Méthodes d’études et

d’analyses des biomolécules

Fait par : Basraoui Nada & Barima Salma

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 ➢ Séparation et dosage de l’acide aspartique et l’arginine par
chromatographie sur résine échangeuse de cation

Les échangeurs d'ions sont des macromolécules insolubles portant des

groupements ionisables, qui ont la propriété d'échanger de façon réversible
certains de leurs ions, au contact d'autres ions provenant d'une solution.

Résine cationique : qui échange réversiblement des cations. Une résine

cationique est chargée négativement.

Résine-G- / X+ + cation+ <=> Résine-G- / cation+ + X+

Figure 1 : Résine échangeuse de cations (résine cationique).

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 ➢ On commence par déposer à l’aide d’une pipette jaugée 1ml du mélange
d’acide aminés : Acide aspartique et arginine puis on ajoute 25mL de
tampon acétate de sodium (ph= 5.2 ;0.2M) qu’on verse petit à petit ce
qui va nous mettre de recueillir l’eluat d’acide aspartique

➢ On enlève l’erlenmeyer de 100 ml contenant l’acide aspartique et on le

remplace par un autre qui va contenir par la suite de l’arginine et ceci
après l’ajout de 25 ml de NaOH.

➢ On enchaine ensuite par la préparation de la gamme étalon qui va nous

permettre de doser l’acide aspartique contenue dans l’éluat en utilisant
la courbe.

➢ On précise que d’avant de commencer cette manipulation on a réglé le

débit à 1 goutte toutes les 10 secondes. Ce dernier doit être maintenu
constant pendant la séparation chromatographique des deux acides
aminés
➢ Il ne faut jamais laisse la résine à sec.
➢ Avant de doser la densité optique de la gamme étalon on a ajouté dans
chaque tube 1ml du réactif de la ninhydrine et 5ml de tampon acétate
dans chaque tube puis on a agité, chauffé et laissé à l’obscurité

1-On fait la lecture spectrophotométrique à 570 nm car le complexe formé

donne une coloration pourpre qui absorbe une longueur d’onde de 570 nm

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2-Tableau des quantités d’acide aspartique et leurs densités optique
Tube T 1 2 3 4 5
Qt d’ASP en mg 0 2.5 5 7.5 10 X
V de la solution 0 0.25 0.5 0.75 1 1
standard d’ASP (ml)

Tampon acétate pour 1 0.75 0.5 0.25 0

un Vf=1ml
DO 0 0.240 0.429 0.590 0.854 0.310

3-La courbe d’étalonnage :

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 2 4 6 8 10 12

4- La concentration d’acide ASP 3,5 mg/ml .

5-La quantité d’Acide ASP dans tout l’éluat de la colonne est :
2 g -------→20 ml
X g ------→1 ml
Donc : X= 100 mg

6- R= Qr/ Qd=100 mg/3,5mg = 28,76

La séparation est bien faite.
● 2- Caractérisation de l’arginine :
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 T1 T2 T3 T4
0 ++ 0 ++

0 : Jaune ++ : rouge orange

Les tubes 1 et 2 présentent une coloration jaune car ils ne contiennent pas
l’arginine .Mais les T2 et T3 présentent une coloration rouge orange car la
réaction spécifique ou le α-naphtol avec l’hypobromite de sodium dans un
milieu alcalin et ils réagissent avec l’arginine.