UNIVERSITE DE REIMS CHAMPAGNE ARDENNE

ECOLE DOCTORALE SCIENCES TECHNOLOGIE SANTE

THESE

Pour obtention du grade de

DOCTEUR DE L’UNIVERSITE DE REIMS CHAMPAGNE-ARDENNE

Discipline : Pharmacie
Spécialité : Pharmacognosie

Présentée et soutenue publiquement

Par

NGUYEN Phuc-Dam

Le 27/11/2015

Titre :

ETUDE PHYTOCHIMIQUE DE PLANTES DE LA MEDECINE

TRADITIONNELLE DU VIETNAM ET DU LAOS; EVALUATION
BIOLOGIQUE DANS LE DOMAINE DE LA SANTE

JURY

Dr. AL-MOURABIT Ali Rapporteur

Directeur de Recherche au CNRS (ICSN)
Pr. LAURAIN-MATTAR Dominique Rapporteur
Professeur à l’Université de Lorraine
Pr. LAVAUD Catherine Directeur de thèse
Professeur à l’Université de Reims Champagne - Ardenne
Dr. MASSIOT Georges Président
Directeur de Recherche émérite au CNRS (ICMR)
 REMERCIEMENTS
Ce travail de recherche a été réalisé au sein du groupe « Isolement et Structure » à l’Institut
de Chimie Moléculaire de Reims (ICMR, UMR, CNRS 7312), UFR de Pharmacie de l’Université
de Reims Champagne-Ardenne, en bénéficiant d’une bourse accordée par le Ministère de
l’éducation et formation du Vietnam.
Je tiens d'abord à exprimer toute ma gratitude à ma directrice de thèse, le Professeur
Catherine LAVAUD qui m’a accueilli dans son équipe et m’a guidé pour mener à bien ce travail
et me permettre de présenter ma thèse aujourd’hui. Je la remercie pour ses conseils et son
soutien, en particulier pour sa patience et sa bienveillance qui m’ont été d’une grande aide
pour l’aboutissement de ce travail.
Je remercie respectueusement le Professeur Dominique LAURAIN-MATTAR et le Directeur Ali
AL-MOURABIT, pour avoir aimablement accepté de se consacrer à la lecture de mon manuscrit
et d’en être les rapporteurs. Je remercie également le Docteur Georges MASSIOT d’avoir
accepté de juger ce travail et pour les discussions sur la stéréochimie.
Je tiens également à remercier le Docteur Amin ABEDINI pour la réalisation des tests
antimicrobiens, pour ses précieux conseils et pour sa gentillesse et ses encouragements.
Mes remerciements s'adressent également au Pr. Sophie GANGLOFF, professeur de
microbiologie à l'UFR de pharmacie et directrice de l'EA 4691 "BIOS" pour nous avoir ouvert
les portes de son laboratoire pour la réalisation des tests antimicrobiens, et pour les conseils
et discussions dans l'évaluation antimicrobienne de nos composés.
Je tiens à exprimer mes sincères remerciements à Agathe, ChaCha, Nico et Benjamin pour leur
aide en particulier leur patience et leur enthousiasme à me guider pour utiliser tous les
appareillages et le matériel du laboratoire. Sans leur aide, beaucoup de mon travail
expérimental n’aurait pu être réalisé avec succès.
Mes remerciements vont également à tous les doctorants, chercheurs et stagiaires du
laboratoire que j’ai croisé au cours de ces quatres années (Lila, Dima, Diane, Maya, Abbes,
Armel, Sébastien, Audrey, Ali, Naïma, Mahmoud, Nassima, et bien d’autres …) pour leur bonne
humeur et l’ambiance amicale qu’ils ont su entretenir au laboratoire.
Je remercie les enseignants-chercheurs de pharmacognosie et les chercheurs du groupe
« Isolement-Structure » pour leur disponibilité à me conseiller.
Merci à tous les membres de l’équipe pour les gâteaux, le champagne, les cadeaux, les repas
partagés et les moments de bonheur passés ensemble, ils resteront gravés dans mon cœur.
Je remercie bien tous mes amis vietnamiens (Tram, Thien, Thong, Tuan, Tuong-Minh, Phuc,
Khoa, Cuong, Giang, Son, An, ...) qui ont partagé ma vie au quotidien pendant mon séjour en
France et pour leur aide, leur gentillesse et leurs encouragements.
Un grand merci à mes parents, mon frère, ma sœur, mes collègues et mes amis au Vietnam
pour leur soutien, leur confiance et leurs encouragements. C’est avec une immense joie que
j’aurai hâte de les retrouver prochainement.
Finalement, je remercie tout le personnel de l’ICMR UMR CNRS 7312 et toutes les personnes
qui ont contribué d’une façon ou d’une autre à l’aboutissement de ce travail.
 SOMMAIRE

Liste des schémas

Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
INTRODUCTION ......................................................................................................................... 1
PREMIER PARTIE : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE & TRAVAUX ANTERIEURS ........................... 7
I. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR CLEOME CHELIDONII ....................................................... 8
I.1. - BOTANIQUE DES CLEOMACEAE ..................................................................................... 8
I.1.1. - SYSTEMATIQUE : ..................................................................................................... 8
I.1.2. - CARACTERES GENERAUX :....................................................................................... 8
I.1.3. - GENRE CLEOME : ..................................................................................................... 9
I.2. - BIBLIOGRAPHIE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE CLEOME ................................................ 9
I.2.1. FLAVONOIDES ............................................................................................................ 9
I.2.2. COUMARINES ........................................................................................................... 11
I.2.3. TERPENOIDES .......................................................................................................... 11
I.2.4. - GLUCOSINOLATES .................................................................................................. 14
I.2.5. – COMPOSES AZOTES : ............................................................................................. 14
I.2.6. - METABOLITES DIVERS ............................................................................................ 15
I.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DU GENRE CLEOME ......................................................... 15
I.3.1 - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE : ............................................................. 15
I.3.2 - ACTIVITES BIOLOGIQUES ........................................................................................ 16
I.4. - PRESENTATION DE CLEOME CHELIDONII .................................................................... 17
I.4.1- DESCRIPTION BOTANIQUE ....................................................................................... 17
I.4.2- ETUDES CHIMIQUES ANTERIEURES ......................................................................... 18
I.4.3 - PROPRIETES BIOLOGIQUES .................................................................................... 20
II. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR DOLICHANDRONE SPATHACEA .................................... 22
II.1 BOTANIQUE DES BIGNONIACEAE ET DE DOLICHANDRONE .......................................... 22
II.1.1 BIGNONIACEAE : ...................................................................................................... 22
II.2.2. Dolichandrone spathacea (L. f.) K. Schum. ............................................................. 23
II.2. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE DOLICHANDRONE ............................................ 24
II.2.1. – ALCANES, ALCANOLS, ACIDES LIPIDIQUES : ........................................................ 24
 II.2.2. – SUCRES ET DERIVES : ........................................................................................... 24
II.2.3. – FLAVONOÏDES : .................................................................................................... 24
II.3.4. – QUINONES: ........................................................................................................... 25
II.2.5. – PHENYLPROPANOÏDES : ...................................................................................... 25
II.2.6. – LIGNANES : .......................................................................................................... 26
II.2.7. – TERPENOIDES ET STEROÏDES : ............................................................................. 27
II.2.8. – COMPOSES DIVERS :............................................................................................ 28
II.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DES DOLICHANDRONE : .................................................. 28
II.3.1. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE: ............................................................ 28
II.3.2. - ACTIVITES BIOLOGIQUES ...................................................................................... 30
III. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR FLACOURTIA RUKAM................................................... 31
III.1 - BOTANIQUE DES SALICACEAE..................................................................................... 31
III.2. - BIBLIOGRAPHIE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE FLACOURTIA ..................................... 32
III.2.1. - FLAVONOÏDES ..................................................................................................... 32
III.2.2. - COUMARINES : .................................................................................................... 33
III.2.3. - TERPENOIDES : .................................................................................................... 33
III.2.4. - LIGNANES : .......................................................................................................... 35
III.2.5. – DERIVES AROMATIQUES DE GLUCOSE : ............................................................. 35
III.2.6. - DERIVES D’ACIDE QUINIQUE ............................................................................... 36
III.2.7. – ACIDES, PHENOLS ET ACIDES-PHENOLS : ........................................................... 36
III.2.8. - METABOLITES DIVERS : ....................................................................................... 36
III.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DU GENRE FLACOURTIA ................................................ 37
III.3.1. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE : ......................................................... 37
III.3.2. - ACTIVITES BIOLOGIQUES : .................................................................................. 37
III.4. - PRESENTATION DE Flacourtia Rukam Zoll. & Moritzi................................................ 42
III.4.1. - DESCRIPTION BOTANIQUE .................................................................................. 42
III.4.2. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE : ......................................................... 43
III.4.3. - PHYTOCHIMIE ET ACTIVITE ANTI-OXYDANTE : ................................................... 43
DEUXIEME PARTIE : RESULTATS ET DISCUSSION …………………………………………………………..…….44
IV. CLEOME CHELIDONII ........................................................................................................... 45
IV.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES PARTIES AERIENNES DE CLEOME CHELIDONII ........... 45
IV.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS............................................................................... 45
IV.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES FLAVONOÏDES .......................................... 48
IV.1.3- DETERMINATION STRUCTURALE DES MEGASTIGMANES ..................................... 70
IV.1.4. - DETERMINATION STRUCTURALE DES ALCALOÏDES CD-1 à CD-4......................... 80
 IV.1.5. - DETERMINATION STRUCTURALE DES COMPOSES CD-5 ET CD-6 : ...................... 83
IV.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTI-RADICALAIRE DES FLAVONOIDES DE C. CHELIDONII
.............................................................................................................................................. 84
IV.2.1. - RAPPELS BIBLIOGRAPHIQUES .............................................................................. 84
IV.2.2. - RESULTATS SUR LES COMPOSES CF-1 à CF-14 .................................................... 86
V - DOLICHANDRONE SPATHACEA ........................................................................................... 89
V.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE DOLICHANDRONE SPATHACEA ............... 89
V.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS ET PURIFICATION DES COMPOSES : ...................... 89
V.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES IRIDOÏDES: ................................................ 92
V.1.3. DETERMINATION STRUCTURALE DES SAPONOSIDES ........................................... 110
V.1.4. - DETERMINATION STRUCTURALE DES METABOLITES CONNUS DSC-1 à DSC-7 et
DSC-11 à DSC-19 ............................................................................................................. 122
V.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTIMICROBIENNE ...................................................... 125
V.2.1. - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES EXTRAITS : .................................................... 125
V.2.2. - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES METABOLITES ISOLES: ................................. 127
VI. FLACOURTIA RUKAM ......................................................................................................... 131
VI.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE FLACOURTIA RUKAM ........................... 131
VI.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS ET PURIFICATION DES COMPOSES : ................... 131
VI.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES GLUCOSIDES PHENOLIQUES .................. 136
VI.1.3. - DETERMINATION STRUCTURALE DES AUTRES GLYCOSIDES PHENOLIQUES ..... 164
VI.1.4. – DETERMINATION STRUCTURALE DES METABOLITES DIVERS CONNUS ........... 171
VI.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTIMICROBIENNE ..................................................... 175
VI.2.1 - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES EXTRAITS : .................................................... 175
VI.2.2. - ACTIVITE DES METABOLITES ISOLES: ................................................................. 177
TROISIEME PARTIE : CONCLUSION GENERALE …………………………………………………………………..182
QUATRIEME PARTIE : PARTIE EXPERIMENTALE …………………………………………………………………189
VII. MATERIEL ET APPAREILLAGE........................................................................................... 190
VII.1. - MATERIEL VEGETAL ................................................................................................. 190
VII.2. - MATERIEL CHROMATOGRAPHIQUE ....................................................................... 191
VII.2.1. - CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM).......................................... 191
VII.2.2. - CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE OUVERTE (CC) ...................................... 193
VII.2.3. - CHROMATOGRAPHIE SOUS PRESSION REDUITE (VLC) .................................... 193
VII.2.4. - CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE FLASH (CCF) .......................................... 193
VII.2.5. - CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC) ....................... 193
VII.3. - METHODES PHYSICO-CHIMIQUES ........................................................................... 194
VII.3.1. - POUVOIR ROTATOIRE ...................................................................................... 194
 VII.3.2. - SPECTROMETRIE ULTRA-VIOLET-VISIBLE (UV-Vis) .......................................... 195
VII.3.3. - SPECTROMETRIE INFRAROUGE (IR) .................................................................. 195
VII.3.4. - SPECTROMETRIE DE MASSE (SM) ..................................................................... 195
VII.3.5. - SPECTROMETRIE DE RESONANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE (RMN) .............. 195
VII.3.6. - DICHROISME CIRCULAIRE ................................................................................. 196
VIII. EXTRACTION, PURIFICATION ET HYDROLYSE ................................................................. 196
VIII.1. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Cleome chelidonii ................ 196
VIII.1.1. – EXTRACTION . ................................................................................................. 196
VIII.1.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 3 (ACETATE D’ETHYLE) : ................................... 196
VIII.1.3. – PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE) : ..................................... 201
VIII.2. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Dolichandrone spathacea ... 208
VIII.2.1. - EXTRACTION ................................................................................................... 208
VIII.2.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE) ........................................ 208
VIII.3. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Flacourtia rukam ................. 218
VIII.3.1. - EXTRACTION ................................................................................................... 218
VIII.3.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE) : ....................................... 218
VIII.4. - HYDROLYSE ACIDE DES EXTRAITS : ........................................................................ 225
VIII.5. - HYDROLYSE ENZYMATIQUE : ................................................................................. 225
VIII.6. - TESTS BIOLOGIQUES .............................................................................................. 225
VIII.6.1. - ACTIVITE ANTIOXYDANTE ............................................................................... 225
VIII.6.2. - ACTIVITE ANTIBACTERIENNE .......................................................................... 227
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES .…………………………………………………………………………….………230
ANNEXES ………………………………………………………………………………………………………………………….250
 LISTE DES SCHEMAS

Schéma n° 1 : Extraction des parties aériennes de Cleome chelidonii ................................... 45

Schéma n° 2 : Purification des composés de l’extrait 3 (acétate d’éthyle) ............................ 46
Schéma n° 3 : Purification des composés de l’extrait méthanolique (extrait 4) .................... 47
Schéma n° 4 : Extraction des feuilles de Dolichandrone spathacea ....................................... 89
Schéma n° 5 : Purification des composés de l’extrait méthanolique 4 de D. spathacea. ...... 90
Schéma n° 6 : Extraction des feuilles de Flacourtia rukam ................................................... 133
Schéma n° 7 : Purification des composés de l’extrait méthanolique 4 de F. rukam ............ 134
 LISTE DES FIGURES

Figure n° 1: Arbre de phylogénie botanique du genre Cleome ................................................. 8

Figure n° 2: Arbre de phylogénie botanique du genre Dolichandrone .................................... 22
Figure n° 3: Campsis radicans ou Tecoma radicans (Bignoniaceae) ........................................ 23
Figure n° 4: Médicament TIEU PHONG NHUAN GAN SO 40 .................................................... 29
Figure n° 5: Arbre de phylogénie botanique du genre Flacourtia ........................................... 31
Figure n° 6 : Spectres UV du composé CF-2 ............................................................................. 59
Figure n° 7 : Spectres UV de CF-14........................................................................................... 68
Figure n° 8 : CCM des extraits de Flacourtia rukam .............................................................. 131
Figure n° 9 : HPLC analytique des extraits 4 des feuilles, écorces, branches et racines de F.
rukam ..................................................................................................................................... 132
Figure n° 10: Cleome chelidonii L. .......................................................................................... 190
Figure n° 11: Dolichandrone spathacea (L. f.) K. Schum. ....................................................... 190
Figure n° 12: Flacourtia rukam Zoll. & Moritzi....................................................................... 191
Figure n° 13 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de C. chelidonii ............ 201
Figure n° 14 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de D. spathacea .......... 208
Figure n° 15 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de F. rukam ................. 218
 LISTE DES TABLEAUX
Tableau n° 1: Activité anti-radicalaire des Flacourtia .............................................................. 38
Tableau n° 2: Activité antimicrobienne des Flacourtia............................................................ 39
Tableau n° 3 : RMN 1H et 13C du quercétol dans les composés CF-1 à CF-13 .......................... 49
Tableau n° 4 : RMN 1H et 13C du kaempférol des composés CF-14 à CF-16 ............................ 50
Tableau n° 5 : RMN 1H et 13C de la partie glycosidique des composés CF-1 à CF16................ 53
Tableau n° 6 : Données spectrales UV du composé CF-2 ........................................................ 59
Tableau n° 7 : Ion de masse de CF-8 à CF-11 ........................................................................... 64
Tableau n° 8 : RMN de la position 6 du β-D-glucose dans CF-8 à CF-11.................................. 64
Tableau n° 9 : Caractéristiques spectrales UV de CF-14 .......................................................... 68
Tableau n° 10 : RMN de la partie aglycone de CM-1 à CM-3 .................................................. 75
Tableau n° 11 : Test au DPPH : pourcentage d’inhibition et CI50 des flavonoides glycosylés
(CF-1 à CF-14) de Cleome chelidonii ......................................................................................... 87
Tableau n° 12 : RMN 1H et 13C de β-D-glucopyranose des composés DSI-1 à DSI-16 ............. 93
Tableau n° 13 : RMN 1H et 13C de la partie aglycone des composés DSI-7 à DSI-10, DSI-15,
DSI-16 ....................................................................................................................................... 97
Tableau n° 14 : RMN 1H et 13C de la partie aglycone du catalpol dans DSI-1 à DSI-6 et DSI-12
à DSI-14 .................................................................................................................................. 107
Tableau n° 15 : RMN 1H et 13C de β-D-glucopyranose de DSC-8 à DSC-10............................ 111
Tableau n° 16 : RMN 1H et 13C de la partie sapogénine de DSC-8 à DSC-10 ......................... 121
Tableau n° 17 : Concentration minimale inhibitrice (CMI) des cinq extraits foliaires de D.
spathacea ............................................................................................................................... 126
Tableau n° 18 : Bioautographie des composés actifs ............................................................ 127
Tableau n° 19 : CMI de DSC-1, DSC-2, DSC-4, DSC-17, DSI-6 et DSI-9 .................................. 128
Tableau n° 20 : RMN du β-D-glucopyranose (FRP-1 à -14).................................................... 138
Tableau n° 21 : RMN 1H, 13C et HMBC de l’alcool benzylique de FRP-1 ................................ 139
Tableau n° 22 : RMN 1H, 13C et HMBC de l’alcool benzylique de FRP-5 ................................ 139
Tableau n° 23 : RMN 1H et 13C de l’alcool benzylique (FRP-1 à FRP-14) ............................... 140
Tableau n° 24 : RMN 1H et 13C de la partie R1 = 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate
(FRP-1 à FRP-5) ....................................................................................................................... 148
Tableau n° 25 : Spectres de masse de FRP-1 à FRP-5 et hypothèses de structures.............. 149
Tableau n° 26 : RMN 1H et 13C de la partie R1 = 1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle (FRP-
6 et FRP-7) .............................................................................................................................. 158
Tableau n° 27 : RMN de la partie glycérol des Syringylglycérol 8-O-β-D-glucopyranosides . 166
Tableau n° 28 : RMN de FRD-9 et diastéréosisomères. ......................................................... 174
Tableau n° 29 : CMI des extraits foliaires de Flacourtia rukam ............................................. 176
Tableau n ° 30 : Bioautographie des composés isolés de F. rukam contre Staph. aureus CIP
53.154 ..................................................................................................................................... 177
Tableau n° 31 : CMI des composés antibactériens de F. rukam ............................................ 178
Tableau n° 32 : Phases mobiles utilisées pour la CCM .......................................................... 192
 LISTE DES ABBREVIATIONS

CF-n° Désignation des composés flavonoides dans Cleome

chelidonii
CM-n° Désignation des composés mégastigmanes dans Cleome
chelidonii
CD-n° Désignation des composés divers dans Cleome chelidonii
DSI-n° Désignation des composés iridoides dans Dolichandrone
spathacea
DSC-n° Désignation des composés divers dans Dolichandrone
spathacea
FRP-n° Désignation des composés phénoliques dans Flacourtia
rukam
FRD-n° Désignation des composés divers dans Flacourtia rukam
ACN Acétonitrile
AcOEt acétate d’éthyle
Ara α-L-arabinose
ATCC American type culture collection
ax axial
CC Chromatographie sur Colonne ouverte
CCM Chromatographie sur Couche Mince
CCM-prép Chromatographie sur Plaque Préparative
CD Dichroïsme circulaire
CCF Chromatographie sur Colonne Flash
CFU Colony-forming unit
CI50 Concentration Inhibitrice à 50%
CIP Collection of the Institut Pasteur
CMI Concentration Minimale Inhibitrice
COSY COrrelated SpectroscopY
d doublet
dd doublet de doublets
ddd doublet de doublets de doublets
DEDL Détecteur évaporatif à diffusion de Lumière
dl doublet large
dm doublet de multiplets
DMSO diméthylsulfoxyde
DMSO-d6 diméthylsulfoxyde deutéré
DPPH• 1,1-diphényl-2-picryl-hydrazyl
dq doublet de quadruplets
dt doublet de triplets
eq équatorial
EP Ether de pétrole
EtOH Ethanol
ESI ElectroSpray Ionization (ionisation par électrospray)
Gal β-D-galactopyranose
Glc β-D-glucopyranose
HMBC Heteronuclear Multiple Bonding Connectivity
HPLC Chromatographie Liquide Haute Performance
HPLC-prép Chromatographie Liquide Haute Performance Préparative
HPLC semi-prép Chromatographie Liquide Haute Performance semi-
préparative
HRMS Spectrométrie de masse haute résolution
HSQC Heteronuclear Single Quantum Connectivity
Hz Hertz
IR Infrarouge
I% pourcentage d’inhibition
INT para-iodonitrotétrazolium
isoPro isopropanol
J (Hz) constante de couplage exprimée en Hertz
m multiplet
MAC Médecine alternative et complémentaire
MeCOEt méthyléthylcétone
MHA Mueller-Hinton
MTC Médecine traditionnelle chinoise
MTV Médecine traditionnelle vietnamienne
m/z masse/charge d’un ion
NOESY Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY
ppm parties par million
q.s.p. Quantité suffisante pour
qt quintuplet
Rha α-L-rhamnopyranose
RMN Résonance Magnétique Nucléaire
RMN 13C Résonance Magnétique Nucléaire du carbone
RMN 1H Résonance Magnétique Nucléaire du proton
ROESY ROtating Overhauser Effect SpectroscopY
s singulet
sl singulet large
SM Spectrométrie de Masse
t triplet
TC Témoin de culture
td triplet de doublets
TFA acide trifluoroacétique
TOCSY TOtal Correlation SpectroscopY
tr temps de rétention
TS Témoin de stérilité
uma Unité de masse atomique
UV/vis Ultra-Violet/visible
VLC chromatographie liquide sous vide
δC Déplacement chimique du carbone en ppm
δH Déplacement chimique du proton en ppm
µM micromole
 INTRODUCTION GENERALE

La médecine traditionnelle est formée des connaissances, des compétences et des pratiques
propres à une culture, qui reposent sur ses théories, ses croyances et ses expériences. Comme
pour toute médecine, elle est utilisée pour maintenir les êtres humains en bonne santé ainsi
que pour prévenir, diagnostiquer, traiter et guérir des maladies physiques et mentales. Ainsi,
utilisée depuis des milliers d'années, les tradi-praticiens ont beaucoup apporté à la santé
humaine, surtout en tant que prestataires de soins primaires.
La médecine traditionnelle reste très populaire dans le monde, et depuis 1990, elle refait une
apparition remarquée dans de nombreux pays développés. Dans certains pays, elle est parfois
qualifiée de médecine « alternative », «parallèle» ou «douce» [1].
Il existe de nombreux systèmes différents de médecine traditionnelle. La philosophie et les
pratiques de chaque système sont influés par les conditions actuelles, l'environnement, et la
zone géographique, cependant elles ont en commun une approche intégrée de la vie, de
l'équilibre de l'esprit, du corps et de l'environnement, en mettant l'accent sur la santé plutôt
que sur la maladie. Généralement, l'importance est ciblée sur l'état général de la personne,
plutôt que sur la douleur ou la maladie dont le patient souffre, et l'utilisation des plantes et
ressources naturelles est une partie essentielle de tous les systèmes de médecine
traditionnelle [2, 3].
A titre d’exemple, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) est celle la plus connue, étudiée
et exploitée ; elle possède une histoire de plus de 3000 ans, et constitue un exemple important
de la façon dont les connaissances accumulées et ancestrales sont appliquées dans une
approche holistique dans les soins de santé de nos jours. Le diagnostic et le traitement sont
basés sur une vision complète du patient et de ses symptômes, exprimés en termes de
l'équilibre du Yin et du Yang. Le Yin représente la terre, le froid et la féminité, alors que le Yang
représente le ciel, la chaleur, et de la masculinité. Les actions du Yin et du Yang influent les
interactions des cinq éléments qui composent l'univers (métal, eau, bois, feu et terre). Les
praticiens de la MTC cherchent à contrôler les niveaux du Yin et du Yang à travers les 12
méridiens, qui apportent et transmettent l'énergie à travers le corps [2].
Le développement et la production massive de médicaments synthétiques ont révolutionné
les thérapeutiques de santé dans la plupart du monde. Cependant la majorité de la population
des pays en développement comptent sur les tradi-praticiens et les plantes des médecines
traditionnelles pour leurs soins primaires [2].
En Chine, la MTC représente environ 40% de tous les soins de santé et plus de 90% des
hôpitaux généraux en Chine possèdent des unités de médecine traditionnelle. La valeur totale
des plantes de médecine traditionnelle en 1995 atteignait environ 2,5 milliards de dollars. En
2005, les ventes des produits issus des « plantes » ont totalisé 14 milliards de dollars [2].
En Inde, 70% de la population utilisent la médecine traditionnelle ayurvédique pour leurs
besoins de soins de santé, et environ 960 espèces de plantes sont utilisées par l'industrie des
plantes indiennes, dont 178 espèces avec une quantité supérieure à 100 tonnes par an [2].

1
Jusqu'à 90% de la population en Afrique utilisent la médecine traditionnelle. Et au Brésil, les
revenus provenant des plantes médicinales étaient de 160 millions de dollars en 2007 [2].
L'utilisation de la médecine traditionnelle ne se limite pas aux seuls pays en développement,
et dans les pays industrialisés l'application de thérapies alternatives a considérablement
augmenté durant ces dernières décennies.
Aux États-Unis en 2007, environ 38% des adultes et 12% des enfants ont utilisé une certaine
forme de médecine traditionnelle. Dans une enquête sur 22 000 adultes, 12,8% ont pris au
moins un supplément à base de plantes, et dans une autre enquête, 42% des répondants ont
utilisé des suppléments diététiques ou suppléments nutritionnels, dont les plus couramment
utilisés sont des multivitamines et minéraux, suivies de «saw palmetto» (palmier de Floride,
Serenoa repens), de lin, d'ail et du Ginkgo. En 1990, les dépenses associées à la thérapie
«alternative» aux États-Unis ont été estimées à 13,7 milliards de dollars. Ce chiffre avait
doublé en 1997, du fait que l’utilisation des médicaments à base de plantes augmente plus
vite que toute autre thérapie alternative [2]. En 2007, la population adulte a dépensé 33,9
milliards de dollars pour des visites aux tradi-praticiens et des achats de produits et dérivés
utilisés en médecine alternative et comlémentaire (MAC); ainsi 44% (soit 14,8 milliards de
dollars) de cette dépense est utilisé pour acheter des produits naturels à base de plantes [4].
En Australie, au Canada et au Royaume-Uni, la dépense annuelle pour la médecine
traditionnelle est estimée respectivement à 80 millions de dollars, 1 milliard de dollars et 2,3
milliards de dollars. Les médicaments de phytothérapie sont également très communs en
Europe. L'Allemagne et la France sont les leaders dans le marché de gré à gré entre les pays
européens, et les revenus annuels en Europe de l'Ouest ont atteint 5 milliards de dollars en
2003-2004 [2]. En 2013, le marché des médicaments à base de plantes était estimé à 33
milliards d’euros en Europe avec un taux de croissance annuel de 11%, avec l’Allemagne pour
27% du marché, et la France pour 24%. En Europe de l'Est, la Pologne représente le marché
principal avec une estimation approximative du marché de 600 millions d’euros [5].
Les raisons avancées pour l'utilisation de la médecine traditionnelle sont qu'elle est plus
abordable, correspond plus étroitement à l'idéologie du patient, réduit les préoccupations
concernant les effets indésirables des médicaments chimiques, satisfait le désir de soins
personnalisés. Les médecines traditionnelles sont largement perçues naturelles et
sécuritaires, sans toxicité, bien que cela ne soit pas nécessairement vrai.
L'utilisation principale des plantes médicinales est pour la promotion de la santé le traitement
de maladies chroniques et aiguës, et de divers problèmes comme les maladies
cardiovasculaires, troubles de la prostate, de la dépression, de l'inflammation, et pour
stimuler le système immunitaire. On estime que 25% des médicaments commercialisés dans
le monde sont obtenus à partir de plantes [2]. En outre, le recours à des remèdes traditionnels
est opérant lorsque la médecine conventionnelle reste inefficace. Ainsi en Chine en 2003, les
médicaments traditionnels à base de plantes médicinales dont Phragmites communis Trin. ,
Lonicera japonica Thunb., Scutellariae baicalensis Georgi., Astragalus membranaceus (Fisch.)
Bunge, Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. [6], ont joué un rôle prédominant pour traiter le
syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS), et en Afrique, l’African wild potato (Hypoxis
hemmerocallidea) a été utilisée pendant des décennies pour traiter le syndrome de
dépérissement associée au VIH [2, 7, 8].

2
Plus de 60% des médicaments contre le cancer ou en cours d’évaluation sont à base de
produits naturels, et plus de 70% des 177 médicaments anticancéreux approuvés dans le
monde entier sont à base de produits naturels ou des mimétiques, dont beaucoup sont
améliorés avec la chimie combinatoire [2, 9].
Pour ce qui concerne plus précisément le Vietnam, sa médecine traditionnelle peut être
divisée en deux catégories: la médecine traditionnelle vietnamienne (MTV), et la médecine
orientale ou MTC. En effet du fait de sa géolocalisation et de son histoire, le Vietnam a été un
point de rencontre pour des systèmes de médecine traditionnelle depuis des millénaires,
comme la médecine chinoise au nord, les influences indiennes et islamiques à l'ouest, et les
pratiques austronésiennes des îles de la région Pacifique Sud [10].
La MTV est une combinaison de modifications opérées dans la médecine chinoise qui se sont
faites au cours de la domination chinoise jusqu’au 12ème siècle, et de pratiques autochtones
des diverses minorités ethniques qui composent le Vietnam. Ce sont les différences observées
dans les maladies et les espèces végétales présentes dans les régions chaudes et plus humides
du Vietnam qui ont créé des accents différents dans le diagnostic et le traitement par rapport
à la MTC. Les médicaments spécifiques des minorités ethniques du Vietnam ont été pris en
compte ; ces minorités représentant environ 13 millions d’individus pour une population
totale de 90 millions en 2014, et peuvent être divisées en 54 groupes ethniques [11, 12].
A la campagne et dans les zones reculées et montagneuses, la MTV est plus couramment
utilisée. Dans le delta, les plaines et les villes, les patients utilisent plus souvent une
combinaison de la MTV et MTC [10].
La médecine traditionnelle forme une partie intégrante du système national de soins de santé
au Vietnam et a un rôle important dans la promotion de la santé du peuple vietnamien, en
particulier dans les cas difficiles, les maladies gériatriques et les soins de santé primaires au
niveau de la commune [10].
Les médecins allopathiques qui sont diplômés des universités médicales et qui ont été formés
à la médecine traditionnelle sont devenus des supporters actifs de la médecine traditionnelle.
Ils sont activement engagés dans la promotion de l'utilisation rationnelle de la médecine
traditionnelle dans leurs instituts et hôpitaux [10].
Selon les statistiques du Ministère de la Santé du Vietnam, environ 30% des patients reçoivent
un traitement par médecine traditionnelle. Le traitement est fourni par les tradi-praticiens
(qui n'ont reçu aucune éducation formelle) et par des médecins traditionnels (qui ont obtenu
leur diplôme dans un département universitaire de médecine traditionnelle) [10].
Le ministère dénombre environ 1000 tradi-praticiens, 5000 médecins traditionnels, 2000
assistants-médecins traditionnels, et 209 pharmaciens de médecine traditionnelle. En outre,
il y a environ 8000 praticiens privés de médecine traditionnelle, dont environ 1400 sont des
acupuncteurs. Au Vietnam, existent 286 départements de médecine traditionnelle dans les
hôpitaux généraux, 45 hôpitaux provinciaux de médecine traditionnelle, et 4 instituts de
médecine traditionnelle [10].
La plupart des formations de médecine traditionnelle pour le personnel de santé est organisée
par le système gouvernemental : formation des médecins, des médecins assistants et des
pharmaciens.

3
Cette formation est assurée par:
- Sept universités et un institut pour la formation des médecins et des pharmaciens :
o l'institut de médecine traditionnelle du Vietnam à Hanoi.
o la faculté de médecine traditionnelle à l'Université de médecine de Hanoi.
o la faculté de médecine traditionnelle à l'Université de médecine et de
pharmacie de Ho Chi Minh.
o les départements de médecine traditionnelle à l'Université de médecine des
provinces: Thai-Binh, Thai-Nguyen, Can-Tho, Hue et Hai-Phong.
- Vingt-six des universités, des collèges juniors et des écoles secondaires réalisent la
formation des médecins assistants:
o l'Université de médecine et de pharmacie de Ho Chi Minh
o l'Université internationale de Hong-Bang
o Les collèges juniors de la santé des provinces: Lang-Son, Phu-Tho, Quang-Ninh,
Hung-Yen, Hue, Quang-Nam, et Khanh-Hoa;
o Les collèges juniors de Dang Thuy Tram, de Dong-Thap, et de Bac-Lieu.
o Les écoles secondaires de médecine et de pharmacie de Tue-Tinh 1 (Hanoi), de
Tue-Tinh 2 (Thanh-Hoa), de Le Huu Trac
o Les écoles secondaires de la santé des provinces : Thai-Nguyen, Bac-Giang,
Long-An, Vinh-Long, Soc-Trang et Ca-Mau
o L’école secondaire technique de médecine et de pharmacie Hanoi
o Les écoles secondaires polytechniques de Thanh-Hoa et de Dong-Nai,
o L’école technique de Vinh et l’école de l’Ouest de Sai-Gon.

Toutes les institutions de formation utilisent un programme commun qui comprend une
connaissance de base de la médecine traditionnelle : la phytothérapie, l'acupuncture, le
massage, la préservation de la vitalité, et d’autres thérapies [11, 13].

Carte du Vietnam [14]

Le Vietnam est situé dans la zone tropicale avec un quart de sa superficie recouverte de forêts;
cette situation est favorable à la croissance et à la présence de nombreuses espèces et variétés
d'animaux, de plantes et à l’obtention d’écosystèmes. Le Vietnam fait partie des 25 régions
du globe les plus riches en biodiversité. L’estimation est d’environ 12 000 végétaux, parmi
eux : 50% de plantes vasculaires endémiques, 10% d’espèces végétales migrantes provenant
4
de l'Hymalaya - Yunnan - Qi Chou (Chine), 14% de l'Inde – Myanmar, 15% de l'Indonésie –
Malaisie, et les espèces restantes provenant de la zone tempérée ou de régions tropicales.
Parmi cette biodiversité végétale, 350 espèces sont classées comme menacées [11, 15, 16].
Comme pour la MTC, les animaux et les minéraux peuvent être utilisés en MTV, mais les
plantes sont les principes à effet thérapeutique les plus importants. Il existe actuellement
1573 médicaments commercialisés à base de plantes recensés au Vietnam dont 267 sont
inscrits sur la liste nationale des médicaments essentiels de 1996 [3]. La pharmacopée
vietnamienne a listé 250 plantes médicinales avec des détails sur la façon de recueillir, de
préserver, d’administrer et d’utiliser chaque espèce [17].
Au Vietnam, le besoin en matières pharmaceutiques est d'environ 60 000 tonnes par an, alors
que le Vietnam en fournit seulement environ 15 600 tonnes ; le reste (soit 70%) doit être
importé de la Chine, de Taïwan, de Singapour, ….[18]. Le Ministère de la Santé du Vietnam a
planifié le développement de 54 espèces de plantes médicinales importantes dans 8
écorégions pour couvrir d’ici 2020 jusqu’à 60% (et 80% en 2030) de la demande totale en
matières pharmaceutiques, et améliorer l'exportation de matières pharmaceutiques et de
produits dérivés de plantes. En plus, ils ont planifié la construction de régions de culture des
plantes médicales selon les principes et critères GACP-WHO (WHO guidelines on Good
Agricultural and Collection Practices (GACP) for Medicinal Plants) pour cultiver 60 plantes
médicinales en 2020 (et 120 espèces en 2030) [19].
En collaboration avec le professeur NGUYEN Kim Phi Phung de l’Université des Sciences de Ho
Chi Minh - Vietnam, nous avons le projet de travailler sur des plantes médicinales de la
médecine traditionnelle du Vietnam. Notre objectif est de contribuer à l'amélioration des
connaissances phytochimiques et biologiques de ces plantes, afin d’en valoriser et d’en
promouvoir l'usage en médicine traditionnelle. Dans le cadre de ce projet, nous avons mené
un travail de thèse intitulé «Etude phytochimique de plantes de la médecine traditionnelle du
Vietnam et du Laos; évaluation biologique dans le domaine de la santé». Nous avons
sélectionné trois espèces végétales:
- Cleome chelidonii (Cleomaceae)
- Dolichandrone spathacea (Bignoniaceae)
- Flacourtia rukam (Salicaceae)
Ces trois plantes sont utilisées en médecine traditionnelle d’Indochine. Cleome chelidonii est
utilisée contre les rhumatismes, comme antalgique (maux de tête, otite) et antipyrétique,
dans le traitement de la colique et de la dysenterie. Les feuilles de Dolichandrone spathacea
possèdent des propriétés antitumorale et antiseptique, et sont utilisées pour traiter le
muguet. Le jus du fruit immature de Flacourtia rukam est utilisé pour le traitement de la
diarrhée, de la dysenterie, et de la dysménorrhée. Ses racines sont également utilisées pour
soigner les coliques abdominales. (Voir la partie de Bibliographie).
Ce manuscrit est construit en quatre chapitres :

 le premier chapitre bibliographique est consacré à une présentation sur la botanique

des trois espèces étudiées, l’état des connaissances phytochimiques, et les propriétés
biologiques connues pour les trois espèces étudiées,

5
  le deuxième chapitre reprend l’ensemble des travaux réalisés et des résultats obtenus
des études phytochimiques et de l’évaluation des activités antioxydante,
antibactérienne des extraits et des métabolites secondaires isolés de ces trois plantes,
 le troisième chapitre est une conclusion générale sur l’ensemble des travaux réalisés
et les perspectives envisagées,
 le dernier chapitre décrira les détails expérimentaux des études phytochimiques et
biologiques.
En annexe, sont fournies les données physicochimiques et spectrales concernant les nouveaux
composés naturels isolés.

6
 PREMIERE PARTIE :
SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
& TRAVAUX ANTERIEURS

7
I. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR CLEOME CHELIDONII
I.1. - BOTANIQUE DES CLEOMACEAE
I.1.1. - SYSTEMATIQUE :

Les Cleomaceae sont une petite famille de l'ordre des Brassicales, comprenant plus de 300
espèces appartenant à 17 genres selon l’APG III dont: Cleome, Cleomella, Dactylaena,
Haptocarpum, Justago, Peritoma, Podandrogyne, Polanisia et Wislizenia [20]. Autrefois
rattachées au Capparaceae, les plantes de la famille des Cleomaceae se trouvent dans les
régions tropicales et tempérées.

Figure n° 1: Arbre de phylogénie botanique du genre Cleome

I.1.2. - CARACTERES GENERAUX :

Les Cleomaceae sont des plantes ou arbustes, vivaces ou annuels, généralement dépourvus
d’épines, glabres ou glanduleux pubescents avec des poils dressés sécréteurs de
glucosinolates. Les tiges sont habituellement dressées, parfois rampantes.
Les feuilles sont généralement caduques, alternes généralement palmatilobées parfois
simples, les nervures sont pennées; le bord du limbe est lisse, dentelé ou cranté. Les stipules
sont généralement présentes (parfois caduques).
Les fleurs sont axillaires ou en corymbes terminaux; les bractées si elles existent, ont une
forme unifoliée ou trifoliée. Les fleurs sont généralement actinomorphes ou légèrement
zygomorphes, rondes à cratériformes, campanulées ou urcéolées; le périanthe et l’androcée
sont hypogynes. Il y a 4 sépales distincts ou soudés à la base; les 4 pétales liés directement au
réceptacle sont imbriqués ou distincts, égaux ou inégaux. Les étamines sont nombreuses. Le
pistil comprend un ovaire à deux loges; chaque loge renferme de 1 à 18 ovules; le style est
relativement court, droit et épais avec un stigmate capité.
Les fruits sont des nucules ou capsules, valvaires, allongés, indéhiscents ou déhiscents. Les
graines sont nombreuses de couleur marron clair à gris noir [21].

8
I.1.3. - GENRE CLEOME :
Le genre Cleome est le plus représenté dans cette famille avec 180 à 200 espèces qui sont des
sources importantes de médicaments traditionnels, de plantes alimentaires et utilisées pour
d’autres usages.
Ces plantes sont largement distribuées et la majeure partie est limitée aux régions tropicales,
où on peut y trouver environ 150 espèces, en particulier en Asie du Sud-Ouest [20-22].
Il s'agit de plantes herbacées annuelles ou vivaces. Les tiges sont pas ou peu ramifiées,
glanduleuses pubescentes ou glabres.
Les feuilles sont simples ou palmatilobées comprenant entre 3-11 folioles. Les stipules sont
absentes ou écailleuses.
Les fleurs sont zygomorphes à sépales persistants soudés à la base. Les pétales sont égaux. On
compte de 4 à 6 étamines libres. L’ovaire est supère et uniloculaire.
Les fruits sont des capsules allongées déhiscentes par 3 valves, et contiennent de 4 à 25
graines réniformes ou ovoïdes [21, 23].
Au Vietnam, quatre espèces de Cleome sont répertoriées: Cleome chelidonii, Cleome
gynandra, Cleome speciosa et Cleome viscosa [24].

I.2. - BIBLIOGRAPHIE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE CLEOME

Plusieurs études de la littérature menées sur une quinzaine d’espèces de Cleome ont montré
la présence de différentes classes de métabolites secondaires comme des polyphénols, des
terpénoïdes, des alcaloïdes, et des métabolites primaires comme des glucosinolates et des
dérivés lipidiques.
I.2.1. FLAVONOIDES

I.2.1.1. Flavones :
Une dizaine de flavones a été isolée de C. brachycarpa, C. amplyocarpa, C. chrysantha, C.
drosenfolia, C. arabica.
R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 réf
OMe OH H OH H H OH H [25]
OMe OH H OH H OMe OH H [25]
H OH OMe OH H OMe OH H [25]
OMe OH OMe OH H OH OH H [25]
H OH OMe OH H OMe OH OMe [25]
OMe OH OMe OMe H H OH H [25, 26]
OMe OH OMe OMe OMe H OH H [27]
H OMe H OMe H OMe OMe H [28]
OMe OH OMe OMe H OMe OH H [25, 28]
OMe OH OMe OMe H OMe OMe OH [28]
OMe OH OMe OMe H OH OMe OMe [26, 29]
OMe OH OMe OMe OMe OMe OH H [25]
OMe OH OMe OMe H OMe OMe OMe [25, 26, 28, 29]
H OH H OH H OH OH H [29]

9
I.2.1.2. Flavanones :
Une flavanone et un glycoside sont identifiés de C. viscosa: 7,3’,4’-trihydroxy-5-
méthoxyflavanone et 3’,4’-dihydroxy-5-méthoxyflavanone-7-O-α-L-rhamnopyranoside [30];
la naringénine 4’-O-β-D-xylopyranosyl-(14)-β-D-glucopyranoside [31] et la pinocembrine
sont isolés de C. droserifolia [32].

R1 R2 R3 R4 réf
OMe OH OH OH [30]
OMe L-Rha OH OH [30]
OH OH H -Xyl(14)-Glu [31]
OH OH H H [32]

I.2.1.3. Flavonols :
Dix-sept glycosides de kaempférol et de quercétol sont isolés de C. arabica, C. amplyocarpa,
C. brachycarpa, C. chrysantha C, droserifolia, C. paradoxa, et C. viscosa :
R1 R2 R3 réf
H H OH [33]
Glu H OH [33, 34]
Glu Rha OH [32, 34]
H Rha OH [35]
Rha Rha OH [34, 35]
Glu H OMe [34, 35]
Rha Rha OMe [34, 35]
Glu H OMe [26, 34]
R1 R2 R3 réf Rut Rha OMe [35]
Glu H H [34] H Glu(12)-Rha- OMe [28]
OH Rha H [26, 36] H Rha(12)-Glu- OMe [29]
Rha Rha H [26, 34, 35] Glu = Glucose
Glu Rha H [26, 34, 35] Rha = Rhamnose
Rha Glu H [35] Rut = Rutinose
A Glu H H [37] AGlu = acide glucuronique

I.2.1.4. Anthocyanosides :
Dix anthocyanosides sont identifiés de C. hessleriana [38] dont la structure commune de base
est la pélargonidine-3-O-(β-D-glucopyranosyl-(1->2)-(6’’-(E-p-coumaroyl)-β-D-
glucopyranosyl)-5-O-β-D-glucopyranoside
R1 R2 R3 réf
OH OH H [38]
OH OMe OMe [38]
OH OMe H [38]
OH H H [38]
H OH H [38]
H OMe OMe [38]
H OMe H [38]
H H H

10
I.2.2. COUMARINES
Deux coumarines prénylées et quatre coumarino-lignoïdes sont isolés de C. viscosa :
auraptene et 6’-hydroxy-β-cycloauraptene [39], les cleomiscosins A, B, C, et D [40-43] .

auraptene [39]

cleomiscosins A R1 = R2 = H
[40-42]
cleomiscosins B R1 = R2 = Me
6’-hydroxy-β-cycloauraptene [39] [40]
cleomiscosins C R1 = R2 = H
[40]
cleomiscosins D R1 = R2 = Me
[43]

I.2.3. TERPENOIDES

I.2.3.1 – Monoterpènes :
Un seul monoterpène de type mégastigmane, le (+)-(6S,9R)-roseoside a été isolé et identifié
de C. brachycarpa et C. droserifolia [28, 29].

I.2.3.2- Sesquiterpènes :
Six sesquiterpènes sont isolés de C. brachycarpa et C. droserifolia: buchairol [28, 29, 44],
teucladiol [28, 29], 6-di(7-hydroxy,1, 5-epoxy germacrane), 4(15)-guaiane-6-ol, 7α-germacra-
1(10),4(15)-diene-5β, 6α-diol, et 4,7,8-eudesma-triol [32].

11
I.2.3.3 - Diterpènes:
Sept diterpènes sont identifiés de C. droserifolia, C. icosandra et C. viscosa dont 4 à squelette
dolabellane et 3 à squelette cembrane

[45]
[32]

R1 R2 réf
H H [26, 29]
COMe H [26]
COMe Me [26]

[46, 47]
[48]

I.2.3.4 - Triterpènes:
De nombreux triterpènes à squelettes dammarane et trinortriterpène sont présents dans le
genre Cleome dont cabralealactone, 17-α-hydroxycabralealactone, 17α-
hydroxycabraleahydroxylactone, cabraleahydroxylactone, cleomblynol A, Isocleomblynol A,
cleomblynol B, 12β-acetoxycleocarpone, cleocarpone, cleocarpanol, amblyone,
brachycarpone, deacetoxybrachycarpone, 1-epibrachyacarpone, drosericarpone.
R1 R2 R3 R4 réf
Cabralealactone O H H O [49, 50]
17-α-hydroxycabralealactone O H OH O [27, 49]
α-OAc, β-H OAc OH O [49]
17α-hydroxycabraleahydroxylactone α-OH β-H H OH C(CH3)2OH [49]
α-OH β-H H OH O [49]
Cabraleahydroxylactone α-OH β-H H H O [50]

cleomblynol A
R1 = βOAc, R2 = H [51-53]
R1 = H [49] R1 = H [49]
R1 = OAc [49] R1 = OAc [49] Isocleomblynol A
R1 = αOAc, R2 = H [51]

cleomblynol B
R1 = βOAc, R2 = OAc [51]

12
 R1 = R2 = H [49, 54, 55]
R1 = -O- = R2 [49]
R1 = OH, R2 = H [49]

R1 R2 R3 réf
12β-acetoxycleocarpone O OAc H [49]
α-OH, β-H OAc H [49]
α-OH, β-H OH H [49]
cleocarpone O H H [49, 56]
α-OAc, β-H OAc C2H5 [49]
cleocarpanol α-OH, β-H H H [49, 51, 54]

amblyone [27, 51]

drosericarpone [44]
R1 R2 R3 réf
OH H H [52, 53] Brachycarpone R = α-OAc [57]
OAc OAc OAc [58] Deacetoxybrachycarpone R = H [50]
OAc OAc H [27] 1-epibrachyacarpone R = β-OAc [59]

On peut ajouter l’acide ursolique isolé de C. brachycarpa [50] et l’α-amyrin de C. paradoxa

[33].

I.2.3.5 - Polyterpènes:
Quatre polyprénols sont isolés de C. spinosa : cleomeprenol-9, cleomeprenol-10,
cleomeprenol-11 et cleomeprenol-12 [60].

13
I.2.3.6 – Phytostérols :
La présence de plusieurs stérols très communs est signalée dans plusieurs espèces de Cleome:
β-sistostérol [27, 59], stigmastérol [33], stigmasta-5,23-dien-3-ol, 4-β-sitostérol-3-one, 24(S)-
éthyl-3α,5α-cyclocholest-22(E)-en-6-one, et cholest-4-en-3-one [61].
Ainsi que des formes hétérosidiques comme le daucostérol [29, 59], le stigmasta-5,24(28)-
diene-3β-O-α-L-rhamnoside [62], et le stigmastérol-3-O-β-D-glucopyranoside [33, 44].

24(S)-éthyl-3α,5α-cyclocholest- stigmasta-5,24(28)-diene-3β-O-α-L-rhamnoside
22(E)-en-6-one [62]
[61]

I.2.4. - GLUCOSINOLATES
Les glucosinolates sont des composés piquants formés par hydroxylation et décarboxylation
d'acides aminés, puis incorporation de soufre et glycosylation ; ils sont trouvés dans quelques
familles comme les Brassicaceae et Capparaceae. Deux glucosinolates sont trouvés dans C.
viscosa et C. gynandra: glucocapparin et glucocleomin [63].

I.2.5. – COMPOSES AZOTES :

Quatre composés azotés ont été identifiés : paradoxonine et paradoxenoline de C. paradoxa
[48], nevirapine de C. viscosa [64], et cleomin de C. arabica [34].

14
I.2.6. - METABOLITES DIVERS
Plusieurs autres composés sont isolés dans le genre Cleome comme:
- l’acide 2-amino-9-(4-oxoazetidin-2-yle)-nonanoïque appelé également l’acide lactame
nonanoïque (LAN) de la racine de C. viscosa [65].
- des alcanes: hexatriacontane et tetracontane de C. burmanni [61].
- des acides carboxyliques, des acides gras et des composés volatils dans les huiles
essentielles de C. viscosa [66] et C. gynandra [67].

I.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DU GENRE CLEOME

I.3.1 - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE :
De nombreuses espèces de Cleome sont utilisées en médecine traditionnelle :
- C. amblycarpa contre les infections bactériennes [68].
- C. arabica comme plante carminative et apéritive à propriété tonique [68].
- C. chrysantha comme vermifuge et antiseptique [68].
- C. pentaphyla dont les feuilles sont utilisées comme rubéfiantes et vésicantes, contre
l’otalgie, et sont appliquées en cas de furoncle. La décoction de la racine est fébrifuge. Les
graines sont employées comme vermifuge en interne pour l'expulsion des vers ronds, et en
usage externe comme adoucissant [69].
- C. brachycarpa comme plante apéritive, tonique, carminative et anti-émétique [68].
Elle possède une activité anti-inflammatoire, anti-rhumatismale, analgésique, et est utilisée
contre la gale [70, 71].
- C. gynandra contre la fièvre et l’otalgie, pour soigner les furoncles et les maladies de
peau [20, 71]. Au Vietnam, les feuilles peuvent être consommées comme un légume, et sont
utilisées pour soulager les douleurs lombaires [24, 72].
- C. viscosa: au Pakistan, la plante est utilisée contre les maladies des oreilles, la
dysenterie, les douleurs, les furoncles, la teigne [71]. En Arabie Saoudite et en Inde, la plante
est employée comme carminatif, vermifuge, antiseptique, sudorifique, irritant, rubéfiant et
vésicant, contre l’otalgie, les fièvres, les diarrhées et les furoncles [68-70]. Elle est utilisée par
les aborigènes d'Australie pour soulager les maux de tête. Aux États-Unis, les racines sont
utilisées comme vermifuge [69]. Au Vietnam, C. viscosa est utilisée contre les convulsions, les
maux d'oreilles et de tête [24, 72].

15
I.3.2 - ACTIVITES BIOLOGIQUES

I.3.2.1 - Antimicrobienne :
o L’activité antimicrobienne de l’extrait éthanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa se manifeste par une activité antifongique importante de
l’extrait des feuilles contre Rhizopus oligosporus, et contre Escherichia coli,
Proteus vulgaris et Pseudomonas aeruginosa pour les deux extraits [73].
o L’acide lactame nonanoique (LNA) est actif contre P. aeruginosa et
Staphylococcus aureus mais sans effet sur E. coli. Il stimule la croissance des
certains Aspergillus [65].
o Le quercétine 3-O-(2’’-acétyl)-glucoside montre une activité importante contre
S. aureus et E. coli [74].

I.3.2.2 - Analgésique :
o Des mesures d’activité antalgique de l’extrait méthanolique (250 mg/kg) des
feuilles de C. scaposa ont été réalisées chez la souris. L’extrait montre un effet
important (44 % d’inhibition) par rapport au diclofenac (28 % d’inhibition à 50
mg/kg) [75],
o Une autre étude montre que l'huile des graines de C. viscosa (125 mg/kg)
possède également une activité antalgique importante (plus de 91% inhibition)
chez la souris par rapport à l’aspirine (150mg/kg, 82 % inhibition) [76].

I.3.2.3 - Anti-inflammatoire :
o L’extrait méthanolique des feuilles de C. scaposa produit une réduction
importante (69 %) de l’œdème de la patte de la souris à la dose de 500 mg/kg
[75].
o Et le quercétine 3-O-(2’’-acétyl)-glucoside montre une réduction importante
(45 %) à la dose 200 mg/kg [74].

I.3.2.4 – Anti-émétique :
o L'activité anti-émétique a été évaluée en utilisant un modèle de vomissements
chez le poussin. L’extrait méthanolique des feuilles de C. scaposa (150 mg/kg)
réduit le nombre de vomissements de 50 % par rapport à 34 % pour la même
dose de chlorpromazine [75].
o Les extraits méthanoliques des feuilles de C. brachycarpa et de C. viscosa à la
même dose, réduisent de 58 % et 43 % respectivement le nombre de
vomissements [77].
o L’extrait méthanolique des feuilles de C. scaposa possède un effet encore plus
important avec 92 % de réduction du nombre de vomissements à la dose de

16
 125 mg/kg [76].

I.3.2.5 - Hépatoprotectrice :
o L’activité hépatoprotectrice est évaluée chez la souris traitée par le
paracétamol. L’extrait éthanolique des graines de C. viscosa montre un effet
hépatoprotecteur important aux doses de 300 et 400 mg/kg, confirmé par des
études histopathologiques [78].
o Les coumarinolignoïdes (mélange des cleomiscosins A, B et C) montrent des
effets importants contre l’hépato-toxicité induite au CCl4 chez l’animal à la
dose 50 mg/kg [79].
o De même façon, à la dose 21 µmol/kg les trois flavonoides de C. droserifolia
(5,3’-dihydroxy-3,6,7,4’,5’-pentaméthoxyflavone, 5’-hydroxy-3,6,7,3’,4’,5’-
hexaméthoxyflavone et 3’-méthoxy-3,5,4’-trihydroxy flavone-7-
neohespéridoside) montrent une activité hépatoprotectrice modérée par
rapport à la silymarine [29].

I.4. - PRESENTATION DE CLEOME CHELIDONII

I.4.1- DESCRIPTION BOTANIQUE
Cleome chelidonii (synonymies C. leschenautii Schult. & Schult.f., C. schraderi Schult. &
Schult.f., Aubion chelidonii L.f., Corynandra pulchella Schrad. Ex Spreng., Polanisia chelidonii
DC.) est une plante vivace annuelle dressée jusqu'à 0,5m de hauteur, et possédant des nœuds
espacés d’environ 12 cm.
C. chelidonii se rencontre dans l’Asie tropicale (de l'Inde jusqu'en Malaisie et en Indonésie),
dans les zones cultivées, les talus ou fossés à basse altitude [80]. Au Vietnam, ce sont des
plantes sauvages, communes dans toutes les provinces [24].
Les feuilles basales ont de 3 à 9 folioles, et les feuilles supérieures de 1 à 3 folioles. Les folioles
possèdent un pétiole de 2 à 8 cm selon leur maturité. Les folioles ont une forme lancéolée,
cunéiforme, crénelée à dentelée, ou arrondie.
Les fleurs de couleur rose à violette sont rassemblées en corymbes terminaux lâches. Les
bractées foliacées mesurent 1,5 mm et les bourgeons floraux ont ovoïdes. Les sépales ont une
forme elliptique et acuminée, les pétales sont ovales (longueur de 1,4 à 1,7 cm). Les étamines
sont nombreuses avec des filets pourpres de 1,5 à 1,8 cm de long. L’ovaire est sessile, glabre
et mesure de 8 à 10 mm.
Les fruits sont des capsules cylindriques, étroites, rétrécies à la base, de 9 cm avec un bec de
4 à 10 mm; les valves sont glabres, striées avec des nervures parallèles.
Les graines sont asymétriques, ovales ou en forme de virgule avec un diamètre de 1,25 à 1,8
mm. L’enveloppe externe de la graine est verruqueuse et recouverte d’une couche cireuse
[24, 81-83].

17
I.4.2- ETUDES CHIMIQUES ANTERIEURES

I.4.2.1 Polyphénols et alcaloïdes:

En 2011, Ganga Rao et al. ont déterminé la teneur en composés phénoliques et en alcaloïdes
totaux dans deux échantillons de C. chelidonii provenant de régions différentes d’Inde. Ils
n’ont pas trouvé de composés phénoliques dans l'extrait alcoolique des feuilles et des racines
de ces échantillons. Par contre des alcaloïdes sont détectés dans les extraits, et la teneur en
alcaloïdes totaux est différente entre les deux échantillons allant de 0,5 à 3,3 % [84].
En 2013, S. Ethadi et al. ont réalisé la même étude chimique sur un troisième échantillon de
racines de C. chelidonii d’Inde. Les résultats montrent que tous les extraits (extrait hexanique,
à l’acétate d’éthyle, méthanolique et hydro-alcoolique) renferment des polyphénols et des
alcaloïdes ; les extraits polaires (extraits méthanolique et hydro-alcoolique) sont les plus
riches : 3,9 et 3,1 % en polyphénols totaux, 3,3 et 3,7 % en alcaloïdes totaux [85].

I.4.2.2 Hétérosides flavonoïdiques :

En 1965, la rutine a été isolée à partir des fleurs fraîches de C. chelidonii [86] .
Plus récemment, 3 autres glycosides du quercétol ont été isolés et caractérisés des feuilles de
C. chelidonii [87]. Il s’agit des cleomesides A et B : 3-O-[2’’-O-β-D-glucopyranosyl]-α-L-
rhamnopyranyl,7-O-(4’’’’-acetyl)-α-L-rhamnopyranyl- quercétol et 3-O-[2’’-O-(6’’’-p-
coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl]-α-L-rhamnopyranosyl,7-O-(4’’’’-acetyl)-α-L-
rhamnopyranosyl-quercétol, et du désacétyl-cleomeside A.

Rutine [86] R1 R2 réf

Cleomeside A OAc H [87]
Cleomeside B OAc coumaroyl [87]
Deacétyl-cleomeside A H H [87]

I.4.2.3. Glucosinolates :
La présence de trois glucosinolates : la glucocapparine, la glucocleomine et la
glucoputranjivine a été mise en évidence dans les graines de C. chelidonii. [63, 88]

Glucocapparin [63] Glucocleomin [63] Glucoputranjivine [88]

18
I.4.2.4. Glucides :
En 2012, Aparadh et al ont comparé la teneur en hydrates de carbone au cours du
développement des feuilles de C. chelidonii. Les jeunes feuilles sont plus riches en glucides
totaux (18 %) par rapport aux feuilles matures (15%) et sénescentes (13%). Le même résultat
est obtenu pour l’amidon : 18% dans les feuilles jeunes. Par contre les sucres réducteurs et les
oligosaccharides se concentrent dans les feuilles matures (0,1% et 0,75%) [89].
L’ α-D-galactopyranoside d’éthyle a été isolé des feuilles de C. chelidonii [87].

I.4.2.5. Dérivés lipidiques :

L’huile des graines de C. chelidonii contient plusieurs dérivés d’acides et d’alcools gras [90] :
- le 6(Z),9(Z)-pentadecadien-1-ol (4,6%)
- l’ester éthylique de l’acide 9(Z),12(Z)-octadecadienoïque (70,6%),
- le 2-hydroxy-1-(hydroxyméthyle)éthyle 9(Z),12(Z)-octadecadienoate (2%)
- l’acide palmitique (15,5%)
- le palmitate d’éthyle (5,6%)
- le 2,4-decadienal (1,7%)
Des feuilles a été isolé un monoglycéride, le monostéarate de glycérol [87].

6(Z),9(Z)-pentadecadien-1-ol l’acide 9(Z),12(Z)-octadecadienoïque 2-hydroxy-1-(hydroxyméthyle)éthyle

9(Z),12(Z)-octadecadienoate

I.4.2.6 Autres métabolites :

L’adénine a été isolée des feuilles de C. chelidonii originaire du Vietnam [87].
D’autres métabolites semblent avoir été détectés dans les feuilles et racines de C. chelidonii
comme des anthraquinones, des stérols, des terpènes, des tanins, des protides mais sans
précision sur les méthodes de détection utilisées et leurs teneurs [85, 91].

19
I.4.3 - PROPRIETES BIOLOGIQUES

I.4.3.1 Usages en médecine traditionnelle :

En Inde, Cleome chelidonii est utilisée contre les rhumatismes, comme antalgique (maux de
tête, otite) et antipyrétique [92], dans le traitement de la colique, la dysenterie [93]. Elle
possède également des propriétés bénéfiques contre les maladies de la peau et comme
vermifuge [94].
Au Vietnam, la plante est généralement utilisée comme antipyrétique et anti-inflammatoire
pour le traitement de la fièvre, la grippe, la céphalalgie, la toux, la morsure de serpent,
l’inflammation rénale [72, 95].

I.4.3.2 Activités biologiques :

- Antimicrobienne :
L’extrait méthanolique des feuilles fraiches de Cleome chelidonii a été testé contre quatre
bactéries (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli et Pseudomonas
aeruginosa) et quatre microchampignons et levures (Aspergillus flavus, Aspergillus niger,
Candida albicans et Fusarium axixporum), en utilisant la méthode de diffusion par disques. Les
résultats montrent une activité antifongique importante avec une CMI (Concentration
Minimale Inhibitrice) entre 0,039 – 0,156 mg/ml, et une CMF (Concentration Minimale
Fongicide) entre 0,039 et 0,312 mg/mL. L’activité antibactérienne est surtout contre les
bactéries à Gram positif S. aureus (CMI 0,078 mg/mL ; CMB 0,078 mg/mL), et B. subtilis (CMI
0,078 mg/mL ; CMB 0,156 mg/mL) [96].
- Anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique :
L’extrait méthanolique de la plante entière possède une activité anti-inflammatoire avec une
réduction importante (55%) de l’œdème de la patte de souris à la dose de 200 mg/kg. Cet
extrait possède également une activité antalgique démontrée par le test de contorsion induit
à l’acide acétique (46% d’inhibition) et le test de la plaque chaude. Enfin son activité
antipyrétique est semblable à celle du paracétamol par le test à la levure de bière [92].
L’extrait méthanolique des racines de C. chelidonii possède une activité anti-inflammatoire
similaire avec un pourcentage d’inhibition de l’œdème de 53% [85].
Ces résultats confortent les usages traditionnels de C. chelidonii au Vietnam et en Inde.
- Anti-radicalaire et anti-oxydante :
L’activité anti-radicalaire des extraits de C. chelidonii a été évaluée in vitro avec trois tests de
piégeage de radicaux (superoxide, hydroxyle, DPPH - discussion voir partie travaux personnels
sur l’activité anti-radicalaire des flavonoïdes de C. chelidonii). Les extraits alcooliques des
feuilles et des racines possèdent une activité dose-dépendante sur les radicaux superoxide et
hydroxyle avec des CI50 de 130 à 200 µg, pour le test au DPPH les CI50 sont de 600 à 1520 µg.
L’activité anti-radicalaire d’extraits des racines a été également évaluée. Les résultats
montrent que l’extrait méthanolique est le plus actif avec une CI50 = 101 µg, 136 µg, et 75 µg
(superoxide, hydroxyle et DPPH respectivement) [84, 97] .

20
S. Ethadi et al. ont évalué l’activité anti-radicalaire et l’activité hépatoprotectrice de quatre
extraits (hydro-éthanolique, méthanolique, acétate d’éthyle, hexanique) des racines de C.
chelidonii chez le rat. Tous les extraits sont actifs et l’extrait méthanolique possède la
meilleure activité anti-radicalaire (CI50 = 101 mg sur le radical superoxide; CI50 = 136 mg sur le
radical hydroxyle; CI50 = 75 mg sur le radical DPPH). L’activité hépatoprotectrice est maximale
avec 81 % de SGPT ou ALAT (Sérum Glutamopyruvate Transférase ou Alanine-
AminoTransférase) pour l’extrait méthanolique à la dose de 400 mg/kg [85]. Cet extrait ne
présente pas de toxicité aiguë chez l’animal. Ces résultats sont similaires à l’étude de G. Battu
où l’extrait méthanolique des racines possède une activité hépatoprotectrice importante avec
la protection maximale 58% de SGOT (ou ASAT: Aspartate aminotransférase), 78% de SGPT et
67% de PAL (phosphatase alcaline) et 35% de Bilirubine totale) à la dose de 100mg/kg [97].
Les auteurs concluent que les activités anti-inflammatoires et hépatoprotectrices importantes
observées pour les extraits de C. chelidonii peuvent être dues à leur forte capacité de piéger
les radicaux libres.
L’extrait méthanolique de la plante entière induit les enzymes hépatiques (Glutathione S-
transférase GSP) de la phase II détoxifiante, et inhibe l’activité enzymatique de la phase I.
L’extrait possède une forte activité anti-oxydante en inhibant la peroxydation lipidique et la
lactate déshydrogénase (LDH). Cet extrait présenterait une activité chemopréventive et
inhibitrice de la promotion tumorale de cancers de l’estomac et de la peau [98].

21
II. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR DOLICHANDRONE SPATHACEA
II.1 BOTANIQUE DES BIGNONIACEAE ET DE DOLICHANDRONE
II.1.1 BIGNONIACEAE :
Les Bignoniaceae sont une famille de l'ordre des Lamiales, comprenant plus de 800 espèces
appartenant à environ 80 genres dont Bignonia, Catalpa, Dolichandra, Dolichandrone,
Fernandoa, Godmania, Markhamia, …..[99, 100]

Figure n° 2: Arbre de phylogénie botanique du genre Dolichandrone

Ces plantes se situent dans les régions tropicales et néotropicales d’Amérique, d’Asie,
d’Afrique, en particulier en Amérique du Sud. Certaines sont cultivées comme plantes
ornementales dans les régions tempérées.
Les Bignoniaceae sont des arbres, des arbustes ou des lianes. Le bois est jaune clair et tendre.
L'écorce est lisse. Les tiges sont marquées de cicatrices blanches.
Les feuilles sont imparipennées (1 à 3 folioles), dépourvues de stipules, opposées ou
occasionnellement verticillées. Les fleurs sont voyantes en forme de trompette et
zygomorphe. Les inflorescences sont en cymes ou en grappes. Le calice est tubulaire avec 5
lobes ou tronqué. La corolle tubulaire est formée de 2 lobes supérieurs et 3 lobes inférieurs.
L'androcée se compose de 5 étamines qui sont attachées au tube de la corolle. Le disque
nectarifère est de forme annulaire ou d’une cupule. Le gynécée est constitué d'une paire de
carpelles et d’un ovaire à 2 loges ; chaque loge contenant plusieurs ovules attachées à un
placenta axillaire. Le style est long avec un stigmate bifide.
Les fruits sont des capsules à déhiscence septique ou loculicide contenant de nombreuses
graines. Les graines sont plates avec des ailes très minces et translucides [99].

22
 Figure n° 3: Campsis radicans ou Tecoma radicans (Bignoniaceae) [101, 102]

A: Inflorescence B : Coupe longitudinale d’une fleur C : Coupe transversale du fruit

D : Fruit E : Coupe longitudinale du fruit F : photo personnelle de Areh Tal

II.2.2. Dolichandrone spathacea (L. f.) K. Schum.

Le genre Dolichandrone comprend actuellement dix espèces reconnues: D. alba, D.
alternifolia, D. arcuata, D. atrovirens, D. columnaris, D. falcata, D. filiformis, D. heterophylla,
D. serrulata et D. spathacea [103].

Au Vietnam, trois espèces sont répertoriées: D. spathacea, D. columnaris et D. serrulata [104].

Dolichandrone spathacea (L. f.) K. Schum. (Syn: Bignonia longissima Lour., B. rheedii Wall., B.
spathacea Linn. f., D. rheedii Seem., D. longissima K. Schum., Spathodea luzonica Blanco) est
un arbre lianescent de 5 à 15 m que l’on retrouve en Inde, en Asie-Pacifique, dans les îles du
Pacifique, le long des berges des cours d’eau, les marécages, les forêts côtières et les
mangroves [99, 105].
Les tiges portent des lenticelles et sont marquées de cicatrices ovoïdes visibles laissées par les
feuilles mortes. Les feuilles sont opposées, imparipennées (7 à 9 folioles) de 20 à 50 cm de
long, sans stipules, avec des pétioles de 0,5 à 1 cm de long. Les folioles sont minces, ovales à
lancéolées, à base arrondie et extrémité effilée.
Les fleurs sont blanches, longues et tubulaires, disposées en groupes de 3-4 aux pédoncules
courts et dressés. Le calice est tubulaire de 5 cm de long. La corolle est cylindrique de 15 cm
de long et avec un diamètre de 6,3 à 7,5 cm ; les lobes sont arrondis avec une marge crénelée.
Les fruits de couleur vert foncé à brun violacé sont des capsules déhiscentes en forme de
faucille de 25 à 50 cm de long, et 2 à 2,5 cm d’épaisseur. Les graines sont blanches, plates et
rectangulaires de 1,5 cm.
Au Vietnam, la plante se trouve le long des berges, dans les forêts côtières et les mangroves
du Centre au Sud du Vietnam [104].

23
II.2. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE DOLICHANDRONE
De nombreuses études chimiques menées sur les espèces de la famille Bignoniaceae ont
montré une forte diversité chimique avec la présence de différentes classes de métabolites
secondaires dont des iridoides qui sont considérés comme des marqueurs taxonomiques.
II.2.1. – ALCANES, ALCANOLS, ACIDES LIPIDIQUES :
Il s’agit majoritairement de composés en C-18 (n-octocosanol, acide octadecanoïque, et leurs
dérivés polyinsaturés et méthylés), en C-16 (acide hexadecanoïque), et C-6 (hexenal, hexenol)
[106-110].

II.2.2. – SUCRES ET DERIVES :

Peu de composés osidiques ont été isolés de D. falcata [106, 108] et D. atrovirens [107].

[106, 107] [106] [106]

II.2.3. – FLAVONOÏDES :
Neuf flavonoïdes courants à squelette flavone et flavonol, une catéchine, et un
anthocyanoside ont été isolés de D. atrovirens [111, 112], D. caude-felina [113], D.
heterophylla [114], D. stipulata [115], D. falcata [116, 117], D. platycalyx [118].

[113] [114] [115]

24
II.3.4. – QUINONES:
Une dizaine de quinones ont été isolées des écorces ou du bois de D. falcata [119], D. stipulata
(syn. Markhamia stipulata) [120], D. crispa [110]. Il s’agit de dérivés du lapachol et des
dimères à squelette tectol.

[119] [110] [110, 120] [119]

Trois hétérosides d’hydroquinone ont été isolés dans Markhamia stipulata (= D. stipulata)
[121].
R1 R2 R3 réf
Markhamioside F = H OH H [121]
Khaephuoside B = OMe OMe vanilloyle [121]
Sepuinoside K = H OH vanilloyle [121]

II.2.5. – PHENYLPROPANOÏDES :

II.2.5.1. – Phénols et acide-phénols :

Les acides gallique, caféique, férulique, hydroxybenzoïque, phtalique (ainsi que quelques-uns
de ses esters) ont été isolés de différentes espèces de Dolichandrone [109, 111, 112, 114].

II.2.5.2. – Glycosides estérifiés de phényléthanol :

Plusieurs esters hétérosidiques phénylpropanoïdiques constitués d’un oligoside et d’une
aglycone dihydroxyphényléthanol se retrouvent dans D. falcata [119], D. heterophylla [114],
D. serrulata [122], et Markhamia stipulata (= D. stipulata) [121]. La partie osidique est
estérifiée par un acide caféique ou férulique. Cette classe de composés est très courante dans
l’ordre des Lamiales. Les composés caractérisés pour les Dolichandrone sont des dérivés du
verbascoside (ou de l’actéoside).

25
 R1 R2 R3 R4 réf
H H H H [121]
H H Apiosyle H [121]
H Cafféoyle H H verbascoside
[114, 121]
cafféoyle H H H isoverbascosid
e
[114, 121]
H Cafféoyle Apiosyle H [121]
Ac Cafféoyle Apiosyle H [121]
cafféoyle H Apiosyle H [121]
féruloyle H Apiosyle Me [121]
cafféoyle H Arabinosyle H [121]
Ac Cafféoyle Arabinosyle H [121]
Ac Cafféoyle Galactosyle H [121]
H 3,4-diméthylcafféoyle H H [121]

Le verbascoside et l’isoverbascoside montrent des activités anti-radicalaires très importantes

avec des CI50 = 7,42 et 5,51 µM par rapport au trolox (CI50 = 16,6 µM) [123].

II.2.5.3. – Coumarines :
Seule la 3,4,5,6-tetrahydro-6,8a-epidioxy-4a-methyl-coumarine a été isolée de l’extrait
méthanolique des fleurs de D. falcata [106].

II.2.6. – LIGNANES :
Trois lignanes ont été identifiés: la paulownin et son acétate des écorces et du bois de D.
crispa [110], et le glucoside de (+)-lyorésinol des feuilles et branches de Markhamia stipulata
(= D. stipulata) [121].

Le (+)-lyoresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside montre une activité anti-radicalaire importante

avec une CI50 = 14,2 µM par rapport au trolox (CI50 = 16,6 µM) [123].

26
II.2.7. – TERPENOIDES ET STEROÏDES :

II.2.7.1 – Monoterpènes :
Parmi les monoterpènes, les iridoïdes représentent un groupe de cyclopenta-[c]-pyranne
important dans la famille Bignoniaceae [124, 125].
L’ixoside [122] et l’ajugol [121] ont été retrouvés dans les tiges de D. serrulata et D. spitulata.

D’autres monoterpènes ont été isolés des produits volatiles des fleurs de D. falcata [106]: 2,3-
pinanediol, 2,6-diméthyl-2-octene, et de l’huile essentielle de D. cauda-felina [109]: linalool
et son époxyde.

II.2.7.2. – Diterpènes :
A partir des mêmes extraits volatiles, deux diterpènes : 2,6,10,14-tetraméthylhexadecane et
3,7,11,15-tetraméthyl-2-hexadecènol, ont été caractérisés [108, 109]. De la vitamine E et du
β-tocophérol sont également présents.

II.2.7.3. – Phytostérols:
Quelques stérols très communs sont retrouvés dans les espèces de D. atrovirens, Markhamia
stipulata (= D. stipulata), D. crispa: α-sistostérol, β-sistostérol , γ-sistostérol, stigmastérol,
acétate de β et γ-sitostérols, benzoate de β-sitostérol [100, 110, 120].

II.2.7.4. – Mégastigmanes :
Deux ionones (α-ionone et α-damascenone) ont été isolées de D. cauda-felina [109] et le (6S,
9R)-roséoside de D. spitulata [121].

27
II.2.8. – COMPOSES DIVERS :
Des extraits méthanolique et chloroformique des fleurs de D. falcata, plusieurs métabolites
ont été repérés par GC-MS. Il s’agit de composés à squelette 3-methyl-2-cyclohexenone (=
seudenone), d’acide isobutyrique, de 1,1-dimethoxy-2-propanone, du 2-ethyl-p-crésol, et du
1,2,3,4-pentatraène [106].

Conclusion :
De cette étude bibliographique sur la chimie du genre Dolichandrone, on en conclut que
l’espèce Dolichandrone spathacea que nous avons sélectionnée, n’a pas été chimiquement
étudiée.
Il existe deux articles dans la littérature montrant la présence de tanins dans les écorces [126].
En revanche, Saiful et al., ont rapporté la présence de tanins, de triterpènes, de saponines
dans les tiges et les feuilles, et de flavonoïdes dans les feuilles [127].

II.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DES DOLICHANDRONE :

II.3.1. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE:
Les espèces de la famille Bignoniaceae sont largement utilisées en médecine traditionnelle
pour le traitement du cancer, des morsures de serpent, des maladies de la peau, des maladies
hépatiques, de l'épilepsie, du choléra, de la douleur, des problèmes urinaires, du paludisme,
des problèmes cardiaques et des maladies sexuellement transmissibles [128].
En Thaïlande, l'écorce de D. serrulata est utilisée comme fébrifuge, et anti-inflammatoire
[122]. Dans la médecine traditionnelle thaïlandaise, les feuilles et les écorces de Markhamia
stipulata (syn. D. spitulata) sont utilisées en usage externe pour traiter les maladies de la peau
ainsi qu’en usage interne comme analgésique [129].
En Inde, les écorces de D. falcata sont utilisées pour traiter les ménorragies et leucorrhées.
[130]. Les racines de Markhamia obtusifolia (syn. D. obtusifolia) sont utilisées dans le
traitement de l'ankylostome dans certaines parties de la Tanzanie [131].
En Thaîlande, les feuilles de D. spathacea sont utilisées comme antitumoral et antiseptique
[132]. En Indonésie, les feuilles de D. spathacea (L. f.) K.Schum. sont utilisées pour traiter le
muguet. Aux Philippines, la plante est utilisée pour traiter les maladies nerveuses et les
flatulences [99].
En Inde, les graines de D. spathacea sont utilisées comme antiseptique pour traiter les
maladies de la peau, et les feuilles en cas de bronchite [133, 134].
28
En Papouasie-Nouvelle-Guinée, les bourgeons floraux de D. spathacea sont appliqués
localement contre les infections oculaires [135].
Au Vietnam, les jeunes fruits de D. spathacea peuvent être consommés [104]. Cette plante
combinée avec d’autres, est utilisée comme médicament traditionnel pour le traitement de la
maladie hépatique, les maladies de peau et les allergies.
Nom du médicament: TIEU PHONG NHUAN GAN SO 40®; une boîte comprend 10 paquets de
4 g comprenant plusieurs petits pilules.

Figure n° 4: Médicament TIEU PHONG NHUAN GAN SO 40

(photo personnelle de NGUYEN Phuc Dam)

Composition du paquet :

Poids
Plante Poids (mg) Plante
(mg)

Cassia alata 1516 Passiflora foetida 68

Centella asiatica 620 Erythrina variegata 68

Andrographis Eleusine indica 68

348
paniculata

Bacopa monniera 348 Eclipta alba 60

Morus alba 276 Lasia spinosa 40

Fibraurea tinctoria 136 Acanthus ilicifolius 40

Curcuma longa 84 Dolichandrone spathacea 40

Pandanus tectorius 68 Gardenia augusta 28

Pistia stratiotes 68 Lonicera japonica 28

Cynara scolymus 68 Cyperus rotundus 28

29
Traitement : La maladie hépatique, les maladies de peau et les allergies, laxatif, anti-
inflammatoire et détoxifiant.
Posologies : Adulte: 1 ou 2 paquets /jour, dilués dans un verre d’eau 2 ou 3 fois avant le repas
(pour le laxatif, 1 paquet avec 1 verre d’eau tiède avant de coucher); Enfant de plus 5 ans: 2
pilules par année.

II.3.2. - ACTIVITES BIOLOGIQUES

II.3.2.1. - Activité antiradicalaire:

P. Aparna et al. ont évalué l’activité anti-radicalaire de l’extrait à l’acétate d’éthyle et des
composés isolés du bois de D. falcata. Les résultats montrent que cet extrait et deux composés
(dolichandroside A, verbascoside) possèdent une bonne activité anti-radicalaire (CI50 = 80, 31
et 107 µg/ml respectivement par le test au DPPH) [120].
L’activité anti-radicalaire mesurée sur quatre extraits des feuilles de D. spathacea (extrait
hexanique, extrait au dichlorométhane, extrait éthanolique et extrait aqueux) démontre que
l’extrait éthanolique possède la meilleure activité (CE50 = 5,17 ± 0,29 µg/ml sur le radical DPPH)
[132].

II.3.2.2. – Activité inhibitrice d’osidases :

P. Aparna et al. ont également évalué l’activité inhibitrice de l’α-glucosidase. Deux composés
(aloe saponarin II, dolichandroside A) et l’extrait à l’acétate d’éthyle sont très actifs avec des
CI50 = 18, 40 et 33 µg/ml respectivement sur l’α-glucosidase de levure, et des CI50 = 9, 19 et
30 µg/ml respectivement sur l’ α-glucosidase intestinale [120].
Les trois extraits hydrométhanoliques des feuilles, des écores et des fleurs de D. spathacea
possèdent un effet inhibiteur faible contre la sucrase et la maltase intestinale de rat. L’extrait
hydrométhanolique des feuilles possède l’activité la plus forte (26%) [136].

II.3.2.3. - Activité antimicrobienne:

Des mesures d'activité antimicrobienne de l’extrait au dichlorométhane des écores et des
racines de D. spathacea contre cinq bactéries (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans) ont été réalisées en utilisant
la méthode de diffusion par disques. Seul l’extrait au dichlorométhane des racines est actif
contre Bacillus subtilis avec une CMI de 100 µg/ml [137].
Les extraits méthanoliques des feuilles et des tiges de D. spathacea ont montré une activité
antimicrobienne contre six souches de Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline
(SARM) en utilisant la méthode de diffusion sur disques. L’extrait des tiges montre une activité
antibactérienne importante contre trois souches (N441, N829 et N1406) avec une CMI de 1,2
à 1,9 mg/ml par rapport à celle de l’oxacilline (0,78 mg/ml) [127].

30
III. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE SUR FLACOURTIA RUKAM
III.1 - BOTANIQUE DES SALICACEAE
Les Salicaceae forment une famille de l'ordre des Malpighiales, comprenant plus de 1000
espèces appartenant à 50 genres dont: Azara, Bennettiodendron, Dovyalis, Flacourtia, Idesia,
Ludia, Xylosma… Les plantes de la famille des Salicaceae se trouvent dans le monde entier
[138].

Figure n° 5: Arbre de phylogénie botanique du genre Flacourtia

Les Salicaceae sont des arbustes ou des arbres, glabres à pubescents. Les tiges sont
habituellement dressées à pendantes, avec des ramifications monopodiales ou sympodiales.

Les feuilles sont persistantes, caduques ou marcescentes ; elles sont généralement alternes
et disposées en spirale; les pétioles sont présents avec ou sans stipules ; le bord du limbe est
dentelé ou entier, parfois glandulaire.
Les fleurs sont en grappe ou en épi (chaton), et généralement non ramifiées parfois fasciculées
(racème de cymes). Les fleurs sont généralement unisexuées, parfois bisexuelles,
habituellement dioïques. Les étamines sont nombreuses (1-70) avec des filaments minces
distincts ou soudés à la base, et des anthères à déhiscence longitudinale. Le pistil comprend
un ovaire à 1-10 carpelles; chaque ovaire comprend 1-25 ovules; le style est distinct ou soudé
avec 2-4 stigmates.
Les fruits sont des capsules, des baies ou des drupes. Les graines sont parfois entourées d'une
aigrette arillée à poils soyeux et longs avec présence ou non d'endosperme.

Le genre Flacourtia comprend plusieurs espèces reconnues : F. amalotricha, F. cavaleriei, F.

degeneri, F. flavescens, F. helferi, F. indica, F. inermis, F. jangomas, F. kinabaluensis, F. latifolia,
F. mollipila, F. mollis, F. montana, F. occidentalis, F. oppositifolia, F. rukam, F. subintegra, F.
territorialis, F. tomentella, F. vitiensis, F. vogelii, F. zipelli [139].
Au Vietnam, quatre espèces de Flacourtia sont répertoriées: F. jangomas, F. rukam, F.
montana et F. indica [140].

31
III.2. - BIBLIOGRAPHIE PHYTOCHIMIQUE DU GENRE FLACOURTIA

Les études de la littérature sur les métabolites du genre Flacourtia ont porté essentiellement
sur trois espèces : F. indica (F. ramontchi), F. jongomas (syn. F. cataphracta Roxb. ex Willd.) et
F. inermis. La présence de nombreuses classes de métabolites secondaires comme des
terpénoïdes, des stéroïdes, et une richesse en composés phénoliques : flavonoïdes,
coumarines, acides aromatiques, lignanes, glycosides phénoliques, a été rapportée.
III.2.1. - FLAVONOÏDES

III.2.1.1. - Flavones
Deux flavones (l’apigénine et le chrysoeriol-7-O-β-D-glucopyranoside) sont isolés de F.
cataphracta Roxb (syn. jangomas) et F. indica [141, 142].

III.2.1.2. - Flavonols :
Huit flavonols de kaempférol et de quercétol sont identifiés par LC-MS de F. inermis, F. indica,
F. cataphracta (syn. jangomas), et F. ramontchi (syn. indica) [142-144].

R1 R2 réf
H H [142]
H Gal [143]
H Glu [143]
H Rut [143, 144]
OH Rut [143, 144]
OH H [143]
OH Gal [143]
OH Glu [143]
Gal = galactoyranose
Glu = glucopyranoe
Rut = rutinose

32
III.2.1.3. - Flavanols :
Trois flavanols : la (+)-catéchine, la catéchine-[5,6-e]-4β-(3,4-dihydroxyphenyl) dihydro-2(3H)-
pyranone et la mururin A sont isolées de F.indica [141, 145].

[145] [141] [141]

III.2.1.4. - Chalcone :
La 4,4’-dihydroxychalcone est isolée des écores de tiges de F. cataphrata (syn. jangomas)
[142].

III.2.2. - COUMARINES :
L’ostruthine est isolée des feuilles de F. jangomas [146], et l’esculine est identifiée par LC-MS
de F. inermis [143].

III.2.3. - TERPENOIDES :

III.2.3.1. - Monoterpènes :
Un seul mégastigmane, le flacoside C ou (6S,9R)-vomifoliol 9-O-α-L-rhamnopyranosyl-
(1′′6′)-β-D-glucopyranoside, a été identifié de F. ramontchi (syn. indica) [144].

33
III.2.3.2. - Diterpènes :
Un diterpène à squelette clerodane, le 14-tetrahydroclerodan-3-ene a été isolé de F.
cataphracta (syn. jangomas)[142].

III.2.3.3. - Triterpènes :
Quelques triterpènes sont isolés de F. cataphracta (syn. jangomas), F. jangomas, F. ramontchi
(syn. indica) [142, 147-149] : squalene, α-amyrine, β-amyrine, 3-β-acetoxy-D:A friedo-
oleanan-27,16-α-lactone, 21β-A’-neogammacer-22(29)-en-3-one et 3-β-cafféoate d’acide
bétulinique.

III.2.3.4. - Limonoides :
Deux limonoides, la limonine et la jangomolide, sont identifiés de F. jangomas [146].

III.2.3.5. - Phytostérols :
La présence des stérols comme les β-sistostérol, stigmastérol, et sistostérol-3-O-glucoside, est
signalée dans F. cataphracta (syn. jangomas), et F. ramontchi (syn. indica) [142, 150].

34
III.2.4. - LIGNANES :
Six lignanes ont été identifiés dans F. ramontchi (syn. indica) [144, 150].

III.2.5. – DERIVES AROMATIQUES DE GLUCOSE :

De nombreux composés glucosés se trouvent dans le genre Flacourtia qui sont
essentiellement des esters phénoliques et phénylpropaniques, ou des hétérosides
phénoliques de glucopyranose :

R1 R2 R3 R4 réf
H H H B2 [143]
H H H B3 [143]
H H H B2 [151]
Me H H B2 [151]
B4 H H B1 [148]
B4 B6 H B1 [148]
B7 H B2 H [152]
B7 H H B3 [152]
B7 H H B1 [148]
B8 H H B1 [153, 154]
B9 H H B3 [143]
B10 H H B5 [144]
B11 H H B5 [144]
B12 H H B2 [151]

R1 R2 R3 R4 R5 réf R1 R2 R3 R4 R5 R6 réf
H H B1 B1 H [145] B1 H H B1 H H [148]
B1 H H B1 B13 [148] H B1 H B1 H H [148]
B1 H H B1 B14 [148] B1 H H B1 B1 H [148]
H H H B1 B15 [155] H H H B1 B1 H [156]
H H H H H [144] H H B1 B1 Ac Et [145]
B1 H H B1 B16 [148] H H H B1 H H [141, 144]
H H H B1 H [141, 144, 148, 155] B1 H H H H H [141]

35
III.2.6. - DERIVES D’ACIDE QUINIQUE
De nombreux dérivés d’acide quinique sont isolés ou identifiés par LC-MS dans le genre
Flacourtia (F. inermis, F. cataphracta (syn. jangomas), F. indica) [142, 143, 156].

R1 R2 R3 R4 réf
H H H H [156]
H Cafféoyle H H [143]
H Cis-cafféoyle H H [143]
H H Cafféoyle H [142, 143]
H H H Cafféoyle [143]
H H H Cis-cafféoyle [143]
H Cafféoyle Cafféoyle H [143]
H Cafféoyle H Cafféoyle [143]
H H Cafféoyle Cafféoyle [143]
H férulolye H H [143]
H Coumaroyle H H [143]
H Cafféoyle Glu H [143]
H Cafféoyle H Glu [143]
H Glu H Cafféoyle [143]
H H Glu Cafféoyle [143]
Me H H Cafféoyle [156]
Me Cafféoyle H H [143, 156]
Me H Cafféoyle H [143, 156]
Me H H Cafféoyle [143]
n-Bu H H Cafféoyle [156]
n-Bu Cafféoyle H H [156]

III.2.7. – ACIDES, PHENOLS ET ACIDES-PHENOLS :

Des acides-phénols et autres composés similaires ont été identifiés dans F. inermis, F. indica
et F. cataphracta (syn. jangomas) [142, 155, 157]: le pyrocatechol, l’acide 2,3-
dihydroxybenzoique, l’acide 3,4-dihydrobenzoique, la vanilline, le 3,5-di-tert-butyl-4-
hydroxyanisole, l’acide benzoïque, l’acide 1,2-benzenedicarboxylique et d’autres acides
carboxyliques [147].

III.2.8. - METABOLITES DIVERS :

L’acide malique est isolé de F. inermis [156], et plusieurs autres composés sont identifiés de
F. indica comme le glycérol, le 2-butyl-cyclobutanecarboxylate, et des acides gras [142, 147].

36
III.3. - PROPRIETES BIOLOGIQUES DU GENRE FLACOURTIA
III.3.1. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE :

- Flacourtia jangomas est utilisé pour traiter la nausée, la diarrhée, la bronchite et la toux. Les
feuilles et l'écorce sont appliquées contre les saignements des gencives et les dents
douloureuses. Les racines sont utilisées en usage externe pour traiter les maladies de la peau
[158].

- En Inde et au Bangladesh, les fruits de F. indica sont utilisés pour le traitement de la jaunisse.
Sa gomme-résine est utilisée contre le paludisme à Madagascar et aux Comores, et contre le
choléra [141, 159]. Les écorces sont prescrites comme fébrifuge, et les racines sont utilisées
en cas de coliques néphrétiques [159]. En Thaïlande, les feuilles sont utilisées comme
vermifuge, les écorces contre les rhumatismes et l'enrouement. Les racines et les cendres sont
utilisées pour le traitement de troubles rénaux [160]. Les utilisations traditionnelles en Inde
de F. ramontchi (syn. indica) sont similaires : traitement de pathologies cutanées, traitement
de douleurs et de rhumatismes, de néphropathies. Les graines broyées avec le curcuma et le
gingembre sont utilisées pour réduire la douleur après l’accouchement [161].
- En Papouasie-Nouvelle-Guinée, F. zippelii (syn. inermis) est utilisé contre la diarrhée, la
dysenterie, les blessures, les maladies féminines et comme tonique [162].
- Au Bénin, les feuilles de F. flavescens sont utilisées pour le traitement de la dysenterie, la
diarrhée et les infections de la peau [163].
La richesse et la diversité en composés phénoliques des Flacourtia dont F. indica et F.
jangomas, justifient leurs nombreux effets bénéfiques traditionnels sur la peau et les troubles
intestinaux.
III.3.2. - ACTIVITES BIOLOGIQUES :
La majorité des activités biologiques et pharmacologiques rapportées de la littérature porte
sur les deux mêmes espèces utilisées de façon traditionnelle F. indica et F. jangomas, et dont
l’étude phytochimique a été accomplie.
De nombreuses activités ont été ainsi mises en évidence pour les extraits apolaires et polaires
des parties aériennes de ces deux espèces. Les résultats positifs ont été obtenus
principalement sur les extraits méthanolique ou éthanolique. Là aussi la richesse et la diversité
en composés phénoliques et aromatiques polaires expliquent certainement celles-ci.

III.3.2.1. - Activité anti-oxydante :

Les extraits bruts obtenus au méthanol ou à l’éthanol des 2 espèces de Flacourtia ont fait
l’objet de plusieurs mesures d’activité anti-radicalaire. Les résultats sont consignés dans le
tableau n° 1, et montrent que leur activité anti-radicalaire est importante quelque soit le test
utilisé et le radical piégé.

37
 Tableau n° 1: Activité anti-radicalaire des Flacourtia

Espèce Extrait Test/radical Résultat Témoin positif Réf

MeOH 82 à 95 %
Feuilles ; DPPH d’inhibition -carotène 99 % [164]
Racines (à 50 µg/ml)
41,5 %
MeOH Acide ascorbique
DPPH (à 80 mg [165]
Fruit peau
d’échantillon)
MeOH Acide ascorbique
DPPH CI50 = 18 µg/ml
Feuilles CI50 = 8 µg/ml
F. indica H2O
DPPH CI50 = 26 µg/ml
Feuilles
[166]
MeOH Acide ascorbique
Oxyde nitrique CI50 = 62 µg/ml
Feuilles CI50 = 26 µg/ml
H2O
Oxyde nitrique CI50 = 75 µg/ml
Feuilles
18,75 %
MeOH Acide ascorbique
superoxyde (à 80 mg [165]
Fruit peau
d’échantillon)
Acide gallique
DPPH CI50 = 2,2 µg/ml
CI50 = 1,82 µg/ml
Quercétine
hydroxyle CI50 = 49 µg/ml
CI50 = 25 µg/ml
F. sepiaria (syn. MeOH Acide ascorbique
superoxyde CI50 = 45 µg/ml [167]
indica) Feuilles CI50 = 30 µg/ml
Cucurmine
Oxyde nitrique CI50 = 53,7 µg/ml
CI50 = 22,4 µg/ml
Chélation d’ions Acide ascorbique
CI50 = 58,4 µg/ml
ferreux CI50 = 38 µg/ml
Acide ascorbique
DPPH CI50 = 28 µg/ml
CI50 = 15 µg/ml
EtOH
F. ratmontchi Acide ascorbique
Parties Oxyde nitrique CI50 = 30 µg/ml [161]
(syn. indica) CI50 = 18 µg/ml
aériennes
Acide ascorbique
superoxyde CI50 = 34,6 µg/ml
CI50 = 22 µg/ml
EtOH Acide ascorbique
F. jangomas DPPH CI50 = 11 µg/ml [168]
Feuilles CI50 = 5 µg/ml

III.3.2.2. - Activité hépatoprotectrice :

L’extrait à éther de pétrole des parties aériennes de F. indica montre un effet
hépatoprotecteur important à la dose de 350 mg/kg chez la souris traitée par le methotrexate,
confirmé par des études histopathologiques [169]; de même, l’extrait aqueux des feuilles
contre l’hépato-toxicité induite au CCl4 aux doses de 250 et 500 mg/kg [170].
Nazneen et al. ont également évalué l’activité hépatoprotectrice de trois extraits des parties
aériennes de F. indica contre l’hépatotoxicité du paracétamol. Les extraits à l’éther de pétrole
et à l’acétate d’éthyle (à la dose de 1,5 g/kg) possèdent une activité hépatoprotectrice
importante, avec une réduction significative des taux sériques en aspartate (AST) et alanine
transaminases (ALT) [171].

38
III.3.2.3. - Activité antimicrobienne :
Plusieurs mesures d’activité antimicrobienne sont reportées dans la littérature pour les
extraits des deux espèces : F. indica et F. jangomas (Tableau n° 2). Les extraits méthanoliques
des parties aériennes sont également les plus actifs.

Tableau n° 2: Activité antimicrobienne des Flacourtia

Micro-organisme Espèce/partie Extrait Résultat Réf
F. sepiaria (syn. indica)
CHCl3 CMI 10 mg/ml [172]
(racines)
F. jangomas (racines) CHCl3 CMI 5 mg/ml [172]
CHCl3 CMI 300 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 300 µg/ml
[161]
(parties aériennes) EtOH CMI 300 µg/ml
Bacillus cereus H2O CMI 300 µg/ml
F. zippelii (syn. inermis) 10 mm
MeOH
(feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH [162]
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 14 mm
MeOH
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. sepiaria (syn. indica)
CHCl3 CMI > 20 mg/ml
(racines)
B. megaterium [172]
CMI 1,25 mg/ml
F. jangomas (racines) CHCl3
CHCl3 CMI 300 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 400 µg/ml
[161]
(parties aériennes) EtOH CMI 300 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
B. subtilis MeOH
(feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH [162]
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 12 mm
Microsporus roseus MeOH [162]
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 10 mm
Staphylococcus albus MeOH [162]
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 10 mm
MeOH
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. flavenscens
MeOH CMI 1,5 mg/ml [163]
(syn. Indica) (feuilles)
CHCl3 CMI 300 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 300 µg/ml
[161]
(parties aériennes) EtOH CMI 300 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
S. aureus
F. zippelii 8 mm
MeOH
(syn. inermis) (feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH [162]
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 12 mm
MeOH
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 10 mm
S. epidermidis MeOH [162]
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
39
 F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(feuilles) (à 4 mg/disque)
Streptococcus faecalis [162]
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. flavenscens
MeOH CMI 2,5 mg/ml [163]
(syn. Indica) (feuilles)
F. sepiaria (syn. indica)
CHCl3 CMI > 20 mg/ml
(racines) [172]
F. jangomas (racines) CHCl3 CMI 0,325 mg/ml
CHCl3 CMI 400 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 400 µg/ml
[161]
Escherichia coli (parties aériennes) EtOH CMI 200 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH [162]
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 10 mm
MeOH
(écorces des racines) (à 4 mg/disque)
F. flavenscens
Enteroccoccus faecalis MeOH CMI 0,625 mg/ml [163]
(syn. Indica) (feuilles)
CHCl3 CMI 400 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 300 µg/ml
Proteus vulgaris [161]
(parties aériennes) EtOH CMI 200 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
Pseudomonas F. flavenscens
MeOH CMI > 10 mg/ml [163]
aeruginosa (syn. Indica) (feuilles)
CHCl3 CMI 500 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 300 µg/ml
[161]
(parties aériennes) EtOH CMI 200 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
Salmonella typhi (feuilles) (à 4 mg/disque)
F. zippelii (syn. inermis) 8 mm
MeOH
(écorces des tiges) (à 4 mg/disque) [162]
12 mm
F. zippelii (syn. inermis)
MeOH (à 4 mg/disque)
(écorces des racines)
F. zippelii (syn. inermis)
MeOH 8 mm (à 4 mg/disque)
(feuilles)
F. zippelii (syn. inermis)
S.typhymurium MeOH 8 mm (à 4 mg/disque) [162]
(écorces des tiges)
F. zippelii (syn. inermis)
MeOH 12 mm (à 4 mg/disque)
(écorces des racines)
F. sepiaria (syn. indica)
CHCl3 CMI 10 mg/ml
Shigella shiga (racines) [172]
F. jangomas (racines) CHCl3 CMI 1,25 mg/ml
CHCl3 CMI 300 µg/ml
F. ramontchi CH3COCH3 CMI 200 µg/ml
Candida albicans [161]
(parties aériennes) EtOH CMI 200 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml
CHCl3 CMI 300 µg/ml
Saccharomyces F. ramontchi CH3COCH3 CMI 300 µg/ml
[161]
cerevisiae (parties aériennes) EtOH CMI 200 µg/ml
H2O CMI 300 µg/ml

40
III.3.2.4. - Activité antiparasitaire :
Les extraits des feuilles de F. indica possèdent une activité anthelminthique importante contre
Pheretima posthuma (lombric) à la dose de 100 mg/ml. L’extrait méthanolique est le plus actif,
provoquant la mort des vers en 30 minutes par rapport au citrate de pipérazine (18,6 min)
[167].
Certains composés isolés des parties aériennes de F. indica ont été évalués sur une souche
résistante à la chloroquine de Plasmodium falciparum. Le poliothrysoside (ester phénolique
de glucose) possède une activité antipaludique très importante avec une CI50 = 7,4 µM et un
bon indice de sélectivité (>28) par rapport à la chloroquine [155].

Koneni V. Sashidhara et al. ont évalué l’activité antipaludique de composés isolés de l’extrait
éthanolique de feuilles et de ramilles de F. indica sur une souche sensible à la chloroquine
(3D7) et une souche résistante à la chloroquine (K1). Les résultats montrent que le dérivé de
catéchine (catechin-[5,6-e]-4β-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone) est le plus
actif contre la souche 3D7 avec une CI50 = 1,1 µM, tandis que le mururine A possède une
activité très importante avec une CI50 = 1,2 µM et 1,3 µM contre les souches 3D7 et K1, et un
bon indice de sélectivité (48,7) [141].
Ces résultats confirment l’usage en médicine traditionnelle qui en est fait aux Comores pour
traiter le paludisme.
De même, les extraits polaires des feuilles et racines de F. flavescens ont été évalués sur une
souche résistante à la chloroquine de Plasmodium falciparum. Les extraits
hydrométhanoliques possèdent l’activité antipaludique la plus élevée (CI50 = 1,55 µg/ml)
[173].

III.3.2.5. - Activité anti-diabétique :

Ajay Kumar Singh et al. ont évalué l’activité anti-diabétique de l’extrait méthanolique des
feuilles et tiges de F. jangomas sur des rats diabétiques. La glycémie à jeun a été réduite
significativement et le taux de glycogène augmenté [174].

III.3.2.6. - Activité anti-diarrhéique :

L’extrait éthanolique des feuilles de F. jangomas possède une activité anti-diarrhéique
importante avec une inhibition de 85 % de la défécation aux doses de 500 mg/kg, par rapport
au lopéramide à la dose de 3 mg/kg [168]. H.M. Sayed et al. ont également retrouvé cette
activité anti-diarrhéique pour l’extrait méthanolique foliaire de F. cataphracta à la dose
300mg/kg [142].

41
III.3.2.7. - Activités analgésique, anti-pyrétique et anti-inflammatoire :
L’extrait éthanolique des feuilles de F. jangomas possède une activité antalgique chez la souris
(test de contorsion induit à l’acide acétique) avec 45 % et 67 % d’inhibition aux doses de 250
et 500 mg/kg [168].
Les extraits chloroformique et à l’acétate d’éthyle des feuilles de F. cataphracta (syn.
jangomas) possèdent une activité anti-pyrétique importante [142].
Tous les extraits des feuilles de F. cataphracta (syn. jangomas) possèdent une activité anti-
inflammatoire aux doses de 200 et 400 mg/kg par rapport à l’indométhacine [142].
De même pour les extraits des feuilles de F. ramontchi (syn. indica) contre l’œdème de la
patte de souris suite à l’injection de carragénine, à la dose de 150 mg/kg [175].

III.3.2.8. - Activité anti-cancéreuse :

Pachute et al. ont signalé une activité anticancéreuse de l’extrait éthanolique des feuilles de
F. indica contre le carcinome d'ascite Ehrlich (CAE). Cet extrait augmente la longévité des
souris traitées par rapport au groupe contrôle [159].
L’extrait méthanolique des parties aériennes possède une activité anti-proliférative et pro-
apoptotique importantes sur les cellules du cancer du côlon humain (HCT116) suite à leur
traitement par 500 µg/ml pendant 24 heures [176].

III.3.2.9. - Activité cardioprotectrice :

L’extrait éthanolique des feuilles de F. indica peut prévenir les dommages cardiaques induits
par la doxorubicine. Le prétraitement avec cet extrait (250 et 500 mg/kg) modère
significativement les modifications des paramètres sériques de l’infarctus du myocarde (GPT,
GOT CPK, LDH), réduit le profil lipidique (VLDL, TG, CT), et maintient les paramètres anti-
oxydants (SOD, GSH) [147].

III.4. - PRESENTATION DE Flacourtia Rukam Zoll. & Moritzi

III.4.1. - DESCRIPTION BOTANIQUE
Flacourtia rukam Zoll. & Moritzi (syn: F. cataphracta sensu Blume, F. edulis Griff, F. euphlebia
Merr, F. megaphylla Ridley, F. peninsula Elmer, F. sulcate Elmer, Hisingera grandifolia Turcz)
est un arbre de 5 à 20 m de haut, très ramifié, à feuilles persistantes et à écorce brun foncé.
Ses noms vernaculaires français sont : Prunier café, Prunier de Chine, Prunier malgache.
L'espèce croît à Madagascar et en Malaisie, et plus rarement dans les Moluques et la Nouvelle-
Guinée. Elle a été introduite dans l'Indo-Chine, la Chine du Sud et à Taiwan, en Thaïlande, en
Inde et sous les tropiques. Elle se développe bien dans des conditions tropicales chaudes et
humides jusqu'à 2100 m, dans la forêt primaire ou secondaire, souvent le long des rivières à
mi-ombre ou en plein soleil.
Le tronc possède des épines ligneuses, mais peut être dépourvu d’épines dans les formes
cultivées. Les rameaux sont glabres à densément pubescents quand ils sont jeunes.

42
Les feuilles juvéniles sont flasques, tombantes, rose-rouge à brun. Les feuilles matures
mesurant 6-16 × 4-7 cm, sont oblongues, lancéolées, acuminées, à marge finement dentée,
glabres ou pubérulentes.
Les inflorescences sont axillaires et se composent de nombreuses grappes de fleurs vert-
jaunâtre, inodores, apétales avec de 4 à 6 sépales, et généralement unisexuées. Les fleurs
mâles possèdent de nombreuses étamines et les fleurs femelles sont constituées de 4-6 styles
libres à stigmate bilobé.
Le fruit est une baie globuleuse juteuse et acidulée de 2-2,5 cm de diamètre, vert pâle à rose
ou vert-violacé à violet foncé à maturité. Les styles persistants décrivent une cicatrice
circulaire. Chaque fruit renferme de 4-7 graines dures plates [158].
Au Vietnam, la plante se trouve dans plusieurs régions du Nord au Sud-est et les fruits sont
consommés [140].
III.4.2. - USAGES EN MEDECINE TRADITIONNELLE :
En Malaisie, le jus du fruit immature de F. rukam est utilisé pour le traitement de la diarrhée,
de la dysenterie, et de la dysménorrhée. Les racines sont également utilisées pour soigner les
coliques abdominales. Le jus des feuilles est appliqué sur les paupières enflammées, et les
feuilles sont également utilisées contre la variole et les névralgies.
A Java, la poudre de feuilles est saupoudrée sur des plaies. Aux Philippines, les racines sont
utilisées en usage interne chez les femmes après l'accouchement, pour traiter les allergies, la
pneumonie, les maladies hépatiques, l'ulcère de l'estomac et l'anémie [158].
En Thaïlande, le fruit mûr de F. rukam est consommé, servi en salade de fruits épicée, pour
faire de la confiture ou des confiseries. Les jeunes feuilles sont consommées crues. En
médecine traditionnelle on retrouve les mêmes utilisations que celles décrites en Malaisie
[177].
III.4.3. - PHYTOCHIMIE ET ACTIVITE ANTI-OXYDANTE :
L’espèce Flacourtia rukam Zoll. & Moritzi n’a pas été chimiquement étudiée. Seule
l’estimation du contenu phénolique dans les fruits a été évalué à 40 mg EAG/100 g (EAG =
équivalent en acide gallique) [178].
E.H. Khairul Ikram et al. ont évalué l’activité anti-oxydante de l’extrait méthanolique des fruits
par les méthodes FRAP et au DPPH. Les résultats montrent que cet extrait possède une activité
importante avec une valeur de FRAP de 2,09 mM, et 78 % d’inhibition à la dose 25 µg/ml pour
le DPPH [178].

43
 DEUXIEME PARTIE :
RESULTATS ET DISCUSSION

44
IV. CLEOME CHELIDONII
IV.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES PARTIES AERIENNES DE CLEOME
CHELIDONII
IV.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS
Les parties aériennes de Cleome chelidonii réduites en poudre sèche (1 kg) ont été extraites
par cinq percolations successives à l’aide de solvants de polarité croissante : éther de pétrole,
chloroforme, acétate d’éthyle, méthanol et le mélange CH3OH – H2O (80 – 20) (Schéma n° 1).
Sont obtenus cinq extraits numérotés de 1 à 5.
La comparaison par CCM des 5 extraits, montre que les extraits méthanolique (extrait 4) et à
l’acétate d’éthyle (extrait 3) sont les plus riches en composés et nous avons choisi de purifier
les métabolites qu’ils contiennent.
Le fractionnement de l’extrait 3 à l’acétate d’éthyle a été effectué par une VLC (Vacuum Liquid
Chromatography) sur silice de phase normale, puis les composés des fractions obtenues ont
été purifiés par une combinaison de chromatographies sur colonne, chromatographies Flash,
HPLC préparative et HPLC semi-préparative, ce qui a conduit à l’isolement de 15 composés
(Schéma n° 2).
Le fractionnement de l’extrait 4 méthanolique est réalisé de façon similaire mais en utilisant
une silice de phase inversée (C18) pour la VLC. La purification des composés contenus dans les
fractions de VLC, a permis d’isoler 16 composés (Schéma n° 3).
Schéma n° 1 : Extraction des parties aériennes de Cleome chelidonii

45
Schéma n° 2 : Purification des composés de l’extrait 3 (acétate d’éthyle)

46
Schéma n° 3 : Purification des composés de l’extrait méthanolique (extrait 4)

47
IV.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES FLAVONOÏDES
Seize flavonoïdes (quatorze dans l’extrait 4 méthanolique et deux dans l’extrait 3 à l’acétate
d’éthyle) ont été isolés et identifiés comme étant des dérivés estérifiés de 3,7-O-diglycosides
de flavonols. Trois flavonoïdes CF-14, CF-15 et CF-16, possèdent le kaempférol comme génine
et les treize autres CF-1 à CF-13 sont des glycosides de quercétol. Leurs parties osidiques sont
constituées de deux sucres : glucose et rhamnose, et cette partie osidique est identique dans
tous les composés isolés. Les différences structurales et les originalités de ces composés
résident dans la nature d’une partie estérifiant un ou plusieurs hydroxyles osidiques.

IV.1.2.1. - Structure des aglycones

 Quercétol :
Les spectres de RMN 1H (Tableau n° 3) des composés CF-1 à CF-13 montrent les signaux
caractéristiques d’un flavonol. Cinq signaux aromatiques dont deux fins doublets avec une
constante de couplage faible Jméta = 2.1 Hz sont attribués aux H-6 (δH ppm 6.49) et H-8 (δH ppm
6.75) du cycle A. Les trois protons restants forment le système ABX d’un cycle B ortho-para
trisubstitué, attribuables aux H-2’ (δH ppm 7.41, d, J=2.1Hz), H-5’ (δH ppm 6.96, d, J=8.3Hz), H-6’
(δH ppm 7.37, dd, J=8.3 et 2.1Hz). Ces signaux suggèrent la présence de la partie quercétine dans
les composés CF-1 à CF-13.
De même, sur les spectres de RMN 13C et DEPT (Tableau n° 3) on dénombre 15 carbones sp2
situés entre δC ppm 94.2 – 178.4 dont un carbonyle et 7 carbones quaternaires oxygénés. Tous
les carbones de la partie aglycone sont attribués grâce aux corrélations HMBC détectées entre
H-6/C-5, C-7, C-8, C-10, et H-8/ C-4, C-6, C-7, C-9, C-10, et H-2’/C-2, C-1’, C-3’, C-4’,C-6’, et H-
5’/C-2, C-1’, C-3’, C-4’, C-6’, et H-6’/C-2, C-2’, C-4’. Ces déplacements chimiques sont en accord
avec ceux décrits pour le quercétol [179].

48
Tableau n° 3 : RMN 1H et 13C du quercétol dans les composés CF-1 à CF-13

49
  Kaempférol :
La partie aglycone de CF-14, CF-15 et CF-16 se distingue par seulement quatre protons
aromatiques formant les deux groupes caractéristiques du kaempférol (Tableau n° 4):
- deux fins doublets aromatiques avec une constante de couplage faible Jméta = 2.1 Hz
pour H-6 (δH ppm 6.52) et H-8 (δH ppm 6.80) du cycle A.
- deux signaux s’intégrant chacun pour 2H, formant le système AA’BB’ du cycle B : H-
2’/H-6’ (δH ppm 7.82, d, J= 8.8Hz), et H-3’/H-5’ (δH ppm 6.89, d, J= 8.8Hz).
Sur les spectres de RMN 13C et DEPT (Tableau n° 4) 15 carbones sont situés entre δC ppm 94.2 –
178.4 caractéristiques du kaempférol dont un carbonyle et seulement 6 carbones
quaternaires oxygénés. Comme précédemment, les corrélations HMBC confirment
l’attribution des carbones du kaempférol [180].

Tableau n° 4 : RMN 1H et 13C du kaempférol des composés CF-14 à CF-16

Partie aglycone : kaempférol

4.9.9.3 (i2) CF-14 3.13.25.12.5 CF-15 3.13.25.12.6 CF-16 Kaempférol
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

2 158.6 158.7 158.7 145.6

3 135.4 135.5 135.5 135.5

4 178.4 178.4 178.5 175.3

5 161.6 161.6 b 161.6 a 161.5

6 6.52 (d, 2.1) 99.3 6.55 (d, 2.1) 99.2 6.57 (d, 2.2) 99.3 6.25 (d, 2.0) 98.6

7 162.0 161.7 b 161.8 a 163.3

8 6.80 (d, 2.1) 94.3 6.80 (d, 1.9) 94.4 6.82 (d, 2.2) 94.5 6.56 (d, 2.0) 93.6

9 156.8 156.7 156.7 156.9

10 106.3 106.0 106.5 102.7

1’ 120.9 120.9 120.9 122.8

2’ 7.82 (d, 8.8) 130.7 7.82 (d, 8.7) 130.7 7.85 (d, 8.9) 130.7 7.37 (d, 8.8) 132.5

3’ 6.89 (d, 8.8) 115.2 7.00 (d, 8.7) 115.2 6.99 (d, 8.9) 115.2 6.72 (d, 8.8) 116.1

4’ 160.5 160.5 160.6 161.7

5’ 6.89 (d, 8.8) 115.2 7.00 (d, 8.7) 115.2 6.99 (d, 8.9) 115.2 6.72 (d, 8.8) 116.1

6’ 7.82 (d, 8.8) 130.7 7.82 (d, 8.7) 130.7 7.85 (d, 8.9) 130.7 7.37 (d, 8.8) 132.5

50
IV.1.2.2. - Structure de la partie osidique

 Hydrolyse acide des extraits:

L’hydrolyse acide de l’extrait 4 méthanolique et de l’extrait 3 à l’acétate d’éthyle, a permis
d’identifier deux sucres : le glucose et le rhamnose. Après séparation, l’analyse par HPLC
chirale confirme leur configuration naturelle soit le D-glucose et le L-rhamnose.

HPLC analytique de l’hydrolysat de l’extrait 4 de C. chelidonii

HPLC chirale des extraits 3 et 4 de C. chelidonii

 Spectrométrie RMN :
La partie osidique de tous les flavonoïdes CF-1 à CF-16 est identique et composée de trois
unités osidiques caractérisées par trois protons anomériques à δH ppm 5.58 (d, J=1.1Hz), 5.68
(d, J=1.0Hz) et 4.41 (d, J=7.8Hz), deux méthyles à δH ppm 1.28 (d, J=6.2Hz) et 1.01 (d, J=6.2Hz),
et un massif entre δH ppm 3.18 – 4.31 pour les autres protons osidiques (Tableau n° 5)
Cet ensemble de données traduit la présence de deux unités de L-rhamnose et une unité de
D-glucose.
51
L’HSQC permet de lier ces protons à leurs carbones osidiques respectifs: trois carbones
anomériques à δC ppm 98.5, 101.3 et 105.8, douze CHOH entre δC ppm 69.3 – 81.5, un CH2-OH à
δC ppm 60.8, et deux CH3 à δC ppm 16.7 et 16.3.
Les résultats obtenus de l'analyse des spectres COSY, TOCSY et HMBC nous ont permis
d'identifier les trois sucres :
- A partir de la position anomérique à δH ppm 5.68 (d, 3J1’’-2’’=1.0Hz, H1’’) et δC ppm 101.3,
un α-L-rhamnopyranose est identifié avec H-1’’et H-2’’ diéquatoriaux, et les H-3’’, H-
4’’ et H-5’’ trans-diaxiaux (3J > 9 Hz), et son CH3 situé δH ppm 1.01 (d, J=6.2Hz, H6’’).
- Le second doublet à δH ppm 4.41 (d, J=7.8Hz, H1’’’) (δC ppm 105.8), est un β-D-
glucopyranose caractérisé par la position trans-diaxiale des H-1’’’, H-2’’’, H-3’’’, H-4’’’
et H-5’’’ (3J > 7,5 Hz).
- Le troisième proton anomérique situé à δH ppm 5.58 (d, 3J1’’-2’’=1.1Hz, H1’’’’) (δC ppm 98.5)
a été déterminé comme un second α-L-rhamnopyranose par son CH3 situé à δH ppm 1.28
(d, J=6.2Hz, H6’’’’) et les protons trans-diaxiaux H-3’’’’, H-4’’’’ et H-5’’’’.
L’analyse du spectre ROESY confirme les positions axiales ou équatoriales de certains protons
osidiques. Ainsi, des effets Overhauser sont observés entre H-1/H-2 de chacun des α-L-
rhamnoses, et entre H-1’’’/H-3’’’/H-5’’’ du β-D-glucose.
La comparaison des déplacements chimiques des deux rhamnoses montre que le Rha‘’
possède une position 2 déblindée δH ppm = + 0,3 et δC ppm = + 11 du fait de sa substitution.
L’enchaînement β-D-glucopyranosyl (12)-α-L-rhamnopyranoside est mis en évidence grâce
aux corrélations HMBC 3J interosidiques observées entre H-1’’’Glc/ C-2’’Rha, et inversement
entre H-2’’Rha/ C-1’’’Glc.

52
Tableau n° 5 : RMN 1H et 13C de la partie glycosidique des composés CF-1 à CF16
Partie osidique
4.6.2.5 (a) CF-1 4.9.7 (g) CF-2 4.7.4.1 (d) CF-3 4.7.4.2 (e) CF-4
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

3-O-Rha

1’’ 5.68 (d, 1.0) 101.3 5.68 (d, 1.0) 101.3 5.67 (sl) 101.3 5.67 (d, 1.2) 101.3

2’’ 4.31 (dd, 3.3, 1.3) 81.5 4.30 (dl, 1.9) 81.5 4.30 (m, w1/2 = 6) 81.5 4.30 (dd, 3.3, 1.4) 81.5

3’’ 3.89 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 3.88 (dd, 9.8, 3.2) 70.4 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4

4’’ 3.36 (t, 9.7) 72.1 3.37 (t, 9.8) 72.1 3.36 (t, 9.8) 72.1 3.35 (m) 72.1

5’’ 3.65 (dq, 9.2, 6.2) 70.6 3.65 (m) 70.6 3.65 (m) 70.6 3.66 (m) 70.6

6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.01 (d, 6.2) 16.3

Glu en position 2 du Rhamnose

1’’’ 4.41 (d, 7.8) 105.8 4.40 (d, 7.8) 105.8 4.40 (d, 7.8) 105.8 4.40 (d, 7.8) 105.8

2’’’ 3.25 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 3.24 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 3.25 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 3.25 (dd, 8.8, 8.0) 73.9

3’’’ 3.39 (t, 8.0) 76.4 3.38 (m) 76.4 3.39 (m) 76.4 3.37 (m) 76.4

4’’’ 3.37 (dd, 9.9, 8.2) 69.3 3.37 (m) 69.3 3.37 (m) 69.3 3.36 (m) 69.3

5’’’ 3.18 (ddd, 9.1, 4.1, 2.6) 76.4 3.18 (m) 76.4 3.18 (m) 76.4 3.18 (m) 76.4

3.69 (dd, 12.0, 4.3) 3.69 (dd, 12.2, 4.3) 3.69 (dd, 12.0, 4.2) 3.69 (dd, 12.2, 4.2)
6’’’ 60.8 60.8 60.7 60.8
3.66 (dd, 12.0, 2.6) 3.66 (dd, 12.2, 2.6) 3.66 (dl, 12.0) 3.65 (dl, 12.0)

7-O-Rha

1’’’’ 5.58 (d, 1.1) 98.5 5.62 (sl) 98.3 5.60 (sl) 98.2 5.63 (d, 1.4) 95.7

2’’’’ 4.04 (m, w1/2 = 7.5) 70.3 4.09 (sl, w1/2 = 5) 70.3 4.21 (m, w1/2 = 6) 68.0 5.24 (dd, 3.6, 1.7) 71.8

3’’’’ 3.85 (dd, 9.4, 3.4) 70.7 4.02 (dd, 9.7, 3.3) 68.6 5.12 (dd, 9.4, 3.3) 73.8 4.03 (dd, 9.6, 3.6) 68.9

4’’’’ 3.50 (dd, 9.6, 9.4) 72.2 5.06 (t, 9.8) 73.6 3.71 (m) 69.4 3.47 (dd, 9.6, 9.5) 72.4

5’’’’ 3.62 (m) 69.9 3.77 (dq, 9.7, 6.2) 67.7 3.71 (m) 69.9 3.67 (m) 69.9

6’’’’ 1.28 (d, 6.2) 16.7 1.18 (d, 6.2) 16.5 1.31 (d, 5.5) 16.7 1.29 (d, 6.2) 16.7

5.58 (d, 1.1) 98.5 5.62 (sl) 98.3 5.60 (sl) 98.2 5.63 (d, 1.4) 95.7

53
 Partie osidique
4.9.10 (l) CF-5 4.9.14.4 (m) CF-6 4.10.9.7 CF-7 4.6.2.12 (c) CF-8
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

3-O-Rha

1’’ 5.68 (d, 1.3) 101.3 5.68 (d, 1.3) 101.3 5.67 (sl) 101.3 5.76 (d, 0.8) 101.2

2’’ 4.30 (dd, 3.4, 1.4) 81.5 4.31 (dd, 3.5, 1.5) 81.5 4.31 (m, w1/2 = 7.5) 81.5 4.38 (dl, 2.3) 82.3

3’’ 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 3.88 (dd, 9.5, 3.2) 70.4 3.88 (dl, 7.8) 70.4 3.92 (dd, 9.8, 3.4) 70.3

4’’ 3.36 (t, 9.8) 72.1 3.36 (t, 9.6) 72.1 3.36 (m) 72.1 3.38 (t, 9.8) 72.1

5’’ 3.65 (m) 70.6 3.67 (m) 70.6 3.67 (m) 70.6 3.78 (dq, 9.7, 6.5) 70.7

6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.01 (d, 6.2) 16.3 1.11 (d, 6.2) 16.3

Glu en position 2 du Rhamnose

1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 4.40 (d, 7.8) 105.8 4.40 (d, 7.7) 105.8 4.44 (d, 7.9) 105.7

2’’’ 3.24 (dd, 8.8, 8.0) 73.9 3.24 (dd, 9.0, 7.9) 73.9 3.24 (tl, 8.1) 73.9 3.31 (tl, 9.0) 73.7

3’’’ 3.39 (m) 76.4 3.38 (m) 76.4 3.38 (nd) 76.4 3.44 (tl, 9.4) 76.2

4’’’ 3.38 (m) 69.3 3.36 (m) 69.3 3.37 (nd) 69.3 3.31 (tl, 9.4) 70.6

5’’’ 3.18 (ddd, 9.0, 4.5, 2.4) 76.4 3.18 (ddd, 9.1, 4.2, 2.4) 76.4 3.18 (ddd, 8.7, 5.0, 2.2) 76.4 3.44 (m) 73.9

3.68 (dd, 12.3, 4.2) 3.69 (dd, 12.3, 4.2) 3.69 (dd, 12.2, 4.3) 4.54 (dd, 11.8, 2.4)
6’’’ 60.8 60.8 60.8 63.0
3.65 ((dd, 12.1, 2.4 3.66 (dd, 12.3, 2.6) 3.65 (dd, 12.0, 2.2) 4.10 (dd, 11.9, 6.7)

7-O-Rha

1’’’’ 5.70 (d, 1.3) 95.5 5.65 (d, 1.7) 98.0 5.76 (d, 1.5) 95-5 5.51 (sl) 98.5

2’’’’ 5.29 (dd, 3.7, 1.7) 71.7 4.26 (dd, 2.9, 1.9) 67.9 5.48 (dd, 3.5, 1.8) 68.9 4.05 (m, w1/2 = 6) 70.3

3’’’’ 4.22 (dd, 9.9, 3.7) 66.8 5.27 (dd, 10.0, 3.1) 71.5 5.43 (dd, 10.2, 3.5) 69.0 3.85 (dd, 9.5, 3.3) 70.7

4’’’’ 5.01 (t, 9.8) 73.4 5.24 (t, 10.1) 70.6 5.14 (t, 10.0) 70.3 3.50 (t, 9.5) 72.2

5’’’’ 3.85 (dq, 9.7, 6.2) 67.7 3.89 (m) 67.7 3.98 (dq, 9.8, 6.2) 67.7 3.63 (dq, 9.4, 6.1) 69.9

6’’’’ 1.18 (d, 6.2) 16.5 1.20 (d, 6.2) 16.4 1.21 (d, 6.2) 16.4 1.29 (d, 6.2) 16.7

54
Spectre RMN 1H du composé CF-1

Spectre RMN 13C du composé CF-1

55
 Spectre DEPT du composé CF-1

Spectre COSY de la partie osidique du composé CF-1

56
Spectre TOCSY de la partie osidique du composé CF-1

Spectre HSQC de la partie osidique du composé CF-1

57
 Spectre ROESY de la partie osidique du composé CF-1

IV.1.2.3. - Détermination des liaisons hétérosidiques

 Spectroscopie UV :
Les spectres UV des 16 hétérosides flavoniques de C. chelidonii sont similaires et se présentent
comme celui du composé CF-2 (Figure n° 6 et Tableau n° 6) avec deux bandes d’absorbance
maximale caractéristiques d’un chromophore flavonol : bande I (caractéristique du cycle B) à
350 nm et bande II (caractéristique du cycle A) à 256 nm.
Le fait d’ajouter du NaOAc (Figure n° 6C) ne provoque pas de déplacement bathochrome de
la bande II, c'est-à-dire qu’il n’y a pas de OH libre en position 7, ce qui sous-entend que cette
position est glycosylée.
L’hydroxyle libre en position 5 est confirmé par le déplacement bathochrome de + 10 nm de
la bande II en présence de AlCl3 stable en milieu acidifié (Figure n° 6D).
L’ajout de NaOMe provoque un déplacement bathochrome fort de + 46 nm pour la bande I
avec maintien de son absorbance indiquant la présence d’un OH libre en position 4’ (Figure n°
6B).
La présence d’un système ortho-dihydroxylé sur le cycle B pour CF-1 à CF-13 est mise en
évidence par le déplacement hypsochrome de - 24 nm de la bande I en présence de AlCl3 +
HCl par rapport à celui effectué en présence d’AlCl3 dans un milieu non acidifié (Figure n° 6D).
Ce résultat est confirmé par le déplacement bathochrome de + 18 nm de la bande I (Figure n°
6C) après l’addition de NaOAc + H3BO3.

58
Ces données spectrales UV sont en accord avec les données de la littérature pour un quercétol
diglycosylé en position 3 et 7 [181].
Remarque : Pour les composés à kaempférol CF-14 à CF-16 dépourvus d’un système ortho-
dihydroxylé sur le cycle B, l‘analyse similaire en spectroscopie UV sera brièvement discutée lors
de l’établissement de leurs structures.

Tableau n° 6 : Données spectrales UV du composé CF-2

λmax
Solvants-réactifs
Bande I (cycle B) Bande II (cycle A)

MeOH 350 256

NaOMe 396 264

AlCl3 378 266

AlCl3 + HCl 354 268

NaOAc 352 256

NaOAc + H3BO3 368 260

Figure n° 6 : Spectres UV du composé CF-2 ; A = dans MeOH ; B = ajout de NaOH ; C = ajout

de NaOAc puis de H3BO3 ; D = ajout d’AlCl3 puis de HCl.
59
  Séquençage par RMN :
La position des chaines glycosidiques est déterminée de l’analyse des corrélations HMBC et
des effets ROE :
- l’unité α-L-rhamnose terminale (Rha’’’’) est liée à la partie flavonol en position 7 d’où
une corrélation HMBC entre H-1’’’’Rha et C-7.
- les corrélations ROESY détectées entre H-1’’’’/ H-6 et H-8, excluent que ce rhamnose
soit lié au phénol en position 5 de l’aglycone et confirme l’analyse des spectres UV.
- le disaccharide β-D-glucopyranosyl (1→2)-α-L-rhamnospyranoside est lié à l’hydroxyle
en position 3 du flavonol comme le prouvent les corrélations HMBC entre H-1’’Rha et
C-3 de l’aglycone.

Corrélations HMBC et ROESY du composé CF-1

IV.1.2.4. - Flavonoïdes à quercétol CF-1 à CF-13

 Composé CF-1 (CC-4.6.2.5 (a))

Le spectre de masse ESI-MS effectué en mode positif montre un ion pseudo-moléculaire
[M+Na]+ à 779,4 correspondant à la formule brute en C33H40O20. L'ensemble des analyses
spectrales et la comparaison des données avec celles de la littérature nous ont permis
d’identifier le composé CF-1 comme le quercétol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-
rhamnopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside, flavonoïde connu isolé par exemple de
Ochradenus baccatus [182].

La structure de CF-1 constitue le squelette moléculaire des autres hétérosides flavoniques de

CF-2 à CF-16. Ces hétérosides possèdent en plus une partie ester composée d’acétates, de
coumarates ou de cafféates. Leur nature, nombre et localisation sur les unités osidiques
diffèrent d’un hétéroside à un autre, et constituent leur distinction structurale. Ainsi la

60
discussion pour établir les structures de CF-2 à CF-16 portera spécifiquement sur les
caractéristiques spectrales liées à ces groupes esters.

 Composé CF-2 (CC-4.9.7 (g))

Le spectre de masse HR-ESI-MS de CF-2 effectué en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 821,2123 (calc. 821,2116) correspondant à la formule brute en
C 35H42O21. Ce composé possède 42 uma de plus que CF-1 soit un acétate.
La comparaison des données spectrales de RMN des composés CF-2 et CF-1 montre des
similitudes (Annexe) et leurs différences résident en :
- la présence d’un singulet de 3H à δH ppm 2.12 (s) pour CF-2 attribué au groupe acétyle,
- le déblindage du H-4 du rhamnose’’’’ à δH ppm 5.06 (t, 9.8) dans CF-2 au lieu de 3,50
ppm dans CF-1.
- des effets similaires sont observés sur les spectres RMN 13C et DEPT, avec la présence
supplémentaire des deux carbones du groupe acétyle à δC ppm 171.0 et 19 pour CF-2.
Le groupe acétyle est localisé en position H-4’’’’ du rhamnose isolé (position 7 du quercétol)
grâce aux corrélations HMBC du carbonyle δC ppm 171.0 avec H-4’’’’ (δH ppm 5.06, t, 9.8) et avec
son CH3 δH ppm 2.12 (s).
L’hétéroside flavonique CF-2 est identifié à la quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(4-acetyl)-α-L-rhamnopyranoside qui est un flavonoïde connu isolé
des feuilles de C. chelidonii au Vietnam et publié pendant nos travaux [87].

 Composés CF-3 (4.7.4.1 (d)) et CF-4 (4.7.4.2 (e))

Comme pour CF-2, en HR-ESI-MS mode positif, les deux composés CF-3 et CF-4 possèdent le
même ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à 821,2123 et 821,2105 (calc. 821,2116)
correspondant à la formule brute en C 35H42O21 suggérant qu’il s’agit d’isomères de position
du groupe acétyle.
La comparaison des spectres de RMN des trois produits CF-2, CF-3 et CF-4 montre des signaux
similaires et toutes leurs données spectrales confirment que ce sont trois isomères de position
(Annexe).
Dans le composé CF-3 le groupe acétyle est lié en position 3 du Rha’’’’ (rhamnose isolé en
position 7 du quercétol) comme l’atteste le déblindage du proton Rha’’’’-3 à δH ppm 5.12 (dd,
9.4, 3.3Hz) et sa corrélation HMBC avec le carbonyle d’acétate à δC ppm 171.2.

61
Dans le composé CF-4 c’est la position 2 du rhamnose Rha’’’’ qui est acétylée, avec le proton
Rha-2’’’’ déblindé (δH ppm 5.24, dd, 3.6, 1.7Hz) et une corrélation HMBC entre ce proton et le
carbonyle d’acétate à δC ppm 170 .8.
Ainsi les deux composés CF-3 et CF-4 sont déterminés comme étant respectivement la
quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(3-acetyl)-α-L-
rhamnopyranoside et la quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-
O-(2-acetyl)-α-L-rhamnopyranoside. Ce sont deux hétérosides flavoniques nouveaux.

 Composés CF-5 (4.9.10 (l)) et CF-6 (4.9.14.4 (m))

Les spectres de masse HR-ESI-MS enregistrés en mode positif des composés CF-5 et CF-6
montrent le même ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à 863,2212/863,2228 (calc.
863,2222/863,2222) correspondant à la formule brute en C37H44O22 , soit 84 uma
supplémentaires par rapport à CF-1 ; nous pouvons en déduire que CF-5 et CF-6 sont des
isomères diacétylés de CF-1.
Pour CF-5, l’unité rhamnose (Rha’’’’) liée avec la partie quercétine en position 7 (Annexe) est
diestérifiée en positions 2 et 4 avec l’observation du déblindage de ces deux protons : H-2’’’’
(δH ppm 5.29 dd, 3.7 et 1.7) et H-4’’’’ (δH ppm 5.01, t, 9.8).
Le premier groupe acétate possède en RMN 1H son méthyle à δH ppm 2.13 (s) et en RMN 13C
son carbonyle à δC ppm 170.7. Par les corrélations HMBC observées entre ce carbonyle avec le
proton Rha’’’’-4 et le CH3 de l’acétate, cet acétate est localisé en position 4 du rhamnose.
Le second acétate est caractérisé par un CH3 à δH ppm 2.21 (s) et un carbonyle à δC ppm 170.6.
De manière identique, ce carbonyle présente des corrélations avec ce CH3 et le proton H-2 du
Rha’’’’, ce qui permet de l’attribuer à la position 2 du même rhamnose.
L’ensemble des données spectrales nous a permis d’identifier le composé CF-5 comme étant
la quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2,4-diacetyl)-α-L-
rhamnopyranoside. C’est également un composé nouveau.

62
Pour CF-6, le second groupe acétyle est déterminé en position 3 du rhamnose (au lieu de la
position 2 dans CF-5) avec Rha’’’’-H-3 déblindé à δH ppm 5.27 (dd, 10.0, 3.1Hz). Ce proton
possède une corrélation HMBC avec le carbonyle à δC ppm 170.6. Le CH3 de cet acétate est
détecté à δH ppm 2.11 (s) et possède également une corrélation avec le carbonyle.
Le composé CF-6 est déterminé comme étant la quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl (1→2)-
α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(3,4-diacetyl)-α-L-rhamnopyranoside. Il s’agit d’un hétéroside
flavonique nouvellement décrit.

 Composé CF-7 (4.10.9.7)

Par rapport à CF-1, le spectre de masse HR-ESI-MS mode positif du composé CF-7 montre un
ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à 905,2341 (calc 905,2328) correspondant à la formule brute
en C 39H46O23 soit 126 uma supplémentaires = 3 groupes acétyle.
La présence de trois acétates sur la partie osidique est confirmée en RMN (Annexe) par
l’observation de :
- trois groupes CH3-COOR à δH ppm 2.02, 2.08 et 2.21 et δC ppm 19.2 (3 CH3), 170.1
(1xCOOR) et 170.2 (2xCOOR)
- trois positions déblindées pour le rhamnose en position 7 du quercétol : H-2’’’’, H-3’’’’
et H-4’’’’ à δH ppm 5.48 (dd, 3.5, 1.8Hz), 5.43 (dd, 10.2, 3.5Hz) et 5.14 (t, 10 Hz).
Les trois groupes acétyle sont localisés grâce aux corrélations HMBC entre le carbonyle δ C ppm
170.1 avec H-2’’’’ (δH ppm 5.48) et CH3 (δH ppm 2.21), et entre les carbonyles équivalents δC ppm
170.2 avec H-3’’’’ (δH ppm 5.43) et H-4’’’’ (δH ppm 5.14), et les deux autres CH3 (δH ppm 2.08 et
2.02).
L’ensemble des données spectrales nous a permis d’identifier le composé CF-7 comme
nouvellement décrit et de structure : la quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(2,3,4-triacetyl)-α-L-rhamnopyranoside.

63
 Composés CF-8 (4.6.2.12 (c)) CF-9 (4.7.53.2 (h)) CF-10 (4.9.9.5 (j)) et CF-11(4.9.16.4
(o))
Sur les spectres de RMN 1H et 13C de ces 4 hétérosides (CF-8 à CF-11) apparaissent des signaux
supplémentaires, caractéristiques d’un groupe p-coumaroyle avec une double liaison trans à
δC ppm 113.3, δH ppm 6.03 (d, J=15.9Hz) et δC ppm 145.1, δH ppm 7.42 (d, J=15.9Hz), quatre protons
aromatiques AA’BB’ : H-2’’’’’ et H-6’’’’’ (δH ppm 7.21, d, J=8.6Hz), H-3’’’’’ et H-5’’’’’ (δH ppm 6.67,
d, J=8.6Hz), et un carbonyle à δC ppm 167.4 (C-9’’’’’) (Annexe).
Les spectres de masse HR-ESI-MS de CF-8, CF-9, CF-10 et CF-11 enregistrés en mode positif
montrent un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ augmenté de 146 uma par rapport à ceux
observés pour les hétérosides CF-1, CF-3, CF-2 et CF-6, attestant de la présence d’un ester p-
coumaroyle supplémentaire.

Tableau n° 7 : Ion de masse de CF-8 à CF-11

CF-1 CF-8 CF-3 CF-9 CF-2 CF-10 CF-6 CF-11

[M+Na]+ 779,4 925,4 821,2123 967,2477 821,2123 967,2468 863,2228 1009,2585

Formule
C33H40O20 C 42H46O22 C 35H42O21 C 44H48O23 C 35H42O21 C 44H48O23 C 37H44O22 C 46H50O24
brute

La comparaison des signaux de RMN du β-D-glucose dans ces paires de composés montre que
les deux protons H-6’’’Glu [δH ppm 4.54 (dd, J=11.8, 2.4Hz), δH ppm 4.10 (dd, J=11.9, 6.7Hz)] sont
déblindés du fait de leur estérification par le groupe p-coumaroyle.

Tableau n° 8 : RMN de la position 6 du β-D-glucose dans CF-8 à CF-11

CF-1 CF-8 CF-3 CF-9
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

3.69 (dd, 12.0, 4.3) 4.54 (dd, 11.8, 2.4) 3.69 (dd, 12.0, 4.2) 4.54 (dd, 11.8, 2.5)
6’’’ 60.8 63.0 60.7 63.0
3.66 (dd, 12.0, 2.6) 4.10 (dd, 11.9, 6.7) 3.66 (dl, 12.0) 4.09 (dd, 11.1, 6.7)

CF-2 CF-10 CF-6 CF-11

No
1 13 1 13 1 13 1 13
H C H C H C H C

3.69 (dd, 12.2, 4.3) 4.54 (dd, 11.9, 2.4) 3.69 (dd, 12.3, 4.2) 4.54 (dd, 11.9, 2.5)
6’’’ 60.8 63.0 60.8 63.0
3.66 (dd, 12.2, 2.6) 4.10 (dd, 11.1, 5.3) 3.66 (dd, 12.3, 2.6) 4.06 (dd, 11.8, 6.7)

Cela est confirmé par la corrélation HMBC entre H-6’’’Glu [δH ppm 4.54 (dd, J=11.8, 2.4Hz), δH
ppm 4.10 (dd, J=11.9, 6.7Hz)] et le carbonyle C-9’’’’’ du p-coumaroyle à δC ppm 167.4.

Par conséquent, CF-8 est identifié comme la quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-

glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside, isolé
précédemment de Sedum sarmentosum [183].
64
De même, les deux composés CF-9 et CF-10 sont deux régioisomères. Leurs structures sont
respectivement : la quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(3-O-acétyl)-α-L-rhamnopyranoside et la quercétine 3-O-(6-O-trans-
p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(4-O-acétyl)-α-L-
rhamnopyranoside . CF-9 est un composé nouvellement isolé et décrit, et CF-10 est un
flavonoïde connu déjà isolé des feuilles de Cleome chelidonii [87].

Enfin, CF-11 est l’ester p-coumarate de l’hétéroside flavonique CF-6, c’est à dire la quercétine
3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(3,4-O-
diacetyle)-α-L-rhamnopyranoside, composé également original.

65
  Composé CF-12 (4.6.2.9.3 (b)) et Composé CF-13 (4.7.11.3 (i))
Les spectres de masse ESI-MS en mode positif des composés CF-12 et CF-13 montrent des ions
pseudo-moléculaires [M+Na]+ à 941,4 (C 42H46O23) et 983,2442 (C44H48O24) correspondants à
163 uma supplémentaires par rapport à ceux obtenus pour CF-1 et CF-2.
Les données de RMN des composés CF-12 et CF-13 possèdent des signaux communs
caractéristiques d’un groupe E-cafféoyle (Annexe) :
- un système aromatique ortho-para-trisubstitué ABX avec H-2’’’’’ (δH ppm 6.85, d, J=2.0 Hz), H-
5’’’’’ (δH ppm 6.65, d, J=8.1 Hz), H-6’’’’’ (δH ppm 6.73, dd, J=8.2 et 2.1 Hz)
- six carbones aromatiques entre δC ppm 113.5 à 148 dont deux sont oxygénés (C-3’’’’’ à 145.2
ppm, C-4’’’’’ à 148 ppm)
- une double liaison trans à (δC ppm 145.6 ; δH ppm 7.37, d, J=15.9Hz) et (δC ppm 113.3 ; δH ppm 6.02,
d, J=15.9Hz)
- un carbonyle d’ester à δC ppm 167.4 (C-9’’’’’).
Tous les carbones du groupe cafféoyle sont attribués grâce aux corrélations HSQC et HMBC.
Le groupe cafféoyle estérifie le glucose terminal sur sa position 6’’’-CH2OR ; en effet des
corrélations HMBC sont détectées entre H-6’’’Glu [δH ppm 4.50 (dd, J=11.9, 2.3Hz) et 4.13 (dd,
J=11.9, 6.3Hz)] et le carbonyle du caffeoyle C-9’’’’’ à δC ppm 167.4.
Les analyses spectrales de RMN, de masse et leur comparaison avec la littérature, permettent
d’identifier le composé CF-12 comme la quercétine 3-O-(6-O-E-caffeoyl)-β-D-glucopyranosyl-
(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside, isolée antérieurement de Sedum
sarmentosum [183].

La structure de CF-13 est similaire à celle de CF-12, mais la présence d’un acétate est
confirmée par les signaux d’un CH3CO à δH ppm 2.12 (s) et δC ppm 19.6 et 171.0. De plus, le
déplacement chimique de proton H-4’’’’ du rhamnose (positionné sur le C-7 du quercétol) est
déblindé à δH ppm 5.05 (t, 9.8Hz).
L’acétate est placé en position 4 du rhamnose terminal grâce aux les corrélations HMBC entre
H-4’’’’ (δH ppm 5.05, t, 9.8Hz) et le carbonyle d’acétate δC ppm 171.0.
Ainsi, CF-13 est identifié comme la quercétine 3-O-(6-O-E-caffeoyl)-β-D-glucopyranosyl-
(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(4-O-acétyle)-α-L-rhamnopyranoside. C’est un composé
nouveau.
66
IV.1.2.5 - Flavonoïdes à kaempférol CF-14 à CF-16
Trois flavonoïdes avec du kaempférol comme aglycone ont été isolés des parties aériennes
dont l’un (CF-14) dans l’extrait 4 méthanolique, et les deux autres (CF-15 et CF-16) dans
l’extrait 3 à l’acétate d’éthyle. Comme pour les hétérosides à quercétol, la partie
triglycosidique est identique, constituée des deux mêmes chaines. Ce sont également des
dérivés estérifiés de l’unité rhamnose positionnée sur le C-7 du kaempférol.

 Composé CF-14 (4.9.9.3-i2)

Le spectre UV de CF-14 (Tableau n° 9 et Figure n° 7) présente les deux bandes d’absorbance
maximale d’un flavonoïde substitué en position 3 : la bande I (cycle B) à 342 nm et bande II
(cycle A) à 266 mn.
L’ajout d’une solution de NaOMe provoque un déplacement bathochrome fort de + 46 nm
pour la bande I avec une augmentation de son absorbance (Figure n° 7B) ce qui indique la
présence d’un OH libre en position 4’.
Il n’y a pas de changement d’absorbance après l’ajout d’une solution méthanolique de NaOAc,
ce qui confirme l’absence de groupe OH libre en position 7 (Figure n° 7C). De plus, l’absence
d’un système ortho-dihydroxylé sur le cycle B est confortée car aucun déplacement
bathochrome de la bande I n’est observé quand on ajoute du H3BO3 à la solution précédente.
Ce résultat est confirmé car aucun déplacement hypsochrome de la bande I n’est observé
entre les spectres dans AlCl3 + HCl et dans AlCl3 (Figure n° 7D)
Ces données spectrales UV sont en accord celles de la littérature pour le kaempférol
disubstitué en position 3 et 7 [181].

67
 Tableau n° 9 : Caractéristiques spectrales UV de CF-14

λmax
Solvants-réactifs
Bande I (cycle B) Bande II (cycle A)

MeOH 342 266

NaOMe 388 268

AlCl3 346 268

AlCl3 + HCl 342 274

NaOAc 344 266

NaOAc + H3BO3 342 266

Figure n° 7 : Spectres UV de CF-14 ; A = dans MeOH ; B = ajout de NaOH ; C = ajout de NaOAc

puis de H3BO3 ; D = ajout d’AlCl3 puis de HCl.

68
Le spectre de masse HR-ESI-MS de CF-14 enregistré en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 805,2173 (calc. 805,2167) correspondant à la formule brute en
C 35H42O20.
L’analyse des spectres COSY, TOCSY, ROESY, HSQC et HMBC nous a permis d’identifier tous les
protons et les carbones de la partie aglycone et de la partie osidique (Annexe), et de confirmer
le squelette du kaempférol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-α-L-
rhamnopyranoside.
Le proton H-4’’’’ du rhamnose terminal en position 7 de l’aglycone est à δH ppm 5.06 (t, 9.8)
démontrant bien que CF-14 est estérifié. La présence d’un groupe acétyle se traduit par les
signaux à δH ppm 2.12 (s ; CH3), δC ppm 19.6 (CH3) et 171.0 (COO). Les corrélations HMBC entre ce
carbonyle et H-4’’’’ du rhamnose (δH ppm 5.06, t, 9.8 Hz) et avec les protons du méthyle δH ppm
2.12 (s) permettent de positionner l’acétate.
La structure du CF-14 est le kaempférol 3-O-β-glucopyranosyl-(1→2)-α-rhamnopyranosyl-7-
O-(4-acetyl)-α-rhamnopyranoside, hétéroside flavonique estérifié nouvellement isolé et
décrit.

 Composés CF-15 (3.13.25.12.5) et CF-16 (3.13.25.12.6)

Les spectres de masse HR-ESI-MS en mode positif des deux composés CF-15 et CF-16 montrent
un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ identique à 847,2269 et 847,2266 (calc. 847,2273)
correspondant à la formule brute C 37H44O21.
La différence de masse avec le composé précédent CF-14 soit 42 uma, suggère que CF-15 et
CF-16 possèdent un acétate supplémentaire et sont deux régiosiomères de position.
Par comparaison des spectres de RMN (Annexe) nous pouvons reconnaître quelques
différences qui sont :
- la présence de deux singulets de protons méthyliques entre 2 et 2.2 ppm et deux
protons osidiques déblindés au-delà de 5 ppm. Ces résultats confirment que les
composés CF-15 et CF-16 possèdent deux acétates et deux positions osidiques
estérifiées.
- sur les spectres RMN 13C et DEPT, les quatre carbones de deux acétates sont détectés
à δC ppm entre 170.7 et 170.9 (COOR) et entre 19.2 et 19.5 (CH3CO).
Un premier acétate est localisé en position H-2’’’’Rha (rhamnose en position 7 du kaempférol)
grâce aux corrélations HMBC observées dans CF-15 entre H-2’’’’ (δH ppm 5.30, dd, 3.6, 1.7) et
le carbonyle δC ppm 170.7, et entre les protons méthyliques δH ppm 2.21 et ce carbonyle.

69
Pour CF-16, il n’existe pas de corrélation détectable entre le proton H-2’’’’ et le carbonyle de
l’acétate, seul le déblindage de ce proton traduit une position acétylée.
Le second acétate est localisé différemment entre CF-15 et CF-16 :
- pour CF-15 : le proton H-4’’’’Rha δH ppm 5.00 (t, 9.8 Hz) corrèle au carbonyle δC ppm 170.6,
lui-même possédant une corrélation avec le CH3CO situé à δH ppm 2.13 (s)
- pour CF-16 : le proton H-3’’’’Rha δH ppm 5.25 (dd, 10.0, 3.5 Hz) corrèle au carbonyle δC
ppm 170.2, lui-même possédant une corrélation avec le CH3CO situé à δH ppm 2.18 (s)
Finalement, de l’analyse combinée de tous les spectres de RMN, de masse et d’UV, les deux
composés CF-15 et CF-16 sont identifiés respectivement comme étant le kaempférol 3-O-β-
D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2,4-diacetyl)-α-L-rhamnopyranoside et
le kaempférol 3-O-β-glucopyranosyl–(1→2)-α-rhamnopyranosyl-7-O-(2,3-diacetyl)-α-L-
rhamnopyranoside. Ce sont également deux composés nouveaux.

IV.1.3- DETERMINATION STRUCTURALE DES MEGASTIGMANES

Neuf mégastigmanes (CM-1 à CM-9) ont été isolés de l’extrait 3 (acétate d’éthyle). Le
squelette mégastigmane fait partie des C-13 norterpénoides ; il se caractérise par la présence
de treize carbones formant un cyclohexène substitué en positions 1, 5 et 6 ; le substituant de
la position 6 est une chaîne insaturée. Ils proviennent de la dégradation des caroténoïdes. On
distingue les mégastigmanes oxygénés sur la chaîne latérale auxquels appartiennent les
ionones, et les mégastigmanes non oxygénés.

Un seul des composés isolés est un mégastigmane non glycosylé, les huit autres sont des
glucosides. Parmi ces derniers, trois (CM-1 à CM-3) sont des composés originaux pour cette
classe de métabolites. L’hydrolyse acide de l’extrait 3 et l’analyse par HPLC chirale des sucres
libérés, nous a permis de déterminer la configuration naturelle du glucose comme étant la D.

70
IV.1.3.1. - Détermination structurale du composé CM-1 (3.13.25.6)
Le spectre de masse HR-ESI-MS enregistré en mode positif de CM-1 montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 427,1932 (calc. 427,1944) correspondant à la formule brute C 19H32O9.
Dix-neuf signaux sont observés sur les spectres de RMN 13C et DEPT soient 13 carbones du
squelette de mégastigmane et 6 carbones du D-glucose. De même, le spectre de RMN 1H
montre les protons de l’unité glucosidique avec un doublet anomérique à δH ppm 4.43 (d, 7.9Hz)
et un massif entre δH ppm 3.28 – 3.90 pour les autres protons osidiques.

Spectre HRSM de CM-1

Spectre RMN 1H de CM-1

71
Spectre RMN 1 3C de CM-1

Spectre DEPT-135 de CM-1

72
Structure du β-D-glucopyranose:
Un β-D-glucose est identifié de l’analyse des corrélations COSY et TOCSY observées à partir de
son doublet anomérique à δH ppm 4.43 (d, 7.9Hz) ; ainsi ses H-2 et H-3 apparaissent comme un
dd (δH ppm 3.28) et un tl (δH ppm 3.40) avec une 3JH2-H3 de 9Hz du fait de leur position trans-
diaxiale. La constante 3JH3-H4 est également de l’ordre de 9Hz d’où la position trans-diaxiale de
H-4. Le H-5 est un multiplet à δH ppm 3.37, et le CH2OH en position 6 forment avec H-5 un
système ABX δH ppm 3.89 (dd, 11.8, 1.9Hz) et 3.68 (dd, 11.9, 5.5Hz). Le spectre NOESY montre
des effets entre les protons axiaux H-1, H-3 et H-5 confirmant qu’il s’agit d’un β-D-glucose.
L’HSQC permet de lier les protons à leurs carbones osidiques respectifs: carbone anomérique
à δCppm 104.5, quatre CHOH à δC ppm 73.6, 76.6, 69.9, 76.8 et un CH2OH à δC ppm 61.0. Ces valeurs
sont celles retrouvées habituellement pour un β-D-glucose terminal [184].
Structure du squelette mégastigmane et de CM-1 :
Sur le spectre de RMN 1H (Tableau n° 10 ; Annexe), quatre méthyles sont détectés dont trois
singulets à δH ppm 0,98 (s), 1,09 (s), 1,41 (s) pour 3 CH3 liés à des carbones quaternaires, et un
méthyle doublet à δH ppm 1,25 (d, 6.5Hz).
L’analyse du spectre COSY des 7 autres signaux protonés montre la présence de deux
enchainements:
- un unique –CH2– à δH ppm 1.28 (ddd, 13.2, 3.6, 1.1Hz, H2-eq) et 1.69 (t, 12.6Hz, H2-ax),
lié à un –CHO– à δH ppm 3.84 (dt, 13.3, 3.3Hz, H-3), lui-même lié à un second –CHO– à
δH ppm 4.05 (d, 2.3Hz, H-4)
- une double liaison trans di-substituée à δH ppm 5.91 (dd, 15.5, 1.3Hz, H-7) et 5.69 (dd,
15.5, 5.6Hz, H- 8), liée au troisième –CHO– à δH ppm 4.33 (qd, 6.2, 1.1 Hz, H-9),
finalement lié au CH3 doublet (CH3-10).

Le spectre de RMN 13C et DEPT confirment les quatre carbones méthyliques à δC ppm 15.6, 22.4,
23.5, 28.1, le méthylène à δC ppm 40.7, les trois carbones CHOR à δC ppm 64.7, 67.2, 83.5, la
double liaison trans –CH=CH- à δC ppm 124.1 et 138.1. De plus trois carbones quaternaires sont
détectés à δC ppm 33.9, 67.6, 70.3, les deux deniers étant oxygénés (Tableau n° 10 ; Annexe).
La structure du squelette mégastigmane est confirmée des corrélations HMBC des 3 carbones
quaternaires avec les protons méthyliques :
- les deux méthyles singulets à δH ppm 0.98 (CH3-11) et 1.09 (CH3-12) sont géminés et
corrèlent au CH2 (C-2) et aux carbones quaternaires δC ppm 33.9 (C-1) et 70.3 (C-6),
- le dernier méthyle singulet à δH ppm 1.41 (CH3-13) corrèle aux CHOR (δC ppm 83.5, C-4) et
carbones quaternaires oxygénés δC ppm 67.6 (C-5), 70.3 (C-6),
73
 - le méthyle doublet δH ppm 1,25 (CH3-10) corrèle aux CHOR (δC ppm 67.2, C-9) et carbones
éthyléniques (C-7 et C-8),
- les protons éthyléniques (H-7 et H-8) corrèlent au carbone quaternaire oxygéné δC ppm
70.3 (C-6).
Le β-D-glucopyranose est lié au squelette mégastigmane en position 4 comme l’atteste la
corrélation HMBC entre le proton H-4 et le carbone anomère C-1’ δC ppm 104.5 (inversement
une corrélation HMBC s’observe entre H-1’ δH ppm 4.43 et le carbone C-4 (δC ppm 83.5)).
D’après sa formule brute, CM-1 possède 4 insaturations soient 3 cycles et 1 double liaison.
Ceci sous-entend la présence d’un cycle époxyde entre les deux carbones quaternaires
oxygénés C-5 (δC ppm 67.7) et C-6 (δC ppm 70.3).
Le composé CM-1 est identifié au 5,6-époxy-3,4,9-trihydroxy-7-mégastigmen-4-O-β-D-
glucopyranoside, isomère du Komaroveside C, ce dernier étant glucosylé en position 3 [185].

Stéréochimies de CM-1
La stéréochimie relative des 4 centres asymétriques du cycle mégastigmane a été déterminée
de l’analyse des effets NOE et des valeurs des constantes de couplage. Elle s’est avérée être
identique à celle reportée pour le Komaroveside C :
- H-3 à δH ppm 3.84 (dt, 13.3, 3.3Hz) est déterminé en position axiale grâce à la grande
constante de couplage 3JH-3-H-2 de 13.3Hz avec l’un des protons H-2 (axial)
- H-4 à δH ppm 4.05 (d, 2.3Hz) est en position équatoriale et possède une constante de
couplage faible 3JH-4-H-3 .
- H-3, H-4, H-11, H-7 et H-13 sont de configuration cis dans le cyclohexane grâce aux
effets NOE observés entre H-3ax/H-4eq, H-3ax/ H-11ax, H-7/H-11ax, H-7/H-13, H-
13/H-4eq. Le cycle époxyde est situé sur la face opposée à ces protons, configuration
anti.

Corrélations NOESY dans CM-1

Pour le dernier centre asymétrique (C-9) dans CM-1, nous n’avons pas pu déterminer de
configuration à cause de la trop faible quantité de composé isolé.

74
En effet l’établissement de la configuration du C-9 ainsi que la stéréochimie absolue de CM-1
nécessite d’hydrolyser ce composé pour obtenir l’aglycone et ensuite de préparer les esters
de Mosher pour déterminer la configuration absolue des C-3 et C-9 [186].
Le composé CM-1 (1,5 mg) a subi une hydrolyse enzymatique avec une β-glucosidase durant
7 jours à 37oC pour obtenir la partie aglycone (0,3 mg). Le pouvoir rotatoire de l’aglycone ([α]D
= -22) est différent du pouvoir rotatoire de celui de l’aglycone de Komaroveside C ([α]D = -77)
[185]. Cette différence peut être dûe à une configuration C-9 inverse.
L’ensemble de l’analyse des spectres de RMN, de masse et la comparaison avec le
Komaroveside C, permet d’identifier CM-1 au 5,6-époxy-3,4,9-trihydroxy-7-mégastigmen-4-
O-β-D-glucopyranoside qui serait un composé naturel nouvellement isolé et décrit.
Tableau n° 10 : RMN de la partie aglycone de CM-1 à CM-3
La partie aglycone

CM1 (3.13.25.6) CM2 (3.13.22.8.4) CM3 (3.13.22.6)

No CD3OD CD3OD CD3OD

1H 13C 1H 13C 1H 13C

1 33.9 39.5 41.3

1.28 (ddd, 13.2, 3.6, 1.1) eq 1.45 (ddd, 13.1, 4.6, 1.0) eq 2.21 (d, 16.4)
2 40.7 36.8 49.1
1.69 (t, 12.6) ax 1.98 (t, 12.8) ax 2.54 (d, 16.4)

3 3.84 (dt, 13.3, 3.3) ax 64.7 4.39 (ddd, 12.5, 4.5, 1.9) 73.4 194.7

4 4.05 (d, 2.3) eq 83.5 3.81 (d, 1.9) 75.5 144.9

5 67.6 74.9 150.7

6 70.3 79.1 78.9

7 5.91 (dd, 15.5, 1.3) 124.1 5.93 (dd, 15.7, 1.0) 128.2 5.74 (dd, 15.7, 0.7) 128.9

8 5.69 (dd, 15.5, 5.6) 138.1 5.80 (dd, 15.7, 6.3) 135.0 5.82 (dd, 15.7, 5.8) 136.0

9 4.33 (qtd, 6.2, 1.1) 67.2 4.33 (qtd, 6.4, 1.0) 68.1 4.33 (qtl, 6.2) 67.5

10 1.25 (d, 6.5) 22.4 1.28 (d, 6.5) 22.6 1.27 (d, 6.0) 22.4

11 0.98 (s) ax 23.5 1.26 (s) 25.1 1.04 (s) 21.8

12 1.09 (s) eq 28.1 0.92 (s) 26.1 1.03 (s) 22.9

13 1.41 (s) 15.6 1.30 (s) 22.7 1.96 (s) 12.4

75
IV.1.3.2. - Détermination structurale du composé CM-2 (3.13.22.8.4)
Le spectre de masse HR-ESI-MS de CM-2 réalisé en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 445,2038 (calc. 445,2050) correspondant à la formule brute C 19H34O10,
et à 3 insaturations.
La comparaison des données de RMN de CM-2 (Tableau n° 10 ; Annexe) avec les deux
composés CM-1 et Komaroveside C montre de fortes similarités :
- les corrélations COSY, TOCSY, HSQC et HMBC sont en accord avec un β-D-
glucopyranose déterminé à partir de ses signaux anomériques à δH ppm 4.45 (d, 7.8Hz),
δC ppm 101.0, et avec des positions trans-diaxiales de H-1’, H-2’, H-3’, H-4’ et H-5’ (3JH-H
> 7,5Hz)
- les protons du squelette mégastigmane avec quatre méthyles à δH ppm 0,92 (s), 1,26 (s),
1,30 (s) et 1,28 (d, 6.5Hz), un –CH2– à δH ppm 1.45 (ddd, 13.1, 4.6, 1.0Hz, H2-eq) et 1.89
(t, 12.8Hz, H2-ax), trois –CHO– à δH ppm 3.81 (d, 1.9Hz), 4.39 (ddd, 12.5, 4.5, 1.9Hz) et
4.33 (qtd, 6.4, 1.0Hz), et une double liaison trans di-substituée à δHppm 5.93 (dd, 15.7,
1.0Hz) et 5.80 (dd, 15.7, 6.3Hz).
Comme pour le komaroveside C, le β-D-glucopyranose est lié à l’hydroxyle en en position 3 de
la partie mégastigmane puisqu’on détecte la corrélation HMBC entre H-3 δH ppm 4.39 (ddd,
12.5, 4.5, 1.9Hz) et le carbone anomère C-1’ δC ppm 101.0 (et inversement entre le proton
anomére H-1’ δH ppm 4.45 (d, 7.8Hz) et le C-3 (δC ppm 73.4)).
La structure plane de CM-2 comprend un cycle de moins que celle du Komaroveside C. Le
cycle manquant est l’époxyde, remplacé par un diol C-5/C-6 dans CM-2. Ces deux carbones
sont ainsi déblindés à 74.9 et 79.1 ppm au lieu de 68.2 et 70.4 ppm.
La stéréochimie relative des quatre centres asymétriques C-3, C-4, C-5 et C-6 du composé CM-
2 a été établie par les corrélations ROESY et les constantes des couplages des protons.
Par rapport à CM-1, le CH3-13 résonne à δH ppm 1,30 et δC ppm 22.7 (+ 7 ppm) ce qui le placerait
en position équatoriale ; il ne possède qu’un effet ROE avec H-4 ce qui confirme une
configuration trans-équatoriale ; les deux hydroxyles OH en C-5 et C-6 sont en configuration
trans-diaxiale.

Corrélations ROESY de CM-2

Comme pour CM-1, nous n’avons pas pu déterminer la stéréochimie du centre chiral CHOH-
9, ni la configuration absolue de CM-2 à cause de la faible quantité de composé isolé pour
pouvoir appliquer la méthode des esters de Mosher.

76
Ainsi, par l’analyse des données spectrales de RMN, de masse et comparaison avec la
littérature, le composé CM-2 est suggéré comme étant le 3,4,5,6,9-pentahydroxy-7-
mégastigmen-3-O-β-D-glucopyranoside, et serait un glucoside de mégastigmane nouveau.

IV.1.3.3. - Détermination structurale du composé CM-3 (3.13.22.6)

Le spectre de masse HR-ESI-MS mode positif de CM-3 montre un ion pseudo-moléculaire
[M+Na]+ à 425,1786 (calc. 425,1788) correspondant à la formule brute C 19H30O9 soit 5
insaturations. En tenant compte du cycle du mégastigmane et de celui du glucose, CM-3
renferme 3 autres insaturations.
L’analyse des corrélations de RMN (COSY, TOCSY, NOESY, HSQC) (Annexe), nous a permis de
confirmer la présence du β-D-glucopyranose.
A la différence de CM-2, le -CH2- à δH ppm 2.21 (d, 16.4Hz, H-2) et 2.54 (d, 16.4Hz, H-2) forme
ici un système AB isolé, et on détecte deux protons oléfiniques de configuration trans à δH ppm
5.74 (dd, 15.7, 0.7Hz, H- 7) et 5.82 (dd, 15.7, 5.8Hz, H-8). Par contre un seul –CHO– à δH ppm
4.33 (qtd, 6.2Hz, H-9) est préssent (Tableau n° 10 ; Annexe)
Sur le spectre de RMN 13C et DEPT en plus des carbones quaternaires C-1 (δC ppm41.3) et C-6
(oxygéné à δC ppm 78.9), on détecte pour CM-3 trois carbones supplémentaires attribués à une
double liaison tétrasubstituée avec 2 C sp2 à δC ppm 144.9 et 150.7, et un carbonyle cétonique
α,β-insaturé légèrement blindé à δC ppm 194.7.
Les protons du CH3-13 corrèlent sur le spectre HMBC avec les quaternaires C-6 et ceux de la
double liaison tétrasubstituée, ainsi qu’avec le carbonyle; ceci permet d’établir
l’enchaînement carboné d’une cyclohexenone α,β-insaturée :

Corrélations HMBC de CM-3

Le proton H-2 équatorial possède des corrélations HMBC avec le C-1, les CH3-11 et 12, le C-6
et le CO-3 confirmant l’arrangement des substituants de la cyclohexenone.

77
Tous les carbones de squelette mégastigmane sont attribués de l’analyse du spectre HMBC et
le squelette est similaire à celui des roseosides [187] :

La différence avec ces hétérosides réside dans la position de l’unité β-D-glucopyranose qui se
localise sur un hydroxyle en position 4 dans le composé CM-3 du fait de l’observation de la
corrélation HMBC entre le proton anomère H-1’ δH ppm 4.05 (d, 7.3Hz) et le carbone C-4 de la
cyclohexenone δC ppm 144.9 au lieu de la position 9 pour les roseosides
Les spectres de RMN de CM-3 enregistrés dans le DMSO permettent de visualiser et
d’attribuer les signaux des hydroxyles OH-6 à δH ppm 5.08 (s) et OH-9 à δH ppm 4.76 (d, 4.5 Hz).
Sur le spectre ROESY, des effets ROE sont observés pour le OH-6 avec H-8, CH3-12, CH3-13
suggérant que l’hydroxyle est équatorial au plan du cycle :

Corrélations ROESY de CM-3

La configuration de CM-3 est déterminée par l'application de la règle d’hélicité de dichroïsme
circulaire. Le C-6 possède la configuration S grâce à l’effet Cotton positif à 253 nm observé sur
son spectre de CD [187, 188].

78
 10000
8000
6000
4000
2000
0
-2000 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400
-4000
-6000
-8000

Courbe de CD de CM-3
Comme pour les autres mégastigmanes nouveaux, la configuration du C-9 n’a pas pu être
déterminée.
Le composé CM-3 est identifié comme étant le (6S, 7E)-4,6,9-trihydroxymégastigman-4,7-
dien-3-one-4-O-β-D-glucopyranoside. C’est un hétéroside de mégastigmane nouvellement
isolé et décrit.

IV.1.3.4. - Détermination structurale des mégastigmanes connus CM-4 à CM-9 :

Par l’analyse des spectres de RMN, de masse et comparaison avec les données de la
littérature, nous avons identifié les structures de six mégastigmanes connus.

Les composés, CM-4 (3.12.13.9.6) ou saussureoside A [189] et CM-5 (3.12.12.5) ou

komaroveside B [185], sont deux régioisomères pour la localisation du glucose. Ces glucosides
de mégastigmanes ont été isolés de Saussurea medusa (Compositae) et Cardamine komarovii
(Cruciferae). Les mesures de leurs pouvoirs rotatoires confirment leur stéréochimie : -44 pour
79
CM-4 (litt. -45), -62.3 pour CM-5 (litt. -65.4). Leurs structures sont proches de celle du
composé nouveau CM-1, qui constitue le dérivé dihydrogéné en C-9 du saussureoside A.
Le composé CM-6 (3.10.10.5) est le déglucopyranosyl-saussureoside A [189]. Ce
mégastigmane est décrit comme le produit d’hydrolyse du saussureoside A. C’est la première
fois qu’il est décrit comme métabolite naturel. L’hypothèse comme quoi ce composé pourrait
être formé lors des étapes de purification est difficilement envisageable car nous n’avons pas
isolé les aglycones des autres composés hétérosidiques.
Le composé CM-7 (3.13.22.9.8) ou saussureoside B [189] fut isolé précédemment de
Saussurea medusa (Compositae). Les protons H-3 et H-4 possèdent une 3JH-3ax-H-4eq de 3.5 Hz
caractéristique d’une position axiale et équatoriale. Les effets NOE entre H-3/H-11/H-13,
confirment leur configuration cis. Le pouvoir rotatoire mesuré pour CM-7 (-40.3) est identique
à celui de la littérature (-39.5).
Le composé CM-8 (3.13.19.7) ou staphylinoside D [190] a été isolé des feuilles de Staphylea
bumalda. Le proton H-8 est confirmé en position β par ses effets NOE observés avec les CH3-
12/-13. La structure isomère H-8α ou glochidionoside D isolé de Glochidion zeylanicum peut
être ainsi éliminée. La comparaison des pouvoirs rotatoires confirme cette identification : CM-
8 (-61.4), staphylinoside D (-60.8), glochidionoside D (-47.8).
Le dernier composé CM-9 (3.12.12.4) est le (6S, 9R)-roseoside isolé des feuilles d’Alangium
premnifolium [191] et obtenu par synthèse optiquement active et par β-glucosylation à partir
d’un 3-hydroxy-7,8-didehydro-β-ionol [187]. Sa courbe de CD indique un effet positif à 240 nm
d’où confirmation de la configuration 6S ; le pouvoir rotatoire positif (+ 91.7) confirme que
nous avons le diastéréosiomère (6S, 9R) (litt. : (6S, 9R) + 109.4 ; (6S, 9S) -157.5).

IV.1.4. - DETERMINATION STRUCTURALE DES ALCALOÏDES CD-1 à CD-4

Quatre alcaloïdes ont été isolés et identifiés dont CD-2 et CD-4 purifiés de l’extrait 4 (MeOH)
et CD-1 et CD-3 de l’extrait 3 (AcOEt). L’ensemble des données spectrales et la comparaison
avec les données de la littérature, nous ont permis de déterminer des alcaloïdes à noyau
indole dérivés du tryptophane dont un composé nouveau CD-2.
Les alcaloïdes à noyau indole sont une large classe diversifiée de produits naturels,
comprenant plus de 2000 composés. Ces produits naturels possèdent une diversité de
structure chimique et une richesse d'activités biologiques et pharmacologiques [192-194].
Parmi eux, les alcaloïdes dérivés de l'indole-3-carboxylate possèdent plusieurs activités
biologiques : antivirale, immunostimulatrice, inductrice d’interféron, anti-virale de l’hépatite
B et C, par exemple l’arbidol (A-1) et le composé A-2 [195-197]. Certains sont des inhibiteurs
de la 5-lipoxygénase humaine (composé A-3) [198, 199], et des antitumoraux (composé A-4)
[200].

80
IV.1.4.1. - Détermination structurale de CD-2 (4.4.13.9)
Le spectre de masse positif HR-ESI-MS de CD-2 montre un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à
376,1012 (calc. 376,1008) correspondant à la formule brute C16H19NO8.
Les spectres de RMN de CD-2 montrent la présence d’une unité osidique avec un doublet de
proton anomérique à δH ppm 4.93 (d, 7.6Hz). Les données spectrales COSY, NOESY, HSQC et
HMBC nous ont permis d’identifier un β-D-glucopyranose.
Quatre carbones aromatiques sp2 et une double liaison tétra-substituée >C=C< entre δC ppm
94.8 – 156.5 correspondent au noyau indole [201].
Sur le spectre de RMN 1H, nous retrouvons les protons du noyau indole : trois aromatiques
d’un système ABX à δHppm 7.24 (dd, 2.2, 0.3Hz), 7.06 (dd, 8.7, 2.1Hz) et 7.95 (d, 8.7Hz), et un
proton éthylénique CH=C< à δHppm 7.90 (s). Ce proton est porté par un CH à δC ppm 131.5 (HSQC),
et il corrèle sur le spectre HMBC avec les carbones du pyrrole (C-3, C-8 et C-9) et le carbonyle
C-10. Il s’agit donc du proton H-2 du noyau indole.

Les corrélations HMBC permettent :

- de localiser le β-D-glucopyranose en position 6 de l’indole : corrélation entre le proton
anomérique H-1’ 4.93 (d, 7.6Hz) et le carbone C-6 δC ppm 154.7,
- et de confirmer la présence de l’ester méthylique en position 3 : corrélation entre les
protons CH3-11 δH ppm 3.89 (s) et le carbonyle C-10 δC ppm 166.4.
Ainsi, le composé CD-2 est identifié comme l’ester méthylique de l’acide 6-O-β-D-
glucopyranose-6-hydroxyindole-3-carboxylique. L’acide 6-O-β-D-glucopyranose-6-
hydroxyindole-3-carboxylique est connu et a été isolé du rhizome de Cardamine
diphylla [202]; CD-2 pourrait ainsi être un produit d’estérification formé lors des étapes
d’extraction et de purification utilisant le méthanol.
81
Pour vérifier le caractère naturel de CD-2 dans C. chelidonii, nous avons refait le protocole
d’extraction en utilisant l’éthanol au lieu du méthanol. Suite à l’analyse par HPLC de l’extrait
éthanolique, nous avons observé un pic de très faible intensité au même temps de rétention
que CD-2 à 13,578 minutes. Nous en concluons que CD-2 ne semble pas être présent dans ce
nouvel extrait, et donc se serait formé durant le protocole d’extraction/purification.

82
 HPLC analytique du composé CD-2 et de l’extrait EtOH

IV.1.4.2. - Détermination structurale des alcaloïdes CD-1 (3.10.3.8), CD-3 (3.13.22.7) et CD-4
(4.7.13.7)
Les trois autres alcaloïdes CD-1, CD-3 et CD-4 sont des dérivés indoliques de structure proche
de CD-2 :
- le composé CD-1 est un alcaloïde soufré, le 2-méthylesulfinyl-6-méthoxy-3-indole-
carbonate isolé de fruit de Capparis masaikai [203]
- le composé CD-3 est l’acide β-D-glucopyranosyl-indole-3-carboxylique [204].
- le composé CD-4 est l’Indole-3-acetonitrile [205].

IV.1.5. - DETERMINATION STRUCTURALE DES COMPOSES CD-5 ET CD-6 :

Nous avons identifié les structures de deux composés très communs et fréquemment
rencontrés dans métabolites primaires des organismes vivants : l’uracile (CD-5 3.12.9.2) [206],
et l’acide palmitique (CD-6 3.6.6.8) [207].

83
IV.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTI-RADICALAIRE DES FLAVONOIDES DE C.
CHELIDONII
IV.2.1. - RAPPELS BIBLIOGRAPHIQUES
Suite aux études antérieures de la littérature réalisées sur les extraits méthanoliques des
feuilles et racines de C. chelidonii montrant une activité anti-inflammatoire, anti-radicalaire,
et antioxydante [84] (VOIR Partie I), nous avons entrepris d’évaluer le potentiel anti-
radicalaire des glycosides flavonoïdiques CF- 1 à CF-14.
Le métabolisme oxydatif mitochondrial est indispensable à la vie cellulaire, mais celui-ci est
générateur de radicaux libres. L’excès de leur production engorge les enzymes protectrices
que sont le superoxyde dismutase, la catalase et la peroxidase, créant un état de stress
oxydatif ou déséquilibre entre radicaux libres oxygénés (ROS) produits et capacité du système
antioxydant. Ce stress engendre des effets destructeurs cellulaires par oxydation des lipides
membranaires, des protéines cellulaires, de l’ADN, des enzymes [208]. Ces effets sont
responsables de pathologies ou de processus physiologiques comme le vieillissement,
l’immunodéficience, l’inflammation, l’artériosclérose, des désordres neurologiques, des
pathologies cardiaques, des cancers [209, 210].
L’activité anti-oxydante d’un composé correspond à sa capacité à retarder, empêcher ou
supprimer les dommages oxydatifs envers une molécule cible. Les anti-oxydants les plus
connus sont le β-carotène (provitamine A), l’acide ascorbique (vitamine C), le tocophérol
(vitamine E), ainsi que les composés phénoliques, particulièrement les flavonoides [211, 212].
L’activité des flavonoïdes s’explique par plusieurs mécanismes [209, 213].
- capacité à piéger des radicaux libres tels que ceux oxygénés (ROS) : hydroxyle HO•,
anion superoxyde O2•-, peroxyde ROO•, oxygène singulet •O-O•, alkoxyle RO•, et
radicaux non oxygénés : alkyle R•, aryle Ar•, et radicaux azotés (RNS) : NO•, NO2•

- chélation d’ions métalliques (Fe3+, Cu2+),

- inhibition d’enzymes responsables de la formation des ROS [214, 215].

La structure chimique et la polarité de la molécule anti-oxydante sont déterminantes car les

processus d’oxydation cellulaire sont complexes. Cela explique qu’il n’existe pas de méthode
universelle et standard pour évaluer la capacité anti-oxydante d’un composé ; cette
évaluation demandera d’utiliser plusieurs méthodes in vitro parmi lesquelles [208, 211, 212] :

84
 - piégeage de radicaux, comme le DPPH• (1,1-diphényl-picrylhydrazyle) et l’ABTS•+
(2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazole-6-sulphonate) qui sont stables et colorés avec des
absorptions respectives à 517 et 734 nm,
- réduction d’ions ferriques ou cuivriques par les méthodes FRAP (Ferric Reducing
Antioxidant Power) et CUPRAC (Cupric ion-reducting antioxidant capacity) dans
lesquelles la forme réduite des complexes métalliques possède une absorption à 593
ou 450 nm,
- inhibition de la consommation des ROO• par des molécules/substrats biologiques : les
méthodes ORAC (Oxygen radical Absorbance Capacity) et TRAP (Total radical-trapping
antioxidant parameter)
- inhibition de l’oxydation des LDL (low density lipoprotein) en suivant le retard dans la
formation de diènes conjugués
Notre choix s’est porté sur la mesure de la capacité d’un produit à céder un radical hydrogène
H• au radical DPPH•. C’est une méthode simple, rapide et souvent utilisée pour rechercher
l’activité anti-radicalaire de composés purs ou d’extraits. Elle est recommandée pour les
composés contenant des groupes SH, NH, et OH, se réalise à température ambiante d’où
absence de risque de dégradation thermique des composés et du radical [211].
Le DPPH• est un radical stable qui ne forme pas de dimère à température ambiante, de
couleur violette intense qui vire à l’incolore lorsque un antioxydant lui cède un H•. La
diminution de la coloration est suivie au spectrophotomètre à λ = 515 nm.

0,4
0,35
0,3
0,25 CF-1
CF-4
DO

0,2
0,15 CF-14
0,1
0,05
0
0 10 20 30 40 50 60 70
Temps en min

Activité anti-radicalaire des flavonoïdes de C. chelidonii

Parmi les flavonoïdes, ceux possédant un OH en C-4’ du cycle B possèdent un pouvoir anti-
oxydant très élevé. Ceux possédant un cycle o-dihydroxybenzène (cycle B catéchol) possèdent
une activité anti-radicalaire la plus importante. Ainsi, le quercétol possède une forte activité
anti-radicalaire du fait de son appartenance aux flavonols et à la présence d’un cycle B ortho-
dihydroxylé qui lui permettent de céder 2H dans le test au DPPH pour se transformer en
quinone puis régénération du cycle catéchol B par addition d’un H venant du solvant protique
(EtOH) [215, 216].
85
De nombreuses mesures d’activité anti-radicalaire de la littérature, confirment les conclusions
de Bors et al. [217] sur les capacités anti-radicalaires des aglycones flavonoidiques :
- présence d’un cycle B 3’-4’-dihydroxylé,
- présence d’une double liaison C-2/C-3 conjugué au carbonyle C-4 dans le cycle C
(flavone et flavonol) permettant une délocalisation électronique et conjuguaison des
cycles A et B,
- présence d’un OH-3 dans le cycle C et/ou d’un OH-5 dans le cycle A (flavonol)
De façon générale, les études montrent que les dérivés et hétérosides de flavonoides
possèdent une activité anti-oxydante in vitro plus faible que les aglycones. Ceci est dû au
blocage des hydroxyles par des sucres ou des substituants alkoxylés. Les glycosides de
quercétol en C-4’ possèdent une activité anti-radicalaire très faible par rapport au quercétol
du fait de l’incapacité à céder leur H.
Pour les flavonols dont le OH est libre en C-3, on observe une étroite corrélation entre l’activité
anti-radicalaire et l’activité anti-oxydante [215].
IV.2.2. - RESULTATS SUR LES COMPOSES CF-1 à CF-14
Nous avons réalisé une mesure d’activité antiradicalaire des flavonoides isolés de C. chelidonii
dans le but d’apprécier l’effet de la partie osidique et des groupes acétates sur cette activité
par rapport aux aglycones quercétol et kaempférol.
Les tests au DPPH ont été réalisés sur l’ensemble des 14 glycosides flavonoidiques (CF-1 à CF-
14) dans des plaques à 96 puits à 37oC avec 5 concentrations différents (200 μg/ml, 100 μg/ml,
50 μg/ml, 10 μg/ml et 5 μg/ml). L’acide ascorbique et la quercétine ont été utilisés comme
témoins positifs. La lecture de l’absorbance à 515 nm s’est faite après une heure de réaction
(Tableau n° 11).
L’activité anti-radicalaire est évaluée grâce au pourcentage d’inhibition (I%) et CI50
(concentration nécessaire pour obtenir une activité de 50%). Ces indices sont calculés comme
suit:
I% = [(Ablanc – Aéchantillon) / Ablanc] x 100%
Ablanc : absorbance du blanc (DMSO)
Aéchantillon : absorbance de l’échantillon (flavonoïde testé)
La CI50 est calculée sur la base de la courbe du pourcentage d’inhibition.

86
 Tableau n° 11 : Test au DPPH : pourcentage d’inhibition et CI50 des flavonoides glycosylés
(CF-1 à CF-14) de Cleome chelidonii
I% à 60 min Substituants
CI50 ± SD
Composé
(μM)
50 µg/ml 10 µg/ml R1 R2 R3 R4 R5

CF-1 87 34 25,89 ± 3,79 H H H OH H

CF-2 84 24 35,10 ± 0,89 H H CH3CO OH H

CF-3 88 46 17,74 ± 0,17 H CH3CO H OH H

CF-4 85 25 35,02 ± 1,44 CH3CO H H OH H

CF-5 88 35 26,43 ± 1,08 CH3CO H CH3CO OH H

CF-6 90 40 23,77 ± 3,17 H CH3CO CH3CO OH H

CF-7 57 16 49,67 ± 0,25 CH3CO CH3CO CH3CO OH H

CF-8 83 36 24,53 ± 1,53 H H H OH p-Coumaroyle

CF-9 76 23 33,74 ± 1,82 H CH3CO H OH p-Coumaroyle

CF-10 81 33 27,56 ± 2,18 H H CH3CO OH p-Coumaroyle

CF-11 87 26 26,79 ± 0,74 H CH3CO CH3CO OH p-Coumaroyle

CF-12 89 35 24,99 ± 1,99 H H H OH E-Cafféoyle

CF-13 84 24 31,40 ± 3,04 H H CH3CO OH E-Cafféoyle

CF-14 37 6 104,27 ± 5,09 CH3CO H H H H

Acide ascorbique - - 45,89 ± 2,15

Quercétine - - 2,12 ± 0,22

La CI50 de tous les flavonoïdes montre une activité anti-radicalaire moins importante que celle
du quercétol (CI50 = 2,12 μM), et un peu plus d’activité que l’acide ascorbique (CI50 = 45,89 μM)
sauf le composé CF-14 qui a une activité faible (CI50 = 104,27 μM). Ce flavonoïde est moins
actif que les autres flavonoides parce que son aglycone est le kaempférol dépourvu de
système ortho-dihydroxylé benzénique (cycle B).
Le composé CF-1 est la forme hétérosidique en C-3 et C-7 du quercétol et ainsi son activité
anti-radicalaire est beaucoup plus faible (CI50 = 25,89 μM). Dans la littérature le 7-O-α-L-
87
rhamnopyranosyl-(3-O-β-D-glucopyranosyl(1-2)-β-D-glucopyranosyl)-quercétol possède une
CI50 de 13,69 μM ; bien que le test n’y soit pas décrit, nous observons une perte d’activité de
la même grandeur [218].
La comparaison de l’activité des trois composés CF-1 (CI50 = 25,89 μM), CF-8 (CI50 = 24,53 μM)
et CF-12 (CI50 = 24,99 μM) montre que la présence de groupe coumaroyle ou cafféoyle en
position 6’’’Glu n’influe pas sur l’activité anti-radicalaire, bien que ces groupes soient des
donneurs de H du fait de leur conjugaison électronique avec formation de quinone. Notre
résultat est cohérent avec la faible activité anti-radicalaire reportée pour le
wushankaempférol d’Epimedium washanense [219] possédant 2 esters p-E-coumarate sur la
chaine osidique en C-3 (CI50 = 443,7 μM).

La présence d’un acétate en position 2’’’’Rha (composé CF-4; CI50 = 35,02 μM) ou 4’’’‘Rha
(composé CF-2 ; CI50 = 35,10 μM) ne modifie que légèrement l'activité par rapport au composé
non estérifié de référence (CF-1)
Entre tous les composés monoacétylés CF-2, CF-3 et CF-4, le plus actif est CF-3 (CI50 =17,74
μM), ceci indique que la présence d’un acétate en position 3’’’’Rha est la plus favorable pour
l’activité anti-radicalaire. Cet effet n’est pas retrouvé dans les composés analogues
coumaroylés : CF-9, CF-10 et CF-13 (ester cafféoyle)
De même, la présence de deux acétates comme pour les composés CF-5 (CI50 = 26,43 μM),
CF-6 (CI50 = 23,77 μM), CF-11 (CI50 = 26,79) n’influe pas sur l’activité anti-radicalaire.
Par contre la présence de trois acétates, composé CF-7 (CI50 = 49,67 μM), réduit de moitié
l’activité anti-radicalaire comparée avec celle du composé CF-1 (CI50 = 25,89 μM).
En conclusion, le glycoside de quercétol CF-3 est le seul à posséder une activité anti-radicalaire
la plus importante (CI50 = 17,74 μM). Ceci prouve que la présence d’un groupement acétyle en
position 3’’’’Rha de la chaîne en C-7 du quercétol, a le plus d’effet sur l’activité anti-radicalaire
que les autres substituants et positions.

88
V - DOLICHANDRONE SPATHACEA
V.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE DOLICHANDRONE SPATHACEA
V.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS ET PURIFICATION DES COMPOSES :
La poudre des feuilles de Dolichandrone spathacea (150 g) a été extraite selon le même
protocole de percolation que celui utilisé pour les parties aériennes de Cleome chelidonii
(schéma n° 4). Les cinq extraits sont numérotés de 1 à 5.
La comparaison par CCM et HPLC des extraits montre que l’extrait méthanolique (extrait 4)
est le plus riche en composés et nous avons choisi d’en isoler et purifier les composés.
Le fractionnement de l’extrait méthanolique a été réalisé par une VLC sur silice de phase
normale, et les fractions obtenues ont été purifiées pour conduire à l’isolement de 35
composés (schéma n° 5). Parmi ceux-ci on dénombre 16 iridoïdes, 3 saponosides, 3
diglycosides des phényléthanoïde, 4 flavonoïdes, 3 acides monoterpènoïques, 5 acides
phénoliques et 1 mégastigmane.
Schéma n° 4 : Extraction des feuilles de Dolichandrone spathacea

89
Schéma n° 5 : Purification des composés de l’extrait méthanolique 4 de D. spathacea.

90
91
V.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES IRIDOÏDES:
Les iridoïdes sont des métabolites secondaires de la flore et la faune terrestre et marine, et se
retrouvent dans de nombreuses familles de végétaux. Ce sont des monoterpènes caractérisés
par un squelette cyclopenta[c]pyranique, parfois désigné par le terme d’iridane (cis-2-
oxabicyclo-[4,3,0]-nonane).
Le système bicyclique β-cis-fusionné du cyclopentanopyrane est la structure caractéristique la
plus commune dans cette classe de composés :

Ils sont considérés comme des marqueurs chimiotaxonomiques de plusieurs familles :

Dipsacaceae, Gentianaceae, Lamiaceae, Plantaginaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae,
Oleaceae, Acanthaceae, Pedaliaceae et Bignoniaceae [124, 125].
Seize glycosides d’iridoïdes ont été identifiés dans l’extrait méthanolique (4) dont trois
composés nouveaux :
- 9 d’entre eux : DSI-1, DSI-2, DSI-3, DSI-4, DSI-5, DSI-6, DSI-12, DSI-13 et DSI-14, sont des
esters de catalpol,
- les 6 autres : DSI-7, DSI-8, DSI-9, DSI-10, DSI-15 et DSI-16, sont des esters d’ajugol,
- et le dernier DSI-11 est déterminé comme l’ixoside qui a été isolé de la feuille de Ixora
chinensis [220] et des tiges de D. serrulata [122].
Les différences structurales des glycosides isolés résident dans la structure chimique du
groupement ester en position 6 de la partie aglycone.

92
V.1.2.1. - Structure du β-D-glucopyranose
Tous les composés DSI renferment un β-D-glucopyranose, élément constitutif du catalpol et
de l’ajugol.
L’hydrolyse acide de l’extrait méthanolique suivie par l’analyse par HPLC chirale de
l’hydrolysat confirme la configuration naturelle du D-glucose.

Le spectre RMN 1H (Tableau n°12) montre le doublet du proton anomérique à H 4.69 ± 0.12
ppm (d, J=7.9 ± 0.1 Hz, H-1’) et un massif entre δH ppm 3.10 – 3.95 pour les 6 autres protons
glucidiques. L’attribution des protons osidiques est réalisée de l’analyse des données
spectrales COSY et TOCSY. Les spectres ROESY ou NOESY montrent bien des corrélations entre
les protons axiaux H-1, H-3 et H-5 confirmant qu’il s’agit un β-D-glucose.
Le β-D-glucose est lié à la partie monoterpénique en sa position 1 comme l’atteste une
corrélation HMBC entre H-1 du monoterpène δH ppm 5.10 – 5.56 et le carbone anomérique C-
1’ à δC ppm 99.2 ± 1.2, et inversement entre le proton anomérique H-1’ et le C-1 hydroxylé à δC
ppm 92 - 95.1.

Corrélations HMBC et ROESY/NOESY du β-D-glucopyranose dans les iridoïdes DSI-1 à DSI-16 :

Tableau n° 12 : RMN 1H et 13C de β-D-glucopyranose des composés DSI-1 à DSI-16

-D-glucopyranose

4.7(2).12.4 (i) DSI-7 4.6.7.12.5 (p) DSI-8 4.8 (2).16.3 (e’) DSI-9
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.57 (d, 7.9) 99.4 4.69 (d, 8.0) 98.0 4.69 (d 7.9) 98.0

2’ 3.10 (dd, 9.0, 8.2) 74.8 3.22 (dd, 9.2, 7.9) 73.4 3.22 (dd, 9.2, 8.0) 73.4

3’ 3.27 (dd, 9.0, 8.8) 78.0 3.39 (dd, 9.2, 8.7) 76.6 3.39 (dd, 8.9, 8.8) 76.6

4’ 3.17 (dd, 9.6, 8.7) 71.7 3.31 (dd, 9.2, 8.6) 71.8 3.29 (dd, 9.6, 8.6) 70.3

5’ 3.33 (m) 78.3 3.33 (m) 76.8 3.36 (m) 76.8

3.56 (dd, 11.9, 5.9) 3.68 (dd, 12.0, 6.0) 3.68 (dd, 11.9, 6.0)
6’ 62.9 61.5 61.5
3.80 (dd, 11.9, 1.9) 3.92 (dd, 12.0, 2.2) 3.92 (dd, 11.9, 2.0)

93
 4.7.9.6 (i’’) DSI-10 4.7.15.6 (n) DSI-15 4.7.10.6 (k) DSI-16
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.69 (d 7.8) 99.3 4.81 (d, 7.9) 99.7 4.81 (d 7.9) 99.7

2’ 3.22 (dd, 9.2, 8.0) 74.8 3.30 (dd, 8.8, 8.3) 74.9 3.29 (dd, 9.3, 7.9) 74.9

3’ 3.39 (dd, 9.0, 8.8) 78.0 3.43 (t, 9.0) 77.7 3.42 (t, 9.1) 77.7

4’ 3.28 (t, 9.7) 71.8 3.28 (t, 9.3) 71.8 3.27 (t, 9.5) 71.8

5’ 3.32 (m) 78.3 3.35 (ddd, 9.4, 6.3, 1.5) 78.7 3.35 (ddd, 9.7, 6.8, 2.1) 78.7

3.68 (dd, 11.9, 6.0) 3.67 (dd, 12.2, 6.1) 3.66 (dd, 11.9, 6.7)
6’ 62.8 62.9 63.0
3.92 (dd, 11.9, 2.0) 3.95 (dl, 11.9) 3.95 (dd, 11.9, 2.0)

4.7.17.7 (r’) DSI-1 4.8.18.3 (g) DSI-2 4.6.11 (r) DSI-3

No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.70 (d, 8.0) 99.7 4.69 (d 7.9) 99.7 4.82 (d, 7.9) 98.3

2’ 3.18 (dd, 9.1, 7.8) 74.9 3.17 (dd, 9.0, 8.0) 74.9 3.30 (dd, 9.3, 7.9) 73.5

3’ 3.31 (t, 9.1) 77.7 3.31 (t, 9.1) 77.7 3.43 (dd, 9.2, 9.0) 76.3

4’ 3.16 (dd, 9.1, 7.7) 71.8 3.16 (t, 9.5) 71.8 3.28 (dd, 9.8, 8.8) 70.4

5’ 3.23 (m) 78.7 3.23 (m) 78.7 3.35 (m) 77.3

3.55 (dd, 12.0, 6.7) 3.54 (dd, 12.0, 6.8) 3.67 (dd, 12.0, 6.7)
6’ 63.0 63.0 61.6
3.84 (dd, 12.0, 2.0) 3.83 (dd, 12.0, 2.0) 3.95 (dd, 11.9, 2.2)

4.6.7.12.7.3 (r + q) DSI-4 4.8(2).12.3 (d’) DSI-5 4.7.9.4 (i’) DSI-6

No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.80 (d, 7.9) 98.3 4.81 (d, 7.9) 99.7 4.81 (d 7.9) 99.7

2’ 3.29 (m) 73.5 3.28 (dd, 8.7, 7.9) 74.9 3.29 (t, 8.0) 74.9

3’ 3.42 (t, 9.1) 76.3 3.43 (t, 9.1) 77.7 3.43 (t, 9.1) 77.7

4’ 3.28 (m) 70.4 3.30 (dd, 9.8, 9.0) 71.8 3.29 (t, 8.9) 71.8

5’ 3.35 (m) 77.3 3.35 (m) 78.7 3.36 (m) 78.7

3.66 (dd, 12.0, 6.7) 3.67 (dd, 12.0, 6.7) 3.67 (dd, 12.0, 6.7)
6’ 61.6 63.0 63.0
3.95 (dd, 12.0, 2.3) 3.95 (dd, 12.0, 1.9) 3.95 (dd, 12.0, 2.1)

94
 4.8.21.7 (j) DSI-12 4.7.10.6 (k) DSI-13 4.7.15.8 (n’) DSI-14
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.81 (d, 7.9) 99.7 4.81 (d 7.9) 99.7 4.81 (d, 7.9) 99.7

2’ 3.28 (dd, 9.0, 7.8) 74.9 3.29 (dd, 9.3, 7.9) 74.9 3.30 (dd, 8.8, 8.3) 74.9

3’ 3.42 (t, 9.1) 77.7 3.42 (t, 9.1) 77.7 3.43 (t, 9.0) 77.7

4’ 3.27 (t, 9.2) 71.8 3.27 (t, 9.5) 71.8 3.28 (t, 9.3) 71.8

5’ 3.35 (m) 78.7 3.35 (ddd, 9.7, 6.8, 2.1) 78.7 3.35 (ddd, 9.4, 6.3, 1.5) 78.7

3.66 (dd, 12.0, 6.7) 3.66 (dd, 11.9, 6.7) 3.67 (dd, 12.2, 6.1)
6’ 63.0 63.0 62.9
3.95 (dd, 12.0, 1.7) 3.95 (dd, 11.9, 2.0) 3.95 (dl, 11.9)

4.17.2 (a’) DSI-11 Ajugol [221] Catalpol [222]

No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.65 (d 7.8) 100.4 4.54 (d, 7.9) 99.4 99.7

2’ 3.21 (dd, 8.8, 8.0) 74.6 3.20 (dd, 9.2, 8.0) 74.8 74.9

3’ 3.39 (t, 8.7) 77.8 3.37 (dd, 9.2, 8.0) 77.8 77.7

4’ 3.33 (m) 71.4 3.27 (dd, 9.7, 8.3) 71.7 71.7

5’ 3.32 (m) 78.2 3.30 (m) 78.0 78.6

3.70 (dd, 12.0, 5.0) 3.66 (dd, 11.9, 5.7)

6’ 62.7 62.9 62.9
3.88 (dd, 12.3, 2.2) 3.89 (dd, 11.9, 2.0)

V.1.2.2. - Structure de la partie 11-nor-3-iridène-1,6,8-triol (DSI-7 à -10, DSI-15 à -16) :

Les spectres de RMN 1H et COSY des composés DSI-7, DSI-8, DSI-9, DSI-10, DSI-15 et DSI-16
montrent la présence des signaux caractéristiques de l’aglycone de l’ajugol (11-nor-3-iridène-
1,6,8-triol) :
- trois protons couplés dont l’un hémiacétalique H-1 (δH ppm 5.53, d, J=2.5Hz), H-5 (δH ppm
2.95, dd, J=9.1, 2.3Hz) et H-9 (δH ppm 2.60, dd, J=9.3, 2.3Hz), ces deux derniers en jonction
du squelette cyclopenta[c]pyranique,
- deux protons oléfiniques H-3 (δH ppm 6.24, dd, J=6.3, 2.2Hz) et H-4 (δH ppm 5.00, dd, J=6.2,
2.6Hz) d’une double liaison cis-disubstituée et adjacente à H-5
- un proton de -CHOR-6 déblindé à δH ppm 4.95 (ddd, J=6.5, 4.1, 2.5Hz), adjacent à H-5 et à
un CH2,
- un groupe –CH2 –7 à δH ppm 2.02 (dd, J=14.2, 4.0Hz, H-7β) et δH ppm 2.27 (dd, J=14.2, 6.4Hz,
H-7α),
- un méthyle singulet –CH3-10 à (δH ppm 1.41, s).
Les spectres de RMN 13C, DEPT et HSQC (Tableau n° 13) comprennent 9 carbones dont trois
CH : C-1, C-5 et C-9 à δC ppm 93.4, 39.4 et 51.7, deux carbones sp2 C-3, C-4 à à δC ppm 141.1 et

95
104.6, un CH3 (C-10), un CH2 (C-7), un –CHOR (C-6) et un C quaternaire oxygéné (C-8) à δC ppm
79.1.
Le spectre HMBC confirme le squelette de l’aglycone grâce aux corrélations HMBC de H-1, H-
9, H-5, H-6 :

Le système cis-bicyclique H-5β/H-9β est confirmé par la grande constante de couplage JH-5/H-9
≥ 9Hz traduisant un angle dièdre voisin de 0°. La constante de couplage entre H-9 et H-1 (J ≈
2.5 Hz) positionne H-1α avec un angle dièdre voisin de 135°. Cette stéréochimie relative est
confirmée par les effets NOE observés entre H-5/H-9 -orientés, H-9/H-1 et l’absence d’effet
entre H-5/H-1.
Les protons H-6 et H-10 sont de configuration α dans le cyclopentane avec des effets NOE
observés entre H-1α/H-10, H-10/H-7α, H-7α/H-6 et l’absence d’effet NOE entre H-6/H-5β ou
H-9β.

Tous les composés isolés DSI-7, DSI-8, DSI-9, DSI-10, DSI-15 et DSI-16, montrent un déblindage
de la position 6 par rapport à l’ajugol : δH ppm > 4.75 ( ppm ≈ + 1) suggérant que cette position
est estérifiée et qu’il s’agit de dérivés 6-O-acyl-ajugols. L’HMBC montre en effet une
corrélation entre H-6 et un carbonyle d’ester à δC ppm ≈ 169.

96
Tableau n° 13 : RMN 1H et 13C de la partie aglycone des composés DSI-7 à DSI-10, DSI-15,
DSI-16
Aglycone (ajugol)

4.7(2).12.4 (i) DSI-7 4.6.7.12.5 (p) DSI-8 4.8 (2).16.3 (e’) DSI-9
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1 5.40 (d, 2.5) 93.4 5.53 (d, 2.5) 92.0 5.52 (d, 2.5) 92.0

3 6.12 (dd, 6.3, 2.2) 141.0 6.24 (dd, 6.3, 2.2) 139.7 6.24 (dd, 6.3, 2.2) 139.7

4 4.88 (dd, 6.2, 2.8) 104.6 5.00 (dd, 6.3, 2.6) 103.2 5.00 (dd, 6.2, 2.6) 103.2

5 2.83 (dq, 9.2, 2.1) 39.4 2.95 (dd, 9.1, 2.3) 38.0 2.95 (dd, 9.2, 2.2) 38.0

6 4.83 (ddd, 6.5, 3.8, 2.6) 80.3 4.96 (ddd, 6.5, 4.1, 2.7) 78.9 4.95 (ddd, 6.5, 4.1, 2.5) 78.9

1.90 (dd, 14.2, 4.0) β 2.02 (dd, 14.2, 4.0) β 2.02 (dd, 14.2, 4.0) β
7 47.9 46.5 46.5
2.14 (dd, 14.2, 6.5) α 2.27 (dd, 14.2, 6.4) α 2.27 (dd, 14.2, 6.4) α

8 79.1 77.7 77.7

9 2.47 (ddl, 9.2, 1.8) 51.7 2.60 (dd, 9.3, 2.3) 50.2 2.59 (dd, 9.3, 2.3) 50.2

10 1.29 (s) 26.1 1.41 (s) 24.7 1.41 (s) 24.7

4.7.9.6 (i’’) DSI-10 4.7.15.6 (n) DSI-15 4.7.10.2 (k’) DSI-16

No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1 5.52 (d, 2.5) 93.4 5.56 (d, 2.4) 93.4 5.39 (d, 2.5) 93.4

3 6.24 (dd, 6.3, 2.2) 141.1 6.23 (dd, 6.3, 2.2) 141.1 6.11 (dd, 6.3, 2.2) 141.1

4 4.99 (dd, 6.1, 2.6) 104.6 4.97 (dd, 6.3, 2.7) 104.6 4.84 (dd, 6.2, 2.6) 104.5

5 2.95 (dd, 9.1, 3.2) 39.4 2.90 (dq, 9.2, 2.2) 39.3 2.77 (dq, 9.0, 2.0) 39.3

6 4.95 (m) 80.4 4.89 (m) 80.5 4.77 (m) 80.5

2.02 (dd, 14.2, 4.0)β 2.23 (dd, 14.3, 6.5) α 2.10 (dd, 14.3, 6.3)
7 47.9 47.8 47.8
2.27 (dd, 14.2, 6.4)α 1.98 (dd, 14.3, 4.0) β 1.85 (dd, 14.1, 3.7)

8 79.2 79.0 79.1

9 2.59 (dd, 9.3, 2.3) 51.7 2.59 (dd, 9.2, 2.0) 51.6 2.45 (dd, 9.2, 2.1) 51.6

10 1.41 (s) 26.1 1.39 (s) 26.1 1.27 (s) 26.2

97
 Ajugol [221]
No
1H 13C

1 5.46 (d, 2.3) 93.8

3 6.16 (ddd, 6.3, 2.1, 0.5) 140.4

4 4.85 (ddd, 6.3, 3.2, 0.7) 105.9

5 2.72 (m) 41.3

6 3.92 (dt, 5.2, 2.9) 78.2

2.04 (dd, 13.4, 5.7)

7 50.0
1.79 (dd, 13.4, 4.7)

8 79.5

9 2.54 (dd, 9.6, 2.3) 51.8

10 1.31 (s) 25.2

V.1.2.2.1. - Esters d’ajugol nouveaux (DSI-8 et DSI-15) :

 DSI-8 [DS 4.6.7.12.5 (p)]
Le spectre de masse HR-ESI-MS de DSI-8 effectué en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 531.1848 (calc. 531.1842) correspondant à la formule brute C25H32O11.
La soustraction de la masse de l’ajugol (C15H24O9 ; M = 348) à l’ion moléculaire, indique que la
partie ester a une masse de 161 uma et une formule brute en C10H9O2. Le spectre RMN 1H
(Annexe) nous permet d’identifier la présence d’un groupe 4‘’-O-méthoxycinnamoyle :
- deux signaux s’intégrant chacun pour 2H d‘un système AA’BB’ pour un cycle
aromatique paradisubstitué à δH ppm 7.56 (d, J=8.6Hz, H-2’’ et H-6’’) et δH ppm 6.97 (d,
J=8.7Hz, H-3’’ et H-5’’).
- une double liaison disubstituée -C7=C8- de configuration trans avec une constante de
couplage élevée 3Jtrans = 16.0 Hz à δH ppm 7.68 (d, H-7’’) et δH ppm 6.43 (d, H-8’’)
- un –OCH3 à δH ppm 3.85 (s).
Les spectres de RMN 13C, DEPT et HSQC (Annexe) montrent les 10 carbones entre δC ppm 114.0
– 167.4 d’un 4‘’-O-méthoxycinnamoyle dont un carbonyle d’ester, deux carbones oléfiniques,
six carbones aromatiques, et un méthyle.
L’ensemble les données nous permet d’identifier la structure de DSI-8 comme le 6-O-(p-
méthoxy-E-cinnamoyle)-ajugol. C’est un iridoïde naturel nouvellement isolé et décrit.

98
Spectre de masse HRSM de DSI-8

Spectre RMN 1H de DSI-8

99
Spectre RMN 13C de DSI-8

Spectre DEPT de DSI-8

100
Spectre COSY H-H de DSI-8

Spectre TOCSY de DSI-8

101
 Spectre ROESY de DSI-8

Spectre HSQC J-modulé de DSI-8

102
Spectre HMBC de DSI-8

Spectre HMBC de DSI-8

103
  DSI-15 [DS 4.7.15.6 (n)]
Le spectre de masse HR-ESI-MS mode positif de DSI-15 montre un ion pseudo-moléculaire
[M+Na]+ à 539.2462 (calc. 539.2468) correspondant à la formule brute C25H40O11 et à une
partie ester en C10H16O2.
Les spectres de RMN 13C et DEPT (Annexe) montrent la présence d’un acide monoterpènique
dont un carbonyle C-1’’ à δC ppm 169.5, une liaison double trisubstituée à δC ppm 128.8 (C) et δC
ppm 144.3 (CH), un –CH2OH-8’’ à δC ppm 60.9, deux méthyles à δC ppm 12.4 (C-9’’) et δC ppm 19.8
(C-10’’), et quatre carbones entre δC ppm 27.2 – 40.6 dont 3 CH2 et 1 CH.
Les spectres RMN 1H (Annexe) et HSQC confirment un acide monoterpènoique monoinsaturé
avec un proton oléfinique à δH ppm 6.83 (td, 7.5, 1.3Hz, H-3’’), deux groupes méthyles à δH ppm
1.85 (s, H-9’’) et δH ppm 0.97 (d, 6.5Hz, H-10’’), un –CH2OH à δH ppm 3.64 (m, H-8’’a) et δH ppm 3.60
(m, H-8’’b), et un massif de 7 H blindés multiplets entre δH ppm 1.32 – 2.28.

Les corrélations HMBC permettent d’identifier un acide 8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-

octenoïque [223]:
- le CH3-9’’ singulet (δH ppm 1.85) corrèle au C-2’’et CH-3’’ de la double liaison
trisubstituée, et au carbonyle C-1’’,
- le doublet du CH3-10’’ (δH ppm 0.97) corrèle au CH-6’’ et aux deux CH2-7’’ et -5’’,
- le proton éthylénique H-3’’ (δH ppm 6.83) corrèle au CH2-4’’ et -5’’
- les protons du CH2OH-8’’ corrèlent aux CH-6’’ et CH2-7’’.
Le déblindage du proton H-3’’ à 6.83 ppm du fait de l’anisotropie exercée par le carbonyle, et
le blindage du carbone CH3-9’’ à 12.4 ppm traduisent une configuration E pour la double
liaison trisubstituée par rapport au 22-25 ppm dans une configuration Z [223, 224].
Configuration absolue :
Pour déterminer la configuration absolue du CH-6’’, nous avons réalisé une hydrolyse alcaline
de DSI-15 puis purifié par HPLC semi-préparative l’acide monoterpénique libéré [225]. La
mesure de son pouvoir rotatoire ([]D= +3.7) est comparée à celle de l’acide (2E,6R)-8-
hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoique (6R: []D = +5.6 [223] ; et 6R: []D = +12.8 , 6S : []D = -
10.8 [226].
La structure de DSI-15 est le 6-O-((2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoyl)-ajugol. C’est
également un composé nouveau.

104
V.1.2.2.2. - Iridoides connus esters d’ajugol (DSI-7, DSI-9, DSI-10 et DSI-16)
Par l’analyse des spectres de RMN, de masse et comparaison avec les données de la
littérature, nous avons déterminé les structures de quatre iridoides esters d’ajugol connus :

- DSI-7 est le 6-O-p-E-coumaroyl-ajugol isolé précédemment des racines de Rehmannia

glutinosa [221].
- DSI-9 et DSI-10 sont le 6-O-E-cafféoyl-ajugol et 6-O-E-isoféruloyl-ajugol isolés des feuilles
de Phyllarthrone madagascariense (Bignoniaceae) [227].
- DSI-16 est le nemorososide (ou 6-O-(2E,6Z)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2,6-octadienoyl-
ajugol) isolé des feuilles de Penstemon nemorosus [228].

105
V.1.2.3. - Structure de la partie 11-nor-3-iridène-7,8epoxy,6-ol (DSI-1 à -6 et DSI-12 à -
14) :
Les données spectrales de RMN des composés DSI-1, DSI-2, DSI-3, DSI-4, DSI-5, DSI-6, DSI-12,
DSI-13 et DSI-14 indiquent la présence des signaux caractéristiques du catalpol estérifié en
position 6.
La partie aglycone renferme des signaux protonés (Tableau n° 14) similaires à ceux décrits
précédemment :
- les trois protons méthines H-1 (δH ppm 5.20, d, J=9.1Hz), H-5 (δH ppm 2.62, m) et H-9 (δH
ppm 2.65, dd, J=9.0, 7.7Hz),
- les deux protons oléfiniques H-3 (δH ppm 6.40, dd, J=6.0, 1.5Hz) et H-4 (δH ppm 5.00, dd,
J=6.0, 4.2Hz) du cycle pyranne
- le proton -CHO-6 du cyclopentane à δH ppm 5.05 (dl, J=8.0Hz).
Par contre, le CH3-10 est oxydé en –CH2OH avec δH ppm 4.18 (d, J=13.2Hz, H-10a) et δH ppm 3.84
(d, J=13.2Hz, H-10b) ; de même un –CHO- à δH ppm 3.70 (sl, H-7) remplace le CH2–7. De la
même façon, les spectres de RMN 13C et DEPT (Tableau n° 14) montrent deux carbones
oxygénés –CHO–7 et CH2OH-10 à δC ppm 60.2 et 61.3.
Les données des expériences HSQC et HMBC confirment la structure du catalpol. La présence
du cycle époxyde C-7/C-8 est déterminée par comparaison des déplacements chimiques des
carbones C-7 et C-8 (δC ppm entre 58-67) qui possèdent un blindage δC ppm = -15 à -20 par
rapport au diol [125]. Le spectre de masse de chaque composé a confirmé la présence du cycle
époxyde.

La stéréochimie relative des 6 centres asymétriques a été déterminée de l’analyse des effets
NOE. Les trois protons H-5β, H-9β et H-1α du squelette cyclopenta[c]pyranique sont
positionnés grâce à la corrélation NOE entre H-5β/H-9β et l’absence d’effet NOE entre H-1α/H-
5β et H-1α/H-9β. Ensuite, l’absence d’effet NOE entre H-5β/H-6 et la présence d’effet NOE
entre H-6/H-7 indique que les protons H-6 et H-7 sont de configuration α, et donc le CH2OH-
10 est également de configuration α par la présence du cycle époxyde entre C-7/C-8.

106
Comme précédemment, tous les composés isolés DSI-1, DSI-2, DSI-3, DSI-4, DSI-5, DSI-6, DSI-
12, DSI-13 et DSI-14, montrent un déblindage de la position 6 du catalpol vers δH ppm = 5,
suggérant que cette position est estérifiée et que les composés sont des 6-O-acyl-catalpols.

Tableau n° 14 : RMN 1H et 13C de la partie aglycone du catalpol dans DSI-1 à DSI-6 et DSI-12
à DSI-14
Aglycone (catalpol)

Catalpol
4.7.17.7 (r’) DSI-1 4.8.18.3 (g) DSI-2 4.6.11 (r) DSI-3
No [222]
1H 13C 1H 13C 1H 13C 13C

1 5.08 (d, 9.1) 95.0 5.07 (d, 9.4) 95.1 5.20 (d, 9.1) 93.7 95.3

3 6.28 (dd, 6.1, 1.5) 142.4 6.27 (dd, 5.8, 1.7) 142.4 6.46 (dd, 5.8, 1.7) 141.0 141.8

4 4.90 (dd, 6.0, 4.1) 102.8 4.89 (dd, 6.0, 4.2) 103.0 5.01 (dd, 5.9, 4.2) 101.5 104.0

5 2.52 (m) 36.8 2.49 (m) 36.8 2.62 (tdd, 7.7, 4.3, 1.7) 35.3 39.1

6 4.96 (dd, 7.7, 0.9) 81.6 4.93 (dd, 7.9, 1.0) 81.3 5.06 (dd, 8.0, 1.2) 80.0 79.6

7 3.62 (d, 0.8) 60.2 3.60 (s) 60.3 3.73 (d, 1.2) 58.8 62.5

8 66.9 66.8 65.4 66.2

9 2.54 (t, 8.9) 43.2 2.25 (t, 9.1) 43.2 2.65 (dd, 9.0, 7.7) 41.7 43.6

4.08 (d, 13.2)

4.07 (d, 13.2) 4.19 (d, 13.2)
10 3.74 (d, 13.2) 61.3 61.3 59.9 61.6
3.73 (d, 13.2) 3.86 (d, 13.2)

4.6.7.12.7.3 (r + q) DSI-4 4.8(2).12.3 (d’) DSI-5 4.7.9.4 (i’) DSI-6

No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1 5.18 (d, 9.7) 93.6 5.20 (d, 9.3) 95.1 5.20 (d, 9.1) 95.1

3 6.38 (dd, 4.2, 1.8) 141.0 6.39 (dd, 6.0, 1.6) 142.4 6.40 (dd, 6.0, 1.5) 142.4

4 4.94 (dd, 6.0, 4.5) 101.5 5.10 (dd, 6.0, 4.2) 102.9 5.01 (dd, 6.0, 4.2) 102.9

2.51 (tdd, 7.9, 4.5,

5 35.2 2.62 (m) 36.8 2.62 (m) 36.8
1.9)

6 4.99 (dd, 8.3, 1.2) 80.0 5.05 (dd, 7.9, 1.0) 81.3 5.06 (dd, 7.1) 81.4

7 3.73 (d, 0.9) 58.7 3.72 (d, 0.8) 60.3 3.72 (sl) 60.3

8 65.4 66.8 66.8

9 2.61 (dd, 9.7, 7.7) 41.7 2.65 (dd, 9.2, 7.7) 43.2 2.65 (t, 8.8) 43.2

4.19 (d, 13.2) 4.20 (d, 13.2)

4.18 (d, 13.1)
10 59.9 3.85 (d, 13.2) 61.3 3.86 (d, 13.1) 61.3
3.85 (d, 13.2)

107
 4.8.21.7 (j) DSI-12 4.7.10.6 (k) DSI-13 4.7.15.8 (n’) DSI-14
No
1H 13C 1H 13C 1H 13C

1 5.18 (d, 9.5) 95.1 5.18 (d, 9.5) 95.1 5.18 (d, 9.6) 95.1

3 6.38 (d, 6.0) 142.4 6.39 (dd, 6.0, 1.7) 142.4 6.39 (d, 6.0) 142.4

4 4.97 (m) 102.9 4.97 (dd, 6.0, 4.4) 102.9 4.98 (dd, 5.6, 4.1) 102.9

5 2.58 (m) 36.7 2.59 (ddt, 7.8, 4.4, 1.8) 36.7 2.59 (m) 36.7

6 4.98 (m) 81.6 4.98 (dd, 7.9, 1.0) 81.6 4.98 (d, 7.7) 81.6

7 3.69 (s) 60.2 3.69 (s) 60.2 3.70 (sl) 60.2

8 66.7 66.8 66.8

9 2.63 (dd, 9.3, 7.8) 43.1 2.63 (dd, 9.5, 7.9) 43.2 2.63 (dd, 9.3, 7.9) 43.2

4.18 (d, 13.2) 4.18 (d, 13.2) 4.18 (d, 13.2)

10 61.3 61.3 61.3
3.84 (d, 13.2) 3.84 (d, 13.1) 3.85 (d, 13.1)

V.1.2.3.1. - Ester de catalpol nouveau (DSI-14 [DS 4.7.15.8 (n’)]):

Le spectre de masse HR-ESI-MS enregistré en mode positif de DSI-14 montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 553.2256 (calc. 553.2261) correspondant à la formule brute C25H38O12.
La comparaison des données spectrales de RMN des composés DSI-14 et DSI-15 montrent des
similitudes (Annexe) ; les signaux H et C de l’ester monoterpénique (8-hydroxy-2,6-diméthyle-
2-octenoate) sont identiques dans les deux composés.
Le composé DSI-14 est un ester monoterpénique de catalpol, le 6-O-(8-hydroxy-2,6-
diméthyle-2-octenoyl)- catalpol.
La stéréochimie du carbone C-6’’ de la partie monoterpénique est déterminée par une
méthode identique d’hydrolyse que celle employée pour DSI-15. La mesure du pouvoir
rotatoire ([]D= + 3.7) montre qu’il, s’agit de l’acide (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-
octenoique.
Ainsi, DSI-14 est identifié au 6-O-(2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoyl-catalpol. C’est
un glucoside d’iridoide nouveau.

108
V.1.2.3.2. - Esters de catalpol connus: DSI-1 à DSI-6, DSI-12 et DSI-13
Par l’analyse complémentaire des spectres de RMN et de masse, suivie d’une comparaison
avec les données de la littérature, nous avons identifié les structures de huit iridoides connus,
esters de catalpol.

DSI-1 est identifié au 6-O-(E)-p-cinnamoyl-catalpol isolé des racines et rhizomes de Gentiana

kurroo [229].
DSI-2 est le specioside (ou 6-O-(E)-p-coumaroyl-catalpol) isolé des feuilles de Catalpa speciosa
[230].
DSI-3 est déterminé comme le 6-(E)-p-méthoxycinnamoyl-catalpol isolé des feuilles de
Buddleja globosa [231].
DSI-4 est un mélange de deux isomères E et Z du 6-p-méthoxycinnamoyl-catalpol isolés de
Westringia fruticosa et Westrigia viminalis [232]. Ces isomères sont distingués par la
constante de couplage de la double liaison C-7’’=C-8’’ : 3Jtrans = 16.0 Hz dans le composé 6-(E)-
p-méthoxycinnamoyle catalpol (DSI-3) et 3Jcis = 12.7 Hz dans le composé 6-O-(Z)-p-
méthoxycinnamoyle catalpol.

DSI-5 et DSI-6 sont respectivement le verminoside (6-(E)-cafféoyl-catalpol) et la minecoside

(6-(E)-isoféruloyl-catalpol) isolés de Veronica officinalis [233].
DSI-12 et DSI-13 sont déterminés comme le némoroside et le 6’’(Z)-némoroside isolés de
Penstemon ambiguus [225]. Leurs esters sont le couple d’isomères: géraniol et nérol. Le
composé DSI-12 (némoroside) possède les carbones C-5’’ à δC ppm 39.1 et C-10’’ à δC ppm 16.2,
par rapport au composé DSI-13 (6’’(Z)-némoroside) avec C-5’’ à δC ppm 31.5 et C-10’’ à δC ppm
23.5.
109
V.1.2.4. - Structure de DSI-11 (4.17.2 (a’))(ixoside)
Le spectre de masse ESI-MS effectué en mode positif de DSI-11 montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 411.1 correspondant à la formule brute C16H20O11.
De l’analyse complémentaire des spectres RMN et de masse, nous avons identifié la structure
de DSI-11 comme étant le 7,8-dehydroforsythide (ou ixoside) isolé des feuilles et brindilles de
Ixora chinensis [220] et des tiges de D. serrulata [122].

V.1.3. DETERMINATION STRUCTURALE DES SAPONOSIDES

Trois saponosides triterpéniques (DSC-8, DSC-9 et DSC-10) ont été isolés et identifiés dans
l’extrait méthanolique des feuilles de Dolichandrone spathacea (extrait 4) dont deux
composés nouveaux à squelette ursane. La partie osidique est constituée d’une seule unité de
-D-glucose.

V.1.3.1. - Structure du β-D-glucopyranose

L’hydrolyse acide de l’extrait méthanolique suivie de l’analyse par HPLC chirale de l’hydrolysat
confirme la configuration naturelle d’un D-glucose.
Le spectre RMN 1H (Tableau n° 15) montre le doublet du proton anomérique à δ H ppm 5.33 +
0.07 (d, J=8.1 + 0.1 Hz, H-1’) et un massif entre δH ppm 3.34 – 3.84 pour les 6 autres protons
glucidiques. Les constantes de couplage 3J > 8 Hz entre les protons H-1’, H-2’, H-3’, H-4’ et H-
5’ confirment leurs positions trans-diaxiales.
Ce β-D-glucose est liée la partie triterpènique en sa position 28 du fait du déplacement
chimique blindé vers 96 ppm du carbone anomère (C-1’), et grâce à la corrélation HMBC entre
H-1’ δH ppm 5.33 + 0.07 et le carbonyle C-28 à δC ppm 178.5 + 0.1. [234, 235].

110
Tableau n° 15 : RMN 1H et 13C de β-D-glucopyranose de DSC-8 à DSC-10
β-D-glucopyranose

Arjunglucoside I DSC-8 (4.8.21.4 (j’)) DSC-9 (4.7.21.1) DSC-10 (4.8(2).23.1)

No
13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 95.9 5.40 (d, 8.1) 95.8 5.33 (d, 8.1) 95.9 5.33 (d, 8.2) 95.9

2’ 74.2 3.34 (tl, 8.5) 73.9 3.34 (tl, 8.2) 73.9 3.35 (t, 8.2) 73.9

3’ 79.0 3.41 (t, 9.0) 78.4 3.43 (t, 8.9) 78.3 3.43 (t, 8.8) 78.3

4’ 71.2 3.37 (m) 71.1 3.37 (t, 9.0) 71.2 3.38 (dd, 9.4, 8.5) 71.2

5’ 79.3 3.36 (m) 78.8 3.33 (m) 78.6 3.35 (m) 78.6

3.84 (dd, 12.5, 1.6) 3.82 (dd, 11.8, 2.0) 3.83 (dd, 12.0, 1.9)
6’ 62.3 62.4 62.4 62.4
3.71 (dd, 12.0, 4.2) 3.70 (dd, 11.9, 4.6) 3.71 (dd, 12.0, 4.6)

V.1.3.2. - Saponosides nouveaux (DSC-9 et DSC-10) :

- DSC-9 :
Le spectre de masse HR-ESI-MS de DSC-9 effectué en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 673.3934 (calc. 673.3928) correspondant à la formule brute C36H58O10.
La présence de 36 carbones est observée sur les spectres RMN 13C dont 6 pour le β-D-
glucopyranose et 30 pour un triterpène à squelette ursane. Une sapogénine -12 ursène
trihydroxylée dérivée de l’acide ursolique est déterminée des signaux (Tableau n° 16 ;
Annexe):
- carbonés: une double liaison trisubstituée à δC ppm 130.0 (CH) et 138.9 (C); sept
méthyles à δC ppm 28.4, 17.6, 17.4, 18.7, 24.7, 27.1 et 16.6; un carbonyle à δC ppm 178.5
(C-28) ; deux carbones hydroxylés CH-OH à δC ppm 80.2 et 69.0, et un carbone
quaternaire hydroxylé à δC ppm 73.7.
- protonés : un proton oléfinique à δH ppm 5.36 (t, 3.4Hz); sept méthyles dont six singulets
à δH ppm 1.07 (deux méthyles), 1.18, 1.33, 1.32 et 1.23, et un doublet à δH ppm 0.95 (d,
6.7Hz); deux groupes CH-OH à δH ppm 3.10 (dd, 11.7, 4.1Hz) et 4.50 (sl, w1/2= 7.5Hz).
La partie aglycone est un dérivé d’acide ursolique avec trois groupements hydroxyles dont un
–OH en position C-19 ou C-20 car nous n’avons qu’un seul méthyle doublet dans DSC-9.

111
Les corrélations HMBC à partir des protons caractéristiques (7 CH3, 2 CHOH, H-13 éthylénique,
H-5) permettent d’identifier l’enchainement carboné du squelette -12 ursène :

 des méthyles géminés CH3-23 et CH3-24 (H-23 à δH ppm 1.07 (s) / H-24 à δH ppm 1.18
(s)) on attribue les carbones C-3 (CHOH), C-4 (Cq) et C-5 (CH) ;
 les protons CH3-25 (δH ppm 1.33 (s)) corrèlent également avec le C-5 et les carbones C-
1 (CH2), C-9 (CH), C-10 (Cq);
- les protons CH3-26 (δH ppm 1.07 (s)) corrèlent également au C-9 (CH) et possèdent des
corrélations supplémentaires avec les carbones C-7 (CH2), C-8 (Cq), C-14 (Cq).
- les protons CH3-27 (δH ppm 1.32 (s)) corrèlent de même aux quatenaires C-8 et C-14, et
avec les carbones C-15 (CH2) et C-13 (éthylénique).
- le proton H-3 (CHOH ; δH ppm 3.10 (dd, 11.7, 4.1Hz)) corrèle avec le C-1(CH2) et le C-4
(Cq).
- le proton éthylénique H-12 corrèle aux C-11 (CH2), C-14 (C), C-17 (Cq), C-18 (CH).
- le proton H-5 (δH ppm 0.75 (sl)) corrèle aux C-3 (CHOH), C-4 (Cq), C-9 (CH), C-10 (CH2) et
au second CHOH attribué de ce fait au C-6.
Les cycles A, B, et C du squelette -12 ursène sont arrangés ainsi :

Les cycles D et E sont déterminés des corrélations HMBC observées pour :

- le proton H-18 (δH ppm 2,55 (sl)) qui corrèle aux C-13 (C éthylénique), C-28 (carbonyle),
C-17 (Cq), C-16 (CH2), C-20 (CH) et C-19 (quaternaire oxygéné).
- les protons CH3-29 ( δH ppm 1.23 (s)) corrèlent avec les C-19, CH-20, CH-18
- les protons CH3-30 ( δH ppm 0.95 (d, 6.7Hz) corrèlent aux C-19, CH-20, CH2-21

112
La partie génine de DSC-9 est identifiée comme un isomère de l’acide 3,6,19-trihydroxyurs-
12-en-28-oïque.
La configuration des centres asymétriques C-3, C-6, C-19, a été établie de l’analyse de la
multiplicité des protons, des valeurs des constantes de couplage et des effets Overhauser
observés dans le spectre ROESY :
- la configuration 3β–OH est déterminée par le doublet de doublets de H-3 à δH ppm 3.10
(11.7, 4.1Hz), possédant une grande constante de couplage 3JH-3ax/H-2ax = 11.7Hz avec
H-2 trans-diaxial confirmant que H-3 est en position axiale (α) et le groupement –OH
en position équatoriale (β).
- la configuration 6β–OH implique un proton H-6 α-équatorial δH ppm 4.50 (sl, w1/2=
7.5Hz) possédant des constantes de couplage faibles avec les protons vicinaux H-7.
Ceci est confirmé par les effets ROE entre les protons H-6α/H-5α axial, et H-6α/H-23α
équatorial.
- le groupe hydroxyle en position axiale 19α-OH est déterminé par l’effet ROE entre le
H-18 axial et le méthyle CH3-29β équatorial.

D’autres effets ROE sont observés entre le H-18 et le H-20, et entre les méthyles CH3-24, CH3-
25, CH3-26, tous ces protons et groupes étant β-axiaux. Un effet est observé entre H-3 -
axial/CH3-23-équatorial/ H-5 -axial, et entre H-5 et H-9 -axiaux.
La sapogénine de DSC-9 est l’acide uncarique ( = acide 3β, 6β, 19α-trihydroxyurs-12-en-28-
oique)[236], et le saponoside DSC-9 est identifié comme l’acide uncarique-28-O-β-D-
glucopyranoside ou acide 3β, 6β, 19α-trihydroxyurs-12-en-28-oique-28-O-β-D-
glucopyranoside. C’est un saponoside naturel nouvellement isolé et décrit.

113
Spectre de masse de DSC-9

Spectre RMN 1H de DSC-9

114
Spectre RMN 13C de DSC-9

Spectre HSQC de DSC-9

115
Spectre HSQC de DSC-9

Spectre ROESY de DSC-9

116
Spectre HMBC de DSC-9

117
Spectre HMBC de DSC-9

118
 - DSC-10 :
Le spectre de masse HR-ESI-MS de DSC-10 enregistré en mode positif, montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 689.3869 (calc. 689.3877) correspondant à la formule brute C36H58O11.
La comparaison des données spectrales de RMN des deux composés DSC-9 et DSC-10
montrent des similitudes (Tableau n° 16); leurs différences résident dans la présence d’un
groupement hydroxyle supplémentaire pour DSC-10.

Sur les spectres RMN 13C et DEPT de DSC-10, on peut observer uniquement six méthyles à δC
ppm 14.1, 17.7, 18.7, 24.7, 27.1 et 16.6, et un CH2 –OH à δC ppm 66.8. De même, le spectre de
RMN 1H montre les signaux de six méthyles dont cinq singulets à δH ppm 1.09, 1.35, 1.07, 1.33
et 1.23, un méthyle doublet à δH ppm 0.95 (d, 6.7 Hz), et deux protons CH2 –OH à δH ppm 3.50 (d,
10.9 Hz) et 3,62 (d, 11.0 Hz).
Le –OH supplémentaire est localisé en position 23 ou 24 d’après les corrélations HMBC entre
les protons du CH2–OH avec les carbones C-3, C-4, et C-5. La corrélation ROE entre le proton
H-6α et le CH2–OH confirme leur position α équatoriale soit 23α-CH2–OH. L’hydroxylation du
C-23 engendre des effets α(+), β(+), et γ (-) sur le déplacement chimique des carbones C-23
(δC ppm 66.8, α =+38.4), C-4 (δC ppm 14.1, β= +3.5), C-24 (δC ppm 14.1, γ= -3.5), C-5 (δC ppm 49.5, γ
= -6.7) et C-3 (δC ppm 73.9, γ = -6.3) dans DSC-10 par rapport au composé DSC-9. [237, 238].

119
Ainsi la sapogénine de DSC-10 est déterminée comme l’acide 3β, 6β, 19α, 23-tetrahydroxyurs-
12-en-28-oïque [239] et le saponoside DSC-10 est identifié comme l’acide 3β, 6β, 19α, 23-
tetrahydroxyurs-12-en-28-oique-28-O-β-D-glucopyranoside. C’est également un composé
nouveau.

V.1.3.3. - Saponoside connu (DSC-8) :

Le spectre de masse ESI-MS enregistré en mode positif de DSC-8, montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 689.5 correspondant à la formule brute C36H58O11.
La partie génine de DSC-8 est un dérivé trihydroxylé de l’acide oléanolique avec comme
signaux caractéristiques (Tableau n° 16).
Un –OH est positionné sur le C-19 grâce aux corrélations HMBC entre le proton H-19 δH ppm
3.29 (d, 3.4Hz) et les carbones C-13, C-17, C-18, C-20, C-21, C-29 et C-30. Ce proton est-
équatorial (H-19β) car nous observons un effet ROE entre H-19/CH3-30β-axial ; donc le
groupement –OH est en position α-axiale.
Par l’analyse similaire des données spectrales de RMN et la comparaison avec la littérature,
les trois autres –OH sont déterminés en 2α-OH, 3β-OH et 23α-CH2-OH.
Le saponoside DSC-8 est identifié comme l’arjunglucoside I (ou acide 2α, 3β, 19α, 23-
tetrahydroxyolean-12-en-28-oique-28-O-β-D-glucopyranoside), composé connu isolé de
Trachelospermum asiaticum [240].

120
Tableau n° 16 : RMN 1H et 13C de la partie sapogénine de DSC-8 à DSC-10
Sapogénine de DSC-8 à DSC-10

Arjunglucoside I DSC-8 (4.8.21.4 (j’)) DSC-9 (4.7.21.1) DSC-10 (4.8(2).23.1)

No
13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1.93 (dd, 12.3, 4.4) 1,00 (m) 1,02 (m)

1 47.6 47.8 42.1 41.7
0.92 (dd, 12.2, 11.6) 1,62 (m) 1,61 (m)

1,74 (m) 1,61 (m)

2 68.9 3.71 (m) 69.7 28.0 27.6
1,59 (m) 1,77 (m)

3 78.4 3.37 (m) 78.3 3,10 (dd, 11.7, 4.1) 80.2 3,58 (dd, 11.7, 3.8) 73.9

4 43.7 44.2 40.7 44.2

5 48.5 1.33 (m) 48.4 0,75 (sl) 57.2 1.19 (sl) 49.5

1.42 (td, 12.7, 3.2) ax

6 18.8 19.3 4,50 (sl, w1/2= 7.5) 69.0 4,41 (sl, w1/2=7.0) 68.9
1.47 (m) eq

1.80 (dd, 12.6, 3.8) eq 1,55 (dd, 14.5, 2.0) eq 1,51 (dl, 14.2)
7 33.1 33.3 41.8 41.4
1.62 (td, 12.6, 4.1) ax 1,74 (m) ax 1,81 (m)

8 40.4 40.9 40.3 40.3

9 48.2 1.85 (t, 9.4) 49.1 1,73 (m) 49.0 1,77 (m) 48.9

10 38.6 39.2 37.6 37.3

11 24.3 2.02 (dd, 8.8, 2.9) 24.9 2,06 (m) 24.7 2,07 (m) 24.7

12 123.5 5.36 (t, 3.3) 124.8 5,36 (t, 3.4) 130.0 5,36 (tl, 3.4) 130.0

13 144.4 144.5 138.9 138.9

14 42.2 42.8 43.1 43.1

1.77 (dd, 13.5, 3.3) eq 1,91 (td, 14.0, 4.4) ax 1,91 (td, 13.9, 3.9) ax
15 29.1 29.4 29.7 29.7
1.69 (m) ax 1,03 (m) eq 1,04 (m) eq

2.35 (td, 13.4, 3.1) ax 2,62 (td, 13.3, 4.3) ax 2,62 (td, 13.3, 4.3) ax
16 28.0 28.4 26.6 26.6
1.74 (m) eq 1,66 (m) eq 1,66 (dl, 13.0) eq

17 46.5 47.1 49.3 48.6

18 44.6 3.08 (sl, W1/2 = 5) 45.1 2,55 (sl) 55.0 2,25 (s) 55.0

19 81.1 3.29 (d, 3.4) 82.4 73.7 73.7

20 35.5 35.9 1,38 (m) 43.0 1,38 (m) 43.0

1.02 (dm, 12) 1,75 (m) 1,28 (m)

21 29.0 29.5 27.2 27.2
1.70 (m) 1,27 (m) 1,76 (m)

1.69 (m) 1,81 (m) 1,66 (dl, 12.6)

22 32.9 33.2 38.3 38.3
1.29 (m) 1,66 (m) 1,80 (m)

3.53 (d, 11.1) 3.50 (d, 10.9)

23 66.7 66.4 1,07 (s) 28.4 66.8
3.29 (d, 11.0) 3,62 (d, 11.0)

24 14.2 0.72 (s) 13.8 1,18 (s) 17.6 1,09 (s) 14.1

25 17.8 1.05 (s) 17.5 1,33 (s) 17.4 1,35 (s) 17.7

26 17.4 0.77 (s) 17.8 1,07 (s) 18.7 1,07 (s) 18.7

27 24.9 1.33 (s) 25.1 1,32 (s) 24.7 1,33 (s) 24.7

28 177.3 178.6 178.5 178.5

29 28.7 0.96 (s) 28.6 1,23 (s) 27.1 1,23 (s) 27.1

30 24.7 0.97 (s) 25.2 0,95 (d, 6.7) 16.6 0,95 (d, 6.7) 16.6

121
V.1.4. - DETERMINATION STRUCTURALE DES METABOLITES CONNUS DSC-1 à DSC-7 et DSC-
11 à DSC-19
En plus des iridoïdes et des saponosides, 16 autres composés ont été isolés et identifiés à des
structures connues. L’ensemble des données spectrales de RMN et de masse, suivie d’une
comparaison avec celles de la littérature, nous a permis de déterminer les structures de trois
diglycosides de phényléthanoïdes (DSC-1 à DCS-3), quatre flavonoïdes (DSC-4 à DSC-7), trois
acides monoterpèniques (DSC-11 à DSC-13), cinq acides phénoliques (DSC-14 à DSC-18) et un
mégastigmane (DSC-19).

V.1.4.1. - Diglycosides de phényléthanoïdes :

- DSC-1 possède 2 unités osidiques : glucose et rhamnose qui sont facilement distingués
par les signaux caractéristiques :
 Le glucose est identifié grâce à un carbone anomérique à δH ppm 4.19 (d, 7.9Hz)
et les constantes de couplage 3J>7.9Hz entre les protons H-1’, H-2’, H-3’, H-4’
et H-5’.
 Le rhamnose déterminé par le carbone anomérique à δHppm 5.05 (d, 1.4Hz) et
un carbone méthyle à δH ppm 1.15 (d, 6.2Hz)
Ce rhamnose est lié en position 3’ du glucose grâce à la corrélation HMBC entre le
proton H-1’’-Rha à δHppm 5.05 (d, 1.4Hz) et le carbone C-3’-Glc à δCppm 84.5.
La partie génine, 3,4-dihydroxyphényléthanol, est identifiée grâce aux signaux
caractéristiques d’un système ABX à δHppm 6.45 (dd, 8.0, 2.0Hz, H-6), 6.56 (d, 8.0Hz, H-
5) et 6.58 (d, 1.9Hz, H-2), et de deux CH2 à δCppm 36.6 (C-7) et 72.1 (C-8).
Le glucose se lie en position C-8 du 3,4-dihydroxyphényléthanol grâce à la corrélation
HMBC entre le proton H-1’-Glc à δHppm 4.19 (d, 7.9Hz) et le carbone C-8.
DSC-1 est identifié au decafféoyleacteoside isolé de Cistanche salsa [241].
- Les spectres de DSC-2 et DSC-3 sont similaires à ceux de DSC-1 mais avec la présence
d’une partie cafféoyle dans ces composés. La partie cafféoyle est facilement identifiée
grâce aux signaux caractéristiques d’un système ABX à δHppm 6.98 (dd, 8.3, 2.0Hz, H-
6’’’), 6.80 (d, 8.1Hz, H-5’’’) et 7.08 (d, 1.9Hz, H-2’’’), et une double liaison trans à δHppm
7.62 (d, 15.9Hz, H-7’’’), 6.30 (d, 15.8Hz, H-8’’’).
La partie cafféoyle estérifie la position 4’ du glucose avec une corrélation HMBC entre
le proton H-4’-Glc à δHppm 4.94 (t, 9.5Hz) et C-9’’’ à δCppm 166.9 pour DSC-2, tandis que
la partie cafféoyle estérifie la position 6’ du glucose de DSC-3 grâce à la corrélation
HMBC entre le proton H-6’-Glc et C-9’’’ à δCppm 169.2.
Les deux isomères DSC-2 et DSC-3 sont identifiés comme étant le verbascoside (ou
acteoside) [242] et isoverbascoside (ou isoacteoside) [243].

122
V.1.4.2. – Flavonoïdes (lutéoline et glycosides) :

- DSC-4 et DSC-5 sont déterminés comme étant la lutéoline [244] et la lutéoline-7-O--

D-glucopyranoside [245].

- DSC-6 est la lutéoline-7-O--D-glucuronide [246]. La partie osidique est identifiée

grâce aux grandes constantes de couplage des protons H-1’’ à δH ppm 5.17 (d, 6.9Hz), H-
4’’ à δH ppm 3.63 (dd, 9.6, 9.0Hz) et H-5’’ à δH ppm 4.05 (d, 9.7Hz); en plus les effets ROE
entre les protons H-1’’/H-3’’/H-5’’ confirment leurs positions trans-diaxiales.
- DSC-7 est la lutéoline-7-O-rutinoside [247-250].

V.1.4.3. - Acides monoterpèniques :

- DSC-11 et DSC-12 sont deux acides monoterpéniques isomères du géraniol et nérol,
distingués par le déplacement chimique du C-10 à δC ppm 23.5 (6Z) et δC ppm 16.2 (6E).
Ces composés sont identifiés comme l’acide (2E,6E)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2,6-
octadienoïque [251] et l’acide (2E,6Z)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2,6-octadienoïque
[252].
- DSC-13 est déterminé comme l’acide (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoïque
[223]. La configuration absolue du CH-6 est confirmée par la mesure de son pouvoir
rotatoire (+3.4) comparée avec la littérature: 6R: = +5.6 [223, 226]; et 6R: = +12.8, 6S :
= -10.8 [226].

123
 -

V.1.4.4. - Acides phénoliques:

- DSC-14 et DSC-15 sont identifiés comme l’acide p-hydroxybenzoïque (acide p-

salicylique) isolé des racines de Pandanus odorus [253], et l’acide vanillique isolé des
fruits de Boreave orientalis [254].
- DSC-16, DSC-17 et DSC-18 sont l’acide p-coumarique isolé des tiges de Manihot
esculenta [255], l’acide 4-O-méthylcoumarique (acide p-méthoxycinnamique) [256] et
l’acide isoférulique [257].

V.1.4.5. - Mégastigmane:
Le dernier composé DSC-19 est identifié comme le 6S,9S-roseoside (corchoionoside C) isolé
des fruits de Capparis spinosa [258] et obtenu par synthèse optiquement active et par -
glucosylation à partir d’un 3-hydroxy-7,8-didehydro--ionol [187]. La configuration absolue du
C-9(S) est déterminée par les déplacements chimiques des carbones de la double liaison 7-
HC=CH-8 à δC ppm 133.7 et 133.8 (9S: δC ppm 133.8 C-7, C-8 et 9R: δC ppm 131.6 C-7, 135.3 C-8),
et le pouvoir rotatoire positif ( = + 79.9) qui confirme le diastéréosiomère (6S, 9S) (litt. : (6S,
9S) = + 74.0 ; (6R, 9S) = -157.5) [187].

124
V.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTIMICROBIENNE
Dans l’objectif de valoriser et promouvoir l'usage de Dolichandrone spathacea en médicine
traditionnelle Vietnamienne, nous avons évalué l’activité antimicrobienne des extraits
préparés et composés isolés des feuilles. Dans la littérature, nous avons vu que les feuilles
sont utilisées comme antiseptique et contre le muguet, et que les extraits méthanoliques des
feuilles et des tiges ont montré une activité contre des souches de Staphylococcus aureus
résistant à la méthicilline (SARM)[127].
Nous avons étudié l’activité antimicrobienne des 5 extraits foliaires (extrait d’éther de pétrole
(extrait 1), extrait chloroformique (extrait 2), extrait d’acétate d’éthyle (extrait 3), extrait
méthanolique (extrait 4) et extrait hydrométhanolique (extrait 5)), et celle des 35 composés
isolés de l’extrait méthanolique.
Les tests antimicrobiens ont été réalisés par le Docteur Amin ABEDINI (ATER 2014/2016;
ICMR ; Groupe « Isolement-Structure ») dans le laboratoire de Microbiologie de l’UFR de
pharmacie de l’URCA en collaboration avec l’unité de recherche EA 4691 "Biomatériaux et
Inflammation en site osseux (BIOS)", (directrice : Professeur Sophie GANGLOFF).
Les évaluations antimicrobiennes sont fréquemment réalisées sur une ou deux souches, par
contre dans notre projet nous avons choisi une large gamme de micro-organismes pathogènes
(staphylocoques, entérocoques, bacilles, streptocoques, candida, …). La plupart de ces
souches ont été récemment isolées d'infections humaines. A titre de comparaison, nous avons
également inclus certaines souches de référence ATCC (American Type Culture Collection) et
CIP (Collection de l'Institut Pasteur). Ces souches ont été isolées puis repiquées sur un milieu
de culture en laboratoire, elles ne reflètent donc pas ce que l'on rencontre actuellement dans
les hôpitaux.
Les tests antimicrobiens que nous avons réalisés, sont comparables à ceux attendus pour des
antibiotiques. Pour la détermination de la CMI, nous avons utilisé la méthode de diffusion par
un ensemenceur automatique qui a beaucoup plus d’avantages que la méthode de diffusion
par disque. Cette dernière dépend des caractéristiques physico-chimiques des composés
(solubilité, polarité, masse, …) et c’est une méthode incertaine pour les extraits bruts qui
contiennent un mélange de différents composés.

V.2.1. - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES EXTRAITS :

L’activité antimicrobienne des 5 extraits est réalisée en utilisant la méthode de diffusion en
milieu solide afin de déterminer la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) à six
concentrations (10 mg/ml, 5 mg/ml, 2,5 mg/ml, 1,2 mg/ml, 0,6mg/ml et 0,3mg/ml) contre 17
souches bactériennes (8 bactéries à Gram positif, 9 bactéries à Gram négatif) et 5 levures.
La CMI se détermine en utilisant la gélose de Mueller Hinton (MHA) mélangée à la solution
d’échantillon à tester, puis coulée en boîtes de Petri. L’ensemencement se réalise à l’aide d’un
inoculateur à tête multiples (appareil de STEERS). L’activité sera ensuite estimée visuellement
par la présence ou l’absence de colonies après incubation à l’étuve à 37 °C pendant 18-24
heures (Tableau n° 17)

125
 Tableau n° 17 : Concentration minimale inhibitrice (CMI) des cinq extraits foliaires de D.
spathacea
P = bactérie à Gram positif N = bactérie à Gram négatif L = levure NA = Non actif
CMI (mg/ml)

No Souches sensibles Extrait 1 Extrait 2 Extrait 3 Extrait 4 Extrait 5

1 Bacillus subtilis 5 1,2 5 10 10

2 Enterococcus faecalis ATCC 1034 5 2,5 10 10 10

3 Staphylococcus aureus CIP 8325-4 5 2,5 5 NA 10

4 Staphylococcus aureus CIP 53.154 5 2,5 5 2,5 10

P
5 Micrococcus luteus 5 1,2 5 5 10

6 Listeria innocua 5 2,5 5 NA 10

7 Staphylococcus epidermidis ≤ 0,3 1,2 2,5 10 10

8 Streptococcus pyogenes ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3

9 Providencia stuartii 5 1,2 5 NA 10

10 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 10 NA 10 10 10

11 Shigella sonnei ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3

12 Proteus vulgaris NA NA 10 NA 10

N 13 Klebsiella pneumoniae NA NA 10 NA NA

14 Serratia marcescens NA NA 10 NA 10

15 Escherichia coli CIP 54.127 NA NA 10 NA NA

16 Enterobacter cloacae NA NA 10 NA NA

17 Salmonella enterica NA NA 10 NA 10

18 Candida glabrata 2,5 1,2 5 NA 10

19 Candida tropicalis 5 10 5 NA 10

L 20 Candida kefyr 5 10 10 NA NA

21 Cryptococcus neoformans 10 NA 10 NA NA

22 Candida albicans 5 10 5 NA 10

Les résultats montrent que tous les extraits sont plus actifs sur les bactéries à Gram positif et
les levures que sur les bactéries à Gram négatif. L’activité la plus intéressante est trouvée pour
l’extrait AcOEt (extrait 3) qui est actif contre les 22 souches de microorganismes, et pour
l’extrait chloroformique (extrait 2) le plus actif sur les bactéries à Gram positif.
L’extrait méthanolique (extrait 4) possède une activité antibactérienne contre 6 bactéries à
Gram positif (Bacillus subtilis, Enterococcus faecalis ATCC 1034, Staphylococcus aureus CIP

126
53.154, Micrococcus luteus, Staphylococcus epidermidis et Streptococcus pyogenes) et 2
bactéries à Gram négatif (Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et Shigella sonnei)
Une activité importante est mise en évidence pour tous les extraits foliaires de D. spathacea
contre deux bactéries pathogènes: Streptococcus pyogenes et Shigella sonnei (CMI ≤ 0,3)

V.2.2. - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES METABOLITES ISOLES:

La bioautographie par la méthode de diffusion en milieu gélosé MH (Mueller Hinton) est
réalisée sur cinq souches bactériennes dont deux bactéries à Gram positif (Staphylococcus
aureus CIP 53.154 et Enterococcus faecalis ATCC 1034) et trois bactéries à Gram négatif
(Pseudomonas aeruginosa CIP 82-188, Pseudomonas aeruginosa A-22 et Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027) et par rapport au témoin de gentamicine (50 µg).
Les résultats (Tableau n° 18) montrent six composés actifs (DSC-1, DSC-2, DSC-4, DSC-17, DSI-
6 et DSI-9). Les autres composés ne sont pas actifs.

Tableau n° 18 : Bioautographie des composés actifs

Composé Staph. aureus E. faecalis P. aeruginosa P. aeruginosa P. aeruginosa

(50 µg) CIP 53.154 ATCC 1034 CIP 82-188 A-22 ATCC 9027
DSC-1 +++ ++ + - +
DSC-2 +++ ++ + + +
DSC-4 ++ ++ + + +
DSC-17 +++ ++ + - ++
DSI-6 - + - - +
DSI-9 +++ + + + +

« +++ » = très actif; « ++ » = actif modéré; « + » = actif; « - » = non actif

127
Les CMI de ces 6 composés ont été déterminées par la méthode de dilution en milieu liquide
en plaques 96 puits contre cinq souches bactériennes dont trois bactéries à Gram positif:
Staphylococcus aureus CIP 53.154, Enterococcus faecalis ATCC 1034 et Streptococcus
pyogenes, et deux bactéries à Gram négatif : Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et Shigella
sonnei, à 9 concentrations : 500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, 31,2 µg/ml, 15,6
µg/ml, 7,8 µg/ml, 3,9 µg/ml, et 1,9 µg/ml (Tableau n° 19).
Tableau n° 19 : CMI de DSC-1, DSC-2, DSC-4, DSC-17, DSI-6 et DSI-9
CMI (µg/ml)
Composé Staph. aureus E. faecalis P. aeruginosa
Strep. pyogenes Shig. sonnei
(50µg) CIP 53.154 ATCC 1034 ATCC 9027
DSC-1 62,5 31,2 62,5 250 31,2

DSC-2 125 31,2 125 250 31,2

DSC-4 250 250 125 500 125

DSC-17 62,5 125 62,5 125 62,5

DSI-6 NA 500 250 500 250

DSI-9 125 250 125 500 125

La meilleure activité inhibitrice a été trouvée pour deux diglycosides de phényléthanoïde: DSC-
1 (decafféoylacteoside ou decafféoylverbascoside) et DSC-2 (acteoside ou verbascoside).
L’activité antimicrobienne du decafféoylverbascoside (DSC-1) avait été précédemment
évaluée contre Staph. aureus ATCC 29213 et E. faecalis 29212, et contre deux bactéries à Gram
négatif : E. coli ATCC 25922 et P. aeruginosa ATCC 27853. Contrairement à notre résultat sur
Staph. aureus, ce composé n’avait pas démontré d’activité contre les 4 bactéries ciblées [259].
L’activité antibactérienne du verbascoside (DSC-2) est connue et celle-ci a été plusieurs fois
évaluée dans la littérature contre différentes souches bactériennes. Quelques études
confirment nos résultats :
- L’activité moyenne obtenue contre Streptococcus pyogenes (CMI = 125 μg/ml) est en
accord avec l’étude de Souza et al. contre: Strep. pyogenes ATCC 75194 (20 mm; 62
μg/ml), Staph. epidermidis 557H9 (20 mm; 32 μg/ml) et Staph. aureus ATCC 25923 (13
mm; 63 μg/ml) [260].
- Le verbascoside montre un effet antibactérien significatif contre Staph. aureus CIP
53.154 avec une CMI = 125 μg/ml. Ce résultat est accord avec la littérature où le
verbascoside montre des activités considérables contre des souches multirésistantes
128
 de S. aureus (MRSA) avec des CMI entre 64 – 256 µg/ml [261]. Dans l’étude de Rigano
et al. son activité est plus forte contre S. aureus ATCC 13709 avec une CMI = 16 µg/ml,
de plus ce composé possède une activité plus importante contre les deux bactéries E.
faecalis ATCC 14428 (CMI = 32 µg/ml) et P. aeruginosa ATCC 27853 (CMI = 32 µg/ml)
par rapport à nos résultats [262].
- Le verbascoside est actif contre Aeromonas hydrophila ATCC 7966 avec une CMI =
120 µg/ml, et Staph. aureus ATCC 25923 avec une CMI = 250 µg/ml, et dans cette étude
aucune activité est mise en évidence contre Bacillus subtilis et Pseudomonas
aeruginosa comme nous l’avons également démontré [263].
- Rigano et al. ont également mis en évidence une activité antibactérienne importante
du verbascoside contre 2 bactéries à Gram positif (Staph. epidermidis ATCC 10875, et
Bacillus subtilis ATCC 10774) et 6 bactéries à Gram négatif (Enterococcus aerogenes
ATCC 13048, E. cloacae ATCC 10699, Escherichia coli ATCC 11229, Proteus mirabilis
ATCC 7002, Proteus vulgaris ATCC 12454, et Salmonella typhi ATCC 19430) avec une
CMI entre 4 – 128 µg/ml dont la meilleure contre P. vulgaris ATCC 12454 [262].
La lutéoline (DSC-4) est peu active sur les souches testées, ce qui est en accord avec une étude
de la littérature ayant trouvé une CMI de 128 µg/ml contre Staph. aureus (MSSA) et Staph.
aureus (MRSA), et une CMI de >256µg/ml contre P. aeruginosa ATCC 29212. Dans cette même
étude, la lutéoline montre une faible activité contre 2 bactéries E. coli ATCC 25922 et S. faecalis
avec une CMI de plus 256 µg/ml [264]. Dans une autre étude, la lutéoline également possèdait
une faible activité avec une CMI de 200 µg/ml contre Bacillus subtilis ATCC 6633 [265].
D’après nos résultats, l’acide p-méthoxy-E-cinnamique (DSC-17) possède une activité
antibactérienne moyenne. Ces résultats sont en accord avec ceux de Rigano et al. [262], où ce
composé montre un effet antibactérien contre 3 bactéries (S. aureus ATCC 13709, E. faecalis
ATCC 14428 et P. aeruginosa ATCC 27853) avec une CMI entre 128 – 256 µg/ml. Ce composé
est actif contre S. epidermidis ATCC 10875 et 4 bactéries à Gram négatif (E. aerogenes ATCC
13048, E. cloacae ATCC 10699, Escherichia coli ATCC 11229, et Salmonella typhi ATCC 19430)
avec une CMI identique de 256 µg/ml. L’acide p-méthoxy-E-cinnamique également possède
un effet antibactérien modéré contre d’autres Streptococcus : S. mutans KTCT 3065 et S.
sobrinus KTCT 3288 avec une CMI de 352 et 470 µg/ml respectivement [266].
Les deux iridoides : le minecoside (DSI-6) et le 6-O-caffeoyl-ajugol (DSI-9) sont les moins actifs
parmi les composés testés. DSI-6 montre un effet antibactérien faible contre les 4 souches
bactériennes avec une CMI entre 250 – 500 µg/ml sauf contre Staph. aureus CIP 53.154. Nos
résultats constituent la première étude de l’activité antibactérienne de ces deux iridoïdes.
Dans la littérature, plusieurs iridoides ont montré une activité antibactérienne ; ainsi CHENG-
SHAN YUAN et al. ont évalué l’activité antibactérienne de 9 iridoides (kansuenoside, ixoroside,
euphroside, mussaenoside, boschnaloside, acide 7-deoxy-8-epi-loganique, acide 8-epi-
loganique, aucubin et acide geniposidique) contre trois souches bactériennes (B. subtilis, E.
coli et Staph. aureus) par la méthode de diffusion [267]. Leurs résultats montrent que les 4
iridoïdes : ixoroside, boschnaloside, acide 8-epi-loganique et aucubin, possèdent un effet
important contre les deux souches (E. coli et Staph. aureus) avec une inhibition de 16-20 mm
à la dose de 100 µg/ml par rapport au témoin de chloramphénicol.

129
Masoud Modaressi et al. ont rapporté une activité antibactérienne de trois iridoides :
phloyoside I, phlomiol et pulchelloside, contre les 9 souches bactériennes (Bacillus cereus,
Citrobacter freundii, E. coli, E. coli (penicillin resistant), Micrococcus luteus, Proteus mirabilis,
Pseudomonas aeruginosa, Staph. aureus et Staph. Epidermidis). Ces composés possèdent un
effet antibactérien (faible à modéré) avec une CMI entre 500-50 µg/ml par rapport au témoin
de ciprofloxacin [268].

Parmi les six composés actifs, DSC-2 (190 mg ; soit 0,13% dans les feuilles et 0,83% dans
l’extrait méthanolique) et DSC-17 (480 mg ; soit 0,32% dans les feuilles au début et 2,09% dans
l’extrait méthanolique), sont des composés majoritaires de l’extrait méthanolique (4), et sont
également trouvés dans l’extrait 5 (extrait hydrométhanolique). Leur activité antibactérienne
pourrait expliquer l’activité de l’extrait et l’utilisation traditionnelle des feuilles de D.
spathacea comme antiseptique. Par contre ces deux composés sont absents dans l’extrait
chloroformique (extrait 2) qui est le plus actif.

130
VI. FLACOURTIA RUKAM
VI.1. - ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE FLACOURTIA RUKAM
VI.1.1. - PREPARATION DES EXTRAITS ET PURIFICATION DES COMPOSES :
Quatre parties de Flacourtia rukam ont été récoltées : les feuilles, les écorces, les branches et
les racines. Une extraction préliminaire a été réalisée sur 50 g de poudre de chaque partie par
cinq percolations successives à l’aide de solvants de polarité croissante: éther de pétrole,
chloroforme, acétate d’éthyle, méthanol et CH3OH – H2O (80 – 20). Les cinq extraits obtenus
sont numérotés de 1 à 5.
La comparaison par CCM (Figure n° 11) et HPLC (Figure n° 12) des extraits montre que tous les
extraits des feuilles sont les plus riches en composés, et plus particulièrement l’extrait
méthanolique (extrait 4) en composés de moyenne polarité que nous avons choisi d’analyser.

F : Feuilles E : Ecorces B : Branches R : Racines

Figure n° 8 : CCM des extraits de Flacourtia rukam

131
 Racine
Branche
Ecorce
Feuille

Figure n° 9 : HPLC analytique des extraits 4 des feuilles, écorces, branches et racines de F.
rukam

Le même protocole de percolation a été ensuite effectué sur une quantité plus importante de
poudre des feuilles (500 g) (schéma n° 6).
Le fractionnement de l’extrait méthanolique a été réalisé par une VLC sur silice de phase
normale. Les fractions obtenues ont été purifiées par une combinaison de chromatographie
Flash, HPLC préparative, HPLC semi-préparative, ce qui a conduit à l’isolement de 27 composés
(schéma n° 7). Parmi ceux-ci on dénombre 16 glycosides phénoliques dont 9 composés
nouveaux, 1 lignane, 5 hétérosides flavonoïdes, 3 isomères d’acide cafféoylquinique et 2
mégastigmanes.

132
Schéma n° 6 : Extraction des feuilles de Flacourtia rukam

133
Schéma n° 7 : Purification des composés de l’extrait méthanolique 4 de F. rukam

134
135
VI.1.2. - DETERMINATION STRUCTURALE DES GLUCOSIDES PHENOLIQUES
Quatorze glucosides phénoliques (FRP-1 à FRP-14) ont été identifiés dont huit nouveaux (FRP-
1 à FRP-8). Tous possèdent un squelette commun : un β-D-glucopyranose lié à la position 2
d’un alcool benzylique hydroxylé (alcool 2,5-dihydroxybenzylique).

R1 = H ou 3-oxocyclohex-4-enoate ou 2,3-dihydroxybenzoate
R2 = R3 = H ou benzoate ou E-cafféate

Les différences structurales résident dans le motif d’hydroxylation de l’alcool benzylique, la

nature chimique de l’ester en position 7 ou celle de l’ester en position 2’ ou/et 6’ du glucose.
Selon la nature de R1, les 14 composés peuvent se répartir dans 4 séries:
- Série 1 : R1 = H (FRP-13)
- Série 2 : R1 = 2,3-dihydroxybenzoate (FRP-8 et FRP-14)
- Série 3 : R1 = 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-hex-4-enoate (FRP-1 à FRP-5, FRP-9 à FRP-12)
- Série 4 : R1 = 1,2,-dihydroxy-3-oxo-hex-4-enoate (FRP-6 et FRP-7)

VI.1.2.1. - β-D-glucopyranose mono ou di estérifié des composés FRP :

L’hydrolyse acide de l’extrait méthanolique suivie de l’analyse par HPLC chirale de l’hydrolysat
confirme la configuration D naturelle du glucose.

HPLC chirale de l’hydrolysat de l’extrait 4 de F. rukam

Comme pour les hétérosides précédents, l’analyse des spectres de RMN (Tableau n° 20)
confirme la structure d’un β-D-glucopyranose.
Ce β-D-glucose est lié à l’aglycone phénolique en position 2 comme l’atteste une corrélation
HMBC entre H-1’ du glucose δH ppm 4.54 – 5.16 et le carbone C-2 à δC ppm 148.5 ± 1.5 (ou 156.8

136
dans composé FRP-5) et un effet ROE observé entre H-1’ du glucose et H-3 de l’alcool
benzylique à δH ppm 6.92 ± 0.19 (d, J = 8.2 ou 8.8 ou 8.9Hz).

Corrélations ROESY du β-D-glucopyranose dans les composés FRP-1 à FRP-14

Selon le composé FRP, le déblindage des protons osidiques H-2’ (δH ppm 5.25 ± 0,12 ; δH =
+1.5 ppm) et H-6’ (δH ppm 4.60 ± 0.12 et 4.41 ± 0.13 ; δH = + 0.5 ppm) traduisent
l’estérification des positions 2’ et/ou 6’ du glucose.

137
Tableau n° 20 : RMN du β-D-glucopyranose (FRP-1 à -14)
4.7.23.4.5 (t) FRP-1 4.7.25.6.2 (w) FRP-2 4.7.22.5.1 (r) FRP-3
No 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.93 (d, 8.0) 102.0 4.68 (d, 7.4) 102.9 5.16 (d, 8.0) 100.7
2’ 5.13 (dd, 9.6, 8.1) 75.8 3.52 (dd, 9.0, 7.4) 73.6 5.30 (dd, 9.6, 8.0) 74.3
3’ 3.68 (dd, 9.7, 8.9) 76.0 3.49 (t, 9.1) 76.4 3.86 (t, 9.3) 74.5
4’ 3.45 (dd, 9.6, 9.1) 71.5 3.43 (t, 9.2) 70.5 3.60 (t, 9.5) 70.6
5’ 3.38 (ddd, 9.6, 5.4, 2.1) 78.3 3.61 (ddd, 9.6, 7.3, 2.2) 74.1 3.80 (ddd, 9.5, 6.7, 2.1) 74.3
3.83 (dd, 12.0, 2.2) 4.69 (dd, 11.6, 2.2) 4.60 (dd, 11.9, 2.1)
6’ 62.5 63.9 63.1
3.66 (dd, 12.0, 5.6) 4.38 (dd, 11.7, 7.4) 4.43 (dd, 11.8, 6.7)

4.7.25.6.1 (x) FRP-4 4.7.22.5.5 (r’’) FRP-5 4.7.19.5 (O’’) FRP-6

No 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.99 (d, 8.0) 102.5 4.88 (d, 7.8) 102.5 4.81 (d, 7.7) 104.2
2’ 5.32 (dd, 9.5, 8.1) 75.7 3.48 (dd, 9.0, 7.8) 74.8 3.51 (m) 75.0
3’ 3.84 (t, 9.4) 76.0 3.42 (t, 9.0) 77.9 3.51 (m) 78.0
4’ 3.62 (t, 9.4) 71.9 3.36 (dd, 9.5, 8.9) 71.9 3.45 (dd, 9.5, 9.0) 72.1
5’ 3.74 (m) 75.6 3.71 (ddd, 9.7, 7.6, 2.1) 75.6 3.73 (ddd, 9.7, 7.7, 2.2) 75.7
4.58 (dd, 11.8, 1.8) 4.60 (dd, 11.8, 1.7) 4.72 (dd, 11.7, 2.2)
6’ 64.6 65.4 65.4
4.44 (dd, 11.9, 6.6) 4.34 (dd, 11.8, 7.6) 4.44 (dd, 11.7, 7.6)

4.7.24.4.6. (v) FRP-7 4.7.25.6.3 (y) FRP-8 4.7.13.3 (k’’) FRP-9

No 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.56 (d, 7.3) 104.4 5.15 (d, 8.4) 100.9 5.16 (d, 8.0) 100.5
2’ 3.35 (m) 75.0 5.31 (dd, 9.6, 8.1) 74.1 5.27 (dd, 9.7, 8.0) 74.4
3’ 3.35 (m) 78.0 3.84 (t, 9.3) 74.5 3.83 (dd, 9.6, 8.7) 74.6
4’ 3.30 (t, 9.5) 72.0 3.60 (t, 9.3) 70.6 3.57 (dd, 9.8, 8.6) 70.2
5’ 3.55 (ddd, 9.5, 7.6, 2.1) 75.5 3.82 (ddd, 9.4, 6.6, 2.0) 74.4 3.53 (ddd, 9.7, 5.3, 2.0) 77.0
4.58 (dd, 11.7, 2.1) 4.62 (dd, 11.8, 2.0) 3.96 (dd, 12.0, 2.0)
6’ 65.3 63.1 61.0
4.29 (dd, 11.7, 7.5) 4.45 (dd, 11.8, 6.6) 3.79 (dd, 12.0, 5.4)

4.7.17.4 (O) FRP-10 4.7.24.4.2 (u) FRP-11 4.7.24.6.6 (u’’) FRP-12

No 1H 13C 1H 13C 1H 13C

1’ 4.80 (d, 7.5) 102.7 5.07 (d, 8.0) 102.0 4.54 (dlike, 7.5) 104.4
2’ 3.52 (dd, 8.7, 7.5) 73.6 5.17 (dd, 9.5, 8.0) 75.6 3.37 (m) 74.9
3’ 3.51 (dd, 9.0, 8.7) 76.5 3.76 (t, 9.2) 76.0 3.37 (m) 77.9
4’ 3.45 (dd, 9.5, 8.9) 70.7 3.50 (t, 9.3) 72.3 3.30 (m) 72.0
5’ 3.73 (ddd, 9.7, 7.7, 2.2) 74.1 3.77 (ddd, 9.8, 7.7, 2.1) 75.7 3.55 (ddd, 9.6, 7.6, 2.1) 75.5
4.72 (dd, 11.7, 2.1) 4.67 (dd, 11.8, 2.1) 4.59 (dd, 11.7, 2.1)
6’ 64.0 65.3 65.4
4.45 (dd, 11.7, 7.6) 4.39 (dd, 11.8, 7.6) 4.54 (dd, 11.7, 7.6)

4.7.13.4 (l’) FRP-13 4.7.24.6.5 (u’) FRP-14

No 1H 13C 1H 13C

1’ 5.08 (d, 8.0) 100.8 4.80 (d, 7.4) 104.8

2’ 5.25 (dd, 9.7, 8.0) 74.3 3.53 (dd, 8.8, 7.7) 75.0
3’ 3.80 (dd, 9.7, 8.5) 74.7 3.50 (t, 7.8) 78.0
4’ 3.55 (dd, 9.8, 8.3) 70.3 3.45 (t, 9.3) 72.0
5’ 3.52 (ddd, 9.7, 5.5, 2.2) 76.9 3.70 (ddd, 9.3, 7.5, 1.9) 75.5
3.97 (dd, 11.9, 2.1) 4.70 (dd, 11.7, 2.0)
6’ 61.1 65.3
3.77 (dd, 11.9, 5.5) 4.41 (dd, 11.7, 7.4)

138
VI.1.2.2. - Alcools hydroxybenzyliques des composés FRP :
L’alcool 2,5-dihydroxybenzylique dans FRP-1 à FRP-4, et FRP-6 à FRP-14, est identifié par un
système ABX caractéristique des protons aromatiques, attribuables aux H-3 (δH ppm 6.92 ± 0.19,
d, J = 8.8 ± 0.1 Hz), H-4 (δH ppm 6.25-6.69, dd, J = 8.8 ± 0.1, 2.9 ± 0.1 Hz) et H-6 (δH ppm 6.67 ±
0.17, d, J= 2.8 ± 0.1 Hz); et un système AB d’un CH2OH à δH ppm 4.27 et 4.53 (d, J = 14.1 Hz) ou
CH2OR déblindé (δH ppm 5.11 ± 0.35 et 5.19 ± 0.3). (Tableau n° 21).
Les spectres de RMN 13C et DEPT confirment la structure de cet alcool 2,5-dihydroxybenzylique
(Tableau n° 21)
Sur les spectres HMBC, on observe des corrélations entre les protons CH2OR-7 et les carbones
sp2 aromatiques C-1 (126 à 128 ppm), CHOR-2 (147 à 150 ppm), CH-6 (115 à 117 ppm).

Tableau n° 21 : RMN 1H, 13C et HMBC de l’alcool benzylique de FRP-1

FRP-1 CD3OD
No 1 13
H C HMBC (HC)
1 127.2
2 149.7
3 6.75 (d, 8.9) 117.5 1, 2, 5, 7
4 6.31 (dd, 8.9, 2.9) 115.4 2, 5, 6
5 153.8
6 6.53 (d,2.9) 115.8 2, 4, 5, 7
4.90 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’
7 64.1
4.83 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’

Le spectre RMN 1H (Tableau n° 22) de FRP-5 nous permet d’identifier un alcool 2-

hydroxybenzylique au lieu de l’alcool 2,5-dihydroxybenzylique dans les autres composés.
En effet, quatre protons aromatiques sont présents avec des 3J > 7.5 Hz pour un cycle
orthodisubstitué.

Tableau n° 22 : RMN 1H, 13C et HMBC de l’alcool benzylique de FRP-5

FRP-5 CD3OD
No 1 13
H C HMBC (HC)
1 126.5
2 156.8
3 7.05 (d, 8.2) 131.0 1, 5
4 6.97 (dt, 7.5, 1.5) 130.7 6
5 6.88 (dt, 7.5, 1.8) 123.6 1, 3
6 7.29 (d, 8.5) 116.9 4
5.31 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’
7 64.6
5.27 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’

Pour FRP-5, le squelette glucoside de l’alcool 2-hydroxybenzylique correspond à un fragment

en C13H18O7 de masse 286.
Pour les autres composés FRP, le squelette glucoside de l’alcool 2,5-dihydroxybenzylique
correspond à un fragment en C13H18O8 de masse 302.
139
Tableau n° 23 : RMN 1H et 13C de l’alcool benzylique (FRP-1 à FRP-14)
4.7.23.4.5 (t) FRP-1 4.7.25.6.2 (w) FRP-2 4.7.22.5.1 (r) FRP-3
No 1 13 1 13 1 13
H C H C H C
1 127.2 126.5 126.8
2 149.7 148.5 147.8
3 6.75 (d, 8.9) 117.5 6.92 (d, 8.8) 118.3 7.02 (d, 8.9) 118.0
4 6.31 (dd, 8.9, 2.9) 115.4 6.39 (dd, 8.8, 3.0) 115.6 6.62 (dd, 8.9, 2.9) 115.3 a
5 153.8 152.7 152.9
6 6.53 (d,2.9) 115.8 6.77 (d, 3.0) 116.2 6.81 (d, 3.6) 115.3 a
4.90 (d, 12.3) 5.36 (d, 12.2) 5.16 (d, 12.8)
7 64.1 62.8 62.4
4.83 (d, 12.3) 5.30 (d, 12.2) 5.11 (d, 12.9)

4.7.25.6.1 (x) FRP-4 4.7.22.5.5 (r’’) FRP-5 4.7.19.5 (O’’) FRP-6

No 1 13 1 13 1 13
H C H C H C
1 127.7a 126.5 128.5
2 149.8b 156.8 149.8
3 6.76 (d, 8.8) 120.1 7.05 (d, 8.2) 131.0 7.06 (d, 8.8) 119.7
4 6.32 (dd, 8.8, 2.9) 117.0 6.97 (dt, 7.5, 1.5) 130.7 6.55 (dd, 8.8, 3.0) 116.8
5 154.0 6.88 (dt, 7.5, 1.8) 123.6 154.2
6 6.65 (d, 2.9) 117.4 7.29 (d, 8.5) 116.9 6.81 (d, 3.0) 117.0
4.96 (d, 12.4) 5.31 (d, 12.5) 5.35 (d, 12.5)
7 64.4 64.6 64.3
4.92 (d, 12.1) 5.27 (d, 12.5) 5.29 (d, 12.6)

4.7.24.4.6. (v) FRP-7 4.7.25.6.3 (y) FRP-8 4.7.13.3 (k’’) FRP-9

No 1 13 1 13 1 13
H C H C H C
1 128.0 126.5 126.4
2 150.0 148.2 148.0
3 6.80 (d, 8.8) 119.8 7.11 (d, 8.9) 118.3 7.07 (d, 8.8) 117.4
4 6.29 (dd, 8.7, 3.0) 117.0 6.65 (dd, 8.2, 2.8) 115.5 6.69 (dd, 8.9, 3.0) 115.3
5 154.0 153.0 152.7
6 6.58 (d, 3.0) 117.4 6.76 (d, 2.8) 115.2 6.81 (d, 3.0) 115.3
5.16 (d, 12.2) 5.18 (d, 12.6) 5.19 (d, 12.9)
7 64.3 61.6 62.4
5.10 (d, 12.2) 5.15 (d, 12.1) 5.06 (d, 12.9)

4.7.17.4 (O) FRP-10 4.7.24.4.2 (u) FRP-11 4.7.24.6.6 (u’’) FRP-12

No 1 13 1 13 1 13
H C H C H C
1 126.9 128.1 127.8
2 148.5 149.2 150.0
3 7.06 (d, 8.8) 118.5 6.90 (d, 8.9) 119.3 6.79 (d, 8.9) 120.0
4 6.54 (dd, 8.8, 3.0) 115.3 6.38 (dd, 8.9, 3.0) 116.6 6.25 (dd, 8.8, 3.0) 117.0
5 152.7 154.2 154.0
6 6.84 (d, 3.0) 115.7 6.67 (d,2.9) 116.8 6.59 (d, 3.0) 117.5
5.38 (d, 12.5) 4.90 (d, 12.3)
7 63.2 63.8 5.16 (s) 64.5
5.32 (d, 12.4) 4.83 (d, 12.3)

4.7.13.4 (l’) FRP-13 4.7.24.6.5 (u’) FRP-14

No 1 13 1 13
H C H C
1 132.3 129.0
2 147.5 149.7
3 7.01 (d, 8.8) 117.0 7.09 (d, 8.8) 120.3
4 6.61 (dd, 8.8, 3.0) 113.7 6.59 (dd, 8.8, 2.8) 116.7
5 152.8 154.4
6 6.80 (d, 3.0) 113.7 6.84 (d, 2.9) 116.2
4.53 (d, 14.0) 5.49 (d, 13.0)
7 58.5 63.5
4.27 (d, 14.1) 5.46 (d, 13.1)

140
VI.1.2.3. - Composé nouveau de la série 2 (R1 = 2,3-dihydroxybenzoate) : FRP-8

Le spectre de masse positif HR-ESI-MS de FRP-8 montre un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à

727,1626 (calc. 727,1639) correspondant à la formule brute C36H32O15.
Le spectre RMN 1H (Annexe) nous permet d’identifier en plus du glucoside d’alcool 2,5-
dihydroxybenzylique, la présence de 3 esters d’acide : benzoïque, E-cafféique et 2,3-
dihydroxybenzoïque :
- ester benzoyle:
o cinq protons d’un système A2B2X à δH ppm 8.05 (d, J=7.2Hz, H-2’’’ et H-6’’’), 7.38
(t, J=7.6Hz, H-3’’’ et H-5’’’) et 7.50 (t, J=7.4Hz, H-4’’’) ; et un carbonyle C-7’’’ à
δC ppm 165.8.
o ce benzoate est lié à la partie β-D-glucopyranose en sa position 2’ : corrélation
HMBC entre H-2’ du glucose à δH ppm 5.31 (dd, 9.6, 8.1Hz) et le carbonyle C-7’’’.
- ester E-cafféoyle :
o trois protons aromatiques d’un système ABX d’un cycle trisubstitué à δH ppm
7.09 (d, J=2.0Hz, H-2’’’’), 6.82 (d, J=8.1Hz, H-5’’’’) et 6.98 (dd, J=8.0, 1.9Hz, H-
6’’’’).
o une double liaison disubstituée -C7=C8- de configuration trans avec une
constante de couplage élevée 3Jtrans = 15.9 Hz à δH ppm 7.62 (d, H-7’’’’) et 6.32 (d,
H-8’’’’), et adjacente à un carbonyle C-9’’’’ à δC ppm 167.5.
o ce E-cafféate est lié en position 6’ du β-D-glucopyranose grâce aux corrélations
HMBC entre H-6’ du glucose à δH ppm 4.62 (dd, 11.8, 2.0Hz) et 4.45 (dd, 11.8,
6.6Hz) avec le carbonyle C-9’’’’.
- ester 2,3-dihydroxybenzoyle:
o trois protons aromatiques d’un cycle ortho-trisubstitué à δH ppm 6.98 (dd, 8.0,
1.3Hz), 6.65 (t, 7.9Hz) et 7.15 (dd, 8.1, 1.5Hz). Un troisième carbonyle d’ester
C-7’’ est détecté à δC ppm 169.8.
o ce 2,3-dihydroxybenzoate est lié à l’alcool 2,5-dihydroxybenzylique en sa
position 7 montrant une corrélation HMBC entre les protons H-7 à δH ppm 5.18
(d, 12.6Hz) et 5.15 (d, 12.1Hz), et le carbonyle d’ester C-7’’.
L’ensemble des données spectrales de RMN et de masse nous permet d’identifier la structure
de composé FRP-8 comme alcool 2-(2’-benzoyl-6’-E-cafféoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’,3’’-
dihydroxybenzoyl)-5-hydroxybenzylique.

141
Spectre de masse HRMS de FRP-8

Spectre RMN 1H de FRP-8

142
Spectre RMN 13C de FRP-8

Spectre DEPT de FRP-8

143
Spectre COSY de FRP-8

Spectre COSY de FRP-8

144
Spectre HSQC de FRP-8

Spectre HSQC de FRP-8

145
Spectre HMBC de FRP-8

Spectre HMBC de FRP-8

146
 Spectre HMBC de FRP-8

VI.1.2.4. - Composés nouveaux de la série 3 (R1 = 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate) :

FRP-1 à FRP-5
VI.1.2.4.1. - Structure de R1 = 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate

La présence d’un acide 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoïque estérifiant la position 7

de l’alcool hydroxybenzylique dans FRP-1 à FRP-5, est déterminée des signaux de RMN
suivants (Tableau n° 24):
o deux protons oléfiniques couplés à δH ppm 6.02 ± 0.11 (dd, J = 10.4, 2.6 Hz, H-4’’)
et entre δH ppm 6.62 – 6.83 (dd, J = 10.4 ± 0.1, 1.9 ± 0.1 Hz, H-5’’), adjacents à un
CH-OH à δH ppm 4.88 – 5.07 (m ou t, 2.2 Hz, H-6’’)
147
 o un proton singlet à δH ppm 4.43 – 4.46 / 5.77 – 5.93 (CHOH ou CHOR-2’’) adjacent
à deux carbones quaternaires.
o sept carbones dont 2CH sp2 à δC ppm 125.8 – 127.5 (C-4’’) et 149.6 – 151.2 (C-5’’)
d’une double liaison disubstituée conjuguée à une cétone (α,β-insaturée) à δC
ppm 191.2 – 198.5 (C-3’’), un carbonyle d’ester à δC ppm 170.2 – 172.5 (C-7’’), deux
CH-OR à δC ppm 70.3 – 72.1 (CHOH-6’’) et 75.9 – 78.8 (CHOR-2’’), et un carbone
quaternaire hydroxylé à δC ppm 83.1 – 86.2 (C-OH-1’’).
La structure du groupe 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle est déduite de l’analyse des
corrélations HMBC observées entre H-2’’/C-1’’, C-3’’et C-6’’, entre H-4’’/C-2’’ et C-6’’, entre
H-5’’/C-1’’ et C-3’’, et entre H-6’’/C-1’’ et C-5’’.

Corrélations HMBC de la partie R1 = 1,2,6-triihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate

Ce groupe 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle est lié à l’alcool hydroxybenzylique :
observation de corrélations HMBC entre les deux protons benzyliques CH2-7 (δH ppm 4.83 – 5.30
et 4.90 – 5.36) et le carbonyle d’ester C-7’’ à δC ppm 170.2 – 172.5.

Tableau n° 24 : RMN 1H et 13C de la partie R1 = 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate

(FRP-1 à FRP-5)
4.7.23.4.5 (t) FRP-1 4.7.25.6.2 (w) FRP-2 4.7.22.5.1 (r) FRP-3
No 1 13 1 13 1 13
H C H C H C
1’’ 84.2 83.1 84.6
2’’ 5.77 (s) 78.7 5.85 (s) 76.7 4.43 (s) 75.9
3’’ 192.4 191.2 197.1
4’’ 5.98 (dd, 10.4, 2.6) 127.4 6.10 (dd, 10.4, 2.6) 126.0 6.02 (dd, 10.4, 2.6) 125.8
5’’ 6.72 (dd, 10.4, 1.9) 151.2 6.83 (dd, 10.5, 1.8) 149.8 6.72 (dd, 10.5, 2.0) 149.6
6’’ 4.98 (t, 2.2) 72.1 5.07 (t, 2.2) 70.7 4.89 (m) 70.3
7’’ 171.2 170.2 170.7

4.7.25.6.1 (x) FRP-4 4.7.22.5.5 (r’’) FRP-5

No 1 13 1 13
H C H C
1’’ 84.2 86.2
2’’ 5.93 (s) 78.8 4.46 (s) 77.4
3’’ 192.6 198.5
4’’ 6.10 (dd, 10.4, 2.6) 127.5 5.91 (dd, 10.4, 2.6) 127.2
5’’ 6.83 (dd, 10.5, 1.8) 151.0 6.62 (dd, 10.3, 1.8) 151.0
6’’ 5.07 (t, 2.2) 72.1 4.88 (m) 71.9
7’’ 171.1 172.5

(en gras = positions estérifiées)

148
VI.1.2.4.2. - Spectrométrie de masse de la série 3 (FRP-1 à FRP-5) :
Cet ester cétonique R1 possède une formule brute en C7H7O5 et une masse de 171. Lié au
glucoside d’alcool hydroxybenzylique, on obtient un noyau de base :
- pour FRP-1 à FRP-4 : C20H24O13 soit 472,
- et pour FRP-5 : C20H24O12 soit 456 (pas OH en position 5).

Les composés FRP-1 à FRP-5 sont des esters de ce noyau de base (Tableau n° 25).

Tableau n° 25 : Spectres de masse de FRP-1 à FRP-5 et hypothèses de structures.

Composé Formule brute Noyau Formules Structure des

brutes des esters (R )
(masse)
esters
FRP-5 C27H28O13 C20H24O12  = 104
560 456 C7H5O
- 1H liaison
FRP-1 C36H32O15 C20H24O13  = 208
680 472 2 x C7H5O
- 2H liaisons
FRP-2 C36H34O15 C20H24O13  = 246
706 472 C7H5O + C9H7O
- 2H liaisons

FRP-3 C36H34O17 C20H24O13  = 278

738 472 C7H5O + C9H7O3
- 2H liaisons

FRP-4 C43H38O18 C20H24O13  = 382

842 472 2 x C7H5O +
C9H7O3
- 3 H liaisons

149
VI.1.2.4.3. - Structure de FRP-5
L’ester benzoate se caractérise en RMN (Annexe) par :
- cinq protons aromatiques formant un système couplé à δH ppm 7.92 (d, J=7.2Hz, H-2’’’
et H-6’’’), 7.39 (t, J=7.8Hz, H-3’’’ et H-5’’’) et 7.52 (dt, J=7.5, 1.3Hz, H-4’’’).
- six carbones aromatiques entre δC ppm 129.6 – 134.4 et un carbonyle d’ester à δC ppm
167.8 (C-7’’’).
Le benzoate est lié en position 6’ du β-D-glucopyranose : observation d’une corrélation HMBC
entre les H-6’ du glucose à δH ppm 4.60 (dd, 11.8, 1.7Hz) et 4.34 (dd, 11.8, 7.6Hz) et le carbonyle
du benzoate C-7’’’ à δC ppm 167.8.
Le composé FRP-5 est l’alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’,6’’-trihydroxy-
3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-benzylique, nouvellement décrit.

VI.1.2.4.4. - Structure de FRP-1

Comme dans le composé précédent, les signaux caractéristiques de deux esters benzoyles
sont repérables dans les spectres de RMN (Annexe) de FRP-1 :
- un groupe benzoyle lié en la position 2’ du glucose démontrée par une corrélation HMBC
entre le H-2’ à δH ppm 5.13 (dd, J=9.6, 8.1Hz) et le carbonyle C-7’’’ à δC ppm 167.4 (C-7’’’).
- un second résidu benzoyle lié en position 2’’ de la partie cyclohexènique grâce à la
corrélation HMBC entre son carbonyle C-7’’’’ à δC ppm 166.5 (C-7’’’’) et le H-2’’ déblindé à
δH ppm 5.77 (s) de la cyclohexènone.
Ainsi, le composé FRP-1 est identifié comme étant l’alcool 2-(2’-O-benzoyl-β-D-
glucopyranosyl)-7-(2’’-O-benzoyl-1’’,6’’-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-
hydroxybenzylique. C’est également un composé naturel nouvellement décrit.

150
Spectre de masse HRMS de FRP-1

Spectre RMN 1H de FRP-1

151
Spectre RMN 13C de FRP-1

Spectre DEPT de FRP-1

152
Spectre COSY de FRP-1

Spectre HSQC de FRP-1

153
Spectre HMBC de FRP-1

Spectre HMBC de FRP-1

154
Spectre ROESY de FRP-1

155
VI.1.2.4.5. - Structure de FRP-2
Les spectres RMN de FRP-2 (Annexe) montrent la présence des signaux caractéristiques d’un
groupe benzoyle et d’un groupe E-cinnamoyle :
- un benzoate similaire à celui de FRP-1 positionné cette fois-ci en position 6’ du β-D-
glucopyranose grâce aux corrélations HMBC entre les H-6’ du glucose à δH ppm 4.69 (dd,
11.6, 2.2Hz) / 4.38 (dd, 11.7, 7.4Hz), et le carbonyle C-7’’’ à δC ppm 166.3.
- un ester E-cinnamate:
o système de cinq protons aromatiques à δH ppm 7.57 (m, H-2’’’’ et H-6’’’’), δH ppm
7.40 (m, H-3’’’’ et H-5’’’’, et H-4’’’’).
o une double liaison disubstituée -C7’’’’=C8’’’’- de configuration trans 3Jtrans = 16.0
Hz à δH ppm 7.67 (d, H-7’’’’) et δH ppm 6.42 (d, H-8’’’’).
o Un carbonyle ester à δC ppm 165.3.
Ce E-cinnamate est lié en position 2’’ de la partie 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-
enoate : observation de la corrélation HMBC entre CHOR-2’’ à δH ppm 5.85 (s) et le
carbonyle C-9’’’’ du cinnamate à δC ppm 165.3.
Ainsi, le composé FRP-2 est l’alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-E-
cinnamoyl-1’’,6’’-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique.

VI.1.2.4.6. - Structure de FRP-3

Les spectres RMN 1H et 13C (Annexe) de FRP-3 montrent la présence d’un ester benzoylé et
d’un ester E-cafféoylé :
- benzoate:
o cinq protons aromatiques d’un cycle benzyle à δH ppm 8.14 (dd, J=8.4, 1.2Hz, H-
2’’’ et H-6’’’) ; δH ppm 7.51 (dd, J=8.0, 7.6Hz, H-3’’’ et H-5’’’) et δH ppm 7.62 (dt,
J=7.7, 1.2Hz, H-4’’’).
o une corrélation HMBC observée entre H-2’ du glucose à δH ppm 5.30 (dd, 9.6,
8.0Hz) et le carbonyle C-7’’’ du benzoate à δC ppm 166.0
- E-cafféate:
o un système ABX des protons aromatiques d’un cycle trisubstitué à δH ppm 7.10
(d, J=2.1Hz, H-2’’’’); δH ppm 6.82 (d, J=8.3Hz, H-5’’’’) et δH ppm 6.97 (dd, J=8.1,
2.1Hz, H-6’’’’).

156
 o une double liaison trans disubstituée – C7’’’’=C8’’’’– : 3Jtrans = 15.9 Hz à δH ppm
7.61 (d, H-7’’’’) et δH ppm 6.33 (d, H-8’’’’).
o un carbonyle à δC ppm 167.6 (C-9’’’’)
L’ester E-cafféate substitue la position 6’ du β-D-glucopyranose comme l’indique les
corrélations HMBC entre les H-6’ du glucose à δH ppm 4.60 (dd, 11.9, 2.1Hz)/4.43 (dd, 11.8, 6.7Hz)
et le carbonyle du cafféate C-9’’’’ à δC ppm 167.6.
Ainsi, le composé FRP-3 est identifié à l’alcool 2-(2’-O-benzoyl-6’-O-E-cafféoyl-β-D-
glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’,6’’-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique.

VI.1.2.4.7. - Structure de FRP-4

Les données spectrales de RMN de FRP-4 sont similaires à celles de FRP-3 mais ici ce composé
possède deux esters benzoylés et un E-cafféate (Annexe).
Le groupe benzoyle supplémentaire est lié en position 2’’ de la partie cyclohexénone d’où la
corrélation HMBC entre H-2’’ à δH ppm 5.93 (s) et le carbonyle supplémentaire C-7’’’’’ à δC ppm
166.3.
L’ensemble des données spectrales nous a permis d’identifier le composé FRP-4 a l’alcool 2-
(2’-O-benzoyl-6’-O-E-cafféoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-benzoyl-1’’,6’’-dihydroxy-3-oxo-
cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique. Comme pour les composés précédents, il s’agit d’un
composé nouveau.

157
VI.1.2.5 - Composés nouveaux de la série 4 (R1 = 1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate) :
FRP-6 et FRP-7
VI.1.2.5.1. - Détermination structurale de R1 = 1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoate

Les composés FRP-6 à FRP-7 possèdent un groupement 1,2-dibydroxy-3-oxo-cyclohex-4-

enoyle avec la présence d’un CH2 au lieu d’un CHOH en position 6‘’ par rapport aux composés
de la série 3.
Leurs spectres RMN 1H (Tableau n° 26) montrent deux protons d’une double liaison cis-
disubstituée vers δH ppm 6 (dd, J=10, 3 Hz, H-4’’) et 6.8 (ddd, J=10, 5.5, 2.3 Hz, H-5’’), et
adjacente au CH2 δH ppm 2.65 (dd, 19.2, 5.6Hz, H-6’’eq) et 3.09 (dd, 19.3, 2.7Hz, H-6’’ax), et un
singlet au delà de δH ppm 5 (s, CHOH-2’’ ou CHOR-2’’).
Leurs spectres RMN 13C (Tableau n° 26) montre la présence de deux carbonyles, l’un d’une
cétone α,β-insaturée légèrement blindé vers δC ppm 193, le second d’ester vers δC ppm 173, et
un quaternaire hydroxylé à δC ppm 80.
Comme pour la série 3, les corrélations HMBC permettent d’établir la structure au groupe
1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle lié à la partie aglycone (alcool 2-hydroxybenzylique)
en sa position 7 :

Tableau n° 26 : RMN 1H et 13C de la partie R1 = 1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle (FRP-

6 et FRP-7)
4.7.19.5 (O’’) FRP-6 4.7.24.4.6. (v) FRP-7
No 1 13 1 13
H C H C
1’’ 81.4 79.8
2’’ 4.69 (s) 77.8 5.94 (s) 79.3
3’’ 199.1 193.1
4’’ 6.03 (dd, 10.1, 2.9) 127.8 5.98 (dd, 10.2, 2.9) 128.2
5’’ 6.84 (ddd, 10.1, 5.5, 2.3) 146.7 6.81 (ddd, 10.1, 5.6, 2.3) 146.7
2.65 (dd, 19.2, 5.6)α-eq 2.68 (dd, 19.3, 5.6)α-eq
6’’ 37.7 38.5
3.09 (td, 19.3, 2.7)β-ax 3.13 (dd, 19.3, 2.7)β-ax
7’’ 173.7 172.8

158
VI.1.2.5.2. - Structures de FRP-6 et FRP-7
Le spectre de masse positif HR-ESI-MS de FRP-6 montre un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à
583,1433 (calc. 583,1428) correspondant à la formule brute C27H28O13.
Les spectres RMN 1H et 13C (Annexe) montrent les signaux caractéristiques d’un groupe
benzoyle. Ce benzoate estérifie la position 6’ du β-D-glucopyranose (corrélations HMBC entre
les H-6’ du glucose à δH ppm 4.72 (dd, 11.7, 2.2Hz) et 4.44 (dd, 11.7, 7.6Hz) et le carbonyle du
benzoate C-7’’’ à δC ppm 167.8).
Le composé FRP-6 est identifié à l’alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’-
dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique, composé nouvellement décrit.

Le spectre de masse positif HR-ESI-MS de FRP-7 montre un ion pseudo-moléculaire [M+Na]+ à

687,1692 (calc. 687,1690) correspondant à la formule brute C34H32O14, soit 104 uma
supplémentaires par rapport à FRP-6 correspondant à un second ester benzoate.
La comparaison de leurs spectres RMN montre que dans FRP-7 le premier groupe benzoyle
est lié à la partie de glucose en sa position 6’, et le deuxième groupe benzoyle estérifie la
position 2’’ de la partie cyclohexénone par les corrélations HMBC entre H-2’’ à δH ppm 5.94 (s)
et le carbonyle supplémentaire C-7’’’’ à δC ppm 166.7.
Le composé FRP-7 est identifié comme l’alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-
benzoyl-1’’-hydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique. C’est également un
composé nouveau.

159
VI.1.2.5. - Stéréochimie des cyclohexenones (groupes R1) :
VI.1.2.5.1. Stéréochimie de groupe 1,2,6-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle (série 3):

La stéréochimie relative des trois centres asymétriques C-1’’, C-2’’ et C-6’’ des composés de la
série 3 : FRP-1 à FRP-5 a été établie des corrélations ROESY.
Pour les deux composés FRP-3 et FRP-5:
o selon la littérature la structure de la xylosmin établie par diffraction aux rayons
X [269], montre que le cycle cyclohexene possède une conformation «half-
boat», avec une stéréochimie relative ou tous les OH sont du même côté : OH-
1’’ en position α -axiale, et les OH-2’’ et -6’’ α-équatoriaux.
o un effet ROE est en effet bien observé entre le proton H-2’’ à δH ppm 4.43/4.46
(s) et le H-6’’ à δH ppm 4.88/4.89 (s) confirmant leurs positions axiales et les deux
–OH respectifs en position équatoriale.

Effet ROE important de FRP-3 et FRP-5

o La modélisation moléculaire (logiciel Maestro®) des 2 diastéréosiomères en

position 1’’ de FRP-3 a été tentée (collaboration avec A. Martinez). Les résultats
doivent être consolidés et semblent montrer que la stéréochimie β-équatoriale
du carbonyle est plus favorable énergiquement et stériquement.

160
 (β-OH 1’’ equatorial) E = - 122.47 kJ/mol (α-OH 1’’ axial) E = - 144.29 kJ/mol

La stéréochimie relative des composés FRP-3 et FRP-5 est donc similaire à celle de la xylosmin :
1’’-R*, 2’’-R*, 6’’-R*.
La mesure de leurs pouvoirs rotatoires donne des valeurs positives : FRP-3 (α)D = +15,2 et FRP-
5 (α)D = +17 comparée avec celui négatif de la xylosmin (-4), nous pourrions supposer une
configuration absolue inversée :

Pour les trois autres composés de la série 3, FRP-1, FRP-2 et FRP-4, nous n’observons pas
d’effet ROE entre H-2’’ et le H-6’’, et donc la stéréochimie relative semble différente à celle de
la xylosmin.

VI.1.2.5.2. - Stéréochimie de groupe 1,2-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyle (série 4) :

La stéréochimie relative de composé FRP-6 et FRP-7 a été déterminée de l’analyse des

corrélations ROESY ; l’effet ROE observé entre H-2’’ à δH ppm 4.69 (s, FRP-6) (5.94 FRP-7) et l’un
des H-6’’ à δH ppm 3.09 (dt, 19.3, 2.7, H-6’’ax, FRP-6) (3.13, FRP-7), suggère que H-2’’ est orienté
axialement.

161
 Effet ROE important de FRP-6 et FRP-7

De même, la modélisation moléculaire (logiciel Maestro®) des 2 diastéréosiomères en

position 1’’ de FRP-6 montre que la stéréochimie β-équatoriale du carbonyle est très
légèrement plus favorable énergiquement. Cette différence ne semble pas significative
pour pouvoir être certain que la configuration relative de FRP-6 et FRP-7 est : 1’’-R*, 2’’-
R*.

(β-OH 1’’ équatorial) E = - 90.8 kJ/mol (α-OH 1’’ axial) E = - 95.8 kJ/mol
La mesure de leurs pouvoirs rotatoires donne des valeurs négatives : FRP-6 = -5,5, et
FRP-7 = -35,5.

Conclusion :
Un travail supplémentaire semble nécessaire pour terminer les structures de ces composés
FRP (esters de glucosides phénoliques), pour confirmer leurs stéréochimies relatives et établir
les configurations absolues des carbones asymétriques des hydroxycyclohexenones (R1) :
- Des essais de cristallisation pourront être tentés puisque la xylomin est décrite sous
forme de cristaux obtenus dans l’AcOEt. Une analyse par diffraction aux rayons X avec
une anticathode au Cu pourra ensuite être réalisée sur un monocristal de bonne
qualité pour déterminer la configuration absolue.

- Des réactions d’hydrolyse alcaline seront nécessaires pour isoler et caractériser les
cyclohexenones et comparer leurs données physicochimiques et spectrales à celles de
la littérature ; en particulier l’enregistrement du spectre de CD doit nous permettre de
déterminer la configuration absolue des C- 1’’, C-2’’ et C-6’’ [270].
162
VI.1.2.6. - Structure des composés connus (FRP-9 à FRP-14)
Le composé FRP-13 possède le squelette principal du glucoside de l’alcool 2,5-dihydroxy
benzylique et un groupement benzoyle. Le groupe benzoyle a été déterminé en position 2’ de
glucose. FRP-13 est identifié à l’itoside A (ou alcool 2-(2’-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-5,7-
dihydroxybenzylique) isolé des écores et branches de Itoa orientalis (Flacourtiaceae) [271].
Le composé FRP-14 est de la même série que le composé FRP-8. Il est dépourvu de l’ester
cafféoyle, et le benzoate est lié au glucose en position 6’. Le composé FRP-14 est le
Scolochinenoside D (ou alcool 2-(6’-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’,3’’-
dihydroxybenzoyle)-5-hydroxybenzylique) isolé des tiges de Scolopia chinensis
(Flacourtiaceae/Salicaceae) [272].

Les deux isomères FRP-9 et FRP-10 appartiennent à la série 3 avec une 1,2,6-trihydroxy-3-
oxocyclohex-4-enone et un ester benzoylé. FRP-9 possède la même structure plane que
l’alcool (rel)-2-(2’-O-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1α,2α,6α-trihydroxy-3-oxocyclohex-
4-enoyl)-5-hydroxybenzylique isolé des feuilles et branches de Flacourtia indica [141], et celle
de FRP-10 à l’alcool (rel)-(2-(6’-O-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1α,2α,6α-trihydroxy-
3-oxocyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique isolé des feuilles et tiges de Homalium
longifolium (Flacourtiaceae) [273].
Cependant, le signe des pouvoirs rotatoires est opposé par rapport aux valeurs de la
littérature: FRP-9 = +7 (littérature = -34,6) et FRP-10 = +39,6 (littérature = -7). Nous proposons
les deux composés FRP-9 et FRP-10 comme étant l’alcool (rel)-2-(2’-O-benzoyle-β-D-
glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-oxocyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique et
l’alcool (rel)-2-(6’-O-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-oxocyclohex-
4-enoyl)-5-bydroxybenzylique.

163
FRP-11 possède la même structure que la Xylosmin isolée des parties aériennes de Xylosma
flexuosum (Salicaceae) [269]. Le pouvoir rotatoire de FRP-11 = +14,7 est de signe différent à
celui de la Xylosmin = -4 ; nous proposons ainsi FRP-11 comme l’alcool (rel)-2-(2’,6’-O-
dibenzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-oxocyclohex-4-enoyl)-5-
bydroxybenzylique.
FRP-12 est identifié à l’alcool (rel)-2-(6’-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(6’’α-benzoyloxy-
1α,2α-dihydroxy-3-oxocyclohex-4-enoyl)-5-bydroxybenzylique isolé des feuilles et tiges de
Homalium longifolium (Flacourtiaceae) [273]. Le pouvoir rotatoire mesuré de FRP-12 = -16,
mais n’a pu être comparé à celui de la littérature, celui-ci n’étant pas été reporté.

VI.1.3. - DETERMINATION STRUCTURALE DES AUTRES GLYCOSIDES PHENOLIQUES

Deux autres glycosides phénoliques (FRD-11 et FRD-12) ont été également isolés et identifiés
dans l’extrait méthanolique (extrait 4) des feuilles de Flacourtia rukam dont un composé
nouveau FRD-11.

VI.1.3.1. - Glucoside phénolique nouveau FRD-11

Le spectre de masse HR-ESI-MS de FRD-11 effectué en mode positif montre un ion pseudo-
moléculaire [M+Na]+ à 443.1537 (calc. 443.1529) correspondant à la formule brute C18H28O11
FRD-11 est un glucoside d’arylglycérol, diastéréoisomère du 1,3-dihydroxy-1-(3,4,5-
trimethoxyphenyl)propan-2-yl-β-D-glucopyranoside [274].

Squelette syringylglycerol
164
La partie aglycone, 1,3-dihydroxy-1-(3,4,5-trimethoxyphenyl)propane ou 4-O-
methylsyringylglycerol, est identifiée par un cycle aromatique symétrique tétrasubstitué avec
deux protons équivalents méta-orientés à δH ppm 6.65 (s, H-2 et H-6), et six carbones sp2 entre
δC ppm 105.2 – 138.5. Trois groupes méthoxy (δH ppm 3.65 (3H) et 3.75 (6H) ; δC ppm 61.6 (1C) et
56.5 (2C)) sont détectés. La chaine propanique dérive du glycérol comprenant deux CH-OR (C-
7 et C-8) à δC ppm 74.8 et 86.3 et un CH2-OH-9 terminal à δC ppm 63.2.
Le β-D-glucose est caractérisé par de grandes constantes de couplage 3J > 7.4 Hz des protons
H-1’ à H-5’ entre δH ppm 3.13 – 4.22. Ce glucose est lié en position 8 de la partie aglycone :
corrélation HMBC entre H-8/C-1’-Glu et inversement entre H-1’-Glu/C-8.
Les données spectrales de RMN de FRD-11 sont différentes du diastéréoisomère erythro isolé
de Erica arborea, le (7S,8R)-4-méthyl-syringylglycérol-8-O-β-D-glucopyranoside [274], en
particulier les signes des pouvoirs rotatoires : FRD-11 [α]D = +6 et (7S, 8R) [α]D = - 18.
Les travaux de M. Gan et al. sur la configuration threo et erythro des arylglycérols dans
différents solvants ont permis d’établir que la valeur de la constante de couplage JH-7/H-8 et la
différence de déplacement chimique C entre C-8 et C-7 sont discriminatives [275]. Ainsi pour
les 8-O--D-glucopyranosides d’arylglycerol :

- Erythro : JH-7/H-8 ≤ 4.4 Hz dans DMSO-d6, C5D5N, CD3OD ; C8-C7 ≤ 12.5 ppm dans DMSO-
d6, C5D5N, et < 11 ppm dans CD3OD.
- Threo : JH-7/H-8 ≥ 6 Hz dans DMSO-d6, C5D5N, CD3OD ; C8-C7 ≥ 14 ppm dans DMSO-d6,
C5D5N, et > 12 ppm dans CD3OD

Pour FRP-11, JH-7/H-8 = 6.2 Hz et C8-C7 = 12.0 ppm, ce qui suggère une configuration threo
(7S, 8S) ou (7R, 8R).

Les deux diastéosiomères threo (7S, 8S) et (7R, 8R) pour FRD-11

De même, quand on fait une comparaison les données RMN de FRD-11 avec les (7S,8S) ou
(7R,8R)-Syringylglycérol-8-O-β-D-glucopyranoside, nous observons des similarités des signaux
H-7 à H-9 (Tableau n° 27).

165
Tableau n° 27 : RMN de la partie glycérol des Syringylglycérol 8-O-β-D-glucopyranosides

(-)- (7S,8R)-4- (-)-(7R,8S)- (+)-(7S,8S)- (-)-(7R,8R)-

4.7.6.4 (d) FRD-11 Méthylesyringylglycérol Syringylglycérol 8-O-β- Syringylglycérol 8-O-β- Syringylglycérol 8-O-β-D-
CD3OD 8-O-β-D-glucopyranoside D-glucopyranoside D-glucopyranoside glucopyranoside
CD3OD DMSO CD3OD CD3OD

No 1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C 1H 13C

7 4.84
4.65 (d, 6.2) 74.8 75.2 4.63 (d, 4.4) 72.6 4.69 (d, 7.0) 75.1 4.60 (d, 7.5) 75.3
(overlapped)
8 3.95
3.75 (m) 86.7 85.3 3.75 (m) 84.6 3.82 (m) 87.5 3.79 (m) 86.9
(dd, 7.4, 4.0)
3.50 3.67 3.42 3.56 3.45
(dd, 11.8, 3.7) (dd, 9.5, 4.0) (dd, 11.2, 4.4) (dd, 12.0, 4.0) (dd, 12.0, 3.0)
9 63.2 62.7 61.1 63.3 62.6
3.32 3.62 3.29 3.40 3.25
(dd, 11.8, 5.8) (dl, 9.5) (dd, 11.2, 4.8) (dd, 12.0, 5.0) (dd, 12.0, 6.0)
[α]D = +6 [α]D = - 18 [α]D = - 14.3 [α]D = +7,9 [α]D = - 48

Le pouvoir rotatoire est de même signe positif que le diastéroisomère (7S,8S), ce qui suggère
que nous ayons la même configuration absolue ; la différence entre FRD-11 et ce composé
étant la présence d’un méthoxy aromatique supplémentaire en position 4 [276, 277].
L’ensemble des données spectrales, étayé d’une comparaison avec celles de la littérature,
permet d’identifier FRD-11 au (7S,8S)-4-O-méthyl-syringylglycérol-8-O-β-D-glucopyranoside.

Spectre de masse de FRD-11

166
Spectre RMN 1H de FRD-11

Spectre RMN 13C de FRD-11

167
Spectre DEPT de FRD-11

Spectre COSY de FRD-11

168
Spectre HSQC de FRD-11

Spectre HMBC de FRD-11

169
 Spectre HMBC de FRD-11

VI.1.3.2. - Glycoside phénolique connu FRD-12

FRD-12 est identifié au 6-O-α-L-rhamnopyranosyl-β-D-glucopyranoside du salicylate de
méthyle isolé de fruit de Passiflora edulis [278].

170
VI.1.4. – DETERMINATION STRUCTURALE DES METABOLITES DIVERS CONNUS
En plus des glycosides phénoliques, nous avons isolé et identifié les structures de 11 autres
composés connus: un lignane (FRD-13), cinq flavonoides (FRD-1 à FRD-5), trois isomères
d’acide cafféoylquinique (FRD-6 à FRD-8), et deux mégastigmanes (FRD-9 et FRD-10).

VI.1.4.1. – Lignane FRD-13:

FRD-13 est identifié au 4-O-β-D-glucopyranosyl-syringaresinol isolé de Cressa cretica [279]
ou des racines de Boerhaavia diffusa [280]. La configuration absolue des carbones C-7, C-8,
C-7’ et C-8’ est confirmée de l’absence d’effet ROE entre H-7/H-8 et entre H-7’/H-8’, et de la
comparaison du pouvoir rotatoire de FRD-13 [α]D = - 12.5 avec celui de la littérature [α]D = -
10 [280].

VI.1.4.2. - Flavonoïdes
- FRD-1, FRD-3 et FRD-4 sont déterminés comme étant respectivement : la lutéoline
[244], la lutéoline-7-O-β-D-glucopyranoside [245], et la lutéoline-7-O--D-
glucururonopyranoside [246], ces trois glycosides avaient été isolés également de
Dolichandrone spathacea (composés DSC-4 à DSC-6).

- FRD-2 est le quercétine–3–O–β–D-galactopyranoside [281]. Le galactose se caractérise

par ses grandes constantes de couplage entre les protons axiaux H-1’’ δH ppm 5.19 (d,
7.8Hz), H-2’’ δH ppm 3.81 (dd, 9.6, 7.8Hz), H-3’’ δH ppm 3.49 (t, 6.3), et un H-4’’ équatorial

171
 δH ppm 3.87 (d, 3.0). La comparaison avec les données spectrales de littérature confirme
un -D-galactopyranoside [282].

- FRD-5 possède 24 carbones dont deux carbones CHOR, un CH2, et 21 carbones sp2.
L’analyse des spectres RMN montre que FRD-5 est un dérivé de catéchine (2,3-trans)
ou epicatéchine (2,3-cis) (Annexe) :

o La partie trans-catéchine est identifiée grâce au CH-OR-2 δH ppm 4.93 (d, 5.6 Hz)
avec une constante de couplage caractéristique des 2,3-trans flavan-3-ols
[283].
o Les 9 carbones de la partie combinée à la catéchine forment trois cycles
supplémentaires qui donnent deux possibilités de structure pour FRD-5:
mururin A ou vaccinin A.

o Les H-4 de la catéchine corrèlent en HMBC à un C aromatique oxygéné le plus

déblindé à δC ppm 151.8 (lactone insaturée), alors que le H-8 corrèle au second
C aromatique oxygéné à δC ppm 149.4 (cycle pyrane). Ces déplacements
chimiques sont en accord avec ceux observés pour la mururin A [283]; les
différences entre les deux hypothèses sont : mururin A δC ppm 153.0 (C-5) et
150.0 (C-7), et vaccinin A δC ppm 149.0 (C-5) et 153.6 (C-7) [284].
o La concordance des pouvoirs rotatoires : FRD-5 [α]D = - 49,5 et mururin A [α]D
= -56,8 nous permet d’identifier le composé FRD-5 est la mururin A.

VI.1.4.3. - Acides E-cafféoylquiniques:

Dans FRD-6, FRD-7 et FRD-8, un ester E-cafféoylé est présent et caractérisé par le système
ABX des 3 protons aromatiques, la double liaison trans (J = 16 Hz), le carbonyle vers 170 ppm.
172
La stéréochimie relative de l’acide quinique est déterminée des multiplicités et couplage de
ses protons: le proton H-6 le plus blindé vers 2 ppm (dd, J > 9.5 Hz) est en position axiale, et le
second proton H-6 légèrement plus déblindé est équatorial (d ou m). De même, les protons
H-5 et H-4 sont en position axiale : H-5 td (8-9, 3-4 Hz) et H-4 dd (8-9, 3 Hz); le proton H-3 est
équatorial avec 3J3-4 = 3 Hz. Ces orientations sont confirmées par les effets ROE observés entre
H-2ax/H-4ax/H-6ax.
- FRD-6 :
La partie cafféoyle est liée à l’acide quinique en sa position 3 : H-3 déblindé à δH ppm 5.38 (td,
7.8, 3.6Hz) et observation d’une corrélation HMBC entre le H-3 et le carbonyle C-9’ à δC ppm
169.0. FRD-6 est l’acide 3-O-(E)-cafféoylquinique [285] : (α)D = -25.7 (MeOH), réf (α)D = -35.2
(H2O) [286].
- FRD-7 :
La partie cafféoyle est liée à l’acide quinique en sa position 5 : H-5 déblindé à δH ppm 5.36 (td,
9, 4.2 Hz) et observation d’une corrélation HMBC entre le H-5 et le carbonyle C-9’ à δC ppm
168.7. FRD-7 est l’acide 5-O-(E)-cafféoylquinique [285]: (α)D = -22 (MeOH), réf (α)D = -35.2
(MeOH) [287] et - 34 [285].
- FRD-8 :
La partie cafféoyle est liée à la partie aglycone en sa position 4 : H-4 déblindé à δH ppm 4.82
(dd, 9.3, 2.7 Hz) et observation d’une corrélation HMBC entre le H-4 et le carbonyle C-9’ à δC
ppm 169.0. FRD-8 est l’acide 4-O-(E)-cafféoylquinique isolé de Crataegus [285]; FRD-8 : (α)D = -
23.7 (MeOH), réf (α)D = -54 (H2O) [288] et - 60 [285].

VI.1.4.4. - Mégastigmanes:
FRD-9 est identifié comme étant le blumenol C isolé antérieurement des parties aériennes de
Epimedium grandiflorum var. thunbergianum [289].
La configuration 6R est déterminée de l’effet Cotton positif à 238 nm sur la courbe de CD de
FRD-9 [290]. La configuration absolue du C-9 est déterminée comme 9S de la comparaison des
données de RMN 13C (δC-9 ppm 77.8, δC-10 ppm 22.1, δC-glu1’ ppm 104.2) avec celles du glucoside de
blumenol C (9S δC-9 ppm 77.7, δC-10 ppm 22.0, δC-glu1’ ppm 104.1) et du byzantionoside B (9R ; δC-9
ppm 75.7, δC-10 ppm 19.9, δC-glu1’ ppm 102.3) [290]. (Tableau n° 28)

173
Tableau n° 28 : RMN de FRD-9 et diastéréosisomères.

Blumenol C-glucoside Byzantionoside B

FRD-9 4.7.14.6 (m’)
CD3OD CD3OD
CD3OD
(6R, 9S) (6R, 9R)
1H 13C 1H 13C 1H 13C
No

1 37.5 37.4 37.4

2.51 (d, 17.4) 2.48 (d, 17.0) 2.46 (d, 17.0)

2 48.2 48.2 48.2
2.00 (d, 17.2) 1.98 (d, 17.0) 1.97 (d, 17.0)

3 202.5 202.4 202.5

4 5.83 (s) 125.6 5.80 (s) 125.6 5.80 (s) 125.5

5 170.0 169.8 170.1

6 2.00 (t, 4.9) 52.7 1.97 (m) 52.7 1.99 (m) 52.5

1.83 (m) 1.81 (m) 1.98 (m)

7 26.8 26.7 26.9
1.71 (m) 1.67 (m) 1.50 (m)

1.68 (m) 1.68 (m) 1.68 (m)

8 37.6 37.5 37.9
1.64 (m) 1.61 (m) 1.61 (m)

9 3.94 (m) 77.8 3.82 (m) 77.7 3.88 (m) 75.7

10 1.27 (d, 6.3) 22.1 1.25 (d, 6.0) 22.0 1.18 (d, 6.0) 19.9

11 1.04 (s) 27.6 1.02 (s) 29.1 1.01 (s) 29.1

12 1.12 (s) 29.2 1.09 (s) 27.5 1.09 (s) 27.6

13 2.07 (s) 25.1 2.04 (s) 25.0 2.04 (s) 25.0

Glu

1’ 4.34 (d, 7.8) 104.2 4.32 (d, 8.0) 104.1 4.33 (d, 8.0) 102.3

2’ 3.17 (dd, 9.2, 7.8) 75.5 3.15 (dd, 9.0, 8.0) 75.4 3.14 (dd, 9.0, 8.0) 75.3

3’ 3.36 (dd, 9.0, 8.0) 78.4 3.34 (t, 9.0) 78.3 3.35 (t, 9.0) 78.3

4’ 3.29 (dd, 9.6, 8.0) 71.8 3.27 (t, 9.0) 71.8 3.27 (m) 72.0

5’ 3.27 (ddd, 9.5, 5.7, 2.3) 78.0 3.25 (m) 77.9 3.26 (m) 78.0

3.87 (dd, 12.0, 2.1) 3.85 (dd, 12.0, 2.0) 3.85 (dd, 12.0, 2.0)
6’ 62.9 62.9 63.1
3.68 (dd, 11.9, 5.4) 3.66 (dd, 12.0, 5.0) 3.65 (dd, 12.0, 5.0)

De même, le FRD-10 est le 9-O-(6’-O-α-L-arabinopyranosyl)-β-D-glucoside de blumenol C isolé

des racines de Allium porrum [291].
o L’α-L-arabinose est caractérisé par des protons H-1’’, H-2’’ et H-3’’ en
position axiale à grande constante de couplage 3J > 6.5Hz. Le proton H-3’’ à
δH ppm 3.54 (dd, 7.0, 3.6Hz) est adjacent à H-4’’ en position équatoriale comme
le démontre 3J3-4 = 3.6Hz [292].
o L’enchainement diosidique est déterminé des corrélations HMBC
interosidique entre H-1’’-Ara/C-6’-Glu, et entre H-1’-Glu/C-9 du
mégastigmane.
o La configuration 6R est confirmée par l’effet Cotton positif à 241 nm
(foliasalacioside B1: effet positif à 236 nm) [293].
o La configuration du 9S est déterminée de la comparaison des déplacements
chimiques des δC-10 ppm 22.1 et δC-glu1’ ppm 104.2 avec celles du 9-O-(6’-O-α-L-
arabinopyranosyl)-β-D-glucoside de blumenol C (6R, 9S), et du
foliasalacioside B1 (6R, 9R) [291, 292].
174
VI.2. - EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTIMICROBIENNE
De même que pour Dolichandrone spathacea, nous avons évalué l’activité antimicrobienne
des extraits de Flacourtia rukam et des composés isolés des feuilles. Bien que les usages
traditionnels de cette espèce ne soient pas liés à une cause infectieuse, une activité
antimicrobienne importante fut reportée dans la littérature pour les extraits méthanoliques
des parties aériennes de deux autres espèces : F. indica et F. jangomas (cf. Partie
bibliographique page 39 - 40). Peu d’études biologiques ont été réalisées sur F. rukam et une
seule évaluation antimicrobienne avait été entreprise sur des glucosides phénoliques [294].
VI.2.1 - ACTIVITE ANTIMICROBIENNE DES EXTRAITS :
Nous avons étudié l’activité antimicrobienne des 5 extraits foliaires (extrait à l’éther de pétrole
(extrait 1), extrait chloroformique (extrait 2), extrait à l’acétate d’éthyle (extrait 3), extrait
méthanolique (extrait 4) et extrait hydrométhanolique (extrait 5)), et celle des 27 composés
isolés de l’extrait méthanolique selon le même protocole d’évaluation que celui utilisé pour
D. spathacea.
L’activité antimicrobienne des 5 extraits est réalisée en utilisant la méthode de diffusion en
milieu solide afin de déterminer la CMI à six concentrations (10 mg/ml, 5 mg/ml, 2,5 mg/ml,
1,2 mg/ml, 0,6 mg/ml et 0,3 mg/ml) contre 17 souches bactériennes (8 bactéries à Gram
positif, 9 bactéries à Gram négatif) et 5 levures (Tableau n° 29)

175
Tableau n° 29 : CMI des extraits foliaires de Flacourtia rukam

P = bactérie à Gram positif ; N = bactérie à Gram négatif ; L = levure ; NA = Non actif

CMI (mg/ml)

No Souches sensibles Extrait 1 Extrait 2 Extrait 3 Extrait 4 Extrait 5

1 Bacillus subtilis 1,2 1,2 ≤ 0,3 10 5

2 Enterococcus faecalis ATCC 1034 10 5 ≤ 0,3 10 5

3 Staphylococcus aureus CIP 8325-4 2,5 1,2 ≤ 0,3 10 5

4 Staphylococcus aureus CIP 53.154 ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 5 5

P
5 Micrococcus luteus 0,6 1,2 ≤ 0,3 10 5

6 Listeria innocua ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 5 10

7 Staphylococcus epidermidis ≤ 0,3 ≤ 0,3 1,2 2,5 2,5

8 Streptococcus pyogenes ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 1,2 0,6

9 Providencia stuartii 2,5 5 1,2 10 NA

10 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 NA NA 5 NA NA

11 Shigella sonnei ≤ 0,3 ≤ 0,3 ≤ 0,3 0,6 ≤ 0,3

12 Proteus vulgaris NA NA 5 NA NA

N 13 Klebsiella pneumoniae NA NA 5 NA NA

14 Serratia marcescens NA NA 5 NA NA

15 Escherichia coli CIP 54.127 NA NA 10 NA NA

16 Enterobacter cloacae NA NA 10 NA NA

17 Salmonella enterica NA NA 5 NA NA

18 Candida glabrata 2,5 2,5 2,5 NA NA

19 Candida tropicalis NA NA 5 NA NA

L 20 Candida kefyr NA NA 5 NA NA

21 Cryptococcus neoformans 5 5 10 NA NA

22 Candida albicans 5 5 ≤ 0,3 NA NA

Ces résultats montrent que tous les extraits sont plus actifs sur les bactéries à Gram positif
que sur les bactéries à Gram négatif et les levures. Cette observation suggère que les extraits
agissent certainement au niveau des constituants de l’enveloppe des Gram positif, du
peptidoglycane et les acides (teichoïque).
Une activité importante est mise en évidence pour tous les extraits contre deux bactéries
pathogènes: Shigella sonnei (CMI ≤ 0,6) et Streptococcus pyogenes (CMI ≤ 1,2). Ainsi F. rukam
est sélectivement active contre les Staphylococcus, Streptococcus pyogenes et Shigella sonnei.
L’activité la plus forte est mise en évidence pour l’extrait AcOEt (extrait 3) qui est actif contre
toutes les souches. L’extrait méthanolique (extrait 4) possède une activité antibactérienne

176
contre toutes les bactéries à Gram positif et plus intensément contre Staphylococcus
epidermidis et Streptococcus pyogenes, et contre deux bactéries à Gram négatif (Providencia
stuartii et Shigella sonnei).
Les trois extraits apolaire et moyennement polaire (extraits 1 à 3) possèdent une activité
importante contre : Staphylococcus aureus CIP 53.154, Listeria innocua, Streptococcus
pyogenes et Shigella sonnei avec une CMI ≤ 0,3.

VI.2.2. - ACTIVITE DES METABOLITES ISOLES:

L’activité des 27 composés isolés de F. rukam est déterminée par la méthode de
bioautographie contre la bactérie à Gram positif Staphylococcus aureus CIP 53.154 par rapport
au témoin de gentamicine (Tableau n° 30).

Tableau n ° 30 : Bioautographie des composés isolés de F. rukam contre Staph. aureus CIP
53.154
Composé Composé
Activité Activité
(50µg) (50µg)

FRP-1 - FRD-1 +++

FRP-2 ++ FRD-2 -

FRP-3 ++ FRD-3 -

FRP-4 +++ FRD-4 -

FRP-5 - FRD-5 -

FRP-6 - FRD-6 -

FRP-7 - FRD-7 -

FRP-8 - FRD-8 -

FRP-9 - FRD-9 -

FRP-10 - FRD-10 -

FRP-11 + FRD-11 -

FRP-12 - FRD-12 -

FRP-13 - FRD-13 +

FRP-14 ++

« +++ » = très actif ; « ++ » = actif modéré ; « + » = actif ; « - » = non actif

Parmi les composés divers (FRD), nous confirmons l’activité antimicrobienne de la lutéoline
(FRD-1) isolée également de D. spathacea et dont l’activité antibactérienne avait été évaluée
comme modérée à intense contre les cinq souches : Staph. aureus CIP 53.154, E. faecalis ATCC
1034, Strep. pyogenes, P. aeruginosa ATCC 9027 et Shig. Sonnei, avec des CMI entre 125 et
500 µg/ml. (cf. page 128 - 129)

177
Les CMI des glucosides phénoliques actifs (FRP-2 à FRP-4, FRP-11, FRP-14 ; FRP-8 = contrôle
négatif pour la série) et un lignane FRD-13 ont été déterminées par la méthode de dilution en
milieu liquide en plaques 96 puits contre cinq souches bactériennes dont trois à Gram positif :
Staphylococcus aureus CIP 53.154, Staphylococcus epidermidis et Enterococcus faecalis ATCC
1034, et deux à Gram négatif : Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et Escherichia coli CIP
54.127. Neuf concentrations (500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, 31,2 µg/ml, 15,6
µg/ml, 7,8 µg/ml, 3,9 µg/ml, et 1,9 µg/ml) ont été testées (Tableau n° 31).

Tableau n° 31 : CMI des composés antibactériens de F. rukam

CMI (µg/ml)
Composé S. aureus E. faecalis P. aeruginosa E. coli
S. epidermidis
CIP 53.154 ATCC 1034 ATCC 9027 CIP 54.127
FRP-1 NA NA NA NA NA
FRP-2 250 500 125 250 500
FRP-3 62,5 125 62,5 125 250
FRP-4 31,2 31,2 31,2 125 125
FRP-8 NA NA NA NA NA
FRP-11 250 250 250 250 500
FRP-14 250 250 250 125 250
FRD-13 500 250 500 250 500

Le 4-O-β-D-glucopyranosyl-syringaresinol (FRD-13) est le moins actif parmi les composés

testés. FRD-13 montre un effet antibactérien faible contre les 5 souches bactériennes avec
une CMI entre 250 – 500 µg/ml. D’après nos recherches, nos résultats constituent la première
étude de l’activité antibactérienne de lignane.
Le syringaresinol est reconnu actif contre trois bactéries : Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis et Escherichia coli par la méthode de diffusion par disque [295]; ce composé possède
une activité antibactérienne contre A. baumannii JVC 1053 MDR avec une CMI = 100 µg/ml
[296].

178
 R1 R2 R3 R4 R1 R2 R3 R4
FRP-5 H H Benzoyle H FRP-6 OH H Benzoyle H
FRP-10 OH H Benzoyle H FRP-7 OH H Benzoyle Benzoyle
FRP-12 OH H Benzoyle Benzoyle
FRP-2 OH H Benzoyle Cinnamoyle
FRP-9 OH Benzoyle H H
FRP-1 OH Benzoyle H Benzoyle
FRP-11 OH Benzoyle Benzoyle H
FRP-3 OH Benzoyle Caffeoyle H

FRP-4 OH Benzoyle Caffeoyle Benzoyle

R1 R2 R3
FRP-14 OH H Benzoyle
FRP-8 OH Benzoyle Caffeoyle

R1 R2 R3
FRP-13 OH Benzoyle H

La meilleure activité inhibitrice a été trouvée pour le composé FRP-4 qui est le glucoside
phénolique le plus actif sur les bactéries à Gram positif (CMI = 31,2 µg/ml) et sur les bactéries
à Gram négatif (CMI = 125 µg/ml). Sa structure est celle de l’hétéroside le plus estérifié de la
série.
Dans le but d’évaluer l’impact des différents substituants sur l’activité antibactérienne, nous
avons tenté de dégager quelques relations structure-activité pour cette série de glucosides
phénoliques estérifiés :
- Ester en position benzylique C-7 :
Les composés FRP-13 et FRP-9 ne possèdent pas d’activité ce qui montre que la
présence d’un ester cyclohexenonate en position 7 ne participe pas à l’activité. Et ceci
quelque soit l’état d’hydroxylation du cycle hexenone puisque les composés FRP-6 et
FRP-10 sont aussi inactifs.
- Hydroxylation en position 5 du phénol :
La présence d’un OH en position 5 dans le composé FRP-10 n’apporte pas d’activité
antibactérienne par rapport au composé FRP-5.

179
- Monoester en position 2’ ou 6’ du glucose :
La présence d’un seul groupement benzoyle en position 2’Glu ou 6’Glu n’apporte pas
d’activité puisque FRP-5, FRP-10, FRP-9, FRP-13 et FRP-6 sont tous dépourvus
d’activité antimicrobienne.
Un article de 2010, relate l’absence d’activité antibactérienne de quatre glucosides
phénoliques de structures proches (chaenomeloidin, tremulacin, salicine et
tremuloidin) contre E. coli ATCC 25922 et S. aureus ATCC 25923 [294]. Ces résultats
confortent le fait que les monoesters du glucose ne sont pas actifs et que la nature de
la cyclohexenone n’a pas de contribution.

R1 R2 R1 R2
Chaenomeloidin Benzoyle H Tremulacin H Benzoyle
Salicine H H
Tremuloidin H Benzoyle

- Diesters :

 D’après nos résultats il semble que la double estérification en positions 2’ et 6’ du

glucose par des esters aromatiques contribuent de façon notable à l’activité
antimicrobienne. En effet les composés FRP-3 et FRP-11 sont actifs alors que le
composé FRP-9 est inactif.

 Par contre si l’une des estérifications concerne la cyclohexenone (FRP-12, FRP-1, FRP-
7) nous n’observons pas de gain d’activité, ou très faiblement s’il s’agit d’un cinnamate
au lieu d’un benzoate (FRP-2 ; CMI de 125 à 500 µg/ml).

 Cette influence de la nature de l’ester est retrouvé en comparant FRP-11 et FRP-3 ; la

présence d’un cafféate en position 6’Glu influe fortement sur l’activité
antibactérienne : FRP-3 à cafféate (CMI de 62,5 à 250 µg/ml) contre FRP-11 à benzoate
(CMI de 250 à 500 µg/ml).

- Triesters :
Le composé le plus actif : FRP-4 (CMI de 31,2 à 125 µg/ml) est un triester aromatiques
en position 2’ et 6’ du glucose et en position 2’’ de la cyclohexenone.
Par contre ces conclusions ne sont pas confirmées pour les composés FRP-8 (diester mais non
actif) et FRP-14 (monoester avec CMI de 125 à 250 µg/ml) appartenant à la série estérifiée en
C-7 par un 2,3-dihydroxybenzoate.

180
En conclusion :

 Cinq glucosides phénoliques (FRP-2, FRP-3, FRP-4, FRP-11 et FRP-14) possèdent une
activité bactérienne.
 La présence simultanée de deux substituants (benzoyle ou cafféoyle) en position 2’ et
6’ du glucose influe sur l’activité antibactérienne, et le groupement cafféoyle en
position 6’Glu est plus actif que le groupe benzoyle.
 Le composé FRP-4 est le seul à posséder une activité antibactérienne la plus
importante contre les cinq bactéries testées ce qui prouve que la présence
simultanément de trois groupements (un cafféoyle en position 6’Glu, deux benzoyles
en position 2’Glu et 2’’) est la situation plus favorable pour obtenir une activité
antibactérienne. Celle-ci peut engendrer un encombrement stérique défavorable à la
synthèse de la paroi bactérienne.
 Nos résultats constituent la première étude de l’activité antibactérienne des
glucosides phénoliques.
Les sept composés actifs sont également retrouvés dans l’extrait hydrométhanolique (extrait
5) qui possède une activité comparable à l’extrait méthanolique (extrait 4) ; ces composés
peuvent être les responsables de leurs activités. Par contre ils sont totalement absents dans
les autres extraits et ne peuvent donc pas expliquer l’activité antibactérienne élevée des
extraits 1, 2 et 3.

181
 TROISIEME PARTIE :
CONCLUSION GENERALE

182
L’étude phytochimique des trois espèces : Cleome chelidonii, Dolichandrone spathacea et
Flacourtia rukam, nous a conduit à l’isolement et à la détermination structurale de 90
métabolites naturels dont 29 se sont avérés être des composés nouveaux. Leur purification a
été réalisée classiquement à l’aide de différentes méthodes chromatographiques sur support
solide (CCM, CCM préparative, CC ouverte, VLC, CC Flash, HPLC préparative, HPLC semi-
préparative).
L’identification structurale a été générée de l’analyse des données spectrales obtenues par
des méthodes spectroscopiques de RMN mono et bidimensionnelles à 600/150 MHz (1H-RMN,
13C-RMN, DEPT, COSY, TOCSY, HSQC, HMBC, NOESY et ROESY) et par les autres

spectrométries : masse (ESI-MS et HR-ESI-MS), UV, IR, CD et la mesure du pouvoir rotatoire;

pour les composés connus, leurs données spectrales ont été comparées avec celles de la
littérature.
Les composés isolés appartiennent à plusieurs classes de métabolites primaires et
secondaires:

 22 flavonoïdes dont 11 nouveaux

 19 glycosides phénoliques dont 9 originaux
 16 iridoïdes dont 3 structures nouvelles
 12 mégastigmanes dont 3 nouvellement décrits
 4 alcaloïdes à noyau indole dont 1 nouveau
 3 saponosides dont 2 structures nouvelles
 3 acides monoterpènoïques
 5 acides phénoliques
 3 isomères d’acide cafféoylquinique
 1 lignane glycosylé
 l’uracile et l’acide palmitique
Cleome chelidonii
Les parties aériennes de C. chelidonii renferment 16 flavonoïdes CF-1 à CF-16 (dont 11
nouveaux), 9 mégastigmanes CM-1 à CM-9 (3 nouveaux), les 4 alcaloïdes à noyau indole CD-1
à CD-4 (1 nouveau), l’uracile (CD-5) et l’acide palmitique (CD-6).

 Les flavonoïdes isolés sont des hétérosides estérifiés de 3,7-O-diglycosides de flavonol

dont trois nouveaux (CF-14, CF-15, CF-16) à kaempférol, et 13 autres à quercétol dont
CF-3 à CF-7, CF-11 et CF-14 sont nouveaux. La partie osidique est identique dans tous
ces flavonoïdes et constituée de trois sucres: 1 glucose et 2 rhamnoses. Les différences
structurales et originalités de ces composés résident dans la nature de la partie
estérifiant un ou plusieurs hydroxyles osidiques. Ces esters naturels d’hétérosides
flavonoïdiques ne sont pas courants dans la littérature, et ils constituent plusieurs
composés nouveaux pour le genre Cleome.
 Parmi les neuf mégastigmanes isolés, les trois nouvellement décrits sont des
glucosides (CM-1, CM-2, CM-3). Le composé CM-1 est identifié au 5,6-époxy-3,4,9-
trihydroxy-7-mégastigmen-4-O-β-D-glucopyranoside, isomère du Komaroveside C, le
β-D-glucopyranoside étant lié en position 4 par rapport à la position 3 dans le
Komaroveside C [185]. Le CM-2 est similaire de Komaroveside C, mais possède un diol
C-5/C-6 au lieu d’un cycle d’époxyde [185]. Le composé CM-3 est le (6S, 7E)-4,6,9-
183
 trihydroxymégastigman-4,7-dien-3-one-4-O-β-D-glucopyranoside, le squelette est
similaire à celui des roseosides [187] mais l’originalité de CM-3 est le β-D-
glucopyranose lié sur un hydroxyle en position 4 d’une double liaison(>C4=C5<).
 Quatre alcaloïdes à noyau indole dérivés du tryptophane dont le composé nouveau
CD-2 est identifié comme l’ester méthylique de l’acide 6-O-β-D-glucopyranose-6-
hydroxyindole-3-carboxylique. L’acide 6-O-β-D-glucopyranose-6-hydroxyindole-3-
carboxylique a été isolé du rhizome de Cardamine diphylla [202], et nous en concluons
que CD-2 peut être un produit d’estérification formé lors des étapes d’extraction en
utilisant le méthanol.
Les flavonoïdes étant les composés majoritaires dans cette espèce, et connus pour posséder
un fort pouvoir anti-oxydant et piégeur de radicaux libres, nous avons eu comme objectif
d’apprécier l’effet de la partie osidique et des groupes acétates sur cette activité par rapport
aux aglycones, quercétol et kaempférol. Nous avons mesuré le potentiel anti-radicalaire sur
le radical DPPH des 14 flavonoïdes isolés CF-1 à CF-14.

 Nos résultats montrent que tous les flavonoïdes possèdent une activité anti-radicalaire
(CI50 = 17,74 à 104,27 µM) moins importante que celle du quercétol (CI50 = 2,12 µM),
et une activité comparable à celle de l’acide ascorbique (CI50 = 45,89 µM). Le flavonoïde
CF-14 a une activité faible (CI50 = 104,27 µM) puisque son aglycone est le kaempférol,
dépourvu de système ortho-dihydroxylé benzénique dans le cycle B du squelette
flavonol.
 Le glycoside de quercétol CF-3 est le seul à posséder une activité anti-radicalaire
importante (CI50 = 17,74 µM). Ceci prouve que la présence d’un groupement acétylé
en position 3 du rhamnose, est l’estérification la plus favorable pour l’activité anti-
radicalaire que les autres esters et positions.
 La présence d’un ou de deux acétates sur le rhamnose lié au quercétol influe peu sur
l’activité anti-radicalaire, mais la présence de trois acétates réduit de moitié l’activité
anti-radicalaire par rapport au flavonoïde non estérifié de référence (CF-1).

Dolichandrone spathacea
35 composés sont isolés des feuilles de Dolichandrone spathacea et nous avons identifié 16
iridoïdes glucosylés (DSI dont 3 nouveaux DSI-8, DSI-14, DSI-15), 3 saponosides (DSC-8 à DSC-
10 dont 2 nouveaux : DSC-9 et DSC-10). Plusieurs composés connus sont également isolés : 3
glycosides phénoliques (DSC-1 à DSC-3), 4 flavonoïdes (DSC-4 à DSC-7), 3 acides mono
terpènoïques (DSC-11 à DSC-13), 5 acides phénoliques (DSC-14 à DSC-18) et 1 mégastigmane.
(DSC-19).

 La présence majoritaire de glucosides d’iridoïdes confirme qu’il s’agit bien de

marqueurs chimiotaxonomiques des Bignoniacées. Les 16 composés identifiés sont
des glucosides de catalpol (DSI-1 à DSI-6, DSI-12, DSI-13, DSI-14; 1 seul nouveau DSI-
14), et d’ajugol (DSI-7 à DSI-10, DSI-15, DSI-16, 2 nouveaux DSI-8 et DSI-15) et l’ixoside
(DSI-11). Les différences structurales de ces iridoïdes résident dans les substituants
estérifiant la position 6 de la génine. DSI-8 est le 6-O-(p-méthoxy-E-cinnamoyle)-
ajugol, alors que DSI-14 et DSI-15 possèdent un ester d’acide monoterpènique
monoinsaturé peu commun (acide (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoïque).

184
  3 saponosides triterpénoiques (DSC-8, DSC-9, DSC-10) ont été identifiés dont 2
composés nouveaux (DSC-9 et DSC-10) à squelette ursane. Ces deux saponosides
nouveaux sont des 28-O-glucosides d’acides polyhydroxytriterpéniques : l’acide
uncarique (acide 3β, 6β, 19α-trihydroxyurs-12-en-28-oique) et l’acide 3β, 6β, 19α,23-
tetrahydroxyurs-12-en-28-oique. Les deux sapogénines ne sont pas très répandues
dans le groupe de ces saponosides.
 Les autres composés connus sont très courants dont 3 glycosides phénoliques (DSC-1
à DSC-3) isolés également dans le genre Dolichandrone (voir partie I). Parmi les
composés connus, le decafféoylacteoside (DSC-1), l’acteoside (DSC-2), la lutéoline
(DSC-4) et l’acide p-méthoxy-E-cinnamique (DSC-17) possèdent une activité
antibactérienne démontrée dans notre étude.

Dans le but de valoriser et promouvoir l’usage de D. spathacea en médicine traditionnelle

Vietnamienne, nous avons étudié l’activité antimicrobienne de ses 5 extraits foliaires (extrait
d’éther de pétrole (extrait 1), extrait chloroformique (extrait 2), extrait d’acétate d’éthyle
(extrait 3), extrait méthanolique (extrait 4) et extrait hydrométhanolique (extrait 5)), et celle
des 35 composés isolés de l’extrait méthanolique (extrait 4).

 Les résultats montrent que tous les extraits sont plus actifs sur les bactéries à Gram
positif et les levures, que sur les bactéries à Gram négatif. L’action se situerait au
niveau de la paroi cellulaire et des constituants du peptidoglycane (N-
acetylglucosamine, acide N-acétylmuramique, acides téichoïques). Les bactéries à
Gram positif sont beaucoup plus sensibles par rapport aux bactéries à Gram négatif.
Ceci est dû aux différentes structures de la paroi cellulaire des bactéries. En effet, les
bactéries à Gram négatif possèdent une membrane externe en plus du peptidoglycane.
Le peptidoglycane est poreux et laisse passer de nombreuses substances ce qui n'est
pas le cas de la membrane externe des bactéries à Gram négatif qui s'oppose,
notamment, à la pénétration des antibiotiques hydrophobes. Par conséquent, il en
résulte une résistance plus importante des souches à Gram négatif contre l’activité de
nos extraits végétaux.

 L’activité la plus intéressante est trouvée pour l’extrait AcOEt (extrait 3) qui est actif
contre les 22 souches de microorganismes testées. L’extrait méthanolique (extrait 4)
possède une activité antibactérienne contre 6 bactéries à Gram positif (Bacillus
subtilis, Enterococcus faecalis ATCC 1034, Staphylococcus aureus CIP 53.154,
Micrococcus luteus, Staphylococcus epidermidis et Streptococcus pyogenes) et 2
bactéries à Gram négatif (Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et Shigella sonnei).

 L’activité antibactérienne des 35 métabolites isolés a été mesurée contre cinq souches
bactériennes et les CMI de six composés les plus actifs (DSC-1, DSC-2, DSC-4, DSC-17,
DSI-6 et DSI-9) ont été déterminées (Staphylococcus aureus CIP 53.154, Enterococcus
faecalis ATCC 1034, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et
Shigella sonnei).
o La meilleure activité inhibitrice a été trouvée pour deux diglycosides de
phényléthanoïde: le decafféoylacteoside (DSC-1) et l’acteoside (DSC-2) avec
des CMI = 31,2 à 250 µg/ml selon la souche.

185
 o La lutéoline (DSC-4) est peu active sur les souches testées et l’acide p-méthoxy-
E-cinnamique (DSC-17) possède une activité antibactérienne moyenne (CMI
allant de 62,5 à 125 µg/ml).
o Ces résultats sont en accord avec des études antérieures sauf pour le
decafféoylacteoside (DSC-1) qui est dépourvu d’activité antibactérienne dans
une étude de la littérature [259].
o Parmi les iridoïdes, seuls le minecoside (DSI-6) et le 6-O-caffeoyl-ajugol (DSI-9)
sont faiblement actifs avec une CMI entre 125 – 500 µg/ml selon la souche
testée. Nos résultats constituent la première étude de l’activité
antibactérienne de ces deux glucosides d’iridoïdes estérifiés. Par rapport aux
travaux de la littérature qui ont montré que des iridoïdes comme l’aucubin
possédaient un effet antibactérien important contre E. coli et Staph. aureus
[267], il semblerait donc que la présence de groupe esters en position 6 soit
défavorable à l’activité antibactérienne des iridoïdes.

Flacourtia rukam
Nous avons isolé et identifié 27 composés dont 9 nouveaux des feuilles de Flacourtia rukam.
Parmi ceux-ci on dénombre : 16 glycosides phénoliques (FRP-1 à FRP-14, FRD-11 et FRD-12)
dont 9 nouveaux (FRP-1 à FRP-8 et FRD-11), 5 flavonoïdes (FRD-1 à FRD-5), 3 isomères d’acide
cafféoylquinique (FRD-6 à FRD-8), 2 mégastigmanes (FRD-9 et FRD-10) et 1 lignane glycosylé
(FRD-13).

 Les 14 glucosides phénoliques (FRP-1 à FRP-14) possèdent le squelette commun d’un

glucose lié en position 2 à un alcool benzylique. Les différences structurales de ces
composés résident dans la partie estérifiant l’alcool primaire benzylique et/ou la
présence d’un ou deux groupes esters aromatiques sur le glucose. Ce type
d’hétérosides est fréquemment rencontré dans la famille Salicaceae et peut être
considéré comme un marqueur chimiotaxonomique [297, 298]. Le problème de leurs
stéréochimies n’a pas été entièrement résolu et méritent des travaux
complémentaires.

 Un autre glycoside phénolique nouveau FRD-11 est un glucoside de syringylglycérol,

et sa structure est identifiée comme le (7S,8S)-4-O-méthylesyringylglycérol-8-O-β-
glucopyranoside, diastéréoisomère du (7S,8R)-4-O-méthyl-syringylglycérol-8-O-β-D-
glucopyranoside [274].

 Les autres composés connus sont très courants, plusieurs composés (FRD-2, FRD-5 à
FRD-8) se trouvent dans d’autres espèces du Flacourtia (voir la partie I) et trois
composés (FRD-1, FRD-3 et FRD-4) avaient été isolés également de D. spathacea
(DSC-4 à DSC-6). Parmi eux, FRD-13 (le 4-O-β-D-glucopyranosyl-syringaresinol) a
montré une activité antibactérienne.
Nous avons évalué l’activité antimicrobienne des 5 extraits préparés à partir des feuilles de F.
rukam et des 27 composés isolés.

186
 Comme nous l’avions observé pour les extraits de D. spathacea, nos résultats montrent
que tous les extraits de F. rukam sont plus actifs sur les bactéries à Gram positif que
sur les bactéries à Gram négatif et les levures. L’activité la plus forte est mise en
évidence pour l’extrait AcOEt. L’extrait méthanolique (extrait 4) possède une activité
antibactérienne contre toutes les bactéries à Gram positif et plus intensément contre
Staphylococcus epidermidis et Streptococcus pyogenes, et contre deux bactéries à
Gram négatif : Providencia stuartii et Shigella sonnei.
 Parmi les 27 composés testés contre Staphylococcus aureus CIP 53.154, 7 composés
sont actifs (FRP-2, FRP-3, FRP-4, FRP-11, FRP-14, FRD-1 et FRD-13).
 FRD-13 est le moins actif, ce composé possède une activité antibactérienne faible
contre les 5 souches bactériennes avec une CMI entre 250 – 500 µg/ml. Nos résultats
constituent la première étude de l’activité antibactérienne de lignane.
 Notre étude constitue la première évaluation de l’activité antibactérienne des
glucosides phénoliques. Les CMI des glucosides phénoliques actifs (FRP-2, FRP-3, FRP-
4, FRP-11 et FRP-14) ont été déterminées contre cinq souches bactériennes:
Staphylococcus aureus CIP 53.154, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis
ATCC 1034, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 et Escherichia coli CIP 54.127.
o Ces 5 glucosides phénoliques possèdent une activité bactérienne intéressante
avec des CMI entre 31,2 – 500 µg/ml.
o Quelques relations structure-activité pour cette série de glucosides
phénoliques estérifiés ont été avancées :
 La présence d’un seul groupement benzoyle en position 2’Glu ou 6’Glu
n’apporte pas d’activité antibactérienne. Ces résultats sont confortés
également par le rapport de Andre Pichette et al en 2010 [294].
 La présence simultanée de deux esters aromatiques (benzoyle ou
cafféoyle) en positions 2’ et 6’ du glucose influe favorablement sur
l’activité antibactérienne.
 Le composé FRP-4 possède l’activité antibactérienne la plus importante
contre les trois bactéries à Gram positif (CMI = 31,2 µg/ml) et les deux
bactéries à Gram négatif (CMI = 125 µg/ml) ce qui prouve que la
présence simultanément de trois groupes esters constitue la situation
la plus favorable pour obtenir une activité antibactérienne.

187
Perspectives
Ce travail nous a permis de contribuer à la connaissance phytochimique et biologique de trois
espèces originaires du Vietnam et du Laos utilisées comme plantes médicinales
traditionnelles. Cependant pour compléter cette étude et permettre leur valorisation, nous
pouvons proposer quelques perspectives:

 Nos résultats démontrent une forte potentialité de l’activité antimicrobienne de nos

extraits et de certains produits isolés. Plusieurs composés ont en effet des CMIs très
proches de celles des antibiotiques témoins. De nouveaux agents antimicrobiens
contre des bactéries de plus en plus résistantes aux antibiotiques pourraient être mis
en évidence. Cette valorisation potentielle nécessite de s’assurer de la sécurité
d’utilisation des extraits en mesurant leur cytotoxicité vis-à-vis de cellules saines et en
évaluant leur hépatotoxicité in vitro sur des hépatocytes et in vivo chez l’animal. La
poursuite de différents tests microbiologiques comme la CMB (concentration
minimale bactéricide), le dénombrement (kill-time), et les courbes de croissance
pourra être envisagée. Ainsi, il est important de poursuivre l’évaluation de l’activité
antibactérienne des glucosides phénoliques de F. rukam contre d’autres souches de
bactéries pour enrichir leur profil d’activité aussi bien que l’évaluation de l’activité en
synergie d’action des composés en mélange par co-cultures.
 Il serait intéressant de réaliser une étude phytochimique de l’extrait à l’acétate
d’éthyle (extrait 3) des feuilles de D. spathacea et F. rukam puisque ces extraits
possèdent l’activité antibactérienne la plus forte.
 Il est décrit dans la littérature que l’extrait méthanolique des fruits de F. rukam
possède une activité anti-oxydante et anti-radicalaire importante. Il serait nécessaire
d’évaluer l’activité anti-radicalaire de l’extrait méthanolique des feuilles de F. rukam
et des composés isolés, en particulier les glucosides phénoliques nouveaux.
 Au Vietnam, en plus de trois espèces étudiées dans cette thèse, 8 autres espèces sont
répertoriées dont C. gynandra, C. viscosa, F. jangomas, et F. indica utilisés dans la
médicine traditionnelle (voir la parie I). Leurs études phytochimiques et la mesure des
activités antibactériennes sur ces espèces seront un de nos objectifs et projets de
recherche lors de notre retour au Vietnam.
 Enfin nous envisageons de poursuivre la collaboration entre l’Université de Can Tho
(Département de Chimie - Faculté de Pédagogie), et l’Université de Reims (ICMR-UMR
7312, groupe « Isolement-Structure ») pour l’étude phytochimique d’autres plantes
médicinales du Vietnam.

188
 QUATRIEME PARTIE :
PARTIE EXPERIMENTALE

189
VII. MATERIEL ET APPAREILLAGE
VII.1. - MATERIEL VEGETAL
Les parties aériennes de Cleome chelidonii ont été récoltées à CanTho au Vietnam, et les
feuilles de Dolichandrone spathacea à VinhLong, en décembre 2011 par NGUYEN Phuc Dam
et ses collègues. Les identifications botaniques ont été réalisées par le professeur NGUYEN
Nghia Thin (Faculté de Biologie, Université des Sciences d’Hanoï, Vietnam) par comparaison
avec des herbiers de référence déposés au département de biologie de l’Université de Cantho
portant les no CTU-CD002 et CTU-CD001 respectivement.

A B
Figure n° 10: Cleome chelidonii L.

A: Cleome chelidonii L. (numéro reference 2387: [24])

B: Photo personnelle de NGUYEN Phuc Dam

A B C
Figure n° 11: Dolichandrone spathacea (L. f.) K. Schum.

A: Dolichandrone spathacea (numéro 8065: [104]).

B: Dolichandrone spathacea [99].
C: Photo personnelle de NGUYEN Phuc Dam

190
L’échantillon de Flacourtia rukam Zoll. & Moritzi étudié a été récolté à Ban Namalat au Laos
et identifié par F. Polidano en septembre 2003. Un herbier référencé 7FR-UR a été conservé
au Laos.

A B

C
Figure n° 12: Flacourtia rukam Zoll. & Moritzi

A: Flacourtia rukam (numéro 2165: [140]).

B: Flacourtia rukam [158]
C: Feuilles, branches, écorces et racines sèches de F. rukam récolté

VII.2. - MATERIEL CHROMATOGRAPHIQUE

VII.2.1. - CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM)
Les analyses chromatographiques sur couche mince sont réalisées sur des supports en verre
ou en aluminium avec indicateur de fluorescence; la phase « normale » est un gel de silice
60A : Alugram UV254 Macherey-Nagel®; la phase « inverse » est une silice greffée C-18 :
Silicagel 60 RP-18 F254S Merck®.
Les chromatographies sur plaque préparative sont en verre recouverte de silice DURASIL-25
UV254 Macherey-Nagel® de 0,25 mm d’épaisseur ou Silicagel 60 RP-18 F254S Merck® de 0,22
mm d’épaisseur.
Les mélanges d’éluants utilisés en phase normale sont : hexane/acétone ; toluène/acétone ;
hexane/AcOEt ; CHCl3/Acétone ; CHCl3/AcOEt ; CHCl3/MeOH ; CHCl3/MeOH/H2O ;
AcOEt/isoPro/H2O ; MeCOEt/isoPro/Acétone/H2O et en phase inverse MeOH/H2O ou
ACN/H2O (Tableau n° 32)

191
Tableau n° 32 : Phases mobiles utilisées pour la CCM

Cleome chelidonii
Extrait/fraction Eluant utilisé Extrait/fraction Eluant utilisé
Hexane/Acétone = 80/20 CHCl3/MeOH = 80/20
4.1 à 4.19
CHCl3/MeOH = 98/2 MeOH/H2O = 60/40
Extrait 1
Toluène/Acétone = 80/20 4.4.1 à 4.4.18 MeOH/H2O = 40/60
Extrait 2
Hexane/AcOEt = 50/50 4.4.13.1 à 4.4.13.14 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
Extrait 3
CHCl3/éther de pétrole = 90/10 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.6.1 à 4.6.13
CHCl3/MeOH = 90/10 MeOH/H2O = 60/40
Extrait 4 CHCl3/MeOH = 80/20 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.6.2.1 à 4.6.2.17
Extrait 5 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5 MeOH/H2O = 60/40
AcOEt/(Isopro/H2O) 65/35(2/1) CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.7.1 à 4.7.17
MeOH/H2O = 60/40 MeOH/H2O = 60/40
MeOH/H2O = 70/30 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.9.1 à 4.9.18
ACN/H2O = 60/40 MeOH/H2O = 60/40
3.1 à 3.14 CHCl3/MeOH = 90/10 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.10.1 à 4.10.14
3.6.1 à 3.6.19 CHCl3/MeOH = 95/5 MeOH/H2O = 70/30
3.6.6.1 à 3.6..6.15 CHCl3/MeOH = 98/2
3.10.1 à 3.10.14 CHCl3/MeOH = 90/10 EtCOMe /Isopro/
Hydrolyse sucre = 20/10/7/6
3.10.10.1 à 3.10.10.15 CH2Cl2/Acétone = 70/30 Acétone/H2O
3.12.1 à 3.12.18 CHCl3/MeOH = 90/10
3.12.13.1 à 3.12.13.16 CHCl3/MeOH = 80/20
3.13.1 à 3.13.16 CHCl3/MeOH = 90/10
3.13.14 à 3.13.29 CHCl3/MeOH = 80/20
3.13.14 à 3.13.23 MeOH/H2O = 30/70
3.13.17 à 3.13.29 MeOH/H2O = 70/30
3.13.19.1 à 3.13.19.17 ACN/H2O = 20/80
3.13.22.1 à 3.13.22.21 CHCl3/MeOH = 75/25
3.13.25.1 à 3.13.25.17 AcOEt/HCOOH/AcOH/H2O = 100/11/11/27

Dolichandrone spathacea Flacourtia rukam

Extrait/fraction Eluant utilisé Extrait/fraction Eluant utilisé
Hexane/Acétone = 80/20 CHCl3/MeOH = 98/2
CHCl3/AcOEt = 90/10 CHCl3/MeOH = 85/15
Extrait 1
Acétone/AcOEt = 50/50 Hexane/Acétone = 80/20
Extrait 2
Extrait 1 Toluène/Acétone = 80/20 CHCl3/AcOEt = 90/10
Extrait 3
Extrait 2 Hexane/AcOEt = 50/50 Acétone/AcOEt = 50/50
Extrait 3 CHCl3/MeOH = 98/2 Toluène/Acétone = 80/20
CHCl3/MeOH = 90/10 CHCl3/MeOH = 80/20
CHCl3/MeOH = 85/15 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
Extrait 4
CHCl3/EtOEt = 90/10 MeOH/H2O = 50/50
Extrait 5
CHCl3/MeOH = 80/20 MeOH/H2O = 60/40
CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5 ACN/H2O = 50/50
Extrait 4
MeOH/H2O = 50/50 4.1 à 4.6 CHCl3/MeOH = 90/10
Extrait 5
MeOH/H2O = 60/40 4.5 à 4.9 CHCl3/MeOH = 80/20
ACN/H2O = 50/50 4.7 à 4.15 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.1 à 4.5 CHCl3/MeOH = 90/10 4.15 à 4.20 CHCl3/MeOH/H2O = 50/50/5
4.5 à 4.8 CHCl3/MeOH = 80/20 4.4 à 4.19 MeOH/H2O = 50/50
4.8 à 4.14 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5 4.7.1 à 4.9.28 CHCl3/MeOH/H2O = 80/20/1
4.14 à 4.20 CHCl3/MeOH/H2O = 60/40/5 MeOH/H2O = 50/50
CHCl3/MeOH = 90/10 4.7.9.1 à 4.7.9.12
4.5.1 à 4.5.18 CHCl3/MeOH = 80/20
MeOH/H2O = 60/40
CHCl3/MeOH = 80/20 4.7.22.1 à 4.7.22.9 MeOH/H2O = 60/40
4.6.1 à 4.6.19
MeOH/H2O = 60/40 4.7.23.1 à 4.7.23.10 MeOH/H2O = 60/40
CHCl3/MeOH = 80/20 CHCl3/MeOH = 85/15
4.6.7.1 à 4.6.7.19 4.7.24.1 à 4.7.24.12
MeOH/H2O = 60/40 MeOH/H2O = 70/30
4.6.7.12.1 à 4.6.7.12.14 CHCl3/MeOH = 80/20 4.7.25.1 à 4.7.25.11 CHCl3/MeOH = 85/15
CHCl3/MeOH = 80/20 MeOH/H2O = 70/30
4.7.1 à 4.7.25
MeOH/H2O = 60/40 CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5
4.9.1 à 4.9.15
CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5 MeOH/H2O = 60/40
4.8.1 à 4.8.23
MeOH/H2O = 60/40 CHCl3/MeOH/H2O = 60/40/5
4.15.1 à 4.15.16
CHCl3/MeOH/H2O = 70/30/5 MeOH/H2O = 50/50
4.13.1 à 4.13.17
MeOH/H2O = 50/50
EtCOMe /Isopro/ EtCOMe /Isopro/
Hydrolyse sucre = 20/10/7/6 Hydrolyse sucre = 20/10/7/6
Acétone/H2O Acétone/H2O

192
La révélation des CCM s’effectue en lumière visible et sous UV (254 et 365nm), suivie d’une
pulvérisation à l’aide de réactifs : H2SO4 aqueux à 50%, ou vanilline sulfurique (1 % de vanilline,
2 ml d’acide sulfurique, EtOH à 95% q.s.p. 100).

VII.2.2. - CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE OUVERTE (CC)

La phase stationnaire utilisée en phase normale est la silice Kieselgel Merck® (63-200 μm), en
utilisant une quantité de silice 50 fois supérieure à la quantité de l’échantillon à déposer ; et
la phase inverse est une silice greffée Lichroprep RP-18 Merck® (40-63 μm), en utilisant 30-40
fois le poids de l’échantillon à déposer, et sous pression à l’aide d’air comprimé.
Dans le cas d’un dépôt solide, le mélange à fractionner est absorbé préalablement sur une
quantité de silice correspondant à environ 3 fois sa masse.
VII.2.3. - CHROMATOGRAPHIE SOUS PRESSION REDUITE (VLC)
La silice est conditionnée dans une colonne équipée d’un verre fritté n°4 jusqu’à une hauteur
de 5-7 cm, en utilisant 25 fois le poids de l’extrait à fractionner. Les supports utilisés sont
identiques à ceux de la CC. La dépression est créée à l’aide d’une trompe à eau; le dépôt et le
solvant d’élution sont précisés pour chaque extrait utilisé [299].
VII.2.4. - CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE FLASH (CCF)
L’appareil utilisé GRACE Reveleris® est muni d’un détecteur DEDL (Détecteur évaporatif à
diffusion de Lumière), d’un détecteur UV/vis, d’une vanne de purge pour la ligne DEDL
(isopropanol) et d’une vanne de purge pour les 4 lignes de solvant. Le déroulement de la
manipulation est suivi grâce à l’écran associé, le tout est piloté par le logiciel Reveleris® Flash
System. Il permet le recueillement automatique des fractions. La phase stationnaire est
contenue dans des cartouches en plastique de différents diamètres contenant de la silice
normale ou greffée C18.
N° Colonne flash Support Poids silice Débit prescrit Masse de l’échantillon
(CCF) à déposer
1 Silica 40 μm 4g 5 ml-18 ml/min (4 mg-0,8 g)
2 Silica 40 μm 12 g 36 ml/min (12 mg-2,4 g)
3 Silica 40 μm 40 g 40 ml/min (40 mg- 8 g)
4 RP-C18 4g 5 ml-18 ml/min 5 mg-0,2 g
5 RP-C18 12 g 36 ml/min 12 mg-2,4 g
6 RP-C18 40 g 40 ml/min 40 mg-8,0 g

VII.2.5. - CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC)

VII.2.5.1. - HPLC analytique et semi-préparative

 Chaînes chromatographiques Dionex® et Ultimate 3000®

Le système UPLC constitué d’un appareil Ultimate 3000®, consiste en une pompe LPG-3400SD
avec un dégazeur intégré, un injecteur WPS-3000SL, un détecteur UV (DAD-3000), un DEDL
SEDEX 80 SEDERE, et un four TCC-3000SD. Cette chaîne est pilotée par le logiciel Chromeleon®
sous un débit de 1 ml/min et une pression maximale de 180 bars.

193
Le système HPLC Dionex® utilisé, consiste en une pompe LPG 3400AB avec un dégazeur
intégré, un injecteur ASI-100, un détecteur UVD 340S, un collecteur AFC 3000 et un four STH
585. Cette chaîne est également commandée par le logiciel Chromeleon® avec une pression
maximale de 180 bars, et un débit de 1 à 6 ml/min en fonction du mode utilisé et de la colonne.
Mode HPLC Type de colonne Numéro

analytique Phenomenex Luna® C18, 5μ, 100 Å, 250 x 4,6mm Colonne 1

analytique Interchrom Uptisphere Strategy® C18, 2-5μ, 250 x 4,6mm Colonne 2

semi-préparative Phenomenex Luna® C18, 5μ, 100 Å, 250 x 10mm Colonne 3

semi-préparative Phenomenex Luna® C18, 5μ, 100 Å, 250 x 15mm Colonne 4

semi-préparative Interchrom Uptisphere Strategy® C18, 2-5μ, 250 x 10mm Colonne 5

Le système d’éluant employé est un mélange d’ACN ou MeOH (qualité-HPLC Carlo erba®), et
d’eau permutée déionisée et filtrée, additionnée ou non de 0,025 % TFA.

 Chaîne chromatographique Waters®

L’appareillage piloté par le logiciel Empower®, comprend une pompe 600 E, un passeur auto-
sampler 717 plus®, et la détection est effectuée à l’aide d’un détecteur à indice de réfraction
RI (Waters 410®).
Deux types de colonne sont utilisés pour cette analyse :
- Colonne Rezex® ROA 250 x 21,2 mm (Phenomenex®) pour la purification des sucres par HPLC
semi-préparative (débit = 3,5 ml/min, la pression = 1400 psi, solvant = H2SO4 2,5µM).
- Colonne Chiralpak IC®, 5μm, 250 x 4,6mm, (Chiraltech®) pour l’identification des sucres
(débit = 0,5 ml/min, la pression = 300 psi, solvant = n-Hexane/EtOH/TFA (80/20/1)).

VII.2.5.2. - HPLC préparative

La chaîne consiste en une colonne Merck® de 200x50 mm, d’une pompe Armen® AP 250/500
avec un injecteur ACC 250/500, et un détecteur UV Merck® K-2501 Knauer. Le suivi de
purification est effectué à l’aide d’un enregistreur papier Kipp & Zonen®BP111 et les fractions
sont collectées grâce à un collecteur Büchi C-660®. La colonne est remplie avec de la silice
greffée Lichroprep RP-18 (12 μm) Merck®.

VII.3. - METHODES PHYSICO-CHIMIQUES

VII.3.1. - POUVOIR ROTATOIRE
Les pouvoirs rotatoires spécifiques sont mesurés sur un polarimètre électronique Perkin-
Elmer®, Model 341 à 20°C en utilisant la raie D du sodium (λ=589 nm). La cuve a un volume de
1 ml et une longueur de 10 cm. Après calibrage du zéro optique avec le solvant, le pouvoir
rotatoire spécifique [α]D, exprimé en degré, est calculé à partir de la formule suivante :

194
[α]D = (100 x α)/(l x c)
α : angle de rotation en degré lu sur le polarimètre
l : longueur en dm de la cuve de mesure
c : concentration de la molécule en solution en g/100 ml
VII.3.2. - SPECTROMETRIE ULTRA-VIOLET-VISIBLE (UV-Vis)
Les spectres UV-Vis des composés ont été mesurés dans le MeOH à l’aide d’un
spectrophotomètre de type Shimadzu® UV/Vis U-2450, double faisceau permettant des
lectures directes contre témoin. Les mesures se font dans des cuves en quartz d’un trajet
optique de 1 cm.
Les spectres d’absorbance des flavonoïdes, ont été enregistrés avec la présence des réactifs
suivants :
- solution d’AlCl3 5% dans le méthanol,
- solution d’HCl 50% v/v dans le méthanol,
- solution de NaOH 2,5% dans l’eau,
- solution de NaOMe 2,5% dans le méthanol.
VII.3.3. - SPECTROMETRIE INFRAROUGE (IR)
2mg de composé est mélangé à du KBr pulvérulent anhydre, puis la poudre est pressée pour
former une pastille. Les spectres IR sont réalisés à l’aide d’un appareil Nicolet® Impact 410
FTIR.
VII.3.4. - SPECTROMETRIE DE MASSE (SM)
Les spectres de masse en basse et haute résolution ont été enregistrés en électro-spray sur
un appareil micromasse ESI-Q-TOF®. (Manchester, UK). Les échantillons sont solubilisés dans
le MeOH légèrement acidifié (0,01 % d’acide formique). L’injection se fait grace à une seringue
de 500 µl, avec un débit de 5 µl/min.
La principale condition de travail étaient le suivante : tension de capillaire 3500 V, tension du
cône d’extraction 30 à 60 V, température de source 80°C.
VII.3.5. - SPECTROMETRIE DE RESONANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE (RMN)
Les spectres de résonance magnétique nucléaire du proton et du carbone (RMN-1H et 13C)
sont enregistrés à 600 et 150 MHz sur un appareil BRUKER AVANCE DRX-600® équipé d’une
cryoplateforme. Les microprogrammes Bruker® et le logiciel de traitement des données
Topspin® 2.1 sont exploités.
Les échantillons ont été solubilisés dans les solvants deutérés : CDCl3, DMSO-d6 et CD3OD
(précisés pour chaque produit) dans des tubes analytiques de 5 mm de diamètre.
Les programmes de séquences impulsionnelles standard de Bruker® sont utilisées et les
paramètres optimisées pour réaliser les expériences bidimensionnelles : COSY 1H-1H, TOCSY
1H-1H, HSQC 1H-13C, HMBC 1H-13C, NOESY 1H-1H et ROESY 1H-1H.

195
VII.3.6. - DICHROISME CIRCULAIRE
Les dichroïsmes circulaires des composés ont été mesurés dans l’EtOH à l’aide d’un appareil
J-810 Jasco®, avec un système de contrôle de température PTC-423S. Les concentrations des
solutions préparées se situent entre 0,01 mg/ml - 0,1 mg/ml.

VIII. EXTRACTION, PURIFICATION ET HYDROLYSE

VIII.1. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Cleome chelidonii
VIII.1.1. – EXTRACTION (cf. Schéma n° 1 page 45).
Les parties aériennes séchées et broyées (1 kg) ont été extraites par macération dans 10L
d’éther de pétrole pendant 7 heures, puis lixiviation pendant 16 heures pour obtenir après
évaporation du solvant 29 g d’extrait 1 (rendement 2,9 %). Les marcs sont séchés et traités de
la même façon par 10L de CHCl3 pendant 30 heures pour donner 16 g d’extrait 2 (rendement
1,6 %). Le même protocole répété avec 10L d’AcOEt permet d’obtenir 5,4g d’extrait 3
(rendement 0,54 %), puis avec 10L de MeOH 79,6 g d’extrait 4 (rendement 7,96 %), et enfin
avec 10L de MeOH aqueux à 20% pour donner 80 g d’extrait 5 (rendement 8%).

VIII.1.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 3 (ACETATE D’ETHYLE) :

VIII.1.2.1. - VLC :
5,4 g d’extrait 3 à l’AcOEt sont fractionnés sur 160 g de silice en phase normale avec
l’éluant cyclohexane/AcOEt/MeOH (VLC de 9 cm de diamètre et 5 cm de hauteur). Des
fractions de 250 ml sont recueillies, analysées et réunies en fonction de leurs profils en
CCM :
Fractionnement par VLC de l’extrait 3 de C. chelidonii

Fractions Cyclohexane/AcOEt/MeOH Masse (mg) Composés isolés

100/0/0
1-3 95/5/0 31,5
85/15/0
4 80/20/0 461,7
5 70/30/0 405,8
6 60/40/0 376,4 CD-6 (5,5mg)
7 50/50/0 245,0
8 20/80/0 153,6
9 0/100/0 284,4
10 0/90/10 256,0 CD-1 (0,5mg), CM-6 (1,6mg)
11 0/80/20 300,0
CD-5 (3mg), CM-4 (1mg),
12 0/50/50 706,2
CM-5 (1,5mg), CM-9 (0,5mg)
CD-3 (2mg), CM-1 (1,8mg), CM-2
(0,6mg), CM-3(3,2mg), CM-7 (0,2mg),
13 0/0/100 1051,4
CM-8 (4,5mg), CF-15 (1mg), CF-16
(1mg)
14 0/0/100 552,7
Total 4824,7
Rendement 89,31%

196
VIII.1.2.2. - Purification des composés : (cf. Schéma n° 2 page 46)
- CD-6 :
 La fraction VLC 3.6 est purifiée par CC sur 23 g de silice normale avec l’éluant
CH2Cl2/MeOH :

Fraction VLC 3.6 (376,4 mg)

Fraction CH2Cl2 - Masse Fraction CH2Cl2 - Masse

Regroupement Regroupement
(25 ml) MeOH (mg) (25 ml) MeOH (mg)

1 1-2 100/0 3,6 26-27 99,5/0,5

11 2,1
2 3 100/0 1,2 28 99/1

3 4-5 100/0 1,1 12 29 99/1 1,5

4 6-7 100/0 6,3 13 30-31 99/1 2,0

5 8-9 100/0 53,0 14 32-34 99/1 2,1

6 10 100/0 35,0 15 35-37 99/1 19,2

7 11-12 100/0 62,5 16 38-46 99/1 22,4

8 13 100/0 45,8 47-49 99/1

9 14-16 100/0 41,0 17 50-66 98/2 35,0

17-23 100/0 67-79 95/5

10 17,5
24-25 99,5/0,5 18 80 95/5 1,3

19 81-84 0/100 9,6

Total 362,2

Rendement 96,22%

Le composé CD-6 (3.6.6.8 ; 5,5 mg) est finalement purifié du regroupement 3.6.6 par CC (6 g
de silice) avec l’éluant cyclohexane/CH2Cl2/MeOH = 50/50/0.

197
 - CD-1 et CM-6 :
 La fraction VLC 3.10 est purifiée par CC (15 g silice normale) avec le gradient
CHCl3/MeOH :
Fraction VLC 3.10 (256 mg)

Fraction CHCl3 Masse Fraction CHCl3 Masse

Regroupement Regroupement
(15ml) /MeOH (mg) (15ml) /MeOH (mg)

1 1-3 100/0 3,1 34-37 99,5/0,5

9 8,4
2 4-7 100/0 5,3 38 99/1

3 8-11 100/0 4,2 10 39-49 99/1 43,2

4 12-14 100/0 5,2 11 50-65 99/1 22,7

5 15-17 100/0 4,5 66-78 98/2

12 23,8
6 18-21 100/0 4,4 79-80 95/5

7 22-25 99,5/0,5 5,5 81-90 95/5

13 26,4
8 26-33 99,5/0,5 13,2 91-92 0/100

14 93-94 0/100 76,1

Total 362,2

Rendement 96,22%

o Regroupement 3.10.3 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 3 ;

ACN/H2O-TFA 0,025% (20/80 à 80/20) pendant 30 min ; 3 ml/min) fournit CD-
1 (3.10.3.8 ; 0,5 mg, tr = 17,66 min).
o Regroupement 3.10.10 purifié par CC (4g silice normale) avec l’éluant
CH2Cl2/Acétone/MeOH pour obtenir CM-6 (3.10.10.5 ; 1,6 mg) élué à
CH2Cl2/Acétone/MeOH = 95/5/0.

198
 - CD-5, CM-4, CM-5 et CM-9 :
La fraction VLC 3.12 est purifiée par CC en phase normale (42 g silice normale) avec le
gradient d’élution CHCl3/MeOH :
Fraction VLC 3.12 (706 mg)

Fraction Masse Fraction Masse

Regroupement CHCl3 /MeOH Regroupement CHCl3 /MeOH
(40ml) (mg) (40ml) (mg)

1 1-5 100/0 6,5 9 51-56 97/3 26,3

2 6-7 100/0 2,7 10 57-67 97/3 78,8

8-9 100/0 11 68-86 95/5 93,4

3 10-17 99,5/0,5 10,6 12 87-89 95/5 18,7

18-19 99/1 13 90-92 90/10 84,0

4 20-25 99/1 7,0 93-103 90/10

14 69,8
5 26-34 98/2 44,1 104 80/20

6 35-40 98/2 27,8 15 105-106 80/20 3,0

7 41-46 98/2 7,0 107-115 80/20

16 38,5
47-49 98/2 116 50/50
8 11,0
50 97/3 17 117-120 50/50 36,3

18 121-124 0/100 32,3

Total 246,0

Rendement 96,09%

o CD-5 (3.12.9.2 ; 3 mg) est récupéré par filtration du précipité formé dans le
regroupement 3.12.9.
o Les composés CM-9 (3.12.12.4 ; 0,5 mg, tr = 7,23 min) et CM-5 (3.12.12.5 ; 1,5
mg, tr = 7,80 min) sont obtenus du regroupement 3.12.12 par HPLC semi-
préparative (colonne 3 ; 20 à 80% ACN/H2O-TFA 0,025% pendant 30 min; 3
ml/min).
o La purification du regroupement 3.12.13 est réalisée par CC (5 g de silice
normale) pour donner une sous-fraction 3.12.13.9 (9 mg) éluée dans
CH2Cl2/Acétone/MeOH (50/50/0) ; celle-ci purifiée en HPLC semi-préparative
dans les conditions ci-dessus fournit CM-4 (3.12.13.9 ; 1 mg, tr = 10,27 min).

199
 - CD-3, CM-1, CM-2, CM-3, CM-7, CF-15 et CF-16 :

 La fraction VLC 3.13 est soumise à une CC (50 g de la silice normale) :

Fraction VLC 3.13 (1051 mg)

Fraction Masse Fraction Masse

Regroupement CHCl3/CH3OH Regroupement CHCl3/CH3OH
(50 ml) (mg) (50 ml) (mg)

1-2 100/0 17 45-46 90/10 52.7

1 1.5
3-5 97/3 18 47-49 90/10 38.1

2 6-8 97/3 13.3 19 50-52 90/10 38.0

3 9-10 97/3 7.4 20 53 90/10 9.0

4 11-15 97/3 11.4 21 54-55 90/10 24.0

5 16-17 97/3 3.1 22 56-62 90/10 60.8

6 18-20 97/3 4.9 23 63-66 90/10 15.3

7 21-24 95/5 4.0 67 90/10

24 17.1
8 25-26 95/5 4.9 68-69 80/20

9 27-30 95/5 14.7 25 70-72 80/20 74.5

10 31 95/5 1.1 73-80 80/20

26 111.3
11 32 95/5 3.1 81 70/30

12 33-36 95/5 10.2 27 82-85 70/30 41.8

13 37 95/5 0.9 86 70/30

28 53.0
14 38-40 90/10 6.7 87-89 50/50

15 41-43 90/10 34.8 90-91 50/50

29 151.3
16 44 90/10 28.8 92-96 0/100

Total 837,7

Rendement 79.71%

o Regroupement 3.13.19 purifié par CC (2 g silice greffée C-18) éluée par le

gradient MeOH/H2O (10/90 à 100/0) donne CM-3 (3.13.19.7 ; 4,5 mg).
o Regroupement 3.13.22 soumis à CCF (cartouche 4 g silice C-18) éluée avec
MeOH/H2O (3/97 à 100/0) en 50 minutes ; 18 ml/min ; les composés CM-3
(3.13.22.6 ; 3,2 mg) et CD-3 (3.13.22.7 ; 2 mg) sont élués dans MeOH/H2O
(20/80). La sous-fraction MeOH/H2O (20/80) (3.13.22.8) est purifiée par HPLC
semi-préparative (colonne 3 ; élution isocratique 15% ACN/ H2O-TFA 0,025% ;
3 ml/min) pour donner CM-2 (3.13.22.8.4 ; 0,6 mg, tr = 7,15 min). De même la
sous-fraction MeOH/H2O (20/80) (3.13.22.9) est purifiée par une HPLC semi-
préparative identique pour obtenir CM-7 (3.13.22.9.8 ; 0,2 mg, tr = 11,19 min).
o Regroupement 3.13.25 purifié par CC (3 g silice C-18) avec MeOH/H2O (20/80
à 100/0) fournit CM-1 (3.13.25.6 ; 1,8 mg) élué dans 30/70. La sous-fraction
éluée dans 50/50 est purifiée par HPLC semi-préparative identique pour
obtenir CF-15 (3.13.25.12.5 ; 1 mg, tr = 7,63 min) et CF-16 (3.13.25.12.6 ; 1 mg,
tr = 7,93 min).

200
VIII.1.3. – PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE) :

Figure n° 13 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de C. chelidonii

VIII.1.3.1. - VLC :
Le fractionnement de l’extrait 4 méthanolique (10 g) est réalisé par une VLC en phase inverse
avec l’éluant MeOH/H2O (10/90 à 100/0) sur 250 g de silice (9,5 cm de diamètre et 6,5 cm de
hauteur) pour donner 20 fractions :

201
Fractionnement par VLC de l’extrait 4 de C. chelidonii

Fractions (500 ml) Solvant : MeOH/H2O Masse (mg) Composés isolés

1 10/90 4708,4
2 20/80 1127,5
3 30/70 264,3
4 40/60 277,5 CD-2 (1,5 mg)
5 45/55 384,6
6 50/50 462,2 CF-1 (24 mg), CF-8(54 mg), CF-12 (4,4 mg)
CF-3 (6 mg), CF-4(4,6 mg), CF-9 (4,5 mg),
7 55/45 247,8
CF-13(2,0mg), CD-4 (2,8 mg)
8 60/40 340,1
CF-2 (7 mg), CF-5(12,3 mg), CF-6 (14,4 mg),
9 65/35 269,0 CF-10 (7,2 mg), CF-11 (8,1 mg), CF-14 (0,8
mg)
10 70/30 95,9 CF-7 (1 mg)
11 80/20 86,9
12 90/10 100,4
13 100/0 228,9
14 100/0 314,8
15 100/0 124,2
16 100/0 55,2
17 100/0 32,8
18 100/0 45,9
19 100/0 24,0
20 100/0 24,3
Total 9214,7
Rendement 91,94%

VIII.1.3.2. - Purification des composés : (cf. Schéma n° 3 page 47)

- CD-2 :
 La fraction VLC 4.4 est soumise à une CC (11 g de silice greffé C-18) :
Fraction VLC 4.4 = 277,5 mg

Fraction Masse Fraction Masse

Regroupement MeOH/H2O Regroupement MeOH/H2O
(5 ml) (mg) (5 ml) (mg)

1 1-4 10/90 1,7 47-49 15/85

11 19,7
2 5-6 10/90 9,2 50-54 20/80

3 7-11 10/90 12,1 12 55-70 20/80 39,5

4 12-16 10/90 5,1 13 71-80 25/75 24,6

5 17-19 10/90 2,5 14 81-84 25/75 8,6

6 20-23 15/85 4,1 15 85-98 30/70 29,0

7 24-28 15/85 6,6 99-112 40/60

16 33,1
8 29-35 15/85 10,5 113-116 100/0

9 36-44 15/85 20,9 17 117-120 100/0 13,0

10 45-46 15/85 4,5 18 121-125 100/0 4,6

Total 249,3

Rendement 89,84 %

202
Le regroupement 4.4.13 est purifié par une seconde CC (1,5 g de silice normale ; éluant
CHCl3/MeOH) pour donner CD-2 (4.4.13.9 ; 1,5 mg), élué dans 90/10.
- CF-1, CF-8 et CF-12 :
 La fraction VLC 4.6 est fractionnée par CCF (cartouche Reveleris® C18, 40 g ; ACN/H2O
15/85 à 100/0 en 60 min ; fraction de 25 ml ; 35 ml/min).
Le regroupement des fractions [4.6] éluées à 15 % ACN (235 mg) est de nouveau
fractionné par CCF (cartouche Reveleris® C18 40 g ; ACN/H2O (5/95 à 100/0) sur 60
min ; 40 ml/min) pour donner 17 regroupements :
Regroupement 4.6.2 = 234,8 mg

Fraction Masse Fraction

Regroupement ACN/H2O Regroupement ACN/H2O Masse (mg)
(25 ml) (mg) (25 ml)

1 2-25 5-13% ACN 8,0 9 59-64 16% ACN 8,2 (CF-12)

2 26-31 13-15% ACN 2,0 10 65-71 16% ACN 10,3

3 32-36 15-16% ACN 3,4 11 72-81 16% ACN 7,5

4 37-42 16% ACN 10,5 12 82-86 16% ACN 54,9 (CF-8)

5 43-46 16% ACN 24,0 (CF-1) 13 87-90 16-18% ACN 19,7

6 47-50 16% ACN 4,5 14 91-95 18-20% ACN 16,0

7 51-53 16% ACN 3,5 15 96-101 20-40% ACN 14,9

8 54-58 16% ACN 4,2 16 102-105 40-55% ACN 9,5

55-100%
17 106-120 2,2
ACN

Total 367,0

Rendement 79,40%

o Les regroupements 4.6.2.5 et 4.6.2.12 contiennent les composés CF-1

(4.6.2.5 ; 24 mg) et CF-8 (4.6.2.12 ; 54 mg)
o Le regroupement 4.6.2.9 est purifié par HPLC semi-préparative (colonne 3 ;
élution isocratique 18% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 3 ml/min) pour fournir CF-12
(4.6.2.9.3 ; 4,4 mg, tr = 14,07 min).

203
 - CF-3, CF-4, CF-9, CF-13 et CD-14 :

 La fraction VLC 4.7 est soumise à une CCF (cartouche Reveleris® C18 40 g) éluée par
ACN/H2O (10/90 à 100/0) en 45 minutes avec un débit de 40 ml/min :
Fraction VLC 4.7 = 247.8 mg

Fraction Masse Fraction Masse

Regroupement ACN/H2O Regroupement ACN/H2O
(25 ml) (mg) (25 ml) (mg)

1 2-25 10-18%ACN 13.0 9 109-113 20%ACN 16.6 (CF-9)

2 26-32 18-20%ACN 9.3 10 114-120 20%ACN 16.6 (CF-9)

20%ACN 20-21%ACN 11.8 (CF-

3 33-51 24.0 11 122-131
13)

20%ACN 13.0 (CF-3, 21-23%ACN

4 52-60 12 132-138 12.3
CF-4)

20%ACN 13.2 (CF-3, 23-42%ACN

5 62-73 13 139-141 9.1 (CD-4)
CF-4)

6 74-90 20%ACN 20.9 14 142 42%ACN 9.4 (CD-4)

7 91-99 20%ACN 17.2 15 143 42%ACN 9.1 (CD-4)

8 100-108 20%ACN 32.9 16 144-146 42-60%ACN 3.8

17 147-162 60-100%ACN 3.6

Total 219.2

Rendement 88.46 %

204
Les regroupements 4.7.4, 4.7.5, 4.7.9 à 4.7.15 sont purifiés par HPLC semi-préparative pour
donner les composés CF-3, CF-4, CF-9, CF-13 et CD-4 :

Composé Regroupement Méthode Eluant Colonne Débit UV

d’origine ml/min nm
Code, tr purification

CF-3 (4.7.4.1; 6mg) 4.7.4 et 4.7.5 HPLC semi- 20% ACN/H2O- 3 3 254
préparative TFA 0,025%
tr = 17,72 min

CF-4 (4.7.4.2 ; 4.7.4 et 4.7.5 HPLC semi- 20% ACN/H2O- 3 3 254

4,6mg) préparative TFA 0,025%
tr = 21,30 min
CF-9 (4.7.53.2 ; 2 4.7.9 2 x HPLC semi- 23% ACN/H2O- 3 3 254
mg) préparative TFA 0,025%
tr = 11,19 min Puis
50-53%
MeOH/H2O-
TFA 0,025%
CF-9 (4.7.53.2 ; 4.7.10 2 x HPLC semi- 25% ACN/H2O- 3 3 254
2,5mg) préparative TFA 0,025%
tr = 11,19 min Puis
50-53%
MeOH/H2O-
TFA 0,025%
CF-13 (4.7.11.3 ; 4.7.11 HPLC semi- 25-35% 3 3 254
2mg) préparative ACN/H2O-TFA
tr = 11,19 min 0,025%
CD-4 (4.7.13.7 ; 4.7.13, 4.7.14 HPLC semi- 35% ACN/H2O- 3 3 254
2,8mg) et 4.7.15 préparative TFA 0,025%
tr = 24,89 min

205
 - CF-2, CF-5, CF-6, CF-10, CF-11 et CF-14 :
La fraction VLC 4.9 est chromatographiée par HPLC préparative (187 g silice greffé C-18 ; 5 cm
de diamètre et 20 cm de longueur) avec un gradient ACN/H2O (15/85 à 100/0) en 80 min, un
débit de 43 ml/min, et une détection UV à 210 nm pour donner 18 regroupements dont deux
composés purs CF-2 (4.9.7 ; 7 mg), et CF-5 (4.9.10 ; 12,3 mg):
Fraction VLC 4.9 = 269 mg

Fractions ACN/H2 Masse Fractions ACN/H2

Regroupement Regroupement Masse (mg)
(50 ml) O (mg) (50 ml) O

15% 50%
1 1-30 6,0 10 64 12,3 (CF-5)
ACN ACN

15-25% 50%
2 30-38 4,0 11 65 23,5
ACN ACN

25-27% 50%
3 39-40 2,3 12 66 15,5
ACN ACN

27-38% 50%
4 41-50 3,3 13 67 30,1
ACN ACN

38-45% 50%
5 51-56 6,3 14 68 43,7 (CF-6)
ACN ACN

45-50% 50%
6 57-60 10,4 15 69 24,5
ACN ACN

50% 50%
7 61 7,0 (CF-2) 16 70-71 21,3 (CF-11)
ACN ACN

50% 50-80%
8 62 14,7 17 72-76 9,0
ACN ACN

50% 80-
9 63 ACN 19,0 18 77-80 100% 4,0
ACN

Total 256,9

Rendement 95,50 %

o Regroupement 4.9.9 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 3 ; élution

isocratique 25% ACN/H2O.TFA 0,025% ; 3 ml/min ; 254 nm) pour donner CF-14
(4.9.9.3 ; 0,8 mg, tr = 14,79 min) et CF-10 (4.9.9.5 ; 7,2 mg, tr = 19,01 min).
o Regroupement 4.9.14 soumis à une HPLC semi-préparative dans des conditions
similaires pour donner CF-6 (4.9.14.4 ; 14,4 mg, tr = 17,67 min).
o De même, HPLC semi-préparative (colonne 3 ; élution isocratique 30%
ACN/H2O-TFA 0,025%; 3 ml/min ; 254 nm) effectuée sur le regroupement
4.9.16 pour obtenir CF-11 (4.9.16.4 ; 8,1 mg, tr = 22,28 min).

206
 - CF-7 :
 La fraction VLC 4.10 est purifiée par HPLC préparative (187 g de silice LiChrospher RP-
18 (12µm) Merck®, 5 cm de diamètre et 20 cm de hauteur ; ACN/H2O (25/75 à 100/0)
sur 50 minutes ; 30 ml/min ; 210 nm) pour donner 14 regroupements :
Fraction VLC 4.10 = 96 mg

Fractions Masse Fractions Masse

Regroupement ACN/H2O Regroupement ACN/H2O
(50 ml) (mg) (50 ml) (mg)

1 1-9 25-50% ACN 0,8 8 21 66-68% ACN 8,1

2 10-11 50-53% ACN 4,7 9 22 68-70% ACN 4,8

3 12-13 53-56% ACN 2,0 10 23 72-74% ACN 2,0

4 14-17 56-60% ACN 7,4 11 24 74-76% ACN 1,5

5 18 60-62% ACN 11,8 12 25-26 76-80% ACN 2,5

6 19 62-64% ACN 14,0 13 27-30 80-100% ACN 2,5

7 20 64-66% ACN 10,4 14 31-40 100% ACN 5,9

Total 78,4

Rendement 81,67%

La purification du regroupement 4.10.9 est réalisé par HPLC semi-préparative (colonne 3 ;

élution isocratique 35% ACN/H2O.TFA 0,025% ; 3 ml/min ; 254 nm) pour fournir CF-7
(4.10.9.7 ; 1mg, tr = 16,74 min).

207
VIII.2. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Dolichandrone
spathacea
VIII.2.1. - EXTRACTION
Les feuilles séchées et broyées (150 g) sont extraites à l’éther de pétrole (1,5L) par macération
pendant 3 heures, puis lixiviation pendant 4 heures et évaporation du solvant pour obtenir
0,985 g d’extrait 1 à l’éther de pétrole (rendement 0,66%). Les marcs séchés subissent le
même protocole avec 1,5L de CHCl3 : macération de 17 heures, lixiviation de 3 heures pour
donner 5,018 g d’extrait 2 chloroformique (rendement 3,35%). Le même protocole avec 1,5L
d’AcOEt fournit 2,14 g d’extrait 3 à l’acétate d’éthyle (rendement 1,43%), avec 1,5L de MeOH
23 g d’extrait 4 méthanolique (rendement 15,33%), et enfin avec 1,5L de avec du MeOH
aqueux à 20% 17,83 g d’extrait 5 hydrométhanolique (rendement 11,89%) (cf. Schéma n° 4
page 89).

VIII.2.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE)

Figure n° 14 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de D. spathacea

208
VIII.2.2.1 - VLC :
20 g d’extrait 4 méthanolique (en 2 fois) sont fractionnés par une VLC en phase normale (250
g de silice; 9,5 cm de diamètre et 7 cm de hauteur) éluée par un gradient CHCl 3/MeOH/H2O.
Des fractions de 500 ml sont collectées, analysées par CCM et réunies en fonction de leurs
profils chromatographiques pour obtenir 20 fractions :

Fractionnement VLC de l’extrait 4 méthanolique de D. spathacea

Extrait 4 méthanolique
Composés isolés
(20 g en 2 fois 10 g)
Solvant (500 ml)
Fraction Masse (g)
CHCl3 /MeOH/H2O
1 100/0/0 0,0730
2 98/2/0 0,0283
3 95/5/0 0,2391
4 90/10/0 0,4880 DSC-17(488mg)
DSC-11(3,6mg), DSC-12(5mg),
5 85/15/0 0,6223
DSC-13(4,6mg)
DSC-4(4,5mg), DSC-14(3mg),
DSC-15(1mg), DSC-16(22mg),
6 80/20/0 2,3273
DSC-18 (2,3mg), DSI-3(230mg),
DSI-4(2mg), DSI-8(50mg)
DSC-9(7,3mg), DSC-19(6mg),
DSI-1(214mg), DSI-6(5mg),
7 75/25/0 2,5612 DSI-7(23mg), DSI-10(4mg),
DSI-13(7,5mg), DSI-14(10mg),
DSI-15(7,5mg), DSI-16(4mg)
DSC-1(8mg), DSC-2(190mg),
DSC-3(14mg), DSC-5(7,5mg),
8 70/30/0 2,2392 DSC-8(6mg), DSC-10(7,5mg),
DSI-2(9mg), DSI-5(7mg),
DSI-9(7mg), DSI-12(9,5mg)
9 70/30/1 2,7255
10 70/30/2 1,9680
11 70/30/3 1,0854
12 70/30/4 0,7926
13 70/30/5 0,6170 DSC-7(6mg)
14 60/40/5 0,7809
15 50/50/5 1,2412
16 40/60/5 0,9386
17 30/70/5 0,5640 DSC-6(4,5mg), DSI-11(6mg)
18 20/80/5 0,2259
19 10/90/5 0,1010
20 0/100/5 0,0873
Total 19,7058
Rendement 98,36%

209
VIII.2.2.2 - Purification des composés :
- DSC-17, DSC-11, DSC-12, DSC-13 :
La fraction VLC 4.4 contient un seul composé : DSC-17 (488 mg)

 La fraction VLC 4.5 est soumise à une CCF (cartouche Reveleris® C18 40 g) avec un
gradient MeOH/H2O (10/90 à 100/0) sur 65 min, et un débit de 40 ml/min :
Fraction 4.5 = 622mg

Fractions ACN/H2O Masse Fractions ACN/H2O Masse

Regroupement Regroupement
(25 ml) (mg) (25 ml) (mg)

1 2-12 10% ACN 21,6 10 70-78 45% ACN 26,6

2 13-20 10-20% ACN 8,0 11 79-90 45% ACN 40,3

3 21-23 20% ACN 7,0 12 91-99 45-50% ACN 31,7

4 24-34 20-28% ACN 15,0 13 100-110 50% ACN 51,6

5 35-37 28-30% ACN 5,7 14 111-128 50-100% ACN 181,0

6 38-40 30% ACN 5,7 15 129-131 100% ACN 52,5

7 41-48 30% ACN 10,8 16 132 100% ACN 18,2

8 49-58 30-40% ACN 17,2 17 133-135 100% ACN 30,8

9 59-69 40-45% ACN 53,0 18 136-139 100% ACN 12,8

Total 589,6

94.79
Rendement
%

o Regroupement 4.5.9 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 4 ; élution

isocratique 25% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 6 ml/min ; 254 nm) pour donner les
composés DSC-11 (4.5.9.2 ; 6,2 mg, tr = 10,66 min) et DSC-12 (4.5.9.3 ; 3,6 mg,
tr = 11,21 min).
o Regroupement 4.5.11 soumis à une HPLC semi-préparative (colonne 4 ; élution
isocratique 28% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 6 ml/min) fournit DSC-13 (4.5.11.1 ; 5,8
mg, tr = 14,62 min).

210
 - DSC-4, DSC-14, DSC-15, DSC-16, DSC-18, DSI-4 et DSI-8 :

 La fraction VLC 4.6 est fractionnée par une CCF (cartouche Reveleris® 40 g silice
normale) par un gradient CHCl3/MeOH (100/0 à 0/100) en 42 min et un débit de 40
ml/min, pour donner 19 regroupements :
Fraction VLC 4.6 = 2327 mg

Regroupe Fractions CHCl3/MeOH Masse Regroupe Fractions CHCl3/MeOH Masse

ment (25ml) (mg) ment (25ml) (mg)

1 2-8 0-5% MeOH 6,4 10 36-38 10% MeOH 303,0

5-6% MeOH 10% MeOH 241,1

2 9-14 6,1 11 39-41
(DSI-3)

6-7% MeOH 30,9 (DSC-15 10% MeOH

3 15-18 12 42-46 311,9
et DSC-18)

4 19-22 7% MeOH 22,1 (DSC-16) 13 47-48 10-11% MeOH 75,5

5 23-25 7-8% MeOH 27,6 (DSC-14) 14 49-51 11-12% MeOH 52,1

6 26-28 8-10% MeOH 68,5 15 52-60 12-15% MeOH 57,6

7 29 10% MeOH 223,1 16 62-72 15-20% MeOH 18,0

8 30-31 10% MeOH 251,4 17 73-77 20-22% MeOH 12,4

9 32-35 10% MeOH 503,6 18 78-86 22-30% MeOH 22,0

30-100%
19 87-106 26,8
MeOH

Total 2260,1

97,11
Rendement
%

o Le regroupement 4.6.4 contient le composé pur DSC-16 (22 mg) et le

regroupement 4.6.11 contient le composé DSI-3 (241 mg).
o Regroupement 4.6.3 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 3 ; élution
isocratique 23% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 3 ml/min ; 205 nm) pour donner les
composés DSC-15 (4.6.3.1 ; 1 mg, tr = 7,13 min) et DSC-18 (4.6.3.4 ; 2,3 mg, tr =
12,39 min).
o HPLC semi-préparative (colonne 4 ; 20-45% ACN/H2O-TFA 0,025% sur 20 min ;
6ml/min ; 254 nm) réalisée sur le regroupement 4.6.5 pour obtenir les
composés DSC-14 (4.6.5.1 ; 3 mg, tr = 8,69 min) et DSC-4 = 4.6.5.3 (4,5 mg, tr =
16,18 min).
o Regroupements 4.6.7 et 4.6.8 réunis puis fractionnés par une CCF (cartouche
Reveleris® C18 40 g ; MeOH/H2O 10/90 à 100/0 en 55 min ; 40 ml/min ;
détection DEDL et UV à 310 et 254nm) :

211
 4.6.7 et 4.6.8 = 474 mg

Fractions MeOH/H2O Masse Regroupem Fractions MeOH/H2O

Regroupement Masse (mg)
(25ml) (mg) ent (25ml)

1 2-15 10-15% MeOH 15,8 9 62-63 60% MeOH 11,1

2 16-35 15-30% MeOH 10,2 10 64 60% MeOH 14,6

3 36-40 30-35% MeOH 5,0 11 65 60% MeOH 20,6

35-36% MeOH 165,6 (DSI-4

4 41-43 3,2 12 66-69 60% MeOH et DSI-8)

5 44-47 36-38% MeOH 6,2 13 70-71 60% MeOH 19,0

6 48-56 38-60% MeOH 21,2 14 72-78 60-80% MeOH 20,0

7 57-58 60% MeOH 23,5 15 79-84 80-100% MeOH 31,5

8 59-60 60% MeOH 29,1 16 85-90 100% MeOH 11,6

17 91-101 100% MeOH 16,6

Total 424,8

Rendement 89,53%

o Sous-fraction 4.6.7.12 purifiée par CC (10 g de la silice normale ; gradient

CHCl3/MeOH ; fractions de 5 ml). La fraction 4.6.7.12.5 éluée dans CHCl3/MeOH
(95/5) contient DSI-8 (50 mg) ; le composé DSI-4 (4.6.7.12.7.3 ; 2 mg, tr = 25,46
min) est obtenu de la purification par HPLC semi-préparative (colonne 3 ;
élution isocratique 28% ACN/H2O ; 4 ml/min ; 270 nm) de la fraction 4.6.7.12.7.

212
 - DSC-9, DSC-19, DSI-1, DSI-6, DSI-10, DSI-13 DSI-14, DSI-15, DSI-16 et DSI-17 :

 La fraction VLC 4.7 (1 g x 2 fois) est fractionnée par une HPLC préparative (187 g de
silice greffé C-18 LiChrospher RP-18 (12µm) Merck, 5 cm de diamètre et 20 cm de
hauteur) avec un gradient d’éluant MeOH/H2O (25/75 à 100/0) sur 75 min, un débit de
80 ml/min, et une détection UV = 310 nm pour donner 25 regroupements :
Fraction 4.7 (2,1438 g)

Regroupe Fractions Masse Regroupe Fraction

MeOH/H2O MeOH/H2O Masse (mg)
ment (60 ml) (mg) ment (60 ml)

1 1-4 25-29% MeOH 11,6 13 35-40 48-55% MeOH 40,5

2 5-7 29-35% MeOH 96,6 14 41-44 55-62% MeOH 34,4

62,7 (DSI-14
3 8-9 35% MeOH 15 45-46 62-65% MeOH
25,8 et DSI-15)

4 10 35% MeOH 28,5 16 47-48 65% MeOH 40,2

32,6 (DSC-
5 11 35% MeOH 17 49-50 65% MeOH
19) 51,8 (DSI-1)

6 12 35% MeOH 101,8 18 51-53 65% MeOH 189,6

7 13 35% MeOH 134,3 19 54-58 65% MeOH 32,7

65-100%
8 14 35% MeOH 20 59-65
356,3 MeOH 26,4

27,8
9 15 35% MeOH 90,1 (DSI-6 21 66-67 100% MeOH
et DSI-10) (DSC-9)

232,7 (DSI-
10 16 35% MeOH 13 et DSI- 22 68-69 100% MeOH
16) 34,5

11 17-24 35% MeOH 63,5 23 70-72 100% MeOH 50,1

107,3 (DSI-
12 25-34 35-48% MeOH 24 73 100% MeOH
17) 28,4

25 74-80 100% MeOH 53,1

Total 1953,3

Rendement 91,11%

213
Composé Regroupement Méthode Eluant Colonne ou Débit UV
Code, tr d’origine purification CCM ml/min nm

DSC-19 (4.7.5.2.2 ; 4.7.5 2 x HPLC 28% ACN/H2O- 5 4 254

6mg) semi- TFA 0,025%
tr = 46,98min préparative puis
17%
MeOH/H2O
DSI-6 (4.7.9.4 ; 5mg) 4.7.9 HPLC semi- 23% ACN/H2O 5 4 340
tr = 14,49min préparative
DSI-10 (4.7.9.6 ; 4mg) 4.7.9 HPLC semi- 23% ACN/H2O 5 4 340
tr = 16,15min préparative
DSI-16 (4.7.10.2 ; 4mg) 4.7.10 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 4 230
tr = 14,70min préparative
DSI-13 (4.7.10.6 ; 4.7.10 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 4 230
7,5mg) préparative
tr = 19,02min
DSI-17 (4.7.12.4 ; 4.7.12 HPLC semi- 20% ACN/H2O 3 4 270
23mg) préparative
tr = 25,19min
DSI-15 (4.7.15.6 ; 4.7.15 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 3,5 205
7,5mg) préparative
tr = 22,54min
DSI-14 (4.7.15.8 ; 4.7.15 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 3,5 205
10mg) préparative
tr = 25,91min
DSI-1 (4.7.17.7 ; 4.7.17 HPLC semi- 30% ACN/H2O 5 4 280
14,2mg) préparative
tr = 20,72min)
DSC-9 (4.7.21.1; 4.7.21 CCM MeOH/H2O Silicagel 60
7,3mg) préparative (70/30) RP-18 F254S
Rf = 0,28 Merck, 20 x
20 cm

214
 - DSC-1, DSC-3, DSC-5, DSC-8, DSC-10, DSI-2, DSI-5, DSI-9, DSI-12 :

 La fraction VLC 4.8 (1g x 2fois) est fractionnée par une HPLC préparative sur 187 g de
la silice greffé C-18 (Colonne: LiChrospher RP-18 (12µm) Merck, 5 cm de diamètre et
20 cm de hauteur) dans l’éluant MeOH/H2O (25/75 à 100/0) pendant 100 min avec le
débit de 80 ml/min et le détecteur de UV = 310 nm) pour donner 24 regroupements
dont 4.8.11 est un composé pur DSC-2 (397 mg) :

Purification de la fraction VLC 4.8

Fraction 4.8 1,0930g 1,0150g 2,1438g
Fractions
Regroupement MeOH/H2O Masse (mg) Masse (mg) Masse (mg)
(60 ml)
1 1-8 25-29% MeOH 85,0 76,8 161,8
2 9 29-35% MeOH 19,0 31,2 50,2
3 10 35% MeOH 6,6 17,1 23,7
4 11-12 35% MeOH 24,7 13,4 38,1
5 13-17 35% MeOH 30,0 20,6 50,6
6 18 35% MeOH 4,9 5,3 10,2
7 19-20 35% MeOH 16,4 14,0 30,4
8 21-30 35% MeOH 47,4 43,3 90,7
9 31 35% MeOH 22,0 15,7 37,7
10 32-35 35% MeOH 33,8 18,5 52,3
11 36-40 35% MeOH 206,0 191,5 397,5
12 41-47 35-48% MeOH 36,2 33,3 69,5
13 48-51 48-55% MeOH 34,8 20,0 54,8
14 52-56 55-62% MeOH 39,8 85,0 124,8
15 57 62-65% MeOH 8,3 4,0 12,3
16 58-60 65% MeOH 40,7 61,4 102,1
17 61-62 65% MeOH 18,1 12,0 30,1
18 63-64 65% MeOH 20,7 12,5 33,2
19 65-68 65% MeOH 51,2 26,7 77,9
20 69 65-100% MeOH 22,3 16,6 38,9
21 70-71 100% MeOH 37,4 56,6 94,0
22 72-78 100% MeOH 73,2 38,8 112
23 79-80 100% MeOH 20,7 66,5 87,2
24 81-100 100% MeOH 115,1 72,2 187,3
Somme 1014,3 953,0 1967,3
Rendement 92,80% 93,89% 93,32%

215
 Composé (Code, tr) Fraction Méthode Eluant Colonne ou CCM Débit UV
d’origine purification ml/min nm

DSC-1 (4.8.4.4 ; 8mg) 4.8.4 HPLC semi- 10% ACN/H2O 5 4 230

tr = 8,61min préparative
DSI-5 (4.8.12.3 ; 7mg) 4.8.12 HPLC semi- 20% ACN/H2O 3 4 205
tr = 11,33min préparative
DSC-3 (4.8.14.3 ; 14mg) 4.8.14 HPLC semi- 19% ACN/H2O 5 3,5 205
tr = 18,41min préparative
DSC-5 (4.8.15.2 ; 7,5mg) 4.8.15 HPLC semi- 18% ACN/H2O 5 4 254
tr = 15,81min préparative
DSI-9 (4.8.16.3 ; 7mg) 4.8.16 HPLC semi- 18% ACN/H2O 3 4 205
tr = 24,00min préparative
DSI-2 (4.8.18.3 ; 9mg) 4.8.18 HPLC semi- 23% ACN/H2O 3 4 205
tr = 12,87min préparative
DSC-8 (4.8.21.4 ; 6mg) 4.8.21 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 4 205
tr = 13,13min préparative
DSI-12 (4.8.21.7 ; 9,5mg) 4.8.21 HPLC semi- 25% ACN/H2O 5 4 205
tr = 17,16min préparative
DSC-10 (4.8.23.1 ; 7,5mg) 4.8.23 CCM CHCl3/MeOH/ DURASIL-25 UV254
Rf = 0,33 préparative H2O (80/20/2) Macherey-Nagel
(20 x 20 cm)

- DSC-7 :

 La fraction VLC 4.13 est fractionnée par une CCF (cartouche Reveleris® C18 40 g) avec
un gradient d’élution MeOH/H2O (10/90 à 100/0) sur 55 min avec un débit de 40
ml/min, par détection au DEDL et UV à 310 et 254 nm. Après analyse du profil des
fractions, 17 regroupements sont obtenus :

Purification de la fraction VLC 4.13

Fraction VLC 4.13 = 617 mg

Fractions MeOH/H2O Masse Fractions MeOH/H2O Masse

Regroupement Regroupement
(25ml) (mg) (25ml) (mg)

1 2-4 10% MeOH 245,4 9 60-65 44% MeOH 18,4

2 5 10% MeOH 55,7 10 66-75 44-50% MeOH 18,1

3 6-12 10% MeOH 22,1 11 76-79 50% MeOH 15,5

10-20% 50% MeOH

4 13-30 27,0 12 80-90 11,3
MeOH

20-30% 50-76% MeOH

5 31-40 18,5 13 91-95 15,3
MeOH

30-44% 76% MeOH

6 41-51 22,3 14 96-97 13,4
MeOH

7 52-55 44% MeOH 24,0 15 98-104 76-100% MeOH 21,3

8 56-59 44% MeOH 14,8 16 105-112 100% MeOH 25,3

17 113-124 100% MeOH 22,4

Total 590,8

Rendement 95,75 %

216
 Regroupement 4.13.9 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 3 ; élution
isocratique 18% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 3,5ml/min ; 310 nm) pour donner DSC-7
(4.13.9.1 ; 6 mg, tr = 14,85 min)

- DSC-6, DSI-11 :
 Une HPLC semi-préparative effectuée sur 89 mg de la fraction VLC 4.17 avec la colonne
3, un gradient d’élution 10-35% ACN/H2O-TFA 0,025% pendant 20 min, un débit de 4
ml/min et une détection UV à 240 nm, permet d’obtenir les deux composés: DSI-11
(4.17.2 ; 6 mg, tr = 5,79 min) et DSC-6 (4.17.3 ; 4,5 mg, tr = 15,89 min).

217
VIII.3. - EXTRACTION ET PURIFICATION DES COMPOSES DE Flacourtia rukam
VIII.3.1. - EXTRACTION
Les feuilles séchées et broyées (500 g) ont été extraites selon le même protocole de
percolation que celui utilisé pour les parties aériennes de C. chelidonii en commençant avec
5L l’éther de pétrole (macération = 15 heures, lixiviation = 9 heures) pour obtenir 0,526 g
d’extrait 1 à l’éther de pétrole (rendement 0,11%). Les marcs séchés sont traités par 5L de
CHCl3 (macération 49 heures, lixiviation 10 heures) pour donner 5,708 g d’extrait 2
chloroformique (rendement 1,15%). Puis avec 5L d’AcOEt pour obtenir 2,516 g d’extrait 3 à
l’acétate d’éthyle (rendement 0,50%), puis avec 5L de MeOH pour fournir 27,233 g d’extrait 4
méthanolique (rendement 5,45%), et enfin avec 5L de MeOH – H2O = 80 – 20 pour donner
13,46 g d’extrait 5 hydrométhanolique (rendement 2,69%) (cf. Schéma 6 page 133).
VIII.3.2. - PURIFICATION DE L’EXTRAIT 4 (METHANOLIQUE) :

Figure n° 15 : Chromatogramme HPLC de l’extrait 4 méthanolique de F. rukam

218
VIII.3.2.1 - VLC :
L’extrait 4 méthanolique (10 g x 2 fois) est fractionné par une VLC en phase normale sur 250 g
de silice (9,5 cm de diamètre et 7 cm de hauteur) avec le gradient d’élution CHCl3/MeOH/H2O
(100/0/0 à 0/0/100). Des fractions de 500 ml sont collectées, analysées et réunies en fonction
de leurs profils chromatographiques en CCM pour obtenir 20 fractions :
Fractionnement par VLC de l’extrait 4 méthanolique de F. rukam
Extrait 4 MeOH (21,377 g)

Solvant (500 ml) Solvant (500 ml)

Fraction Masse (mg) Fraction Masse (mg)
CHCl3/MeOH/H2O CHCl3/MeOH/H2O

4.1 100/0/0 66,3 4.11 70/30/3 1003,0

4.2 98/2/0 42,2 4.12 70/30/4 1712,0

4.3 95/5/0 51,1 4.13 70/30/5 1049,8

4.4 90/10/0 434,8 4.14 60/40/5 1187,6

4.5 85/15/0 550,0 4.15 40/60/5 1816,3

4.6 80/20/0 1573,9 4.16 20/80/5 1950,3

4.7 75/25/0 1685,9 4.17 0/100/5 856,4

4.8 70/30/0 1372,9 4.18 0/90/10 298,1

4.9 70/30/1 2124,1 4.19 0/80/20 360,3

4.10 70/30/2 2241,7 4.20 0/70/3 481,6

Total 20858,3

Rendement 97,57%

219
VIII.3.2.2 - Purification des composés des fractions VLC 4.9 et 4.15 :
VIII.3.2.2.1. - FRD-2, FRD-3 et FRD-10:

La fraction VLC 4.9 est chromatographiée par une CCF en phase inverse (cartouche Reveleris®
C18, 80 g) avec le gradient d’élution ACN/H2O (5/95 à 100/0) sur 55 min, avec un débit de 30
ml/min, et sous détection couplée en DEDL et UV à 205 et 254 nm, pour obtenir 15
regroupements :

Fractionnement par CCF de la fraction VLC 4.9

Fraction VLC 4.9 = 2124,1 mg
Fractions ACN/H2O
Regroupement Masse (mg)
(25ml)
1 2-5 5% ACN 39,0
2 6-8 5% ACN 1489,6
3 9-18 5-11% ACN 74,4
4 19-22 11% ACN 57,7
5 23-38 11-17% ACN
97,1 (FRD-2, FRD-3, FRD-10)
6 39-45 17-20% ACN 18,7
7 46-59 20-25% ACN 14,0
8 60-74 25-29% ACN 45,0
9 75-82 29-50% ACN 36,8
10 83-86 50-75% ACN 10,3
11 87-91 75% ACN 76,8
12 92-94 75-100% ACN 9,3
13 95-103 100% ACN 8,6
14 104-113 100% ACN 8,0
15 113-135 100% ACN 29,6
Total 2014,9
Rendement 94,86%

Purification du regroupement 4.9.5 par HPLC semi-préparative (colonne 5 ; élution isocratique

20% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 4 ml/min ; 254 nm) pour donner trois composés: FRD-2 (4.9.5.2 ;
7 mg, tr = 12,13 min), FRD-3 (4.9.5.3 ; 15 mg, tr = 12,76 min), et FRD-10 (4.9.5.5 ; 22 mg, tr =
16,50 min).

220
VIII.3.2.2.2. - FRD-4, FRD-6, FRD-7 et FRD-8 :

De même, la fraction VLC 4.15 est également fractionnée par une CCF en phase inverse
(cartouche Reveleris® C18, 40 g) avec le gradient d’élution ACN/H2O (10/90 à 100/0) sur 50
min :

Fractionnement par CCF de la fraction VLC 4.15

Fraction VLC 4.15 = 1816,3 mg
Regroupement Fractions ACN/H2O Masse (mg)
1 2-5 10% ACN 457,6
2 6 10% ACN 197,0
3 7 10% ACN 88,8 (FRD-4, FRD-6, FRD-7, FRD-8)
4 8-9 10% ACN 120,0
5 10-26 10% ACN 52,3
6 27-41 10% ACN 35,9
7 42-47 10-16% ACN 54,9
8 48-49 16% ACN 10,9
9 50-56 16-24% ACN 15,8
10 57-64 24-26% ACN 91,0
11 65-70 26% ACN 122,8
12 71-82 26-44% ACN 95,5
13 83-88 44% ACN 166,3
14 89-99 44-100% ACN 61,6
15 100-108 100% ACN 6,0
16 109-120 100% ACN 30,6
Total 1607,0
Rendement 88,48 %

Regroupement 4.15.3 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 5 ; élution isocratique 13%
ACN/H2O-TFA 0,025% sur 15 min puis à 25% sur 10 min ; 4 ml/min ; 254 nm) pour donner
quatre composés purs: FRD-6 (4.15.3.1 ; 7 mg, tr = 5,99 min), FRD-7 (4.15.3.2 ; 18 mg, tr = 9,48
min), FRD-8 (4.15.3.3 ; 10 mg, tr = 11,76 min), et FRD-4 (4.15.3.5 ; 5 mg, tr = 22,01 min).

VIII.3.2.3. – Purification des composés des fractions VLC 4.6 et 4.7 :

Les deux fractions VLC 4.6 et 4.7 présentent le même profil chromatographique complexe
avec plus d’une vingtaine de pics correspondants à des composés de polarité diverse. Ces deux
fractions sont réunies et fractionnées en 2 fois par une CCF en phase inverse sur la silice
greffée C18 (cartouche Reveleris® C18, 80g) avec un gradient d’élution ACN/H2O (10/90 à
100/0) sur 65 min, un débit de 40 ml/min, et une détection couplée par DEDL et UV à 205 et
254 nm. Des fractions de 25 ml sont collectées, analysées par CCM et réunies en fonction de
leurs profils chromatographiques pour obtenir 28 regroupements :

221
 Fraction VLC 4.6 + 4.7 (3183,8 mg)

Regroupem Fractions ACN/H2O Masse (mg) Fractions ACN/H2O Masse

Regroupement (mg)
ent (25 ml) (25 ml)

1 2-6 10% ACN 113,7 15 68-70 24% ACN 46,8

2 7 10% ACN 121,2 16 71-72 24% ACN 117,5

3 8-12 10% ACN 69,3 17 73-75 24% ACN 148,1

10-13% ACN 24-25%

4 13-18 18 76-78
59,3 ACN 60,0

13-15% ACN 25-27%

5 19-22 19 79-82
37,6 ACN 67,3

15% ACN 27-33%

6 23-25 20 83-85
50,2 (FRD-11) ACN 44,4

15-16% ACN 33-65%

7 26-31 21 86-93
72,3 ACN 161,4

16% ACN 65-70%

8 32-36 22 94-96
76,6 ACN 243,9

16-17% ACN 70-80%

9 37-39 23 97-98
76,1 (FRD-12) ACN 205,9

17-20% ACN 80-85%

10 40-44 24 99-100
77,9 (FRD-12) ACN 316,8

20-22% ACN 85-87%

11 45-50 25 101
72,0 ACN 171,2

22-24% ACN 87-100%

12 51-57 26 102-104
45,0 ACN 90,3

13 58-63 24% ACN 147,9 27 105-120 100% ACN 54,7

14 64-67 24% ACN 97,8 28 121-135 100% ACN 122,8

Total 2968

Rendement 93,21%

- FRD-11 et FRD-12 :

 Le regroupement 4.7.6 purifié par HPLC semi-préparative (colonne 5 ; élution

isocratique 10% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 4 ml/min ; 240 nm) conduit à FRD-11
(4.7.6.4 ; 11 mg, tr = 15,81 min).
 La réunion des regroupements 4.7.9 et 4.7.10 chromatographié par CCF
(cartouche Reveleris® 12 g ; CHCl3/MeOH 100/0 à 0/100 en 35 min ; 30 ml/min ;
DEDL et UV = 205 et 254 nm) conduit à 12 sous-fractions La sous-fraction
4.7.9.11 (20,6 mg) éluée par CHCl3/MeOH (de 15 à 60% MeOH) est purifiée par
une HPLC semi-préparative (colonne 5; élution isocratique 15% ACN/H2O-TFA
0,025% ; 4 ml/min ; 210 nm) pour obtenir FRD-12 (4.7.9.11.2 ; 4,1 mg, tr = 15,96
min).

222
 - FRP-6, FRP-9, FRP-10, FRP-13, FRD-13:
Composé (Code, tr) Regroupe Méthode Eluant Colonne Débit UV
ment purification ml/min nm
d’origine

FRP-9 (4.7.13.3 ; 20mg) 4.7.13 HPLC semi- 20% ACN/H2O.TFA 5 4 265

tr = 13,52min préparative 0,025%

FRP-13 (4.7.13.4 ; 11mg) 4.7.13 HPLC semi- 20% ACN/H2O.TFA 5 4 265

tr = 14,83min préparative 0,025%
FRD-13 (4.7.14.4 ; 18mg) 4.7.14 HPLC semi- 18% ACN/H2O.TFA 5 4 230
tr = 28,50min préparative 0,025%
FRD-9 (4.7.14.6 ; 16mg) 4.7.14 HPLC semi- 18% ACN/H2O.TFA 5 4 230
tr = 43,43min préparative 0,025%
FRP-10 (4.7.17.4 ; 30mg) 4.7.17 HPLC semi- 22% ACN/H2O.TFA 5 4 240
tr = 19,07min préparative 0,025%
FRP-6 (4.7.19.5 ; 3,5mg) 4.7.19 HPLC semi- 22% ACN/H2O.TFA 5 4 230
tr = 26,24min préparative 0,025%

- FRP-1, FRP-3, FRP-5 et FRD-5 :

Le regroupement 4.7.22 est fractionné par CCF (cartouche Reveleris® C18, 40g) avec le
gradient ACN/H2O (20/80 à 100/0) sur 35 min et un débit de 35 ml/min, par détection UV =
205 et 254 nm. Des fractions de 25 ml sont collectées, analysées et réunies selon leurs profils
chromatographiques pour obtenir 9 sous-fractions. La purification de la sous-fraction 4.7.22.5
(83mg) éluée à 32% ACN est réalisée par HPLC semi-préparative (colonne 5 ; élution
isocratique 27% ACN/H2O-TFA 0,025% ; 4 ml/min ; 245 nm) pour obtenir deux composés: FRP-
3 (4.7.22.5.1 ; 39 mg, tr = 16,68 min) et FRP-5 (4.7.22.5.5 ; 15 mg, tr = 24,83 min).

De même, une CCF (cartouche Reveleris® C18, 40 g) du regroupement 4.7.23 suivie d’une
HPLC semi-préparative de la sous-fraction majoritaire 4.7.23.4 (64 mg) dans des conditions
similaires, permet d’obtenir deux composés purs FRD-5 (4.7.23.4.1 ; 2,5 mg, tr = 12,43 min) et
FRP-1 (4.7.23.4.5 ; 20 mg, tr = 24,74 min)

223
 - FRP-7, FRP-11, FRP-12, FRP-14, FRD-1 :

Le regroupement 4.7.24 est fractionné par CCF en phase normale (cartouche Reveleris® 40 g)
avec un gradient d’élution CHCl3/MeOH (100/0 à 100/0) sur 36 min, un débit de 40 ml/min,
une détection DEDL et UV = 205 et 254 nm :

Regroupement 4.7.24 = 384 mg

Regroupement Fractions (25ml) CHCl3/MeOH Masse (mg)
1 2-14 0-7% MeOH 7,2
2 15-19 7-8% MeOH 9,5
3 20-21 8% MeOH 4,4
4 22-28 8% MeOH 62,1
5 29-31 8% MeOH 25,7
6 32-35 8% MeOH 70,6
7 36-38 8% MeOH 29,4
8 39-42 8-9% MeOH 36,3
9 43-49 9-10% MeOH 16,5
10 50-60 10-14% MeOH 38,2
11 62-87 14-60% MeOH 33,6
12 88-104 60-100% MeOH 23,0
Total 356,5
Rendement 92,84 %

Composé (Code, tr) Fraction Méthode Solvant Colonne Débit UV

d’origine purification ml/min nm

FRD-1 (4.7.24.2.1 ; 3,5mg) 4.7.24.2 HPLC semi- 32% ACN/H2O.TFA 5 4 254

tr = 13,91min préparative 0,025%

FRP-11 (4.7.24.4.2 ; 28mg) 4.7.24.4 HPLC semi- 30% ACN/H2O.TFA 5 4 254

tr = 16,41min préparative 0,025%
FRP-7 (4.7.24.4.6 ; 4,5mg) 4.7.24.4 HPLC semi- 30% ACN/H2O.TFA 5 4 254
tr = 23,79min préparative 0,025%
FRP-14 (4.7.24.6.5 ; 12mg) 4.7.24.4 HPLC semi- 30% ACN/H2O.TFA 5 4 254
tr = 24,30min préparative 0,025%
FRP-12 (4.7.24.6.6 ; 50mg) 4.7.24.4 HPLC semi- 30% ACN/H2O.TFA 5 4 254
tr = 25,88min préparative 0,025%

- FRP-2, FRP-4, FRP-8 :

Le regroupement 4.7.25 est également chromatographié par CCF en phase normale

(cartouche Reveleris® 12 g) avec un gradient CHCl3/MeOH (100/0 à 100/0) sur 34 min, un débit
de 30 ml/min, sous détection DEDL et UV = 205 et 254 nm, pour donner 11 sous-fractions.

La sous-fraction majoritaire 4.7.25.6 (96mg) éluée à 6% MeOH est purifiée par une HPLC semi-
préparative (colonne 5 ; élution isocratique 50% MeOH/H2O-TFA 0,025% ; 4 ml/min ; 254 nm)
pour obtenir trois composés: FRP-4 (4.7.25.6.1 ; 28 mg, tr = 13,73 min), FRP-2 (4.7.25.6.2 ;
8,5 mg, tr = 21,6 min), et FRP-8 (4.7.25.6.3 ; 7 mg, tr = 27,19 min).

224
VIII.4. - HYDROLYSE ACIDE DES EXTRAITS :

100 mg de l’extrait 3 (acétate éthyle) de C. chelidonii sont solubilisés dans 5 ml d’une solution
TFA 2N, ou 1 g de chaque extrait 4 (méthanol) de C. chelidonii, D. spathacea, F. rukam est
solubilisé dans 25ml de TFA 2N.

La solution est chauffée à reflux pendant 4h à 150-170oC. Après refroidissement, le mélange

réactionnel est extrait par 3 fois avec 5 ou 25 ml d’AcOEt.
La phase aqueuse est congelée puis lyophilisée pour obtenir les sucres bruts. Le mélange brut
des sucres est analysé par une CCM sur silice normale en utilisant le solvant d’élution
MeCOEt/isoPrOH/Acétone/H2O (20/10/7/6).

Les sucres sont purifiés par HPLC semi-préparative sur colonne ROA (250 x 21,2 mm, 40oC)
éluée en mode isocratique avec H2SO4 0,25 µM, un débit de 3,5 ml/min et détection RI à 40oC.

Les fractions recueillies sont neutralisées à l’aide d’une solution de NaOH 50 mM et 5 mM en

suivant au pH-mètre. Les solutions osidiques neutralisées sont mises à sec, puis solubilisées
dans la pyridine anhydre. Ces solutions sont filtrées puis la pyridine est évaporée.

Les sucres obtenus (0,15 à 0,8 mg) et les témoins de sucres (1 mg de D-glucose, L-glucose et
L-rhamnose) sont solubilisés dans 1 ml de n-Hexane/EtOH/TFA (70/30/1) pour être analysés
par HPLC analytique sur la colonne chirale CHIRALPAK® ICA avec l’éluant n-Hexane/EtOH/TFA
(80/20/1), un débit de 0,5 ml/min, et par détection RI (40oC) ou par DEDL.

VIII.5. - HYDROLYSE ENZYMATIQUE :

3 mg de composé est solubilisé dans 1 ml H2O puis est ajouté 3 mg d’almond-β-glucosidase
(Sigma-Aldrich). Le mélange est placé dans une étuve à 37oC durant 7 jours. Après 7 jours, on
ajoute 1 ml d’ H2O puis on extrait le milieu réactionnel avec 3 fois 2 ml de CHCl3. Les phases
organiques sont recueillies et mises à sec pour donner la partie aglycone [185].

VIII.6. - TESTS BIOLOGIQUES

VIII.6.1. - ACTIVITE ANTIOXYDANTE
Solution de DPPH : Une solution mère de DPPH est préparée à 316 µM dans l’éthanol absolu
(peut être conservée au réfrigérateur à 4oC à l’abri de la lumière pendant un mois maximum).
Cette solution mère est diluée 2 fois dans H2O pour donner une solution de DPPH à 158 µM
dans EtOH 50%.
Solutions d’échantillon : Les solutions d’échantillons des 14 flavonoïdes de C. chelidonii sont
préparées à partir d’une solution mère à 4 mg/ml dans le DMSO :

225
 Solutions préparées Concentration finale/puits
4mg/ml (S1) 200 µg/ml
Prélever 0,5ml de (S1) + 0,5ml DMSO  100 µg/ml
(S2)
Prélever 0,5ml de (S2) + 0,5ml DMSO  50 µg/ml
(S3)
Prélever 0,2ml de (S3) + 0,8ml DMSO  10µg/ml
(S4)
Prélever 0,5ml de (S4) + 0,5ml DMSO  5 µg/ml
(S5)

Témoin positif:

1. une solution d’acide ascorbique (vitamine C) à 4 mg/ml est préparée dans le

DMSO, puis la solution est diluée au 1/40 (soit 5µg/ml par puits).
2. Une solution de quercétine à 4 mg/ml est préparée dans le DMSO, puis la
solution est diluée au 1/8 pour donner une solution de 0,5mg/ml (Q1) (soit
25µg/ml par puits).
Solutions préparées Concentration finale/puits
0,5 mg/ml (Q1) 25 µg/ml
Prélever 0,25ml de (Q1) + 0,75ml DMSO  6,25 µg/ml
(Q2)
Prélever 0,25ml de (Q2) + 0,75ml DMSO  1,56 µg/ml
(Q3)
Prélever 0,5ml de (Q3) + 0,5ml DMSO  0,78 µg/ml
(Q4)
Prélever 0,5ml de (Q4) + 0,5ml DMSO  0,39 µg/ml
(Q5)
Prélever 0,5ml de (Q5) + 0,5ml DMSO  0,19 µg/ml
(Q6)

Témoin négatif : DMSO.

Des plaques 96 puits de 100µl (Greiner® F bottom) et le lecteur de microplaques (FLUOstar®

Omega) sont utilisés pour faire les tests au DPPH.

Dans les puits de 100µl, nous avons introduit les solutions échantillon, les témoins positif et
négatif, le blanc sans DPPH pour éliminer l’absorbance propre aux solvants :

 Puits échantillon : 5 µl de solution d’échantillon + 95 µl de solution DPPH (soit 150

µM DPPH dans les puits).
 Puits Témoin positif: 5 µl de solution témoin + 95 µl de solution DPPH.
 Puits Témoin négatif: 5 µl de DMSO + 95 µl de solution DPPH.
 Puits Blanc: 5 µl de DMSO + 95 µl de solution EtOH 50o.

Chaque mesure doit être réalisée en triplicate et la mesure se fait à 37 oC et à λ = 515 nm en

mode cinétique pendant 60 minutes.

226
L’activité anti-radicalaire est évaluée grâce au pourcentage d’inhibition (I%) et CI50
(concentration nécessaire pour obtenir une activité de 50%). Ces indices sont calculés comme
suit:
I% = [(Ablanc – Aéchantillon) / Ablanc] x 100%
Avec: Ablanc : absorbance du blanc (DMSO) et Aéchantillon : absorbance de l’échantillon testé
CI50 est calculé sur la base de la courbe du pourcentage d’inhibition.

VIII.6.2. - ACTIVITE ANTIBACTERIENNE

VIII.6.2.1. - Microorganismes testés :

Les 22 souches de microorganisme utilisées dans cette étude sont des souches de référence
du laboratoire EA 4691 Bios (Biomatériaux et Inflammation en site osseux) dont 8 bactéries à
Gram positif, 9 bactéries à Gram négatif et 5 levures :

No Bactéries à Gram positif Bactéries à Gram négatif Levures

1 Bacillus subtilis Providencia stuartii Candida glabrata
Pseudomonas aeruginosa ATCC
2 Enterococcus faecalis ATCC 1034 Candida tropicalis
9027
3 Staphylococcus aureus CIP 8325-4 Shigella sonnei Candida kefyr
4 Staphylococcus aureus CIP 53.154 Proteus vulgaris Cryptococcus neoformans
5 Micrococcus luteus Klebsiella pneumoniae Candida albicans
6 Listeria innocua Serratia marcescens
7 Staphylococcus epidermidis Escherichia coli CIP 54.127
8 Streptococcus pyogenes Enterobacter cloacae
9 Salmonella enterica

Les cinq extraits de D. spathacea et F. rukam ont été testés selon la méthode de diffusion en
milieu solide pour déterminer de la CMI [300].
Les 35 composés purs isolés de D. spathacea et les 27 autres isolés de F. rukam sont testés
selon la méthode de diffusion en milieu liquide (bioautographie) [301].
La détermination de la CMI par la méthode de dilution en milieu liquide (en microplaques) est
réalisée sur 6 composés de D. spathacea (DSC-1, DSC-2, DSC-4, DSC-17, DSI-6 et DSI-9) et 8
composés de F. rukam (FRP-1 à FRP-4, FRP-8, FRP-11, FRP-14, FRD-13) [302].

VIII.6.2.2. - Méthode en milieu solide (CMI) :

L’inhibition de la croissance microbienne in vitro est évaluée par mesure de la concentration
minimale inhibitrice (CMI) : concentration minimale d’extrait qui inhibe toute croissance
visible après 18 à 24 heures d’incubation à 37oC. L’absence de toxicité des solvants utilisés a
été vérifiée.
La CMI est déterminée en utilisant la gélose de Mueller Hinton (MHA) coulée en boîtes de
Petri puis ensemencée grâce à un inoculateur à tête multiples (appareil de STEERS). L’activité

227
sera ensuite estimée visuellement par la présence ou l’absence de colonie après incubation à
l’étuve à 37oC pendant 18 – 24 heures.

 Préparation des solutions d’extrait : à partir de chaque extrait, sont préparées 6

solutions de concentration : 10 mg/ml, 5 mg/ml, 2,5 mg/ml, 1,2 mg/ml, 0,6 mg/ml, et
0,3 mg/ml à partir d’une solution mère à 200 mg/ml (500 mg d’extrait solubilisés dans
2,5 ml de MeOH/H2O (50/50)). Ainsi, pour obtenir la concentration à 10 mg/ml, 1 ml
de solution mère (S1) sont introduits dans une boîte de Petri, puis on ajoute 19 ml de
gélose à chaud.
Solutions préparées Concentration solution Concentration finale
dans les boîtes
500 mg d’extrait + 2,5 ml MeOH/H2O (50/50) (S1) 200 mg/ml 10 mg/ml
Prélever 1ml de (S1) + 1ml MeOH/H2O (50/50)  100 mg/ml 5 mg/ml
(S2)
Prélever 1ml de (S2) + 1ml MeOH/H2O (50/50)  50 mg/ml 2,5 mg/ml
(S3)
Prélever 1ml de (S3) + 1ml MeOH/H2O (50/50)  25 mg/ml 1,2 mg/ml
(S4)
Prélever 1ml de (S4) + 1ml MeOH/H2O (50/50)  12,5 mg/ml 0,6 mg/ml
(S5)
Prélever 1ml de (S5) + 1ml MeOH/H2O (50/50)  6,25 mg/ml 0,3 mg/ml
(S6)

Pour les extraits apolaires (extraits 1 à 3), nous avons utilisés le mélange de solvants
Acétone/EtOH (75/25) au lieu de MeOH/H2O (50/50).

 Préparation des souches microbiennes et culture in vitro : les microorganismes sont

cultivés dans des tubes contenant un milieu MH pendant 24 heures dans une étuve à
37oC. Après incubation, une goutte de chaque suspension est récupérée et ajoutée au
contenu d’un tube contenant 10 ml de solution MH. Pour finaliser la culture dans les
boîtes de Petri, 1ml de suspension de chaque tube est prélevé pour remplir les 22 puits
de la plaque de l’ensemenceur automatique (Appareil de STEERS).

 Incubation et lecture : après ensemencement, les boîtes de Petri sont incubées

pendant 24 heures à 37oC. Après 24 heures, les colonies seront dénombrées
visuellement.

VIII.6.2.3. - Méthode de bioautographie :

 Préparation de la plaque CCM : les composés purs (50 µg dans 50 µl de MeOH) sont
déposés en point sur une plaque de silice normale en vérifiant sous lumière UV à 254
nm ; la plaque est mise dans un dessiccateur pour la sécher et la stériliser.

 Préparation de la suspension bactérienne: les microorganismes sont cultivés dans des

tubes contenant un milieu MHA à 37oC. Après 24h, 10ml de liquide RC (Ringer Cystéine)
sont ajoutés aux tubes pour obtenir la concentration de 107 CFU/ml. Ensuite, deux
dilutions successives au 1/10 dans du milieu MHA sont réalisées pour obtenir la
concentration bactérienne de 105 CFU/ml. Puis 250µl de cette solution sont prélevés

228
 et mis dans un tube de 30 ml de gélose MHA. Cette suspension bactérienne est utilisée
pour faire les tests antibactériens.

 Les CCM déposées avec les composés purs et stérilisées sont placées au fond de boîtes
de culture de forme carrée. Ensuite, 30ml de suspension bactérienne sont ajoutés à
chaque boîte. L’incubation se fait pendant 24 heures à 37 oC. Une solution de para-
iodonitrotétrazolium (INT) à 2 mg/ml dans H2O est vaporisée sur la surface de la
gélose, et l’incubation est renouvelée pendant 4 heures. L’INT est alors transformée
par une déhydrogénase bactérienne en un composé d’une couleur rouge foncé ; ainsi
l’inhibition de la croissance bactérienne est révélée par la présence de zone claire.

VIII.6.2.4. - Détermination de la CMI par la méthode de dilution en milieu liquide

(microplaques)

 Préparation de la suspension bactérienne: les microorganismes sont cultivés et

préparés selon le protocole précédent pour obtenir de la suspension bactérienne à la
concentration de 105 CFU/ml.

 Préparation des produits et des microplaques : Une série de dilution de chaque

composé à tester est préparée à 9 concentrations allant de 500 µg/ml à 1,9 µg/ml à
partir de solution mère à 2 mg/ml ou 1 mg/500 µl dans MeOH/H2O (50/50). Dans le
puits 1, 100 µl de solution mère à 2 mg/ml sont introduits puis est ajouté 100 µl de
gélose de Mueller Hinton (MHA). On mélange la solution à 1 mg/ml (S1), puis on
dépose 100 µl de (S1) dans le puits 2, et ainsi de suite. Enfin 100 µl de suspension
bactérienne sont ajoutés dans les 9 puits pour un volume final de 200 µl.

Puits Solutions d’échantillon préparées Concentration finale

1 100 µl de solution mère + 100 µl de MHA  (S1 à 1 mg/ml) 500 µg/ml
2 Prélever 100 µl de (S1) + 100 µl de MHA  (S2 à 0,5 mg/ml) 250 µg/ml
3 Prélever 100 µl de (S2) + 100 µl de MHA  (S3 à 0,25 mg/ml) 125 µg/ml
4 Prélever 100 µl de (S3) + 100 µl de MHA  (S4 à 0,125 mg/ml) 62,5 µg/ml
5 Prélever 100 µl de (S4) + 100 µl de MHA  (S5 à 62,5 µg/ml) 31,2 µg/ml
6 Prélever 100 µl de (S5) + 100 µl de MHA  (S6 à 31,25 g/ml) 15,6 µg/ml
7 Prélever 100 µl de (S6) + 100 µl de MHA  (S7 à 15,5 g/ml) 7,8 µg/ml
8 Prélever 100 µl de (S7) + 100 µl de MHA  (S8 à 7,75 g/ml) 3,9 µg/ml
9 Prélever 100 µl de (S8) + 100 µl de MHA  (S9 à 3,87 g/ml) 1,9 µg/ml
10 Libre
11 TC : témoin de culture (200 µl de MHA + la souche de bactérie)
12 TS : témoin de stérilité (100 µl de MHA)

 Les microplaques sont incubées pendant 24 heures à 37oC. La lecture est réalisée par
pulvérisation du réactif INT à 2 mg/ml et incubation de nouveau pendant trente
minutes à 37oC. La CMI correspond à la concentration du premier puits présentant une
décoloration.

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249
 ANNEXES

Composés isolés de Cleome chelidonii

CF-1 : quercétol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-rhamnopyranosyl-7-O-α-L-
rhamnopyranoside (connu)
Formule brute : C33H40O20

ESI-MS : m/z 779,4 [M+Na]+, 449,2 [M+H-Rha-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D – 147,8 (c 0,21, MeOH)

UV : MeOH λ nm (log ) 352 (1,44), 256 (2,16)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.6.2.5 (a) CD3OD CF-1

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.4
3 135.5
4 178.4
5 161.5
6 6.49 (d, 2.1) 99.2 5, 7, 8, 10 8
7 162.2
8 6.75 (d, 2.1) 94.2 4, 6, 7, 9, 10 6
9 156.7
10 106.1
1’ 121.2
2’ 7.41 (d, 2.1) 115.5 2, 1’, 3’, 4’, 6’
3’ 145.1
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1 2, 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.37 (dd, 8.3, 2.1) 121.6 2, 2’, 4’ 5’
3-O-Rha
1’’ 5.68 (d, 1.0) 101.3 3, 2’’, 5’’ 2’’ 2’’, 1’’’
2’’ 4.31 (dd, 3.3, 1.3) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.89 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 2’’, 4’’, 5’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.36 (t, 9.7) 72.1 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.65 (dq, 9.2, 6.2) 70.6 3’’, 4’’, 6’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.41 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 1’’, 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.25 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.39 (t, 8.0) 76.4 4’’’ 2’’’ 1’’’
4’’’ 3.37 (dd, 9.9, 8.2) 69.3 5’’’ 5’’’
5’’’ 3.18 (ddd, 9.1, 4.1, 2.6) 76.4 3’’’, 4’’’ 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.69 (dd, 12.0, 4.3)
6’’’ 60.8 4’’’, 5’’’ 5’’’
3.66 (dd, 12.0, 2.6)
7-O-Rha
1’’’’ 5.58 (d, 1.1) 98.5 7, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.04 (m, w1/2 = 7.5) 70.3 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 3.85 (dd, 9.4, 3.4) 70.7 4’’’’,5’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.50 (dd, 9.6, 9.4) 72.2 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.62 (m) 69.9 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.28 (d, 6.2) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

250
CF-2 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(4-acetyl)-α-L-
rhamnopyranoside (connu)
Formule brute : C35H42O21

HR-ESI-MS : m/z 821,2123 [M+Na]+ (calc. 821,2116),

779,2137 [M+Na-Ac]

Pouvoir rotatoire : [α]D – 96,3 (c 0,036, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 350 (0,46), 256 (0,76); NaOMe

396 (0,46), 264 (0,65); AlCl3 378 (0,36), 266 (0,73);
AlCl3+HCl 354 (0,37), 268 (0,71); NaOAc 352 (0,42), 256
(0,74); NaOAc+H3BO3 368 (0,45), 260 (0,82)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.7 (g) CD3OD CF-2

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.5
3 135.5
4 178.4
5 161.6
6 6.52 (d, 2.0) 99.2 5, 7, 8, 10
7 162.0
8 6.78 (d, 2.0) 94.2 6, 7, 9, 10
9 156.7
10 106.2
1’ 121.2
2’ 7.42 (d, 1.7) 115.5 2, 3’, 4’, 6’
3’ 145.2
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.2) 115.1 1’, 3’, 4’
6’ 7.38 (dd, 8.3, 1.8) 121.6 2, 2’, 4’
3-O-Rha
1’’ 5.68 (d, 1.0) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.30 (dl, 1.9) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dd, 9.8, 3.2) 70.4 2’’, 4’’, 5’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.37 (t, 9.8) 72.1 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.65 (m) 70.6 3’’, 4’’, 6’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, 5’’’, R-2’’ 2’’’ 1’’, 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.24 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 1’’’, 3’’’, 4’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.38 (m) 76.4 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.37 (m) 69.3 3’’’, 5’’’
5’’’ 3.18 (m) 76.4 4’’’ 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.69 (dd, 12.2, 4.3)
6’’’ 60.8 4’’’, 5’’’ 5’’’
3.66 (dd, 12.2, 2.6)
7-O-Rha
1’’’’ 5.62 (sl) 98.3 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8
2’’’’ 4.09 (sbr, w1/2 = 5) 70.3 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’
3’’’’ 4.02 (dd, 9.7, 3.3) 68.6 4’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.06 (t, 9.8) 73.6 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.77 (dq, 9.7, 6.2) 67.7 1’’’’, 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.18 (d, 6.2) 16.5 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

4-MeCO 171.0
4-MeCO 2.12 (s) 19.6 CO

251
CF-3 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(3-acetyl)-α-L-
rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C35H42O21

HR-ESI-MS : m/z 821,2123 [M+Na]+ (calc. 821,2116),

779,1992 [M+Na-Ac]+ , 633,1370 [M+Na-Ac-Rha]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -205 (c 0,25, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 352 (2,20), 256 (3,30)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.4.1 (d) CD3OD CF-3

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.5
3 135.5
4 178.4
5 161.6
6 6.53 (d, 1.8) 99.2 5, 7, 8, 10 8
7 161.9
8 6.78 (d, 1.6) 94.3 6, 7, 9, 10 6
9 156.7
10 106.2
1’ 121.2
2’ 7.41 (d, 2.0) 115.5 2, 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
3’ 145.1
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.38 (dd, 8.2, 1.8) 121.6 2, 2’, 4’, 5’ 2’, 5’
3-O-Rha
1’’ 5.67 (sl) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.30 (m, w1/2 = 6) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 2’’, 4’’, 5’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.36 (t, 9.8) 72.1 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.65 (m) 70.6 4’’, 6’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, 5’’’, R-2’’ 2’’’ 1’’, 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.25 (dd, 8.7, 8.1) 73.9 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.39 (m) 76.4 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.37 (m) 69.3 3’’’, 5’’’, 6’’’
5’’’ 3.18 (m) 76.4 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.69 (dd, 12.0, 4.2)
6’’’ 60.7 4’’’, 5’’’ 5’’’
3.66 (dl, 12.0)
7-O-Rha
1’’’’ 5.60 (sl) 98.2 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8
2’’’’ 4.21 (m, w1/2 = 6) 68.0 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’
3’’’’ 5.12 (dd, 9.4, 3.3) 73.8 4’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.71 (m) 69.4 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.71 (m) 69.9 4’’’’, 6’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.31 (d, 5.5) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

3-MeCO 171.2
3-MeCO 2.18 (s) 19.6 CO

252
CF-4 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2-acetyl)-α-L-
rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C35H42O21

HR-ESI-MS : m/z 821,2105 [M+Na]+ (calc. 821,2116),

779,2041 [M+Na-Ac]+, 491,1266 [M-Rha-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -137 (c 0,3, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 346 (1,20), 256 (1,78)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.4.2 (e) CD3OD CF-4

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.5
3 135.5
4 178.5
5 161.6
6 6.52 (d, 2.1) 99.2 5, 7, 8, 10 8
7 161.8
8 6.77 (d, 2.1) 94.3 6, 7, 9, 10 6
9 156.7
10 106.3
1’ 121.2
2’ 7.41 (d, 2.1) 115.5 2, 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
3’ 145.1
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.38 (dd, 8.2, 2.1) 121.6 2, 2’, 4’, 5’ 2’, 5’
3-O-Rha
1’’ 5.67 (d, 1.2) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.30 (dd, 3.3, 1.4) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 4’’, 5’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.35 (m) 72.1 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.66 (m) 70.6 3’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, 5’’’, R-2’’ 2’’’ 1’’, 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.25 (dd, 8.8, 8.0) 73.9 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.37 (m) 76.4 2’’’, 4’’’ 2’’’ 1’’’
4’’’ 3.36 (m) 69.3 3’’’, 5’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 3.18 (m) 76.4 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.69 (dd, 12.2, 4.2)
6’’’ 60.8 5’’’ 5’’’
3.65 (dl, 12.0)
7-O-Rha
1’’’’ 5.63 (d, 1.4) 95.7 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 5.24 (dd, 3.6, 1.7) 71.8 3’’’’, 4’’’’, CO 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 4.03 (dd, 9.6, 3.6) 68.9 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.47 (dd, 9.6, 9.5) 72.4 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.67 (m) 69.9 3’’’’, 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.29 (d, 6.2) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

2-MeCO 170.8
2-MeCO 2.17 (s) 19.4 CO

253
CF-5 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2,4-diacetyl)-α-
L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C37H44O22

HR-ESI-MS : m/z 863,2212 [M+Na]+ (calc. 821,2116),

821,2139 [M+Na-Ac]+, 779,2057 [M+Na-2Ac]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -132 (c 0,21, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 350 (0,86), 256 (1,30)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.10 (l) CD3OD CF-5

No 1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.6
3 135.5
4 178.5
5 161.7
6 6.54 (d, 2.2) 99.2 5, 7, 8, 10
7 161.7
8 6.79 (d, 2.2) 94.3 6, 7, 9, 10
9 156.7
10 106.4
1’ 121.2
2’ 7.42 (d, 2.1) 115.5 2, 1’, 3’, 4’, 6’
3’ 145.2
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1
6’ 7.38 (dd, 8.3, 2.1) 121.6 2, 3’, 4’, 5’
3-O-Rha
1’’ 5.68 (d, 1.3) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.30 (dd, 3.4, 1.4) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.36 (t, 9.8) 72.1 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’
5’’ 3.65 (m) 70.6 6’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.24 (dd, 8.8, 8.0) 73.9 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.39 (m) 76.4 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.38 (m) 69.3 3’’’
5’’’ 3.18 (ddd, 9.0, 4.5, 2.4) 76.4 3’’’ 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.68 (dd, 12.3, 4.2)
6’’’ 60.8 4’’’, 5’’’ 5’’’
3.65 ((dd, 12.1, 2.4
7-O-Rha
1’’’’ 5.70 (d, 1.3) 95.5 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 5.29 (dd, 3.7, 1.7) 71.7 3’’’’, 4’’’’, CO 170.6 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 4.22 (dd, 9.9, 3.7) 66.8 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.01 (t, 9.8) 73.4 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 170.7 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.85 (dq, 9.7, 6.2) 67.7 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.18 (d, 6.2) 16.5 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

2-MeCO 170.6
2-MeCO 2.21 (s) 19.4 2-CO
4-MeCO 170.7
4-MeCO 2.13 (s) 19.5 4-CO

254
CF-6 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl (1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(3,4-diacetyl)-α-
L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C37H44O22

HR-ESI-MS : m/z 863,2228 [M+Na]+ (calc. 821,2116),

821,2134 [M+Na-Ac]+, 779,2039 [M+Na-2Ac]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -139 (c 0,29, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 350 (2,13), 256 (3,13)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.14.4 (m) CD3OD CF-6

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.5
3 135.5
4 178.5
5 161.7
6 6.56 (d, 2.2) 99.2 5, 7, 8, 10
7 161.8
8 6.81 (d, 2.2) 94.3 6, 7, 9, 10
9 156.7
10 106.4
1’ 121.2
2’ 7.42 (d, 2.1) 115.5 2, 3’, 4’, 6’
3’ 145.2
4’ 148.7
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1 2, 1’, 3’, 4’, 6’
6’ 7.39 (dd, 8.3, 2.2) 121.6 2
3-O-Rha
1’’ 5.68 (d, 1.3) 101.3 3, 2’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.31 (dd, 3.5, 1.5) 81.5 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dd, 9.5, 3.2) 70.4 2’’, 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.36 (t, 9.6) 72.1 5’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.67 (m) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.40 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’, 1’’
2’’’ 3.24 (dd, 9.0, 7.9) 73.9 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.38 (m) 76.4 4’’’ 2’’’ 1’’’, 5’’’
4’’’ 3.36 (m) 69.3 3’’’, 5’’’ 5’’’
5’’’ 3.18 (ddd, 9.1, 4.2, 2.4) 76.4 3’’’, 4’’’ 4’’’, 6’’’ 1’’’, 3’’’
3.69 (dd, 12.3, 4.2)
6’’’ 60.8 4’’’ 5’’’
3.66 (dd, 12.3, 2.6)
7-O-Rha
1’’’’ 5.65 (d, 1.7) 98.0 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 8
2’’’’ 4.26 (dd, 2.9, 1.9) 67.9 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 4’’’’
3’’’’ 5.27 (dd, 10.0, 3.1) 71.5 2’’’’,5’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’ 5’’’’
4’’’’ 5.24 (t, 10.1) 70.6 2’’’’, 3’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 6’’’’
5’’’’ 3.89 (m) 67.7 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 6’’’’
6’’’’ 1.20 (d, 6.2) 16.4 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

3-MeCO 170.6
3-MeCO 2.11 (s) 19.4 3-CO
4-MeCO 170.3
4-MeCO 2.07 (s) 19.3 4-CO

255
CF-7 : quercétine 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2,3,4-triacetyl)-
α-L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C39H46O23

HR-ESI-MS : m/z 905,2341 [M+Na]+ (calc. 905,2328),

863,2201 [M+Na-Ac]+, 821,2175 [M+Na-2Ac]+,
779,2057 [M+Na-3Ac]+, 633,1639[M+Na-Rha-3Ac]+,

Pouvoir rotatoire : [α]D -119 (c 0,10, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 354 (0,75), 256 (1,21)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.10.9.7 CD3OD CF-7

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.6
3 135.6
4 178.5
5 161.3
6 6.58 (d, 2.1) 99.2 5, 7, 8, 10 8
7 161.7
8 6.82 (d, 2.1) 94.5 6, 7, 9, 10 6
9 156.7
10 106.5
1’ 121.2
2’ 7.42 (sl) 115.5 2, 3’, 6’
3’ 145.2
4’ 148.9
5’ 6.96 (d, 8.3) 115.1 1’, 3’, 4’ 6’
6’ 7.39 (dl, 8.4) 121.6 2, 2’, 4’ 5’
3-O-Rha
1’’ 5.67 (sl) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.31 (m, w1/2 = 7.5) 81.5 G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.88 (dm, 7.8) 70.4 2’’, 4’’
4’’ 3.36 (m) 72.1 6’’ 3’’, 5’’
5’’ 3.67 (m) 70.6 4’’, 6’’
6’’ 1.01 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’
Glu à la position 2 du Rha
1’’’ 4.40 (d, 7.7) 105.8 2’’’, R-2’’ 2’’’ 5’’’
2’’’ 3.24 (tl, 8.1) 73.9 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.38 (nd) 76.4
4’’’ 3.37 (nd) 69.3 5’’’
5’’’ 3.18 (ddd, 8.7, 5.0, 2.2) 76.4 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.69 (dd, 12.2, 4.3)
6’’’ 60.8 5’’’
3.65 (dd, 12.0, 2.2)
7-O-Rha
1’’’’ 5.76 (d, 1.5) 95-5 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 5.48 (dd, 3.5, 1.8) 68.9 CO 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 5.43 (dd, 10.2, 3.5) 69.0 4’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’ 5’’’’
4’’’’ 5.14 (t, 10.0) 70.3 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.98 (dq, 9.8, 6.2) 67.7 6’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 6’’’’
6’’’’ 1.21 (d, 6.2) 16.4 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

2-MeCO 170.1
2-MeCO 2.21 (s) 19.2 2-CO
3-MeCO 170.2
3-MeCO 2.08 (s) 19.2 3-CO
4-MeCO 170.2
4-MeCO 2.02 (s) 19.2 2-CO

256
CF-8 : quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (connu)
Formule brute : C42H46O22

ESI-MS : m/z 925,4 [M+Na]+, 779,4 [M+Na-

coumaroyl]+ , 633,3 [M+Na-Rha-coumaroyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -106 (c 0,41, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 318 (2,52), 256 (2,42)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.6.2.12 (c) CD3OD CF-8

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.5
3 135.7
4 178.4
5 161.5
6 6.41 (d, 2.1) 99.1 5, 7, 8, 10 8
7 162.0
8 6.50 (d, 2.1) 94.2 6, 7, 9, 10 6
9 156.4
10 106.2
1’ 121.3
2’ 7.37 (d, 1.9) 115.6 2, 1’, 3’, 4’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.6
5’ 6.92 (d, 8.3) 115.0 1’, 6’ 6’
6’ 7.26 (dd, 8.3, 2.0) 121.5 2, 2’, 4’, 5’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ p-coumaroyl 125.5
2’’’’’ 7.21 (d, 8.6) 129.6 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 3’’’’’
3’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’ 2’’’’’
4’’’’’ 159.7
5’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 3’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 7.21 (d, 8.6) 129.6 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 5’’’’’
7’’’’’ 7.42 (d, 15.9) 145.1 1’’’’’, 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.03 (d, 15.9) 113.3 1’’’’’, 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.4
3-O-Rha (R)
1’’ 5.76 (d, 0.8) 101.2 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.38 (dl, 2.3) 82.3 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.92 (dd, 9.8, 3.4) 70.3 4’’, 5’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.38 (t, 9.8) 72.1 3’’, 5’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.78 (dq, 9.7, 6.5) 70.7 1’’, 3’’, 4’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.11 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position du 2 du Rha (R)
1’’’ 4.44 (d, 7.9) 105.7 3’’’, 5’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.31 (tl, 9.0) 73.7 1’’’, 3’’’ 1’’’
3’’’ 3.44 (tl, 9.4) 76.2 1’’’, 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.31 (tl, 9.4) 70.6 3’’’, 5’’’, 6’’’
5’’’ 3.44 (m) 73.9 4’’’ 1’’’
4.54 (dd, 11.8, 2.4) 4’’’, 5’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
6’’’ 63.0
4.10 (dd, 11.9, 6.7) 4’’’, 5’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.51 (sl) 98.5 7, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8
2’’’’ 4.05 (m, w1/2 = 6) 70.3 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’
3’’’’ 3.85 (dd, 9.5, 3.3) 70.7 4’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.50 (t, 9.5) 72.2 2’’’’, 3’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.63 (dq, 9.4, 6.1) 69.9 1’’’’, 3’’’’, 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.29 (d, 6.2) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

257
CF-9 : quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(3-O-acétyl)-α-L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C44H48O23

HR-ESI-MS : m/z 967,2477 [M+Na]+ (calc. 967,2484),

925,2372 [M+Na- Ac]+, 303,0605 [Quercétine]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -90 (c 0,24, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 320 (2,40), 256 (2,31)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.53.2 (h) CD3OD CF-9

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.6
3 135.7
4 178.5
5 161.6
6 6.46 (d, 2.2) 99.1 5, 7, 8, 10 8
7 161.8
8 6.54 (d, 2.2) 94.2 6, 7, 9, 10 6
9 156.4
10 106.3
1’ 121.3
2’ 7.38 (d, 2.0) 115.6 2, 3’, 4’, 6’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.5
5’ 6.93 (d, 8.3) 115.0 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.27 (dd, 8.3, 2.2) 121.5 2, 2’, 4’, 5’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ p-coumaroyl 125.5
2’’’’’ 7.22 (d, 8.6) 129.6 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 3’’’’’
3’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’ 2’’’’’
4’’’’’ 159.7
5’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 3’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 7.22 (d, 8.6) 129.6 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 5’’’’’
7’’’’’ 7.42 (d, 15.9) 145.1 1’’’’’, 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.05 (d, 15.9) 113.3 1’’’’’, 7’’’’’, 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.3
3-O-Rha (R)
1’’ 5.76 (d, 1.0) 101.2 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.38 (dl, 2.0) 82.2 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.91 (dd, 9.9, 3.4) 70.3 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.40 (t, 9.7) 72.1 3’’, 5’’ 3’’, 5’’
5’’ 3.80 (m) 70.7 4’’ 4’’, 6’’
6’’ 1.12 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.42 (d, 7.9) 105.7 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’, 1’’
2’’’ 3.30 (m) 73.7 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.44 (t, 9.2) 76.2 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.30 (m) 70.7 5’’’, 3’’’
5’’’ 3.44 (m) 73.9 4’’’, 6’’’ 1’’’
4.54 (dd, 11.8, 2.5) 9’’’’’ 6’’’
6’’’ 63.0
4.09 (dd, 11.1, 6.7) 6’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.53 (d, 1.8) 98.3 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.22 (dd, 3.3, 1.8) 68.0 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 3’’’’, 1’’’’
3’’’’ 5.12 (dd, 9.5, 3.3) 73.8 4’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’ 2’’’’, 5’’’’
4’’’’ 3.70 (t, 9.4) 69.5 3’’’’, 5’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.73 (m) 69.9 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.31 (d, 6.2) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’
4-MeCO 171.2
4-MeCO 2.18 (s) 19.6 CO

258
CF-10 : quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(4-O-acétyl)-α-L-rhamnopyranoside (connu)
Formule brute : C44H48O23

HR-ESI-MS : m/z 967,2468 [M+Na]+ (calc. 967,2484),

925,2559 [M+Na-Ac]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -129 (c 0,091, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 318 (1,97), 256 (1,87)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.9.5 (j) CD3OD CF-10

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.6
3 135.7
4 178.4
5 161.6
6 6.43 (d, 2.1) 99.1 5, 7, 8, 10 8
7 161.8
8 6.53 (d, 2.1) 94.2 6, 7, 9, 10 6
9 156.4
10 106.3
1’ 121.3
2’ 7.37 (d, 1.8) 115.6 2, 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.5
5’ 6.93 (d, 8.3) 115.0 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.26 (dd, 8.3, 1.9) 121.5 2, 2’, 4’, 5’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ p-coumaroyl 125.5
2’’’’’ 7.22 (d, 8.7) 129.6 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 3’’’’’
3’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’ 2’’’’’
4’’’’’ 159.7
5’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 3’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 7.22 (d, 8.7) 129.6 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 5’’’’’
7’’’’’ 7.42 (d, 15.9) 145.1 1’’’’’, 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.04 (d, 15.9) 113.4 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.4
3-O-Rha (R)
1’’ 5.76 (sl) 101.2 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.38 (dl, 1.5) 82.3 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’, 3’’
3’’ 3.91 (dd, 9.9, 3.4) 70.3 4’’ 2’’, 4’’ 2’’
4’’ 3.40 (t, 9.8) 72.1 3’’, 5’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.78 (m) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.11 (d, 6.2) 16.4 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.43 (d, 7.9) 105.7 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’, 1’’
2’’’ 3.30 (dd, 9.2, 7.9) 73.7 1’’’, 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.44 (t, 9.0) 76.2 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.30 (tl, 9.2) 70.7 5’’’, 6’’’
5’’’ 3.43 (m) 73.9 4’’’ 1’’’
4.54 (dd, 11.9, 2.4) 9’’’’’ 6’’’
6’’’ 63.0
4.10 (dd, 11.1, 5.3) 5’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.55 (sl) 98.4 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.09 (dl, 1.4) 70.3 3’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 4.01 (dd, 9.8, 3.4) 68.6 4’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.06 (t, 9.8) 73.6 3’’’’, 5’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.78 (m) 67.7 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.17 (d, 6.2) 16.5 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’
4-MeCO 171.0
4-MeCO 2.12 (s) 19.6 CO

259
CF-11 : quercétine 3-O-(6-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-
rhamnopyranosyl-7-O-(3,4-O-diacetyle)-α-L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C46H50O24

HR-ESI-MS : m/z 1009,2585 [M+Na]+ (calc. 1009,2590),

967,2485 [M+Na-Ac]+, 925,1900 [M+Na-2Ac]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -116 (c 0,51, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 318 (2,20), 256 (2,12)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.16.4 (o) CD3OD CF-11

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.6
3 135.7
4 178.5
5 161.5
6 6.47 (d, 2.2) 99.1 5, 7, 8, 10 8
7 161.6
8 6.55 (d, 2.2) 94.3 6, 7, 9, 10 6
9 156.4
10 106.4
1’ 121.3
2’ 7.37 (d, 2.0) 115.6 2, 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.5
5’ 6.93 (d, 8.3) 115.0 1’, 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.27 (dd, 8.3, 2.1) 121.6 2, 4’, 5’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ p-coumaroyl 125.5
2’’’’’ 7.22 (d, 8.7) 129.6 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 3’’’’’
3’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’ 2’’’’’
4’’’’’ 159.7
5’’’’’ 6.67 (d, 8.6) 115.2 1’’’’’, 3’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 7.22 (d, 8.7) 129.6 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 5’’’’’
7’’’’’ 7.42 (d, 15.9) 145.1 1’’’’’, 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.04 (d, 15.9) 113.4 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.4
3-O-Rha (R)
1’’ 5.75 (dl, 0.9) 101.2 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 1’’’, 2’’
2’’ 4.37 (dl, 2.3) 82.2 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.91 (dd, 9.1, 3.0) 70.3 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.40 (t, 9.8) 72.1 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.79 (dq, 9.5, 6.1) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.12 (d, 6.2) 16.3 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.43 (d, 7.8) 105.7 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’, 1’’
2’’’ 3.30 (dd, 9.2, 7.8) 73.7 1’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.43 (t, 9.0) 76.2 1’’’
4’’’ 3.30 (t, 9.2) 70.7 3’’’, 6’’’
5’’’ 3.42 (m) 73.9 1’’’
4.54 (dd, 11.9, 2.5) 9’’’’’ 6’’’
6’’’ 63.0
4.06 (dd, 11.8, 6.7) 5’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.57 (sl) 98.1 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.27 (tl, 2.4) 67.9 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’, 4’’’’
3’’’’ 5.26 (dd, 9.2, 3.0) 71.5 4’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’ 5’’’’
4’’’’ 5.25 (t, 9.2) 70.8 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 6’’’’
5’’’’ 3.90 (dq, 9.5, 6.1) 67.7 4’’’’, 6’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 6’’’’
6’’’’ 1.20 (d, 6.2) 16.5 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’
3-MeCO 170.7
3-MeCO 2.12 (s) 19.4 3-CO
4-MeCO 170.4
4-MeCO 2.07 (s) 19.3 4-CO

260
CF-12 : quercétine 3-O-(6-O-E-caffeoyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-
O-α-L-rhamnopyranoside (connu)
Formule brute : C42H46O23

ESI-MS : m/z 941,4 [M+Na]+, 795,4 [M+Na-Rha]+, 617,3

[M+Na-Glu-Caffeoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -97 (c 0,35, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 334 (1,28), 254 (1,41)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.6.2.9.3 (b) CD3OD CF-12

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.6
3 135.6
4 178.5
5 161.5
6 6.42 (d, 2.1) 99.1 5, 7, 8, 10 8
7 162.1
8 6.54 (d, 2.1) 94.2 6, 7, 9, 10 6
9 156.6
10 106.2
1’ 121.4
2’ 7.39 (d, 1.8) 115.6 2, 3’, 4’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.5
5’ 6.93 (d, 8.4) 115.0 3’, 4’, 6’ 6’
6’ 7.29 (dd, 8.4, 2.1) 121.5 2, 4’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ caffeoyl 126.1
2’’’’’ 6.85 (d, 2.0) 113.5 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 6’’’’’
3’’’’’ 145.2
4’’’’’ 148.0
5’’’’’ 6.65 (d, 8.1) 114.8 3’’’’’, 4’’’’’, 1’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 6.73 (dd, 8.2, 2.1) 121.4 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 2’’’’’, 5’’’’’
7’’’’’ 7.37 (d, 15.9) 145.6 1’’’’’, 2’’’’’, 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.02 (d, 15.9) 113.3 1’’’’’, 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.4
3-O-Rha (R)
1’’ 5.72 (d, 1.0) 101.2 3, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.36 (dd, 3.5, 1.3) 82.2 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.91 (dd, 9.9, 3.6) 70.3 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.39 (t, 9.8) 72.1 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.79 (dq, 9.8, 6.2) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.11 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position du 2 du Rha (R)
1’’’ 4.42 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.30 (dd, 9.2, 8.0) 73.7 1’’’ 1’’’
3’’’ 3.43 (t, 9.1) 76.4 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.31 (t, 10.2) 70.5 3’’’, 5’’’, 6’’’
5’’’ 3.42 (ddd, 9.7, 6.2, 2.6) 73.9 4’’’ 1’’’
4.50 (dd, 11.9, 2.3) 4’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
6’’’ 62.9
4.13 (dd, 11.9, 6.3) 5’’’, 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.53 (d, 1.4) 98.5 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.06 (dd, 3.3, 1.7) 70.2 3’’’’, 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 3.85 (dd, 9.5, 3.5) 70.7 4’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.50 (t, 9.5) 72.2 2’’’’, 3’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.62 (dq, 9.5, 6.2) 69.8 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.28 (d, 6.2) 16.7 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

261
CF-13 : quercétine 3-O-(6-O-E-caffeoyl)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-
O-(4-O-acétyle)-α-L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C44H48O24

HR-ESI-MS : m/z 983,2442 [M+Na]+ (calc. 983,2433),

941,2361 [M+Na-Ac]+, 822,1884 [M+Na-Caffeoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -90 (c 0,14, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 332 (0,89), 254 (1,03)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.11.3 (i) CD3OD CF-13

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 157.6
3 135.7
4 178.5
5 161.5
6 6.44 (d, 2.1) 99.1 5, 8, 10 8
7 161.9
8 6.55 (d, 2.1) 94.2 6, 7, 9, 10 6
9 156.5
10 106.3
1’ 121.4
2’ 7.39 (d, 2.1) 115.6 2, 3’, 4’ 6’
3’ 145.0
4’ 148.5
5’ 6.94 (d, 8.3) 115.0 1’, 3’, 4’ 6’
6’ 7.29 (dd, 8.4, 2.1) 121.6 2, 2’, 4’ 2’, 5’
Acyl 1’’’’’ Caffeoyl 126.1
2’’’’’ 6.85 (d, 2.0) 113.4 3’’’’’, 4’’’’’, 6’’’’’ 6’’’’’
3’’’’’ 145.3 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’
4’’’’’ 148.0
5’’’’’ 6.65 (d, 8.2) 114.8 1’’’’’, 3’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 6.73 (dd, 8.2, 2.0) 121.6 2’’’’’, 4’’’’’, 7’’’’’ 2’’’’’, 5’’’’’
7’’’’’ 7.37 (d, 15.9) 145.5 6’’’’’, 8’’’’’, 9’’’’’ 8’’’’’
8’’’’’ 6.03 (d, 15.9) 113.3 1’’’’’, 9’’’’’ 7’’’’’
9’’’’’ 167.4
3-O-Rha (R)
1’’ 5.73 (d, 1.1) 101.2 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.36 (dd, 3.6, 1.2) 82.2 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.91 (dd, 10.0, 3.5) 70.3 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.39 (t, 9.8) 72.2 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.80 (dq, 9.7, 6.2) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 1.11 (d, 6.2) 16.3 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rha (R)
1’’’ 4.42 (d, 7.9) 105.8 R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.30 (dd, 9.1, 8.0) 73.7 1’’’, 3’’’ 1’’’
3’’’ 3.43 (t, 9.2) 76.2 1’’’
4’’’ 3.31 (t, 9.2) 70.5 3’’’, 5’’’
5’’’ 3.42 (m) 73.9 6’’’ 1’’’
4.52 (dd, 12.0, 2.3) 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
6’’’ 63.0
4.12 (dd, 12.0, 6.5) 9’’’’’ 5’’’, 6’’’
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.56 (d, 1.4) 98.3 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.11 (m) 70.3 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 4.01 (dd, 9.8, 3.4) 68.6 4’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.05 (t, 9.8) 73.7 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.78 (dd, 9.7, 6.3) 67.7 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.16 (d, 6.2) 16.5 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’
4-MeCO 171.0
4-MeCO 2.12 (s) 19.6 CO

262
CF-14 : kaempférol 3-O-β-glucopyranosyl-(1→2)-α-rhamnopyranosyl-7-O-(4-acetyl)-α-
rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C35H42O20

HR-ESI-MS : m/z 805,2173 [M+Na]+ (calc. 805,2167),

763,2096 [M+Na-Ac]+, 617,1521 [M+Na-Rha-Ac]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -62 (c 0,073, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 342 (0,66), 266 (1,08); NaOMe

388 (0,63), 268 (0,67); AlCl3 346 (0,41), 268 (0,65);
AlCl3+HCl 342 (0,40), 274 (0,65); NaOAc 344 (0,65), 266
(1,07); NaOAc+H3BO3 342 (0,66), 266 (1,08)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.9.9.3 (i2) CD3OD CF-14

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
2 158.6
3 135.4
4 178.4
5 161.6
6 6.52 (d, 2.1) 99.3 5, 8, 10 8
7 162.0
8 6.80 (d, 2.1) 94.3 6, 7, 9, 10 6
9 156.8
10 106.3
1’ 120.9
2’ 7.82 (d, 8.8) 130.7 2, 4’, 6’ 3’, 6’
3’ 6.89 (d, 8.8) 115.2 2, 1’, 5’ 2’, 5’
4’ 160.5
5’ 6.89 (d, 8.8) 115.2 2, 1’, 3’ 3’, 6’’
6’ 7.82 (d, 8.8) 130.7 2, 2’, 4’ 2’, 5’
3-O-Rha (R)
1’’ 5.75 (d, 1.1) 101.3 3, 2’’, 3’’, 5’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.32 (dd, 3.4, 1.4) 81.3 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’
3’’ 3.83 (dd, 9.8, 3.4) 70.4 2’’, 4’’
4’’ 3.35 (t, 9.6) 72.0 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.47 (dq, 9.5, 6.2) 70.6 3’’, 4’’, 6’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 0.98 (d, 6.2) 16.2 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rhamnose
1’’’ 4.44 (d, 7.9) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.25 (dd, 8.5, 8.4) 73.9 1’’’ 1’’’
3’’’ 3.39 (t, 8.8) 76.4 5’’’ 1’’’
4’’’ 3.35 (t, 9.6) 69.5
5’’’ 3.23 (m) 76.5 3’’’ 6’’’ 1’’’
3.73 (dd, 12.1, 2.4)
6’’’ 60.9 5’’’
3.69 (dd, 12.1, 4.7)
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.62 (sl) 98.3 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 4.08 (m, w1/2 = 5) 70.3 4’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 4.02 (dd, 9.8, 3.4) 68.6 4’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.06 (t, 9.8) 73.6 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’
5’’’’ 3.78 (dq, 9.8, 6.2) 67.7 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.17 (d, 6.2) 16.5 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 5’’’’

4-MeCO 171.0
4-MeCO 2.12 (s) 19.6 CO

263
CF-15 : kaempférol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-7-O-(2,4-diacetyl)-
α-L-rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C37H44O21

HR-ESI-MS : m/z 847,2269 [M+Na]+ (calc. 847,2273),

685,4360 [M+Na-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -102 (c 0,064, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 342 (0,98), 266 (1,46); NaOMe

388 (0,65), 266 (0,68); AlCl3 346 (0,44), 266 (0,62);
AlCl3+HCl 342 (0,43), 268 (0,60); NaOAc 344 (0,95), 264
(1,43); NaOAc+H3BO3 344 (0,96), 264 (1,43)

3.13.25.12.5 CD3OD CF-15

No 1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH)
2 158.7
3 135.5
4 178.4
5 161.6 b
6 6.55 (d, 2.1) 99.2 5, 7
7 161.7 b
8 6.80 (d, 1.9) 94.4
9 156.7
10 106.0
1’ 120.9
2’ 7.82 (d, 8.7) 130.7 2, 4’
3’ 7.00 (d, 8.7) 115.2 1’, 4’
4’ 160.5
5’ 7.00 (d, 8.7) 115.2 1’, 4’
6’ 7.82 (d, 8.7) 130.7 2, 4’
3-O-Rha (R)
1’’ 5.75 (d, 1.1) 101.3 3, 2’’, 5’’ 2’’
2’’ 4.32 (dd, 3.4, 1.5) 81.3 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’
3’’ 3.83 (dd, 9.5, 3.4) 70.4 4’’ 2’’, 4’’
4’’ 3.35 (t, 9.7) 72.0 3’’, 5’’, 6’’ 3’’, 5’’
5’’ 3.48 (dq, 9.6, 6.2) 70.6 4’’, 6’’
6’’ 0.98 (d, 6.2) 16.2 5’’ 5’’
Glu en position 2 du Rha (R)
1’’’ 4.43 (d, 7.8) 105.8 2’’’, 3’’’, R-2’’ 2’’’
2’’’ 3.25 (tl, 8.4) 73.9 3’’’ 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.39 (t, 8.9) 76.4 4’’’ 2’’’, 4’’’
4’’’ 3.35 (t, 9.7) 69.5 3’’’, 5’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 3.22 (m) 76.5 4’’’, 6’’’
3.73 (dd, 12.2, 2.3)
6’’’ 60.9 5’’’ 5’’’
3.69 (dd, 12.2, 4.6)
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.70 (d, 1.3) 95.5 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’
2’’’’ 5.30 (dd, 3.6, 1.7) 71.7 3’’’’, 4’’’’, CO 1’’’’, 3’’’’
3’’’’ 4.22 (dd, 9.9, 3.7) 66.8 2’’’’, 4’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 5.00 (t, 9.8) 73.4 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’, CO 3’’’’, 5’’’’
5’’’’ 3.85 (dq, 9.5, 6.2) 67.7 4’’’’ 4’’’’, 6’’’’
6’’’’ 1.18 (d, 6.2) 16.5 5’’’’

2-MeCO 170.7 a
2-MeCO 2.21 (s) 19.4 2-CO
4-MeCO 170.6 a
4-MeCO 2.13 (s) 19.5 4-CO

264
CF-16 : kaempférol 3-O-β-glucopyranosyl–(1→2)-α-rhamnopyranosyl-7-O-(2,3-diacetyl)-α-L-
rhamnopyranoside (nouveau)
Formule brute : C37H44O21

HR-ESI-MS : m/z 847,2266 [M+Na]+ (calc. 847,2273),

805,2411 [M+Na-Ac]+, 685,4446 [M+Na-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -58 (c 0,064, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 342 (0,35), 266 (0,59); NaOMe

388 (0,56), 266 (0,62); AlCl3 346 (0,28), 268 (0,47);
AlCl3+HCl 342 (0,28), 274 (0,47); NaOAc 344 (0,33), 266
(0,58); NaOAc+H3BO3 342 (0,33), 266 (0,57)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

3.13.25.12.6 CD3OD CF-16

No 1H 13C
COSY ROESY
HMBC (HC)
(HH) (HH)
2 158.7
3 135.5
4 178.5
5 161.6 a
6 6.57 (d, 2.2) 99.3 5, 7
7 161.8 a
8 6.82 (d, 2.2) 94.5 9
9 156.7
10 106.5
1’ 120.9
2’ 7.85 (d, 8.9) 130.7 6’
3’ 6.99 (d, 8.9) 115.2 1’, 4’, 5’
4’ 160.6
5’ 6.99 (d, 8.9) 115.2 1’, 4’, 3’
6’ 7.85 (d, 8.9) 130.7 2’
3-O-Rha (R)
1’’ 5.75 (d, 1.4) 101.3 3, 3’’ 2’’ 2’’
2’’ 4.32 (dd, 3.6, 1.6) 81.3 3’’, 4’’, G-1’’’ 1’’, 3’’ 1’’, 3’’
3’’ 3.83 (dd, 9.8, 3.5) 70.4 2’’, 4’’ 2’’
4’’ 3.34 (t, 9.5) 72.0 3’’, 6’’ 3’’, 5’’ 6’’
5’’ 3.47 (dq, 9.5, 6.2) 70.6 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 0.98 (d, 6.2) 16.2 4’’, 5’’ 5’’ 4’’, 5’’
Glu en position 2 du Rha (R)
1’’’ 4.43 (d, 7.8) 105.8 3’’’, R-2’’ 2’’’ 3’’’, 5’’’
2’’’ 3.25 (t, 8.4) 73.9 1’’’, 3’’’
3’’’ 3.39 (t, 8.9) 76.4 2’’’, 4’’’ 1’’’
4’’’ 3.35 (t, 9.5) 69.5 5’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 3.22 (m) 76.5 4’’’, 6’’’ 1’’’
3.73 (dd, 12.2, 2.5)
6’’’ 60.9 5’’’
3.68 (dd, 12.2, 4.7)
7-O-Rha (R’)
1’’’’ 5.70 (d, 1.6) 95.7 7, 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’ 2’’’’ 6, 8, 2’’’’
2’’’’ 5.43 (dd, 3.5, 1.8) 69.1 3’’’’ 1’’’’, 3’’’’ 1’’’’
3’’’’ 5.25 (dd, 10.0, 3.5) 71.3 4’’’’, CO 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 3.63 (dd, 10.0, 10.0) 69.6 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’ 6’’’’
5’’’’ 3.78 (dq, 9.5, 6.1) 69.9 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 1.32 (d, 6.2) 16.6 4’’’’, 5’’’’ 5’’’’ 4’’’’, 5’’’’

2-MeCO 170.9
2-MeCO 2.08 (s) 19.4 2-CO
3-MeCO 170.2
3-MeCO 2.18 (s) 19.2 3-CO

265
CM-1 : 5,6-époxy-3,4,9-trihydroxy-7-mégastigmen-4-O-β-D-glucopyranoside (nouveau)
Formule brute : C19H32O9

HR-ESI-MS : m/z 427,1932 [M+Na]+ (calc. 427,1944),

Pouvoir rotatoire : [α]D -18 (c 0,082, MeOH)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

CM-1 (3.13.25.6) CD3OD

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) NOESY (HH)
1 33.9
1.28 (ddd, 13.2, 3.6, 1.1) eq 1, 3, 4, 6, 11 2, 11
2 40.7 3
1.69 (t, 12.6) ax 1, 11, 12 2, 12
3 3.84 (dt, 13.3, 3.3) ax 64.7 2 4 2, 4, 11
4 4.05 (d, 2.3) eq 83.5 2, 3, 5, 6, 13, 1’ 3 3, 13, 1’
5 67.6
6 70.3
7 5.91 (dd, 15.5, 1.3) 124.1 5, 6 8 9,10, 11, 12,13
8 5.69 (dd, 15.5, 5.6) 138.1 5, 6 7, 9 9, 10, 11, 13
9 4.33 (qtd, 6.2, 1.1) 67.2 7, 8 8, 10 7, 8, 10
10 1.25 (d, 6.5) 22.4 8, 9 9 7, 8, 9
11 0.98 (s) ax 23.5 1, 2, 6, 12 3, 2eq
12 1.09 (s) eq 28.1 1, 2, 6, 11 7, 2ax
13 1.41 (s) 15.6 4, 5, 6 4, 7, 8, 1’
Glucose
1’ 4.43 (d, 7.9) 104.5 4, 2’, 3’ 2’ 4, 13, 3’, 5’
2’ 3.28 (dd, 9.1, 7.9) 73.6 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.40 (tl, 8.8) 76.6 1’, 2’, 4’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.35 (m) 69.9 3’, 5’ 3’
5’ 3.37 (m) 76.8 6’ 6’ 1’, 3’
3.89 (dd, 11.8, 1.9) 5’ 5’, 6’
6’ 61.0
3.68 (dd, 11.9, 5.5) 5’ 5’ 6’

266
CM-2 : 3,4,5,6,9-pentahydroxy-7-mégastigmen-3-O-β-D-glucopyranoside (nouveau)
Formule brute : C19H34O10

HR-ESI-MS : m/z 445,2038 [M+Na]+ (calc. 445,2050),

261,1227 [M+Na-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -44 (c 0,036, MeOH)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

CM-2 (3.13.22.8.4) CD3OD

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1 39.5
1.45 (ddd, 13.1, 4.6, 1.0) eq 1, 3, 4, 6, 11 2, 3,4 2
2 36.8
1.98 (t, 12.8) ax 1, 3,4, 12 2, 3 2, 12
3 4.39 (ddd, 12.5, 4.5, 1.9) 73.4 2, 4, 1’ 2, 4 4, 11, 1’
4 3.81 (d, 1.9) 75.5 2, 3, 5, 6, 13 2, 3 13
5 74.9
6 79.1
7 5.93 (dd, 15.7, 1.0) 128.2 5, 6, 8, 9 8 9, 11
8 5.80 (dd, 15.7, 6.3) 135.0 6, 7, 9 7, 9
9 4.33 (qtd, 6.4, 1.0) 68.1 7, 10 8, 10 7, 10
10 1.28 (d, 6.5) 22.6 8, 9 9
11 1.26 (s) 25.1 1, 2, 6, 12 2, 12
12 0.92 (s) 26.1 1, 2, 6, 11 11
13 1.30 (s) 22.7 4, 5, 6
Glucose
1’ 4.45 (d, 7.8) 101.0 3, 2’ 2’ 3’, 5’, 4
2’ 3.23 (dd, 9.0, 7.9) 73.7 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.39 (t, 8.8) 76.5 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.35 (tl, 9.2) 70.1 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.30 (ddd, 9.4, 5.4, 2.4) 76.6 4’ 4’, 6’ 1’
3.88 (dd, 11.9, 2.3) 4’,
6’ 61.2 5’
3.72 (dd, 11.9, 5.3) 5’

267
CM-3 : (6S, 7E)-4,6,9-trihydroxymégastigman-4,7-dien-3-one-4-O-β-D-glucopyranoside
(nouveau)
Formule brute : C19H30O9

HR-ESI-MS : m/z 425,1786 [M+Na]+ (calc. 425,1788),

265,1272 [M+Na+2H-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +26 (c 0,045, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) : +9161 (253,2)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

CM-3 (3.13.22.6) CD3OD

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) NOESY (HH)
1 41.3
2.21 (d, 16.4) 2, 11
2 49.1 1, 3, 6, 11, 12 11, 12
2.54 (d, 16.4) 2, 12
3 194.7
4 144.9
5 150.7
6 78.9
7 5.74 (dd, 15.7, 0.7) 128.9 5, 6, 8, 9 8 9, 10, 12
8 5.82 (dd, 15.7, 5.8) 136.0 6, 7, 9 7, 9 10, 12
9 4.33 (qtl, 6.2) 67.5 8, 10 10
10 1.27 (d, 6.0) 22.4 8, 9 9
11 1.04 (s) 21.8 1, 2, 6, 12
12 1.03 (s) 22.9 1, 2, 6, 11
13 1.96 (s) 12.4 3, 4, 5, 6, 7
Glucose
1’ 4.81 (d, 7.3) 102.3 4, 5’ 2’ 3’, 5’
2’ 3.38 (tl, 7.8) 74.3 3’ 1’
3’ 3.41 (t, 8.9) 76.7 2’ 1’
4’ 3.35 (t, 9.4) 69.9 5’
5’ 3.22 (ddd, 9.5, 5.3, 2.2) 77.0 4’, 6’ 1’
3.84 (dd, 12.0, 2.2) 5’ 5’, 6’
6’ 61.1
3.67 (dd, 12.0, 5.4) 5’ 5’, 6’

268
CD-2 : ester méthylique de l’acide 6-O-β-D-glucopyranose-6-hydroxyindole-3-carboxylique
(nouveau)
Formule brute : C16H19NO8

HR-ESI-MS : m/z 376,1012 [M+Na]+ (calc. 376,1008),

346,0930 [M+Na-MeO]+, 295,1524 [M+Na-MeOCO]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -29 (c 0,15, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 278 (2,69)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

CD-2 (4.4.13.9) CD3OD

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) NOESY (HH)

2 7.90 (s) 131.5 3, 7, 8, 9, 10

3 106.9
4 7.95 (dd, 8.7, 0.3) 120.9 3, 5, 7, 8, 9 5
5 7.06 (dd, 8.7, 2.1) 112.8 6, 7, 9 4, 7
6 154.7
7 7.24 (dd, 2.2, 0.3) 99.2 5, 6, 8, 9 5
8 137.1
9 121.4
10 166.4
CH3 3.89 (s) 50.0 10
Glucose
1’ 4.93 (d, 7.6) 102.0 6, 3’ 2’ 5’, 3’
2’ 3.50 (dd, 9.2, 7.7) 73.6 3’ 1’, 3’
3’ 3.45 (m) 76.6 2’, 4’ 2’, 4’ 5’, 1’
4’ 3.43 (m) 70.0 3’, 5’ 5’, 3’
5’ 3.47 (m) 76.8 4’ 4’, 6’ 1’, 3’
3.94 (dd, 12.0, 2.2) 5’ 5’, 6’
6’ 61.2
3.75 (dd, 12.0, 5.5) 5’, 6’

269
Composés isolés de Dolichandrone spathacea

DSI-8 : 6-O-(p-méthoxy-E-cinnamoyle)-ajugol (nouveau)

Formule brute : C25H32O11

HR-ESI-MS : m/z 531,1848 [M+Na]+ (calc. 531,1842),

483,2442 [M+Na-MeO-OH]+, 185,2039 [Ajugol-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -143 (c 0,39, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 308 (2,41), 226 (1,31), 202 (1,49)

IR : (KBr) max cm-1 : 3428, 2931, 1706, 1662, 1632, 1575,

1514, 1475, 1368, 1290, 1170, 1002, 825, 777

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.6.7.12.5 (p) DSI-8 CD3OD

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1 5.53 (d, 2.5) 92.0 1’, 3, 5, 8 9 1’, 9, 10
3 6.24 (dd, 6.3, 2.2) 139.7 1, 4, 5 4, 5 4
4 5.00 (dd, 6.3, 2.6) 103.2 3, 5, 6, 9 3, 5 3, 5
5 2.95 (dd, 9.1, 2.3) 38.0 6, 8, 3, 4 3, 4, 9 4, 6
6 4.96 (ddd, 6.5, 4.1, 2.7) 78.9 9’’, 9, 8, 4 5, 7 5, 7α
2.02 (dd, 14.2, 4.0) β 10, 5, 9, 8, 6 6, 7 7α
7 46.5
2.27 (dd, 14.2, 6.4) α 10, 5, 9, 8 6, 7 6, 7β, 10
8 77.7
9 2.60 (dd, 9.3, 2.3) 50.2 1, 4, 5, 8 1, 5 1, 5
10 1.41 (s) 24.7 7, 8, 9 1, 7α
1-Glucose
1’ 4.69 (d, 8.0) 98.0 1, 2’, 3’, 5’ 2’ 1, 3’, 5’
2’ 3.22 (dd, 9.2, 7.9) 73.4 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.39 (dd, 9.2, 8.7) 76.6 1’, 2’, 4’, 5’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.31 (dd, 9.2, 8.6) 71.8 3’, 5’, 6’ 3’
5’ 3.33 (m) 76.8 1’, 4’, 6’ 6’ 1’, 3’
3.68 (dd, 12.0, 6.0) 6’, 4’ 5’, 6’
6’ 61.5
3.92 (dd, 12.0, 2.2) 6’, 5’ 6’
6-Acyl
1’’ 127.0
2’’ 7.56 (d, 8.6) 129.6 6’’, 3’’, 4’’, 7’’ 3’’ 8’’
3’’ 6.97 (d, 8.7) 114.0 1’’, 5’’, 4’’ 2’’ OCH3
4’’ 161.9
5’’ 6.97 (d, 8.7) 114.0 1’’, 3’’, 4’’ 6’’ OCH3
6’’ 7.56 (d, 8.6) 129.6 2’’, 3’’, 4’’, 7’’ 5’’ 8’’
7’’ 7.68 (d, 16.0) 144.8 1’’, 2’’, 8’’, 9’’ 8’’
8’’ 6.43 (d, 16.0) 115.0 1’’, 2’’, 7’’, 9’’ 7’’ 2’’, 6’’
9’’ 167.4
OCH3 3.85 (s) 54.5 4’’ 3’’, 5’’

270
DSI-14 : 6-O-(2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoyl-catalpol (nouveau)
Formule brute : C25H38O12

HR-ESI-MS : m/z 553,2256 [M+Na]+ (calc. 553,2261),

385,1032 [M+Na-Ester]+, 351,2457 [M-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -107 (c 0,22, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 222 (4,04)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.15.8 (n’) DSI-14 CD3OD

No
1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1 5.18 (d, 9.6) 95.1 1’, 8, 9 9 1’
3 6.39 (d, 6.0) 142.4 1, 4, 5 4 4
4 4.98 (dd, 5.6, 4.1) 102.9 3, 5, 9 3, 5 3, 5
5 2.59 (m) 36.7 4, 6, 9 6, 4 4
6 4.98 (d, 7.7) 81.6 1’’, 4, 7, 9 5, 7 7
7 3.70 (sl) 60.2 5, 6 6 6
8 66.8
9 2.63 (dd, 9.3, 7.9) 43.2 1, 5, 6, 7, 8 1
4.18 (d, 13.2) 7, 8 10
10 61.3
3.85 (d, 13.1) 7, 8, 9 10
1-Glucose
1’ 4.81 (d, 7.9) 99.7 2’, 3’, 5’ 2’ 1, 3’
2’ 3.30 (dd, 8.8, 8.3) 74.9 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.43 (t, 9.0) 77.7 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.28 (t, 9.3) 71.8 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.35 (ddd, 9.4, 6.3, 1.5) 78.7 1’, 4’, 6’ 4’, 6’
3.67 (dd, 12.2, 6.1) 4’ 5’, 6’
6’ 62.9
3.95 (dl, 11.9) 5’ 5’, 6’
6-Acyl
1’’ 169.5
2’’ 128.3
3’’ 6.88 (t, 7.3) 145.0 1’’, 4’’, 5’’, 9’’ 4’’, 9’’
4’’ 2.29 (m) 27.3 2’’, 3’’, 5’’ 3’’, 5’’ 9’’
1.53 (m) 4’’, 6’’, 7’’, 10’’ 4’’, 5’’
5’’ 36.9
1.33 (m) 4’’, 6’’, 7’’, 10’’ 4’’, 5’’ 10’’
6’’ 1.65 (m) 30.5 8’’, 10’’ 10’’
1.62 (m) 6’’, 8’’, 10’’ 7’’, 8’’
7’’ 40.6
1.40 (m) 6’’, 8’’, 10’’ 7’’, 8’’ 10’’
8’’ 3.62 (m) 60.9 6’’, 7’’ 7’’
9’’ 1.89 (s) 12.5 1’’, 2’’, 3’’ 3’’ 4’’
10’’ 0.97 (d, 6.4) 19.8 5’’, 6’’, 7’’ 6’’ 5’’, 7’’

271
DSI-15 : 6-O-((2E,6R)-8-hydroxy-2,6-diméthyle-2-octenoyl)-ajugol (nouveau)
Formule brute : C25H40O11

HR-ESI-MS : m/z 539,2462 [M+Na]+ (calc. 539,2468)

Pouvoir rotatoire : [α]D -94 (c 0,25, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 224 (4,21)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.15.6 (n) DSI-15 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1 5.56 (d, 2.4) 93.4 1’, 8, 3, 5 9 9, 10
3 6.23 (dd, 6.3, 2.2) 141.1 1, 4, 5 4, 5 4
4 4.97 (dd, 6.3, 2.7) 104.6 3, 5, 9, 6 3, 5 3, 5
5 2.90 (dq, 9.2, 2.2) 39.3 4, 6, 8 3, 4, 9 4, 9
6 4.89 (m) 80.5 1’’, 4, 8 7
2.23 (dd, 14.3, 6.5) α 5, 8, 9, 10 6, 7 6
7 47.8
1.98 (dd, 14.3, 4.0) β 5, 6, 8, 9, 10 6, 7
8 79.0
9 2.59 (dd, 9.2, 2.0) 51.6 1, 5, 4, 8, 10 1, 5 1, 5
10 1.39 (s) 26.1 7, 8, 9 10 1
1-Glucose
1’ 4.68 (d, 7.9) 99.4 1, 3’, 5’ 2’
2’ 3.22 (dd, 9.2, 8.1) 74.8 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.59 (t, 8.9) 78.0 2’, 4’ 2’, 4’
4’ 3.29 (dd, 9.7, 8.5) 71.7 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.32 (m) 78.2 1’, 4’, 6’ 4’, 6’
3.68 (dd, 12.0, 5.9) 4’ 5’, 6’
6’ 62.9
3.92 (dd, 12.0, 3.1) 4’, 5’ 5’, 6’
6-Acyl
1’’ 169.5
2’’ 128.8
3’’ 6.83 (td, 7.5, 1.3) 144.3 1’’, 2’’, 4’’, 5’’, 9’’ 4’’, 9’’ 4’’
4’’ 2.28 (m) 27.2 2’’, 3’’, 5’, 6’’’ 3’’, 5’’ 3’’
1.50 (m) 3’’, 4’’, 6’’, 7’’, 10’’ 4’’, 5’’
5’’ 36.9
1.32 (m) 3’’, 4’’, 6’’, 7’’, 10’’ 4’’, 5’’
6’’ 1.65 (m) 30.5 7’’, 10’’ 10’’
1.61 (m) 5’’, 6’’, 8’’, 10’’ 7’’, 8’’
7’’ 40.6
1.37 (m) 5’’, 6’’, 8’’, 10’’ 7’’, 8’’
3.64 (m) 7’’
8’’ 60.9 6’’, 7’’
3.60 (m)
9’’ 1.85 (s) 12.4 1’’, 2’’, 3’’ 3’’
10’’ 0.97 (d, 6.5) 19.8 5’’, 6’’, 7’’ 6’’

272
DSC-9 : acide 3β, 6β, 19α-trihydroxyurs-12-en-28-oique-28-O-β-D-glucopyranoside
(nouveau)
Formule brute : C36H58O10

HR-ESI-MS : m/z 673,3934 [M+Na]+ (calc. 673,3928),

457,2697 [M-Glu-OH]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -18 (c 0,12, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 308 (1,73), 210 (3,59)

IR : (KBr) max cm-1 : 3423, 2929, 1734, 1653, 1604,

1513, 1458, 1383, 1260, 1165, 1074

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.21.1 (k’’’) DSC-9 CD3OD

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1,00 (m)
1 42.1
1,62 (m) 2, 10, 3
1,74 (m)
2 28.0
1,59 (m) 3
3 3,10 (dd, 11.7, 4.1) 80.2 1, 4, 23, 24 2 2, 5, 23
4 40.7
5 0,75 (sl) 57.2 25, 10, 4, 6, 9, 3 6 3, 6, 9
6 4,50 (sl, w1/2= 7.5) 69.0 5, 7 5, 7, 23
1,55 (dd, 14.5, 2.0) eq 6, 26, 8, 9, 5 6 6
7 41.8
1,74 (m) ax 6 6, 25
8 40.3
9 1,73 (m) 49.0 26 5
10 37.6
11 2,06 (m) 24.7 12, 13 9, 12 12
12 5,36 (t, 3.4) 130.0 11, 14, 17, 18, 19 11, 18 11, 18, 29
13 138.9
14 43.1
1,91 (td, 14.0, 4.4) ax 15, 16, 27 15
15 29.7
1,03 (m) eq 15
2,62 (td, 13.3, 4.3) ax 28, 15, 17 15, 16 16, 22
16 26.6
1,66 (m) eq 28, 17 15, 16 16, 22
17 49.3
18 2,55 (sl) 55.0 12, 13, 28, 16, 17, 20, 19 16 12, 29, 20
19 73.7
20 1,38 (m) 43.0 21, 30 18
1,75 (m) 20, 22
21 27.2
1,27 (m) 20, 22
1,81 (m) 20, 17 21
22 38.3
1,66 (m) 20, 16, 21 21
23 1,07 (s) 28.4 24, 4, 5, 3 24 3, 6
24 1,18 (s) 17.6 23, 4, 5, 3 23
25 1,33 (s) 17.4 10, 1, 9, 5 7
26 1,07 (s) 18.7 9, 8, 14
27 1,32 (s) 24.7 13, 15, 8, 14 15
28 178.5
29 1,23 (s) 27.1 18, 20, 19 12, 18
30 0,95 (d, 6.7) 16.6 19, 20, 21 20
Glu
1’ 5,33 (d, 8.1) 95.9 3’, 5’, 28 2’ 3’, 5’
2’ 3,34 (tl, 8.2) 73.9 3’, 4’ 1’, 3’
3’ 3.43 (t, 8.9) 78.3 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3,37 (t, 9.0) 71.2 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.33 (m) 78.6 4’, 6’ 4’, 6’ 1’, 6’
3.82 (dd, 11.8, 2.0) 4’, 5’ 5’, 6’ 5’
6’ 62.4
3,70 (dd, 11.9, 4.6) 4’, 5’ 5’, 6’ 5’

273
DSC-10 : acide 3β, 6β, 19α, 23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oique-28-O-β-D-glucopyranoside
(nouveau)
Formule brute : C36H58O11

HR-ESI-MS : m/z 689,3869 [M+Na]+ (calc.

689,3877), 503,3242[M-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -7 (c 0,19, MeOH)

UV : λ nm (log ) MeOH 298 (1,02), 214 (4,04)

IR : (KBr) max cm-1 : 3422, 2927, 1732, 1651, 1598,

1455, 1384, 1229, 1072

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.8(2).23.1 (k’’) DSC-10 CD3OD

No
1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY (HH)
1.02 (m) 1, 2 2
1 41.7
1.61 (m) 2, 5 1, 2
1.61 (m) 3, 10 1, 2, 3 1
2 27.6
1.77 (m) 3, 10 1, 2, 3
3 3.58 (dd, 11.7, 3.8) 73.9 2, 4, 23, 24 2 2, 5
4 44.2
5 1.19 (sl) 49.5 3, 6, 23 6 6, 9
6 4.41 (sl, w1/2=7.8) 68.9 8 5, 7 5, 7, 23
1.51 (dl, 14.2) 6, 26, 8, 9, 5 6, 7, 26 7
7 41.4
1.81 (m) 8, 14 6, 7 7
8 40.3
9 1.77 (m) 48.9 7, 8, 10, 11, 25, 26 11 5, 27
10 37.3
11 2.07 (m) 24.7 12, 13 9, 12 25
12 5.36 (tl, 3.4) 130.0 9, 11, 13, 14, 18, 19 11, 18 11, 18, 29
13 138.9
14 43.1
1.91 (td, 13.9, 3.9) ax 8, 14, 16, 17, 27 15, 16, 27 15
15 29.7
1.04 (m) eq 15 15
2.62 (td, 13.3, 4.3) ax 28, 15, 17 15, 16, 18 16, 27
16 26.6
1.66 (dl, 13.0) eq 17 15, 16 16
17 48.6
18 2.25 (s) 55.0 12, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 28 12, 16 20, 29
19 73.7
20 1.38 (m) 43.0 21 30 18
1.28 (m) 21, 22
21 27.2 17 22
1.76 (m) 21, 22
1.66 (dl, 12.6) 20, 16 21, 22 20, 21, 22
22 38.3
1.80 (m) 17, 16 21, 22 21, 22
3.50 (d, 10.9) 24, 4, 5, 3 23 6, 24
23 66.8
3.62 (d, 11.0) 24, 4, 5, 3 23 24
24 1.09 (s) 14.1 23, 4, 5, 3 23
25 1.35 (s) 17.7 10, 1, 9, 5
26 1.07 (s) 18.7 7, 8, 9, 14 7
27 1.33 (s) 24.7 8, 13, 14, 15 15 9, 16
28 178.5
29 1.23 (s) 27.1 18, 20, 19 18
30 0.95 (d, 6.7) 16.6 19, 20, 21 20
Glu
1’ 5.33 (d, 8.2) 95.9 3’, 5’, 28 2’ 3’, 5’
2’ 3.35 (t, 8.2) 73.9 3’ 1’, 3’
3’ 3.43 (t, 8.8) 78.3 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.38 (dd, 9.4, 8.5) 71.2 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.35 (m) 78.6 4’ 4’, 6’ 1’
3.83 (dd, 12.0, 1.9) 4’, 5’ 5’, 6’
6’ 62.4
3.71 (dd, 12.0, 4.6) 4’, 5’ 5’, 6’

274
Composés isolés de Flacourtia rukam
FRP-1 : alcool 2-(2’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-benzoyl-1’’,6’’-dihydroxy-3-oxo-
cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C34H32O15

HR-ESI-MS : m/z 703.1645 [M+Na]+ (Calc. 703.1639),

559,4249 [M-Benzoate]+ , 397,2863 [M-Benzoate-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D – 16,0 (c 0,22, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) : +15669 (221,5) ;

+16645 (241,5)
UV : MeOH λ nm (log ) 282 (1,83)

IR : (KBr) max cm-1 : 3448, 2931, 1700, 1602, 1499, 1452,

1384, 1318, 1273, 1207, 1138, 1072, 1026, 712

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.23.4.5 (t) FRP-1 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 127.2
2 149.7
3 6.75 (d, 8.9) 117.5 1, 2, 5, 7 4 4, 1’
4 6.31 (dd, 8.9, 2.9) 115.4 2, 5, 6 3, 6 3
5 153.8
6 6.53 (d,2.9) 115.8 2, 4, 5, 7 4 7
4.90 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
7 64.1
4.83 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
Glucose
1’ 4.93 (d, 8.0) 102.0 2, 5’ 2’ 3, 3’, 5’
2’ 5.13 (dd, 9.6, 8.1) 75.8 1’, 3’, 7’’’ 1’, 3’
3’ 3.68 (dd, 9.7, 8.9) 76.0 2’, 4’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.45 (dd, 9.6, 9.1) 71.5 3’, 5’ 3’, 5’
5’ 3.38 (ddd, 9.6, 5.4, 2.1) 78.3 4’ 4’, 6’ 3’, 1’
3.83 (dd, 12.0, 2.2) 4’, 5’ 6’ 5’, 6’
6’ 62.5
3.66 (dd, 12.0, 5.6) 4’, 5’ 5’, 6’ 6’
cyclohexenone
1’’ 84.2
2’’ 5.77 (s) 78.7 1’’, 3’’, 6’’, 7’’’
3’’ 192.4
4’’ 5.98 (dd, 10.4, 2.6) 127.4 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.72 (dd, 10.4, 1.9) 151.2 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’ 4’’, 6’’
6’’ 4.98 (t, 2.2) 72.1 5’’, 4’’, 7’’ 4’’, 5’’ 5’’, 6’’
7’’ 171.2
benzoyle
1’’’ 131.2
2’’’ 7.95 (d, 7.3) 130.8 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.33 (t, 7.7) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 5’’’, 7’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.45 (t, 7.5) 134.5 3’’’, 2’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.33 (t, 7.7) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 3’’’, 7’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 7.95 (d, 7.3) 130.8 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 167.4
benzoyle
1’’’’ 130.3
2’’’’ 7.82 (d, 7.3) 131.0 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’, 7’’’’ 6’’’’, 3’’’’
3’’’’ 7.31 (t, 7.6) 129.5 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’
4’’’’ 7.48 (t, 7.5) 134.5 3’’’’, 2’’’’ 5’’’’, 3’’’’
5’’’’ 7.31 (t, 7.6) 129.5 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 3’’’’, 7’’’’ 6’’’’, 4’’’’, 3’’’’
6’’’’ 7.82 (d, 7.3) 131.0 3’’’’, 4’’’’, 2’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 5’’’’
7’’’’ 166.5

275
FRP-2 : alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-E-cinnamoyl-1’’,6’’-dihydroxy-3-
oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C36H34O15

HR-ESI-MS : m/z 729.1791 [M+Na]+ (Calc. 729.1795),

559,4258 [M-Cinnamate]+

Pouvoir rotatoire : [α]D – 16,5 (c 0,091, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +21530 (236,4)

UV : MeOH λ nm (log ) 280 (1,59)

IR : (KBr) max cm-1 : 3423, 2925, 1702, 1634, 1500,

1452, 1382, 1281, 1206, 1139, 1068, 715

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.25.6.2 (w) FRP-2 CD3OD

No 1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.5
2 148.5
3 6.92 (d, 8.8) 118.3 1, 2, 5, 7 4 1’, 4
4 6.39 (dd, 8.8, 3.0) 115.6 2, 5, 6 3, 6 3
5 152.7
6 6.77 (d, 3.0) 116.2 2, 4, 5, 7 4 7
5.36 (d, 12.2) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
7 62.8
5.30 (d, 12.2) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
Glucose
1’ 4.68 (d, 7.4) 102.9 2’, 3’, 5’, 2 2’ 3, 3’, 5’
2’ 3.52 (dd, 9.0, 7.4) 73.6 3’, 1’ 1’, 3’
3’ 3.49 (t, 9.1) 76.4 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.43 (t, 9.2) 70.5 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.61 (ddd, 9.6, 7.3, 2.2) 74.1 1’, 4’, 6’ 4’, 6’ 1’
4.69 (dd, 11.6, 2.2) 4’, 7’’’ 6’ 6’
6’ 63.9
4.38 (dd, 11.7, 7.4) 4’, 5’, 7’’’ 5’, 6’ 6’
cyclohexenone
1’’ 83.1
2’’ 5.85 (s) 76.7 1’’, 3’’, 6’’, 9’’’’
3’’ 191.2
4’’ 6.10 (dd, 10.4, 2.6) 126.0 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.83 (dd, 10.5, 1.8) 149.8 1’’, 3’’ 4’’, 6’’ 4’’, 6’’
6’’ 5.07 (t, 2.2) 70.7 4’’, 5’’ 4’’, 5’’ 5’’
7’’ 170.2
benzoyle
1’’’ 129.9
2’’’ 8.00 (dd, 8.1, 1.0) 129.2 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 3’’’
3’’’ 7.49 (t, 7.7) 128.2 1’’’, 2’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’
4’’’ 7.63 (tt, 7.5, 1.2) 133.0 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 7.49 (t, 7.7) 128.2 1’’’, 6’’’, 3’’’ 4’’’, 6’’’
6’’’ 8.00 (dd, 8.1, 1.0) 129.2 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 5’’’
7’’’ 166.3
cinnamoyle
1’’’’ 134.4
2’’’’ 7.57 (m) 128.1 4’’’’, 7’’’’ 3’’’’’
3’’’’ 7.40 (m) 128.6 1’’’’, 5’’’’ 2’’’’’, 4’’’’’
4’’’’ 7.40 (m) 130.2 3’’’’, 5’’’’ 5’’’’’, 3’’’’’
5’’’’ 7.40 (m) 128.6 1’’’’, 3’’’’ 6’’’’’, 4’’’’’
6’’’’ 7.57 (m) 128.1 4’’’’, 7’’’’ 5’’’’’
7’’’’ 7.67 (d, 16.1) 146.0 1’’’’, 2’’’’, 8’’’’, 9’’’’ 8’’’’
8’’’’ 6.42 (d, 16.0) 116.2 1’’’’, 7’’’’, 9’’’’ 7’’’’
9’’’’ 165.3

276
FRP-3 : alcool 2-(2’-O-benzoyl-6’-O-E-cafféoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’,6’’-trihydroxy-3-
oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C36H34O17

HR-ESI-MS : m/z 761.1701 [M+Na]+ (Calc. 761.1694)

Pouvoir rotatoire : [α]D +15 (c 0,19, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +13650 (222,7) ; +9232

(241,2)
UV : MeOH λ nm (log ) 328 (1,99), 292 (1,87)

IR : (KBr) max cm-1 : 3419, 2966, 1700, 1602, 1499, 1451,

1375, 1275, 1207, 1178, 1118, 1074, 982, 714

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.22.5.1 (r) FRP-3 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.8
2 147.8
3 7.02 (d, 8.9) 118.0 1, 2, 4, 5 4
4 6.62 (dd, 8.9, 2.9) 115.3 a 2, 5, 6 3, 6
5 152.9
6 6.81 (d, 3.6) 115.3 a 2, 4, 5 4
5.16 (d, 12.8) 1, 2, 6, 7’’
7 62.4
5.11 (d, 12.9) 1, 2, 6, 7’’
Glucose
1’ 5.16 (d, 8.0) 100.7 2, 2’, 3’ 2’ 5’, 3
2’ 5.30 (dd, 9.6, 8.0) 74.3 b 7’’’, 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.86 (t, 9.3) 74.5 2’, 4’ 2’, 4’
4’ 3.60 (t, 9.5) 70.6 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.80 (ddd, 9.5, 6.7, 2.1) 74.3 b 1’ 4’, 6’ 1’
4.60 (dd, 11.9, 2.1) 9’’’’, 4’ 5’, 6’
6’ 63.1
4.43 (dd, 11.8, 6.7) 9’’’’, 5’ 5’, 6’
cyclohexenone
1’’ 84.6
2’’ 4.43 (s) 75.9 1’’, 3’’, 4’’, 6’’ 6’’
3’’ 197.1
4’’ 6.02 (dd, 10.4, 2.6) 125.8 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.72 (dd, 10.5, 2.0) 149.6 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’ 4’’
6’’ 4.89 (m) 70.3 4’’, 5’’ 4’’, 5’’ 2’’
7’’ 170.7
benzoyle
1’’’ 129.8
2’’’ 8.14 (dd, 8.4, 1.2) 129.5 1’’’, 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.51 (dd, 8.0, 7.6) 128.3 1’’’, 2’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.62 (dt, 7.7, 1.2) 133.1 3’’’, 2’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.51 (dd, 8.0, 7.6) 128.3 1’’’, 2’’’, 3’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 8.14 (dd, 8.4, 1.2) 129.5 1’’’, 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 166.0
Caffeoyle
1’’’’ 126.3
2’’’’ 7.10 (d, 2.1) 113.7 3’’’’, 7’’’’, 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
3’’’’ 145.4
4’’’’ 148.3
5’’’’ 6.82 (d, 8.3) 115.2 a 1’’’’, 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’ 6’’’’
6’’’’ 6.97 (dd, 8.1, 2.1) 121.8 2’’’’, 4’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 5’’’’
7’’’’ 7.61 (d, 15.7) 145.9 1’’’’, 6’’’’, 8’’’’, 9’’’’ 8’’’’
8’’’’ 6.33 (d, 15.9) 113.4 1’’’’, 7’’’’, 9’’’’ 7’’’’
9’’’’ 167.6
a: changeable b: changeable

277
FRP-4 : alcool 2-(2’-O-benzoyl-6’-O-E-cafféoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-benzoyl-1’’,6’’-
dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C43H38O18

HR-ESI-MS : m/z 865.1951 [M+Na]+ (Calc. 865.1956), 703,1672 [M+Na-Caffeoyl]+, 413,2957

[M-Glu-Benzoate-Caffeoate]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -28,5 (c 0,20, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +12020 (220,4) ; +17613 (240,8)

UV : MeOH λ nm (log ) 328 (1,67), 294 (1,66)

IR : (KBr) max cm-1 : 3421, 1706, 1603, 1501, 1452, 1379, 1273, 1178, 1117, 1071, 980, 712

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.25.6.1 (x) FRP-4 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 127.7a
2 149.8b
3 6.76 (d, 8.8) 120.1 1, 2, 5, 7 4 1’, 4
4 6.32 (dd, 8.8, 2.9) 117.0 2, 6 3, 6 3
5 154.0
6 6.65 (d, 2.9) 117.4 2, 4, 5 4
4.92 (d, 12.1) 1, 6, 7’’ 7
7 64.4
4.96 (d, 12.4) 1, 6, 7’’ 7
Glucose
1’ 4.99 (d, 8.0) 102.5 2’, 2 2’ 5’, 3
2’ 5.32 (dd, 9.5, 8.1) 75.7 3’, 7’’’ 1’, 3’
3’ 3.84 (t, 9.4) 76.0 2’, 4’ 2’, 4’
4’ 3.62 (t, 9.4) 71.9 3’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.74 (m) 75.6 4’ 4’, 6’ 1’
4.58 (dd, 11.8, 1.8) 4’, 9’’’’ 5’, 6’ 6’
6’ 64.6
4.44 (dd, 11.9, 6.6) 5’, 9’’’’ 5’, 6’ 6’
cyclohexenone
1’’ 84.2
2’’ 5.93 (s) 78.8 1’’, 3’’, 6’’, 7’’’’’
3’’ 192.6
4’’ 6.10 (dd, 10.4, 2.6) 127.5 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.83 (dd, 10.5, 1.8) 151.0 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’ 4’’
6’’ 5.07 (t, 2.2) 72.1 4’’, 5’’ 4’’, 5’’
7’’ 171.1
benzoyle
1’’’ 131.6
2’’’ 8.10 (d, 7.5) 130.8 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 3’’’ 3’’’
3’’’ 7.47 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 4’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’ 2’’’
4’’’ 7.60 (t, 7.5) 134.5 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 7.47 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 4’’’, 3’’’ 4’’’, 6’’’ 6’’’
6’’’ 8.10 (d, 7.5) 130.8 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 5’’’ 5’’’
7’’’ 167.3
cafféoyle
1’’’’ 127.6a
2’’’’ 7.10 (d, 1.8) 115.1 3’’’’, 4’’’’, 7’’’’ 6’’’’ 7’’’’, 8’’’’
3’’’’ 146.9
4’’’’ 149.7b
5’’’’ 6.83 (d, 8.2) 116.6 1’’’’,3’’’’, 4’’’’ 6’’’’
6’’’’ 6.99 (dd, 8.2, 2.0) 123.2 2’’’’, 4’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 5’’’’ 7’’’’, 8’’’’
7’’’’ 7.64 (d, 15.8) 147.3 1’’’’, 2’’’’, 6’’’’, 9’’’’ 8’’’’ 2’’’’, 6’’’’
8’’’’ 6.34 (d, 15.9) 114.9 1’’’’, 7’’’’, 9’’’’ 7’’’’ 2’’’’, 6’’’’
9’’’’ 169.0
benzoyle
1’’’’’ 130.4
2’’’’’ 7.91 (d, 7.2) 131.1 3’’’’’, 4’’’’’, 6’’’’’, 7’’’’’ 3’’’’’ 3’’’’’
3’’’’’ 7.36 (t, 7.8) 129.3 1’’’’’, 4’’’’’, 5’’’’’ 2’’’’’, 4’’’’’ 2’’’’’
4’’’’’ 7.52 (t, 7.5) 134.3 2’’’’’, 3’’’’’, 5’’’’’, 6’’’’’ 5’’’’’, 3’’’’’
5’’’’’ 7.36 (t, 7.8) 129.3 1’’’’’, 4’’’’’, 3’’’’’ 6’’’’’, 4’’’’’ 6’’’’’
6’’’’’ 7.91 (d, 7.2) 131.1 3’’’’’, 4’’’’’, 2’’’’’, 7’’’’’ 5’’’’’ 5’’’’’
7’’’’’ 166.3

278
FRP-5 : alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’,6’’-trihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-
enoyl)-benzylique (nouveau)
Formule brute : C27H28O13

HR-ESI-MS : m/z 583.1425 [M+Na]+ (Calc. 583.1428),

463,3469 [M+Na-Benzoate]+, 413,1277 [M+Na-
Cyclohexenoate]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +17 (c 0,18, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +18058 (234,2)

UV : MeOH λ nm (log ) 272 (0,89)

IR : (KBr) max cm-1 : NON

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.22.5.5 (r’’) FRP-5 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.5
2 156.8
3 7.05 (d, 8.2) 131.0 1, 5 4 1’
4 6.97 (dt, 7.5, 1.5) 130.7 6 3, 5
5 6.88 (dt, 7.5, 1.8) 123.6 1, 3 4, 6
6 7.29 (d, 8.5) 116.9 4 5 7
5.31 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’ 6
7 64.6
5.27 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’ 6
Glucose
1’ 4.88 (d, 7.8) 102.5 5’, 2 2’ 3, 7, 5’
2’ 3.48 (dd, 9.0, 7.8) 74.8 3’, 1’ 1’, 3’
3’ 3.42 (t, 9.0) 77.9 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.36 (dd, 9.5, 8.9) 71.9 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.71 (ddd, 9.7, 7.6, 2.1) 75.6 1’, 3’, 4’, 6’ 4’, 6’ 1’, 6’
4.60 (dd, 11.8, 1.7) 4’, 7’’’ 5’, 6’ 5’
6’ 65.4
4.34 (dd, 11.8, 7.6) 5’, 7’’’ 5’, 6’
cyclohexenone
1’’ 86.2
2’’ 4.46 (s) 77.4 1’’, 3’’, 6’’ 6’’
3’’ 198.5
4’’ 5.91 (dd, 10.4, 2.6) 127.2 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.62 (dd, 10.3, 1.8) 151.0 1’’, 3’’ 4’’ 4’’
6’’ 4.88 (m) 71.9 1’’, 5’’ 4’’
7’’ 172.5
benzoyle
1’’’ 131.4
2’’’ 7.92 (dl, 7.2) 130.7 4’’’, 6’’’ 3’’’ 3’’’
3’’’ 7.39 (t, 7.8) 129.6 1’’’, 2’’’, 4’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’ 2’’’
4’’’ 7.52 (dt, 7.5, 1.3) 134.4 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 7.39 (t, 7.8) 129.6 1’’’, 2’’’, 4’’’, 3’’’ 4’’’, 6’’’ 6’’’
6’’’ 7.92 (dl, 7.2) 130.7 4’’’, 2’’’ 5’’’ 5’’’
7’’’ 167.8

279
FRP-6 : alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(1’’,2’’-dihydroxy-3-oxo-cyclohex-4-
enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C27H28O13

HR-ESI-MS : m/z 583.1433 [M+Na]+ (Calc. 583.1428),

429,1264 [M+Na-Cyclohexenoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -5,5 (c 0,11, MeOH)

CD : NON

UV : MeOH λ nm (log ) 280 (1,01)

IR : (KBr) max cm-1 : NON

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.19.5 (O’’) FRP-6 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 128.5
2 149.8
3 7.06 (d, 8.8) 119.7 1, 2, 5, 7 4 1’
4 6.55 (dd, 8.8, 3.0) 116.8 2, 5, 6 3, 6
5 154.2
6 6.81 (d, 3.0) 117.0 2, 4, 5, 7 4 7
5.29 (d, 12.6) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
7 64.3
5.35 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
Glucose
1’ 4.81 (dlike, 7.7) 104.2 2 2’ 3, 3’, 5’
2’ 3.51 (m) 75.0 1’, 3’ 1’
3’ 3.51 (m) 78.0 2’, 4’ 1’
4’ 3.45 (m) 72.1 3’ 5’
5’ 3.73 (ddd, 9.7, 7.7, 2.2) 75.7 1’, 4’, 6’ 4’, 6’ 1’, 6’
4.72 (dd, 11.7, 2.2) 7’’’ 5’, 6’ 5’
6’ 65.4
4.44 (dd, 11.7, 7.6) 5’, 7’’’ 5’, 6’ 5’
cyclohexenone
1’’ 81.4
2’’ 4.69 (s) 77.8 1’’, 3’’ 6’’
3’’ 199.1
4’’ 6.03 (dd, 10.1, 2.9) 127.8 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.84 (ddd, 10.1, 5.5, 2.3) 146.7 1’’, 3’’, 6’’ 4’’, 6’’ 4’’
2.65 (dd, 19.2, 5.6)α-eq 1’’, 2’’, 4’’, 5’’, 7’’ 4’’, 5’’, 6’’ 5’’
6’’ 37.7
3.09 (dt, 19.3, 2.7)β-ax 5’’, 4’ 4’’, 6’’, 5’’ 2’’, 5’’
7’’ 173.7
benzoyle
1’’’ 131.3
2’’’ 8.02 (dd, 8.4, 1.2) 130.7 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 3’’’
3’’’ 7.52 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’
4’’’ 7.65 (t, 7.5) 134.4 2’’’, 3’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.52 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 3’’’ 6’’’, 4’’’
6’’’ 8.02 (dd, 8.4, 1.2) 130.7 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 5’’’
7’’’ 167.8

280
FRP-7 : alcool 2-(6’-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’-O-benzoyl-1’’-hydroxy-3-oxo-
cyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C34H32O14

HR-ESI-MS : m/z 687.1692 [M+Na]+ (Calc. 687.1690),

559,4116 [M-Benzoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -35,5 (c 0,24, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) -26253 (230,8)

UV : MeOH λ nm (log ) 282 (1,19)

IR : (KBr) max cm-1 : NON

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.24.4.6 (v) FRP-7 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 128.0
2 150.0
3 6.80 (d, 8.8) 119.8 1, 2, 5, 7 4 4
4 6.29 (dd, 8.7, 3.0) 117.0 2, 5, 6 3, 6 3
5 154.0
6 6.58 (d, 3.0) 117.4 2, 4, 5, 7 4
5.16 (d, 12.2) 1, 2, 6, 7’’
7 64.3
5.10 (d, 12.2) 1, 2, 6, 7’’
Glucose
1’ 4.56 (d, 7.3) 104.4 2 2’ 3’, 5’
2’ 3.35 (m) 75.0 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.35 (m) 78.0 2’, 4’, 5’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.30 (t, 9.5) 72.0 3’, 5’ 3’, 5’
5’ 3.55 (ddd, 9.5, 7.6, 2.1) 75.5 3’, 4’, 6’ 4’, 6’ 3’, 1’
4.58 (dd, 11.7, 2.1) 7’’’, 4’ 5’, 6’
6’ 65.3
4.29 (dd, 11.7, 7.5) 7’’’, 4’, 5’ 5’, 6’
cyclohexenone
1’’ 79.8
2’’ 5.94 (s) 79.3 1’’, 7’’’’ 6’’
3’’ 193.1
4’’ 5.98 (dd, 10.2, 2.9) 128.2 2’’, 3’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.81 (ddd, 10.1, 5.6, 2.3) 146.7 1’’, 3’’, 4’’, 6’’ 4’’, 6’’ 4’’
2.68 (dd, 19.3, 5.6) α-eq 5’’, 1’’, 2’’, 3’’, 4’’, 7’’ 6’’, 5’’ 6’’
6’’ 38.5
3.13 (dt, 19.3, 2.7)β-ax 5’’ 6’’,4’’, 5’’ 2’’, 6’’
7’’ 172.8
benzoyle
1’’’ 131.3
2’’’ 7.79 (d, 7.6) 130.7 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.40 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.53 (t, 7.5) 134.4 3’’’, 2’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.40 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 4’’’, 3’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 7.79 (d, 7.6) 130.7 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 167.8
benzoyle
1’’’’ 130.5
2’’’’ 7.79 (d, 7.6) 131.1 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’, 7’’’’ 6’’’’, 3’’’’
3’’’’ 7.31 (t, 7.8) 129.5 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’ 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’
4’’’’ 7.46 (t, 7.5) 134.5 3’’’’, 2’’’’ 5’’’’, 3’’’’
5’’’’ 7.31 (t, 7.8) 129.5 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 3’’’’ 6’’’’, 4’’’’, 3’’’’
6’’’’ 7.79 (d, 7.6) 131.1 3’’’’, 4’’’’, 2’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 5’’’’
7’’’’ 166.7

281
FRP-8 : alcool 2-(2’-benzoyl-6’-E-cafféoyl-β-D-glucopyranosyl)-7-(2’’,3’’-dihydroxybenzoyl)-5-
hydroxybenzylique (nouveau)
Formule brute : C36H32O15

HR-ESI-MS : m/z 727.1626 [M+Na]+ (Calc. 727.1639),

705,5147 [M+H]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -19,8 (c 0,045, MeOH)

CD : NON

UV : MeOH λ nm (log ) 328 (1,72), 294 (1,51)

IR : (KBr) max cm-1 : 3422, 1682, 1602, 1499, 1453,

1385, 1273, 1206, 1139, 1074, 981, 714

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.25.6.3 (y) FRP-8 CD3OD

No 1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.5
2 148.2
3 7.11 (d, 8.9) 118.3 1, 2, 5, 7 4 4, 1’
4 6.65 (dd, 8.2, 2.8) 115.5 2, 6 3, 6 3
5 153.0
6 6.76 (d, 2.8) 115.2 2, 4, 5, 7 4
5.18 (d, 12.6) 1, 2, 6, 7’’
7 61.6
5.15 (d, 12.1) 1, 2, 6, 7’’
Glucose
1’ 5.15 (d, 8.4) 100.9 5’, 2 2’ 3, 3’, 5’
2’ 5.31 (dd, 9.6, 8.1) 74.1 3’, 1’, 7’’’ 1’, 3’
3’ 3.84 (t, 9.3) 74.5 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.60 (t, 9.3) 70.6 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.82 (ddd, 9.4, 6.6, 2.0) 74.4 4’ 4’, 6’ 1’
4.62 (dd, 11.8, 2.0) 9’’’’ 5’, 6’
6’ 63.1
4.45 (dd, 11.8, 6.6) 5’, 9’’’ 5’, 6’
2,3-dihydroxybenzoyl
1’’ 112.4
2’’ 149.8
3’’ 145.6
4’’ 6.98 (dd, 8.0, 1.3) 120.2 2’’, 3’’, 6’’ 5’’, 6’’
5’’ 6.65 (t, 7.9) 118.5 1’’, 3’’, 4’’ 4’’, 6’’ 6’’
6’’ 7.15 (dd, 8.1, 1.5) 119.9 2’’, 4’’, 7’’ 4’’, 5’’ 5’’
7’’ 169.8
benzoyl
1’’’ 129.7
2’’’ 8.05 (d, 7.2) 129.3 4’’’, 6’’’, 7’’’ 3’’’ 3’’’
3’’’ 7.38 (t, 7.6) 128.0 2’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’ 2’’’
4’’’ 7.50 (t, 7.4) 132.9 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 7.38 (t, 7.6) 128.0 3’’’, 6’’’ 4’’’, 6’’’ 6’’’
6’’’ 8.05 (d, 7.2) 129.3 2’’’, 4’’’, 7’’’ 5’’’ 5’’’
7’’’ 165.8
cafféoyl
1’’’’ 126.3
2’’’’ 7.09 (d, 2.0) 113.6 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’, 7’’’’ 7’’’’, 8’’’’
3’’’’ 145.4
4’’’’ 148.3
5’’’’ 6.82 (d, 8.1) 115.2 1’’’’, 3’’’’, 4’’’’ 6’’’’
6’’’’ 6.98 (dd, 8.0, 1.9) 121.8 2’’’’, 4’’’’, 7’’’’ 5’’’’ 7’’’’, 8’’’’
7’’’’ 7.62 (d, 15.9) 145.9 1’’’’, 6’’’’, 8’’’’, 9’’’’ 8’’’’ 2’’’’, 6’’’’
8’’’’ 6.32 (d, 15.9) 113.4 1’’’’, 9’’’’ 7’’’’ 2’’’’, 6’’’’
9’’’’ 167.5

282
FRP-9 : alcool (rel)-2-(2’-O-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-
oxocyclohex-4-enoyl)-5-hydroxybenzylique
Formule brute : C27H28O14

HR-ESI-MS : m/z 599.1375 [M+Na]+ (Calc. 599.1377),

473,1676 [M-Benzoyl]+, 407,1434 [M-Cyclohexenoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +7,1 (c 0,35, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +29680 (224,3) ;

+19492 (240,9)
UV : MeOH λ nm (log ) 282 (1,79)

IR : (KBr) max cm-1 : 3413, 2928, 1701, 1501, 1455, 1379,

1276, 1209, 1074, 715

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.13.3 (k’’) FRP-9 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.4
2 148.0
3 7.07 (d, 8.8) 117.4 1, 2, 4, 5, 7 4
4 6.69 (dd, 8.9, 3.0) 115.3 2, 5, 6 3, 6
5 152.7
6 6.81 (d, 3.0) 115.3 2, 4, 5, 7 4
5.19 (d, 12.9) 1, 2, 6, 7’’ 7
7 62.4
5.06 (d, 12.9) 1, 2, 6, 7’’ 7
Glucose
1’ 5.16 (d, 8.0) 100.5 2, 2’ 2’ 3’, 5’
2’ 5.27 (dd, 9.7, 8.0) 74.4 7’’’, 1’, 3’ 1’, 3’
3’ 3.83 (dd, 9.6, 8.7) 74.6 2’, 4’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.57 (dd, 9.8, 8.6) 70.2 3’, 5’, 6’ 3’
5’ 3.53 (ddd, 9.7, 5.3, 2.0) 77.0 4’ 6’ 3’, 1’
3.96 (dd, 12.0, 2.0) 4’ 6’
6’ 61.0
3.79 (dd, 12.0, 5.4) 5’ 5’, 6’
cyclohexenone
1’’ 84.6
2’’ 4.45 (s) 75.9 1’’, 3’’, 6’’ 6’’
3’’ 197.1
4’’ 6.02 (dd, 10.4, 2.7) 125.8 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.74 (dd, 10.4, 2.0) 149.6 1’’, 3’’ 4’’, 6’’ 4’’, 6’’
6’’ 4.92 (t, 2.3) 70.4 5’’ 4’’, 5’’ 2’’
7’’ 170.7
benzoyle
1’’’ 129.8
2’’’ 8.12 (dd, 8.5, 1.3) 129.5 1’’’, 4’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.50 (ddd, 8.1, 7.6, 1.7) 128.3 1’’’, 2’’’, 5’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.61 (dt, 7.5, 1.2) 133.1 2’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.50 (ddd, 8.1, 7.6, 1.7) 128.3 1’’’, 2’’’, 3’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 8.12 (dd, 8.5, 1.3) 129.5 1’’’, 4’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 166.0

283
FRP-10 : alcool (rel)-2-(6’-O-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-
oxocyclohex-4-enoyl)-5-bydroxybenzylique
Formule brute : C27H28O14

HR-ESI-MS : m/z 599.1365 [M+Na]+ (Calc. 599.1377),

429,0976 [M+Na-Cyclohexenoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +39,6 (c 0,23, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +29288 (235,6)

UV : MeOH λ nm (log ) 282 (1,75)

IR : (KBr) max cm-1 : 3421, 2923, 1702, 1502, 1454, 1382,

1283, 1209, 1139, 1069, 964, 715

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.17.4 (O) FRP-10 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 126.9
2 148.5
3 7.06 (d, 8.8) 118.5 1, 2, 4, 5, 7 4 4, 1’
4 6.54 (dd, 8.8, 3.0) 115.3 2, 5, 6 3, 6 3
5 152.7
6 6.84 (d, 3.0) 115.7 2, 4, 5, 7 4
5.38 (d, 12.5) 1, 2, 6, 7’’ 7
7 63.2
5.32 (d, 12.4) 1, 2, 6, 7’’ 7
Glucose
1’ 4.80 (d, 7.5) 102.7 2, 3’, 5’ 2’ 3, 5’
2’ 3.52 (dd, 8.7, 7.5) 73.6 3’ 1’, 3’
3’ 3.51 (dd, 9.0, 8.7) 76.5 1’, 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.45 (dd, 9.5, 8.9) 70.7 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.73 (ddd, 9.7, 7.7, 2.2) 74.1 4’, 3’ 4’, 6’ 1’
4.72 (dd, 11.7, 2.1) 4’, 7’’’’ 5’, 6’ 6’
6’ 64.0
4.45 (dd, 11.7, 7.6) 4’, 5’, 7’’’’ 5’, 6’ 6’
cyclohexenone
1’’ 84.8
2’’ 4.57 (s) 76.0 1’’, 3’’, 4’’, 6’’, 7’’ 6’’
3’’ 197.0
4’’ 6.04 (dd, 10.4, 2.7) 125.8 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.75 (dd, 10.4, 2.0) 149.5 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’ 4’’
6’’ 4.99 (t, 2.3) 70.5 5’’, 4’ 6’’, 5’’ 2’’
7’’ 171.0
benzoyle
1’’’ 129.9
2’’’ 8.02 (dt, 7.3, 1.3) 129.3 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.52 (t, 7.5) 128.2 1’’’, 2’’’, 4’’’, 5’’’, 7’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.65 (tt, 7.5, 1.2) 133.0 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.52 (t, 7.5) 128.2 1’’’, 2’’’, 3’’’, 4’’’, 7’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 8.02 (dd, 7.3, 1.3) 129.3 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 166.4

284
FRP-11 : l’alcool (rel)-2-(2’,6’-O-dibenzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(1β,2β,6β-trihydroxy-3-
oxocyclohex-4-enoyl)-5-bydroxybenzylique
Formule brute : C34H32O15

HR-ESI-MS : m/z 703.1647 [M+Na]+ (Calc. 703.1639),

533,1472 [M+Na-Cyclohexenoyl]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +14,7 (c 0,25, MeOH)

CD: [] nm (c 0,01 mg/ml, EtOH) +31085 (223,7) ;

+11460 (245,7)
UV : MeOH λ nm (log ) 282 (1,87)

IR : (KBr) max cm-1 : 3422, 2962, 1708, 1601, 1501, 1454,

1379, 1267, 1209, 1125, 1074, 987, 714

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.24.4.2 (u) FRP-11 CD3OD

No 1H 13C
HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 128.1
2 149.2
3 6.90 (d, 8.9) 119.3 1, 2, 4, 5, 7 4 4, 1’
4 6.38 (dd, 8.9, 3.0) 116.6 2, 5, 6 3, 6 3
5 154.2
6 6.67 (d,2.9) 116.8 2, 4, 5, 7 4 7
4.90 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
7 63.8
4.83 (d, 12.3) 1, 2, 6, 7’’ 7 6
Glucose
1’ 5.07 (d, 8.0) 102.0 2, 2’, 5’ 2’ 3, 3’, 5’
2’ 5.17 (dd, 9.5, 8.0) 75.6 1’, 3’, 7’’’ 1’, 3’
3’ 3.76 (t, 9.2) 76.0 2’, 4’ 2’, 4’ 1’, 5’
4’ 3.50 (t, 9.3) 72.3 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.77 (ddd, 9.8, 7.7, 2.1) 75.7 4’, 3’ 4’, 6’ 3’, 1’
4.67 (dd, 11.8, 2.1) 4’, 7’’’’ 6’ 5’, 6’
6’ 65.3
4.39 (dd, 11.8, 7.6) 4’, 5’, 7’’’’ 5’, 6’ 6’
cyclohexenone
1’’ 85.9
2’’ 4.27 (s) 77.3 1’’, 3’’, 6’’ 6’’
3’’ 198.5
4’’ 5.99 (dd, 10.4, 2.7) 127.2 2’’, 6’’ 5’’, 6’’ 5’’
5’’ 6.58 (dd, 10.4, 1.9) 151.0 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’ 4’’, 6’’
6’’ 4.75 (t, 2.3) 71.7 5’’, 4’ 6’’, 5’’ 2’’, 5’’, 6’’
7’’ 172.1
benzoyle
1’’’ 131.3
2’’’ 8.01 (dd, 7.2, 1.3) 130.9 4’’’, 6’’’, 7’’’ 6’’’, 3’’’
3’’’ 7.41 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 5’’’, 7’’’ 2’’’, 4’’’, 5’’’
4’’’ 7.53 (t, 7.5) 134.5 2’’’ 5’’’, 3’’’
5’’’ 7.41 (t, 7.8) 129.7 1’’’, 2’’’, 3’’’, 7’’’ 6’’’, 4’’’, 3’’’
6’’’ 8.01 (dd, 7.2, 1.3) 130.9 4’’’, 2’’’, 7’’’ 2’’’, 5’’’
7’’’ 167.4
benzoyle
1’’’’ 131.2
2’’’’ 7.93 (dd, 7.1, 1.3) 130.7 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’, 7’’’’ 6’’’’, 3’’’’
3’’’’ 7.38 (t, 7.7) 129.7 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 4’’’’, 5’’’’
4’’’’ 7.49 (t, 7.5) 134.4 3’’’’, 2’’’’ 5’’’’, 3’’’’
5’’’’ 7.38 (t, 7.7) 129.7 1’’’’, 2’’’’, 4’’’’, 3’’’’, 7’’’’ 6’’’’, 4’’’’, 3’’’’
6’’’’ 7.93 (dd, 7.1, 1.3) 130.7 3’’’’, 4’’’’, 2’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 5’’’’
7’’’’ 167.8

285
FRP-12 : alcool (rel)-2-(6’-benzoyle-β-D-glucopyranosyloxy)-7-(6’’α-benzoyloxy-1α,2α-
dihydroxy-3-oxocyclohex-4-enoyl)-5-bydroxybenzylique
Formule brute : C34H32O15

HR-ESI-MS : m/z 703.1630 [M+Na]+ (Calc. 703.1639),

414,3108 [M-Glu-Benzoate]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -16 (c 0,10, MeOH)

CD : NON

UV : MeOH λ nm (log ) 282 (2,09)

IR : (KBr) max cm-1 : 3423, 2922, 1708, 1601, 1502, 1453,

1380, 1281, 1209, 1067, 960, 713

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.24.6.6 (u’’) FRP-12 CD3OD

No 1 13
H C HMBC (HC) COSY (HH) ROESY
1 127.8
2 150.0
3 6.79 (d, 8.9) 120.0 1, 2, 5, 7 4 1’
4 6.25 (dd, 8.8, 3.0) 117.0 2, 5, 6 3, 6
5 154.0
6 6.59 (d, 3.0) 117.5 2, 4, 5, 7 4 7
7 5.16 (s) 64.5 1, 2, 6, 7’’ 6
Glucose
1’ 4.54 (dlike, 7.5) 104.4 3’, 2 2’ 3, 3’, 5’
2’ 3.37 (m) 74.9 3’, 1’ 1’, 3’
3’ 3.37 (m) 77.9 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.30 (m) 72.0 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.55 (ddd, 9.6, 7.6, 2.1) 75.5 1’, 3’, 4’, 6’ 4’, 6’ 1’
4.59 (dd, 11.7, 2.1) 4’, 7’’’’ 5’, 6’
6’ 65.4
4.54 (dd, 11.7, 7.6) 4’, 5’, 7’’’’ 5’, 6’
cyclohexenone
1’’ 84.5
2’’ 5.84 (s) 78.6 1’’, 3’’, 6’’, 7’’’ 6’’ 6’’
3’’ 192.7
4’’ 5.98 (dd, 10.3, 2.5) 127.4 2’’, 6’’ 5’’, 6’’
5’’ 6.71 (dd, 10.5, 1.9) 151.2 1’’, 3’’, 7’’ 4’’, 6’’
6’’ 5.04 (t, 2.1) 72.2 4’’, 5’’ 4’’, 5’’ 2’’
7’’ 171.6
benzoyle
1’’’ 130.3
2’’’ 7.84 (d, 7.4) 131.1 3’’’, 4’’’, 6’’’, 7’’’ 3’’’, 4’’’
3’’’ 7.29 (t, 7.7) 129.5 1’’’, 2’’’, 5’’’, 7’’’ 2’’’, 4’’’
4’’’ 7.44 (t, 7.5) 134.5 2’’’, 3’’’, 5’’’, 6’’’ 3’’’, 5’’’
5’’’ 7.29 (t, 7.7) 129.5 1’’’, 2’’’, 3’’’, 7’’’ 4’’’, 6’’’
6’’’ 7.84 (d, 7.4) 131.1 3’’’, 4’’’, 2’’’, 7’’’ 4’’’, 5’’’
9’’’ 166.5
benzoyle
1’’’’ 131.3
2’’’’ 7.91 (d, 7.5) 130.7 3’’’’, 4’’’’, 6’’’’, 7’’’’ 3’’’’, 4’’’’
3’’’’ 7.40 (t, 7.7) 129.7 1’’’’, 4’’’’, 5’’’’, 7’’’’ 2’’’’, 4’’’’
4’’’’ 7.53 (t, 7.4) 134.4 2’’’’, 3’’’’, 5’’’’, 6’’’’ 3’’’’, 5’’’’
5’’’’ 7.40 (t, 7.7) 129.7 1’’’’, 4’’’’, 3’’’’, 7’’’’ 4’’’’, 6’’’’
6’’’’ 7.91 (d, 7.5) 130.7 3’’’’, 4’’’’, 2’’’’, 7’’’’ 4’’’’, 5’’’’
7’’’’ 167.8

286
FRD-11 : (7S,8S)-4-O-méthyl-syringylglycérol-8-O-β-D-glucopyranoside (nouveau)
Formule brute : C18H28O11

HR-ESI-MS : m/z 443.1537 [M+Na]+ (Calc. 443.1529),

389,1987 [M-MeO]+, 241,1222 [M-Glu]+

Pouvoir rotatoire : [α]D +6,4 (c 0,79, MeOH)

CD : NON

UV : MeOH λ nm (log ) 282 (2,09)

IR : (KBr) max cm-1 : 3424, 2938, 1681, 1599, 1514, 1463,

1417, 1331, 1234, 1204, 1128, 1078, 1038, 720, 658

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

No 4.7.6.4 (d) FRD-11 CD3OD

1H 13C HMBC COSY ROESY
1 138.4
2 6.65 (s) 105.2 1, 3, 4, 6, 7 7, 8
3 154.4
4 138.5
5 154.4
6 6.65 (s) 105.2 1, 3, 4, 2, 7 7, 8
7 4.65 (d, 6.2) 74.8 8, 9, 1, 2, 6 8 8, 2
8 3.75 (m) 86.7 7, 9, 1’ 7, 9 7, 2, 1’
3.50 (dd, 11.8, 3.7) 7 8, 9 9
9 63.2
3.32 (dd, 11.8, 5.8) 7, 8 8, 9 9
3-OCH3 3.75 (s) 56.5 3
4-OCH3 3.65 (s) 61.1 4
5-OCH3 3.75 (s) 56.5 5
Glucose
1’ 4.22 (d, 7.6) 105.1 8, 3’ 2’ 8, 3’, 5’
2’ 3.17 (dd, 9.5, 7.4) 75.5 1’, 3’ 1‘, 3’
3’ 3.23 (t, 8.8) 77.9 2’, 4’ 2’, 4’ 1’
4’ 3.18 (dd, 9.5, 8.3) 71.5 3’, 5’, 6’ 3’, 5’
5’ 3.13 (ddd, 9.4, 5.9, 2.3) 78.1 3’, 4’, 6’ 4’, 6’ 1’
3.73 (dd, 12.0, 2.2) 4’, 5’ 6’ 6
6’ 62.6
3.55 (dd, 12.0, 5.9) 4’, 5’ 6’, 5’ 6

287
FRD-5 : mururin A (connu)
Formule brute : C24H16O9

ESI-MS : m/z 471.0 [M+Na]+, 341,2 [M-C6H5O2]+

Pouvoir rotatoire : [α]D -49,5 (c 0,018, MeOH)

Spectre de RMN : 1H (600 MHz), 13C (125 MHz)

4.7.23.4.1 (q) FRD-5 CD3OD

No 1H 13C HMBC COSY NOESY
2 4.93 (d, 5.6) 82.2 3, 4, 8a, 1’, 2’, 6’ 3 3, 2’, 6’
3 4.20 (dl, 5.1) 65.9 2, 4 2, 4
3.02 (dd, 16.3, 4.7) 2, 3, 4a, 5, 8a 3, 4 3
4 25.6
2.38 (dd, 16.1, 6.3) 3, 4a 3, 4
4a 103.3
5 151.8
6 100.3
7 149.4
8 6.65 (s) 97.4 4a, 6, 7, 8a
8a 158.5
1’ 129.7
2’ 6.85 (s) 113.5 2, 3’, 4’, 6’ 6’ 2, 3
3’ 145.1
4’ 145.0
5’ 6.80 (d, 8.0) 114.9 1’, 3’, 4’ 6’
6’ 6.75 (dl, 8.5) 118.2 2, 2’, 4’ 2’, 5’ 2, 3
1’’ 106.5
2’’ 152.4
3’’ 6.74 (s) 103.0 1’’, 4’’, 5’’
4’’ 147.6
5’’ 143.5
6’’ 7.24 (s) 107.9 2’’, 4’’, 5’’, 7’’ 8’’
7’’ 143.1
8’’ 6.05 (s) 91.0 6, 1’’, 9’’ 6’’
9’’ 163.8

288
TITRE en français: Etude phytochimique de plantes de la médecine traditionnelle du Vietnam et du
Laos. Evaluation biologique dans le domaine de la santé.

RESUME en français:

L’objectif de ce travail est de contribuer à l'amélioration des connaissances phytochimiques et

biologiques des plantes medicinales, afin d’en valoriser et d’en promouvoir l'usage en médicine
traditionnelle au Vietnam. Dans ce travail de thèse, nous avons mené une étude phytochimique sur
trois espèces végétales: Cleome chelidonii (Cleomaceae), Dolichandrone spathacea (Bignoniaceae) et
Flacourtia rukam (Salicaceae). 90 composés ont été isolés et leurs structures ont été déterminées à
l’aide des techniques spectroscopiques de RMN 1D et 2D, par la spectrométrie de masse ESI-MS, des
données spectrales en UV, IR, la mesure du pouvoir rotatoire et des courbes de CD, et par comparaison
avec les données de la littérature. Parmi ces composés, 29 correspondent à des molécules
nouvellement décrites. Les composés isolés peuvent être classés en plusieurs groupes : flavonoïdes,
iridoides, saponosides, mégastigmanes, glycosides phénoliques, alcaloïdes, …

L’évaluation de l’activité anti-radicalaire (test DPPH) a été effectuée sur les flavonoides de C. chelidonii,
et les activités antimicrobiennes des extraits et composés de D. spathacea et F. rukam ont été
mesurées. Parmi les composés testés, le glycoside de quercétol nouveau CF-3 est le seul à posséder
une activité anti-radicalaire importante (CI50 = 17,74 µM) et le glucoside phénolique nouveau FRP-4
possède l’activité antibactérienne la plus importante contre trois bactéries à Gram positif (CMI = 31,2
µg/ml) et deux bactéries à Gram négatif (CMI = 125 µg/ml).

MOTS-CLÉS: Cleomaceae, Bignoniaceae, Salicaceae, flavonoides, iridoides, glycosides phénoliques,

mégastigmanes, RMN, DPPH, activité antimicrobienne.

TITRE en anglais: Phytochemical studies of plants used in traditional medicines of Vietnam and Laos.
Biological evaluation in therapeutic domain.

RESUME en anglais:

The objective of this work is to contribute to the improvement of phytochemical and biological
knowledge of medicinal plants, in order to enhance and promote their uses in traditional medicine in
Vietnam. In this thesis, we carried out a phytochemical study on three plants: Cleome chelidonii
(Cleomaceae) Dolichandrone spathacea (Bignoniaceae) and Flacourtia rukam (Salicaceae). 90
compounds were isolated and their structures were determinated using the spectroscopic techniques
of 1D & 2D NMR and by the ESI-MS mass spectrometry, spectral data UV, IR, measurement of optical
rotation and CD, and by comparison with the literature data. Among them, 29 are new molecules. The
isolated compounds may be classified into many groups: flavonoids, iridoids, saponins,
megastigmanes, phenolic glycosides, alkaloids...

The antiradical activity of the flavonoids of C. chelidonii was evaluated by the DPPH test, and the
antimicrobial activity were examinated on all extracts and compounds of D. spathacea and F. rukam.
Among the tested compounds, the new flavonoid CF-3 has a significant anti-radical activity (IC50 = 17.74
µM) and the new phenolic glucoside FRP-4 has the most significant antibacterial activity against three
Gram-positive bacteria (MIC = 31.2 µg / ml) and two gram-negative bacteria (MIC = 125 µg /ml).

KEYWORDS: Cleomaceae, Bignoniaceae, Salicaceae, flavonoids, iridoids, phenolic glycosids,

megastigmanes, NMR, DPPH, antimicrobial activity.

Institut de Chimie Moléculaire de Reims (ICMR - UMR CNRS 7312)

UFR des Sciences Exactes et Naturelles, BP 1039 - Case postale 44, 51687 Reims Cedex 2