Analyse

instrumentale II

Demoulin Arnaud
HEPN 2022-2023
Partie SPECTROMETRIE DE MASSE

 Introduction
 Principe général
 Ionisation
 Accélération
 Analyseurs
 Détection
 Couplage MS
Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 2
Introduction
 Qu’est ce que la spectrométrie de masse ?
Définition : technique physico-chimique de
détection et d’identification de molécules
d’intérêt par caractérisation structurale sur base
de la mesure de la masse de fragments générés.

Analyse des fragments Molécule d’intérêt

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 3

Introduction
Que peut on analyser avec la spectrométrie
de masse ?
Atomes
±TOUT Minéraux
Solide ?
Liquide ?
Gazeux ? Composés organiques Microorganismes

Polymères

Macromolécules
Petites molécules

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 4

Principe général
 Étapes de la MS IONISATION + FRAGMENTATION
Molécule d’intérêt Ion moléculaire Ions fragments
M M+ + +
+
+ +

DÉTECTION
ACCÉLÉRATION

ANALYSEUR
FILTRE m/z

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 5

Principe général
DÉTECTION
 Étapes de la MS IONISATION + FRAGMENTATION
Molécule d’intérêt Pic de base ≠ Pic moléculaire
Ion moléculaire Ions fragments
M M+ + +
+ + +

+ +
+

+ +
DÉTECTION
ACCÉLÉRATION

ANALYSEUR
FILTRE m/z

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 6

 Principe général
 Appareillage
Pompes

Introduction Source Analyseur(s) Détecteur

Traitement

Injection directe Secteur magnétique

EI Quadrupole
GC CI Cage de Faraday
LC TOF
Electrospray Multiplicateur d’e-
ICP MS/MS
MALDI Ion Trap
FAB

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 7

Principe général
 Avantages généraux
 Analyse de traces  LOD < ng
 Sensibilité
 Sélectivité
 Résolution
 Rapidité
 Polyvalence

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 8

Ionisation - accélération
 Appareillage
Pompes

Introduction Source Analyseur(s) Détecteur

Traitement

EI
CI
Electrospray
MALDI
FAB

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 9

Ionisation - accélération
 EI = Impact électronique

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 10

Ionisation - accélération
 EI = Impact électronique (avec pusher)

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 11

Ionisation - accélération
 Fragmentation

Stable : Instable :
Ion moléculaire ionisé Fragments ionisés

+ + +

+ +

Qu’est ce que la radical cation ?

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 12
Ionisation - accélération
 CI = Ionisation Chimique

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 13

 Ionisation - accélération
 CI = Ionisation Chimique
= Produire des ions par collision avec des ions primaires générés
dans la chambre d’ionisation

Ex avec le gaz le plus couramment utilisé : le méthane

Formation d’ions primaires :

Formation d’ions réactifs :

PLASMA
Parasites

Transfert de protons
Abstraction d’hydrure
Réaction ion-molécule Transfert de charge
Addition
Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 14
Ionisation - accélération
 ESI = Electrospray
Cône de
+ + Taylor
+ +
+ + + ++ + + +
+
Echantillon + +
+ + + +
+ +
+
+ ++
+
+
+
+

++

Application d’une
tension électrique
(V)
Evaporation du solvant
 Fission des gouttelettes
+
+ + Ions désolvatés
+
+ + +
n+
+
+
+ + + + [M+nH]
+ + +
++ +
+

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 15

Ionisation - accélération
 ESI = Electrospray

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 16

Ionisation - accélération
 MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation)

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 17

Ionisation - accélération
 FAB (Fast Atom Bombardment)

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 18

Analyseurs
 Appareillage
Pompes

Introduction Source Analyseur(s) Détecteur

Traitement
Secteur magnétique
Quadrupole
TOF
MS/MS
Ion Trap

Comment filtrer les ions par rapport à leur m/z ?

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 19
Analyseurs
 TOF (Time Of Flight)

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 20

Analyseurs
 TOF (Time Of Flight) avec réflectron

Pourquoi ?

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 21

Analyseurs
 Secteur magnétiques

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 22

Analyseurs
 Quadrupole
Filtre « passe haut »

Filtre « passe bas »

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 23

Analyseurs
 Quadrupole

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 24

Analyseurs
 MS/MS

https://what-when-how.com/proteomics/quadrupole-mass-analyzers-theoretical-and-practical-considerations-proteomics/

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 25

Analyseurs
 Comparatif
Gamme
de
Analyseur Résolution Sensibilité Avantages Inconvénients
masse
(m/z)
Faible sensibilité
Secteur 1 – 15 000 0,0001 Faible Haute résolution
Très cher
magn. Forte expertise
technique
Facile à utilisé (très
Faible résolution
courant)
Quad. 1 – 5 000 1 Grande
Bon marché
Gamme de masse
limitée
Grande sensibilité
Gamme de masse
Haute résolution
TOF Illimité 0,0001 Grande Grande sensibilité Très cher
Simplicité du
concept

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 26

Détection ou Transducteur
 Appareillage
Pompes

Introduction Source Analyseur(s) Détecteur

Traitement

Cage de Faraday
Multiplicateur d’e-

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 27

Détection ou Transducteur
 Cage de Faraday

Plaque conductrice (électrodes)

Ions transfèrent leur charge à la plaque  détection d’un courant

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 28

Détection ou Transducteur
 Multiplicateur d’électrons

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 29

 Principe général
 Appareillage
Pompes

Introduction Source Analyseur(s) Détecteur

Traitement

Injection directe
GC
LC
ICP

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 30

Couplage MS
 ICP – MS (MS à plasma à couplage inductif)
Plasma ?

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 31

Couplage MS
 ICP – MS  Dilution isotopique

échantillon Traceur

Demoulin Arnaud – Analyse instrumentale II 32