures aux valeurs guides (500
germes/100ml selon le dcret excutif n 93-164 du 10/07/1993 JORA n 46), au Cap de
Garde et Rezgui Rachid, pendant toute la priode dtude.
A Sidi Salem, nous enregistrons des valeurs de 1100 et de 2400 germes/100ml
(dpassant largement la valeur guide), au cours des mois de mai, septembre et octobre, cela
sajoute des teneurs proches des valeurs guides en novembre et dcembre (93 germes /100ml).
A Hnaya, nous notons 3 pics de 2400 germes /100ml en avril, mai et juillet et un pic de
1100 germes /100ml en octobre.
Au niveau de Aouinate, les teneurs releves restent infrieures aux valeurs guides sauf
en avril ou un pic de 2400germes /100ml est enregistr (fig.31).

500
400
300
200
100
0

600
500
400
300
200
100
0

Rezgui Rachid
3000
Nbre germes/100ml

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

2500
2000
1500
1000
500
0

Sidi Salem

H'naya

3000
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde

2500
2000
1500
1000
500
0

Aouinate

Figure 31: Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes totaux dans leau
(Janvier - dcembre 2008).

4.2.Les Coliformes thermotolrants (Escherichia coli):


Les concentrations en Coliformes thermotolrants (E.coli), enregistres au niveau du
Cap de Garde et Rezgui Rachid, sont relativement faibles, elles ne dpassent pas 21
germes/100ml ; et sont de ce fait inferieures aux valeurs guides fixes 100germes/100ml
selon le dcret excutif n 93-164 du 10/07/1993 JORA n 46.
A Sidi Salem, 2 pics de 460 et 2400 germes/100ml sont relevs respectivement en mai
et septembre ; cela sajoute des teneurs de 93 germes /100ml (proches des valeurs guides)
en mars, juillet et octobre
Au niveau de Hnaya et Aounate, les teneurs restent inferieures aux valeurs guides
durant presque toute lanne, lexception du mois davril o des pics de 1100 et de 2400
germes/100ml sont respectivement enregistrs (fig.32).
120
100
80
60
40
20
0

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

120
100
80
60
40
20
0

Rezgui Rachid

1000

1000
Nbre germes /100ml

1200

800
600
400
200
0

800
600
400
200
0

H'naya

Sidi Salem
3000
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde
1200

2500
2000
1500
1000
500
0

Aouinate

Figure 32: Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes


thermotolrants (Escherichia coli) dans leau (Janvier - dcembre 2008).

4.3.Les Streptocoques totaux :

500

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Les concentrations en Streptocoques totaux, varient dun site lautre (fig.33).


Dans le Cap de Garde, les valeurs les plus leves sont enregistres en septembre
(93germes/100ml) et en octobre (460 germes/100ml).
A Rezgui Rachid sont relevs 3 pics de 150 germes/100ml (en juillet), de 240
germes/100ml (en septembre) et 2400 germes/100ml (en octobre) ; nous enregistrons, par
ailleurs, des teneurs proches des valeurs guides en mars (75 germes/100ml) et en novembre
(93 germes/100ml).
Dans le site de Sidi Salem, cest en priode estivale et automnale que sont enregistrs
des teneurs dpassant nettement les valeurs guides admises, variant de 240 2400
germes/100ml
Au niveau de Hnaya, nous notons des teneurs en Streptocoques totaux suprieurs aux
valeurs guides en avril (210 germes/100ml), en aot et octobre (240 germes/100ml) et en
septembre (460 germes/100ml).
Quant au site Aouinate, des contaminations suprieurs aux valeurs guides sont
observes, en avril (2400 germes/100ml), en septembre (240 germes/100ml) et en octobre
(120 germes/100ml).

400
300
200
100
0

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

Rezgui Rachid

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

Nbre germes/100ml

500
400
300
200
100
0

Sidi Salem
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde

H'naya

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

Aouinate

Figure 33: Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques totaux dans leau
(Janvier - dcembre 2008).

4.4.Les Streptocoques fcaux :


Dans le Cap de Garde, les teneurs en Streptocoques fcaux ne dpassent pas 14
germes/100ml et de ce fait, bien infrieures aux valeurs guides fixes 100 germes /100ml
selon le dcret excutif n 93-164 du 10/07/1993 JORA n 46
Au niveau de Rezgui Rachid, une importante contamination par les Streptocoques
fcaux est releve de septembre novembre ; nous relevons un pic de 2400 germes /100ml en
octobre et des teneurs proches des valeurs guides en septembre et en novembre.
A Sidi Salem, nous enregistrons 3 pics, un de 93 germes/100ml (proche des valeurs
guides) en aot et deux de 210 germes /100ml en novembre et dcembre.
Quant Hnaya et Aouinate, les teneurs releves durant lanne sont nettement
infrieures aux valeurs guides, lexception du mois davril o des teneurs de 210 et 460
germes /100ml sont notes respectivement (fig.34).
3000
Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

120
100
80
60
40
20

2500
2000
1500
1000
500

Rezgui Rachid

200

200

150

150

Nbre germes/100ml

250

100

100
50
0

50
0

Sidi Salem

Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde
250

H'naya

500
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0

Aouinate

Figure 34 : Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques fcaux dans leau


(Janvier - dcembre 2008).

3. Distribution des germes chez les moules :

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

3.1. Les Coliformes totaux :


Les moules prleves dans lensemble des sites hbergent, durant toute lanne, des
coliformes totaux des teneurs dpassant largement les valeurs guides fixes 1000
germes/100ml de broyat selon la directive europenne du 8 dcembre 1975, reprise par le dcret
excutif n 91-980 du 20 septembre 1991(fig.35).
Des teneurs de 140000 germes / 100ml de broyat sont, toutefois, enregistres 11 mois
de lanne Sidi Salem, 8 mois au Cap de Garde, 7mois Rezgui Rachid, 6 mois Hnaya et
5mois Aouinate.
Par ailleurs, des valeurs relativement basses sont enregistres en fvrier (dans
lensemble des sites) et en dcembre (dans 4 sites sur 5).
160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Rezgui Rachid
160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Nbre germes/100ml

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

H'naya

Sidi Salem
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Aouinate

Figure 35 : Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes totaux


releves chez Perna perna (Janvier - dcembre 2008).

3.2. Les Coliformes thermotolrants (Escherichia coli) :

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Les moules du Cap de Garde hbergent des Coliformes thermotolrants, 5 mois sur 12,
des teneurs variant de 400 et 2500 germes/100ml de broyat ; ces concentrations dpassent
les valeurs guides fixes 230 germes/100ml de broyat selon larrt europen du 23 mars
1993.
Au niveau de Rezgui Rachid, les moules montrent des teneurs en E.coli proche ou
suprieures aux valeurs guides, tout au long de lanne, sauf en mars o aucun germe nest
dcel.
A Sidi Salem, les moules abritent les coliformes thermotolrants durant toute lanne et
des taux suprieures aux valeurs guides ; les teneurs les plus leves sont toutefois releves
de juin dcembre.
Concernant Hnaya, la contamination est assez marque de fvrier juin, elle est
illustre par des teneurs variant de 300 30000 germes/100ml de broyat.
La contamination des moules de lAouinate par E.coli, se limite aux mois de janvier,
mars et septembres o il est relev respectivement 400, 700 et 2000 germes/100ml de broyat
(fig.36).
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Nbre germes/100ml

Rezgui Rachid
35000
30000
25000
20000
15000
10000
5000
0

H'naya

Sidi Salem
2500
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde
160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

2000
1500
1000
500
0

Aouinate

Figure 36 : Variations spatio-temporelles des teneurs en Coliformes thermotolrants


(Escherichia coli) releves chez Perna perna (Janvier - dcembre 2008).

3.3. Les Streptocoques totaux :

160000

160000

140000

140000

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Les moules provenant de lensemble des sites, montrent une forte contamination par
les Streptocoques totaux (fig.37), illustre par des teneurs le plus souvent proche de 140000
germes/100 ml de broyat et dpassants largement la valeur guide admise (arrt europen du
23 mars 1993).
Par ailleurs, nous relevons des teneurs relativement basses en janvier dans pratiquement,
les 5 sites.

120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Rezgui Rachid

140000

140000
Nbre germes/100ml

160000

160000

120000
100000
80000
60000
40000

120000
100000
80000
60000
40000

20000

20000

Sidi Salem

H'naya

160000
Nbre germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Cap de Garde

140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Aouinate

Figure 37 : Variations spatio-temporelles des teneurs en Streptocoques totaux


releves chez Perna perna (Janvier - dcembre 2008).

4.4. Les Streptocoques fcaux :

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Nbre de germes/100ml

Nbre de germes/100ml

Les moules de lensemble des sites, prsentent une forte contamination par les
Streptocoques fcaux ; les teneurs releve, varient de 2500 140000 germes/100 ml de broyat
durant pratiquement toute lanne.
Des valeurs relativement basses, infrieures aux valeurs guides (2.5.103 germes /100ml
de broyat selon arrt europen du 23 mars 1993), sont enregistres en fvrier (600
germes/100 ml de broyat) et mai (1500 germes/100 ml de broyat), respectivement Aouinate
et Hnaya (fig.38).
160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Rezgui Rachid

Nbre germes/100ml

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

H'naya

Sidi Salem

Nbregermes/100ml

Nbre de germes/ml

Cap de Garde

160000
140000
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

Aouinate

Figure 38: Variations spatio-temporelles des Streptocoques fcaux


chez Perna perna (Janvier 2008- dcembre 2008).

5. Dtermination de la source probable de la contamination :


4.1. Origine de la contamination de leau.

4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

Ration CF/SF

Ration CF/SF

Le calcul de lindice de Bourgeois (1980), bas sur le rapport, Coliformes


fcaux/Streptocoques fcaux (CF/SF), fait apparaitre lexistence de contamination dorigine
animale dans leau du Cap de Garde durant toute lanne dtude.
Les eaux de Rezgui Rachid et Aouinate qui subissent aussi des contaminations
dorigine animale, prsentent respectivement, des contaminations dorigine mixte en aot et
humaine en avril.
A Sidi Salem la source probable de contamination serait humaine en mars, mai, juillet
et septembre ; elle est mixte en juin et octobre puis animale le reste de lanne.
La contamination des eaux de Hnaya aurait une origine animale (7 mois/12) et mixte
(4 mois/12) ; cest seulement en avril quune origine humaine de la contamination serait
probable (Fig.39).

CF/SF>4

CF/SF<0,7

18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

Rezgui Rachid

CF/SF>4

CF/SF<0,7

6
Ration CF/SF

5
4
3
2
1
0

Sidi Salem

CF/SF>4

Ration CF/SF

Ration CF/SF

Cap de Garde

CF/SF<0,7

H'naya

CF/SF>4

CF/SF<0,7

6
5
4
3
2
1
0

Aouinate

CF/SF>4

CF/SF<0,7

Figure 39: Variations temporelles de lorigine de la contamination de leau.


CF/SF <0.7=Origine animale. 0.7< CF/SF <1=Origine mixte. CF/SF >4=Origine humaine
Bourgeois (1980).

5. Distribution des germes pathognes chez les moules :


Tableau 3: Rsultat des tests prsomptifs destins la recherche et lidentification des
bactries pathognes chez les bivalves.
Bactries
Prlvements
de lanne
2008
Janvier
Fvrier
Mars
Avril
Mai
Juin
Juillet
Aot
Septembre
Octobre
Novembre
Dcembre

Staphylocoques

Clostridium

S1

S5

S1

S2

S3

S4

S5

S1

S2

S3

S4

S5

S1

S2

S3

S4

S5

+
+
-

+
+

+
+
+
+

+
+
+
+
+
+

+
-

+
-

+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
-

S2

S3

S4

+ + - +
- + - +
- + + - - + - - + - + + - - - - - - - - - - - + - - - +
+ + - (-) : Absence de bactries.
(+) : Prsence de bactries.

Salmonelles

Pseudomonas

Les Rsultats des tests prsomptifs destins rechercher et identifier les bactries
pathognes montrent la prsence de 3 germes sur 4 recherchs (tab.3).
La confirmation ncessite lutilisation de ractifs et autres milieux spcifiques par
lemploi de galerie biochimiques classiques (Kligler, TSI, source de lumire de Wood etc)
ou galerie API.
Lapplication des tests confirmatifs nous a permis de mettre en vidence la prsence,
seulement des Citrobacter frundi, des Enterobacter et des Proteus vulgaris ; Les bactries du
genre Salmonella, Pseudomonas, et Clostridium, semblent tre absents dans les moules de
lensemble des sites.
Quant aux Staphylocoques, la confirmation de leur prsence na pas pu tre effectue
en raison de labsence de ractifs spcifiques aux tests confirmatifs (coagulase, DNase).

6. Rsultats de lanalyse statistique :


Pour faciliter ltude statistique et le droulement des tests, nous avons procd une
conversion des donnes brutes (les moyennes des contaminants) en valeurs logarithmiques via
le test de rapprochement, ce dernier fait appel lquation suivante : log x +1 (x = moyenne
des contaminants).

6.1. Modle linaire gnralis (GLM) :


6.1.1. Eaux.
Le modle linaire gnralis, rvle lexistence dune variation entre les eaux des
diffrents sites dans la distribution des contaminants.
En effets, on remarque une diffrence significative entre les sites dans la distribution des
Coliformes totaux (P=0,032*); alors que la diffrence est non significative dans la distribution
dE. coli (P=0,110 ns).
De plus, il en ressort que les paramtres physico-chimiques, ont un impact diffrent sur
lvolution de la contamination, ceci est rvl, dune part par un coefficient de rgression
diffrent et dautre part par un coefficient de dtermination significatif; ainsi seul le pH
prsente une corrlation hautement significative sur la frquence de la distribution des
Coliformes totaux
(P= 0,009**) et E. coli (P=0,003**).
En ce qui concerne, les Streptocoques, la diffrence entre les sites est non significative
dans la distribution des Streptocoques totaux (P=0,231 ns) et elle est significative dans la
distribution des Streptocoques fcaux (P=0,037*).
Quant aux paramtres physico-chimiques, le pH prsente une corrlation hautement
significative (P=0,04**) sur la frquence de la distribution des Streptocoques fcaux ; par
contre, sa corrlation est non significative (P=0,063ns) par rapport aux Streptocoques totaux,
en plus du pH, on remarque quil existe galement une corrlation significative avec la
salinit (P=0,041*).
6.1.2. Moules.
Le modle linaire gnralis, rvle lexistence dune variation entre les diffrents
sites dans la distribution des contaminants chez les moules.
En effets, on remarque une diffrence trs hautement significative entre les sites dans la
distribution dE.coli (P< 0,001), par rapport aux coliformes totaux o la diffrence est non
significative (P =0,685ns).
Les paramtres physico-chimiques, ont galement, un impact diffrent sur lvolution de
la contamination, ainsi la temprature, la salinit et loxygne dissous prsente une corrlation
significative sur la frquence de la distribution dE. coli dans les diffrents sites, par contre,
seule la temprature prsente une corrlation trs hautement significative sur la frquence de
distribution des Coliformes totaux (P=0,001***).
Quant aux Streptocoques totaux et fcaux, la diffrence entre les sites est non
significative dans leur distribution ; concernant, les paramtres physico-chimiques,
loxygne dissous, prsente une corrlation significative sur la frquence de la distribution des
Streptocoques totaux (P=0,022*) et une corrlation hautement significative sur la frquence
de la distribution des Streptocoques fcaux (P=0,008**) dans les sites, ces derniers,
prsentent galement une corrlation non significative avec temprature (P=0,093 ns).

6.2. Test de lanalyse des moyennes.


6.2.1. Eaux.
Les rsultats obtenus aprs application du test de lanalyse des moyennes, montrent que
les eaux des sites, Sidi Salem et Rezgui Rachid sont les plus pollues des 5, du fait de la forte
concentration des coliformes totaux et E. coli qui dpasse la limite de lintervalle de
confiance suprieure, observe Sidi Salem (fig.40 a et b) ; et la concentration importante des
Streptocoques fcaux qui se rapproche de la limite de lintervalle de confiance suprieure,
observe Rezgui Rachid (fig.40d).

One-Way Normal ANOM for ECOLI2

One-Way Normal ANOM for COLITOT2

Alpha = 0,05

Alpha = 0,05

1,5

2,5

2,0

1,067

1,0

1,784

1,045

1,0

Mean

Mean

1,5

0,5

0,5

0,496

0,0

0,305

-0,075

0,0
1

3
SITE

3
SITE

b
One-Way Normal ANOM for STREPTCOFECO2

One-Way Normal ANOM for STREPTCOC2

Alpha = 0,05

Alpha = 0,05

1,75

2,25
2,041

2,00

1,50

1,490

1,25

1,50
1,398
1,25

Mean

Mean

1,75

1,00

1,026

1,00

0,75

0,75

0,755

0,563

0,50
0,50
1

3
SITE

3
SITE

Figure 40: Calcul de lintervalle de confiance des Coliformes et des Streptocoques de leau.

6.2.2.

Moules.

Les rsultats du test de lanalyse des moyennes, montrent clairement que les moules
peuplant les sites Sidi Salem sont les plus contamines des 5 Sites, du fait de la forte
concentration des contaminants qui se rapprochent (fig.40a,c et d) ou dpassent la limite de

lintervalle de confiance suprieure (fig.41b), aux quelles sajoutent, les moules de Rezgui
Rachid dont la concentration dE.coli dpasse la limite de lintervalle de confiance suprieure
(fig.41d).

One-Way ANOM for COLITOT2 by SITE

One-Way ANOM for ECOLI2 by SITE

Alpha = 0,05

Alpha = 0,05

5
5,2

5,171

4,8

4,786

3,115

3
Mean

Mean

5,0

2,173

4,6

4,402

4,4

4,2
1

3
SITE

1,230

0
1

3
SITE

a
One-Way ANOM for STREPTCOC2 by SITE

One-Way ANOM for STREPF by SITE

Alpha = 0,05

Alpha = 0,05

5,4

5,3
5,2104

5,2

5,2

5,169

5,1
5,0

4,9

4,8719

4,8

Mean

Mean

5,0

4,8

4,739

4,6

4,7
4,6

4,4
4,5334

4,5

4,309
4,2

b
c

3
SITE

3
SITE

d
Figure 41: Calcul de lintervalle de confiance des Coliformes et des Streptocoques des
moules

6.3. Analyse des composantes principales (ACP) :


6.3.1. Eaux.
Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation) - Eaux.
La structure des variables dfinit sur le plan de lACP, exprime laugmentation de labondance
des 4 contaminants (CF, E. coli, ST et SF) en fonction des covariants du milieu (Temprature, salinit,
oxygne dissous, pH et matires en suspensions) ; ainsi, les rsultats montrent lexistence dune
corrlation positive entre les contaminants et les paramtres (salinit et MES) ; en revanche la
corrlation est ngative avec le pH et loxygne dissous (fig.42).
De ce faite, nous pouvons admettre que laugmentation de la salinit et le MES ainsi que la

diminution du pH et loxygne dissous, favorisent la prolifration bactrienne dans leau.


NB : Laxe F1 exprime une combinaison linaire des variables reprsentants labondance des
contaminants et dfinit ainsi le premier gradient qui contrle la dispersion du nuage de point de la
matrice dtude.
Laxe F2 reprsente une combinaison des variables caractrisant laspect physico-chimique et
dfinit ainsi le deuxime gradient expliquant linertie du nuage de point de la matrice dtude.

Axe F2

Axe F1

Figure 42 : Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation) - Eaux.

Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Eaux

Dune manire gnrale lordination reprsent sur le plan de lACP des sites est expliqu par
les gradients dfinit par le cercle de corrlation (plan variable).

De ce fait, le plan F1xF2 relevs des sites (fig. 43), reprsente une double ordination des sites
suivant les deux axes :
o Axe F1, selon labondance des contaminants, lordination est la suivante : Cap de Garde (site1) <
Aouinate (site5) < Hnaya (site4) < Rezgui Rachid (site2) < Sidi Salem (site3).
o

Axe F2, selon laspect physico-chimique, lordination est la suivante : Aouinate (site5) < Cap
de Garde (site1) < Rezgui Rachid (site2) < Hnaya (site4) < Sidi Salem (site3).

La classification des sites sur laxe1 de lACP relevs est expliqu par le gradient dabondance
dfinit sur laxe1 de lACP variable.
Quant la classification des sites sur laxe 2 de lACP relevs est explique par le gradient
physico-chimique, reprsent principalement par la variable pH (seule variable corrle dune manire
linaire aux variables abondances).
Les rsultas, admettent que les paramtres physico-chimiques sont des facteurs dterminants
et jouent un rle important dans la rpartition des diffrents contaminants dans les eaux des 5 sites,
de ce fait, nous pouvons constater que labondance des contaminants par rapport aux facteurs physicochimiques est plus significative au niveau des sites Sidi Salem et Rezgui Rachid en comparaison aux
sites Cap de Garde, Hnaya et Aouinate.

Axe F2

Axe F1

Figure 43 : Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Eaux

6.3.2.Moules.
Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation)- Moules.
La structure des variables dfinit sur le plan F1xF2 de lACP (variables), exprime
laugmentation de labondance des 4 contaminants (CF, E.coli, STet SF), corrle positivement avec
la temprature, la salinit et les MES; en revanche, elle est corrle ngativement avec le pH et lO2
dissous (fig.44).
De ce faite, nous pouvons admettre que laugmentation de la temprature, la salinit et le MES
ainsi que la diminution du pH et loxygne dissous, favorisent la prolifration bactrienne dans les
moules peuplant les 5 sites dtudes.

Axe F2

Axe F1

Figure 44 : Plan F1F2 de lACP variable (cercle de corrlation)- Moules.

Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Moules.


Le plan F1xF2 relevs (fig. 45), reprsente une double ordination des sites suivant les
deux axes :
o Axe F1, selon labondance des contaminants, lordination est la suivante: Cap de Garde
(site1) < Aouinate (site5) < Hnaya (site4) < Rezgui Rachid (site2) < Sidi Salem (site3).
o Axe F2, selon laspect physico-chimique, lordination est la suivante: Sidi Salem (site3)
< Hnaya (site4) < Rezgui Rachid (site2) < Aouinate (site5) < Cap de Garde (site1).
La classification des sites sur laxe1 de lACP relevs est expliqu par le gradient
dabondance dfinit sur laxe1 de lACP variable.
Alors que la classification des sites sur laxe 2 de lACP relves est explique par le
gradient physico-chimique reprsent principalement, tout comme dans lanalyse de leau, par
la variable pH (seul variable corrle dune manire linaire aux variables abondances).
Ceci confirme donc, limpact des facteurs physico-chimiques sur la rpartition des
diffrents contaminants dans les eaux des 5 sites, ainsi leur implication est beaucoup plus
significative au niveau des sites Sidi Salem et Rezgui Rachid en comparaison aux Cap de
Garde, Hnaya et Aouinate.
Axe F1

Axe F1

Figure 45: Plan F1xF2 de l'ACP relevs (sites)-Moules.

Discussion
Notre tude nous a permis d'valuer la qualit du milieu marin le long du littoral NordEst algrien, par la caractrisation des proprits physico-chimiques et bactriologiques de ses
eaux superficielles et la mise en vidence de laction anthropique.
Paramtres physico-chimiques.
La mesure des paramtres physico-chimiques de leau, montre que la temprature, la
salinit, loxygne dissous, le pH et les matires en suspensions prsentent des fluctuations
saisonnires.
Les valeurs thermiques des eaux affichent des variations similaires dans lensemble des
sites de prlvement et montrent l'existence d'un cycle saisonnier. La temprature maximale
rencontre est de 28 C en juillet et Aot 2008, au niveau du Cap de Garde et Sidi Salem, alors que
la plus basse, 12,5 C, est releve en fvrier dans les eaux du Cap de Garde et Rezgui Rachid . Selon Farhi
(1995), la temprature de leau du golfe dAnnaba, varie entre 16 C, lhiver et 28,8C, lt, avec une
amplitude de 12.8C. Les fluctuations de ce paramtre abiotique sont en relation avec les conditions
climatiques locales et plus particulirement avec la temprature de lair Semroud (1983).
Concernant la salinit, les fluctuations observes sont en relation avec les conditions
climatiques, telles l'vaporation lie aux fortes tempratures estivales et les prcipitations. La plus faible
valeur (36.5 g/l) est mesure au niveau de lAouinate en janvier et la plus forte (41.8 g/1) au Cap de
Garde en septembre et (41.3g/l) Aouinate en aot. Ces chiffres montrent que les eaux ctires
d'Annaba sont moins sales en priode hivernale.
Des rsultats similaires, ont t voqus par Semroud (1983) ; De Casabianca-Chassany et
al,(1991); en effet, ces derniers estiment que le rgime de la salinit est rgi par celui des
prcipitations, do l'importance de ces dernires dans la rgulation de la salinit.
Les relevs des teneurs en oxygne dissous mettent en vidence l'existence de fortes teneurs en
oxygne, en priode hivernale et printanire avec 11.79 Aouinate et 11 mg/l Hnaya, et des
teneurs basses en priode estivale, atteignant 1.9 mg/l au mois daot au Cap de Garde et
Hnaya. Ces variations sont directement lies aux variations saisonnires de la temprature de l'eau
qui conditionnent le processus de solubilit de loxygne.
Laugmentation du taux doxygne dissous dans leau en priode hivernale et printanire rsulte de
la baisse de la temprature et de la salinit de leau, ainsi que les facteur mcaniques (agitation par le vent)
qui reprsentent le principal facteur de brassage des eaux (Millet, 1989 ; Belaud, 1996 ; Schlumgerger,
2002). La confirmation est apporte par Bricker et al (1999), qui conclu que la baisse de la temprature
de leau, l'augmentation de linterface air- eau et le brassage engendr par lhydrodynamisme important
en priode hivernale, sont l'origine d'une meilleure oxygnation de leau.
La baisse du taux doxygne dissous releves en priode estivale serait, en revanche, lie non
seulement la forte lvation de la temprature et la salinit mais aussi la respiration des organismes
aquatiques vivants (faune, flore immerge) et au calme hydrodynamique, qui empche le brassage de
leau (Lacaze, 1996). A cela sajoute la dgradation bactrienne des dtritus qui consomment
normment doxygne, raison de 1 g dO2/Kg de matire sche (Belaud, 1996).
En France, Beaupoil et Bornes (1997) ont fixs, aprs une tude concernant leffet des
hypoxies sur la faune, les seuils en oxygne dissous dans les estuaires bretons, comme suite: suprieurs
5mg/l (qualit excellente acceptable), de 3 5 mg/1 (qualit moyenne mdiocre), de 2 3mg/l
(qualit mauvaise trs mauvaise), de 1 2 mg/l (hors classe niveau 1), infrieur 1 mg/1 (hors classe

niveau 2). Ce qui nous permet de dire que, durant la priode d'tude, les eaux du littoral Nord- Est
algrien, prsentent une qualit excellente acceptable (les teneurs en oxygne dissous dpassant 5
mg/1) sauf en t o une baisse de la teneur est enregistre (en dessous de 5 mg/1).
En ce qui concerne le pH des eaux des 5 sites, il est lgrement alcalin ; il oscille entre 7,6
au mois de mai Hnaya et 8.75 au mois de juin au Cap de Garde ; selon Barnabe (1991), les
eaux ctires mditerranennes ont un pH qui varie entre 7.9 et 8.3. La tendance basique du pH
est rencontre dans toutes les eaux, elle peut tre explique par les rejets industriels, les rejets urbains et
les apports des Oueds Bedjima et Seybouse.
Quant aux matires en suspensions (MES), les valeurs les plus basses sont enregistres en
juin avec 0.151mg/l Rzgui Rachid et 0.153mg/l Sidi Salem. Les valeurs les plus leves,
sont observes en automne et au dbut de l'hiver, avec 0.323 mg/l Rezgui Rachid et 0.329
mg/l Hnaya.
Les fluctuations de ce paramtre, sont en relation avec les conditions climatiques et plus
particulirement les prcipitations abondantes, qui sont lorigine des apports allochtones (Dakki, 2003).
Analyses bactriologiques des eaux.
Les analyses bactriologiques des eaux ont rvls, lexistence de pollution en rapport
avec les sources de contaminations et les saisons dans lensemble des sites. Selon Dawe et
Pentose, (1978), Gauthier et Pietri, (1989), la survie de ces microorganismes varie d'un site
lautre et d'une saison lautre ; de ce fait, la qualit intrinsque du milieu rcepteur joue un rle
important vis--vis du devenir des germes fcaux dans le milieu naturel. Ces derniers ont dmontr
qu'un prlvement ralis au niveau du sdiment aprs une crue, rvle une charge bactrienne plus
importante (de lordre de 104 E.coli /ml ou par gramme). Il est apport aussi que la bactrie Escherichia
coli a une bonne croissance un pH proche de la neutralit, entre pH 6 et 8 et elle est capable de
rsister des tempratures extrmes allant de 8C 48C (Nerdhadt et a/., 1994). De ce fait les eaux du
littoral Nord-Est algrien, semble offrir un milieu propice au dveloppement de ces germes fcaux ;
les valeurs des paramtres mesurs (temprature, salinit, pH, O2 dissous et MES) ne constituent pas
un frein leur dveloppement et leur croissance durant la priode dtude.
Nos rsultats montrent que les Coliformes totaux, enregistrent un pic de 460 germes/l00ml
deau en priode estivale au niveau de Rezgui Rachid, cette forte contamination serait
probablement d la forte affluence des estivants ; nous notons, toutefois quil ne dpasse
pas le seuil tolr, fix 500 germes/100ml.
Des pics de 1100 et de 2400 germes/100ml deau sont observs au niveau de Sidi Salem
(en mai et septembre), Hnaya (en avril et juillet) et Aouinate (avril), dpassant largement le
seuil tolr, la prsence de ces pics peut s'expliquerait par le phnomne de lessivage des sols par
les pluies (Lebaron et al., 1990).
En ce qui concerne, les concentrations des Coliformes thermotolrants ( E, coli), elles sont
moins importantes et restent relativement basses dans les eaux du Cap de Garde et de Rezgui Rachid ;
quant aux fortes concentrations dE. coli, elles sont enregistres en avril Hnaya et Aouinate, et en
mai et septembre Sidi Salem (dpassent largement les valeurs guides, fixe 100germes
/100ml), traduisent ainsi une contamination rcente (Rodier, 1996 ; CCME, 2002) qui peut tre
explique par le rejet continu des eaux uses et les conditions climatiques favorables la survie
et la prolifration de ces bactries.
Les rsultats des dnombrements des Streptocoques montrent que les teneurs en
streptocoques totaux sont levs en priode automnale au Cap de Garde, Rezgui Rachid, Sidi
Salem et Hnaya et en priode printanire Aouinate. Ces teneurs levs font suite au
lessivage par les eaux de ruissellements des zones agricoles o dimportantes prcipitations
ont t enregistres au cours de la priode prcdant nos prlvements (voir tab.19) ; au

niveau du site Aouinate, le taux lev de ces indicateurs de contamination, sexpliquerait aussi
par la prsence danimaux domestiques aux abords de la plage.
Les Streptocoques fcaux, montrent des pics Rezgui Rachid et Sidi Salem en priode
automnale, qui seraient la consquence dun lessivage des sols par les pluies, en plus de la proximit
de ces sites, des rejets urbains et industriels charris par les oueds, Seybouse et Bedjima. Les pics
observs Hnaya et Aouinate en priode printanire (avril) seraient probablement dus aux activits de
pche et dlevage pratiques au niveau de ces sites, et peuvent tre relatives des contaminations
anciennes ; en effet, daprs Gleeson et Gray (1997), comparativement aux Coliformes
(incluant E. coli), les Streptocoques sont plus rsistants aux conditions environnementales
difficiles et persistent plus longtemps dans leau.
En rfrence aux normes de la qualit de leau dictes par la directive europenne
(Voir tab. 13 et tab.14) qui limite les seuils 102 E. coli /100ml pour les eaux de baignade et
2.3 102 E.coli /100ml pour les eaux conchylicoles, il savre que les eaux du Cap de Garde et
Rezgui Rachid sont de bonne qualit bactriologique et celles de Hnaya et Aouinate, de
qualit bactriologique acceptable; quant la baignade, elle peut-tre autorise dans les 4
sites. Concernant, les eaux de Sidi Salem, elles se situent dans la catgorie D, et sont de ce fait
de mauvaises qualits car elles sont trs frquemment pollues. Nous remarquons, par ailleurs
que selon les mmes normes, les eaux du Cap de Garde constituent le meilleur site dactivits
conchylicoles, du fait de labsence de contamination bactriologique de ses eaux lie son
loignement des principales sources de contaminations.
Daprs le calcul de lindice de Bourgeois (1980), bas sur le rapport Coliformes
fcaux/Streptocoques fcaux (CF/SF), la source probable de la contamination de leau est
principalement dorigine animale ; en effet, ces zones sont rgulirement frquentes par les
animaux domestiques et de pturages, surtout au niveau de la rgion de Hnaya et Aouinate ;
au niveau de Sidi Salem, les rejets manant des abattoirs situs proximit de la plage,
expliqueraient aussi ces rsultats. Daprs Bitton, 1999 ; Clausen et al., 1977 ; Farow et al.,
1984 ) les Streptocoques du groupe D susceptibles de contaminer les eaux sont typiques des
djections animales ( S.bovis ; S. equinus) ; Ces espces colonisent le btail, les chevaux et
les volailles bien quelles peuvent, parfois, tre prsentes chez lhumain (Devriese et al .,
1998 ;Ruoff et al.,1989). Les contaminations humaine et mixte dceles Rezgui Rachid,
Aouinate et Hnaya, auraient pour origine, les rejets domestiques des riverains et des estivants
en t, quant Sidi Salem, elles sexpliqueraient par la prsence des agglomrations aux
alentours et des rejets charris par les Oueds Bedjima et Seybouse.
Analyses bactriologiques des moules.
Les analyses bactriologiques des moules peuplant les sites dtude, font apparatre des
contaminations importantes par les Coliformes totaux avec des teneurs maximales pouvant
atteindre 140000 germes/100ml de broyats.
En ce qui concerne les Coliformes thermotolrants ( E, coli), les pics de contamination
de leau relevs sont de moindre intensit par rapport ceux releves au niveau des bivalves ;
ceci peut sexpliquer par la fragilit de ces germes et leur brve dure de vie dans leau de
mer dune part (Rodier, 1996 ., CCME, 2002 ) et le pouvoir bio-accumulateur des bivalves
dautre part.
Quant aux Streptocoques (totaux et fcaux), leur prsence de faon continue des taux
trs levs, dpassant le seuil tolr, peut sexpliquer par la rsistance de ces indicateurs de
pollution (Gleeson et Gray, 1997). Et tmoignerait aussi de possibles contaminations
anciennes (Rodier.1996).

En rfrence aux normes de salubrit des fruits de mer, dictes par la communaut
europenne en 1991 (tab.4), les bivalves peuplant les sites dtudes, seraient impropres la
consommation directe, du fait que les taux de contamination mesurs sont nettement
suprieurs aux valeurs europennes, prconisant moins de 230 E.coli / 100 g de chair et de
liquide intervalvaire).
Nous notons toutefois, quen fonction de la priode de rcolte chaque sites prsente des
teneurs en bactries diffrentes ; de ce fait, nous pouvons classer le Cap de Garde et
lAouinate comme zones de productions de la classe B, Hnaya et Rezgui Rachid comme
zone de production de classe C et Sidi Salem comme zone de production de la classe D.
Tableau 4 : Critres microbiologiques pour les mollusques bivalves et niveau de salubrit des
zones de production (Communaut Europenne, 1991).
E.coli (E.C)/ 100g de
chair et de liquide
intervalvaire

Zones

Exploitation

Exploitation

Seuils
microbiologiques

Classement

Elevage

Pche professionnelle,
gisement naturel

Au moins 90% des


rsultats <230 E.C.
Aucun >1000 E.C.

Autoris pour une


consommation directe

Autoris pour une


consommation directe

Au moins 90% des


rsultats <4600 E.C.
Aucun >4600 E.C.

Au moins 90% des


rsultats <46000 E.C.
Aucun >46000 E.C.

Autoris tre
consomm aprs
reparcage ou
purification.
Autoris la
consommation aprs
reparcage (sur une
longue priode) ou
aprs purification
intensive.

Autoris mais aprs


reparcage ou
purification ncessaire
avant commercialisation
Autoris la
consommation aprs
reparcage (sur une
longue priode) ou
aprs purification
intensive

Au moins 90% des


rsultats >46000 E.C.

Impossible de rcolter des


coquillages pour la
consommation humaine.

Impossible de rcolter des


coquillages pour la
consommation humaine.

Par ailleurs, on ne signale aucune prsence de germes pathognes.

Conclusion
Il ressort de cette tude que :
Les eaux du littoral Nord-Est algrien, semblent profiter d'une meilleure
oxygnation en priode hivernale et printanire.
Les tempratures les plus leves sont enregistres en priode estivale dans
l'ensemble des stations.
Le pH est alcalin et les carts entre stations ne sont pas trs levs.
La salinit est importante en priode estivale et automnale.
Les MES sont leves en priode automnale.
La contamination fcale est gnralement importante et dpasse les normes
dictes par la directive europenne en E. coli.
Le site Sidi Salem, reprsente la partie du Golfe, la plus contamine du fait de
sa proximit aux divers effluents tels que loued Bedjima, loued Seybouse et
les rejets urbains.
Limpact de cette forte anthropisation classe les eaux et les moules de Sidi
Salem respectivement dans la catgorie D (eau de mauvaise qualit et trop
frquemment pollue) et dans la zone D (impossible de rcolter des coquillages
pour la consommation humaine).
En perspectives, il serait judicieux de :
- Procder un suivi rgulier des paramtres physico-chimiques et bactriologiques
des affluents qui sont lorigine d'importantes charges microbiennes; et qui se
rapportent aux activits anthropiques.
- Prvoir, en agglomration, un traitement systmatique des rejets par la mise en
place de stations dpurations des eaux et en zone rurale, lutilisation de fosse
septique.
- De mettre en place une rglementation nationale qui interdit tout rejet deffluents
non traits.
- Maintenir la couverture vgtale pour ralentir le lessivage qui favorise la
contamination de leau.
- Dassurer un contrle bactriologique rigoureux et rgulier des fruits de mer.
-

Mettre en place des bassins de reparcage ou de purification.

Annexes
Annexe 1.
La pollution.
La pollution est un problme dactualit affectant pratiquement tous les cosystmes y
compris lenvironnement marin, qui apparat en totalit ou en partie comme le sous-produit de
l'action humaine, au travers d'effets directs ou indirects, altrant les modalits de rpartition
des flux d'nergie, des niveaux de radiation, de la constitution physico-chimique du milieu
naturel et de l'abondance des espces vivantes. Selon le Comit Scientifique Officiel de la
Maison-Blanche pour la protection de lenvironnement (1965), ces modifications peuvent
affecter l'homme directement ou travers des ressources en produits agricoles, en eau, et
autres produits biologiques. Elles peuvent aussi l'affecter en altrant les objets physiques qu'il
dtient, les possibilits rcratives du milieu ou encore en enlaidissant la nature.
On peut distinguer deux grandes formes de pollution :
- Les pollutions ponctuelles, souvent relativement immdiates, qui proviennent de sources
bien identifies (rejets domestiques ou industriels par gouts, effluents dlevage ) et
peuvent tre traites par des stations dpuration.
- Les pollutions diffuses, comme celles dues aux pandages de pesticides et dengrais sur les
terres agricoles, qui concernent lensemble dun bassin versant, Elles mettent plus de temps
atteindre les milieux aquatiques et ne peuvent tre traites qu la source en diminuant lusage
des substances responsables.
Ces pollutions peuvent tre permanentes (rejets domestiques dune grande ville, par
exemples), priodiques (augmentation saisonnires des rejets lies au tourisme, aux crues ),
ou encore accidentelles ou aigus, la suite du dversement intempestif de produits toxiques
dorigine industrielle ou agricole, ou du lessivage des sols suite a de fortes pluies
(Anonyme.2005).

1. Les principaux types de pollution marine.


Il existe plusieurs manires de classer la pollution marine. On peut parler de pollutions
gnralises quand il y a un changement global qui affecte une partie ou la totalit de la
biosphre tels que leffet de serre, la couche dozone et les pluies acides et de pollution
localise quand il sagit drosion, de destruction de la nature par le feu, de pollution par les
pesticides, de pollution nuclaireetc. on rencontre galement des pollutions plagiques et
continentale, des pollution atmosphrique, ainsi que d'autres types de pollution.
Il existe aussi dautres types de classifications de la pollution :
o Classification selon MARPOL.
Pollution par les navires: Cause par immersion de matriaux ou rejets oprationnels ; il
sagit de trois catgories de dversements :
- rejets huileux particuliers aux ptroliers

- rejets huileux communs tous les navires


- rejets non huileux communs.
Pollution terrigne : Ce sont des polluants apports par le continent (apports de matires
organiques et minrales, apports nutritifs dorigine agricole, etc.)
Pollution atmosphrique : Ce sont les gaz et les particules provenant de sources
continentales naturelles (poussire de sols) ou anthropiques (zones urbaines et industrielles).

o Classification selon l'origine.


Pollution urbaine : Due principalement aux rejets domestiques et elle est lie aux
grandes concentrations urbaines.
Pollution industrielle : Lie au dveloppement de lindustrie et aussi varie que les
activits industrielles elles-mmes
Pollution agricole : Due aux insecticides, pesticides, fongicides, engrais chimiques ou
naturels utiliss pour la production agricole
o Classification selon le type.
Pollution physique : On parle de ce type de pollution quand le milieu marin est modifi
dans sa structure physique par divers facteurs
Pollution chimique : Due au dversement des rejets industriels apportant de grandes
quantits de substances chimiques dont certaines sont non dgradables
Pollution biologique : Cest un phnomne naturel d aux micro-organismes. Il sagit
de la contamination microbienne. (Equinoxe, 1990).

2. La contamination microbienne:
Cest la pollution biologique du milieu marin, caractrise par la prsence de
microorganismes dans leau qui servent gnralement de nourriture de nombreux
organismes marins ; favorisant la fixation dalgues ou de larves sur certains substrats,
permettant galement la dgradation de certains polluants ; cependant , elle est considre
comme dangereuse, si les agents prsents sont pathognes (tab.5) ; elle peut entraner la
propagation de certaines maladies infectieuses, ce qui limite la pratique d'activits rcratives
(baignade) et la pche notamment des mollusques bivalves. De plus, elle est souvent
ponctuelle, par consquent se prte difficilement une identification prcise. (Vaillant, 1973).

Tableau 5 : Principaux agents pathognes pour les animaux sang chaud et pour lhomme,
frquents dans les eaux pollues (Creteur, 1998)
Germes

Maladie

Origine

Virus

Poliomylite;
Hpatite virale

Se trouve dans les effluents de stations


dpuration

Vibrio cholerae

Cholra

Transmis par les gouts et les eaux pollues

Salmonella typhi

Fivre typhode

Shigella dysenteriae

Dysenterie

Frquent dans les gouts et les effluents en


priode dpidmies
Eaux pollues

Bacillus anthracis

Anthrax/ Charbon

Egouts. Spores rsistantes aux traitements

Brucella sp.

Brucellose

Mycobacterium
tuberculosis
Leptospira icterohaemorragiae
Entamoeba hystolytica

Tuberculose

Normalement transmise par le lait infect.


Egouts souponns aussi
Isol dans les effluents de sanatorium

Leptospirose

Port par les rats dgout

Dysenterie

Se rpand par lusage des eaux dgout comme


fertilisant ; commun dans les rgions chaudes

2.1. Les facteurs denvironnement affectant la survie des microorganismes


dans leau.
2.1.1. La temprature :
Il est important de connatre la temprature de leau avec prcision; en effet, celle ci
joue un rle dans la solubilit des sels et surtout des gaz. En influant sur la dissociation des
sels dissous, elle agit sur le pH. La temprature de l'eau est mesure l'aide d'un thermomtre
immerg environ 20 cm de profondeur.
2.1.2. Le potentiel dhydrogne :
Le pH joue un rle important sur la baisse ou laugmentation de la concentration en gaz
carbonique CO2 et de l'ammonification. Le pH de leau de mer varie entre 7.9 et 8.3.
2.1.3. Loxygne dissous :
La solubilit de loxygne dissous est fonction de la temprature, de la pression de
latmosphre et de la salinit. La teneur de loxygne dans leau dpasse rarement 10 mg/l.
Elle a tendance diminuer avec la profondeur.

2.1.4. La salinit :
C'est la concentration des corps chimiques qui, en solution dans l'eau, se dissocient sous
forme de cations. Un litre d'eau de mer contient environ 35g de sel, dont 30g de chlorure de
sodium. La salinit une action sur la rpartition des micro-organismes.
2.1.5. Les matires particulaires en suspension :
Les variations portent sur l'ensemble du matriel particulaire en suspension dans l'eau de
mer, c'est dire la majorit des organismes phytoplanctoniques susceptibles d'tre filtrs par
les Moules, auxquels il faut ajouter les particules minrales et les dtritus organiques enrobs
de bactries ainsi que certains agrgats bactriens.
Les agressions de l'environnement ont pour les cellules bactriennes un impact immdiat,
aussi ne serons nous pas surpris d'apprendre que les bactries possdent des mcanismes qui les
aident s'accommoder d'un milieu changeant et parfois hostile. Certaines espces de bactries sont
capables de crotre dans des circonstances spectaculaires : au dessus du point d'bullition de l'eau, ou au
dessous de son point de conglation ; dans des saumures satures ; des pH atteignant des valeurs aussi
basses que 1, ou aussi leves que 11 ; et aux pressions hydrostatiques extrmes du plus profonds des
ocans. Certaines bactries ne sont capables de crotre que si elles sont dans l'un de ces environnements
extrmes (Guiraud.2003)
Les bactries ne croissent pas seulement de plus en plus lentement aux tempratures de plus en plus
basses, ou de plus en plus leves ; il existe des tempratures limites prcises au dessus et en dessous des
quelles la croissance d'une souche donne ne peut plus avoir lieu. Le taux de croissance dcrot
rapidement au-del de la temprature optimale. D'aprs Nerdhadt et al (1994), la temprature
maximale de croissance d'E. coli est approximativement 48 C. Sa temprature optimale est de 39 C et
sa temprature minimale de 8 C ; alors que son domaine normal de temprature s'tend de 21 C
37 C.
Gnralement, on classe les bactries sur la base de la gamme de leurs tempratures de
croissance, on distingue :
o Les psychrophiles ou psychrotrophes, capables de se dvelopper en dessous de 15-20C , parmi eux il
y a les psychrophiles facultatifs, capables de se dvelopper 20C, telles les bactries de la flore Gram
ngatif saprophyte ( Pseudomonas, Achromobacter, Flavobacteium, etc.) et des pathognes (Listeria,
Yersinia).
o Les msophiles qui comportent la majorit des mocro-organismes, capables de se dvelopper entre
15 45 C.
o Les thermophiles, capables de se dvelopper au dessus de 45C et les thermophiles extrmes jusqu
75-80C, telles les bactries lactiques (Lactobacillus thermobacter , Streptococcus thermophilus),
les propionibaterium shemanii et les sporules (Clostidium thermosaccharolyticum).
NB : Ne pas confondre micro-organismes thermophiles et thermorsistant, la thermorsistance est
laptitude rsister un traitement thermique alors que la thermophilie est laptitude se dvelopper
temprature leve.
Tout comme la temprature, la plupart des bactries peuvent crotre dans une large gamme de
pH. Elles saccommodent de larges variations du pH de leurs milieux de croissance en maintenant leur
pH interne au voisinage d'une valeur optimale.
Il faut signaler aussi que chez les bactries sporules, le taux de sporulation, la thermo rsistance
des spores et le taux de germination dpendent galement du pH. La relation des micro-organismes avec
le pH a des applications hyginique : ainsi la plupart des bactries pathognes sont incapables de se
dvelopper a un pH infrieur 4,5 (Guiraud, 2003).

La bactrie Escherichia coli a une bonne croissance un pH proche de la neutralit, entre pH


6 et 8 ; elle peut crotre, mais plus lentement un pH d'environ une unit au dessus ou au dessous
de ces limites (Nerdhadt et a/., 1994), Compte tenu de ce comportement vis--vis du pH externe, le pH
intrieur de la cellule est maintenu une valeur peu diffrente de 7,6. Les bactries sont classes
entre neutrophile (E. coli acidophile et basophile. L'espce Thiobacillus ferrooxidans est acidophile, et
croit le mieux pH 2, tout en maintenant son pH interne proche de 6,5 sur toute la gamme de pH
de croissance, qui s'tend de 2 8. A l'autre extrme le basophile, croit le mieux pH 10,5 et
maintenant son pH interne 9. En conclusion, lorsquune bactrie croit des valeurs de pH infrieur
son pH interne, son cytoplasme est plus basique que son environnement, et lorsqu'elle croit des
valeurs suprieures, son cytoplasme est plus acide.
Parfois des phnomnes dantagonisme et de synergie peuvent tre observs. Ainsi , un
dveloppement qui peut avoir lieu un pH et une temprature donne (tab. 6). Peut tre inhib lorsque
les deux conditions se cumulent (Guiraud, 2003).

Tableau 6 : Comportement de quelques groupes microbiens en fonction du milieu


(Guiraud, 2003)
Germes
Aeromonas
Bacillus cereus
Brucella
Campylobacter
Clostridium botulinum
Clostridium perfringens
Eschirichia coli
Listeria monocytogenes
Pseudomonas
Salmonella
Shigella
Staphylococcus aureus
Staphylococcus pyogenes
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Vibrio vulfinicus
Yersinia enterocolitica

pH favorable
4.5/9.0
4.5/9.3
4.5/8.8
4.9/9.0
4.5/8.5
5.5/8.0
4.4/9.0
4.4/9.4
4.0/9.0
3.8/9.5
5.0/9.2
4.0/9.8
4.8/9.3
5.0/9.6
4.8/11
5.0/10
4.2/9.6

Temprature favorable
2/45C
5/55C
6/42C
32/45C
10/50C
15/50C
7/46C
-0.4/45C
8/45C
5/46C
7/46C
7/48C
10/45C
10/43C
5/43C
8/43C
-1.3/42C

Les exigences que manifestent les microorganismes vis--vis de la concentration en chlorure de


sodium conduit la distinction d'un certain nombre de germes:
o Les Stnotopes qui ne supportent pas les carts de concentration salines et n'acceptent de se
dvelopper qu'entre des limites rapproches : c'est le cas des bactries halophiles faibles ou
stnohalines.
o Les hyperhalophiles, leur croissance n'est possible qu' de fortes concentrations salines.
o Enfin un groupe important est constitu de germes halophiles modrs, ou indiffrent,
halophiles prfrentiels, halotolrant (croit de prfrence dans des milieux peu ou modrment
sals, mais qui acceptent de se dvelopper de fortes concentrations salines), halorsistant
(indiffrentes aux salinits, survivent dans des milieux sals et reprennent leurs vitalit des salinits
normales) ou non halophiles. (Nerdhadt et al., 1994).

2.2. Les germes indicateurs de contamination fcale :


La majorit des micro-organismes pathognes est d'origine fcale. En effet, pour contrler ce
type de pollution, on se base sur le choix de tmoins nomms germes indicateurs ou germes tests.
Le choix de ces indicateurs microbiens doit rpondre certaines exigences (Leclerc, 1978;
Papadakis, 1982) :
o
o
o
o

Etre toujours prsent et a plus grandes concentrations que les germes pathognes surveiller.
Etre capable de se multiplier dans le milieu aquatique.
Etre plus rsistants que les germes pathognes dans lenvironnement aquatique et aux dsinfectants.
Etre mis en vidence, dnombrs et identifis l'aide de techniques simples.

Gnralement, les indicateurs les plus spcifiques de la contamination fcale directe sont les
coliformes fcaux (tmoignant d'une contamination rcente) et les streptocoques fcaux (tmoignant
d'une contamination ancienne) dont le dnombrement et lidentification sont associs ensemble (Rodier,
1996).

2.2.1.

Les coliformes :

Ce sont des bactries gram ngatif appartenant la famille des Enterobacteriaceae qui
sont capables de fermenter le lactose. Les coliformes sont rencontrs largement dans les fces
dorigine animale et humaine.
Ce groupe est constitu de deux catgories de bactries : les coliformes totaux et les
coliformes fcaux.
Puisque les coliformes meurent lors de leur sjour en eau de mer, leur prsence indique
une contamination rcente par des matires fcales.
2.2.1.1. Les Coliformes totaux :
Ce sont des bacilles gram ngatif, ne formant pas de spores, ne possdant pas
doxydase, anarobies facultatives et fermentant le lactose avec production de gaz en 48 h
35C ( Kabler et Clark,1961).
Ils peuvent avoir dautres sources part la matire fcale savoir les cours deau, les
eaux de ruissellement et certains types deffluents industriels. Ce groupe est prsent par les
germes suivants : Enterobacter, Serratia, Yersinia, Rahnella, et Buttiauxella (Larpent et
Larpent, 1985).

2.2.1.2. Les Coliformes fcaux (thermotolrants) :


Les Coliformes fcaux ou Coliformes thermotolrants, sont un sous- groupe des coliformes totaux,
capables de fermenter le lactose une temprature de 44,5C. Lespce la plus frquemment associe ce
groupe bactrien est Escherichia coli (fig.46) et, dans un moindre mesure, certaines espces des genres
Citrobacter,Enterobacter et Klebsielle ( Elmund et al ., 199 ;Sant Canada,1991 ;Edberg et al.,2000).
La bactrie E. coli reprsente toutefois 80 90% des Coliformes thermotholrants dtects (Barthe et
al., 1998 ;Edberg et al., 2000). Bien que la prsence de Coliformes fcaux tmoigne habituellement dune
contamination fcale, plusieurs coliformes fcaux ne sont pas dorigine fcale, provenant plutt deaux

enrichies en matire organique, tels les effluents industriels du secteur des ptes et papiers ou de la
transformation alimentaire (Barthe et al., 1998 ;OMS ,2000).Cest pourquoi, il serait plus appropri dutiliser
le terme gnrique Coliformes thermotolrants plutt que celui de coliformes fcaux (OMS,1994 ;
Robertson,1995).
Lintrt de la dtection de ces coliformes, titre dorganismes indicateurs, rside dans le fait que leur
survie dans lenvironnement est gnralement quivalente celle des bactries pathognes et que leur densit
est gnralement proportionnelle au degr de la pollution produite par les matires fcales (CEAEQ, 2000).
Par ailleurs, ce sont de bons indicateurs de lefficacit du traitement de leau, mais comme leur
nombre est moins lev que celui des coliformes totaux, ces derniers leurs sont prfrables pour cette
fonction (Robertson, 1995).

X 600

Figure 46: Escherichia coli (E .coli) en coloration Gram


(wikipedia, 2008).
2.2.2. Les Entrocoques.
Ces bactries appartiennent la famille de Streptococcaceae, au genre Streptococcus et
au groupe srologique D de LanceField (Sharpe, 1979). Elles sont dfinies comme tant des
cocci sphriques lgrement ovales, Gram positifs. Elles se disposent le plus souvent en
diplocoques ou en chanettes, se dveloppent le mieux 37C et elles possdent le caractre
fermentaire avec production de lacide lactique sans gaz (Manuel de Bergey, 1984).
Il y a 5 espces reconnues parmi les streptocoques fcaux (SF) : S. bovis, S. equinus, S.
avium, S. faecalis et S. faecium.
Les entrocoques sont dorigines intestinales, de lhomme et des animaux sang chaud
et indiquent une pollution par des matires fcales. Ce groupe bactrien est souvent utilis
comme tmoin supplmentaire de contamination fcale du milieu aquatique. Les entrocoques
ne sont pas pathognes pour lhomme mais leur prsence en grand nombre pourrait indiquer
la prsence de bactries pathognes (fig.47).

Il est possible de connatre lorigine de la contamination fcale par lutilisation du


rapport (Coliformes fcaux/Streptocoques fcaux) CF/SF. Ce ratio est valable seulement
quand la contamination est rcente car les Streptocoques fcaux persistent plus longuement
que les Coliformes fcaux dans leau de mer (Bouchriti et al., 1992).
Selon Bourgeois (1980), lorsque le rapport CF/SF est suprieur 4, la contamination est
essentiellement d'origine humaine, sil est infrieur 0.7, la contamination est d'origine
animale et si le rapport est situ entre 0.7 et 4 la contamination est dorigine mixte (tab.7).
Tableau 7: Dtermination de lorigine de la pollution fcale selon le rapport de
Bourgeois (1980).
Ratio CF/SF
R<0.7
0.7<R<1
R>4

Source de Contamination
Origine animale
Mixte
Origine exclusivement humaine

En 1982 Borrego et Romero ont apport des modifications au rapport de Bourgeois,


permettant ainsi davoir un renseignement prcis sur lorigine de la contamination (tab.8).
Tableau 8 : Dtermination de lorigine de la pollution fcale selon le rapport CF/SF.
Borrego et Romero (1982).
Ratio CF/SF
Source de Contamination
R<0.7
Principalement ou entirement dorigine
animale
0.7<R<1
Mixte prdominance animale
1<R<2
Origine incertaine
2<R<4
Mixte prdominance humaine
R>4
Source exclusivement humaine

X 600

Figure 47: Les Streptocoques germes indicateurs dune contamination fcale


(wikipedia, 2008).

2.3. Les germes pathognes.


Ces germes proviennent le plus souvent des ctes pollues par les gouts, les effluents
et dautres sources de pollution.
Les bivalves peuvent tres des vecteurs de nombreux germes pathognes dont les plus
frquents peuvent engendrer des infections et des maladies pidmiques.
2.3.1. Le V.cholerae.
Cest lespce la plus connue du genre Vibrio. Elle ne se trouve pas ltat naturel dans
propre, mais est introduite par les eaux uses non traites (fig.48).
Une classification base sur les antignes somatiques O de nature glucido-lipidoprotique spcifiques V. cholerae a permis de distinguer V.cholerae O1 et V.cholerae non
O1. Alors que les facteurs antigniques H, de nature protique, sont communs tous les
vibrions (Pilet et al., 1979).
Le V. cholerae est considr comme tmoin de contamination rcente par lhomme
infect. Une fois libr dans leau, ce germe peut contaminer les coquillages qui le
transmettent au consommateur (Boutin et al., 1982 ; Garay et al., 1985).
leau

Il provoque le cholra, des toxi-infections intestinales aigues strictement adapte


lespce humaine. Aprs une incubation de 1 5 jours, la maladie se manifeste par des
vomissements spontans, des diarrhes profuses avec des selles aqueuses et incolores (OMS,
1978).

X 600

Figure 48: Vibrion du cholra en coloration Gram


(wikipedia, 2008).

2.3.2. Les Salmonelles.


Les espces du genre salmonella appartiennent au groupe des Salmonellae et la
famille des Enterobacteriaceae. Le genre Salmonella est lun des plus importants de cette
famille. Il comprend des bactries asporules, gram ngatifs, gnralement mobiles grce
des cils pritriches, parfois immobiles (S.pullorum, S.gallinarum).

Figure 49: Salmonella typhimurium en rouge observe au microscope lctronique


(wikipedia. 2008)

Sur la base des caractristiques, le genre salmonella est subdivis en 4 sous-genres :


- Sous genre I : Il est le plus important car il contient la majorit des espces pathognes pour
lhomme et lanimal.
- Sous genre II : Il contient des srotypes communment trouvs chez les reptiles et rarement
chez lhomme.
- Sous genre III : Il contient le groupe Arizona.
- Sous genre IV : Il contient les srotypes rares de salmonella.
Les salmonelles sont des organismes msophiles, distribus dans le monde entier. La
temprature optimale de croissance est 37C (FAO, 1996). Elles sont prsentes chez lhomme
au niveau des intestins, mais aussi chez les mammifres, les oiseaux et bon nombre
danimaux sang chaud (Brissou et Denis, 1978).
La prsence des salmonelles dans leau et dans les fruits de mer indique une
contamination fcale directe ou indirecte partir des dchets de lhomme et des animaux.
Cest la raison pour laquelle, dans beaucoup de rglementations, on exige la recherche de
salmonella pour valuer et dterminer la salubrit des mollusques destins la consommation
humaine.
La principale source de salmonelles est constitue par les malades qui librent jusqu
un milliard de salmonelles par gramme de matire fcale (librant) et les porteurs
apparemment sains, ne prsentant pas de symptmes cliniques mais continuent excrter des
salmonelles pendant des mois voir des annes (Brissou, 1968).

Les tudes pidmiologiques amnent distinguer 3 groupes de salmonelloses :


Les formes septicmiques (salmonelloses majeures) : fivre typhoide et paratyphoide. Elles
sont engendres par des salmonelles qui ne se rencontrent que chez lhomme et qui en est le
seul rservoir : S.typhi et S.paratyphi A et B (fig.49).
Les formes digestives : toxi-infections alimentaires. Elles sont engendres par des
salmonelles dont lhte naturel est lanimal, mai qui peuvent contaminer lhomme. Le nombre
de genre dinfection augmente en raison du mode dalimentation collectif qui se gnralise
dans les pays industrialiss.
Les autres salmonelloses : Elles sont plus rares : mningites, atteintes osto-articulaires,
infections pulmonaires.
Le tableau 9 rsume la frquence dapparition (avec pour certains les toxi-infections
associes) des diffrents srotypes de Salmonella en fonction du lieu de prlvements.
Tableau 9: Importance des principales espces du genre Salmonella (numro dordre sur 20
espces) chez lhomme, les animaux, dans les gouts et en eau de mer et toxi-infections
associes. (Equinoxe (1990)
ToxiHommes
Animaux
Egouts
Eau de mer
infections
Fivres
Paratyphi A
Paratyphi B

18
3

19
16

20
1

Trs rare
1

Paratyphodes

Typhimurium

Diarrhe,
Fivre,
vomissement

Dublin
Panama

16

2
15

17
6

rare
rare

Salmonelloses

Typhi
Enteretidis

2
4

20
3

15
16

trs rare
10

Fivre
typhoide
---

2.3.3. Les Staphylocoques.


Ces bactries appartiennent la famille de Micrococcaceae (Manuel de Bergey, 1984).
Ce sont des cocci grams positifs arrangs en paires, en ttrades ou en grappes (fig.50). Ils
sont immobiles, arobies ou anarobies facultatifs, asporuls (OMS, 1995 c).
Cette famille comprend les genres suivants : Planococcus, Micrococcus et
Staphylococcus. Kloos et Schleifer (1975) ont pu identifier 11 espces au sein du genre
Staphylococcus, en 1984, ils ont pu distinguer 19 espces (Manuel de Bergey, 1984).

Parmi ces espces, S. aureus revt plus dintrt quant la pollution de eaux littorales
et des fruits de mer. Deux autres espces (S. epidermidis et S. saprophyticus) sont assez
frquemment rencontres dans leau, mais leur pouvoir pathogne est moins important.
Les staphylocoques sont trouvs au niveau des muqueuses nasales, les follicules pileux,
la peau et la rgion prinale des animaux sang chaud y compris lhomme.
Les produits de la mer comestibles peuvent tre contamins par les staphylocoques, soit par
lintermdiaire de manipulateurs infects soit par lenvironnement. Frquemment, la
contamination est due un individu atteint dune infection aux mains, dun rhume ou dun
mal de gorge (FAO, 1996).
Lespce la plus importante, S. aureus donne des colonies noires dans le milieu
Chapman, cest un germe msophile avec une temprature de croissance minimum de 10C,
mais des tempratures plus leves sont ncessaires la production des toxines. Elle possde
laptitude dlaborer des entrotoxines (six types distincts : A, B, C1, C2, D, E) qui provoquent
des intoxications alimentaires (Ababouch, 1995) causant des vomissements, des nauses et
des diarrhes (FAO, 1996). Les symptmes ne durent gnralement pas plus de 24 heures,
mais dans les cas graves, la dshydratation peut conduire au choc ou collapsus.

X 600

Figure 50: Les Staphylocoques en coloration Gram


(Wikipedia, 2008)

2.3.4 .Les Bacillaceae.


Les espces de cette famille sont sous forme de btonnets, de filaments ramifis ou de
coques. Parmi les btonnets, on distingue deux genres qui interviennent dans la pollution du
milieu marin: Bacillus et Clostridium.
Le genre Clostridium reprsente un intrt particulier dans la pollution de leau et des

fruits de mer. Il est capable de sporuler, souvent trs toxinogne et trs rsistant. Les espces
les plus importantes dans ce genre sont : C. botulinum et C. perfringens.

C.perfringens

C. perfringens est une bactrie en forme de btonnet (bacille) qui forme des spores et
qui peut se dvelopper seulement en labsence doxygne. Cest une bactrie commune quon
retrouve dans le sol et qui habite normalement les intestins des tres humains et dautres
animaux. Ce genre est rejet en quantits considrables dans les eaux uses (OMS, 1995a).
C. perfringens est plus rsistant que les autres indicateurs, mais il est difficile de le
dtecter dans leau de mer. Il peut contaminer les coquillages stocks dans de mauvaises
conditions (Tengueu, 1996).
C. perfringens cause une intoxication alimentaire en produisant une srie de toxines
lorsquon consomme de la nourriture o la bactrie est prsente en grand nombre.
Les symptmes sont habituellement la diarrhe et des crampes abdominales. Il ny a
gnralement pas de fivre ni de vomissements.

C.botulinum

Ce germe est souvent rencontr dans le milieu aquatique marin. Il a t isol partir de
leau, des sdiments, des coquillages et des poissons (Smith et al, 1982).
C. botulinum est une bactrie en forme de btonnet (bacille), strictement anarobie et
qui forme des spores (fig.51).
Il existe sept types de toxines botuliques dsignes par les lettres A, B, C, D, E, F et G,
mais cest le type E qui intervient le plus frquemment dans les intoxications provoques par
la consommation des poissons et de fruits de mer en conserve (Troller, 1986 ; Frazier et
Westhoff, 1988), car les spores de C. botulinum sont largement rpandus dans les eaux sales.
La consommation daliments contenant la toxine de C. botulinum cause une maladie
appele botulisme qui est grave, mais relativement rare.
Ce sont surtout les symptmes neurologiques paralytiques qui dbutent, alors que les
symptmes digestifs (nause et vomissement) sont secondaires. En effet, les accidents
respiratoires sont la cause de la mort (FAO, 1996) Le seul traitement du botulisme est
ladministration dune antitoxine spcifique. Malheureusement, cette antitoxine est
gnralement inefficace si elle est administre aprs lapparition des principaux symptmes. Il
est donc extrmement important de commencer le traitement ds les premiers signes dun
empoisonnement.

X 600

Figure 51: Clostridium botulinum en coloration Gram


(Wikipedia, 2008)

2.3.5. Les Pseudomonas.


Ces germes appartiennent la famille des Pseudomonaceae. Ce sont des bacilles gram
ngatifs, arobies, asporules, trs mobiles par un ou plusieurs flagelles polaires (fig.52). Il
sagit de bactries pathognes ou daltrations, parfois mme redoutables et mortelles (Brisou
et Denis, 1978).
Les Pseudomonas provoquent chez lhomme des affections de la sphre oto-rhinolarynge (ORL) lors des baignades en rivire, en piscine ou par suite de lutilisation des
bassins tourbillons.
Pseudomonas aeruginosa est une espce qui revt une importance principale dans la
pollution microbienne du milieu marin. Elle est occasionnellement limine par les intestins et
les urines. Sa prsence dans leau est associe aux activits humaines, on le trouve dans
environ 10% des matires fcales normales et frquemment dans les eaux uses o ses
concentrations peuvent atteindre 1 million /100 ml. Elle provoque des infections des oreilles,
des yeux, des brlures et des voies urinaires ainsi que lentrite (OMS, 1995 a).

X 600

Figure 52 : Pseudomonas aeruginosa en coloration de Gram


(wikipedia, 2008)
2.3.6. Les Shigella.
La Shigella est une bactrie en forme de btonnet qui ne constitue pas de spores. Elle
est aro-anarobie facultative. Cest lagent causal dune infection alimentaire appele
shigellose ou dysenterie bacillaire. Cette maladie est dune gravit extrmement variable
et peut causer la nause, des vomissements, des douleurs abdominales, de la diarrhe, des
selles aqueuses contenant souvent du sang et du mucus, des frissons et de la fivre (fig.53).

Figure 53: Shigella flexnarii en rouge observe au microscope lctronique


(wikipedia. 2008)

3.

Les bio-indicateurs de la pollution marine :

Beaucoup dorganismes marins accumulent des contaminants de trs fortes concentrations dans
leurs tissus. Leur premire utilisation dans le cadre de la surveillance des pollutions aquatiques a t, en 1963
par (Falsom et a.l,1963).
La matrise des principes de base de la biologie des espces est une condition
essentielle leur slection comme bio-indicateurs. Des connaissances sur le mode de vie et la
stratgie de nutrition sont ncessaires. Il doivent rpondre a plusieurs critres de slections
(Butler et al., 1971 ; Phillips., 1980, Phillips et Rainbow., 1993).
-Sessile ou sdentaire afin de reprsenter la rgion o ils se dveloppent.
-Robustes et tolrants aux variables physico-chimiques comme la salinit.
- Des accumulateurs puissants.
A ce jour, les mollusques bivalves sont les bio-indicateurs quantitatifs cosmopolites les
plus utiliss. Le concept dorganisme sentinelle Mussel Watch sest construit sur la base
des modles de mtabolisme des contaminants chez les bivalves.
3.1. Les bio-indicateurs en Mditerrane.
En avril 2002, un atelier de travail sur la fondation programme Mussel Watch
mditerrane a t tenu Marseille, sous lgide de CIESM. Durant cette runion 24
chercheurs provenant des pays du bassin mditerranen et de la mer noire ont prsent leurs
travaux sur linspection de la qualit de leurs ctes et ils se sont tous mis daccord sur le
principe dutilisation de la moule mditerranenne, Mytilus galloprovincialis comme bioindicateur de la contamination puisquelle est prsente sur le littoral du bassin mditerranen
et de la mer noire (Fisher et al., 1987). Cependant, ils se sont vite rendu compte que cette
espce est devenue rare et mme absente dans la partie Sud et Est de la mditerrane, elle a
t remplace par la moule africaine, Perna ou le Brachidonte variabilis qui appartient a la
famille des mytilidae et qui a t admise comme solution alternative dans les conclusions de
CIESM (2002).
En Algrie on utilise surtout les moules Perna perna et Mytilus galloprovincialis
quand elles sont prsentes.
3.2.Description des bio-indicateurs.
Les Moules sont des Mollusques appartenant l'Ordre des Filibranches (en raison de la
structure de leurs branchies constitues de filaments, rflchis et unis par des touffes de cils) et
rangs dans la classe des Bivalves ou Lamellibranches. Les moules font partie de la famille des
Mytilidae.
Les espces qui composent, cette famille se distinguent par des coquilles ayant des
valves gales, un ligament presque toujours externe, une charnire sans dents (ou avec dents
trs rduites), des branchies filaments spars, deux muscles adducteur (l'antrieur est
rarement absent), un pied allong et un byssus (Fig. 54).
Espce sessile (fixe demeure), elle rsiste aux courants, aux chocs des vagues et
l'arrachement grce aux solides filaments du byssus qui sont souds au rocher.

Elle est pourtant capable de se dplacer aprs avoir rompu une partie des filaments du
byssus et avoir dpos un peu plus loin sur le rocher une substance protique qui s'coule dans
le sillon postrieur du pied et se solidifie au contact de l'eau en formant des filaments; elle se
hale ensuite sur ces nouveaux filaments.
Consommateur microphage omnivore, elle utilise son appareil branchial comme un
filtre. En effet le courant d'eau inhalant passe travers la branchie qui joue le rle de tamis et
qui comporte des sillons garnis de cellules muqueuses qui agglomrent les particules en
suspension dans l'eau; les microparticules consommables sont alors transportes jusqu' la
bouche alors que les particules non consommables sont rejetes l'extrieur (pseudofcs).
Suspensivore, la moule filtre jusqu' 100 litres d'eau par jour; elle est capable d'oprer
un tri concernant la nature et la taille des particules qui pntrent dans la cavit pallale dont
le diamtre est comprise entre 3 et 13 micromtres. Elle se nourrit de phytobenthos
(diatomes), de phytoplancton et de dbris organiques.
Animal benthique grgaire fix aux substrats solides dans les anfractuosits des rochers
battus et clairs de l'tage mdiolittoral qui sont favorables l'installation de moulires
naturelles. Sensible la pollution chimique et bactrienne, la moule concentre les polluants et
constitue un bon indicateur de la qualit des eaux .
La moule est capable de supporter une longue mersion grce une rserve d'eau entre
les deux valves. (Franc, 1960 ; Seed, 1976 ; Darignac-Corbeil, 1976).

Figure 54 : Structure et anatomie dune moule.

Description de lespce retenue dans cette tude :


o

La moule Perna perna

Elle est de forme allonge et de couleur noire violace, on la rencontre comme la signal
Fischer et al, (1987) sur les fonds de l'tage infralittoral entre 3 et 5 m, elle se fixe par son byssus
aussi bien sur des supports rocheux que sableux ou encore vaseux. C'est une espce gonochorique avec
mission de gamtes entre avril et juin. La couleur du manteau permet de distinguer les deux sexes en
effet, elle est blanchtre chez les mles et ros saumon orange chez les femelles.
Ce sont des organismes filtreurs qui ingrent sans distinction toutes particules prsentes dans le
milieu, elles absorbent le phytoplancton ne retenant que les protozoaires, les microbes et les diatomes
(Boyer, 1986 ; Dupray et al, 1999). Les moules Perna perna, filtrent jusqu' 4 litres d'eau /heure. En
mditerrane leur taille maximale est de 90mm, avec une taille moyenne de 50 60mm (Fisher et al,
1987). Elles sont largement rencontres dans les eaux saumtres des lagunes ctires. Ce sont des
espces caractrises par une forte tolrance vis--vis des conditions du milieu, ainsi elles supportent
des tempratures de 13C en hiver et entre 27 et 28C en t et des salinits comprise entre 7 et 40 %
(Lubet et Chappuis, 1966).

Position systmatique de la moule Perna perna


- Embranchement.
Mollusques
- Classe.
Bivalves
- Sous-classe.
Ptriomorphia (beurlen,1944)
- Ordre.
Mytiloida(ferussac,1822)
- Famille.
Mytilidae(rafmesque,1815)
- Genre.
Perna (philipsson, 1788)
- Espce.
perna (linnaeus,1758).
3.3. Rpartition gographique des moules
Les Moules sont reprsentes par deux genres principaux : Mytilus et Perna. Le genre
Mytilus est extrmement rpandu dans le monde ; on en rencontre depuis les rgions tropicales
jusque dans les mers polaires.
Le genre Perna se cantonne en Atlantique tropicale et subtropical : Maroc, Mauritanie,
Sngal, ctes de l'Amrique du sud. En Algrie, sa prsence a t signale par Pallary (1921) et
Cruvel (1926). Son aire va de Gibraltar au Golfe de Tunisie en Mditerrane.
Ce genre existe sur les ctes d'Afrique du Nord, sous le nom de Mytilus africanus qui
appartient au genre Perna. Cette espce existe mme en abondance. Le genre Perna a t donc
considr comme genre part entire dfini selon Lubet (1973) par les caractres distinctifs au
niveau des empreintes musculaires (Tab.10).

Tableau 10 : Caractres distinctifs entre la musculature de M. galloprovincialis et de Perna perna


(Lubet, 1973)
Muscles

Mytilus galloprovincialis

Perna.perna

Muscle adducteur antrieur

petits ou grands
1 paire s'insrant dorsalement dans
la rgion postrieure

absence des grands

rtracteurs antrieurs : 1 paire


s'insrant antrieurement

rtracteurs antrieurs : 1 paire


s'insrant antrieurement

rtracteurs moyens : 1 paire


forme de deux faisceaux s'insrant
dorsalement dans la rgion
moyenne contre les rtracteurs
postrieurs

rtracteurs moyens : 1 paire de


muscles trs pais forme de
nombreux faisceaux empreinte
distincte

rtracteurs postrieurs : l paire de


deux faisceaux s'insrant
postrieurement entre les
prcdents et l'adducteur postrieur

rtracteurs postrieurs : 1 paire


forme de deux faisceaux
insertion distincte contre
l'adducteur postrieur

Muscle adducteur postrieur


Muscles rtracteurs du pied

Muscles rtracteurs de byssus


(3 paires)

3.4. Dtermination des espces :


La dtermination des espces existantes dans le golfe dAnnaba, a t faite sur des
chantillons rcolts au cours de l'anne 2008. Une fois au laboratoire les moules sont ouvertes et
dbarrasses de leur chair afin de pouvoir examiner les empreintes. Le caractre principal
permettant de sparer les genres Perna et Mytilus est le modle d'empreinte laiss par le muscle sur
la coquille (Fig.55).
Chez Mytilus les composantes antrieures et postrieures du muscle rtracteur sont unies
formant une bande continue de myostracum le long de la marge dorsale de la ligne pallale. Au
contraire, ces deux composantes s'attachent sparment sur la coquille de Perna laissant une
empreinte de muscle discontinue (Sidall, 1980).
En plus de ceci chez P.perna les charnires consistent en une forte dent lamelliforme s ur
chaque valve, chez Mytilus galloprovincialis, elle se compose de trois dents bien apparentes sur
chaque valve (Fig. 56) une autre caractristique moins claire, distingue l'adulte Perna d'au moins
Mytilus edulis est le muscle adducteur antrieur qui est prsent bien que petit chez Mytilus mais
absent ces toutes les espces de Perna (Sidall L, 1980).

Figure 55 : Disposition des insertions musculaires sur la coquille de Perna perna (A)
et de Mytilus galoprovencialis (B) (Sidall, 1980).
ma =muscle adducteur antrieur ; mp = muscle
adducteur postrieur ; rnd = rtracteur antrieurs de
byssus rmb = rtracteurs moyen du byssus ; rpb =
rtracteurs postrieurs du byssus ; rp = rtracteur du
pied .

Figure 56 : Charnire de la valve gauche (Sidall, 1980).


l = Perna perna Linn 2= Mytilus galoprovcncialis Lamarck 3 = Mytilus edulis Linn (ab = section
transversale dans le test)

Annexe 2.
Tableau 11 : Table de Mac Grady pour 3 sries de 3 tubes (Eau).

Nombre de tubes
positifs
001
010
100
101
110
111
120
200
201
210
211
220
221

Nombre de
Nombre
Nombre de
germes/100ml caractristique germes/100ml
3
3
4
7
7
11
11
9
14
15
20
21
28

300
301
302
310
311
312
320
321
322
330
331
332
333

23
39
64
43
75
120
93
150
210
240
460
1100
>2400

Tableau 12 : Table de Mac Grady pour 3 sries de 3 tubes (bivalves).

Nombre
caractristique
000
001
010
011
020
100
101
102
110
111
120
121
130
200

Nombre
Nombre
Nombre
Nombre
Nombre
de
caractristique
de
caractristique
de
germes/ml
germes/ml
germes/ml
0.0
201
1.4
302
6.5
0.3
202
2.0
310
4.5
0.3
210
1.5
311
7.5
0.6
211
2.0
312
11.5
0.6
212
3.0
313
16.0
0.4
220
2.0
320
9.5
0.7
221
3.0
321
15.0
1.1
222
3.5
322
20.0
0.7
223
4.0
323
30.0
1.1
230
3.0
330
25.0
1.1
231
3.5
331
45.0
1.5
232
4.0
332
110.0
1.6
300
2.5
333
140.0
0.9
301
4.0

NB : Le nombre de germes pris du tableau sera multiplier par 10, la chair et de liquide
intervalvaire ont t dilus 1/10.

Tableau 13 : Normes de la qualit requise des eaux de baignades (directive europenne du 8


J.Off.Comm.Europ
et par le dcret excutif N :93-164 du 10 juillet 1993. JORA N 46.

dcembre 1975, reprise par le dcret excutif n 91-980 du 20 septembre 1991.

Paramtres bactriologiques
Coliformes totaux/100ml
Coliformes thermotolrants/100ml
Streptocoques fcaux/100ml
Salmonelle

Norme guide
500
100
100
absence

Nombre impratif
10000
2000
absence

La directive europenne du 8 dcembre 1975, reprise par le dcret n 91-980 du 20 septembre


1991, a tabli les normes de qualit des eaux de baignade et les a classe en quatre catgories :

o
o
o
o

Catgorie A : bonne qualit, respect des valeurs guides et impratives de la directive.


Catgorie B : qualit moyenne, respect des normes impratives.
Catgorie C : pouvant momentanment tre pollue (entre 5 et 33 % dchantillons non
conformes aux valeurs impratives).
Catgorie D : mauvaise qualit, trop frquemment pollue (plus de 33 % dchantillons non
conformes aux normes impratives).

Ce classement attribu en fin de saison, partage dune part, les eaux conformes (A et B) et
dautre part les eaux non conformes (C et D).

Tableau 14 : Normes de la qualit des eaux conchylicoles (Communaut Europenne,


1991).
Paramtres
Zone A
Zone B
Zone C
> 300 et < 1 000 pour > 6000 et < 60 000
> 60 000 pour 90 %
Coliformes fcaux
(nombre/100g de
90 % des
pour 90 % des
des chantillons
chair et de liquide
chantillons
chantillons
intervalvaire)
> 230 et <1000 pour > 4 600 et < 46 000
> 46 000 pour 90 %
Escherichia coli
(nombre/100g de
90 % des
pour 90 % des
des chantillons
chair et de liquide
chantillons
chantillons
humide)
Les eaux conchylicoles sont, comme les eaux de baignade, classes en catgories de qualit. Il
existe ainsi quatre zones :
- Zone A : zone o il est possible de rcolter les coquillages pour une consommation humaine directe.
- Zone B : zone o les coquillages doivent faire lobjet dune purification et/ou dun reparcage dune
dure adapte dans une zone de qualit A, avant dtre accepts pour la consommation humaine.
- Zone C : comme la zone B, mais la purification doit tre plus pousse ou le reparcage de beaucoup plus
longue dure.
- Zone D : zone o il est impossible de rcolter des coquillages pour la consommation humaine.

Tableau 15: Critres microbiologiques pour les coquillages bivalves (arrt europen du 23
mars 1993).
Paramtres
Valeur guide
bactriologiques
Coliformes thermotolrants
< 2.3.102/100ml de chair et
de liquide intervalvaire
Strptocoques fcaux
<2.5.103/100ml de chair et de
liquide intervalvaire
Salmonelle dans 25 g
Autre germes pathognes et
toxines

Absence
Absence

Tableau 16: Principale industrie dversant dans le Golfe dAnnaba (DEWA, 2002).
Unit industrielle
FERTIAL
(ex ASMIDAL)

Lieu
dimplantation
El6Bouni

EN-FERPHOS
SONALGAZ
ENCG

Port
Port
Port

ONAB N 1
ENTPL
Carreaux-Granito

Port
Z.I. Pont Bouchet
Z.I. Pont Bouchet

ORLAIT

Lallelick (El Bouni)

ENCC
FERROVIAL

Z.I. Pont Bouchet


Lallelick (El Bouni)

HYDRO-CANAL
14 EN SIDER

Z.I. Pont Bouchet


Sidi Amar

PROSIDER (Chaiba)
ERWA
SNLB
EMIB

Sidi Amar
Z.I. Meboudja
Annaba
Annaba

SARL PROCOMAC
(Carrelage)
SARL CHOCOTRK

Z.I. Meboudja

SAEL BELKIRI
(Confiserie)
CONSERVERIE DE
TOMATE

Z.I. Pont Bouchet

Z.I. Pont Bouchet

Annaba

Nature des effluents liquides


Eaux de process
(Charges de rsidus chimique)
Eaux de refroidissement
Eaux uses domestiques
Eaux refroidissement
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles
Eaux uses domestiques
Eaux uses domestiques
Eaux uses domestiques
(ponsage)
Eaux uses industrielles
(lactosrum)
Eaux de refroidissement
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles
Eaux uses domestiques
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles
Eaux uses industrielles
Eaux de lavages
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles
(germe et levure)
Eaux uses industrielles
(ponage)
Eaux uses industrielles
Eaux de lavages
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles
Eaux uses domestiques
Eaux uses industrielles

Tableau 17: Reprsentations des rejets domestiques de la wilaya DAnnaba et de leurs


milieux rcepteurs (DEWA, 2002).
Agglomeration W.A
Milieux rcepteurs
Sidi Amar
Oued meboudja vers Oued Seybouse puis la mer.
El Hadjar
Oued meboudja vers Oued Seybouse puis la mer.
El Bouni
Une partie des rejets se dversent vers lOued Seybouse
et lautre partie vers la mer en passant par Oued
Boudjemaa.
Annaba Ville
Les rejets passent par le reseau principal, se dversent
vers la mer en passant par la station de pompage Sidi
Brahim.

Tableau 18 : Localisation des stations de relevage des eaux uses de la wilaya dAnnaba
DHWA (2008).
N
Station de pompage Localisation
Nature de rejets
1
Cap de garde
Annaba
Eaux uses
2
Ain achir
Annaba
Eaux uses
3
Belvdre
Annaba
Eaux uses
4
Refed zahouane
Annaba
Eaux uses
5
La caroube
Annaba
Eaux uses
6
Rizi amor (SP4)
Annaba
Eaux uses
7
Leve de laurore
Annaba
Eaux uses
(cit enasr)
8
Ancien gare (SP2)
Annaba
Eaux uses+pluviales
9
Sid Brahim (SP1)
Annaba
Eaux uses+pluviales
10
Bouzerad hocine
Annaba
Eaux uses
(SP7)
11
Eliza (SP3)
Annaba
Eaux uses+pluviales
12
Plaine Ouest 1(SF1) Annaba
Eaux uses
13
Plaine Ouest 2(SF2) Annaba
Eaux uses
14
Cit Rym
Annaba
Eaux uses
15
El Bouni
El Bouni
Eaux uses
16
Allalik
El Bouni
Eaux uses
17
Gharbi issa
El Bouni
Eaux uses
18
Sidi Salem 2
El Bouni
Eaux uses
19
Boukhmir
El Bouni
Eaux uses
20
Boukhadra 5
El Bouni
Eaux uses
21
El Hadjar 4
El Hadjar
Eaux uses
22
Chetaibi
Chetaibi
Eaux uses
23
Oued el aneb
Oued el aneb
Eaux uses
SP : Station de pompage.
SF : Station de forage.

Tableau 19: Donnes mtorologiques (Office National de la Mtorologie, 2008)


Mois

Janvier 08
Fvrier 08
Mars 08
Avril 08
Mai 08
Juin 08
Juillet 08
Aout 08
Septembre 08
Octobre 08
Novembre 08
Dcembre 08

Pluviomtrie
moyenne mensuelle
(ml)
13.7
16.5
98.5
16.0
41.9
24
7.0
0.2
60.0
48.7
40.5
87.3

Temprature
moyenne mensuelle
(C)
11.2
11.3
12.3
16.1
19.1
21.6
25.3
25.6
23.6
19.7
14.8
11.0

Force du vent

3.1
2.9
3.6
4.0
3.6
3.8
5.4
4.3
3.7
3.3
3.7
3.4

Annexe 3.
o Milieux de culture.
Bouillon Lactos bili au vert brillant / cloche (BLBVB).
Usage :
Milieu de dnombrement des coliformes totaux (48 h une temprature de 37C.
Composition :
-Peptone 10,0g
-Lactose 10,0g
-Bile ddshydrate 20,0ml
-Vert brillant 13,0 mg
(pH = 7,4)
Prparation :
40 g par litre deau distille. Strilisation classique.
Lecture
La cloche de Durham permet le recueil des gaz signant la prsence de coliformes,
condition que le milieu ait t agit correctement pour que les bactries soient bien rparties,
y compris sous la cloche. Il est conseill d'agiter lgrement le milieu plusieurs heures avant
la lecture pour favoriser le dgagement de gaz sous la choche de Durham, qui, autrement, peut
ne pas tre observ pour les dilutions limites.
Si plusieurs essais sont effectus, on utilise la table statistique de Mac Grady pour
dterminer le nombre de coliformes le plus probable (NPP).
On peut dterminer la prsence de coliformes thermotolrants ou fcaux en ralisant le test
de Mackenzie : repiquage d'une anse de 9 microlitres de chaque tube positif BLBVB 37 C
dans un nouveau tube BLBVB et un tube d'eau peptone qui seront incubs 44 C). Les
tubes positifs 44 C permettent de dnombrer les coliformes totaux en utilisant la table de
Mac Grady. Si les tubes d'eau peptone permettent de lire de surcrot la production d'indole,
on peut conclure la prsence d'Escherichia coli et raliser de mme son dnombrement.
Eau peptone exempte dindole (Tryptone water).
Usage :
Recherche de l'indole.
Composition :
-Peptone exempte d'indole 10,0 g
-Chlorure de sodium 5,0 g
(pH=7,2)
Prparation :
15 grammes par litre deau distille. Strilisation classique.
Lecture :
L'addition de ractif de Kovacs montre la production d'indole par un anneau rouge.

Eau peptone tamponne.


Usage :
Utilise pour le pr-enrichissement pralable aux phases denrichissement slectif et
disolement des salmonelles en permettant notamment de revivifier les microorganismes
ayant subi des traitements subltaux.
Composition (g) pouvant tre modifie pour 1 litre de milieu :
Peptone : 10,0.
Sodium chlorure : 5,0.
Phosphate disodique hydrat (9100181) : 9,0.
Phosphate monopotassique : 1,5.
Phosphate disodique anhydre (9101311) : 3,56.
pH du milieu prt l'emploi 25 C : 7,2 0,2.
0Glose nutritive.
Usage :
Milieu d'isolement courant surtout utilis pour la recherche de FMAR (Flore Msophyle
Arobie Revivifiable)
.
Composition :
-Extrait de viande 1,0g
-Extrait de levure 2,0g
-Chlorure de sodium 5,0g
-Agar 15.0g
(pH =7.4)
Prparation :
28 g par litre deau distille. Strilisation l'autoclave.
Ensemencement :
Pour ensemencer il s'agit de faire un dgrad sur toute la glose afin d'isoler plusieurs
colonies. Pour cela, avec une anse de platine, prlever un petite goutte de suspension
bactrienne puis faire des stries serres sur la moiti de la boite de Ptri. Ensuite tourner d'un
quart de tour la boite, striliser la flamme l'anse et recommencer les stries. Ensuite tourner
encore la boite d'un quart de tour et refaire encore les stries (aprs strilisation de lanse). De
cette manire toute la boite doit avoir t ensemence... attention ne pas brler la glose
lorsque l'anse est encore trs chaude.
Examen macroscopique
Taille des colonies
Contour
Relief
Surface
Consistance
Transparence
Pigmentation
Type des colonies
Exigence

Glose Salmonella-Shigella (Glose SS).


Usage:
Isolement des Salmonella et des Shigella mais aussi des Pseudomonas ou des Yersinia
enterocolitica.
Composition :
-Peptone 5.0g
-Extrait de viande 5.0g
-Lactose 10.0g
-Citrate de sodium 10.0g
-Citrate de fer ammoniacal 1.0g
-Sels biliaires 8.5g
-Vert brillant 3.3g
-Rouge neutre 25ml
-Thiosulfate de sodium 8.5g
-Agar 12.0g
(pH = 7,3)
Prparation :
63 g de poudre dissous par bullition. Se reporter la notice en raison de variations de la
composition (Formule moins inhibitrice des Shigella 5,5 g de sels biliaires par exemple).
Ne pas autoclaver.
Lecture :
Lac - : colonies incolores
Lac + : colonies rouges
Centre noir : H2S +
Pas de centre noir : H2S Ne cultivent normalement sur ce milieu que les Gram - cultivant facilement.
Toutefois on peut rencontrer des Enterococcus tout particulirement pour certaines
compositions.
Les coliformes, comme les bacilles oxydase + ne sont pas inhibs contrairement aux
affirmations parfois rencontres.
Glose viande-foie.
Usage :
Il est principalement utilis en tube profond pour la dtermination du type respiratoire des
micro-organismes, mais aussi pour la culture de germes anarobies stricts tels que les
Clostridium.
Composition :
-Base viande foie 30.0g
-Glucose 2.0g
-agar 6.0g
(pH = 7.4)

Prparation :
38 g par litre deau distille. Autoclavage classique. Conditionnement en tubes longs et
fins.
Lecture

Rsultats aprs incubation 24H a 37C


L'absence de culture rvle des bactries exigeantes comme les Haemophilus NAD
dpendants. La hauteur de la culture permet de dterminer le type respiratoire.
King A.
Usage :
Le King A est un milieu de culture utilis pour mettre en vidence de la pyocyanine de
Pseudomonas aeruginosa.
Composition :
-Peptone dite "A" :.............................20,0 g
-Glycrol :.....................................10,0 g
-Sulfate de potassium :.....................10,0 g
-Chlorure de magnsium :.....................1,4g
-Agar purifi :.................................12,0g
(pH = 7,2)
Prparation :
45 g de poudre par litre deau distille. Strilisation classique. Ajouter 10 cm de glycrol
aprs autoclavage.
Lecture :
La pyocyanine bleuit le milieu. Elle est soluble dans le trichloromthane (chloroforme). Une
coloration rouge traduit la production de pyorubine.

King B.
Usage :
Le King B est un milieu de culture qui permet la culture d'tre unicellulaire.
Mise en vidence de la pyoverdine des Pseudomonas du groupe fluorescent.
Composition :
-Peptone dite "B" 20,0g
-Glycrol 10,0g
-Hydrognophosphate de potassium 1,5g
-Sulfate de magnsium heptahydrat 1.5g
-Agar purifi 12,0g
(pH = 7,2)
Prparation :
37 g de poudre par litre deau distille. Strilisation classique. Ajouter 10 cm3 de glycrol
aprs autoclavage.
Lecture :
La pyoverdine jaunit le milieu. Cette molcule prsente une fluorescence 340 nm. Elle
est insoluble dans le trichloromthane (chloroforme).
Litsky (Bouillon glucos lazide de sodium de lthyl violet- bouillon EVA)
Usage :
Milieu de confirmation d'Enterococcus.
Composition :
-Peptone 20,0g
-Glucose5.0g
-Azide de sodium 0,2g
-Ethyl-violet 0.5g
-NaCl 5,0g
-Hydrognophosphate de potassium 2,7g
-Dihydrognophosphate de potassium 2.7g
(pH = 6,8)
Prparation :
35.7g par litre deau distille. Autoclave classique.
Lecture :
Il sert au dnombrement des Streptocoques fcaux. C'est un test confirmatif qui se fait suite
au test prsomptif au milieu de Rothe La lecture des tube se fait grce au trouble form et
l'ventuelle formation d'une pastille violette.
Rothe (Bouillon Glucos lazide de sodium).
Usage :
Milieu denrichissement en Enterococcus.

Composition :
-Peptone 20.0g
-Glucose5.0g
-Azide de sodium 5.0g
-NaCl. 5.0g
-Hydrognophosphate de potassium 2.7g
-Dihydrognophosphate de potassium 2.7g
(pH = 6.8)
Prparation :
36,2 g par litre deau distille (simple concentration) ou 72,4 (double concentration).
Autoclavage classique.
Lecture :
Ce milieu permet l'enrichissement en Entrocoques d'un inoculum de produit
alimentaire.Un trouble signe la prsence ventuelle de ces bactries qu'il faudra ensuite
confirmer par le test de Litsky, l'isolement et lisolement des colonies.

Bouillon au Slnite (Milieu denrichissement pour Salmonelle-Shigella).


Usage
Slnite cystine, glose pour l'enrichissement de salmonella qui a t pr enrichie avec de
l'eau peptone tampone (EPT).
Composition
Peptone pancratique de casine 5.0g
Lactose 4.0g
Monohydrogno-phosphate de sodium 10.0g
Monohydrogno- slnitede sodium 4.0g
Eau dstille 1000ml

Milieu de Chapman au mannitol :


La glose Chapman est le milieu slectif des bactries halophiles (vivant normalement
dans un milieu trs sal) et plus particulirement fermentant le mannitol. C'est un milieu
semi-synthtique.
Usage :
Il est utilis pour l'isolement des Staphylococcus.
Dans les pays anglo-saxons, une variante de ce milieu est appele MSA (mannitol-salt-agar =
glose au mannitol et au sel).
Composition :
Composition pour la prparation d'un litre de milieu.
Peptone :...................................10,0 g
Extrait de viande de buf :..................1,0 g

Chlorure de sodium :........................75,0 g


Mannitol :..................................10,0 g
Rouge de phnol :............................0,025 g
Agar-Agar :.................................15,0 g
Eau distille :..................................qsp 1 Litre
(pH = 7,4)
Prparation :
111 g par litre de milieu Autoclavage classique.
Caractristiques :
Une base nutritive ordinaire.
Une teneur leve en NaCl qui permet la slection des bactries halophiles (comme les
Staphylococcus) et inhibe la grande majorit des autres bactries.
Un critre de diffrenciation : la fermentation du mannitol rvl grce au virage de
l'indicateur color de pH : le rouge de phnol qui permet une orientation vers certaines
espces (comme l'espce Staphylococcus aureus).
Lecture :
On cultive sur ce milieu les Micrococcaceae et quelques autres (Bacillus, Enterococcus)
et mme trs rarement des bacilles gram-ngatif.
Pas de virage ( le milieu reste rouge) : les colonies mannitol - car elle ne fermentent pas le
mannitol, lgre alcalinisation du milieu par l'utilisation de peptones dans leur mtabolisme
nergtique.
virage au jaune du milieu : les colonies sont mannitol + car elles fermentent le
mannitol dans leur mtabolisme nergtique avec acidification du milieu.
remarquons que Chapman est une gelose selective des staphylococus.
Dans tout les cas, les microorganismes cultivant sur ce milieu ont mis en vidence leur
caractre halophile.
Sulfito-reducteur :
Mannitol-Mobilit-Nitrate :
Usage
Utilisation du mannitol, rduction des nitrates, mobilit en glose semi-molle.
Composition
-hydrolysat trypsique de casine:..................10,0 g
-mannitol:..........................................7,5 g
-rouge de phnol:...................................0,4 mg
-nitrate de potassium:..............................1,0 g
-agar:..............................................3,5 g
(pH =7.6)

Prparation
22 g par litre. Strilisation classique.

Lecture

Rsultats possibles :
A : pas de dgradation du manitol.
B : Dgradation du manitol.
C : Dgradation du manitolavec production de gaz.
D : Bactrie non mobile, colonies au lieu de lensemencement.
E : Bactrie mobile, rpartition des colonies dans le milieu.
*Milieu jaune : mannitol+
*Milieu rouge : mannitolPour une bactrie arobie stricte, la culture sur toute la hauteur accompagne
ventuellement de bulles montre une respiration nitrate. La rduction des nitrates pourra tre
visualise par addition des ractifs habituels. Leur acidit entrane un virage progressif au
jaune d'un milieu rouge : une coloration rouge aprs addition des nitrites 1 et 2 montre donc
bien la prsence de nitrites.

Triple sugar iron (TSI).


Usage :
Milieu utilis pour lidentification des entrobactries. Il permet de voir si la bactrie est
capable de rduire le sulfate. (Idem que Hajna Kligler).
Composition :
Peptones de casine15 g/l
Peptones de viande5 g/l
Extraits de viande3 g/l
Mode daction :
La dgradation de sucre est accompagne dune production dacide. Celle-ci est dtecte
par lindicateur de pH, le rouge de phnol, qui en milieu basique est rouge et en milieu acide
est jaune orange. Le thiosulfate est rduit en sulfures dhydrognes par certaines bactries. Le
H2S ragit avec un sel de Fer pour donner un prcipit noir.
Lecture :
Le milieu de dpart est translucide et rouge.

-rouge : pas de fermentation, la bactrie est arobie - Jaune : une fermentation sest produite ;
de lacide a t produit, la bactrie est anarobie facultative.
- Gaz form : du une fermentation - Couleur noire : H2S a t produit.
Kligler-Hajna.
Usage :
Le milieu de Kligler-Hajna est un milieu permettant la recherche simultane de :
L'utilisation du lactose ;
La fermentation du glucose ;
La production d'H2S ;
La production de gaz ;
La lysine dcarboxylase.
La B-galactosidase pour les bactries lactose - (test ONPG).
Composition :
- Peptone ......................... 15 g
- Extrait de viande ............... 3 g
- Extrait de levure ............... 3 g
- Peptone pepsique de viande ...... 5 g
- Glucose ......................... 1 g
- Lactose ......................... 10 g
- Rouge de phnol ................. 25 mg
- Chlorure de sodium .............. 5 g
- Sulfate ferreux..............
0,2 g
- Thiosulfate de sodium ........... 0,3 g
- Agar-agar ....................... 11 g
(pH = 7,5)
Les peptones sont riches en lysine. Le milieu est conditionn en tubes avec une pente et un
culot.
Ensemencement :

La pente doit tre abondamment ensemence (stries serres).

Le culot est ensemenc simple piqre.


Incubation : 37 C pendant 18 24 h (ne pas dpasser ce dlai) aprs avoir dvisser le
bouchon partiellement ce qui permet les changes gazeux.
Lecture, interprtation :
-Interprtation de la pente
Pente rouge : bactrie lactose - (figure 1A);
Pente jaune : bactrie lactose + (figure 1B).
-Interprtation du culot
Culot rouge : bactrie glucose - (figure 1C) ;
Culot jaune : bactrie glucose + (figure 1D).
-Production de gazLa production de gaz lors de l'utilisation des glucides est mise en
vidence par le dcollement de la glose et/ou des bulles dans la glose.
Elle est donc Gaz -Production de sulfure d'hydrogne

Bactries H2S + : prcipit noir ;


Bactries H2S - : pas de prcipit noir
-Prsence d'une lysine dcarboxylase
Bactries LDC + : coloration violette (prsence de cadavrine) ;
Bactries LDC - : la solution reste incolore.

o Ractifs.
Kovacs :
-Alcool amylique ou isomylique 150ml
-P.dimthylaminobenzaldhyde 10.0g
-Acide chlorhydrique concentr 50ml
Conserver +4C.
Solution de sulfite de sodium :
-Sulfite de sodium pur, cristallis (50%dH2O) 1g
-Eau distille 9g
Prparation :
Strilise par chauffage 10 minutes au bain marie deau bouillante.
Repartir en petits flacons a usage unique, entirement remplis et ferms hermtiquement.
Conserver deux semaines + 4C.
Solution dAlun de fer :
- Alun de fer 1 g
- Eau distill sterile 19 g
Ne pas autoclaver.

o Coloration gram.
1-Coloration par le violet de gentiane ou cristal violet. Laisser agir de 30 secondes 1 minute.
Rincer l'eau dminralise
2-Mordanage au lugol (solution d'iode iodo-iodure): taler le lugol et laisser agir 20
secondes ; Rincer l'eau dminralise. On peut raliser une deuxime fois l'opration
identiquement pour plus de scurit
3-Dcoloration (rapide) l'alcool (+actone): verser goutte goutte l'alcool ou un mlange
alcool-actone sur la lame incline obliquement, et surveiller la dcoloration
5 10 secondes). Le filet doit tre clair la fin de la dcoloration. Rincer sous un filet d'eau
dminralise
4-Recoloration la safranine ou la fuchsine. Laisser agir de 30 secondes 1 minute. Laver
doucement l'eau dminralise. Scher la lame sur une platine chauffante 40C, 10 15
minutes
5-Observer avec une goutte d'huile immersion objectif 100 (grossissement x1000)
Les tapes 1 et 2 colorent en violet le contenu de la bactrie. Le violet de gentiane se fixe sur
les composants cytoplasmiques de toutes les bactries. Le lugol permet de fixer cette
coloration interne
L'tape 3 (alcool) sert dcolorer le cytoplasme des bactries qui seront dites Gram
ngatives . En effet, celles ci ont une paroi pauvre en peptidoglycane - donc plus fine - qui
va laisser passer l'alcool (molcule lipophile) ou le mlange alcool-actone, et qui dcolorera
le cytoplasme en liminant le violet de gentiane. Au contraire, pour les bactries dites Gram
positif la paroi constitue une barrire impermable l'alcool car elle est compose d'une
"couche" de peptidoglycane plus importante donc de ce fait ; plus paisse. Elles resteront
alors violettes
L'tape 4 est une contre-coloration ayant pour but de redonner aux bactries Gram ngatives
prcdemment dcolores une teinte rose permettant de les visualiser au microscope. Les
bactries Gram positif restes violettes seront videmment insensibles cette contrecoloration plus ple que le violet imprgnant leur cytoplasme
Ces diffrences de coloration et les diffrences de formes (bacille ou cocci) sont l'origine de
la classification des bactries

Annexe 4.
o Analyses statistiques :

Factor
SITE

Modle linaire gnralis: Des germes de leau en fonction des


sites.
Type
fixed

Levels
5

Values
1; 2; 3; 4; 5

1. Analyse de la variance pour E.coli, en utilisant la SC ajuste pour les tests :


Source
SITE
TMP
SALI
Ph
DO
MES
Error
Total

DF
4
1
1
1
1
1
50
59

Seq SS
9,6837
1,9753
0,1858
5,7943
0,0365
0,2083
30,5687
48,4527

S = 0,781904

Term
Constant
TMP
SALI
Ph
DO
MES

Adj SS
4,8699
1,4255
0,0033
5,8228
0,0042
0,2083
30,5687

R-Sq = 36,91%

Adj MS
1,2175
1,4255
0,0033
5,8228
0,0042
0,2083
0,6114

Coef
15,305
0,04855
-0,0079
-1,8738
0,00512
-1,995

SE Coef
5,543
0,03179
0,1077
0,6072
0,06211
3,418

F
1,99
2,33
0,01
9,52
0,01
0,34

P
0,110 ns
0,133
0,942
0,003**
0,935
0,562

R-Sq(adj) = 25,55%

T
2,76
1,53
-0,07
-3,09
0,08
-0,58

P
0,008
0,133
0,942
0,003
0,935
0,562

2. Analyse de la variance pour les Coliformes totaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :
Source
SITE
TMP
SALI
Ph
DO
MES
Error
Total

DF
4
1
1
1
1
1
50
59

Seq SS
24,189
4,185
0,208
9,237
0,082
0,075
51,289
89,266

S = 1,01281

Term
Constant
TMP
SALI
Ph
DO
MES

Adj SS
11,761
2,492
0,000
7,631
0,042
0,075
51,289

R-Sq = 42,54%

Coef
16,747
0,06419
0,0018
-2,1451
-0,01619
1,196

SE Coef
7,180
0,04118
0,1395
0,7865
0,08045
4,428

Adj MS
2,940
2,492
0,000
7,631
0,042
0,075
1,026

F
2,87
2,43
0,00
7,44
0,04
0,07

P
0,032*
0,125
0,990
0,009**
0,841
0,788

R-Sq(adj) = 32,20%

T
2,33
1,56
0,01
-2,73
-0,20
0,27

P
0,024
0,125
0,990
0,009
0,841
0,788

3. Analyse de la variance pour les Streptocoques totaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :
Source
SITE
TMP
SALI
Ph
DO
MES
Error
Total

DF
4
1
1
1
1
1
50
59

Seq SS
6,3452
8,1890
5,1207
2,4175
0,0768
0,0006
33,4510
55,6007

S = 0,817936

Term
Constant
TMP
SALI
Ph
DO
MES

Adj SS
3,8834
1,5160
2,9301
2,4127
0,0682
0,0006
33,4510

R-Sq = 39,84%

Adj MS
0,9708
1,5160
2,9301
2,4127
0,0682
0,0006
0,6690

Coef
0,727
0,05007
0,2358
-1,2062
0,02074
-0,105

F
1,45
2,27
4,38
3,61
0,10
0,00

P
0,231ns
0,139
0,041*
0,063ns
0,751
0,977

SE Coef
5,798
0,03326
0,1127
0,6351
0,06497
3,576

R-Sq(adj) = 29,01%

T
0,13
1,51
2,09
-1,90
0,32
-0,03

P
0,901
0,139
0,041
0,063
0,751
0,977

4. Analyse de la variance pour les Streptocoques fcaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :
Source
SITE
TMP
SALI
Ph
DO
MES
Error
Total

DF
4
1
1
1
1
1
50
59

Seq SS
6,9627
1,7479
1,4836
3,9496
0,0019
0,0925
18,2549
32,4931

S = 0,604234

Term
Constant
TMP
SALI
Ph
DO
MES

Adj SS
4,0463
0,6013
0,4149
3,3230
0,0014
0,0925
18,2549

R-Sq = 43,82%

Adj MS
1,0116
0,6013
0,4149
3,3230
0,0014
0,0925
0,3651

Coef
7,949
0,03153
0,08874
-1,4155
0,00299
1,329

SE Coef
4,283
0,02457
0,08324
0,4692
0,04800
2,642

F
2,77
1,65
1,14
9,10
0,00
0,25

P
0,037*
0,205
0,292
0,004**
0,951
0,617

R-Sq(adj) = 33,71%

T
1,86
1,28
1,07
-3,02
0,06
0,50

P
0,069
0,205
0,292
0,004
0,951
0,617

Modle linaire gnralis : Des germes de la moule en fonction des


sites.
Facteur
SITE

Type Niveaux
fixe
5

Valeurs
1 2 3 4 5

1. Analyse de la variance pour E.coli, en utilisant la SC ajuste pour les tests :


Source
TMP
SALI
Ph
DO
MES
SITE
Erreur
Total

DL
1
1
1
1
1
4
50
59

Terme
Constante
TMP
SALI
Ph
DO
MES

SC sq
1,558
17,934
18,054
6,476
0,258
67,469
87,870
199,619
Coef
21,319
0,12523
-0,3141
-1,483
0,2193
5,718

SC ajust
9,485
5,197
3,647
7,622
1,711
67,469
87,870

CM ajust
9,485
5,197
3,647
7,622
1,711
16,867
1,757

Er-T coef
9,398
0,05391
0,1826
1,029
0,1053
5,795

T
2,27
2,32
-1,72
-1,44
2,08
0,99

F
5,40
2,96
2,08
4,34
0,97
9,60

P
0,024*
0,092
0,156
0,042*
0,329
0,000***

P
0,028
0,024
0,092
0,156
0,042
0,329

Observations aberrantes pour ECOLI2


Obs
15
42
43

ECOLI2
0,00000
4,47714
0,00000

Ajust
2,74513
1,94289
2,73179

Er-T ajust Val rsid


0,48514 -2,74513
0,49212
2,53425
0,58226 -2,73179

Val rsid norm


-2,23R
2,06R
-2,29R

R indique une observation avec une valeur rsiduelle normalise importante.

2. Analyse de la variance pour les Coliformes totaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :
Source
TMP
SALI
Ph
DO
MES
SITE
Erreur
Total
Terme
Constante
TMP
SALI
Ph
DO
MES

DL
1
1
1
1
1
4
50
59

SC sq
3,4408
2,8761
0,0015
0,7103
0,5346
0,5092
11,1582
19,2308

Coef
8,093
0,06778
-0,08069
-0,1445
0,04932
-2,576

SC ajust
2,7788
0,3431
0,0346
0,3855
0,3472
0,5092
11,1582

CM ajust
2,7788
0,3431
0,0346
0,3855
0,3472
0,1273
0,2232

Er-T coef
3,349
0,01921
0,06508
0,3668
0,03753
2,065

T
2,42
3,53
-1,24
-0,39
1,31
-1,25

F
12,45
1,54
0,16
1,73
1,56
0,57

P
0,001***
0,221
0,695
0,195
0,218
0,685

P
0,019
0,001
0,221
0,695
0,195
0,218

Observations aberrantes pour COLITOT2


Obs
14
50

COLITOT2
3,39811
2,77887

Ajust
4,56600
4,45631

Er-T ajust Val rsid


0,18267 -1,16789
0,16539 -1,67744

Val rsid norm


-2,68R
-3,79R

R indique une observation avec une valeur rsiduelle normalise importante.

3. Analyse de la variance pour les Streptocoques totaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :
Source
TMP
SALI
Ph
DO
MES
SITE
Erreur
Total

DL
1
1
1
1
1
4
50
59

Terme
Constante
TMP
SALI
Ph
DO
MES

SC sq
2,9445
0,3361
0,4176
1,0013
0,0432
0,7364
8,9634
14,4425

Coef
5,160
0,01719
0,05764
-0,2760
-0,07974
-0,802

SC ajust
0,1787
0,1751
0,1263
1,0078
0,0337
0,7364
8,9634

CM ajust
0,1787
0,1751
0,1263
1,0078
0,0337
0,1841
0,1793

Er-T coef
3,002
0,01722
0,05833
0,3288
0,03363
1,851

T
1,72
1,00
0,99
-0,84
-2,37
-0,43

F
1,00
0,98
0,70
5,62
0,19
1,03

P
0,323
0,328
0,405
0,022*
0,666
0,403

P
0,092
0,323
0,328
0,405
0,022
0,666

Observations aberrantes pour STREPTCO


Obs
2
13
37
39
41

STREPTCO
3,65331
3,39811
3,39811
5,14613
3,65331

Ajust
4,54747
4,47246
4,36857
4,27629
4,82323

Er-T ajust Val rsid


0,15024 -0,89416
0,16167 -1,07435
0,16270 -0,97046
0,16403
0,86984
0,16707 -1,16992

Val rsid norm


-2,26R
-2,75R
-2,48R
2,23R
-3,01R

R indique une observation avec une valeur rsiduelle normalise importante.

4. Analyse de la variance pour les Streptocoques fcaux, en utilisant la SC ajuste


pour les tests :

Source
TMP
SALI
Ph
DO
MES
SITE
Error
Total

DF
1
1
1
1
1
4
50
59

Seq SS
5,2939
0,2852
0,6717
2,1734
0,0097
0,9873
13,5257
22,9470

S = 0,520110

Term
Constant
TMP
SALI
Ph
DO
MES

Adj SS
0,7941
0,0010
0,0656
2,0414
0,0618
0,9873
13,5257

Adj MS
0,7941
0,0010
0,0656
2,0414
0,0618
0,2468
0,2705

R-Sq = 41,06%

Coef
6,250
0,03624
-0,00427
-0,1990
-0,11350
1,087

SE Coef
3,687
0,02115
0,07166
0,4039
0,04131
2,274

F
2,94
0,00
0,24
7,55
0,23
0,91

P
0,093 ns
0,953
0,624
0,008**
0,635
0,464

R-Sq(adj) = 30,45%

T
1,70
1,71
-0,06
-0,49
-2,75
0,48

Unusual Observations for STREPF

P
0,096
0,093
0,953
0,624
0,008**
0,635

Obs
39
41
50

STREPF
5,14613
3,17638
2,77887

Fit
4,01465
4,72282
4,06710

SE Fit
0,20150
0,20524
0,18210

Residual
1,13148
-1,54644
-1,28823

St Resid
2,36 R
-3,24 R
-2,64 R

R denotes an observation with a large standardized residual.