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N° Ordre ……..

/FHC/UMBB/2012

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE M’HAMED BOUGARA-BOUMERDES

Faculté des Hydrocarbures et de la Chimie

Mémoire de Magister
Présenté par :

Melle GUEDOUARI Ratiba

En vue de l’obtention du diplôme de MAGISTER en :

Filière : Génie des Procédés Chimiques et Pharmaceutiques

Option : Industrie Pharmaceutique

ETUDE COMPARATIVE DE LA PHARMACOGNOSIE DES DIFFERENTES

PARTIES DU LAURUS NOBILIS L.

ESSAIS DE FORMULATIONS THERAPEUTIQUES.

Devant le jury :

Mr. HAMMOUDI Khaled Professeur UMBB Président

Mr. NABIEV Mohamed Professeur UMBB Rapporteur

Mr. KHIMECHE Kamel M.C. (A) EMP-Alger Examinateur

Mme. FAZOUANE Fethia Professeur UMBB Examinatrice

Année Universitaire : 2011/ 2012


I.20. Usages traditionnelles et médicamenteux : ..............................................................................21
II.14. b.2.2.Indice d’ester ( IE ) :( NF T 75-104 Juin 1982 ) .......................................................84
Dédicaces

Avec l’aide de dieu, j’ai pu réaliser ce modeste travail que je dédie :


À mes très chers parents pour leurs dévouements, leurs amours, leurs sacrifices et
leurs encouragements. Que ce travail soit, pour eux, un faible témoignage de ma
profonde affection et tendresse.
À ma grand-mère paternel, pour leur présence dans tous les instants, pour le
soutien qu’elle m’a apporté, avec toute mon affection et ma reconnaissance.
Je teins à adresser un hommage à ma grand-mère maternel qui m’a encouragée à
me battre pour trouver mon espace.
À mes frères et mes sœurs et à toute ma famille.
À tous mes amis .
Enfin à toutes les personnes qui comptent pour moi, intervenues dans ma vie à
un moment ou à un autre et qui ont participé à faire de moi celle que je suis
aujourd’hui…

Ratiba
Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puissant, pour m’avoir donnée la force et la
patience.

Une thèse, tant nominative soit elle, est avant tout un travail de réflexion collective, donc
au terme de ce travail, il m’est à la fois un plaisir et un devoir de remercier sincèrement
toutes les personnes qui ont participé à sa réalisation.

Ce travail a été réalisé au sein du laboratoire de synthèse pétrochimique de la faculté des


hydrocarbures et de la chimie de l’université M’HAMED BOUGARA de BOUMERDES,
sous la direction de Pr. NABIEV Mohamed.

Je tiens, en tout premier lieu, à remercier le personne sans qui ce présent travail n’aurait
jamais vu le jour : NABIEV Mohamed , Professeur à la faculté des hydrocarbures et de la
chimie, pour avoir encadré et dirigé ce travail avec une grande rigueur scientifique, sa
disponibilité, ses conseils et la confiance qu’il m’accordé. Qui a su trouver les mots pour
m’amener à exprimer mon rêve, faire de la recherche et transmettre les connaissances ainsi
mises en évidence ; il m’a soutenue tout au long de cette thèse, dans les bons moments,
comme dans les périodes de découragement. Je le remercie aussi pour ses qualités
humaines, qu’il trouve ici le témoignage de mon grand respect et de mon estime.

Je suis infiniment reconnaissante à Monsieur le Professeur K. HAMMOUDI, Professeur à


la faculté des hydrocarbure et de la chimie, pour l’inlassable soutient qu’il m’a toujours
accordé, pour la facilité de travail qu’il m’a procurée et pour les précieux conseils qu’il
m’a prodigués tout au long de mon travail. Votre dynamisme pour la recherche des
produits naturels a été pour moi une source de motivation; Recevez ici l’expression de ma
profonde reconnaissance pour vos qualités scientifiques.

Je remercie chaleureusement Monsieur le Professeur B.HAMADA, Professeur à la faculté


des hydrocarbures et de la chimie , pour son sens admirable des rapports humains, pour son
aide et ses encouragements.

Je remercie sincèrement Mme S. HAMMOUDI, Mme F. OUDJEDI, Mieur ZERAIBI, Mieur


RIBA qui m’ont aidée .Recevez ici l’expression de ma profonde gratitude.
Je tiens à remercier sincèrement Monsieur CHADER, maitre assistant à la faculté de
médecine et de pharmacie à Alger, pour son aide inestimable, sa gentillesse, sa
disponibilité pendant les moments difficiles. Qui m'a accueilli au sein du leur Laboratoire :
Un grand merci à toute l’équipe du laboratoire nationale de contrôle des produits
pharmaceutiques à Alger pour leurs accueils chaleureux pour leur gentillesse, leur humour.

Je n’aurai garde d’oublier Monsieur BOUCENNA, enseignant chercheur et chef de


département de génie des procédés chimiques et pharmaceutiques à l’université de
BOUMERDES, pour sa joie de vivre, les nombreuses discussion scientifiques qui m’ont
enrichies et pour ces pertinence conseils.

Mes remerciements s’adressent aussi aux membres du laboratoire de génie des procédés
chimiques et pharmaceutiques :Mieur AKOUCHE, Mme Hafsa ,Meme BOUDERBALA et à
Melle Djamila……... Qui ont mis à ma disposition les condition matérielles nécessaires
pour la réalisation de ce travail tout au long la période de recherche qu’ils ici mon respect
et reconnaissance.

J’aimerais également remercier tout les Professeurs et les Enseignants, du département de


génie des procédés chimiques et pharmaceutiques à la faculté des hydrocarbure et de la
chimie, Université de BOUMERDES.

Que les honorables membres du jury veuillent croire en mes remerciements anticipés pour
avoir accepté de faire partie de mon jury de thèse. J’ai apprécié notre interaction lors de
mon examen de thèse et lors de ma soutenance publique.

• Monsieur le professeur K. HAMMOUDI , Professeur à l’université de BOUMERDES ;

• Monsieur le professeur K. KHIMECHE, Maitre conférences (A) à EMP de BORDJ EL


BAHRI ( ALGER ) ;

• Madame le professeur F. FAZOUANE , Professeur à l’université de BOUMERDES.

Je tiens à remercier, également, tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la
réalisation de ce modeste travail.
Liste des symboles et d’abréviations

AFNOR : Association Française de normalisation

ATCC : American Type Culture Collection

°C : dégrée Celcius

CCM: Chromatographie sur Couche Mince

CLHP : Chromatographie Liquide Haute Performance

CMI : Concentration Minimale Inhibitrice

CMB : Concentration Minimale Bactéricide

CMF : Concentration Minimale Fongicide

CPG : Chromatographie en Phase Gazeuse

DL50 : Dose létale 50

DMAPP : Diméthylallyl pyrophosphate

DMSO : Diméthylsulfoxyde

DO : Densité Optique

DPPH : 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle

Fig : Figure

μg : Microgramme

GC/MS : Chromatographie en phase gazeuse couplée à un spectromètre de masse

H : Taux d’humidité

HD : Hydrodistillation

HE : Huile essentielle

IA : Indice d’acide

IE : Indice d’ester
IPP : Diphosphate d’isopentényle

II : Indice d’iode

IR : Indice de réfraction

IR : Infrarouge

J : Jours

Kg : Kilogramme

μl : microlitre

LPP : Diphosphate de linalyle

μm : Micromètre

M-H : Muëller Hinton

μmol : micromole

MS : Spectrométrie de masse ( Mass Spectrometry)

MH : Masse humide de la matière végétale

MS : quantité de la matière végétale sèche

M0 : masse de l’échantillon avant étuvage

M1 : masse de l’échantillon après étuvage

MHE : Quantité d’extrait récupérée

nm : nanomètre

OMS : Organisation Mondiale de la Santé

P : Pression

Patm : pression atmosphérique

P.F. : point de fusion

pH : Potentiel d’Hydrogène
ppm : partie par million

RMN : Résonance Magnétique Nucléaire

SAB : sabouraud

SM : Spectrométrie de Masse

Teb : Température d’ébullition

tr : Temps de rétention

UI : unité internationale

UFC : Unité Formant des colonies

UV : Ultra-violet

Vf : Volume finale

Vi : Volume initiale

% : pourcentage

ml : milli Litre

PCA : Plat Count Agar

RHE : Rendement en Huile Essentielle

tr : trace
Résumé :

Les plantes sont capable de produire des substances naturelles très diversifiées, qui peuvent
être très utiles pour l’homme. Parmi ces substances on cite les huiles essentielles. A cet
effet , et dans le cadre de la valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéresse aux
espèces de la famille des Lauracées qui est l’une des familles les plus utilisés dans le
monde comme source d’épice. La plante sur laquelle a porté notre choix est une espèce de
laurier ( Laurus nobilis L.) provenant de la région de larba (BLIDA). Dans ce contexte,
l’objectif de ce travail est l’étude comparative de la pharmacognosie des différentes parties
du laurus nobilis à savoir les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines .
L’analyse phytochimique a révélé la présence de quelques groupes chimiques (polyphénols
totaux, des alcaloïdes…..etc) .Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à
partir des feuilles , des tiges, des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats
des rendements en huile essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%,
respectivement. Les racines du laurus nobilis ne contenant pas d’huile essentielle. Les
quatre huiles essentielles obtenues ont été analysées qualitativement, ensuite ils ont été
caractérisées par leur composition chimique grâce à des analyses par CG et CG/SM ; dans
les tiges du laurier l’eugénol méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide
apparaissent comme les constituants majoritaires de l'HE (10.62%, 9.24%, 5.66% et
5.05%). Outre le 1,8-cinéole (10.65% ) , les principales composantes des feuilles étaient le
linalool et le terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE (
11.07% , 11.49%), suivi du Eugénol méthyl ether ( 9.74 %).Alors que dans l'HE des fruits
les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene, le Lauric anhydride , le
cedren-13-ol et le β-élémène (21.83%, 16.42% ,15.05% et 11.46% ) . Les ocimenes étaient
absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le composant majoritaire des feuilles
était présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un pourcentage faible. D’où la
composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des tiges et des fruits du laurier
noble est différentes les une des autres.

Après avoir s’assurer de la bonne qualité de la matière première , il a été procédé à la


formulation des deux pommades à base de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis,
une décongestionnante et l’autre antiseptique. Les tests macroscopiques, l’homogénéité et
le pH des pommades ont été déterminés. Les résultats de teste de tolérance des pommades
préparés ont révélé non irritante.
Les extraits volatils, les pommades formulées ont été également soumis à un criblage pour
leur activité antimicrobienne possible in vitro, contre trois souches de bactéries pathogène
et une seule espèce de levure, en employant la méthode de diffusion à partir d’un disque
solide. Tous les extraits volatils ont réagi positivement au moins sur une des souches
microbiennes testées. Les extraits volatils d'une même plante ont montré des activités
différentes et les CMI ont été déterminée à partir des extraits les plus actifs en milieu
gélosé, l’huile essentielle de la feuille de Laurus nobilis a témoigné d’une forte activité
antimicrobienne même vis à vis de souches multirésistantes aux antibiotiques.

Mots clé :Laurus nobilis, étude phytochimique, huile essentielle, test de tolérance, activité
antimicrobienne.

Summary:

Plants are capable of producing highly diverse natural substances, which can be very useful
to humans. Among these substances are cited as essential oils. For this purpose, and
through the enhancement of the flora of Algeria, it was interested in the species of the
Lauraceae family, which is one of the most families in use worldwide as a source of spice.
The plant that has turned our choice is a species of laurel (Laurus nobilis L.) from the
region of Larba (BLIDA). In this context, the objective of this work is the comparative
study of pharmacognosy the different parts of Laurus nobilis ; leaves, stems, flowers, fruits
and roots. The phytochemical analysis revealed the presence of some chemical groups (
polyphenols, alkaloids, etc. .....). The volatile oils were isolated by hydrodistillation from
leaves, stems, fruits and dried flowers of Laurus nobilis, the results of essential oil yields
are different, 0.79%, 0.1%, 1.15%, 0.82%, respectively. The roots of Laurus nobilis are not
contain essential oil. The four essential oils obtained were analyzed qualitatively, then they
were characterized by their chemical composition through analysis by GC and GC / MS, in
the stems of laurel eugenol methyl ether, terpényl acetate, linalool and caryophyllene oxide
appears as predominant materials of the essential oil (10.62%, 9.24%, 5.66% and 5.05%).
Besides 1,8-cineole (10.65%), the main components of the leaves were linalool and
terpényl acetate appears to be the major constituents of the essential oil (11.07%, 11.49%),
followed by eugenol methyl ether (9.74% ). While in the fruit essential oil the major
components that have been found are the (E)-β-ocimene, the Lauric anhydride, cedren-13-
ol and β-elemene (21.83%, 16.42%, 15.05% and 11.46%). The ocimenes were absent in
the leaves and stems. 1,8-cineole, the major component of the leaves was also present in
the stems and fruits but with a low percentage. Hence the chemical composition of
essential oils from leaves, stems and fruits of the laurel is different from one another. After
ensuring the quality of the raw material, was carried to the formulation of the two
ointments essential oil from leaves of Laurus nobilis, a decongestant and other antiseptic.
The macroscopic tests, homogeneity and pH of ointments were determined . The results of
tolerance tests revealed ointments prepared non-irritating. The volatile extracts, ointments
made were also subjected to screening for their antimicrobial activity as possible in vitro
against three strains of pathogenic bacteria and one yeast species, using the diffusion
method from a solid disk. All volatile extracts reacted positively on at least one microbial
strains tested. The volatile extracts of the same plant showed different activities and MICs
were determined from the most active extracts in agar medium, the essential oil of Laurus
nobilis leaf has demonstrated a strong antimicrobial activity even screws Screw strains
resistant to multiple antibiotics.

Key words: Laurus nobilis, phytochemical study, essential oil, tolerance test,
antimicrobial activity.

:‫ﻣﻠﺨﺺ‬

‫ ﻣﻦ ﺑﯿﻦ ھﺬه اﻟﻤﻮاد‬.‫ واﻟﺘﻲ ﯾﻤﻜﻦ أن ﺗﻜﻮن ﻣﻔﯿﺪة ﺟﺪا ﻟﻺﻧﺴﺎن‬،‫اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻗﺎدرة ﻋﻠﻰ إﻧﺘﺎج ﻣﻮاد طﺒﯿﻌﺔ ﻣﺘﻨﻮﻋﺔ ﻟﻠﻐﺎﯾﺔ‬

,Lauracees ‫ اھﺘﻤﻤﻨﺎ ﺑﻨﻮع ﻣﻦ أﺳﺮة‬,‫ وذﻟﻚ ﻣﻦ ﺧﻼل ﺗﻌﺰﯾﺰ اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻓﻲ اﻟﺠﺰاﺋﺮ‬،‫ ﻟﮭﺬا اﻟﻐﺮض‬.‫اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‬

‫ اﻟﻤﺤﻄﺔ اﻟﺘﻲ ﺣﻮﻟﺖ‬.‫اﻟﺘﻲ ﺗﻌﺪ واﺣﺪة ﻣﻦ اﻟﻌﺎﺋﻼت اﻷﻛﺜﺮ اﺳﺘﺨﺪاﻣﺎ ﻓﻲ ﺟﻤﯿﻊ أﻧﺤﺎء اﻟﻌﺎﻟﻢ ﺑﺎﻋﺘﺒﺎرھﺎ ﻣﺼﺪرا ﻣﻦ اﻟﺘﻮاﺑﻞ‬

‫ ﻓﻲ ھﺬا اﻟﺴﯿﺎق ﻓﺎن اﻟﮭﺪف‬. ‫ ( ﺑﺎﻟﺒﻠﯿﺪة‬Larba ) ‫ ( ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ اﻷرﺑﻌﺎء‬nobilis Laurus) ‫ﺧﯿﺎرﻧﺎ ھﻮ ﻧﻮع ﻣﻦ اﻟﻐﺎر‬

،‫اﻟﻔﻮاﻛﮫ‬،‫ و ا ﻀﺎ اﻟﺴﯿﻘﺎن‬nobilis Laurus ‫ﻣﻦ ھﺬا اﻟﻌﻤﻞ ھﻮ دراﺳﺔ و ﻣﻘﺎرﻧﺔ ﻷﺟﺰاء ﻣﻦ اﻟﻌﻘﺎﻗﯿﺮ اﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻣﻦ أوراق‬

‫ اﻟﺦ‬،‫ ﻗﻠﻮﯾﺪات‬،‫ ﻛﺸﻒ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﻲ اﻟﻨﺒﺎﺗﻲ وﺟﻮد ﺑﻌﺾ اﻟﻤﺠﻤﻮﻋﺎت اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ )اﻟﺒﻮﻟﯿﻔﯿﻨﻮل اﻟﻜﻠﻲ‬. ‫اﻟﺠﺬور واﻟﺰھﻮر‬

‫اﻟﺰھﻮر و اﻟﺠﺬور‬،‫ اﻟﻔﻮاﻛﮫ‬،‫ اﻟﺴﯿﻘﺎن‬،‫ ﻣﻦ اﻷوراق‬hydrodistillation ‫ و ﺗﻢ ﻋﺰل اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﺑﻮاﺳﻄﺔ‬.(...

‫ ﻋﻠﻰ‬٪0.82 ،٪1.15 ،٪0.1 ،٪0.79 ،‫ ﻧﺘﺎﺋﺞ ﻋﺎﺋﺪات اﻟﻨﻔﻂ اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ‬، Laurus bilisno ‫اﻟﻤﺠﻔﻔﺔ ﻣﻦ ﻧﺒﺘﺔ‬

‫ وﻗﺪ ﺗﻢ ﺗﺤﻠﯿﻞ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ اﻷرﺑﻌﺔ‬. ‫ ) اﻟﻐﺎر ( ﻻ ﺗﺤﺘﻮي ﻋﻠﻰ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‬nobilis sLauru ‫ ﺟﺬور‬.‫اﻟﺘﻮاﻟﻲ‬

\GC ‫ و‬GC ‫ ﺛﻢ ﻛﺎﻧﺖ ﺗﺘﻤﯿﺰ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻣﻦ ﺧﻼل اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ ﺑﻮاﺳﻄﺔ‬،‫اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﯿﮭﺎ ﻣﻦ اﻟﻨﺎﺣﯿﺔ اﻟﻨﻮﻋﯿﺔ‬
‫‪ MS‬ﺑﻤﺎ ﯾﻠﻲ ‪ :‬ﻓﻲ ﺳﯿﻘﺎن ﻧﺒﺘﺔ اﻟﻐﺎر ﯾﺒﺪو اﻟﻐﺎﻟﺐ ﻣﻦ ﻣﻮاد ‪,terpenyl acetate ,eugenol methyl ether :‬‬

‫‪. ( % 5.05, % 5.66, %9.24 ,%10.62) aryophyllene oxidec ,aloollin‬‬

‫ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ ‪ ( 10.65%) 1 , 8-cineol‬ﻛﺎﻧﺖ اﻟﻌﻨﺎﺻﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق ‪linalool ،‬‬

‫‪ ,( % 11.07, % 11.49‬ﺗﻠﯿﮭﺎ ‪. ( ٪ 9.74 ) eugenohtlmeytherel‬‬ ‫‪) terpenylacetate،‬‬

‫اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﻌﺜﻮر ﻋﻠﯿﮭﺎ ھﻲ ‪:‬‬ ‫ﻣﻜﻮﻧﺎت اﻟﻔﺎﻛﮭﺔ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ‬ ‫أن‬ ‫ﻓﻲ ﺣﯿﻦ‬

‫‪ cedren-13 - ol , anhydride Iauric , (E) -ᵦ-ocimene‬و ‪, %16.42 , %21.83 )ᵦ -elemene‬‬

‫‪ ocimenes .(%11.46 ,%15.05‬ﻛﺎﻧﺖ ﻏﺎﺋﺒﺔ ﻓﻲ اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن ‪ .‬وﻛﺎن ‪ 1 , 8-cineol‬اﻟﻌﻨﺼﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﻲ ﻓﻲ‬

‫اﻷوراق أﯾﻀﺎ ﻣﻮﺟﻮدة ﻓﻲ اﻟﺴﯿﻘﺎن واﻟﻔﻮاﻛﮫ وﻟﻜﻦ ﻣﻊ ﻧﺴﺒﺔ ﻣﻨﺨﻔﻀﺔ‪ .‬وﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻌﻄﺮﯾﺔ ﻣﻦ‬

‫اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن و اﻟﻔﻮاﻛﮫ ﻣﻦ اﻟﻐﺎر ﺗﺨﺘﻠﻒ ﻋﻦ ﺑﻌﻀﮭﺎ اﻟﺒﻌﺾ‪ .‬ﺑﻌﺪ اﻟﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ ﻧﻮﻋﯿﺔ اﻟﻤﻮاد اﻟﺨﺎم‪،‬ﺗﻤﺖ ﺻﯿﺎﻏﺔ‬

‫ﻣﺮھﻤﯿﻦ ﺑﺎﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق ‪ .‬ﺗﻢ ﺗﺤﺪﯾﺪ اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻌﯿﻨﯿﺔ‪ ،‬اﻟﺘﺠﺎﻧﺲ و درﺟﺔ اﻟﺤﻤﻮﺿﺔ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ‪ .‬وﻛﺸﻔﺖ ﻧﺘﺎﺋﺞ‬

‫اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ اﺳﺘﻌﺪاد ﻏﯿﺮ ﻣﺰﻋﺞ‪ .‬أدﺧﻠﺖ اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة اﻟﻤﺴﺘﺨﺮﺟﺔ و اﻟﻤﺮاھﻢ ﻋﻠﻰ اﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﻧﺸﺎطﮭﻢ‬

‫اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻠﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت ﻓﻲ اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺿﺪ ﺛﻼﺛﺔ ﺳﻼﻻت ﻣﻦ اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ اﻟﻤﺴﺒﺒﺔ ﻟﻸﻣﺮاض وﻧﻮع واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺨﻤﯿﺮة ‪ ،‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام‬

‫طﺮﯾﻘﺔ اﻻﻧﺘﺸﺎر ﻣﻦ ﻗﺮص ﺻﻠﺐ‪ .‬ﻛﺎن رد ﻓﻌﻞ ﻛﻞ ﻣﻨﮭﺎ اﯾﺠﺎﺑﯿﺎ ﻋﻠﻰ اﻷﻗﻞ ﻋﻠﻰ واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺴﻼﻻت اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﯿﺔ اﻟﺘﻲ ﺗﻢ‬

‫اﺧﺘﺒﺎرھﺎ‪ .‬اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻣﻦ ﻧﻔﺲ اﻟﻨﺒﺎت أظﮭﺮت ﺗﺤﺪﯾﺪ ﻧﺸﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ ‪،‬و أظﮭﺮت اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻷوراق‬

‫اﻟﻐﺎر ﻗﻮة ﻧﺸﺎطﮭﺎ ﺿﺪ اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت اﻟﻤﻘﺎوﻣﺔ ﻟﻠﻤﻀﺎدات اﻟﺤﯿﻮﯾﺔ اﻟﻤﺘﻌﺪدة‪.‬‬

‫ﻛﻠﻤﺎت اﻟﺒﺤﺚ‪ :‬اﻟﻐﺎر ‪ ،‬دراﺳﺔ ﻧﺒﺎﺗﯿﺔ‪ ،‬اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‪،‬اﺧﺘﺒﺎر اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ‪ ،‬وﻧﺸﺎط ﻣﻀﺎدات اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت‪.‬‬
Introduction
Introduction

Les témoignages retrouvés sur les parois rocheuses, des bas reliefs de son
environnement , des poteries en terre cuite, sont la preuve que l’homme s’est depuis la nuit
des temps servi des plantes, il leur a attribué des pouvoirs magiques, puis à appris peu à
discerner leurs propriétés. Ces plantes ont constitué pour lui une source de nourriture, voire
un moyen de guérir ses maladies . [1] On a même découvert que les animaux sauvages
utilisent instinctivement certaines plantes pour se soigner ! [2]

La promotion de la phytothérapie nous permettra de sauvegarder le savoir de nos


ancêtres qui tend à disparaitre. Alors actuellement , beaucoup de laboratoires
pharmaceutiques s’intéressent de près aux savoirs médicinaux des guérisseurs des
peuplades primitives menant une vie très proche de la nature.[3] les plantes médicinales
sont aussi un facteur économique majeur pour les pays en voie de développement.[4]

En effet, la recherche scientifique a tendance à ce focaliser sur l’exploration de ces


substances qui constituent une alternative prometteuse aux anciennes substances d’origine
synthétique, dont l’usage s’accompagne des effets secondaires indésirables. Face à cette
situation préoccupante, d’énormes efforts sont consentis dans le domaine de la recherche
médicale en vue de trouver de nouvelles molécules naturelles actives efficaces et non
toxiques pouvant être substituées aux antibiotiques.

Alors, les substances naturelles comme les molécules bioactives issues des végétaux
suscitent actuellement un intérêt tout particulier par leurs multiples activités biologiques
(antibactérienne et antioxydante) tant appréciées dans le domaine de la santé humaine et de
l’industrie alimentaire, pharmaceutique ou cosmétique.[5]

En effet, une plante est dite médicinale lorsque l’un de ses organes par exemple la
feuille, possède des activités pharmacologiques pouvant conduire à des emplois
thérapeutiques.

Les plantes en général, se caractérisent par deux types de métabolismes qui englobe
l'ensemble de la fonction, primaire et secondaire fournissant deux types de métabolites
respectivement primaires en quantités élevées ( sucre, lipides, protéines ) et secondaires en
faible quantités mais de plus en plus grande importance qui ont été par la suite exploitées
par l'homme pour le rôle bénéfique dans un large éventail d'application.
Les huiles essentielles ou les essences, font partie de ce groupe de métabolites secondaires
et sont synthétisées et sécrétées par l’intermédiaire de cellules ou organes particuliers dans
lesquelles elles restent localisées. [ 6]

L’extraction de ces huiles essentielles est certainement la phase la plus délicate et la plus
importante du processus. Elle a pour but de capter les produits les plus subtils et les plus
fragiles élaborés par le végétal.

A cet effet, la région de la méditerranée, compte tenu de sa forte biodiversité végétale,


offre un potentiel en substances naturelles considérable. Environ 25000 espèces y ont été
retrouvées dont certaines sont largement consommées et appréciées comme traitement de

1|P a ge
Introduction

nombreuses pathologies. De fait, l’exploration de ces ressources végétales en vue d’établir


des bases scientifiques justifiant cette médication semble nécessaire.

Les méthodes d’exploration et d’exploitation des matières végétales ont connu des
progrès spectaculaires quant à l’extraction et la purification de leurs principes actifs, ainsi
le passage de leur emploi sous leur forme brute à des extraits concentrés et purifiés ont
permis d’en intensifier l’effet.

Parmi les pays méditerranéen, l’Algérie, qui possède une position géographique
particulière lui accordant une large bande de végétation très variée notamment les plante
aromatique médicinales. En Algérie, la phytothérapie est une pratique très ancienne. La
connaissance empiriques se sont transmises verbalement à travers les générations et se sont
enrichies grâce à la situation géographique stratégique bien connue du l’Algérie.

Cependant, jusqu’à présent, seul le coté botanique de cette biomasse a été largement
documenté, ses propriétés biologiques ne le sont que peu. A cet effet, et dans le cadre de la
valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéressé aux espèces de la famille des
Lauracées.

Laurus nobilis est une plante abondante choisie de cette biomasse végétale en raison du
bénéfice des propriétés thérapeutiques que lui a attribuées la médecine traditionnelle, a
savoir: les industries de l’aromatisation, de la parfumerie, de la conservation, des
cosmétiques et de la pharmacologie grâce à ses divers effets antimicrobiens et
antioxydants.

C’est dans un cadre de contribution à la valorisation de notre patrimoine végétal que


nous avons jugé nécessaire d’identifier les principales classes des composés secondaires
de laurus nobilis L . La présente étude a pour objectif principal la valorisation de cette
plante ( laurus nobilis ) provenant de la région de BLIDA, par une étude
pharmacognosique de ses différentes parties sous l’évaluation de ses activités biologiques
liées aux composés détectés .

Cette étude comporte deux parties essentielles. Une partie relative à l’étude
bibliographique et une autre partie réservée à l’étude expérimentale, par conséquent dans
la partie bibliographique, nous présenterons un bilan bibliographique des connaissances
botaniques des Lauracées, en particulier l’espèce Laurus nobilis L., localisation ,
composition, utilisation….etc.

Ensuite, la partie expérimentale abordera l’analyse de la matière première, l’étude


phytochimique ( screening phytochimique ), l’extraction et l’identification des huiles
essentielles et la formulation des pommades thérapeutiques, à savoir l’évaluation de leurs
activités antibactériennes ( c.-à-d. huiles essentielles et pommades ) .

Enfin, une conclusion générale qui résume l’ensemble des résultats obtenus.

2|P a ge
Aperçus
bibliographique
Chapitre I
La pharmacognosie du
laurier noble.
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.1. Etude pharmacognosique :

La pharmacognosie ( officiel depuis 1969,CSP) ; science multidisciplinaire, au


carrefour de toutes les disciplines scientifiques et pharmaceutiques .C’est l’étude de la
composition et des effets des principes actifs contenus dans des matières premières
d’origine naturelle, animale ou végétale, cette étude étant le plus souvent limitée
seulement aux végétaux et produits issus des végétaux. Longtemps utilisé pour définir
l’étude des principes actifs d’origine végétale.

Les objectifs de cette étude sont :

· Connaitre les principales matières premières d’origine végétale utilisées telles quelles
ou pour l’extraction de certain de leur constituants ;

· Connaitre pour chacune de ces matières premières l’origine, l’identité, morphologie,


les modes de production et leur influence sur la composition chimique, les activités;

· Pour les principes actifs majeurs utilisés en thérapeutique, connaitre les activités
pharmacologiques, leur métabolisme, leur pharmacocinétique, leurs effets
secondaires et les contre-indications ainsi que les propriétés physicochimiques
(stabilité , solubilité , extractibilité , structure, réactivités,….) ;

· Comprendre l’usage de ces drogues ou de ces substances naturelles ( indications,


contre indication, effets secondaires, interactions médicamenteuses,…) en médecine
allopathique ou homéopathique, humaine ou vétérinaire; [7,8]

3|P a ge
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

Historique :
Laurus nobilis est un arbre connu dans la mythologie grecque et romaine comme un
emblème de la victoire et le succès (Leung et Foster, 1999).Son nom commun viendrait du
celte lauer (semper virens) selon certains ou du latin laus, louange, pour souligner les
propriétés médicinales de la plante, déjà louées dans l’Antiquité. Le Laurus était consacré
à Apollon,le dieu grec de la lumière, et un symbole de paix et de la victoire utilisé pour
faire des couronnes des empereurs, des généraux, et les poètes.On pensait que, en le
mâchant, on obtiendrait le don de la prophétie. Selon Pline, le laurier était une plante
sacrée dédiée à Dionysos et à Jupiter, peut-être parce qu’on disait que les foudres
l’épargnaient. Selon Suétone, Jules César portait toujours une couronne de laurier (on
pense que c’était pour masquer sa calvitie).À Rome, on croyait que le dessèchement de
l’arbuste annonçait un désastre. À la même époque, les feuilles de laurier été à la fois un
médicament et une épice. Pendant les saturnales, des fêtes célébrées au mois de décembre,
le feuillage était tressé en guirlandes. En infusion, ses feuilles étaient consommées pour
leurs effets révulsifs et toniques sur l’estomac et la vessie ; sous forme de cataplasme,
elles passaient pour soulager les piqures de guêpe ou d’abeille. Au 1er siècle de notre ère,
le médecin grec dioscoride notait que l’écorce de laurier «brise les pierres(dans les reins)
et soulage les affections du foie ».
En Grèce ancienne, l’oracle de delphes utilisait le laurier dans ses rituels de divination.
Dans la Grèce antique, les vainqueurs des jeux olympiques ont été décorés avec des
couronnes de laurier, et ces feuilles est devenu un symbole immortel de la victoire et de
courage. Lorsque les médecins grecs ont terminé leurs études, ils ont été couronnés de
branches de laurier appelé lauris baca, et qui plus tard a donné naissance au baccalauréat
terme, qui désigne l'accomplissement d'un degré.Dans les temps bibliques, la baie était le
symbole de la richesse et de la méchanceté. En plus l'huile de laurier ou du beurre, obtenu
à partir des fruits (baies) de laurus nobilis est un ingrédient essentiel de la pommade
Laurin, une médecine populaire pour les rhumatismes et la goutte et pour le traitement de
la rate et maladies du foie. Il trouve également application en médecine
vétérinaire.[9,10,11,12,13,14]
I.3. Espèce :
Laurus nobilis L.
Laurier commun , laurier-sauce, laurier noble .
Nom latin du laurier, du celtique blaur = toujours vert. [9,11,15]
I.4. Famille :
Laurier (Laurus nobilis. L) est une plante à importance médicinales et aromatiques, qui
appartient à la famille des Lauraceae (Lauracées),famille botanique importante souvent
aromatiques, ses espèces peuvent être reconnues par leur odeur aromatique.Celle-ci
comprennent 32 genres et environ 2000-2500 espèces,dont certaines produisent des huiles
essentielles appréciées, comme la canelle, les sassafras, le camphrier, le laurier .
Les Lauraceae sont l'un des plus importants tropicales familles ligneuses (Gentry, 1988).
Des études récentes ont révélé une étroite relation entre ses genres, tous sont dioïque et la
plupart ont inflorescences ombelle sous-tendu par bractées. [16,17,18,19,20,21,22,23,24]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.5. Dénomination internationale : Laurus nobilis L.[9, 11, 17,25, 26,51]


Tableau 1 : dénomination internationale de laurus nobilis
Francais laurier sauce, laurier d’Apollon , laurier commun, laurier franc, laurier noble .
Allemand Lorbeersamen, lorbeer, lorbeerbaum, gewürzlorbeer .
Anglais laurel oil, sweet bay, bay tree, bay, bay laurel, true laurel, roman laurel, noble
laurel.
Italien olio di alloro.
Portugais louro.
Arabe rand, habb r’ar
Nom targui ou berbère taselt , rend

I.6. Autres espèce de laurus nobilis :


L’espèce se subdivise en plusieurs variétés qui se différencient selon la forme des
feuilles et la taille des fruits ; leurs usages culinaires sont cependant strictement non
identiques.[25]

Tableau 2 :Autres espèces du laurier noble ( laurus nobilis ).

Nom vernaculaire Nom scientifique Famille

Laurier-amande Prunus laurocerasus L. Rosacées


Laurier benzoin Lindera benzoin L. Lauracées
Laurier-cerise Prunus laurocerasus L. Rosacées
Laurier d'Alexandrie Danae racemosa Liliacées
Laurier de Californie Umbellularia californica Lauracées
Laurier des bois Daphne laureola L. Thyméléacées
Laurier des Iroquois ou pavame Sassafras albidum Lauracées
Laurier du Portugal Prunus lusitanica L. Rosacées
Laurier rose Nerium oleander L. Apocynacées
Laurier-tin ou lauretin Viburnum tinus L. Caprifoliacées
Laurier sassafras Sassafras officinalis Nees Lauracées

I.7. Classification botanique :


La classification botanique est relatée dans le tableau 3.[11 ]

Tableau 3. Classification botanique du laurus nobilis L.

Règne Plantae
Sous-règne Tracheophyta = Tracheobionta
(Cormophyta)
Division Magnoliophyta
Classe Magnoliopsida
Ordre Laurales
Famille Lauraceae
Genre Laurus
Espèces Laurus nobilis L.,

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.8. Caractérisation botanique et morphologie :


Le laurier noble est un arbre généralement dioique (à sexe
séparé),de 2 à 10m de la hauteur atteignant parfois une hauteur
de 15-20m(20 à 30 pieds) aux branches dirigées vers le haut,
et toujours verts qui pousse sauvages ou cultivées. [27,28,29,30,
31,32,33]
Figure1 : arbre de laurus nobilis.[34]
· Les feuilles : Les feuilles sont persistantes, alternes,allongées à lancéolées,
d’environ 10 cm de long sur 3 à 5 cm de large ; elles se terminent en pointe des
2 cotés et sont courtement pétiolées ; leur limbe est glabre, entier, souvent
légèrement ondulé et épaissi sur les bords, recourbé vers l’intérieur,d’un vert
foncé. Si la feuille a une couleur brun-vert, il est trop âgés et est amer, sans
arôme.La feuille de laurier a une saveur forte, épicé, amer, piquant et de
refroidissement nuances. Lorsque la feuille entière séchée est cuit dans les aliments,
son arôme est libérée lentement et devient plus intense. [9, 12,25, 26,28,35, 36]

Figure 2 :feuilles de laurus nobilis. [34]

· Les fleurs : Les fleurs sont petites odorantes en forme d'étoile à la fin du
printemps de couleur blanchâtres à jaune, les fleurs sont groupées à l’aisselle des
feuilles en petits bouquets en forme d’ombelles axillaires ou en courts
panicules.Elles sont enfermées dans un involure formé de bractées caduques à 4
dents (lobes) ; les fleurs males possèdent généralement 8 à12 étamines, dont la
plupart sont stériles, elles portent en leur centre une glande nectarifère, les fleurs
femelles portent 4 staminodes (étamines stériles), un ovaire courtement pétiolé et
divisé en 3 loges, et un stigmate court et émoussé. La floraison à lieu du mars à
mai. [12,25, 28,36,37]

Figure 3:fleurs de laurus nobilisL. [34]


· Les fruits : fruits ou baies de laurier (baies globuleuse,drupe aromatique
charnue ) ressembler à une petite olive avec la forme ovale ou ellipsoïde. Les

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fruits sont de couleur vert au début et violet au noir profond à maturité


(Septembre). Les fruits secs sont drupacé,ovoïdes , d'environ 15 mm à 2cm de long
et 10 mm de large .La surface extérieure est glabre, brillant,presque noir et est
grossièrement ridé en raison de la contraction de la région étroite succulentes sous
l'épiderme.Il est constitué, de l’extérieur à l’intérieur, par le péricarpe (ou la
chair), le mésocarpe(ou la peau), l’endocarpe(ou noyau interne). Les baies restent
sur la plante tout l’hiver, parfois jusqu’au printemps, pouvant coexister avec la
nouvelle floraison.[9, 11, 12,18, 25,26, 28,35,37,38]

Figure 4 :fruits de laurus nobilis L. [34]

I.9. Répartition géographique :


Cette famille qui est principalement tropical, se trouve dans la région méditerranéene en
particulier dans la (Turquie, Grèce, Espagne,Italie, France).

Figure 5: la région Méditerranéene [34]

Le laurier est aussi largement cultivé dans les pays arabes de la Libye au
Maroc.Actuellement cette espèce, sauvage ou cultivées, est présent dans le sud et l'ouest de
l'Europe, et aux Etats-Unis comme plante ornementale. Il pousse spontanément dans la
garrigue et les bois en Europe et autour de la Méditerranée.
[9,14,19,27,28,37,39,40,41,42,43,44,45]

I.10. Répartition géographique en Algérie :


Dans les forets et ravins humides. Commun dans le tell algérois et constantinois.[15]

I.11. Pays d’origine : Il s’agit probablement de l’Asie mineure,bien que l’espèce se


rencontre aujourd’hui dans l’ensemble des pays méditerranéennes, dans l’ex-Yougoslavie
ainsi qu’en inde.[ 11,25, 46]

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I.12. Culture :
Laurus nobilis L. ,est un arbre abondant dans différents environnements il est cultivé
dans de nombreuses régions tempérées, subtropical et chaudes et à haute précipitations du
monde. Cette plante se rencontre aussi fréquemment dans des conditions semi-arides ,il
répondre au déficit hydrique et de s'adapter à la sécheresse grâce à de nombreux
changements physiologiques et biochimiques (Impa et al., 2005).La plante nécessite de
grandes quantités d'eau pendant la première année de l'établissement des plantes.La plante
préfère les sols perméables, riches en nutriments et en humus, situés dans des
endroits protégés du vent et très ensoleillés. Le sol tourbeux riche et abondamment avec
de l'eau et l'atmosphère humide sympathique près de la côte de la mer sont des conditions
favorables à une croissance rapide et luxriant .[ 9,10, 19, 29, 39, 31,47,48]

I.13. Récolte :
Récolté les feuilles et les jeunes branches , en été, les baies en octobre, novembre à leur
maturité complète, c-à-d lorsqu’elles commencent à ce détacher d’elles même.[49]

I.14. Séchage :
HAMROUNI Ibtissem, et d’autres chercheurs tunisiens en 2010,ont étudiés les
changements qualitatives et quantitatives dans l’HE de laurier noble affecté par différentes
méthodes de séchage et les résultats ont montrés que le séchage par l'air à température
ambiante et le séchage par infrarouge à 45°C présentent un rendement en HE plus
élevé.[27] D’autres part le séchage par l’étuve à 45°C et le séchage par l’air à température
ambiante n’ont causés pratiquement aucune perte de substance volatiles par rapport à
l’herbe fraiche.[50,51]

I.15. Conservation :
Les feuilles fraiches se conservent quelques jours dans un sac plastique ou bien roulées
dans un papier absorbant légèrement humide, au réfrigérateur . Les feuilles sèches peuvent
être stockées dans des récipients hermétiques (en porcelaine, en verre ou en métal), à
l’abri de l’humidité et de la lumière. Des feuilles séchées et conservées trop longtemps
prennent une teinte rougeâtre à la lumière. Une fois pulvérisées, elles perdent rapidement
leur caractère aromatique.[25,52]Les changements dans la composition des huiles
essentielles à partir des graines de laurier ont été étudiés au cours du stockage dans
l'obscurité et la lumière. Dans ces conditions, l'huile essentielles de laurier a conservé sa
composition pour 12 moi, puisque celle-ci a retenu une composition constante au cours du
stockage dans l'obscurité et la lumière. La résistance des composants d'huile de laurier à
l'oxydation est probablement associée à la présence de substance individuels ou combinés
dont les effets de stabiliser le potentiel redox du système.Probablement, terpinenes et
d'autres composés stabilisent le système de l’huile essentielle et inhibent l'oxydation des
substances réactives.[47]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.16. Composition chimique :


Il a été signalé que la composition chimique de l'huile essentielle des feuilles, des tiges
et des fruits du Laurus nobilis sont différents les uns des autres dans une certaine
mesure.[43]
La composition chimiques des differents parties du Laurus nobilis L. est montionés dans
les tableaux 4,5,6,7,8 suivant :

Tableau 4: composition chimique des feuilles du laurus nobilis L.

Composition chimique des feuilles du Laurus nobilis L.

Composés chimiques Types


-Alcaloides isoquinoléiques de type aporphine et nor-aporphine (~0,1%),(+)-boldine , (+)-
actinodaphnine, (+)-cryptodorine, (+)-isodomesticine, (+)-
launobine, (+)-nandigérine, N-(+) méthylactinodaphnine, (+)-
néolitsine et (+)-réticuline.[25, 53,54]
-Les composés phénoliques
Compositionflavonoïdique (dix-huit flavonoïdes) des flavonoïdes non-polaires les flavones
libres(apigénine et lutéoline), les flavonols(kaempférol, la
quercétine et myricétine), la rutine - 3 ', 4' ,5,7-
tetrahydroxyflavone 3-rutinoside (rutine) -3,3 ', 4',5,7-
pentahydroxyflavone [25,53,55,56,54]

Kaempférol kaemperol 3-O-[2'', 4''-O-di-Ep-coumaroyla-L-


pyranorhamnoside] ; 3,3', 4',5,6,7, 8-heptamethoxyflavone ;3',
4',5,6,7,8-hexamethoxyflavone (nobiletine) ; 4',5,6,7,8-
pentamethoxyflavone (tangérétine). [56,57]

Dérivés acylés du kaempférol 3-rhamnosides et 3-arabinosides du kaempférol,les kaempférol-


3-glucoside, 3-galactoside.

La quercétine et myricétine l’isoquercitrin, l’hypéroside, le quercétine-3-arabinoside [25,56]

Tanin Cathéchines,proanthocyanidines, (-)-épicatéchine et B2


procyanidine, encore (+) - catéchine, (+)-gallocatéchine, (-)-
épigallocatéchine, procyanidine B4, B5 et B7.
Proanthocyanidines [15,25, 55,56]

-Un principe amer et


mucilage, [15]
-Des matières résineuses et
pectiques,[15]

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-Glycoside et ses aglycone


D-glucose et L-rhamnose, les glycosides megastigmane, D-
glucopyranosides, les disaccharides, RL-arabinofuranosyl-A-D-
glucopyranosides, vicianocides.[41,59,58,60]

-Hétérosides de lignanes (+)-5'-méthoxyisolaricirésinol-9'-O-xyloside,(+)-5'-


sécoisolaricirésinol-9'-O-xyloside et schizandraside.[25]
- Anthraquinones et
Coumarines[10,11,33,58,59]

-les lactones Eremanthine ; C zaluzanin ; zaluzanin D ; reynosine,


sesquiterpenoid déhydrocostuslactone ( teneur jusqu’à 65%) costunolide(
jusqu’à 35%) artémorine, érémanthine, désacétyl-
laurénobiolide, laurénobiolide, santamarine et verlotorine.[25,
54, 57,61]
-Huiles volatiles
1,8-cinéole (teneur entre 12 et 71%) et ses dérivés le 2,3-
déhydro-1 ,8-cinéole, sobrerols et menthadien-8-ols et linalool(6
à 30%),p-cymène( 0 à 20%), α-phellandrène(0 à 20%), géraniol
( 0 à 20%), eugénol( traces à 19%), acétate de linalyle ( 1 à
16%),α-pinène (2 à 16%), sabinène ( 4 à 13%),acétate d’α-
terpényle ( 0 à 12%), méthyleugénol ( eugénol-méthylméther, 2
à 12%), α-terpinéol (7 à 9%), β-pinène (3 à 5%) et terpinéol-4
(1 à 5%); ils sont accompagnés également de camphène, citral,
myrcène et γ-terpinène avec β-élémène l'acétate d'eugénol, le
-La vitamine E ou alpha- carvacrol, primeverosides l’éthers des acides acétiques
isobutyrique et valérianique….etc. [15, 25, 29,42, 62,63,64,60]
tocophérol,[ 10,25, 54,65]

-Acides phénylacrylique et
phénolcarbonique,
libres ou estérifiés, on trouve aussi d’autres acides comme les
acides p-coumarique,férulique, sinapique, gentisique et
vanillique.[25,60]

Tableau 5: composition chimique des fleurs du laurus nobilis L.

Composition chimique des fleurs du laurus nobilis L.

Composés chimiques Types


-L'huile essentielle Outre le 1,8-cinéole et les pinènes,les principales composantes
dans l’huile essentielle des fleurs ont été α-eudesmol, β-élémène
et β-caryophyllène,l'ocimène E, le viridiflorène, le
germacradiénol et le germacrène D. [42,53,63]

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Tableau 6 : composition chimique des tiges du laurus nobilis L.

composition chimique des tiges du laurus nobilis L.

Composés chimiques Types


-Monoterpènes, les 1,8 cinéol et de l'eugénol,dehydrocostunolide ,α-pinène, β-
volatiles sesquiterpènes. pinène, camphène, sabinène, terpinylacetate et
eugenolmethylether .[28]

Tableau 7 : composition chimique des fruits du laurus nobilis L.


Composition chimique des fruits du laurus nobilis L.

Composés chimiques Types


Les fruits contiennent à la fois
les huiles fixes et volatiles.
Huile fixe de 17-30% (cette
l’huile est d'un vert foncé,
granulés, mélange de lard
comme fondant à 40°C, à un
fluide visqueux d’arome fort et
caractéristique, composé d'une
graisse semi-solide). [11,15,
29, 51]
Une variété de matières grasses
sont présents,
Composition en stérol : Cholesterol 10,0mg/kg Sitostanol 14,5
[18,66] mg/kg
2,4-methylenecholesterol 2,1 mg/kg 5-Avenosterol 80,5
mg/kg
Campesterol 162 mg/kg 7-Stigmaterol ND
Campestanol 6,7 mg/kg 7-Avenosterol ND
L'huile extraite des fruits Stigmaterol 16,9 mg/kg Eritrodiol 10,0
contiennent des acides gras, mg/kg
Fraction saponifiable Clerosterol 27,7 mg/kg Sistosterol 1818
[11,18] mg/kg

Acide caprique C10:0 1,3 Acide oléique C18:1 22,1


Acide laurique C12:0 30,0 C18:1 trans 1,0
Acide myristique C14:0 0,8 Acide linoléique C18:2 25,6
Fraction insaponifiable Acide palmitique C16:0 14,7 Acide linolénique C18:3 1,1
Acide palmitoléique C16:1 0,2 Acide eicosénoique C20:1 0,5
Acide stéarique C18:0 0,8 ( Acide arachidique)

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Les lactones sesquiterpéniques costunolide et déhydrocostus-


lactone, stérols, cires, vitamines et composés volatils,la
cyanidine Vasapollo 3-O-glucoside (41%) et la cyanidine 3-O-
rutinoside (53%) 23% d’amidon, 2% de sucre, 0,85% de
principes amers, une résine, du mucilage, de la bassorine,
anthocyanes la cyanidine. L’huile extraite contient un
L'huile essentielle des pourcentage plus élevé avec un contenu en chlorophylle
baies , supérieur à celui de l’huile extravierge d’olive.Cependant, la
vitamine E a été isolé à partir des fruits.[10,11,15,37]

Comprennent : b-ocimène (22%), le 1,8-cinéole (9,5%),


bicyclogermacrene (4,5%), et b-élémène (2%) sont les
principaux composés volatils dans les baies. trans-ocimène et
germacrène L’huile contient aussi les lactones sesquiterpéniques
costunolide et déhydrocostuslactone. [11,37,42,63,66]

Tableau 8 : composition chimique des racines du laurus nobilis L.

Composition chimiques des racines du laurus nobilis L.

Monoterpènes et de sesquiterpènes oxygénés. Les racines contenait le plus de flavonoïdes avec une
teneur de(11,12 mg équivalents catéchine), tannins condensés(9,76 - 0,1mg CE/gps). Composés
phénoliques totaux (55,45 - 2,9 mg GAME / g ps) . [10,53]

Figure 6 : composition chimiques de certains composants du Laurus nobilis L.

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.16.1. Etude comparative de la composition chimique des huiles de


laurus nobilis de différents origines :
I.16.1.a Feuilles de laurus nobilis :
La composition chimique de l'huile essentielle des feuilles, obtenus à partir de
différentes méthodes d'isolement, ont été largement étudiés par de nombreux
chercheurs.Dans tous les cas, le 1,8-cinéole est le principal composant avec des
pourcentages compris entre 10 et 71%. D'autres composés sont présents en quantités
appréciables .En règle générale, le rendement et la composition de l'huile varie en fonction
de l'origine, la période de collecte, et le stade de croissance de la plante.[ 16,25,27]

Tableau 9 : Composition de l’huile essentielle des feuilles de laurier noble de différentes


origines.

Origine Constituants chimiques identifiés


Géographique
α-pinene (5,82 %), sabinène ( 6,92%),β-pinene (4,55 %), 1,8-cinéol (40, 91%), α-
Jordan terpinenyl acetate (5,86%), humulene epoxide II (5,85%) . [67]
α-pinene (3,1 %), sabinène ( 8,2%),β-pinene (3 %), 1,8-cinéol(52,6%) , linalool(7,2%),
Italy α-terpineol (3,1%), α-terpenylacetate (8%), methyl eugenol (3,2%).[68]
Turky(A :Antaka α-pinene (3,66 A- 2,19 Y- 2,61 S %), sabinène (14,05 A- 7,83 Y- 8,70 S %), 1,8-cinéol
Y :Yayladagi, (46,61 A- 47,63 Y- 59,94 S %), α-terpineol (6,83 A- 1,43 Y- 1,94 S %), α-terpenylacetate
S :Samandagi) (11,94 A- 25,70 Y- 16,33 S %), methyl eugenol (1,95 A- 3,39 Y- 0,41 S %).[43]

Turkey α-pinene (4,9 %), sabinène ( 6,8%),β-pinene (3,6 %), 1,8-cinéol(56,7%), α-terpineol
(Izmir) (7%), α-terpinen 4-ol (2,5%).[69]
Italy (Calabria) Eudesmol(3,903 %), costunolide ( 2,342%),ermanthin(5,186 %), vitamine E (9,031%),
α-terpinyl acetate (7,145%), methyl eugenol (2,908%).[12]
Morocco α-pinene (3,71 %), sabinène ( 6,13%),β-pinene (3,14 %), 1,8-cinéol(52,43%), α-terpinyl
acetate (8,96%), limonene (5,25%).[39]
1) α-pinene (2,73 %), sabinène ( 5,44%),β-pinene (2,44 %), 1,8-
Iran cinéol(27,58%),linalool (4%), 1,4-terpineol (4,20%), α-terpinyl acetate
(Tehran) (20,62%),eugenol (2,64%), methyl eugenol (9,72%),caryophyllene oxide
(2,29%).[70]
2) α-pinene (5,26 %), sabinène ( 3,42%),β-pinene (4,06 %), 1,8-
cinéol(55,80%),linalool (1,4%), terpinene-4-ol (5,27%), α-terpinyl acetate
(15,14%), β-cymene (2,70%).[71]
α-pinene (2,1 %), sabinène ( 5,7%), 1,8-cinéol(45,5%),linalool (8,5%), camphor (2,1%),
Croatia terpinen-4-ol (2,1%), α-terpinyl acetate (9,1%),eugenol (2,5%), methyl eugenol
(10%),trans-caryophyllene (2,1%).[72]
α-pinene (2,7 %), sabinène ( 4,6%), β-pinene (2,1 %), 1,8-cinéol(16,3%), linalool
Algérie (10,9%), α-cadinol (1,2%), α-terpineol (2,6%), α-terpinyl acetate (16,6%),eugenol
(2,5%), methyl eugenol (11%),(E)-caryophyllene (6,4%), elemicin (2%),caryophyllene
oxide(4,4%),δ-cadinene (1,4%).[30]
α-pinene (2,9 %), sabinène ( 7,2%), β-pinene (2,5 %), 1,8-cinéol(32,1%), linalool (2,1%),
α-cadinol (1,1%), α-terpineol (2,3%), α-terpinyl acetate (15,6%),eugenol (2,5%), methyl
Tunisie eugenol (10,6%),(E)-caryophyllene (2,9%),elemicin (1%),caryophyllene oxide(tr),δ-
cadinene (1,1%).[30]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

Italy ( Matera ) β-pinene (3,57%), sabinène ( 5,30%), 1,8-cinéol(24,84%),linalool (14,46%),linalylacetate


(2,02%), α-terpineol (3,38%), terpineol acetate (12,36%),eugenol (5,6%), methyl eugenol
(10,09%).[73]
Germany α-pinene (3,9 %), sabinène ( 7,6%),β-pinene (3 %), 1,8-cinéol(32,1%), α-terpinyl acetate
(6,5%), limonene (2,5%).[63]
1,8-cinéole( 37,6%), p-cymène( 19,8%),acétate d’α-terpényle(7,1%),myrcène(4,7%), β-
Egypte pinène(3,7%), terpinéol-4(3,7%),α-terpinéol (3,5%) et linalol(2,8%).[25]
1,8-cinéole ( 46,5%), acétate d’α-terpényle ( 11,8 %), sabinène ( 7,3%),α-pinène (5,7 %),
Sicile β-pinène( 4,3%) et terpinéol-4 (2,4%).[25]

I.16.1.b Les fleurs de laurus nobilis :


Outre le 1,8-cinéole et les pinènes, les principales composantes dans l’huile essentielle
des fleurs ont été α-eudesmol, β- élémène et β -caryophyllène .

La composition chimique de l'huile essentielle de fleur est tout à fait différent des autres
parties de la plante, les feuilles,la tige (Fiorini et al. 1997).[9,42,63]

Tableau 10 : Composition de l’huile essentielle des fleurs de laurier noble de différentes


origines .

Origine Constituants chimiques identifiés


géographique
α-pinene (5,1%), camphene ( 2,4%),β-pinene (3,7%), 1,8-cinéol(8,8%), (E)- β-ocimene
Germany (2,7%),bornylacetate (2,1%), β-elemene (5,4%),(E)- β-caryophyllene (5,1%),germacrene
D (2,4%), bicyclogermacrene (2,2%),α-eudesmol (11,8%).[63]

France Ocimene E(8%) , β-elemene(9,7%) ,β-caryophyllene (10%) , germacrene D, viridiflorene


(toulouse) (12,2%), germacradienol (10,1 %) ,α-eudesmol. [42,53]

I.16.1.c Les baies de laurus nobilis :


Tableau 11 : Composition de l’huile essentielle des fruits de laurier noble de différentes
origines .

Origine Constituants chimiques identifiés


géographique

α-pinene (3,3 %), β-pinene (2,1 %), 1,8-cinéol(9,5%),(E)- β-ocimene(22,1%), β-elemene


Allemagne (2%), bicyclogermacrene D (4,5%),costunolide (2,9%).[63]
α-pinene (10,3 %), sabinène ( 2,1%),camphene (3,8%),β-pinene (5,8 %), 1,8-
cinéol(8,1%),(Z)-β-ocimene (3%),(E)- β-ocimene(23,7%), linalool(4,2%), bornylacetate
Tunisie (2,1%), α-terpinylacetate (3%), β-longipinene (6,8%),méthyl eugenol(1%), (E)-
caryophyllene (1,9%),germacrene D (1,8%), α-bulnesene (2,7%), trans-cadinene (2,1%), δ-
cadinene (3,9%), spathulenol (1,4%), α-cadinol (1,1%).[18]
Turky α-pinene (16,55 A- 11,31 Y- 6,82 S %), sabinène (6,03 A- 4,55 Y- 5,65 S %), 1,8-
A :Antakya, cinéol(18,08 A- 11,06 Y- 17,37 S %), β-pinene (12,83 A- 11,06 Y- 7,87 S %), α-
Y :Yayladagi, phellandrene (15,87 A- 10,58 Y- 13,28 S %),trans-β-osimen (11,88 A- 19,89 Y- 28,35 S
S :Samandagi %), β-elemene (3,06 A- 4,46 Y- 2,68 S %), α-terpinylacetate (4,10 A- 4,88 Y- 3,67 S
%),germacrene-A (2,81 A- 4,35 Y- 3,17 S %).[43]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.17. La variation saisonnière :

Les variations saisonnières ont également été observées dans la composition chimique
du laurus nobilis .[42] L’étude réalisé par Mohammadreza et Verdian-rizi décrit la
composition de l'huile essentielle des parties aériennes du Laurus nobilis dans différents
stades de croissance. Et les résultats obtenus par cette étude montre que le moment de la
récolte de cette plante n'a pas un effet majeur sur la composition chimique de l'huile
essentielle mais il a des effets sur la teneur en huile essentielle de la plante et la floraison
est le meilleur moment pour la récolte de la plante et l'obtention de l'huile essentielle.
[16,74,75] En outre, le meilleur temps de la récolte pour obtenir les huiles essentielles les
plus actifs pour Laurus nobilis (Lauraceae) est à Septembre.[76,77]

I.18. L’huile essentielle du laurus nobilis :


Les feuilles de Laurus nobilis donnent une huile jaune connu pour de nombreuses
indications thérapeutiques.Le principale composant de l’huile de laurier est le 1,8-Cinéole.
[16]

I.18.1 Eucalyptol (1,8-cinéole) :


1,8-cinéole (1,8-époxy-p-menthane), un éther de monoterpènes cycliques, ce composé
est populairement connu comme eucalyptol (Hervé et al., 2003). Les cineoles, possédant
des activités biologiques importantes (surtout pour le traitement des maladies des voies
respiratoires) sont volatils,symétrique monoterpenique éthers cycliques. Ce sont souvent
trouvés en tant que composants d'huiles essentielles de plantes aromatiques. Le1,8-cinéole
a un parfum frais et camphrée caractéristique et un goût âcre . [78,79,80]

Figure 7 : formule développée d’eucalyptol

I.18.1.a Biosynthese du 1,8-cinéole :

Figure 8 :Biosynthese des monoterpenes (1,8-Cinéole). [81]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.18.1.b Synthèse chimique :


Les cineoles peuvent être préparés synthétiquement par traitement des fractions de
terpènes ou de l'isoprène avec des acides minéraux, habituellement de l'acide sulfurique.
Les réarrangements de terpinéols et terpine catalysée par les acides minéraux est une
procédure connue pour la fabrication des cineoles, toutefois, les informations pertinentes
sont rares. Ces méthodes utilisent de très grandes quantités d'acides minéraux par substrat
et le résultat dans des mélanges complexes contenant des quantités relativement faibles de
1,4 - et 1,8-cinéole, avec d'autres produits tels que menthadiènes, cymènes et terpinènes.
Habituellement, le montant de 1,8-cinéole dans le final des mélanges ne dépasse pas 15%,
avec 1,4-cinéole ≤ 35%. Il est une préoccupation grave pour l'environnement sur ces
méthodes en raison de la formation d'une grande quantité de déchets. Par conséquent, le
développement d'une synthèse propre de cineoles est une tâche difficile.[80]

I.19. Laurus nobilis, propriétés pharmacologiques et recherche en cours :


Laurus nobilis est une plante d'importance industrielle utilisé comme matières
premières dans de nombreux domaines, y compris les parfums, cosmétiques,
aromathérapie, phytothérapie et de la nutrition (Buchbauer, 2000).En raison d’utilisation
large des feuilles, des baies et leurs huiles essentielles, ils ont été largement étudiés
(Caredda et al. 2002 , Kilic et al. 2004). Néanmoins, le bois et l'écorce ont des composés
volatils peu étudiés. Les graines, les feuilles et les racines sont utilisées, mais les graines
sont les plus actifs en médecine et la partie normalement appliqués. [18,28,39, 63]

I.19.a .Comme additif dans l’industrie alimentaire :


Les feuilles et les graines du laurus nobilis sont utilisés comme des épices précieuses et
aromatisantes dans les industries alimentaires (Conforti et al,2006). Elles servent
d’aromate dans les cuisines. Elles forment un ingrédient essentiel du mélange d'herbes
''Bouquet Garni''(Ozcan & Chalchat, 2005). [10,12,15, 27, 32, 45, 63,69,82]

I.19.b .Effets fumigènes et insecticides :


Treize huiles essentielles dont ceux du Laurus nobilis ont été examinées sous leurs
formes de vapeur contre une espèce d’insectes attaquant les produits stockés,
Acanthoscelides obtectus (bruche du haricot). Les résultats ont indiqués que l’huile
essentielle des feuilles du Laurus nobilis a une action répulsive, réduit la fécondité,
diminue la couvaison d’oeufs, augmente la mortalité larvaire de nouveau-né .(Papachristos
et Stamopoulos, 2002). Une étude similaire a été réalisée par Erler et ses collaborateurs
(2006), où l’huile essentielle extraite à partir du feuillage frais du Laurus nobilis a été
examinée pour son activité répulsive contre les femelles adultes d’une espèce de moustique
(Culex pipiens), cette huile a montré un degré de répulsion intéressant contre ces parasites
vecteurs de plusieurs maladies comme la malaria, fièvre jaune, dengue, encéphalite…etc.
[83,84] Récemment, il ya un intérêt croissant pour l’utilisation probable des extraits de
plantes comme solution de rechange aux insecticides synthétiques. [42, 68,71, 72,85, 86,
87, 88]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.19.c.Propriétés antirhumatismales :
Comme une plante médicinale, les feuilles,les baies de laurier ont été utilisées comme
un remède contre les douleurs rhumatismales.[ 10,29,45, 63,89] L'huiles grasses provenant
du fruit est utilisé aussi en usage externe pour le traitement des furoncles,des entorses, des
contusions. [12,33]

I.19.d.Utilisation en parfumerie et cosmétique :


En outre, l’huile essentielle des feuilles est employée par l’industrie cosmétique
en parfumerieet dans la fabrication des savons[26,29]. Les baies sont
généralement utilisés dans la production du savon parfumé (pour l'acné
et le traitement des pellicules) et de la fabrication des bougies à
cause de leur teneur élevée en acide gras.[17,28,43]Il est également
utilisé par l'industrie cosmétique dans les crèmes.[12,26,27] Figure 9: savon à base de
l’huile du laurus nobilis

I.19.e.Effet inhibiteur d’enzyme :


Ferreira et ses collaborateurs (2006) ont été étudié l’effet de l’huile essentielle, l’extrait
d’éthanol et la décoction des feuilles du Laurus nobilis sur l’activité de
l’acétylcholinestérase (AChE),enzyme qui catalyse l’hydrolyse de l’acétylcholine donnant
la choline et l’acétyle. La fraction d’éthanol a montré une valeur élevée d’inhibition
d’AChE de 64% (1g/ml), donc la plante Laurus nobilis peut aider à traité ou soulager des
patients souffrant de la maladie d’Alzheimer, puisque les drogues approuvées pour la
thérapie de cette maladie agissent en contrecarrant le déficit d’acétylcholine.[90]

I.19.f. Propriété anti hémorroïdal :


L'huile essentielle obtenue à partir des feuilles de cette plante a été utilisée pour
soulager les hémorroïdes.[ 39, 75] Comme une crème a base de l’huile de laurier en
application externe pour les hémorroïdes.[26]

I.19.g. Effet curatif de blessures :


L’effet curatif de blessures de l’huile de feuille du Laurus nobilis a été examiné par
Khalil et ses collaborateurs (2007). Une blessure en pleine épaisseur a été faite dans le
secteur dorsal des souris Mus musculus. Les blessures ont été traitées quatre fois avec la
préparation d’huile pendant deux jours successifs. Cette opération est répétée pendant
plusieurs jours avec 12 h d’intervalle. Après le 16ième jour, les animaux ont été sacrifiés et
l’histologie du secteur de blessure est examinée. L’huile de Laurus nobilis a montrée une
bonne activité curative de blessures.[59] Une autre étude réalisé par Nayak S et al. en 2006
dont l' objectif était d'examiner l’extrait aqueux du Laurus nobilis pour évaluer leur activité
de cicatrisation chez les rats.Les données de cette étude ont indiqué que l'extrait du laurus
nobilis possède une activité de cicatrisation et il peut être utilisé pour traiter différents
types de blessures chez les êtres humains aussi.[33]

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

I.19.h. Contre les troubles digestifs ou effet gastroprotectif:


Les feuille de laurier est traditionnellement utilisée comme analgésique pour traiter une
variété de plaintes, les névralgies et les crampes intestinales et encore parfois d'être
apprécié pour son effet bénéfique sur le système digestif.[91] Des études récentes ont
montré que les feuilles et l'huile essentielle obtenue à partir des feuilles favorise
l’augmentation de la sécrétion gastrique . Une seule étude a été réalisée à ce sujet par
Gϋrbϋz et autres (2002) où cinq plantes aromatiques dont Laurus nobilis, sont employées
traditionnellement en Turquie pour traiter le mal d’estomac. Ils ont été choisis pour
déterminer leur pouvoir anti-ulcèrogène. Une décoction et un extrait méthanolique ont été
préparés à partir des fruits de Laurier pour déterminer leurs effets sur un modèle d’ulcère
gastrique induit par l’éthanol chez des rats. Les expériences pharmacologiques et les
techniques histopathologiques ont clairement montré que ces extraits donnés oralement ont
significativement protégé l’estomac contre ce modèle d’ulcère. [11,12,16,28]

I.19.i. Effet anticonvulsive :


L’huile essentielle des feuilles de Laurus nobilis a été évaluée pour l’activité
anticonvulsive contre des saisies expérimentales, l’huile a protégé des souris contre des
convulsions toniques, induites par électrochoc maximal et particulièrement par
pentylènetétrazol. Aux doses d’anticonvulsivant, l’huile essentielle a produit la sédation et
relâchement du coeur. Les composants responsables de cet effet peuvent être le cinéol,
eugénol et le méthyle eugénol mais d’autres études sont exigées avant que toutes
conclusions puissent être tirées. [92]

I.19.j.Diminution du glucose plasmatique :


Les feuilles du Laurus nobilis, ont été rapporté d'avoir un effet antidiabétique et de
renforcer en glutathion S-transférase hépatique (TPS). L'administration de 200 et 600
mg/kg de doses de l'extrait éthanolique des feuilles de laurus nobilis produit une
diminution significative de la glycémie chez les lapins diabétiques.[93]L'objectif d’une
autre étude était de déterminer si les feuilles de laurier peuvent être important dans la
prévention et / ou l'atténuation de diabète de type 1.Cette étude démontre que la
consommation des feuilles de laurier, 3 g / j pendant 30 jours, diminue les facteurs de
risque pour le diabète et les maladies cardiovasculaires et suggère que les feuilles de laurier
peuvent être bénéfique pour les personnes diabétiques de type 1. [82, 94]

I.19.k. Propriété antifongiques :


Les aspects de l'activité antifongique de l'huile essentielle de laurier obtenue au moyen
d'un dioxyde de carbone supercritique (SFE-CO2) contre les champignons , ont été étudiés
dans le travail de recherche réalisé par U. De Corato et al.(2010) ; dans leurs essais
expérimentaux des tests effectués sous conditions in vitro et in vivo. Cette étude a
démontré que l'huile essentielle du laurus nobilis est un agent potentiel et prometteur
antifongique qui pourraient être utilisés comme fongicides botaniques dans le post-récolte
de protection des pêches et kiwis contre M. laxa et B. cinerea .[73, 95] Des études in vitro
ont été réalisées pour tester l'activité antifongique d’extrait de Laurus nobilis réalisée avec

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

de l'eau froide distillée ou l’eau distillée en ébullition sur deux champignons pathogènes,
Alternaria alternata et Fusarium oxysporum. Les résultats ont révélé que l’extrait de la
plante,en particulier celle effectuées avec l’eau distillée froide avait une forte activité
antifongique significative avec l'inhibition de la croissance des 2 champignons testés. [96]
Les résultats d’autres études ont confirmés que les extraits du laurus nobilis peuvent être
utilisés comme fongicide naturel pour lutter contre les champignons pathogènes, réduisant
ainsi la dépendance sur les fongicides synthètique.[ 54,68,97,98, 99,100]
I.19.l.L’activité anti-bactérienne :
L’huile essentielle de laurier noble constituent une riche source de composés
biologiquement actifs. Il ya eu un intérêt accru pour la recherche des propriétés
antibactériennes des extraits de cette plante aromatique ( laurier noble ), en particulier
l’huile essentielle . L’activité antibactérienne de l' huile essentielle des feuilles du Laurus
nobilis a été étudié par divers chercheurs contre plusiers souches bactériennes
(Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius , Klebsiella pneumoniae……).Et les
résultats ont montré une activité bactéricide très efficace.[ 32, 39, 75, 91,101, 102] Dans la
recherche de Lawrence and Palombo ,l'huile essentielle du laurier noble a été étudié pour
identifier l’activité contre les spores Bacillus subtilis (ATCC 6051). Les résultats ont
indiqué que l’huile exposée présente un certain niveau d'activité sporicide après 24 h .
Toutefois , pour déterminer si l'acidité d’huiles essentielle a été responsable de leurs
activités, le pH de l’huile a été déterminé, indiquant que le caractère acide de l'huile
essentielle n’étaient pas responsable de l’effets sporicide.[103] Luna-Herrera et al. ont
montré que l'activité antimycobactérienne contre des isolats de M.tuberculosis résistantes
aux médicaments cliniques était meilleure pour le mélange ( HE de laurier noble) que pour
des composés purs (fraction de deux lactones sesquiterpéniques).[104]
En outre, 24 extraits aqueux, d'éthanol, de butanol, d'hexane, de chloroforme et de
méthanol des feuilles, écorces, fruits et fleurs de Laurus nobilis ont été testés pour leur
activités anti-bactériennes . L'activité supérieure était celle de l'extrait d'écorce aqueuse
contre Staphylococcus aureus résistant (25 mm) par rapport à la pénicilline G (33 mm).
Une activité modérée anti-bactérienne des fleurs, des fruits et des extraits de feuilles contre
Klebsiella pneumoniae (Gram négatif) et Salmonella typhimurium a été également
enregistrée. Les valeurs des CMI pour les bactéries étaient relativement élevés, ce qui est
compréhensible puisque nous traitons avec des extraits bruts.Les résultats d’une étude
semblable montrent que les extraits éthanolique des feuilles de laurier noble, par exemple,
présentent un large spectre d’activité antibactérienne contre P. aeruginosa (17 mm de
zone d'inhibition) par rapport à la tétracycline (15 mm).[ 61,105,106, 107,108,109]
I.19.m. Activité antioxydante:
Ces dernières années, il a été intérêt croissant à trouver les antioxydants naturelle à
partir des plantes pour une utilisation dans les aliments et les matières médicinales pour
remplacer les antioxydants synthétiques. Depuis ces antioxydants sont restreints en raison
de leurs effets secondaires tels que la cancérogénicité. [10, 54, 56, 64,72] Le but de travail
de Ahmed M. Emam et al. était d'examiner l'activité antioxydante in vitro des feuilles du
Laurus nobilis . L’extrait éthanolique (70%) du Laurus nobilis a été exposé au balayage

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

radicalaire contre le 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle (DPPH). Dans cette étude, ils ont


constaté que les feuilles du Laurus nobilis sont des sources potentielles des composants
antioxydants qui permettrait d'accroître la capacité antioxydante de l'organisme et lui
protègent contre la peroxydation lipidique ou utilisés comme additifs alimentaires pour
retarder la détérioration des aliments.[45] D’autre part l’activité antioxydante de l’extrait
méthanolique des feuilles, des fruits et d’écorce du Laurus nobilis a été étudié au niveau de
la peroxydation de lipide (LP) dans les liposomes, induite par le système Fe+2/ascorbate et
mesuré spectrophotométriquement à 533nm. Le résultat à montré que l’extrait de
recherche possédait une activité antioxydante. [101, 110, 111,112]

I.19.n .Action diurétique :


L’extrait aqueux des feuilles de laurier sauce est utilisé dans la médecine
traditionnelle turque en tant que diurétique.[75] Ils sont également largement utilisés en
médecine populaire pour traiter les troubles urinaires et les pierres .[27] Les fruits sous la
forme d'une infusion presente des propriétés diurétiques.[12]

I.19.o . Effet cytotoxiques :


Parmi trois extraits testés préparés à partir des fleurs, des feuilles et des fruits du Laurus
nobilis, l'extrait le plus cytotoxique active contre l'ovaire lignée de cellules cancéreuses qui
a été trouvé est l'extrait des fruits avec une inhibition de 98%. Ils ont réalisé l’isolement et
l’identification des composés des feuilles et des fruits du Laurus nobilis supposés être
cytotoxique. Ils ont isolé six lactones sesquiterpènes connue et un nouveau sesquiterpène le
lauroxepine, ces substances actives se sont avérées fortement cytotoxiques contre la lignée
cellulaire ovarienne cancéreuse A2780. [113]
Dans l’étude J.Z. Al-Kalaldeh et al. (2010) , les épices sélectionnées utilisés en Jordanie
ont été analysés chimiquement et étudiés pour leur activité anti-proliférative à
l'adénocarcinome de la lignée cellulaire du sein (MCF7). Les activités antiprolifératives
des huiles volatiles et les extraits bruts d'éthanol et d'eau ont été évalués en utilisant le test
B Sulphorhodamine.Les extraits bruts d'éthanol de laurier noble ont montré une activité
anti-proliférative de cellules MCF7 avec IC50 (24,49 pg / ml).[ 48,67, 114,115]

I.19.p.L'activité anti-inflammatoire :
L'extrait éthanolique (80%) des feuilles de laurier séchées, administré par intubation
gastrique à des rats à une dose de 100,0 mg / kg, a entraîné une inhibition de 19% de
l'œdème induit. L’acétate d'éthyle et l’extraits d'hexane des feuilles, appliquée
extérieurement [(TPA)-inflammation de l'oreille] sur des souris à une dose de 20,0
microlitres /animal, étaient actifs comparativement au tétradécanoyl acétate de phorbol
.[44] L'huile essentielle des feuilles du Laurus nobilis a été évaluée pour les activités
antinociceptifs et anti-inflammatoires chez les souris et les rats par un équipe iranien
.L'effet analgésique et anti-inflammatoire de l'huile essentielle a été comparable aux
antalgiques de référence et auux anti-inflammatoires: la morphine et le piroxicam. les
résultats Présentés font l'huile essentielle digne d'investigations complémentaires.( Sayyah
,Saroukhani et al.,2003).[116] L'objectif de l’étude de F. Fang et al.(2005) était d'identifier

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

les composés des fruits et des feuilles du Laurus nobilis, qui sont responsables à l'effet
anti-inflammatoire induisant. L'isolement des composés actifs a été réalisé et six composés
ont été identifiés; ils sont tous des lactones sesquiterpènes .Ces composés possédent
différentes propriétés pharmacologiques y compris l’effet anti-inflammatoire.[117]

I.19.q . Utilisation contre l’hystérie :


Récemment cette plante fait l'objet de la recherche, les feuilles, les fruits ont été utilisés
contre l'hystérie ,le parkinsonisme, comme emménagogue et aussi pour traiter l'épilepsie.
[75]

I.19.r. Autres utilisations de laurus nobilis :

Par ailleurs, l'infusion aqueuse obtenue à partir des feuilles de laurier noble a été utilisé
pendant de nombreuses années chez les femmes européennes pour soulager les douleurs du
placenta .En outre,le laurier favorise l’apparition des règles et agir contre les règles
douloureuses.[ 13, 15, 91] L'huile essentielle obtenue à partir des feuilles du laurier noble
fourni la matière la plus élevé de protection in vitro contre la nitration de tyrosine.[118]

I.20. Usages traditionnelles et médicamenteux :


Bien que cette plante n'a pas de fonctions importantes dans la médecine traditionnelle,
ces dernières études révèlent que Laurus nobilis a suscité un intérêt renouvelé en raison
des propriétés pharmacologiques et les avantages potentiels pour la santé liés à plusieurs
composés présents dans la plante.[10,32]

I.20.a. Afghanistan : La feuille, mélangée avec de l'anis et Casuarina equisetifolia, est


inséré par voie vaginale pour induire la pregnance.[44]

I.20.b. Argentine : La décoction des feuilles séchées est pris par voie orale pour traiter
les infections des voies respiratoires et urinaires .La moitié de 1 gramme du fruit est pris
par voie orale afin d'accélérer la mise en bas. Le jus des feuilles,3-4 gouttes dans l'eau, est
prise oralement à promouvoir les menstruations.[44]

I.20.c. Angleterre : le jus du fruit est pris oralement pour stimuler les
menstruations.[44]

I.20.d. Europe : le fruit est pris oralement lors de l'accouchement pour accélérer la
délivrance.[44]

I.20.e. Grèce : l'extrait aqueux chaude des feuilles est pris par voie orale comme
contraceptive.[44]

I.20.f. Inde : L'extrait aqueux chaude des feuilles sèches est pris par voie orale comme un
emménagogue, Le fruit est pris oralement par les femmes comme une emménagogue.[44]

I.20.g. Iran : La décoction des fruits secs est pris par voie orale pour stimuler l’appétit et
aider la digestion.L’infusion de la feuille sèche est pris par voie orale comme

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

diaphorétique, pour les crampes, l'aménorrhée et le catarrhe, et à fortes doses comme


émétique.[44]

I.20.h. Israël : l'extrait aqueux chaud des feuilles séchées, avec Ruta chalepensis, est
utilisé en perfusion intraveineuse pour les problèmes respiratoires. Le bain de vapeur des
feuilles séchées, en combinaison avec Salvia fruticosa, chalepensis Ruta et satureja
thymbra, est pris pour le rhumatisme et comme tonique générale. L'huile essentielle des
fruits utilisés en usage externe sur les plaies et pour les névralgiques. Le Drupe a
également été utilisé par la population juive de Djerba dans le traitement de la jaunisse et
les douleurs rhumatismales.[10,44]

I.20.i. Italie : l'extrait aqueux des feuilles séchées est utilisé contre les inflammations .
L'infusion est pris par voie orale pour aider la digestion .L’infusion de la feuille est pris par
voie orale comme antispasmodique pour les coliques abdominales, et comme sédatif
.L’huile essentielle est utilisée comme émollient pour les hémorroïdes.Le fruit macéré dans
l'alcool, est mélangé avec l’huile d'olive et utilisés extérieurement comme
antirhumatismale.[44]

I.20.j. Jordan : La décoction des feuilles est prise oralement comme anti-diarrhée .[44]
I.20.k. Maroc : La feuille est prise oralement pour les troubles du foie et pour l’hygiène
dentaire.[44]

I.20.l. Peru : L’extrait aqueux des fruits secs est pris par voie orale comme un stimulant
circulatoire et utilisé en usage externe pour adoucir les tumeurs et l’extrait aqueux chaud
de la feuille sèche est pris par voie orale comme un stimulant circulatoire réglementaire, et
à l'extérieur il est utilisé pour adoucir les tumeurs et les ulcers.[44]

I.20.m. Tunisie : Les feuilles séchées est pris oralement comme un tranquillisant et
utilisé en usage externe pour les problèmes rhumatismales.[44]

I.20.n. États-Unis : L’extrait des feuilles par l’eau chaude est pris par voie orale comme
un carminative, astringent. [44]

I.20.o. Turquie: Elle est utilisée en massage pour les rhumatismes et pour tuer les
parasites du corps. Les vétérinaires utilisent l'oléum (Oleum lauri, de l'huile fixe provenant
des fruits) comme analgésique. Le pétrole des baies parfois utilisé comme un liniment ou
analgésique pour les maux d'oreilles. Un savon jaune de l'oléum à traiter des affections de
la peau et la perte des cheveux. Le fruit, préparé à partir des différentes manières, est dit
pour aider les fibromes utérins, la rate et du foie, tumeurs internes et les tumeurs du l'œil.
[48]

I.20.p. Liban : L’extrait des feuilles et des baies, utilisé comme carminatif, est
étroitement bouché et trempé dans du brandy au soleil pendant plusieurs jours. Le résidu,
après distillation ultérieure est utilisé comme un liniment pour les rhumatismes et les
entorses, le distillat comme emménagogue. Alpinistes libanais sont dit d'utiliser les baies
pour provoquer l'avortement . Les baies macérés dans de la farine ont été cataplasmes sur

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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble

les dislocations.La baie contient des composés repoussant les cafards, y compris le
cinéole.(Peirce,1999) [48]

I.21. Pharmacodynamique d’huile essentielle de laurier :


Les dérivés térpéniques de l’huile essentielle du laurus nobilis, traditionnellement
utilisés comme antiseptiques des voies respiratoires, ces dérivés terpénique peuvent
abaisser le seuil épileptogène. [119]

I.22. Etude toxicologique :


Les feuilles de laurier et l'huile essentielle qu'ils ne semblent pas avoir d'effets toxiques
significatifs. Mais ces derniers peuvent provoquer des réactions de sensibilisation
(dermatite de contact allergique ) puisqu’elles renferment des lactones sesquiterpéniques
dont le principale est le costunolide.[9,120]La présence des lactones sesquiterpéniques
présentant un groupement méthyle exocyclique explique le potentiel de sensibilisation
modéré exercé par la drogue. La plante ne perd pas son caractère allergisant après cuisson
, ils peuvent donc conduire à des manifestations allergiques comme des inflammations
buccale et/ou stomacale. [25] Les études de toxicité relatives à l’huile artisanale du fruit
donnent un profil de réponse similaire à celui de l’HE des feuilles, avec une probable
hépatotoxicité dose-dépendante .[11] Il a été depuis les temps anciens utilisés à des fins
rituelles et médicinales dont les principes actifs sont distribués dans les feuilles, les fleurs,
les racines et les baies. Les principaux composés sont le 1,8-cinéole, l'eugénol et le
géraniol. Selon la dose, les symptômes neurologiques tels que des hallucinations visuelles
et auditives à des changements dans la couleur, le temps et l'espace, des convulsions, des
tremblements, léthargie, confusion, délire et la psychose peuvent apparaître qui pourrait
durer jusqu'à 2-3 jours.[121]

Attention :
Ne jamais utiliser l’huile essentielle de laurier par voie interne. Ne pas appliquer l’huile
essentielle pure sur la peau en raison des risques d’allergie.[13]

23 | P a g e
Partie
Expérimentale

24 | P a g e
Partie pratique

II. 1. Plan de travail :

25 | P a g e
Partie pratique

II.2.But et objectifs :

Le but du présent travail consiste principalement en comparaison de la composition


chimique des différentes parties du laurus nobilis L. à savoir ( les feuilles, les tiges, les
fruits, les fleurs et les racines), afin de valoriser les plantes algériennes et de développer les
recherches toutes en satisfaisant les besoins de soins de santé.

Les principaux objectifs sont :

1. Contrôle de qualité du matériel végétal ;


2. Identification et étude phytochimique des différentes parties de la plante laurus
nobilis L. ;
3. Extraction des huiles essentielles ;
4. Analyse qualitative et quantitative des extraits obtenus (huiles essentielles) ;
5. Essai de formulation des pommades a base des huiles essentielle extraites et leurs
analyses.

II.3.Matériel et méthode :

II.3.1.Matériel technique:

II.3.1.a. Verrerie et appareillage :


On a utilisé pour l’étude, le matériel suivant : Balance analytique, Becher, Fioles,
Erlenmeyer, Ballons, Cuves ,Broyeur , Mortier et pilon, Eprouvettes graduées, Entonnoirs
en verre, Papiers filtre Wattman, Flacons, Pipette et micropipettes, Pince, Règle graduée,
Bain marie , Ampoule à décanter, Réfrigérants, Supports, Tubes à essais ….. etc.

II.3.1.b. Solvant :

Eau distillée, Acide sulfurique, Methanol, Ethanol, Acide chlorhydrique,


Chloroforme……etc

Caractéristiques des réactifs utilisés : La plupart des réactifs ont été acquis
directement au près de firmes de renommées et n’ont pas nécessité de contrôle. Par contre
certains produits ont du être soumis aux méthodes habituelles de purification pour s’assurer
d’un haut degré de pureté. [122]

26 | P a g e
Partie pratique

II.3.1.c. Matériel technique pour le test d’irritation cutanée :

Tendeuse électrique , Scalpel stérile , Pansement stériles et bandes de gazes , Para film ,
Bande adhésive.

II.3.1.d. Matériel technique pour le test microbiologique :


Autoclave ,Incubateur ,Bec bunsen , Boites de pétri stériles de diamètre 90mm , Pince
stérile, Disques stériles.

II.3.2.Matériel biologique :

II.3.2.a. Matériel animal :

Espèce : lapin ;

Race : néozélandaise ;

Elevage : animalerie de l’Institut pasteur (Alger) ;

Poids :2,5 kg au moins ;

Couleur : blanche.

II.3.2.b. Souches microbiennes testées :

Les souches utilisées dans notre étude font parties de trois groupes de micro-organismes,
qui sont des pathogènes et des contaminants.

Les tests sont réalisés sur 3 bactéries et une levure, provenant essentiellement du
laboratoire de microbiologie de l’UNS de KOUBA et du laboratoire de microbiologie de
l’université d’USTHB de BAB ELZOUAR.

27 | P a g e
Partie pratique

Tableau 12 : souches microbiennes utilisés.

Nom de la Type Gram Famille


souche
Escherichia coli Bactérie - Enterobacteriaceae

Pseudomonas Bactérie -
Pseudomonadaceae
aeruginosa
Staphylococcus Bactérie + Micrococcaceae
aurus
Candida Levure / Cryptococcaceae
albicans

# Milieu de culture utilisés :

Suivant la méthode employée dans l’essai et selon les souches choisies, nous avons utilisé
comme milieux de culture les suivants : ( Annexe IV)

a). Gélose nutritive, Gélose Muller Hinton pour les bactéries ;

b). Milieu Sabouraud pour les levures ;

c). Tween 80.

II.3.2.c. matériel végétal :

Le matériel végétale utilisé : les feuilles,

les fleurs, les tiges, les fruits et les racines

du Laurus nobilis L.

Figure10 : arbre de laurier noble.[34]

28 | P a g e
Partie pratique

II.4.Description botanique :

Le laurier noble (Laurus nobilis), objet de notre étude , appelé « Rand » en arabe. C’est
un arbre généralement dioïque, de 2 à 10m de la hauteur. L’écorce lisse et noire peut être
vert olive ou bleu rougeâtre avec des tiges courtes, lancéolées, acuminées, coriacés de 3-8
cm de large. Les feuilles sont alternes, coriaces, persistantes, elliptiques, lancéolées,
ondulées au bords. Les fleurs sont dioïques, blanchâtres, odorantes, en petites ombelles
axillaires pédonculées et involucrées et enfin les fruits sont drupacés, noir à maturité,
ovoïde de 2cm de long sur 1cm de large.

Figure 11 :différentes parties de la plante du Laurus nobilis L.( feuille, fleur et fruit ).[34]

Afin de tirer la meilleure partie des plantes médicinales, il convient de veiller à ce que
les herbes et leurs dérivés soient d’excellente qualité. Cela exige qu’elles soient cultivées
dans de
bonnes conditions, correctement séchées, bien conservée et que leur date limite de
consommation soit respectée. Le recours à des plantes de mauvaise qualité est bien souvent
une perte de temps et d’argent étant donné que vous n’en tirerez pas tous les bienfaits.
S’agissant de plantes médicinales, la qualité prime avant tout .

II.5.Récolte de laurus nobilis : La récolte des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs
et des racines ont été réalisé à la région de LARBA (BLIDA), durant les périodes
mentionnés au tableau suivant :

29 | P a g e
Partie pratique

Tableau 13 : période de récolte du laurus nobilis L.


Durée de la récolte
Feuille Avril à Juin 2010, Larbaa ( BLIDA ) ;
Avril 2011 , M’SILA , TIZI OUZOU.
Tige Avril à Juin 2010
Fleur Mars à Avril 2011
Fruit Juin 2011
Racine Mai 2011,Corso (BOUMERDES)

II.5.a. Caractérisation du lieu de récolte :


Tableau 14 : caractérisation du lieu de récolte . [123, 124,125]
Région LARBA
Wilaya BLIDA
Distance entre Alger centre et Larba 23,57 km

Situation géographique Sud est d’Alger


Latitude. 36.5666667°
Longitude 3.15°
DMS Latitude 36° 34 min 0.11999999999989 sec
(dégrées, minutes et secondes):
DMS Longitude 3° 9 min 0 sec
(dégrées, minutes et secondes):

Figure 12 : lieu de récolte du laurier noble ( Laraba-BLIDA ) . [123, 124,125]

30 | P a g e
Partie pratique

II.6.Séchage :

Les échantillons ont été séchées au niveau de laboratoire de synthèse pétrochimique à


l’air libre et à l’abri de la lumière et de l’humidité. Nous avons disposé de paillasses
sur lesquelles, nous avons étalé les plantes pendant quelques jours.

Figure 13 : feuille fraiche et sèche du laurier noble .

II.7.Pulvérisation :

Cette opération a été faite après le séchage des plantes récoltées.


Les matières séchées ont été ensuite broyer dans un broyeur
électrique. Au préalable la plante entière a été concassée . ( voir
tableau 17 )

Figure 14: broyeur .

II.8.Conservation :

Les échantillons ont été conservées jusqu’au moment de l’utilisation dans des bouteilles
en verre à l’abri de la lumière.

31 | P a g e
Partie pratique

Tableau 15: les différents états du laurus nobilis L.

Parties du
Matières séchés Matières concassés Matières broyés
laurus nobilis L.
Feuille

Fleur

Tige

Fruit

Racine

32 | P a g e
Partie pratique

II.9.Identification de la matière première :

II.9.a. Etude botanique :

Le laurier , utilisé dans cette étude a été identifier par le département de botanique, de
l’institut national d’agronomie d’Alger comme étant le laurus nobilis L.

Ordre : Laurales

Famille : Lauracées

Genre : Laurus

Espèce : Laurus nobilis L.

II.9.b. Caractères morphologiques :

· Les feuilles sèches de Laurus nobilis sont de couleur brunâtre ,aromatique et


légèrement amer.
· Les racines sèches de Laurus nobilis sont de couleur brunâtre , non aromatique .
· Les fleurs sèches de Laurus nobilis sont de couleur jaune brunâtre ,aromatique.
· Les tiges sèches de Laurus nobilis sont de couleur gris à brunâtre .
· Les fruits sèches de Laurus nobilis sont de couleur noires ,aromatique et
légèrement amer.
II.9.c. Caractères microscopiques :

Laurus nobilis , feuille à structure bifaciale :

La feuille des végétaux vasculaires est un organe généralement aplati, ce qui lui confère
une symétrie bilatérale. Les feuilles sont exclusivement portées par la tige.
La vascularisation de la feuille est assurée par les nervures qui sont issues des "traces
foliaires" émises par le cylindre central de la tige au niveau des noeuds. La nervure
principale fait généralement saillie à la face inférieure de la feuille, on dit parfois, de façon
abusive, la face ventrale. Mais les feuilles n'ont ni dos ni ventre et le caractère "supérieur"
ou "inférieur" des faces n'est pas discriminant : si leur position physiologique la plus
fréquente chez les Dicotylédones est d'être aplaties dans un plan perpendiculaire à
l'allongement de la tige qui les porte, les exceptions sont nombreuses.

33 | P a g e
Partie pratique

La feuille de Laurus nobilis


Un épiderme fortement cutinisé est présent sur les deux faces mais les stomates
n'existent que sur la face abaxiale (3). On qualifie cette disposition des stomates
d'hypostomatique (on dira épistomatique pour des feuilles dont les stomates sont sur la face
adaxiale et amphistomatique lorsque les stomates sont sur les deux faces).
En dehors de la nervure principale le mésophylle présente une structure bifaciale typique
(3). Sous l'épiderme de la face adaxiale se reconnaît un parenchyme palissadique formé de
deux assises cellulaires. Chez les Dicotylédones ce parenchyme qui recèle quelque 80 %
des chloroplastes est le lieu privilégié de la photosynthèse.
Du côté de la face abaxiale, le parenchyme est de type lacuneux, dans lequel s'ouvrent les
chambres sous-stomatiques. De grosses cellules sécrétrices d'essence se rencontrent dans
ces deux types de parenchyme (1, 3).
Le cordon vasculaire de la nervure principale est à symétrie bilatérale, en forme de
croissant dans la concavité duquel se reconnaissent de nombreux pointements de xylème,
désignant la face adaxiale ; des massifs de phloème leur sont superposés. Entre les deux, le
cambium libéro-ligneux a produit des files de formations secondaires : bois adaxial et liber.
Cette lame vasculaire est entourée d'un manchon de sclérenchyme.
Cet ensemble est rigidifié par du collenchyme ; celui de la face adaxiale, sous l'épiderme,
donne un bon exemple de collenchyme rond (2).

34 | P a g e
Partie pratique

Figure 15: Images de coupe transversale de feuille de laurus nobilis L.(Laurier noble) et
schéma conventionnel correspondant.[126]

II.9.d. Caractères organoleptiques :


La poudre des feuilles de Laurus nobilis est de couleur vert vif, d’odeur aromatique
forte , piquante et de saveur astringente .
La poudre des tiges de laurus nobilis est de couleur jaune marron .
La poudre des fleurs de laurus nobilis est de couleur jaune vert, d’odeur aromatique.
La poudre des fruits de laurus nobilis est de couleur marron , d’odeur aromatique forte.
La poudre des racines de laurus nobilis est de couleur jaune marron.

35 | P a g e
Partie pratique

II.10.Contrôle du matériel végétal :


Afin d’assurer la qualité de la drogue végétale, celle-ci a été soumise à une série de tests :

II.10.1.taux d’humidité :

Principe :

Voir annexe I ( Dosage de l’eau par entrainement azéotropique ).

Mode opératoire :

Dans un ballon séché, introduire 200 ml de toluène et environ 2 ml d’eau . Distiller


pendant 2 h, laisser refroidir 30 min et noter le volume d’eau à 0,05 ml près. Introduire
ensuite 20g de la matière végétale dans le ballon. Chauffer légèrement pendant 15 min en
assurant une ébullition régulière. Lorsque le toluène commence à bouillir, distiller à la
vitesse de 2 gouttes/seconde environ jusqu’à ce que la plus grande partie de l’eau soit
entrainée, puis augmenter la vitesse de distillation jusqu’à 4 gouttes par seconde. Lorsque
toute l’eau a été entrainée, rincer l’intérieur du réfrigérant ascendant par le toluène.
Continuer à distiller encore pendant 5 min. arrêter le chauffage et laisser refroidir le tube
collecteur à température ambiante. Après séparation de l’azéotrope noter le volume d’eau
recueillie.

La teneur en eau a été calculée comme suit :

W=( − )/m *100

W : taux d’humidité ou teneur en eau (%).

m : masse de l’échantillon (g).

:volume d’eau recueillie dans la première distillation (ml).

:volume d’eau recueillie à l’issue des deux distillations (ml).

La teneur en eau doit être inférieure ou égale à 10%. [127]

Résultat et discussion :

36 | P a g e
Partie pratique

Tableau 16:le taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.

Echantillons m (g) (ml) (ml) W (%) Normes

Poudre de feuille de laurus nobilis 20 2,5 3,90 7 < 10%


L.
Poudre de tige de laurus nobilis L. 20 2,5 3,25 3,75 < 10%
Poudre de fleur de laurus nobilis L. 20 2,5 3,80 6,5 < 10%
Poudre de baie de laurus nobilis L. 20 2,5 3,40 4,5 < 10%
Poudre de racine de laurus nobilis 20 2,43 2,71 1,4 < 10%
L.

variation du taux d'humidité

7
pourcentage d'humidité ( % )

0
Feuille Tige Fleur Fruit Racine

Figure 16: variation du taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.

Discussion :

Les résultats obtenus montrent clairement que la drogue possède une teneur en eau,
inférieure à 10% dans ses différentes parties, d’où les échantillons sont bien conservés .

II.10.2.perte a la dessiccation :

Principe :

Voir annexe I ( Perte à la dessiccation )

37 | P a g e
Partie pratique

Mode opératoire :

Peser rapidement 1g de la matière végétale dans une capsule à fond plat de diamètre 50
mm et de 30 mm de hauteur .Dessécher dans l’étuve à 100-105°C durant 02 h .Placer
dans un dessiccateur contenant du gel de silice anhydre. Laisser refroidir puis peser.[127]

La perte en masse a été calculée suivant la formule suivante :

PD=(P1-P2)/P1 *100

PD :perte a la dessiccation (%).

P1 :poids initial de l’échantillon (g).

P2 :poids de l’échantillon après séchage (g). Figure 17: dessiccateur

Figure 18: Etuve

Résultat:

Le résultat est reporté dans le tableau 17.

Tableau 17:résultats de perte à la dessiccation.

Echantillons P1(g) P2(g) PD(%) Normes


Poudre des feuilles de laurus nobilis L. 1,0083 0,9235 8.41 < 10%
Poudre des tiges de laurus nobilis L. 1,0102 0,9590 6.05 < 10%
Poudre des fleurs de laurus nobilis L. 1,0018 0,9131 8.85 < 10%
Poudre des baies de laurus nobilis L. 1,0025 0,9306 7.17 < 10%
Poudre des racines de laurus nobilis L. 1,0006 0,9476 5.29 < 10%

38 | P a g e
Partie pratique

variation de la perte à dessiccation

10 8.41%

6.05% Feuille
7.17%
8.85%
5 Tige
5.29%
Baie
0
Racine
Feuille
Tige Fleur
Baie Diagramme
Racine
Fleur

Figure 19 : variation de pourcentage de la perte à dessiccation dans les différentes parties


du laurus nobilis L.

Discussion :

Le résultat obtenu, montre que la poudre des feuilles, tiges, fleurs, fruits et racines ont
perdu presque ; 8.41, 6.05, 8.85, 7.17, 5.29% respectivement de leurs poids massique lors
de la dessiccation. Les résultat sont tous inférieur à 10%, d’où on peut déduire que ces
résultats sont conformes aux normes exigées par la pharmacopée européenne . [128]

II.10.3.Dosage des cendres :

IV.10. 3.1.Cendres totales :

Principe :

Voir annexe I ( Dosage des cendres totales).

Mode opératoire :

Chauffer au rouge un creuset de porcelaine pendant 30 min. Laisser refroidir dans un


dessiccateur contenant du gel de silice anhydre, puis peser. Introduire dans le creuset 1g de
la drogue pulvérisée. Dessécher pendant 1 h à 100-105°C, puis incinérer dans un four à
moufle à une température de 600 ± 25°C jusqu’à masse constante. [127]

La masse résiduelle a été déterminée comme suit :

CT=( PF-PV )/PE * 100


CT : cendres totales (%). PV : poids vide du creuset (g).

PE : poids de la prise d’essai (g). PF : poids final du creuset (g).

39 | P a g e
Partie pratique

Résultat :

Tableau 18 : résultats des cendres totales.

Echantillons PV (g) PE (g) PF (g) CT (%) Normes


Poudre de feuille de laurus nobilis
L. 19,3930 1,0000 19,4330 4 < 6%
Poudre de tige de laurus nobilis L.
21,5990 1,0030 21,6330 3,38 < 6%
Poudre de fleur de laurus nobilis L.
12,2357 0,9735 12,2536 1,83 < 6%
Poudre de baie de laurus nobilis L.
22,8011 0,9748 22,8255 2,50 < 6%
Poudre de racine de laurus nobilis
L. 12,2358 0,9730 12,2735 3,87 < 6%

II.10.3.2.Cendres sulfuriques :

Principe :

Voir annexe I ( Dosage des cendres sulfuriques).

Mode opératoire :

Chauffer un creuset de porcelaine à 600 ±50°C pendant 30 min. Laisser refroidir dans un
dessiccateur sur du gel de silice et peser. Placer ensuite 1g de la matière pulvérisée.
Humecter la matière avec une quantité suffisante de H2SO4 dilué (environ 1M) et chauffer
lentement jusqu’à carbonisation complète de la matière. Après refroidissement, humecter
le résidu avec un peu de H2SO4 dilué au demi, chauffer de la même manière jusqu’à ce
qu’il n’y ait plus de dégagement de fumées blanches. Calciner ensuite à 600 ±50°C jusqu’à
incinération complète du résidu. Laisser refroidir le creuset dans un dessiccateur, puis
peser. [127]

Résultat :

Tableau 19 :résultats des cendres sulfuriques.

Echantillons PV (g) PE (g) PF (g) CS (%) Normes


Poudre de feuille de laurus nobilis L. 19,3970 1,0000 19,4560 5,90 < 6%
Poudre de tige de laurus nobilis L. 20,3320 1,0010 20,3720 3,99 < 6%
Poudre de fleur de laurus nobilis L. 53,2567 0,9770 53,2785 2,23 < 6%
Poudre de baie de laurus nobilis L. 53,2567 0,9509 53,2875 2,97 < 6%
Poudre de racine de laurus nobilis L. 22,1227 0,9970 22,1726 5,00 < 6%

II.10.3.3. Cendres chlorhydriques (cendres non solubles dans l’acide chlorhydrique) :

Principe :

Voir annexe I ( Dosage des cendres chlorhydriques).

40 | P a g e
Partie pratique

Mode opératoire :

Dans le creuset, ajouter au résidu obtenu, lors de la détermination des cendres sulfuriques
ou totales,15 ml d’eau et 10 ml d’HCl à 10%. Recouvrir d’un verre de montre et faire
bouillir doucement pendant 10 min. Filtrer le résidu et laver à l’eau très chaude. Dessécher
et incinérer jusqu’au rouge sombre. Laissez refroidir au dessiccateur et peser dans le
même creuset. [127]

Résultat :

Tableau 20 : résultats des cendres chlorhydriques.

Echantillons PV (g) PE (g) PF (g) CC(%) Normes


Poudre de feuille de laurus nobilis L. 19,3930 1,0000 19,3940 0,10 < 0,5 %

Poudre de tige de laurus nobilis L. 21,5980 1,0030 21,5990 0,09 < 0,5 %

Poudre de fleur de laurus nobilis L. 12,2357 0,9735 12,2364 0,07 < 0,5 %

Poudre de baie de laurus nobilis L. 22,8011 0,9748 22,8019 0,08 < 0,5 %

Poudre de racine de laurus nobilis L. 12,2358 0,9730 12,2378 0,20 < 0,5 %

6
pourcentage des cendres ( % )

3 cendre totale
cndre sulfurique
2 cendre chlorhydrique

0
feuille tige fleur fruit racine
partie traitée du laurus nobilis

Figure 20: pourcentage ( % ) des cendres dans les différents parties de laurus nobilis L.

Discussion :

41 | P a g e
Partie pratique

Les résultats obtenus des cendres totales, sulfuriques et chlorhydriques, indiquent, d’une
part, une faible teneur en substances minérales (≤ 6 %), et d’autre part une très faible
contamination par la poussière ou le sable (≤ 0.5 %).

On remarque à partir de la figure 20 que les cendres sont plus élevés dans les racines, les
tiges et les feuilles par rapport aux fleurs et fruits ( mais dans les normes ).Cela explique
que les racines, les tiges et même les feuilles sont faiblement contaminés par la poussière
ou le sable, ce qui exige le lavage de ces parties avant leurs séchages.

D’après la figure on remarque aussi que pour toute les échantillons , le pourcentage des
cendres sulfuriques est le plus élevé , suivie par le pourcentage des cendres totales et le
pourcentage des cendres chlorhydriques est le plus faible.

II.10.4. Indice de gonflement :

Principe :

Voir annexe I ( principe de l’indice de gonflement ).

Mode opératoire :

Dans une éprouvette graduée à bouchon rodé, de 20 cm de hauteur sur 20 mm de


diamètre, introduire 1g de drogue pulvérisée. Humecter la drogue avec 1ml d’alcool et
ajouter 25 ml d’eau. Agiter énergiquement toutes les 10 min pendant 1 h. Laisser reposer
pendant 3h. Mesurer le volume occupé par la drogue. Effectuer 3 essais
simultanément.[127]

L’indice de gonflement est donné par la moyenne des 3


essais.

IG = ( V1+V2+V3) /3

Les plantes à mucilages possèdent un indice de gonflement


supérieur ou égale à 10. [127]

Figure 21 : calcule du l’indice de gonflement.

Résultats:

42 | P a g e
Partie pratique

Tableau 21 : résultats de l’indice de gonflement .

Echantillons V1 (ml) V2 (ml) V3 (ml) IG


Poudre de feuille de laurus nobilis 4,7 5,3 4,8 4,93
L.
Poudre de tige de laurus nobilis L. 4,3 5,4 5,5 5,06

Poudre de fleur de laurus nobilis L. 5 5 5 5

Poudre de baie de laurus nobilis L. 9,5 9,75 10 9,75

Poudre de racine de laurus nobilis L. 5 6 5,5 5,5

12
Valeur de l'indice de gonflement

10

0
feuille tige fleur fruit racine

Figure 22 : résultats de l’indice de gonflement .

discussion

L’indice de gonflement des feuilles, des tiges, des fleurs, et des racines est presque
identique (5 à 6) , mais pour les fruits est plus ou moins supérieur ( 9 à 10 ) .

L’indice de gonflement indique une valeur proche de 10 seulement pour les fruits du
laurus nobilis , ce qui montre la présence de mucilages dans les fruits du laurus nobilis L.

43 | P a g e
Partie pratique

II.10.5. Dosages de certaines substances extractibles :

II.10.5.a. Substances extractibles par l’éthanol à 80% :

Introduire dans un erlenmeyer 1g de poudre puis 20ml d’éthanol à 80%, laisser macérer
pendant 24 heures à la température du laboratoire après avoir fermer à l’aide d’un verre de
montre . Filtrer avec du papier filtre. Peser le bécher vide (m).
Mettre le filtrat dans ce bécher, évaporer à sec et peser le bécher avec le résidu (m’).
P.E : prise d’essai. [129, 130, 131]

×
Substance extractible par l’éthanol à 80% = .

II.10.5.b. Substances extractibles par l'eau :

Pour déterminer le pourcentage de substances solubles dans l’eau, nous avons réalisé
une décoction pendant 15 mn d’un gramme de poudre dans 20 ml d’eau distillée. Ensuite
laisser refroidir et filtrer sur un papier filtre.
Transvaser le filtrat dans une capsule préalablement tarée (m) et placer dans l’étuve pour
l’évaporation à sec. Peser de nouveau la capsule (m’). Les substances extractibles par l’eau
ont été évaluées par la formule . Avec P.E : prise d’essai . [129, 130, 131]

×
Substance extractible par l’eau = .

Résultats :

Tableau 22: résultats de recherche des substances extractible par l’eau et par l’éthanol.

Rendement (%)
Extraits
Feuilles Fleurs Tiges Fruits Racines

Eau 5.68 / 5.5 4.39 /


Ethanol 6.81 / 9.95 20.32 /

44 | P a g e
Partie pratique

II.11.Screening chimiques :
Pour identifier la composition en métabolite secondaire présent dans la plante du
laurus nobilis, un screening chimique est fait. La colorimétrie et la gravimétrie ont
été les deux principales voies d’identification de ces groupes de substances en
solution. Il s’agit principalement des alcaloïdes, des flavonoïdes, des hétérosides
cardiotoniques , des quinones, des saponines et des tanins .

Pour notre travail, le screening s’est effectué sur les feuilles, les tiges, les fleurs, les
baies et les racines de la plante laurus nobilis L. Cet examen est effectué soit sur la
poudre du broyat de la plante sèche soit sur son extrait (infusé).

Réactions de caractérisation (Détermination de quelques substances biologiques


actives dans la drogue végétale) :

II.11.1.Détermination des alcaloïdes dans la drogue végétale :

Extraction :

Introduire 10g de poudre végétale à analyser dans un erlenmeyer de 250ml, ajouter


100ml d’acide sulfurique à 10%, puis boucher l’erlenmeyer.
Agiter et laisser macérer pendant 24 heures à la température du laboratoire. Filtrer et laver
de façon à obtenir 50ml de filtrat.

Réactions de précipitations

Introduire 1ml de filtrat dans un tube à essais , ajouter cinq gouttes de réactif de
Dragendorff. En laissant reposer 10 minutes. En présence d’alcaloïde , le réactif de
dragendroff , donne un précipité rouge-orange. [129, 130, 131]

Réaction caractéristique :

Résultats :

45 | P a g e
Partie pratique

Tableau 23: résultats de la recherche des alcaloïdes.

Groupes chimiques Partie unitaire Résultat

feuilles +
alcaloïdes

tiges +

fleurs +

baies +

racines +

N.B. : +++ :très abondant ; + : présent ; - :absent

Détermination du pourcentage en alcaloïdes :


Schéma d’extraction et de la détermination du pourcentage en alcaloïde totaux.
Introduire 3g de poudre à étudier dans un erlenmeyer de 250 ml contenant 25ml d’acide
sulfurique dilué à 10% et 5ml d’eau distillée. Boucher, agiter et laisser macérer à la
température du laboratoire pendant 24 heures. Filtrer et compléter à 50ml avec de l’eau
distillée.
Alcaliniser par l’ammoniaque jusqu’à odeur (pH : 8 à 9). Ajouter du chloroforme (CHCl3),
agiter sans former d’émulsion et après décantation, soutirer la phase organique. Faire cette
opération 3 fois au total (20ml de CHCl3 la première, 20ml la deuxième et 10ml la
troisième fois).Recueillir les phases organiques dans un erlenmeyer, sécher sur sulfate de
sodium anhydre et filtrer dans une capsule au préalable pesée. Evaporer au bain-marie
jusqu’à sec et repeser la capsule. [132]

46 | P a g e
Partie pratique

Drogue pulvérisée 3g
Macération 24 heures dans 25 ml

d’H2SO4 et 5 ml d’eau distillée

solution aqueuse épuisée solution aqueuse acide de sels d’alcaloïdes

neutralisation puis
a alcalinisation par NH4OH

solution aqueuse basique d’alcaloïdes

1er épuisement par 20 ml de

CHCl3

Solution aqueuse épuisée solution organique d’alcaloïdes : S1

2eme épuisement par 20 ml de CHCl3

Solution aqueuse épuisée solution organique d’alcaloïdes : S2

3eme épuisement par 10 ml de CHCl3

Solution aqueuse épuisée solution organique d’alcaloïdes : S3

Figure 23: schéma d’extraction des alcaloïdes.

Si P1 est le poids de la capsule vide et P2 celui de la capsule après évaporation, le


pourcentage en alcaloïdes (%Alcaloïdes) se calcule de la façon suivante :

( )×
%Alcaloïdes =

47 | P a g e
Partie pratique

Résultats :
Tableau 24 : pourcentage en alcaloïdes totaux.
Poids de Poids de la Masse Pourcentage
la capsule capsule après en alcaloïdes
alcaloïdes (g)
vide P1 = évaporation P2 (%)
tare (g) (g)
Feuille de Laurus nobilis 27,8043 27,8505 0,0462 1,54
L.
Tige de Laurus nobilis L. 33,5273 33,5495 0,0222 0,74
baie de Laurus nobilis L. 70,6042 70,6352 0,031 1,03
Fleur de Laurus nobilis L. 70,6042 70,6137 0,0095 0,31
Racine de Laurus nobilis 33,5273 33,5289 0,0016 0,05
L.

Racine
Fleur
Baie
Tige
Feuille

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8


Pourcentage d'alcaloide ( % )

Figure 24 : pourcentage d’alcaloïdes dans les différentes parties de la plante laurus


nobilis .

Discussion :

Ce tableau confirme les résultats obtenus dans le tableau 23, à savoir que les feuilles de
laurus nobilis sont les plus riches en alcaloïdes.

II.11.2.Détermination des tanins dans la drogue végétale :

Préparation de l’infusé :

Dans un erlenmayer de 250 ml , introduire 5g de poudre végétale dans 100 ml


d’eau distillée bouillante. Fermer avec un verre de montre. Laisser infuser pendant

48 | P a g e
Partie pratique

15 mn puis filtrer sur papier filtre et rincer le résidu avec un peu d’eau distillée
chaude, de manière à obtenir 100 ml de filtrat.

Recherche des tanins

Introduire dans un tube à essai 5 ml de l’infusé à 5%, ajouter goutte à goutte environ
1ml de solution aqueuse diluée de FeCl3 à 1% : en présence des tanins, il se développe
une coloration verdâtre (tanins catéchiques) ou bleu noirâtre (tanins galliques).

Réaction caractéristique :

· Recherche des tanins cathéchiques :


A 5 ml de l’infusé, ajouter 1 ml d’acide chlorhydrique concentré et porter à
ébullition pendant 15 mn. La présence des tanins catéchiques se confirme par la
formation d’un précipité rouge soluble dans l’alcool isoamylique. [132]
· Les tanins galliques :
La différenciation des tanins (cathéchiques et galliques) est obtenue par la réaction
de Stiasny (10ml de formol + 5ml d’acide chlorhydrique) :
A 30ml d’infusé à 5%, ajouter 15ml de réactif de Stiasny puis chauffer au bain-
marie à 90°C pendant 15 à 30 minutes dans un ballon muni d’un réfrigérant à
reflux. L’apparition d’un précipité montre la présence des tanins cathéchiques.
Filtrer et saturer le filtrat avec 10ml d’une solution d’acétate de sodium pulvérisée
puis ajouter quelques gouttes de solution de FeCl3 à 1% (1ml).Le développement
d’une teinte bleu-noirâtre indique la présence des tanins galliques non précipités
par le réactif de Stiasny.[132]
Résultat :

Tableau 25: recherche des tanins dans laurus nobilis.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Tanins totaux feuilles +++

49 | P a g e
Partie pratique

tiges ++

fleurs +++
baies ++
racines ++

Tanins galliques feuilles +


tiges -
fleurs -
baies -
racines -

feuilles +++
tiges ++
Tanins catéchiques fleurs +++
baies ++
racines ++

II.11.3.Détermination des flavonoïdes dans la drogue végétale :

Détermination des anthocyanes dans la drogue végétale :

2 ml d’infusé sont ajoutés à 2 ml d’acide chlorhydrique 2N. L’apparition d’une


coloration rose-rouge qui vire au bleu-violacé par addition d’ammoniac indique la présence
d’anthocyanes. [133]

Réaction caractéristique :

50 | P a g e
Partie pratique

Résultat :

Tableau 26: résultats de recherche des anthocyanes .

Groupe chimique Partie utilisé Résultat

Anthocyanes feuilles -

tiges -

fleurs -

baies -

racines -

Recherche des proanthocyanidols :

À 2 ml d’infusé sont additionnés 2 ml d’acide chlorhydrique concentré ; le tout


est laissé pendant cinq minutes dans un bain-marie bouillant ; l’apparition d’une
coloration rouge indique une réaction positive. [133]

Résultat :

Tableau 27 : résultats de recherche des proanthocyanidols .

Groupe chimique Partie utilisé Résultat

feuilles +
Proanthocyanidols

51 | P a g e
Partie pratique

tiges +

fleurs ++

baies +

racines +

Réaction cyanhydrique ( cyanidine) :

Dans un tube à essai , introduire 5 ml d’infusé et ajouter 5 ml d’alcool


chlorhydrique (éthanol à 95%, eau distillée, HCl concentré à parties égales en volume
) puis quelques copeaux de zinc ou de magnésium et 1 ml d’alcool isoamylique.

L’apparition d’une coloration : rose orangée (flavones), rose violacé (flavonones) ou


rouge ( flavonols, flavanonols) rassemblé dans la couche surnageant d’alcool
isoamylique indique la presence d’un flavonoide libre (génine).Les colorations sont
moins intenses avec les hétérosides flavonoique, négative avec les chalcons, les
dihydrochalcones , les aurones , les catéchines et les isoflavones. [131]

Réaction caractéristique :

Résultats :

Tableau 28: résultat de recherche des flavonoïdes .


Groupe chimique Partie utilisé Résultat
feuilles +++
Flavonoïde Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine

52 | P a g e
Partie pratique

tiges ++
Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine

fleurs +++
Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine

baies +
Beige marron : hétérosides
flavonoique.

racines +
Beige orangé : hétérosides
flavonoique

Recherche des leucoanthocyanes :

Nous avons effectué la réaction à la cyanidine sans ajouter les copeaux de magnésium
et chauffé au bain-marie pendant 15 mn. En présence de leucoanthocyanes, il se développe
une coloration rouge cerise ou violacée.
Les catéchols donnent une teinte brun-rouge. [131]

53 | P a g e
Partie pratique

Tableau 29 : résultats de recherche des leucoanthocyanes.

Groupe chimique Partie utilisé Résultat

Leucoanthocyanes
feuilles -

tiges +

fleurs +

baies +

racines -

II.11.4.Détermination des quinones dans la drogue végétale (dérivés


anthracéniques) :

Anthraquinones libres :

Préparation de l’extrait :

À 1g de poudre , ajouter 10 ml de chloroforme et chauffer pendent 3 mn sur bain-


marie. Filtrer à chaud et compléter à 10 ml avec le même solvant si nécessaire .

Hydrolysat :

À une partie du résidu de la poudre épuisée par le chloroforme, ajouter 10ml d’eau
distillée et 1ml d’acide chlorhydrique concentré, ensuite maintenir le tube à essais dans un
bain marie bouillant pendant 15 minutes. Refroidir le tube sous un courant d’eau et filtrer.

Réaction de borntager :

À 1 ml de l’extrait chloroformique obtenu, ajouter 1 ml de NH4OH diluée puis


agiter. Une coloration plus au moins rouge indique la présence d’anthraquinones
libres.

54 | P a g e
Partie pratique

les anthraquinones combinés :

Sur la poudre précédemment épuisée par le dichlorométhane, ajouter 10 ml d’eau


distillée et un ml de HCl, chauffer au bain marie pendant 15 mn puis filtrer.

Prendre 5 ml de ce filtrat, extraire avec 5 ml de dichlorométhane. A la phase organique


ajouter un ml de NH4OH diluée à 25%.

L’apparition d’une coloration rouge indique la présence d’anthraquinone sous la forme de


O-hétérosides. [130]

Résultats :
Tableau 30 : résultats de recherche des dérivés anthracéniques.

Groupe Partie unitaire Résultat


chimique
feuilles -
Quinones
libres
tiges -

fleurs -

baies -

racines -

feuilles -

Quinones tiges +
combinés

55 | P a g e
Partie pratique

fleurs -

baies +

racines -

II.11.5.Détermination des hétérosides cardiotoniques dans la drogue végétale :

Extraction :

Ajouter à 1g de poudre 10 ml d’éthanol à 60% et 5 ml d’acétate de plomb à


10%. chauffer sur bain-marie pendant 10mn et filtrer.

Agiter le filtrat avec 10ml de chloroforme sans formation d’émulsion. Laisser décanter.
Puis soutirer la phase chloroformique et évaporer à sec. Reprendre le résidu avec 2
ml d’isopropanol.

Caractérisation :

· Réaction de Libermann Burchard :A 1 ml de l’extrait, ajouter 1/5 du volume


d’anhydride acétique, puis, goutte à goutte de l’acide sulfurique concentré : il se
développe d’abord une coloration rouge, ensuite bleue et enfin verte. La
réaction de Liebermann n’est pas employée en général, elle est caractéristique pour
les substances dérivés de la bufanolide.[127]

Résultats :

Tableau 31 : résultats de recherche des hétéroside cardiotonique.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles

(-) pour les bufanolides.

56 | P a g e
Partie pratique

Hétéroside cardiotonique tiges

(-) pour les bufanolides.

fleurs

(+) pour les bufanolides.

baies

(-)pour les bufanolides.

racines

(-) pour les bufanolides.

II.11.6.Détermination des stérols et terpènes dans la drogue végétale :

Extrait :

Introduire dans un tube à essais 1g de poudre et 20ml d’éther. Boucher, agiter et laisser
en contact pendant 24 heures. Après ce temps, filtrer et compléter à 20ml avec de l’éther.

Caractérisations :

1.Réaction de Liebermann-Buchard :

Evaporer à sec dans une capsule 10ml d’extrait. Dissoudre le résidu dans 1ml
d’anhydride acétique avec 1ml de chloroforme et recueillir la solution dans un tube à
essais. Ajouter 1 à 2ml d’acide sulfurique concentré au fond du tube à essais à l’aide d’une
pipette et ne pas agiter. La formation d’un anneau rouge-brunâtre ou violet à la zone de

57 | P a g e
Partie pratique

contact des deux liquides et la coloration verte ou violette de la couche surnageant révèlent
la présence de stérols et de triterpènes.[132]

2. Caroténoïdes : Carr et Price

Evaporer 5ml d’extrait éthéré dans une capsule jusqu'à sec, ajouter 2 à 3 gouttes de
solution saturée de chlorure d’antimoine (SbCl3) dans le chloroforme ou dans le
tétrachlorure de carbone (CCl4). Il se développe en présence de caroténoïdes une coloration
bleu-rouge par la suite. [132]

Résultat :
Tableau 32 : résultats de recherche des stérols et terpènes et des caroténoïdes.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Stérols et triterpènes feuilles +

tiges +

fleurs ++

baies +

racines +

Caroténoïdes feuilles +

tiges +
fleurs +
baies +
racines +

II.11.7.Détermination des stéroïdes dans la drogue végétale :

Test de Salkowski :

5 gouttes de H2SO4 concentré sont ajoutées à un ml d’extrait, l’observation d’une


coloration rouge dans chaque extrait indique la présence de stéroïdes.

58 | P a g e
Partie pratique

Tableau 33 : résultats de recherche des stéroïdes .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles ++
Stéroïdes
tiges +

fleurs -

baies ++

racines -

II.11.8.Détermination des sennosides dans la drogue végétale :

Dans une fiole conique introduire 2,5 g de poudre ; puis ajouter 50 ml d’eau
distillée et 2 ml d’acide chlorhydrique concentré, chauffer dans un bain-marie
pendant 15 mn, laisser refroidir et agiter avec 40ml d’éther, séparer la couche
éthérée puis évaporer.

Au résidu refroidi, ajouter 5 ml d’ammoniaque diluée (1/2). Il se développe une


coloration jaune ou orange en présence de sennoside .

chauffer au bain-marie pendant 2 mn, il se développe une coloration violette rouge


en présence de sennosides.

Résultats :

Tableau 34: résultats de recherche des sennosides.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Sennosides feuilles +

tiges +

fleurs +

baies +

avant

59 | P a g e
Partie pratique

après
racines -

II.11.9.Détermination des saponisides dans la drogue végétale :

Méthode 1 :(test de mousse)

Dans un tube à essai un ml d’infusé est agité vigoureusement pendant 2mn.


L’observation de mousse indique la présence de saponiside dans la drogue. [130]

Méthode 2 :(test d’émulsion)

5 gouttes d’huile d’olive son ajoutées à 1ml d’infusé dans un tube à essai et la mixture
est agitée vigoureusement .

La formation d’une émulsion stable indique la présence de saponiside. [130]

Réaction caractéristique :

Résultats :

60 | P a g e
Partie pratique

Tableau 35 : résultats de recherche des saponines.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Saponiside feuilles ++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.

tiges ++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.

fleurs ++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.

baies +++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.

racines +++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.

Méthode 3:( calcul de l’indice de mousse)

Préparation du décocté à 1% :

À l’aide d’un erlenmeyer de 250ml, faire une décoction de 1g de poudre dans 100ml
d’eau distillée. Chauffer pendant 15 minutes tout en maintenant une ébullition modérée.
Filtrer après refroidissement et ajuster à 100ml.

61 | P a g e
Partie pratique

Caractérisation :

Dans une série de 10 tubes à essais numérotés de 1 à 10, répartir successivement


1,2,….10ml de décocté à 1% préparé, ajuster le volume dans chaque tube à 10ml avec de
l’eau distillée et agiter chaque tube dans le sens de la longueur pendant 15 secondes à
raison de 2 agitations par seconde. Laisser reposer pendant 15 minutes et mesurer la
hauteur de la mousse dans chaque tube. Le tube dans lequel la hauteur de la mousse est de
1cm permet de calculer l’indice de mousse.

Indice de mousse (Idm) = ×

Avec n = numéro du tube dans lequel la hauteur de la mousse est égale à 1cm.
Si la hauteur de la mousse est inférieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
inférieur à 100.
Si la hauteur de la mousse est supérieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
supérieur à 100. [131]
Tableau 36 : résultats de calcule de l’indice de mousse .

Laurus nobilis L.
Recherche
feuilles fleurs tiges baies racines
Hauteur de la =1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans
mousse le tube n°9 le tube le tube les tubes n° les tubes n°
˃1cm dans n°10 n°10 8,9,10 9,10
le tube n°10
Indice de mousse
(Idm) 211,111 100 100 336,111 211,111

Le calcule de l’indice de mousse nous a confirmé la présence des saponisides dans tous les
parties de la plante laurus nobilis, et surtout concentré dans les baies (fruits).

II.11.10.Détermination des coumarines dans la drogue végétale :

Faire bouillir à reflux 2 g de poudre dans 20 ml d’alcool éthylique on le


fait bouillir pendant 15 mn puis filtrer après refroidissement. A 5 ml du filtrat
rajouter 10 gouttes de la solution alcoolique de KOH à 10% et quelques gouttes
d’HCl à 10 % .

62 | P a g e
Partie pratique

Réaction caractéristique :

Résultats :

Tableau 37 : résultats de recherche des coumarines .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles
coumarine
++

tiges
+

fleurs +
baies
+

racines

++

II.11.11.Détermination des glucosides dans la drogue végétale :

Réaction à l’acide sulfurique :

63 | P a g e
Partie pratique

Mettre deux gouttes de l’acide sulfurique concentré sur une masse de la poudre
végétale. En présence des glucosides. La masse se colore en rouge brique, puis en
violet. [127]

Résultats :

Tableau 38 : résultats de recherches des glucosides .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Glucoside feuilles ++

tiges ++

fleurs +

baies ++

racines +++

II.11.12.Détermination des composés réducteurs dans la drogue végétale :

À 5 ml d’infusé on ajoute quelque gouttes de H2SO4 concentré , au quel on


ajoute une solution aqueuse de KMnO4 ( de couleur violette foncé), le changement
de couleur ( transparent) indique la présence des composés réducteurs dans la drogue
végétale. [127]

Résultats :

Tableau 39: résultats de recherche des composés réducteurs .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles +++
Composés réducteurs

tiges +++

64 | P a g e
Partie pratique

fleurs +
baies -

racines +

II.11.13.Détermination de l’amidon dans la drogue végétale :

À 2 g de la poudre végétale rajouter quelques gouttes d’iode (I2),la couleur bleu-


violet indique la présence d’amidon dans la drogue végétale.

Réaction caractéristique :

Résultats :

Tableau 40:résultats de recherche d’amidon .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles -
amidon tiges -

fleurs +

65 | P a g e
Partie pratique

baies ++

racines -

II.11.14.Détermination de stupéfiants dans la drogue végétale:(les


tétrahydrocannabinols )

À 0,5 gramme de la poudre ajouter 5 ml d’éther de pétrole et agiter pendant 15 mn,


filtrer dans une capsule et évaporer le filtrat à sec au bain marie. Au résidu ajouter trois à
quatre gouttes de KOH à 5% dans l’alcool : une coloration violette indique la présence de
tétrahydrocannabinols. [130]
Résultats :

Tableau 41 : résultats de recherche des stupéfiants .

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Stupéfiants ou feuilles -
Tétrahydrocannabinols. tiges -
fleurs -
baies -
racines -

II.11.15.Détermination des iridoides dans la drogue végétale :

Faire une décoction 1g dans 5ml d’eau distillée. Faire une filtration et ajouter 1ml
d’acide chlorhydrique, rapprocher le tube au feu doux d’une flamme bleue.

Laisser au repos et observer ensuite le précipité noir qui caractérise la présence des
irridoides en cas de leur présence.

Résultat :

Tableau 42 : résultats de recherche des iridoides .

66 | P a g e
Partie pratique

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


Irridoides feuilles +++

tiges ++

fleurs +
baies +

racines +

II.11.16.Détermination de mucilage ( polyuronides ) dans la drogue végétale :

Nous avons introduit 1 ml du décocté à 10 % dans un tube à essai et ajouté 5 ml


d’éthanol absolu. Après une dizaine de minutes, l’obtention d’un précipité floconneux par
mélange, indique la présence de mucilages. [131]
Résultats :

Tableau 43: résultats de recherche de mucilage.

Groupe chimique Partie unitaire Résultat


feuilles ++
Mucilage ou polyuronides

tiges +

fleurs +

baies +

67 | P a g e
Partie pratique

racines +

II.12.17.Tableau récapitulatif :

Tableau 44: Tableau récapitulatif de l’étude phytochimique.

Plante : Laurus nobilis L.


feuille tige fleurs fruit racine
Alcaloïde + + + + +
Tanin +++ ++ +++ ++ ++
Flavonoïde +++ ++ +++ + +

Anthocyane - - - - -

Proanthocyanidols + + ++ + +
Quinones libres - - - - -
combinés - + - + -
Heteroside - - + - -
cariotonique
Saponine ++ ++ ++ +++ +++
Coumarine ++ + + + ++
Composé réducteur +++ +++ + - +
Amidon - - + ++ -
Mucilage ++ + + + +
Irridoide +++ ++ + + +
Glucoside ++ ++ + ++ +++
Stérols et terpènes + + +++ + +
Carténoide + + + + +
Stéroide ++ + - ++ -
Stupéfiants - - - - -

68 | P a g e
Partie pratique

Discussions :

Les tests phytochimiques consistent à détecter les différentes familles de composés


existantes dans la partie étudiée de la plante par des réactions de précipitation ou de
coloration en utilisant des réactifs spécifiques à chaque famille de composés.

L’étude phytochimique est résumée dans le tableau ci-dessus qui a montré :

- une réaction positive avec le réactif de Dragen Dorff montre la présence des
alcaloïdes dans les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines; mais en faible
quantité.

- Les anthocyanes, les quinones et les stupéfiants sont absents dans la plante du laurus
nobilis.

-Les hétérosides cardiotoniques sont présents dans les fleurs seulement, de même l’amidon
existe seulement dans les fleurs et les baies de laurier. Tandis que les composés réducteurs
existent dans les feuilles, les fleurs, les tiges, les racines et absents dans les baies.

-Les coumarines , les mucilages, stérols, carténoide, iridoide, les glucosides et les
saponisides donnent des réactions positives ce qui indique leur présence dans les
différentes parties de la drogue végétale, a savoir ( les feuilles, les fleurs, les tiges, les
fruits et les racines). Il apparait donc que la plante laurus nobilis possède un éventail
de substances bioactives, notamment les saponisides, les coumarines,….etc.
Les saponisides présents dans la plante pourraient servir a la plante pour des agents
de communication. De toutes les façons, les saponisides peuvent faciliter
l’assimilation des génines sucrées et augmenter aussi leur action de détergence.

Cette étude a révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs
( polyphénol : flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols, ) reconnus pour leurs propriétés
biologiques et thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la
présence des flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les
propriétés physiologiques anti-oxydantes .

69 | P a g e
Partie pratique

II.12.Les huiles essentielles :

II.12.1.procédé d’extraction :

Dans notre étude, l’extraction de l’huile essentielle a été effectuée au niveau du


laboratoire de synthèse pétrochimique de BOUMERDES . Pour ce faire, un appareillages
a été utilisés pour extraire l’huile essentielle de laurus nobilis L.

II.12.1.a. Hydrodistillation :

Figure 25 : Montage d’hydrodistillation employé à l’échelle industrielle et en laboratoire


pour l’extraction de l’huile essentielle.

L’hydrodistillation à l’échelle laboratoire a été réalisée à l’aide du dispositif schématisé par


la figure 26.

100g de plante sèche est introduite dans un ballon , imprégné d’eau distillée ( 600 à 700
ml ) , l’ensemble est porté a ébullition pendant 3 heures.
Les vapeurs chargées d’huile , en traversant un réfrigérant se condensent et chutent dans
une ampoule à décanter, l’eau et l’huile se séparent par différence de densité.
L’huile séparée de l’eau aromatique est déshydratée par congélation, et/ou par le sulfate de
sodium ( Na2SO4) et conservée à +5°C.[29,134]

70 | P a g e
Partie pratique

Figure 26: dispositif d’hydrodistillation à l’échelle de laboratoire . [135]

- Légende :

1 : Vallet (support) 5 : Arrivée et Sortie de l’eau

2 : Mélange (Eau-Drogue végétale) 6 : Éprouvette

3 : Thermomètre 7 : drogue végétale broyée.

4 : Réfrigérant à eau 8 : huile essentielle .

Résultats d’extraction par hydrodistillation :

La distillation est conduite pendant une durée nécessaire à l’épuisement de la matière


première en huile essentielle dans les conditions opératoires décrites ci-dessus. Les essais
ont été répétés plusieurs fois .
Le rendement en huile essentielle est exprimé par la quantité d’huile (en ml) obtenue pour
100g de matière végétale sèche.
II.12.2. calcul du rendement :

Le rendement en huile essentielle est le rapport entre le poids de l’huile extraite et le


poids de la plante à traiter. [136]
Le rendement, exprimé en pourcentage est calculé par la formule suivante :

R= PB/PA x100 ou R= [∑PB ⁄ ∑PA]x 100

R : rendement de l’huile en %. PA : poids de la plante en g. PB : poids de l’huile en g.

71 | P a g e
Partie pratique

Tableau 45: rendement des huiles essentielles des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs et
des fruits du laurus nobilis.

PB ( g ) PA ( g ) R (%)
Feuilles 0.7900 100 0.79
Tiges 0,1000 100 0,10
Baies 1,1509 100 1.15
Fleurs 0.8206 100 0.82
Racines 0 100 0

1,2
pourcentages en huiles

1
essentielles ( % )

0,8
0,6
0,4
0,2 %0
0
Feuilles Tiges Fruits Fleurs Racines

Figure 27 :comparaison des rendements de feuille, de tige, de fruit et fleur du laurus


nobilis L.

Discussion :

Les résultats du calcul des rendements des feuilles, des fruits, des tiges, des fleurs et des
racines du laurus nobilis montrent clairement que le pourcentage le plus élevé est celui des
fruits (1.15 %) , ensuite le pourcentage des fleurs ( 0.82 %) suivie par celui des feuilles
(0,79 %) et enfin le pourcentage le plus faible est celui des tige (0.1 %), tandis que les
racines ne contenant plus d’huiles essentielles (0 %). Ces résultats sont en accord avec
Marzouki, Khaldi et al. , qui ont montrer que l’extraction par hydrodistillation des feuilles
du laurus nobilis d’Algérie contiennent un pourcentage de ( 0.5 ± 0.2 ) % en huile
essentielle des feuilles. [30]

II.12.3. Etude de variation du rendement de l’huile essentielle des feuilles du laurus


nobilis :

72 | P a g e
Partie pratique

Il es intéressant de réalisé une autre étude de variation du rendement en fonction des


différentes paramètres : l’états des feuilles de laurus nobilis (feuille fraiche ou séché ;
concassé ou broyé…), le mois de récolte ,le climat de récolte , la méthode d’extraction
( hydrodistillation, micro-onde ..),selon la température d’extraction , afin de déterminer le
meilleur rendement pour l’extraction des huiles essentielles de notre étude.

Tableau 46 : variation de rendement de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis en


fonction de certains paramètres ( climat, saison, méthode…….).

Matière végétale du laurus nobilis PB (g) PA (g) R(%)


Feuilles fraiches par hydrodistillation 0.1633 100 0.16
Feuille sèche 100g de matière première 0.7900 100 0.79
Feuille fraiche de matière végétal extraite par micro-onde 0.2957 50 0.59
Feuille sèche par hydrodistillation au mois d’octobre 0.5440 100 0.54
Feuille sèche par hydrodistillation au mois de janvier 0.6120 100 0.61
Feuille sèche par hydrodistillation au mois d’avril 0.7910 100 0.79
Feuille sèche par hydrodistillation au mois de juillet 0.4320 100 0.43
Feuille sèche par hydrodistillation de TIZI-OUZOU 0.6300 100 0.63
Feuille sèche par hydrodistillation de M’SILA 0.6540 100 0.65
Feuille sèche par hydrodistillation de larba ( BLIDA) 0.7910 100 0.79
Feuille sèche à 50g de matière première extraite par micro-onde 0.4139 50 0.82
Feuilles sèches broyés en poudre fine extraite par hydrodistillation 0,4361 100 0,43
Feuilles sèches concassé extraite par hydrodistillation 0,6700 100 0.67
Feuille sèche à faible température d’extraction ( vitesse faible de 0.8100 100 0.81
vapeur)

Discussion :

L’étude de variation du rendement en fonction du climat, la méthode d’extraction ..etc ,


confirment d’une part que l’extraction soit par hydrodistillation ou par micro-onde des
feuilles fraiches présente un rendement faible par rapport les feuilles séchés.
D’autre part, le broyage en poudre fine donnent des résultats faible par rapport au
concassage.

73 | P a g e
Partie pratique

Le meilleur moment d’extraction des huiles essentielles est en avril ( moment de floraison
). Parce que c’est le moment de la synthèse des différents composants chimiques.
L’extraction par hydrodistillation présente un rendement légèrement faible par rapport à
l’extraction par micro onde.
On a aussi comparés le rendement de l’huile essentielle de 3 origines différentes (
TIZI-OUZOU, M’SILA, BLIDA). Les résultat ont montré que le rendement est presque
semblable.
L'étude a indiqué aussi que le taux de vapeur est un paramètre très important. Le tableau 46
montre l'ensemble récupération du pétrole par rapport au temps de la distillation de la
vapeur pour les taux différents appliqués. Il est clair que le démarrage avec un taux de
vapeur à basse donne un meilleur rendement d'huile. Une taux de vapeur à haute au début
de la distillation à vapeur donne des taux réduits de récupération du pétrole. [137]

En matières végétales sèches, les huiles sous-cutanées ne peuventt être facilement


établi à la surface de la matière sauf si le matériau est mouillé assez suffisant pour la
diffusion doit avoir lieu. Par conséquent, pour ces taux matériaux vapeur basse au début de
la distillation est nécessaire afin de suffisamment humidifier le matériel végétal . Une fois
que les huiles sont apparus, alors le taux de vapeur peut être augmenté, étape par étape
pour faire évaporer l'huile gouttelettes par la vapeur qui passe.[134,137]

Mais l’extraction avec un taux de vapeur faible aux début de l’hydrodistillation peut
causer quelques réaction indésirable (hydrolyse, isomérisation,….etc) , toute en influant
sur la qualité de l’huile essentielle extraite.

II.12.4. Etude cinétique d'extraction: influence du temps d’extraction sur le rendement


en huile essentielle du laurus nobilis L.

La cinétique a été explorée en effectuant des prélèvements horaires à intervalles


réguliers sur les phases aqueuses et organiques durant l’hydrodistillation. Afin d’en
récupérer des quantités significatives et mesurables, les essences ont été extraites avec un
solvant organique (éther diéthylique).

La cinétique de l’extraction par hydrodistillation de l’huile essentielle du Laurus


nobilis a été effectué pour les différentes parties de cette plante.

74 | P a g e
Partie pratique

La détermination de l’évolution du rendement de l’huile essentielle du laurus nobilis L. en


fonction du temps est illustrée dans la figure 28.

2,5
Rendement en huile essentielle ( % )
2

1,5 Racine
Tige
1 Baie
Fleur
0,5 Feuille

0
0 30 60 90 120 150 180 210 240
Temps d'extraction ( min )

Figure 28 : Évolution du rendement des huiles essentielles des tige, des baie, des fleur des
racine, et des feuille du laurus nobilis lors de l’hydrodistillation ,à partir de 200g de
matière végétale.
En se basant sur la figure 28, nous constatons que l’allure générale des courbes est
croissante et qu’elle tend vers un paliers au bout de 120 min.

Étude de la cinétique d’extraction = Suivi du rendement :

Le suivi cinétique accompli et l’évolution du rendement en fonction du temps est


représenté dans la figure 28.
La cinétique se divise en trois étapes :
- dans la première, nous observons un palier pour un rendement nul, correspondant à la
phase de chauffage de la matrice.
- la seconde correspond à un saut marqué de la quantité d’HE récupérée (30 à 120 mn).
- enfin, au cours de la troisième étape, la courbe tend vers un second palier qui correspond
au rendement maximum possible à atteindre.
En effet, le rendement augmente rapidement durant les première 120 minutes ou plus de
80% de l’huile sont extraites respectivement pour les feuilles, les tiges, les fruits et les
fleurs , son évolution devient plus lente par la suite pour atteindre un rendement égal à
1.58% ;0.2% ;2.3% et 1 .64% , respectivement pour laurus nobilis L à partir de 200g de la
matière première.

75 | P a g e
Partie pratique

Dans le cas où les structures sécrétrices sont superficielles, la membrane externe ou la


cuticule qui constitue la seule barrière à la libération de l’HE, est vite rompue à ébullition.
Les composés volatils sont aussitôt évaporés d’où la courte durée pour atteindre le pic
cumulatif lors de l’extraction. Lorsque les essences sont sous-cutanées, elles doivent
d’abord diffuser à travers l’épaisseur du tissu végétal avant d’entrer en contact avec l’eau
ou sa vapeur. Elles seront alors lentement évaporées en comparaison avec les structures
sécrétrices superficielles. [137] Les cellules à huiles essentielles des lauracées ( laurus
nobilis L.) localisées sur ou à proximité de la surface de la plante .

II.13. Extraction de 1,8-cinéole :

Un certain nombre d’huiles volatiles de certaines espèces des plantes ( eucalyptus ,…)
contiennent invariablement eucalyptol aussi élevés que 10% à 70%. Il se produit également
dans l’huile de feuille de laurier noble ( laurus nobilis L. ) . [138]
Toutefois, eucalyptol peut être isolée de ces huiles en adoptant l’une des méthodes
suivantes :
Méthode à l’acide phosphorique ;
Méthode à l’acide bromhydrique ;
Méthode à l’orthocrésol ;
Extraction du cinéol par solvant ;
Extraction du cinéol par cristallisation ;
Récupération par distillation fractionnée ;
La chromatographie d’adsorption. ( voir annexe I )

Parmi les différentes méthodes de récupération du 1,8-cinéol (eucalyptol), constituant


majoritaire de l’huile essentielle des feuilles du Laurus nobilis , on distingue :

Méthode à l’acide phosphorique :

Cette méthode consiste à dissoudre dix (10) ml d’essence dans cinquante (50) ml
d’éther de pétrole et à ajouter peu à peu à froid, de l’acide phosphorique concentré ; la
combinaison blanche (C10H18OH3PO4) qui se dépose prend une teinte jaunâtre ou
rougeâtre. La masse cristalline est alors essorée, lavée avec de l’éther de pétrole puis
décomposée en utilisant de l’eau ; le cinéol est récupéré par décantation.

76 | P a g e
Partie pratique

Figure 29 : réactif utilisées pour l’extraction d’eucalyptol.

Figure 30: l’huile essentielle des feilles du laurier noble dans l’ether de pétrole ( mélange 1).

Figure 31 : le mélange 1 et quelques gouttes d’acide phosphorique ( mélange 2 ).

77 | P a g e
Partie pratique

Figure 32: séparation d’éther de pétrole a partir mélange 2.

Figure 33 : complexe acide phosphorique et l’eucalyptol ( 1,8- cinéol ).

Figure 34 : décantation de cinéol après l’ajout d’eau distillée.

Figure 35 : l’eucalyptol extrait. Figure 36: Eucalyptol.

78 | P a g e
Partie pratique

Description du cinéol ( eucalyptol ) obtenu :

Couleur: liquide jaune pale……………………………………..…………………conforme

Odeur : camphrée, aromatique et caractéristique ..……...…………………..……conforme

Gout : piquant et laisse une sensation de froid……………………………………conforme

Solubilité : insoluble dans l’eau, soluble dans les solvants organiques , de la paraffine, les
huiles fixes et de l’éthanol à 90%.............................................................................conforme

On remarque que les résultats sont conforme aux norme exiger par la pharmacopée
britannique. [138, 139, 140,141]

Propriétés physiques et chimiques: (Voir annexe I).

Informations toxicologiques : (Voir annexe I).

Autres données : (Voir annexe I).

Stockage:

Conserver à température ambiante (15 à 25°C recommandés). Garder hermétiquement


fermé et à l'abri du soleil ou de l'humidité.
Stable pendant 12 mois dans les conditions normales de stockage et dans son emballage
d’origine scellé.

Essais chimiques :

1.Il forme des composés plus caractéristique avec HCl, HBr et H3Po4 avec points fusion
bien défini. [138, 139] ……………………………………………………….…….conforme

79 | P a g e
Partie pratique

II.14. Analyse de l’huile essentielle extraite :

Les propriétés organoleptiques et physico-chimiques constituent un moyen de


vérification et de contrôle de la qualité de l’huile essentielle. Nos essais ont été effectués
selon un protocole précis et obéissent aux normes édictées par AFNOR et par la
pharmacopée . Pour l’huile essentielle de laurier (laurus nobilis L.). [142]
IV.14. a. Caractéristiques organoleptiques de l’huile essentielle du laurus nobilis :

Après l’extraction , on a pu déterminer les caractères organoleptiques de

notre l’huile essentielle et on a les comparés avec ceux de la norme

AFNOR .

Les différentes caractéristiques organoleptiques (aspect, couleur, odeur) de l’essence


du laurier noble ou ( laurus nobilis L. ) ont été notées et présentés ci-dessous :

Tableau 47 : propriétés organoleptiques des huiles de laurier noble.

HE des feuilles du HE des tiges HE des baies du HE des fleurs du


laurus nobilis L. du laurus laurus nobilis L. laurus nobilis L.
nobilis L.
Couleur Jaune clair à jaune Jaune très pale Jaune à jaune pale Jaune à jaune pale
à jaune
Aspect liquide mobile liquide mobile liquide mobile liquide mobile
limpide limpide limpide limpide
Odeur Odeur fraîche, aromatique, aromatique, aromatique,
épicée, camphrée, épicée, avec épicée, épicée,
d'une grande un fond caractéristique caractéristique
originalité, d’eucalyptus
avec un fond
d’eucalyptus.
Huile
essentielle

80 | P a g e
Partie pratique

A l’issue des distillations, les huiles essentielles obtenus de chaque partie de la plante
laurus nobilis , sont liquides mobiles limpides de couleur jaune à jaune pale avec des
odeurs aromatiques caractéristiques.

En particulier , l'huile essentielle extraite a partir des feuilles est d'aspect liquide mobile
limpide, de couleur jaune clair à jaune, d'odeur aromatique, épicée, avec un fond
d'eucalyptus .

Les paramètres organoleptiques de nos HE sont en accord avec ceux répertoriés dans les
normes .[142,137,143]

II.14. b. Caractéristiques physico-chimiques de l’huile essentielle du laurus nobilis L. :

La valeur commerciale d’une huile essentielle est la plus part du temps estimée d’après
ses qualités organoleptiques ( l’odeur en particulier) auxquels s’ajoutent un certain nombre
de constantes appelées « indices », déterminés à partir de normes établies, parmi lesquelles
nous pouvons citer les normes AFNOR. Ces normes définissent deux types d’indices : les
indices physiques ( densité relative, pouvoir rotatoire, indice de réfraction ……..) et les
indices chimiques ( indice d’acides, indice d’ester,….).

Ces tests physico-chimiques ont été réalisés au laboratoire de synthèse pétrochimique de


Boumerdès.

II.14. b.1.caractéristiques physiques de l’huile essentielle :

Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.

II.14. b.1.1.pouvoir rotatoire à 20°C : (NF T 75-113 Juin 1982)

Définition :

( voir annexe I ).

Calcul :

Le pouvoir rotatoire, exprimé en degrés d’angle, est donné par l’équation suivante :

PR= A x 100/ L

Où :

A : valeur de l’angle de rotation en degré d’angle

L : longueur du tube utilisé en millimètres

Signaler les pouvoirs rotatoires lévogyres par le signe négatif (-)

81 | P a g e
Partie pratique

II.14. b.1.2.indice de réfraction à 20°C : ( NF T 75-112 Aout 1977 )

Définition :

( voir annexe I ).

Principe:

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

Régler le refractomètre en mesurant les indices de réfraction des produits étalons tels
que : l’eau distillée, benzoate de benzyle, éthanol.

L’appareil a été étalonné par éthanol ayant un indice de réfraction connu égale à 1.3611 à
20°C.

Calcul :

L’indice de réfraction à la température de référence t est :

= + 0,0004 × ( − )

Où la température de référence est de 20°C.

: valeur de lecture

t : température de l’HE

II.14. b.1.3. Densité à 20°C : ( NF T 75-111 juin 1982)

Définition :

( voir annexe I ).

Principe :

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

Nettoyer soigneusement le pycnomètre , peser le pycnomètre vide. Remplir le


pycnomètre avec de l’eau distillée récemment bouillie, puis refroidie aux environs de
20°C. Plonger le pycnomètre dans le bain thermostatique. Au bout de 30 mn, ajuster si
nécessaire le niveau d’eau au trait repère, boucher le pycnomètre s’il y a lieu, et essuyer
l’extérieur avec un chiffon sec ou un papier absorbant, lorsque l’équilibre de température
avec la salle des balances est réalisé, peser le pycnomètre muni de son bouchon , s’il y a
lieu, à 0.001 g prés.

82 | P a g e
Partie pratique

Vider le pycnomètre, puis le rincer et le sécher, effectuer les mêmes opérations en


remplaçant l’eau par l’échantillon pour essai (huile essentielle).

Calcul :

Densité relative a température ambiante :

= − / −

:masse de pycnomètre vide

Densité relative à 20°C :

= /0,9982( 0,0007{ − 20})

Où :

0,9982 g/ml est la masse volumique de l’eau à 20°C

0,0007 est un facteur correctif

: température ambiante

: densité à température ambiante

II.14. b.1.4. Evaluation de la miscibilité à l’éthanol ( NF T 75-101 Juin 1982 ) :

Définition :

( voir annexe I ).

Principe :

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

Introduire, dans l’éprouvette ou la fiole, 1ml d’huile essentielle, mesuré à l’aide de la


pipette. Ajouter, à l’aide de la burette, un mélange hydro-éthanolique de titre
alcoométrique déterminé préalablement amené à une température de 20°C± 0.2°C , par
fractions de 0.1ml, jusqu’à miscibilité complète , en agitant énergiquement après chaque
addition. Lorsque le mélange est parfaitement limpide, noter le volume du mélange hydro-
éthanolique utilisé.

Poursuivre l’addition du mélange hydro-éthanolique, par fractions de 0.1 ml jusqu’à un


total de 20 ml, en n’oubliant pas d’agiter après chaque addition. S’il se produit un trouble
ou une opalescence avant l’addition complète, noter le volume qui a provoqué ce trouble
ou cette opalescence et , éventuellement, le volume avec lequel celui-ci disparait.

83 | P a g e
Partie pratique

Dans le cas ou une solution limpide n’est pas obtenue après l’addition des 20 ml de solvant
, utiliser le mélange hydro-éthanolique de titre alcoométrique immédiatement supérieur .

IV.15. b.2.caractéristiques chimiques de l’huile essentielle :

Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.

II.14. b.2.1.Indice d’acide ( IA ) : ( NF T 75-103 Juin 1982 )

Définition :

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

Introduire la prise d’essai dans la fiole. Ajouter 5ml d’éthanol, et 5 gouttes de


phénolphtaléine neutraliser le liquide avec la solution d’hydroxyde de potassium (0.1mol/l)
contenu dans la burette.

Calcul :

IA= 56,11xVxC/ m

Où :

V : volume en ml de KOH utilisé

m : masse en g de la prise d’essai

C : concentration exacte de KOH (0.1) en mol/l

II.14. b.2.2.Indice d’ester ( IE ) :( NF T 75-104 Juin 1982 )

Définition :

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

On prend 0.5 ml de l’échantillon pour essai. Introduire la prise d’essai dans le ballon,
puis à l’aide d’une burette ajouter 15 ml de solution de KOH ( 0.5 mole/l ). Puis on place
un réfrigérant ascendant on plonge l’ensemble dans un bain-marie , on chauffe jusqu’à
ébullition pendant 30 min. On détermine la fin de la réaction de saponification lorsqu’on
obtient une solution transparente et homogène ( Absence de trace d’huile ).

Laisser refroidir le ballon et démontrer le réfrigérant. Ajouter 5 gouttes de solution de


phénolphtaléine titrer l’excès de KOH avec la solution d’acide chlorhydrique à 0.5 mole/l,
on réalise parallèlement un essai à blanc dans les même conditions c'est-à-dire 15 ml de

84 | P a g e
Partie pratique

solution de KOH titrées par HCl 0.5 N la différence des volumes dépensés lors du titrage
de l’essai à blanc et de l’échantillon correspondant à la quantité de KOH dépensé pour la
saponification et pour la neutralisation des acides libres contenus dans l’échantillon.

Calcul :

IE = 28,05 / m x ( V0 - V1) - IA

Où :

V0 : volume en ml d’HCl pour le blanc ;

V1 : volume en ml d’HCl pour la détermination ;

m : masse de la prise d’essai ;

IA : indice d’acide.

II.14. b.2.3.Mesure de l’indice d’iode :

L’indice d’iode exprime le degré d’insaturation du corps gras.

Définition :

( voir annexe I ).

Principe :

( voir annexe I ).

Mode opératoire :

Dans une fiole conique bien sèche de 200ml, bouchant à l’émeri, introduire une prise
d’essai convenable de la substance ( le poids de la prise d’essai est déterminé par l’indice
d’iode de la substance, on prend de préférence 32g./II) exactement pesée et 10ml de
chloroforme ou de tetrachlorure de carbone. Agiter le mélange jusqu’à dissolution
complète et ajouter 25ml exactement mesurés de réactif. Boucher, agiter et abandonner le
mélange 1 heure à l’obscurité. Puis ajouter 20ml d’une solution à 10% d’iodure de
potassium, 100ml environ d’eau distillée et titrer l’iode libre au moyen d’une solution de
Na2S2O3 0.1N.

Effectuer un essai à blanc dans les mêmes conditions.

Soient, n : le volume en ml de Na2S2O3 utilisé pour l’essai à blanc.

n’ : le volume en ml de Na2S2O3 utilisé pour la prise d’essai.

P.E. : prise d’essai.

85 | P a g e
Partie pratique
× .
L’indice d’iode est égal à : I I= .

× . ×
(1ml de Na2S2O3 à 0.1N correspond à 126mg d’Iode d’où : ) [142,144]
.

Résultats :

Tableau 48 : caractéristiques physico-chimiques de l’huile essentielle des feuilles du laurus


nobilis L.

Caractéristique physiques Caractéristique chimiques

Pouvoir Indice de Densité miscibilité à Indice Indice Indice de Indice


rotatoire réfraction l’éthanol d’acide d’ester saponnification d’iode
(PR) (IR) (IA) (IE) (IS)
Huile essentielle des feuilles
du laurus nobilis conservé

Soluble dans
pendant 1 ans

-15° 1.4773 0.915 1 à 3 partie 4.40 49.09 53.5 65


d’alcool à
80%
Huile essentielle des feuilles
du laurus nobilis conservé
pendant 1 semaine

Soluble dans
-14° 1.4773 0.915 1à 3 partie 2.6 40.5 43.1 60.94
d’alcool à
80%
[142,144,145,146,14

Soluble dans
1 à 3 partie 1à3
7,148 , 149, 150]

-10° à 1.4670 à 0.912 à d’alcool à 20 à 50 36 à 96 75-100


Normes

-22° 1.4775 0.945 80%. En


Soluble dans général
3 à 10 partie <5
d’alcool à
70%.

86 | P a g e
Partie pratique

Tableau 49: caractéristique phisico-chimique de l’huile essentielle des fruits du laurus


nobilis.

Caractéristique physiques Caractéristique chimiques

Pouvoir Indice de miscibilité à Indice Indice Indice de pH Indice


rotatoire réfraction l’éthanol d’acide d’ester saponnifi- d’iode
(PR) (IR) (IA) (IE) cation (IS)
Soluble dans
Baies du

/ / 1partie d’alcool à 2.2 67.925 70.125 / /


nobilis
laurus

80%

Soluble dans 1 à 3 1à3 30 à 70 36 à 96 / /


[142 , 149,

/ / partie d’alcool à
80%.
Normes

Soluble dans 3 à 10
150]

partie d’alcool à
70%.

A partir de ces valeurs, il en ressort que toutes ces constantes étant influencées par les
conditions édaphiques et climatiques ainsi que les pratiques culturales .
Cependant et malgré ces fluctuations, nous remarquons que les paramètres physico-
chimiques de nos HE sont en accord avec ceux mentionnés par les normes.
Pour les constantes chimiques, par exemple l'indice d'acide donne une idée sur le taux
d'acides libres. Notre étude confirme que cet indice, certes dans les normes, demeure
relativement élevé dans l’huile d’un an ( conservé pendant une année ) par rapport à l’huile
d’une semaine (conservé pendant une semaine ) . Cela peut trouver une explication dans la
dégradation de l'HE (hydrolyse des esters,….) durant sa conservation ( un an ), ce qui est à
terme préjudiciable. Inversement, un IA inférieur ou égale à 3 est une preuve de bonne
conservation de l’essence (faible quantité d'acides libres) c’est le cas de l’HE d’une
semaine .
Un indice de réfraction variant essentiellement avec la teneur en monoterpènes et en
dérivés oxygénés. Une forte teneur en monoterpènes donnera un indice élevé. Pour certains
auteurs, le faible indice de réfraction de l'HE indique sa faible réfraction de la lumière ce
qui pourrait favoriser son utilisation dans les produits cosmétiques. [137]
D’après la méthode d’extraction et l’étude de différent paramètre physico-chimiques de
l’huile essentielle extrait nous pouvons conclure que l’essence des feuilles du laurus
nobilis étudiée à de bonne caractéristique et peut être utilisée comme produit
pharmaceutique.

87 | P a g e
Partie pratique

La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais demeure
non suffisante pour caractériser l'HE. Il sera donc primordial de déterminer le profil
chromatographique de l'essence aromatique.
La détermination de la composition de l’essence de différentes parties du laurus nobilis à
fait l’objet de notre travail afin de caractériser les diverses constituants de ses huiles
essentielles .

Pour cela la méthode d’analyse utilisé est la chromatographie en phase gazeuse.

II.15. Analyse chromatographique d’huile essentielle du laurus nobilis L. :

Les analyses de la composition chimique de nos huiles essentielles du laurus nobilis


ont été réalisées par la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de
masse ( GC-MS).

II.15.a. Chromatographie en phase gazeuse couplée spectromètre de masse :

Cette dernière est réalisée sur un chromatographe en phase gazeuse de type Hewlett-
Packard ( série HP 6890) couplé avec un spectromètre de masse ( série HP 5973 N MS,
ionisation par impact électronique).Cette technique permet de déterminer simultanément le
nombre de constituants de l’essence, leurs concentrations respectives, et leurs ordres de
sorties, qui renseignent sur la volatilité, c'est-à-dire de leurs masses moléculaires, et de
leurs polarités.

Figure 37: Appareil de chromatographie en phase gazeuse couplé masse spectrale.

Cette analyse a été effectuée au laboratoire de chimie organique (chromatographie) au


centre de recherche et de développement (C.R.D.) de SONATRACH (Boumerdes) selon
les conditions opératoires suivantes :

CPG ( Chromatographie en Phase Gazeuse ) :

Colonne capillaire 5% Phényl Méthyl Siloxane possède les caractéristiques suivantes :

- Longueur : 30m

88 | P a g e
Partie pratique

- Diamètre interne : 0,25mm


- Epaisseur du film : 0,25 m

Les conditions opératoires sont :

- La température de l’injecteur splitless : 250°C


- La programmation de température : de 35°C à 250°C à raison de 6°C/mn
- La température de l’interface : 280°C
- Le gaz vecteur : He à 1ml/mn (vitesse linéaire moyenne = 36 cm/sec)
- La quantité injecté : 0,2 μ litre

Spectromètre de masse :

- Les températures de la source et du quadripôle sont fixées respectivement à 230°C


et 150°C ;
- L’énergie d’ionisation 70 eV ;
- Gamme de masse : 35 à 400.

Résultats :

Dans les trois tableaux 50, 53 et 56 les résultats sont classés selon leurs temps de rétention
( c.à.d. selon leur ordre de sortie ).

II.15.a.1. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des feuilles du Laurus


nobilis L. :

Tableau 50 : résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle de feuille du


Laurus nobilis L.

Les composants chimiques Feuilles de laurus nobilis L.


Temps de rétention (mn) Pourcentage ( % )

α-thujène 11.712 0.045


α-pinène 11.932 0.441
camphène 12.424 0.090
Sabinene 13.316 1.259
β-pinène 13.407 0.630
Myrcene 13.878 0.218
∆3-carene ( carene) 14.490 0.068
α-terpinene 14.711 0.121
1,8-cinéol 15.302 10.655
Cis (β) terpineol 16.255 0.267
Linalool 17.449 11.072
Bornéol 18.552 0.070
Iso-bornéol 19.184 0.978
Terpen-4 ol 19.515 1.533

89 | P a g e
Partie pratique

α-terpineol 19.926 3.247


Nerol 20.729 0.357
bornylacétate 22.253 1.000
Terpényl acetate 23.969 11.495
Eugénol 24.129 3.864
β-élémène 24.962 1.992
Eugénol méthyl ether 25.242 9.748
α-gurjunene 25.413 0.599
β-caryophyllene 25.764 5.874
α-guaiene 26.025 0.955
α-caryophyllene 26.466 0.846
cedrene 27.098 1.693
β-elinene 27.218 1.086
τ-elemene 27.409 1.810
–guaiene 27.559 1.434
β-cadinene 27.910 1.478
elémicine 28.422 1.691
spathulenol 29.204 1.835
caryophyllene oxide 29.335 2.218
β-guaiene 30.248 1.004
α-cadinol 30.739 2.190
∑ - 83.863
Autres composés non identifiés - 15.881
Total - 99.744

Figure 38: Chromatogramme des feuilles du laurus nobilis L.

90 | P a g e
Partie pratique

Tableau 51: Composés majoritaires de l’HE des feuilles du laurus nobilis L.

Composés %
1,8-cinéol 10.655
linalool 11.072
α-terpineol 3.247
Terpényl acetate 11.495
Eugénol 3.864
Eugénol méthyl ether 9.748
β-caryophyllene 5.874
caryophyllene oxide 2.218
α-cadinol 2.190

La composition de l'huile essentielle des feuilles du laurus nobilis est exprimée en


pourcentage de divers composés des familles des oxydes terpéniques, des monoterpénols,
des phénols , des monoterpènes , des sesquiterpenes et des esters terpéniques :

Tableau 52: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles de
laurus nobilis L.

Classes Composants chimiques %


biochimiques
oxydes
terpéniques 1,8-cinéole ( 10.655% ) 10.655%

Monoterpénols Linalol ( 11.072%), terpinén-4-ol( 1.533%), alpha- 15.852%


terpinéol ( 3.247%)
Phénols eugénol méthyl éther ( 9.748%), eugénol( 3.864%) 13.612%
sabinène (1.259%), béta-pinène (0.630%), alpha-pinène

(0.441%), myrcène (0.218%), camphène (0.090%), alpha-


Monoterpènes 2.759%
terpinène (0.121%)

Esters acétate d'alpha-terpényle (11.495%), acétate de bornyle


terpéniques (1%) 12.495
Totale identifiées / 55.373

91 | P a g e
Partie pratique

18
16
pourcentage des classes

14
biochimiques (%)

12
10
8
6
4
2
0
oxydes monoterpénols phénols monoterpènes esters
terpéniques terpéniques

Figure 39 : Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles du laurus
nobilis L.

Composition chimique de l'huile essentielle des feuilles du laurus nobilis L. :

Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse -Spectrométrie de


masse de la composition chimique des huiles essentielles des feuilles du laurus nobilis sont
présentés dans le tableau 50, dans lequel les composés identifiés sont listés suivant leur
temps de rétention.
Au total, et parmi les 91 composés (99.744 % ) seulement 35 ont été identifiés ce qui
correspond à un pourcentage de (83.863% ) par rapport à l'ensemble des constituant
isolés.
Le 1,8-cinéol , linalool et terpényl acetate apparaît comme les constituants majoritaires de
l'HE (10.655%, 11.072% , 11.495%), suivi de l’eugénol méthyl éther ( 9.748 %), du β-
caryophyllene (5.874 %), de l’eugénol (3.864 %) et de α-terpinéol (3.247%) .
Biochimiquement parlant, cette HE est composée essentiellement des monoterpénols
(15.85%). Les phénols forment un pool à moins de 14%, suivis des esters terpéniques
(12.49 %). Les oxydes terpéniques sont à un taux assez important (10.65%) mais
constituées uniquement de 1,8-cinéol . Enfin, les composés minoritaires appartiennent à la
famille des monotérpènes (sabinène , béta-pinène , alpha-pinène ….), (Tableau 54 ).
[137,143]

92 | P a g e
Partie pratique

Le profil chromatographique de notre plante montre que son essence possède tous les
constituants nécessaires. En effet, cette HE est marquée par un taux de cineol plus
important .
Autre différence biochimique entre les autres cultivars réside dans la présence ou non de
certains composés caractéristiques .

II.15.a.2. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des tiges du Laurus nobilis


L. :

Tableau 53: Résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle des tiges du


Laurus nobilis L.

Les composants chimiques tiges de laurus nobilis L.


Temps de rétention (mn) Pourcentage ( % )

α-thujène 1.551 3.192


α-pinène 11,732 0,006
camphène 12,243 0,014
sabinene 13,106 0,020
β-pinène 13,196 0,016
α-terpinene 14,51 0,012
1,8-cinéol 14,971 2,188
carene 15,834 0,045
Cis (β) terpineol 16,065 0,040
Linalool 17,108 5,668
Bornéol 18,703 0,295
Iso-bornéol 18,974 0,620
Terpinèn-4 ol 19,294 1,106
α-terpinéol 19,676 2,148
Nerol 20,538 0,210
Bornéol acétate 22,063 0,759
α-terpényl acetate 22,815 0,481
Terpényl acetate 23,708 9,242
Engénol = 1,3,4 eugénol 23,878 2,709
β-élémène 24,741 0,970
Eugénol méthyl ether 25,002 10,62
α-gurjunene 25,222 0,335
β-caryophyllene ,trans caryophyllene 25,513 3,529
α-caryophyllene 26,276 0,728
Cedrene 26,907 1,034

93 | P a g e
Partie pratique

β-guaiene 27,379 1,752


–cadinol 27,600 1,621
β-cadinene 27,740 2,729
Elémicine (elemcin) 28,241 2,635
spathulenol 29,044 2,492
caryophyllene oxide 29,174 5,058
Globulol 29,335 1,369
guaien 30,077 1,240
τ-cadinol 30,308 2,240
α-cadinol 30,579 4,287
α-copaen-11 ol 30,899 2,324
acide hexadecanoic (palmetic) 36,015 2,616
∑ - 76.350
Autres composés non identifiés - 23.103
Total - 99.453

Figure 40:Chromatogramme de l’huile essentielle des tiges du laurier noble (laurus nobilis
L.)

Tableau 54 : Composés majoritaires de l’HE des tiges du laurus nobilis L.

Composés %
α-thujène 3.192
1,8-cinéol 2.188
linalool 5.668
α-terpineol 2.148
Terpényl acetate 9.242
Engénol 2.709
Eugénol méthyl ether 10.62
94 | P a g e
Partie pratique

β-caryophyllene 3.529
β-cadinene 2.729
Elémicine 2.635
Spathulenol 2.492
caryophyllene oxide 5.058
τ-cadinol 2.240
α-cadinol 4.287
α-copaen-11 ol 2.324

Tableau 55: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis.

Classes Composants chimiques %


biochimiques
Oxydes 2.188
terpéniques 1,8-cinéole (2.188 % )

8.922
Linalol ( 5.668%), terpinén-4-ol ( 1,106%), alpha-
Monoterpénols terpinéol

( 2.148%)
Phénols 13.329
eugénol méthyl éther ( 10.62 %), engénol ( 2.709 %)

Monoterpènes 0.068
sabinène (0.02%), béta-pinène (0.016%), alpha-pinène

(0.006%), camphène (0.014 %), alpha-terpinène (0.012%)

Esters 10.482
terpéniques acétate d'alpha-terpényle (0,481%), acétate de bornyle

(0,759%) , térpényle acétate ( 9.242 %)

Totale identifiées / 34.989

95 | P a g e
Partie pratique

14

pourcentage des calsses 12

10
biochimiques ( % )

0
oxydes monoterpénols phénols monoterpènes esters
terpéniques térpéniques

Figure 41: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis .

Composition chimique de l'huile essentielle des tiges du laurus nobilis L. :

Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse-Spectrométrie de


masse de la composition chimique des huiles essentielles des tiges du laurus nobilis sont
présentés dans le tableau 53, dans lequel les composés identifiés sont listés suivant leur
temps de rétention.
Au total, et parmi les 146 composés (99.45%) seulement 38 ont été identifiés ce qui
correspond à un pourcentage de 76.35% par rapport à l'ensemble des constituant isolés.
L’eugénol méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide apparaît comme
les constituants majoritaires de l'HE (10.62%, 9.242%, 5.668% et 5.058%), suivi du α-
cadinol ( 4.287 %), du β-caryophyllene (3.529%), du α-thujène (3.192%) et de 1,8-cinéol
(2.188%) .
Biochimiquement parlant, cette HE est composée essentiellement des phénols (13.32%).
Les esters terpéniques forment un pool de 10.48%, suivis des monoterpénols (8.92 %). Les
oxydes terpéniques sont à un taux faible par rapport à celui des feuilles (10.65%). Enfin,
les composés minoritaires appartiennent à la famille des monotérpènes , qui présente un
taux très faible (0.068%) (Figure 41 ).
En effet, l’HE des tiges du laurier est différentes à l’HE des feuilles du laurier .[137,143]
II.15.a.3. Résultats chromatographiques de l’huile essentielle des fruits du Laurus
nobilis L. :

96 | P a g e
Partie pratique

Tableau 56: Résultats de profil chromatographiques de l’huile essentielle des fruits du


Laurus nobilis L.

Les composants chimiques Fruits ( baies) de laurus nobilis L.


Temps de rétention (mn) Pourcentage ( % )

1,8-cinéol ( Eucalyptol ) 16.209 0.717


linalool 18.227 0.531
4-Terpinèol 20.536 0.295
α-terpinéol ( P-menth-1-en-8-ol ) 20.907 1.029
Bornylacétate 23.336 0.437
α-terpényl acetate 24.885 0.584
α-cubebene 24.988 0.554
β-élémène 26.091 11.462
caryophyllene 26.800 0.848
azulene 27.114 0.338
Eudesma-4(14), 11 diène 28.354 1.118
cubenol 29.120 6.365
Lauric anhydride 30.240 16.424
cedrene 31.360 0.981
cedren-13-ol 32.092 15.057
(E)-β-ocimene 32.566 21.838
Lanceol, cis 33.812 2.664
Caryophyllene oxide 34.201 1.049
Spathulenol 34.28 1.290
Hexadecanoic acide 37.299 1.194
Acide oleique 40.236 0.519
∑ - 85.294
Autres composés non identifiés - 14.704
Total - 99.998

Figure 42:Chromatogramme de l’huile essentielle des fruits du laurier noble (laurus nobilis
L.)

97 | P a g e
Partie pratique

Tableau 57 : Composés majoritaires de l’HE des fruits du laurus nobilis L.

Composés %
β-élémène 11.462
Eudesma-4(14), 11 diène 1.118
cubenol 6.365
Lauric anhydride 16.424
cedren-13-ol 15.057
(E)-β-ocimene 21.838
Lanceol, cis 2.664
Spathulenol 1.290

Tableau 58: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis.

Classes Composants chimiques %


biochimiques

Oxydes 1,8-cinéole (0.717 % ), Lanceol, cis ( 2.664 % ) ,


terpéniques 4.671
Spathulenol ( 1.290 % ).

Linalol ( 0.531%), 4-terpinéol ( 0.295%), alpha-terpinéol


Monoterpénols 1.855
( P-menth-1-en-8-ol ) ( 1.029%).

Phénols Eugénol méthyl éther ( 0%), engénol ( 0 %). 0

Sesquiterpénéols Cubenol ( 6.365 % ). 6.365

Sesquiterpènes β-élémène ( 11.462 % ).


11.462

sabinène (0%), béta-pinène (0%), alpha-pinène (0%),


Monoterpènes 36.895
camphène (0%), alpha-terpinène (0%), (E)-β-ocimene

( 21.838 %) , cedren-13-ol ( 15.057 % ).

Esters alpha-terpénylacétate (0.584%), acétate de bornyle


terpéniques 1.021
(0.437%).

Totale identifiées / 62.269

98 | P a g e
Partie pratique

40
pourcentage des calsses biochimiques ( % )

35
30
25
20
15
10
5
0

Figure 43: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis .

Composition chimique de l'huile essentielle des fruits du laurus nobilis L. :

Les résultats de l’analyse par Chromatographie en phase gazeuse-Spectrométrie de


masse de la composition chimique de l’huile essentielle des fruits du laurus nobilis sont
présentés dans le tableau 56, dans lequel les composés identifiés sont listés suivant leur
temps de rétention. Au total, et parmi les 46 composés (99.99 %) seulement 24 ont été
identifiés ce qui correspond à un pourcentage de 85.29 % par rapport à l'ensemble des
constituant isolés.
Le (E)-β-ocimene, Lauric anhydride , cedren-13-ol , β-élémène apparaît comme les
constituants majoritaires de l'HE des fruits du laurier (21.83%, 16.424% ,15.057% et
11.462% ), suivi du Cubenol ( 6.365 % ), du Lanceol (2.664%), du Spathulenol (1.290%).
Le 1,8-cinéol ( ou eucalyptol ) existe aussi dans les fruits du laurus nobilis mais en quantité
très faible (0.717 %) par rapport a celle des feuilles et des tiges de la même plante.
Biochimiquement parlant, cette l’HE est composée essentiellement des Monoterpènes
(36.89%) et des Sesquitérpènes (11.46%). Les Sesquiterpénéols forment un pool de
(6.36%), suivis des oxydes terpéniques (4.67%).
Les Monoterpénols (1.85%), les Esters terpéniques (1.02%) sont à un taux faible (les
composés minoritaires) par rapport à celui des feuilles et des tiges. (Figure 43 ).

99 | P a g e
Partie pratique

En effet, l’HE des fruits du laurier est différentes totalement à l’HE des feuilles et des
tiges du laurier noble .
II.15.a.4. Résultats chromatographiques bibliographique de l’huile essentielle des fleurs
du Laurus nobilis L. :

Tableau 59: Résultats bibliographique de profil chromatographiques de l’huile essentielle


des fleurs du Laurus nobilis L.

Les composants chimiques Pourcentage ( % ) en composants chimiques


dans les fleurs du laurus nobilis L.
Tricyclene t
Thujone 0.2
a-Pinene 5.1
Camphene 2.4
Sabinene 1.7
b-Pinene 3.7
Myrcene 0.6
a-Phellandrene 0.1
D3-Carene 0.4
ρ-Cymene –
Limonene t
1,8-Cineole 8.8
(Z )-b-Ocimene 0.3
Phenylacetaldehyde –
(E)-b-Ocimene 2.7
(E)-Sabinene hydrate t
Linalool –
Pinocarvone –
Borneol 0.4
a-Terpineol t
Linalyl acetate –
Bornyl acetate 2.1
2-Undecanone –
d-Terpinyl acetate 0.3
a-Terpinyl acetate 1.8
Eugenol –
a-Ylangene 0.9
a-Copaene 0.3
iso-b-Elemene 0.4
b-Cubebene –
b-Elemene 5.4
Eugenol methyl ether –
(E)-b-Caryophyllene 5.1
(E)-Isoeugenol 0.5

100 | P a g e
Partie pratique

a-Humulene 0.5
Alloaromadendrene –
(E )-b-Farnesene 0.1
γ-Muurolene –
GermacreneD 2.4
b-Selinene 0.3
Bicyclogermacrene 2.2
a-Farnesene 1.3
Germacrene A 1.1
γ-Cadinene –
d-Cadinene t
Ni(sesquiterpene) 3.4
Elemol –
Germrene D-4-ol –
a-Eudesmol 11.8
Costunolide –

t : trace .

Diagramme montrant la composition des


differentes parties de laurus nobilis avec leur
pourcentage
25
pourcentage des composants ( % )

20

15

10

5
Feuilles
0
Tiges
β-caryophyllene ,trans caryophyllene

caryophyllene oxide
Eugénol méthyl ether

acide hexadecanoic (palmetic)


Elémicine (elemcin)
α-terpényl acetate

cubenol
cedren-13-ol
1,8-cinéol

Nerol
Bornéol
camphène

azulene
Cedrene

guaien
Terpinèn-4 ol
α-thujène

α-cadinol
–cadinol

Lanceol, cis
Engénol
β-pinène

Cis (β) terpineol

fruits

Figure 44: Diagramme montrant la composition des différentes parties de laurus nobilis
avec leur pourcentage (%).

101 | P a g e
Partie pratique

II.16.Formulations des pommades :

II.16. A. Contrôle de qualité de la matière première :

II.16. A.1. contrôle de qualité des excipients :

Avant de préparer (formuler) une pommade, le contrôle de sa matière première


s’impose. [139, 151]

1. Vaseline :

Dénomination commune internationale : vaseline officinale.

Composition : c’est un mélange d’hydrocarbure qu’on obtient par raffinage de diverses


fractions lourdes du pétrole pour augmenter sa consistance, on peut ajouter des petites
quantités des paraffines.

Aspect : substance blanchâtre d’une consistance analogue à celle de l’axonge, translucide


en couches minces et légèrement fluorescente quand elle est fondue, insipide ( qui n’a
aucune saveur ), incolore et dégage une faible odeur lors de chauffage.

Solubilité :

Tableau 60: Tests de solubilité de la vaseline.

Chloroforme Soluble
0,5 parties de benzene Soluble
L’eau Insoluble
L’acétone Soluble

Identification :

Tableau 61 : Les différents contrôles sur la vaseline.

Norme Valeur
Densité D20 0,830 à 0,900 0,832
Tf 38 à 50°C 43°C

Acidité :

A 10 g de vaseline, ajouter 20 ml d’eau bouillante et agiter rigoureusement pendant une


minute, refroidir et décanter. A 10 ml de la phase aqueuse, ajouter 0,1 ml de la solution de
phénolphtaléine, la solution est incolore, le virage au rose de l’indicateur ne nécessite plus
de 1ml de NaOH à 0,01 M.

Volume de NaOH utilisé = 0,1ml ……………………………………………….( conforme)

2. Menthol :

Formule brute : C10H20O

102 | P a g e
Partie pratique

Appellation chimique : isopropyl-2-méthyl-5-cyclohexanol

Caractères :

poudre cristalline, libre ou agglomérée ou cristaux prismatiques ou acicules, incolore,


brillants, d’odeur forte caractéristique rappelant la menthe pratiquement insoluble dans
l’eau.

Solubilité :

Tableau 62: Tests de solubilité de menthol.

L’eau Difficilement soluble


L’acétone Très soluble
Benzène Très soluble
Chloroforme Très soluble
L’éther du pétrole Soluble

Identification :

Tableau 63 : Les différents contrôles effectués sur le menthol.

Norme Résultat
Pouvoir rotatoire -48 à -50 -50
Point de fusion 41 à 45°C 44°C

Essais :

Solution « s » :Dissoudre 2,5 g de menthol dans 10ml d’alcool et compléter à 25ml avec le
même solvant.

Aspecte de la solution : La solution est limpide et incolore.

Acidité ou alcalinité :

Dissoudre 1,0 g de menthol dans l’alcool et compléter à 10ml avec le même solvant,
ajouter 0,1 ml de solution de phénolphtaléine. La solution est incolore, le virage au rose de
l’indicateur nécessite quelques gouttes de NaOH à 0,01 M.

Volume de NaOH utilisé = 0,3 ml ……………………………………………...( conforme )

Résidu à l’évaporation :

Evaporer au bain-marie 2 g de menthol puis chauffer à l’étuve 100-105°c pendant une


heure.

Les masses du résidu ne sont pas supérieures à 0,1 mg ( 0,05% ).

Masse de résidu = 0,08 mg ……………………………………………………..( conforme )

103 | P a g e
Partie pratique

3. Salicylate de méthyle :

Caractères :

Aspect : liquide incolore ou faiblement jaune ………………………………….( conforme )

Solubilité : très peu soluble dans l’eau , miscible à l’alcool, aux huiles grasses et aux huiles
essentielles……………………………………………………………………... ( conforme )

Identification :

A/ le point de fusion : 156°C à 161°C ………………………………………….. ( 159,6°C )

B/ réaction de coloration : Pour 10 ml d'une solution saturée ajouter 0,05 ml de solution de


chlorure ferrique . Il se développe une coloration violette ……………….....…( conforme )

Essai :

Aspect de la solution : la solution est limpide et n’est pas plus fortement coloré que la
solution témoin ………………………. …………………………………….….( conforme )

Acidité : < 0,4 ml de NaOH 0,1M………………………………………………. ( 0,00 ml )

Densité : 1,180 à 1,186 …………………………………………………………….( 1,183 )

Indice de réfraction : 1.535 à 1.538…………………………………………….......(1.5351)

Dosage :

titrimétrie -NaOH 0,1 M 99,0% à 100,5% ……………………………………..( 99,15% )

4. Analyse du camphre :
Caractères :

Poudre cristalline blanche, très volatile même à température ambiante.

Solubilité :

Tableau 64: tests de solubilité de camphre.

L’eau peu soluble conforme


Alcool très soluble conforme
Ether et éther de pétrole très soluble conforme
Huiles grasses facilement soluble conforme
Glycérol soluble conforme

Identification :

Point de fusion : Le point de fusion du camphre doit varier dans l’intervalle : 174-
180°c.

104 | P a g e
Partie pratique

Point de fusion = 175°c………………………………………………..……....( conforme ).

Point de fusion des cristaux du camphre : Le point de fusion des cristaux doit varier dans
l’intervalle : 118-121°c.

Point de fusion = 119,8°c…………………………………………………...…( conforme ).

Angle de rotation optique : On le détermine sur la solution « s », il doit varier entre + 0,15°
et -0,15°.

Angle de rotation optique = 0°……………………………………………...…...(conforme).

Essais :

Solution « s » : Dissoudre 2 g de camphre dans 10 ml puis compléter à 25 ml avec le même


solvant.

Aspecte de la solution « s » : La solution « s » est limpide et incolore.

Acidité : Dissoudre 10 g de camphre dans 10 ml d’alcool, ajouter 0,1 ml de solution de


phénophtaléine, la solution est alors incolore, titrer par l’hydroxyde de sodium à 0,1N.

Volume de NaOH à 0,1N = 1,8 ml …………………………………………....( conforme ).

5. Analyse de lanoline :

Composition :

C’est une substance cireuse purifiée et anhydre obtenue à partir de la laine du mouton. Elle
peut contenir au maximum 200 parties par million de butylhydroxytoluène.

Aspect :

Substance jaune pale de consistance onctueuse et d’odeur caractéristique fondue.

La grasse de laine est un liquide jaune limpide.

Solubilité:

Figure 65: Tests de solubilité de lanoline.

L’eau pratiquement insoluble conforme


Chloroforme soluble conforme
L’éther et éther de pétrole soluble conforme

Identification :

Densité : La densité de lanoline est de 0,932 à 0,945 à 15°c.

Point de fusion : Le point de fusion de lanoline est de 238°c.

Point de fusion = 238°c……………………………………………………….( conforme).


105 | P a g e
Partie pratique

Indice de réfraction : L’indice de réfraction de la lanoline varie entre 1,478 et 1,482.

6.Analyse de lidocaïne:

Solubilité :

Très soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent).

Identification :

Pour environ 5 mg, ajoutez 0,5 ml d'acide nitrique fumant R. Evaporer à sec sur un bain-
marie, cool, et dissoudre le résidu dans 5 ml d'acétone R. Ajoutez 0,2 ml d'hydroxyde de
potassium alcoolique solution R. Une couleur verte se développe.

Essai :

pH 4,0 à 5,5.

Stockage :

Protégé de la lumière.

7.Analyse de l’acide salicylique :

2-Hydroxybenzenecarboxylic acide.

Apparence :

Blanche ou presque blanche, poudre cristalline blanche ou incolore, cristaux aciculaires.

Solubilité :

Légèrement soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent), peu
soluble dans le chlorure de méthylène.

Identification :

Dissolvez environ 30 mg dans 5 ml de 0,05 M d'hydroxyde de sodium, de neutraliser, si


nécessaire ml et diluer avec de l'eau à 20 R. 1 ml de la solution donne la réaction (a) des
salicylates.

Essais :

Dissoudre 2,5 g dans 50 ml d'eau R bouillante distillée, refroidir et filtrez.

Aspect de la solution :

La solution est limpide et incolore.

106 | P a g e
Partie pratique

Stockage : Protégé de la lumière.

8.Analyse de l’oxyde de zinc :

Apparence :

Doux, blanc ou légèrement jaunâtre-blanc, poudre amorphe, exempte de particules


graveleuses.

Solubilité :

Pratiquement insoluble dans l'eau et l'éthanol (96 pour cent).

Identification :

Dissolvez 0,1 g dans 1,5 ml de acide chlorhydrique dilué et complétez à 5 ml avec de l'eau
. La solution donne la réaction du zinc.

Essai :

Alcalinité :

Agitez 1,0 g avec 10 ml d'eau bouillante . Ajoutez 0,1 ml de solution de phénolphtaléine et


filtrez.
Si le filtrat est rouge, pas plus de 0,3 ml de 0,1 M d'acide chlorhydrique est nécessaire pour
changer la couleur de l'indicateur.

II.16. A.2. Contrôle de qualité de l’huile essentielle des feuilles du laurus


nobilis :
L’analyse a été faite dans la première partie de ce travail , nous avons constaté que cette
huile essentielle peut être utilisé pour la formulation des préparas médicamenteux.

Les différents contrôles effectuées sur les excipients et l’huile essentielle montre qu’ils
sont conformes aux normes de la pharmacopée européenne ce qui permet leurs utilisation
dans une formulation pharmaceutique.

Dans cette partie nous avons formulé quelques pommades y compris celle qui peut avoir
une propriété décongestionnante destinée a dégager les voies respiratoires, grâce aux
propriétés décongestionnantes des voies respiratoires du 1,8-cinéol composant majoritaire
de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis .

Nous avons opté l’utilisation de la vaseline en grande proportion comme excipient de


cette pommade qui à comme rôle la fixation des principes actifs, on a aussi utilisé la
lanoline qui à une importance, car elle aide l’absorption des principes actifs en les
véhiculant jusqu’au sang ( circulation sanguine ).

107 | P a g e
Partie pratique

II.16. B. Pommade décongestionnante des voies respiratoires :

Tableau 66: Formulation de pommade décongestionnant [152].

Constituants Essai I Essai II Essai III

% g % g % g
Hydrochlorure de
lidocaïne (anesthésine) 0 0 0,3 0,3 0,3 0,3

Solution de hydrochlorure
d’adrénaline 0 0 x x x x

Vaseline blanche 55 55 53 53 53 53

Lanoline 27 27 24 24 24 24

Huile de vaseline 13 13 10 10 10 10

Huile essentielle des feuilles 0 0 x x 2x 2x


de laurier noble

Camphre 4 4 3 3 3 3

Menthe 1 1 1 1 1 1

Huile essentielle 0 0 x x x x
d’eucalyptus

Salicylate de méthyle 0 0 x x x x

Bentonite 0 0 0,5 0,5 0,5 0,5


ZnO 0 0 0,5 0,5 0,5 0,5

Mode opératoire :

Dans un creuset en porcelaine, on pulvérise en poudre fine l’ensemble de menthol,


camphre, bentonite et l’oxyde de Zn.

Faire liquéfier une quantité de vaseline sur la plaque chauffante. Incorporer


successivement le menthol jusqu’à solubilisation puis le camphre, la bentonite, l’oxyde de
Zn et on laisse refroidir.

108 | P a g e
Partie pratique

Figure 45: Mélange vaseline, camphre, bentonite et l’oxyde de Zn.

Mettre dans un mortier lanoline puis la solution d’hydrochlorure d’adrénaline et le


salicylate de méthyle, mélanger jusqu’à homogénéisation, on ajoute le mélange vaseline
additionné aux autre constituants.

Figure 46: Pommade formulée.

Mélanger le tout puis ajouter de l’anesthésie( lidocaine ). Après avoir mélangé on


obtient un mélange uniforme, ensuite en y ajoute l’huile de vaseline. Une fois que le
mélange commence à refroidir, on ajoute l’huile essentielle de laurier et celle de menthe
polio et d’eucalyptus en dernier car c’est des produits très volatils, on arrive à avoir un
mélange homogène en triturant à l’aide du pilon l’ensemble principes actifs et excipients.

II.16. C. Pommade antiseptique :

Tableau 67: Formulation de pommade antiseptique.

Constituants Essai ( % )
Lidocaïne (Anesthésine) 1
Huile essentielle de laurus nobilis x
Acide salicylique 1
Tetraborate de Na 1
Streptocide 0,5
Vaseline blanche 60
lanoline 30
Menthe 1,2
Camphre x
Salicylate de méthyle 3

Mode opératoire :

109 | P a g e
Partie pratique

Dans un cristallisatoire, faire liquéfier une quantité de vaseline sur la plaque chauffante.
Incorporer successivement le menthol jusqu’à solubilisation, puis le streptocide, le
tetraborate de Na ,l’acide salicylique et enfin le camphre et on laisse refroidir.

Figure 47: Mélange vaseline, menthol et camphre .

Mettre dans un mortier lanoline puis le salicylate de méthyle, mélanger jusqu’à


homogénéisation, on ajoute le mélange vaseline additionné aux autre constituants.

Figure 48 : Mélange lanoline et le salicylate de méthyle.

Mélanger le tout puis ajouter de l’anésthésine. une fois que le mélange commence à
refroidir, on ajoute l’huile essentielle de laurier en dernier.

Figure 49: Pommade antiseptique formulée .

Mettre chaque pommade dans un récipient hermétique et conserver ces derniers dans un
endroit frais.

110 | P a g e
Partie pratique

II.16. D. Contrôles du produit fini :

II.16. D. 1. Contrôle de la pommade décongestionnante des voies respiratoires :

II.16. D. 1.a. Examen des caractéristiques macroscopiques :

L’examen des caractéristiques macroscopique constitue la première approche de la


qualité de la préparation et doit faire l’objet d’une étude approfondie de la part du
fabriquant, afin de lui permettre l’observation de toute anomalie. En effet, des
modifications perçues au niveau des caractéristiques visuelles, olfactives, sont des
indicateurs possibles d’une dégradation de causes diverses ( oxydation, variation de
pH).[152]

Figure 50: pommade décongestionnante formulée.

a). Essai galéniques :

Aspect : assez épaisse sans présence de grumeaux à l’étalement.

Couleur : jaunâtre à jaune blanchâtre .

Odeur : arome de laurier noble et une odeur camphrée .

b). Homogénéité :

Macroscopiquement, nous vérifions l’homogénéité de chaque pate en étalant une couche


mince sur une surface plane d’une feuille qu’on plie, que nous ouvrons et sur laquelle nous
effectuons l’étalement d’une deuxième couche. Il est vérifié à l’œil nu l’absence des
agrégats et la bonne répartition des produits. Dans le cas de nos pommades nous ne voyons
aucune présence de grumeaux, donc elles sont parfaitement homogènes.

111 | P a g e
Partie pratique

Figure 51: pommade décongestionnante étalée .

c). Mesure du pH :

Le pH a été déterminé en mesurant celui d’une dilution au dixième de pommade dans de


l’eau distillée chaude.

Figure 52 : mesure de pH de la pommade décongestionnante.

Le pH de la pommade antirhume à base d’HE du laurus nobilis est égal à 6,88.

D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.

d). La viscosité :

la viscosité représente la résistance qu’opposent les molécules d’un liquide à une force
tendant à les déplacer par glissement.

Pour caractériser physiquement un produit , on détermine sa courbe d’écoulement.

On appelle équation rhéologique d’état d’une substance, la relation qui existe entre la
déformation de cisaillement « ε » et la contrainte de cisaillement « σ ». Cette relation est
notée : ε = f (σ ).

Les courbes qui traduisent graphiquement l’équation rhéologique d’état sont appelées
rhéogramme.

La viscosité est définie par la relation : η= σ / v

112 | P a g e
Partie pratique

Avec :

σ : La contrainte de cisaillement.

v : la vitesse de cisaillement correspondante.

Elle est réalisée par la méthode sur l’appareil à mobile tournant, cette méthode est utilisée
quelle que soit la consistance de l’émulsion.

Elle est basée sur la mesure des forces de cisaillement, et permet de mesurer la viscosité
dynamique exprimée en milli pascal / seconde.

Condition opératoires :

L’essai est réalisé dans un rhéomètre AR2000 avec géomètre cône-plan

Con : de diamètre F=6cm.

Nom : CSR 1

Nombre d’intervalles : 4

Application : RHEOPLUS/32 V3.21 21002984-33025

Dispositif : MCR301 SN80133964 ; FW3.00 ; Slot2

Système de mesure : CP25-2-SN9301 ; d=0.053 mm

Accessoires : TU1= P-PTD200-SN80106708

Nombre de points de données : 1

Réglage de l’heure : 1 Meas. Pts.

Meas. Pts. Durée : 1min

Taux de cisaillement d ( gamma )/ dt = 1/s à température T= 20°C.

La courbe écoulement : t=0…..1000s-1 et chaque seconde 1 point.

Les résultats obtenus sont relevés sur le tableau 68 et sont représentés dans les figures
53 ;54 :

Tableau 68: Valeur du taux de cisaillement, de la contrainte de cisaillement et de viscosité


de la pommade.

Meas. Shear Shear Viscosity Speed Torque


Pts. Rate [1/s] Stress [Pa] [Pa.s] [1 / min] [μ Nm]
1 0.1 97 970 0.0334 397
2 0.134 95.6 713 0.0449 391
3 0.18 97.3 541 0.0602 398
4 0.241 101 418 0 ?0807 412

113 | P a g e
Partie pratique

5 0.324 105 324 0.108 428


6 0.434 108 249 0.145 442
7 0.583 111 191 0.195 456
8 0.781 115 147 0.261 471
9 1.05 119 114 0.351 487
10 1.41 124 88.1 0.47 506
11 1.89 129 68.6 0.631 529
12 2.53 137 54 0.846 558
13 3.39 145 42.6 1.13 591
14 4.55 155 34 1.52 633
15 6.11 166 27.1 2.04 677
16 8.19 178 21.7 2.74 728
17 11 193 17.6 3.67 788
18 14.7 215 14.6 4.93 878
19 19.8 246 12.4 6.61 1000
20 26.5 282 10.6 8.87 1150
21 35.6 326 9.16 11.9 1330
22 47.7 383 8.03 16 1570
23 64 453 7.08 21.4 1850
24 85.8 529 6.16 28.7 2160
25 115 583 5.06 38.5 2380
26 154 541 4.15 51.7 2620
27 207 651 3.14 69.3 2660
28 278 677 2.44 92.9 2770
29 373 700 2.13 125 3250
30 500 705 1.87 167 3820

Viscosité en fonction de taux de cisaillement


800

700

600
viscosité [Pa.s]

500

400

300

200

100
0
0 100 200 300 400 500 600
taux de cisaillement [1/s]

Figure 53: Courbe représente la viscosité en fonction de taux de cisaillement.

114 | P a g e
Partie pratique

Contrainte de cisaillement en fonction de


temps de cisaillement
800
Contrainte de cisaillement [Pa ]

700
600
500
400
300
200
100
0
0 100 200 300 400 500 600
Taux de cisaillement [1/S]

Figure 54: Diagramme représentant la contrainte de cisaillement en fonction de taux de


cisaillement.

La rhéologie est la science des écoulements de la matière. La mesure de la viscosité d’un


fluide en fait partie. Le graphe indiquant la viscosité en fonction du taux de cisaillement
montre que la pommade étudiée est du type dit « rhéo-fluidifiant » car sa viscosité diminue
lorsque le taux de cisaillement augmente ( Figure 53). C’est le cas des bonnes pommades
qui sont fluides à l’étalement mais plus visqueuses au toucher, évitant ainsi les
« coulures ». Les molécules, sous l’effet de la vitesse de cisaillement ont tendance à
s’aligner progressivement le long des couches ce qui favorise un glissement relatif.

Une seconde interprétation consiste à envisager une modification de la structure du


matériau sous l’effet du gradient de vitesse ( déstructuration par rupture de liaison de type
Van der Waals, défloculation des particules ….).

Cependant, ce fluide est dit à seuil, car il faut dépasser un seuil en contrainte σ0 avant qu’il
ne puisse s’écouler .Par définition, un seuil d’écoulement décrit la contrainte requise pour
produire l’écoulement d’une substance plastique.

Le seuil d’écoulement sert à déterminer l’épaisseur d’une couche de revêtement et à


s’assurer de la stabilité au stockage.

Donc cette pommade est un fluide plastique, ce qui signifie qu’elle s’écoule à partir d’une
certaine valeur de contrainte σ0 . Au repos, elle possède une structure tridimensionnelle
rigide ( particules emboitées ).

Les résultats obtenus sont conformes, et la nature de la pommade est un fluide non
Newtonien pseudo plastique .

115 | P a g e
Partie pratique

II.16. D. 2. Contrôle de la pommade antiseptique :

II.16. D. 2.a. Examen des caractéristiques macroscopiques :

Figure 55: Pommade antiseptique formulée.

a). Essai galéniques :

Aspect : assez épaisse sans présence de grumeaux à l’étalement.

Couleur : jaunâtre.

Odeur : arome de laurier noble et une odeur camphrée .

b). Homogénéité :

Dans le cas de la pommade antiseptique nous ne voyons aucune présence de grumeaux,


donc elle est parfaitement homogène.

Figure 56: Pommade antiseptique étalée .

116 | P a g e
Partie pratique

c). Mesure du pH :

Figure 57 : Mesure de pH de la pommade antiseptique.

Le pH de la pommade antiseptique à base d’HE du laurus nobilis est égal à 5,63.

D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.

Paramètre du contrôle de qualité :

Les caractères macroscopiques ( couleur et la consistance ), l’homogénéité et le pH des


pommades sont reportés dans le tableau 69 :

Tableau 69 : Caractères macroscopiques, homogénéité et pH des pommades.

Paramètres Pommade antirhume Pommade antiseptique

Couleur Jaunâtre à jaune blanchâtre Jaunâtre

Homogénéité Homogène Homogène

Consistance Molle assez épaisse Molle assez épaisse

pH 6,88 5,63

117 | P a g e
Partie pratique

II.17. Essai de la tolérance locale :

La réaction cutané érythème et œdème est évaluée et quantifiée sur la zone préalablement
scarifiée ou intacte. Selon l’échelle numérique proposé par le « Journal Officiel de la
République Française » . [153]

Test de tolérance :

L’application, sur la peau saine ou lésée, de produits chimiques, est susceptible de


provoquer chez certains sujets des irritations d’intensité variable.

Les tests de tolérance locale cutanée ont pour but de prédire, à partir de la connaissance de
la toxicité sur un organisme animal vivant, le risque toxicologique chez l’homme.

Le test de tolérance a été réalisé à l’animalerie du Laboratoire Nationale De Contrôle Des


Produits Pharmaceutiques ( L.N.C.P.P. à Dely brahim, Alger), Laboratoire de
pharmacologie et de toxicologie.

Principe :

L’indice d’irritation primaire cutanée de nos produits a été déterminé chez le lapin selon la
méthode de référence publiée au Journal Officiel de la République Française du 24 octobre
1984 .

La méthode est réalisée sur 6 (six) lapins de souche néozélandaise, le dos de chaque animal
est divisé en deux zones, après élimination des poils. Sur l’une des zones, le produit est
appliqué directement, sur l’autre zone, il est appliqué après scarification. Le produit est
maintenu en contact avec la peau par un pansement pendant 24 heures.

Des lectures sont faites une heure après enlèvement du pansement, et 24 à 72 heures après
l’application du produit.

Le système de cotation des phénomènes observés permet de dégager par un calcul un


indice d’irritation primaire cutanée ( IP ) pour classer le produits en 4 catégories.

L’essai est effectué dans un lieu tranquille ou aucune perturbation ne risque d’exciter les
animaux.

Protocole expérimental :

A). Préparation des animaux :

En premier lieu, la veille de jour d’application du produit, le dos et les flancs de 6 lapins
ont été tondus à l’aide d’une tendeuse électrique.

118 | P a g e
Partie pratique

Figure 58: Lapin tondu au niveau du dos et des flancs.

B). Application de la pommade :

Le jour de l’essai ( Vingt-quatre heures plus tard), on effectue sur le flanc droit de
chaque animal à l’aide d’une lame de scalpel stérile, trois scarifications parallèles de
l’épiderme de 3cm de long espacées d’environ 0,5 cm, le flanc gauche restant tel quel, les
scarifications doivent abraser la cornée sans provoquer de saignement.

Figure 59: Zone scarifiée .

Une quantité de produit ( pommade ) équivalente à 0,5 g a été appliquée sur chacun des
flancs ( scarifié et normale ) des animaux sous pansement semi-occlusif. La gaze ainsi
imbibée est recouverte par le para film et le para film est recouvert d’une bande adhésive.

Les lapins sont remis dans leurs cages. Chaque produit formulé a été laissé en contact avec
la peau durant 24 heures.

Figure 60 : Produit appliqué.

119 | P a g e
Partie pratique

+ =
Figure 61: Application du produit.

C). Observation :

Vingt quatre heures plus tard, les pansements sont ôtés , les résultats sont lus au bout
d’une demi heure par au moins deux personne distinctes, une seconde lecture est faite 72
heures après l’application du produit. L’irritation cutanée a été appréciée aux sites
d’application ( scarifié et non scarifié ) à l’aide d’une échelle d’évaluation numérique
permettant de coter les érythèmes et la formation d’œdème.

L’évaluation porte sur la formation de l’érythème et de l’œdème qui sont notés suivant une
échelle numérique :

Tableau 70: Evaluation de l’œdème.

Absence d’œdème 0
Œdème très léger ( à peine visible ) 1
Léger œdème ( gonflement apparent ) 2
Œdème moyen ( épaisseur 1mm ) 3
Œdème grave ( épaisseur supérieur à 1mm ) 4

Tableau 71: Echelle numérique de l’érythème et la formation d’escarres.

Absence d’érythème 0
Léger érythème ( à peine visible ) 1
Erythème bien visible 2
Erythème modéré à important 3
Erythème grave ( rouge pourpre ) 4

D). Expression des résultats :

Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire :

L’indice d’irritation primaire cutanée ( IP ) a été déterminé en additionnant les chiffres


obtenus pour l’érythème et l’œdème, à chaque temps de lecture ( 24 et 72 heures après
l’application ), sur les 12 zones d’application ( 1 zone scarifiée + 1 zone intacte ) x 6
animaux puis en divisant le total par 24 :

120 | P a g e
Partie pratique
∑ , ∑ ,

Ou

IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24

Avec :

24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x nombre de


type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )

E : érythème

Œ: œdème

La moyenne ainsi obtenue représente l’IP, celui-ci permet de classer le produit (pommade)
en quatre types de réponses :

- Action non irritante, IP inférieur à 0,5 : IP < 0,5 ;


- Action légèrement irritante, IP compris entre 0,5 et 2 : 0,5< IP < 2 ;
- Action moyennement irritante (irritante), IP compris entre 2 et 5 : 2< IP < 5 ;
- Action sévèrement irritante, IP compris entre 5 et 8 : 5 < IP < 8.

Figure 62: Résultat de l’indice d’irritation primaire cutanée pour la pommade


décongestionnante.

Résultats :
1. Détermination de l’indice d’irritation primaire cutanée de la pommade antigrippe
( anti-rhume , décongestionnante) :

Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :

121 | P a g e
Partie pratique

Tableau 72: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai I ) :

N° De Poids Flanc Traité Flanc Témoin


Lapin De Œdème Erythème Œdème Erythème
Lapin J1(24 J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h)
h)
1 3,78 0 0 0 0 0 0 0 0
2 2,92 0 0 0 0 0 0 0 0
3 3,30 0 0 0 0 0 0 0 0
4 4,50 0 0 0 0 0 0 0 0
5 3,25 0 0 0 0 0 0 0 0
6 3,84 0 0 0 0 0 0 0 0

D’après le tableau , il est noté une absence totale soit d’œdèmes ou d’érythème durant
toute la période de l’expérimentation.

Tableau 73 : Evaluation des réactions cutanées.

N° De Lapin Œdème + Erythème Œdème + Erythème


24 h + 72 h 24 h + 72 h
Flanc Traité Flanc Témoin
1 0 0
2 0 0
3 0 0
4 0 0
5 0 0
6 0 0
Valeurs cumulées 0 0

Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :

IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24

Avec :

24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x nombre de


type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )

Donc :

IP = 0 / 24 = 0

IP = 0

Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0 ) est inférieur à 0,5 ce qui
nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai I ) à base de HE de laurus
nobilis est non irritante pour la peau.

122 | P a g e
Partie pratique

Tableau 74: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai II ) :

N° De Poids Flanc Traité Flanc Témoin


Lapin De Œdème Erythème Œdème Erythème
Lapin J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h)
1 3,78 0 0 0 0 0 0 0 0
2 2,92 0 0 0 0 0 0 0 1
3 3,30 0 0 0 0 0 0 0 0
4 4,50 0 0 0 0 0 0 0 1
5 3,25 0 0 0 0 0 0 0 0
6 3,84 0 0 0 0 0 0 0 0

D’après le tableau 74 , il est noté une absence totale d’œdèmes et quelques valeurs
d’érythème qui apparait chez certains lapin après les 72 heures de la période
d’expérimentation.

Tableau 75 : Evaluation des réactions cutanées.

N° De Lapin Œdème + Erythème Œdème + Erythème


24 h + 72 h 24 h + 72 h
Flanc Traité Flanc Témoin
1 0 0
2 0 1
3 0 0
4 0 1
5 0 0
6 0 0
Valeurs cumulées 0 2

Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :

IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24

Avec :

24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x nombre de


type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )

Donc :

IP = 2 / 24 = 0,083

IP = 0,083

Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,083 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai II ) à base de HE de laurus

123 | P a g e
Partie pratique

nobilis est non irritante pour la peau , donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation
cutanée humaine.

Tableau 76: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai III ) :

N° Poids Flanc Traité Flanc Témoin


De De Œdème Erythème Œdème Erythème
Lapin Lapin J1(24 J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h)
h)
1 3,78 0 0 1 0 0 0 1 0
2 2,92 0 0 1 1 0 0 1 1
3 3,30 0 0 1 0 0 0 1 0
4 4,50 0 0 2 1 0 0 2 1
5 3,25 0 0 1 0 0 0 1 0
6 3,84 0 0 1 0 0 0 0 0

D’après le tableau 76 ,les phénomènes observés sont uniquement les érythèmes avec un
degré variable . Il est noté une absence totale d’œdèmes d’érythème durant toute la
période de l’expérimentation.

Tableau 77: Evaluation des réactions cutanées.

N° De Lapin Œdème + Erythème Œdème + Erythème


24 h + 72 h 24 h + 72 h
Flanc Traité Flanc Témoin
1 1 1
2 2 2
3 1 1
4 3 3
5 1 1
6 1 0
Valeurs cumulées 9 8

Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :

IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24

Avec : 24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x


nombre de type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )

Donc :

IP = 17 / 24 = 0,708

IP = 0,708

124 | P a g e
Partie pratique

Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire IP ( IP = 0,708 ) est compris entre 0,5
et 2 : 0,5 < IP < 2 ; ce qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai III )
à base de l’HE de laurus nobilis est légèrement irritante pour la peau a cause de la
concentration élevé de l’huile essentielle de laurus nobilis.

2. Détermination de l’indice d’irritation primaire cutanée de la pommade


antiseptique:

Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :

Tableau 78: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade antiseptique à base d’huile essentielle de laurus nobilis :

N° De Poids Flanc Traité Flanc Témoin


Lapin De Œdème Erythème Œdème Erythème
Lapin J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h) J1(24h) J3(72h)
(g)
1 3,78 0 0 1 0 0 0 1 0
2 2,92 0 0 0 0 0 0 0 0
3 3,30 0 0 1 0 0 0 1 0
4 4,50 0 0 1 0 0 0 1 0
5 3,25 0 0 0 0 0 0 0 0
6 3,84 0 0 1 0 0 0 1 0

D’après le tableau 78, les phénomènes observés sont uniquement des érythèmes avec un
degré variable au cours de la 1ere observation et une diminution remarquable après 72
heures. Il est noté également une absence totale soit d’œdèmes durant toute la période de
l’expérimentation.

Tableau 79: Evaluation des réactions cutanées.

N° De Lapin Œdème + Erythème Œdème + Erythème


24 h + 72 h 24 h + 72 h
Flanc Traité Flanc Témoin
1 1 1
2 0 0
3 1 1
4 1 1
5 0 0
6 1 1
Valeurs cumulées 4 4

Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :

IP = ( Œdème + Erythèmes )Flanc traité + ( Œdème + Erythèmes )Flanc témoin / 24

125 | P a g e
Partie pratique

Avec :

24 = nombre de lapin ( 6 ) x nombres de zones testés ( traité et témoin = 2) x nombre de


type d’irritation ( Œdème et érythème = 2 )

Donc :

IP = 8 / 24 = 0,333

IP = 0,333

Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,333 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade antiseptique à base de l’HE du laurus nobilis
est non irritante pour la peau, donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation cutanée
humaine.

Discussion :
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP) des pommades
décongestionnantes des voies respiratoires ( essai I, essai II et essai III ) sont de 0 ; 0.083 et
0.708 respectivement. Les deux première valeur sont < 0.5 ce qui nous amène à conclure
que les deux pommades anti-rhumes ( essai I , essai II) à base de l’huile essentielle des
feuilles du laurus nobilis sont non irritantes pour la peau.

Le test de la toxicité locale de la pommade antirhume ( essai III ) a révélé l’application


d’érythème chez quelques lapins, après 24 heures de l’application, due à la pénétration de
ces derniers dans l’épiderme, à travers la couche cornée, les cellules basales ne restent pas
sensibles à ce passage. Ainsi, l’apparition d’érythèmes assez remarquables sur les flancs
traités peut être la conséquence de l’affrontement des lapins entre eux lors de leur
hébergement, la concentration de l’huile essentielle dans la pommade appliquée ou d’une
hypersensibilité de l’animal à la pommade ou à un de ses composants. Alors que,
l’apparition d’érythème assez remarquable sur les flancs témoins de quelques lapins peut
être due à la scarification qui a atteint de derme.

D’autre part, l’indice d’irritation primaire ( IP) de la pommade antiseptique est de


0,333 une valeur inférieur à 0,5 ce qui nous amène à conclure que cette pommade à base
de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis est non irritante pour la peau, donc la
pommade n’est pas toxique pour l’utilisation cutanée humaine.

126 | P a g e
Partie pratique

II.18. Réaction d’identification ( Dosage des pommades préparées):

Il est nécessaire de vérifier que dans la pommade préparée il y a bien les substance
annoncées ( analyse qualitative et quantitative ) et que cette dernière est bien pur et non
souillée par les interactions ou des produits de dégradation. Il faudra bien qu’elle soit
présente en qualité conforme à celle annoncée, il ne faudra pas qu’elle soit inférieur à
90%.

1. Anesthésine ( ou hydrochlorure de lidocaine ) : nitritométrie


2. Camphre : obtention de l’oxyme de camphre, neutralisation

O NOH

-H2O
C(CH)2
+ NH2OH C(CH)2

Hydroxylamine Oxyme

3. Salicylate de méthyle : hydrolyse, neutralisation, gravimétrique.


4. Huile essentielle : CPG
5. Réaction d’identification du menthol : Réaction de condensation par de la
vanilline

On traite 1g de pommade par 10ml d’alcool, on le filtre, le filtrat obtenu est transféré dans
un creuset en porcelaine et on y ajoute 1ml de H2SO4 concentré et 1ml d’une solution
fraiche de vanilline dans l’acide sulfurique. On mélange en tournant le creuset et on le
dilue par 1ml d’eau ou d’alcool, il se forme une coloration.

Identification :

Changement de couleur jaune ( filtrat /1ml H2SO4 /1ml d’une solution fraiche de vanilline)
à une coloration rouge violette après ajout de 1ml d’alcool.

127 | P a g e
Partie pratique

II.19.Tests microbiologiques :

L’utilisation thérapeutique rationnelle des huiles essentielles nécessite une


détermination précise du pouvoir antibactérien ou antifongique de l’essence. En effet, la
connaissance de l’activité de l’essence est un élément indispensable pour l’établissement
de formulations et prescriptions efficaces.[154]

Les tests microbiologiques ont été réalisés au laboratoires de microbiologie de la faculté


des sciences ( BOUMERDES) :

1. Evaluation qualitative de l’activité antimicrobienne :

La technique que nous avons utilisée pour évaluer l’activité antimicrobienne de nos
produits ( HEs, pommade à base des HEs ) est l’aromatogramme ou la méthode de
diffusion en milieu gélosé en utilisant des disques stériles en cellulose.

Cette méthode utilisée par certains auteurs [155,156,157] est la technique que nous avons
utilisée pour évaluer l’activité inhibitrice de nos produits ( HEs du laurus nobilis , des
pommades a base d’huile essentielle).

Protocole expérimental :

L’évaluation qualitative de l’activité antimicrobienne de nos produits, consiste à


estimer l’inhibition de la croissance des microorganismes ( bactéries et levures ) en contact
de différents produits, et ceci par la méthode de diffusion sur plaque de gélose ( diffusion
sur milieu gélosé) en utilisant des disques de cellulose préalablement stérilisés par lumière
UV de 6mm de diamètre. En ce qui concerne les pommades formulées , un volume de 0.1
mm3 est déposé au centre de chaque boite à l’aide d’une seringue stérile. [158]

Préparation de l’inoculum :

La méthode de préparation des inoculums est celle préconisée par la SFM (


communiqué de 2005 ) qui consiste à préparer , à partir d’une culture de 18-24 h pour les
bactéries et de 48 h pour les levures sur le milieu gélosé, une suspension en solution saline
d’eau physiologique stérile ( 0.9% NaCl ) à une concentration de 107 à 108 germes/ml.
Cette suspension obtenue par la détermination de la transmittance allant de 22% à 32%
pour les bactéries et entre 2% et 3% pour les levures et cela à une longueur d’onde de
620mm ( standardisation de l’antibiogramme selon l’OMS, 1999).

Diffusion sur milieu gélosé :

La méthode de diffusion sur milieu gélosé a été réalisée sur le milieu Muller-Hinton(M-
H) ( pour les bactéries ) et Sabouraud ( pour les levures ). On fait fondre les deux milieux
dans un bain marie à 95°C, puis on verse simultanément et aseptiquement une première
couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite avec 3
répétitions par couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite.

128 | P a g e
Partie pratique

Figure 63: réalisation de l’activité antibactérienne.

Après refroidissement à température ambiante, on ensemence 200 μl de suspension de


chaque souche par la méthode du Râteaux et on laisse solidifier sur la paillasse. A l’aide
d’une pince stérile, on prélève un disque de cellulose préalablement stérilisé par lumière
UV de 6mm de diamètre, et on l’imbibe d’huile essentielle pure , on dépose le disque sur la
surface gélosé sèche des boites de pétri. En ce qui concerne les pommades formulées , un
volume de 0.1 mm3 est déposé au centre de chaque boite à l’aide d’une seringue stérile.
Puis nous laissons les boites durant 20minutes à la température ambiante pour permettre la
diffusion de l’échantillon. Elles sont ensuite mises à l’étuve à 37°C pendant 24 heures pour
les bactéries et à 25°C pendant 48 heures pour les levures.

Le pourcentage d’inhibition est calculé par la formule suivante : [159, 160]

% Inhibition = ( D test / D boite de pétri ) x 100

D test : diamètre de la zone d’inhibition.


D control : diamètre de la boite de pétri.

Figure 64: Résultat de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis contre Candida albicans.

129 | P a g e
Partie pratique

Figure 65: Résultat de l’activité antibactérienne des huiles essentielles des feuilles du
laurus nobilis contre Escherichia coli.

Figure 66 : Résultat de l’activité antibactérienne des huiles essentielles des feuilles du


laurus nobilis contre staphylocoque aureus.

Figure 67: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Escherichia coli (bactérie
gram -)

Figure 68: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4) , des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Staphylococcus aureus
(bactérie gram +)
130 | P a g e
Partie pratique

Figure 69: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges(2) et des fruits(3) du laurus nobilis contre Pseudomonas aeruginosa
(bactérie gram -)

Figure 70: Résultats de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs(1), des tiges(2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Candida albicans .

Tableau 80: Résultat de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des feuilles du


laurus nobilis.

Huile Souches Diamètre Diamètre I%


essentielle (mm) moyen
Escherichia Bactérie D1= 17.55
coli Gram -
D2= 14.34 16.79 18.66

Huile essentielle D3= 18.50


des feuilles du Pseudomonas D1= 12
laurus nobilis aeruginosa Bactérie
Gram - D2= 11.5 12 13.33

D3= 12.50
Staphylocoque D1= 17.69
aureus Bactérie
Gram + D2= 18.91 18.11 20.12

D3= 17.75
Candida D1= 21.5
albican
Levure D2= 20.5 21 23.33

D3= 21

131 | P a g e
Partie pratique

I% : le pourcentage d’inhibition

D : diamètres d’inhibition

D1 : diamètre d’inhibition de l’essai 1

D2 : diamètre d’inhibition de l’essai 2

D3 : diamètre d’inhibition de l’essai 3

Tableau 81: Résultats de l’activité antimicrobienne des fruits, des fleurs, des tiges du
laurus nobilis.

Souche Type Les huiles essentielles Diamètre ( mm ) I%


microbienne
Escherichia Huile essentielle des 20 22.22
Bactérie gram -

coli fruits du laurus nobilis


Huile essentielle des 12 13.33
fleurs du laurus nobilis
Huile essentielle des tiges 16 17.77
du laurus nobilis
Pseudomonas Huile essentielle des 12 13.33
Bactérie gram -

aeruginosa fruits du laurus nobilis


Huile essentielle des 15 16.66
fleurs du laurus nobilis
Huile essentielle des tiges 12 13.33
du laurus nobilis
Staphylocoque Huile essentielle des 20 22.22
Bactérie gram +

aureus fruits du laurus nobilis


Huile essentielle des 18 20
fleurs du laurus nobilis
Huile essentielle des tiges 22 24.44
du laurus nobilis
Candida Huile essentielle des 18 20
albican fruits du laurus nobilis
Levure

Huile essentielle des 20 22.22


fleurs du laurus nobilis
Huile essentielle des tiges 16 17.77
du laurus nobilis

Tableau 82 : Résultats de l’activité antimicrobienne des pommades à base de l’huile


essentielle des feuilles du laurus nobilis.

Produits Souche Diamètre


formulées d’inhibition I%
D (mm )
Pommade Staphylococcus aureus Bactérie Gram + 14 15.55
1 Escherichia coli Bactérie Gram - 17 18.88
Candida albicans Levure 15 16.66

132 | P a g e
Partie pratique

Pommade Staphylococcus aureus Bactérie Gram + 18 20


2 Escherichia coli Bactérie Gram - 16 17.77
Candida albicans Levure 18 20
Témoin Staphylococcus aureus Bactérie Gram + 0 0
(eau Escherichia coli Bactérie Gram - 0 0
distillée) Candida albicans Levure 0 0

Pommade 1 : pommade décongestionnante à base de l’huile des feuilles du laurus nobilis

Pommade 2 : pommade antiseptique à base de l’huile des feuilles du laurus nobilis

Figure 71 : Résultats de l’activité antimicrobienne des pommades à base de l’huile


essentielle des feuilles du laurus nobilis.

Discussion :

L’évaluation qualitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des feuilles ,


des fruits, des fleurs, des tiges du laurus nobilis L. et des pommades formulées à été faite
sur 3 bactéries ( une à gram + et deux autres à gram - ) et une levure , par la méthode des
aromatogrammes. Le pouvoir antimicrobien de tous ces produits est obtenu par la mesure
des diamètres des zones d’inhibition ( mm ).

L’échelle d’estimation de l’activité antimicrobienne est donnée par Mutai et al., (2009)
[161]. Ils ont classé les diamètres des zones d’inhibition ( D ) de la croissance microbienne
en 5 classes :

Très fortement inhibitrice : D ≥ 30 mm

Fortement inhibitrice : 21 mm ≤ D ≤ 29 mm

Modérément inhibitrice : 16 mm ≤ D ≤ 20 mm

Légèrement inhibitrice : 11 mm ≤ D ≤ 16 mm

Non inhibitrice : D < 10mm

Le diamètre moyen de la zone d’inhibition observée autour des disques imprégnés de


l’huile essentielle pure, des pommade formulées après 24 heures d’incubation à 37°C pour
les bactéries et après 48 heures à 25°C pour les levures, ainsi que leurs pourcentages
d’inhibitions sont résumés dans les tableaux 82,83 et 84.

133 | P a g e
Partie pratique

Selon l’échelle citée par Mutai et al., 2009 : [161]

Les huiles essentielles pures des feuilles, des fruits, des fleurs, des tiges du laurus nobilis
présentent des activités sur toutes les souches bactériennes testées .

Les diamètres d’inhibition varient de 12 à 22 mm. Le plus grand diamètre d’inhibition


obtenu avec les huiles des tiges du laurus nobilis contre Staphylococcus aureus, et le plus
petit avec les feuilles, les fruits et les tiges contre Pseudomonas aeruginosa et aussi on
peut cité que l’huile essentielle des fleurs présente aussi un faible diamètre d’inhibition
contre Eschirichia coli.

Les souches de Pseudomonas aeruginosa sont légèrement résistantes à l’égard des quatre
huiles essentielles.

Notre huile essentielle de laurier à savoir ( des feuilles et des tiges ) possède également une
activité fortement inhibitrice sur les souches de Staphylococcus aureus .

Les souches de (candida albicans) utilisées sont sensibles vis-à-vis les quatre huiles
essentielles et surtout les feuilles et les fleurs ( voir figure 70 ).

L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis révélés très actif par rapport aux autres
huiles essentielles, pour cette raison et pour la disponibilité des feuilles ( durant toute
l’année ) on a pu réalisé la concentration minimale inhibitrice ( CMI ) de l’huile essentielle
des feuilles du laurier noble .

2. Evaluation quantitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle des


feuilles du laurus nobilis :

Détermination de la concentration minimale inhibitrice CMI et la concentration


minimale bactéricide CMB fongicide CMF.

L’évaluation quantitative de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle du laurus


nobilis , consiste à déterminer la concentration minimale inhibitrice CMI et la
concentration minimale bactéricide CMB et fongicide CMF sur des microorganismes (
bactéries et levures ) soumis aux contact des huiles essentielles de laurus nobilis, et ceci
par la méthode de dilution en milieu solide en utilisant des disques absorbants pour les
bactéries et les levures. La méthode utilisée est celle de la dilution en milieu solide. [ 136]

Préparation d’inoculum :

Par la même manière de diffusion sur milieu gélosé, on prépare l’inoculum pour cette
méthode . La suspension est reprise par dilutions successives dans le tampon phosphate
salin (PBS) pour l’obtention d’une densité initiale de l’inoculum entre 105 CFU ( unités
formant colonies ) / mL et 106 CFU/mL pour chacune des souches testées.

Préparation de l’émulsion d’HE :

134 | P a g e
Partie pratique

La solution d’huile essentielle doit être au 0.4/10 ( 4%). Elle a été préparée dans M-H
(pour les bactéries) et SAB ( pour les levures) additionnés de tween 80 et maintenu en
surfusion. Une série de dilution de chaque produit est préparée à des concentrations allant
de 4% à 0.03% pour l’HE . La réalisation des dilutions se fait comme suite :

2ml d’HE est dilué dans 50 ml de milieu M-H ( bactéries) ou SAB (levures ), maintenu en
surfusion, dans un premier flacon ce qui donne de 4% ( solution mère ) ; verser la moitié
du premier flacon dans un deuxième flacon et ajuster avec 25 ml de milieu pour la dilution
2% procéder de la même manière jusqu’à l’obtention de la dernière dilution de 0.03%. Les
mélanges de chaque dilution sont immédiatement repartis dans deux boites de pétri rondes
( 90 mm de diamètre ) à raison de 12.5 mm de milieu par boite. La gamme de
concentration finales obtenue correspond
à4% ;2% ;1% ;0.5% ;0.25%;0.125% ;0.06% ;0.03%.

Figure 72: Réalisation de la CMI de l’huile essentielle des feuille du laurus nobilis .

Dépôt des disques :

Après solidification, les disques stériles en cellulose de 0.6 cm imbibés de la


suspension bactérienne ou fongique ( levures ) sont déposés à la surface du milieu gélosé
contenant ou pas l’HE. Chacune des boites a été ensemencée par deux à trois ( 2-3) espèces
différentes. Tous les essais sont réalisés deux fois les boites de pétri ( témoins et essais )
sont mises en incubation pendant 24 heures à 37°C pour les bactéries et pendant 72 heures
à 25°C pour les levures. La lecture des résultats se fait visuellement par l’observation de la
croissance ou de l’inhibition de la croissance du microorganisme antimicrobien testé par
rapport à la croissance sur une boite témoin sans extrait. La CMI est définie comme étant
la plus petite concentration du produit pour laquelle aucune croissance n’est visible à l’œil
nu. Pour les boites qui ne présentent pas de croissance, le disque de mycélium est transféré
sur un milieu gélosé M-H (bactérie ) et SAB ( levure ) neuf pour confirmer s’il s’agit d’un
effet fongistatique ou fongicide sur les levures et d’un effet bactériostatique ou bactéricide
sur les bactéries. La CMB et la CMF ont été définies comme étant les plus faibles
concentrations de l’agent pour lesquelles il y a absence totale de colonies en comparaison
avec les témoins après 24 H de culture à 37°C pour les bactéries et 72H d’incubation à
25°C pour les levures.

135 | P a g e
Partie pratique

Figure 73: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli (bactérie gram –)

Figure 74: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.

Figure 75 : Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.

136 | P a g e
Partie pratique

Figure 76 : Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Candida albicans .

Figure 77: Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Candida albicans .

Les résultats de l’activité antibactérienne et antifongique des huiles essentielles des feuilles
du laurus nobilis L. sont consignés dans le tableau :

Tableau 83: Aromatogramme de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis .

Souche Témoin 0.03% 0.06% 0.125% 0.25% 0.5% 1% 2% 4%


Bactérie Gram+
Staphylococcus +++ ++ ++ ++ + + + - -
aureus

Bactérie Gram -
Escherichia +++ ++ + + + +/- - - -
coli

Pseudomonas +++ ++ ++ ++ ++ + + + +
aeruginosa

Levure
Candida +++ + + +/- - - - - -
albican

+ : présence de germe

- : absence de germe

137 | P a g e
Partie pratique

Tableau 84: Concentrations minimales inhibitrices ( CMI ) et concentrations minimales


bactéricides ( CMB ) de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis relatives aux
bactéries testées.

Souche CMI CMB


Bactérie gram +
Staphylococcus aureus 2% 4%

Bactérie gram -
Escherichia coli 1% 2%

Pseudomonas aeruginosa - -

Tableau 85: Concentration minimales inhibitrices ( CMI ) et concentration minimale


fongicides ( CMF ) de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis relative à la levure
testée.

Souche CMI CMF


Candida albicans 0.25% 0.5%

L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis a exercé une activité inhibitrice vis-à-vis
des bactéries et de levure testée , sauf les souches Pseudomonas aeruginosa qui se révèle
résistantes, et cela malgré l’utilisation d’une concentration de 4%.

Staphylococcus aureus a été inhibé à partir de la concentration minimale de 2% (v/v ).

Ainsi, Escherichia coli s’est montré le plus sensible, il a été inhibé à partir de la
concentration minimale 1% ( v/v ).

Les levures ont montré une grande sensibilité à l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis. Une concentration de 0.25% ( v/v ) d’HE était suffisante pour inhiber la croissance
de Candida albicans.

Les subcultures réalisées suite à l’obtention des CMI, ont permis d’observer les
concentrations minimales bactéricides ( CMB ) sur les 2 bactéries et les concentrations
minimales fongicides ( CMF) sur la levure testée Candida albicans.

La concentration minimale bactéricide et/ou fongicide est souvent égale ou plus élevée que
la CMI.

Les CMB déterminés ont varié aussi de 1% à 4% (v/v ). Parmi les bactéries testées , la
souche Escherichia coli s’est montrée la plus sensible (CMB=2%), tandis que
Staphyloccocus aureus était la plus résistante ( CMB=4%).

Candida albicans s’est montrée la plus sensible par rapport aux bactéries testées,
(CMF=0.5%) .

138 | P a g e
Partie pratique

Malgré les variations des CMI et CMB et/ou CMF d’un microorganisme à un autre, dans
certains cas elles sont égales indiquant ainsi une forte action bactéricide et/ou fongicide. En
effet, lorsque le rapport CMB/CMI (CMF/CMI) est inférieur ou égal à 4, l’HE est
bactéricide et/ou fongicide. Quand ce rapport est supérieur à 4, l’HE est dite bactéricide
et/ou fongistatique .[162 ]

Le tableau présente les différents rapports CMB/CMI, CMF/CMI.

Tableau 86: Rapport CMB/CMI, CMF/CMI de différentes souches utilisées vis-à-vis


d’HE des feuilles du laurus nobilis.

Souches CMB/CMI (CMF/CMI) Interprétation


Staphylococcus aureus 2 Bactéricide
Escherichia coli 2 Bactéricide
Candida albicans 2 Fongicide

D’après le tableau 86, nous pouvons dire que notre huile essentielle testée a un pouvoir
bactéricide et/ou fongicide sur la plus part des souches testées sauf Pseudomonas
aeruginosa. Donc, l’HE de laurus nobilis a révélé, à la fois, une activité bactéricide et
fongicide. Ce qui explique leur application aux produits pharmaceutiques.

Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0, 25% d’huile de laurier inhibe
complètement la croissance de candida albicans, alors que 0,5% est levuricide ou
fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus l’huile de laurier noble,
révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.

139 | P a g e
[partie pratique]

Glossaire

140 | P a g e
Conclusion

Pendant longtemps, les remèdes naturels et surtout les plantes médicinales furent le
principal, voire l’unique recours du médecin et cet ensemble de soins thérapeutiques, qui
fait appel aux drogues ou aux principes actifs d’origine végétal , est appelé phytothérapie.

Grâce à l’industrie pharmaceutique, on a pu isoler, purifier ces principes actifs ce qui


nous a permis d’en connaitre leur constitution et par la suite déterminer leur intérêt.

Ce travail a porté sur l’étude comparative de la pharmacognosie des différentes parties


du laurus nobilis. Essai de formulation thérapeutique à base d’huile extraite. Bien que la
biomasse végétale soit une source très prometteuse pour l’avenir, très peu d’études ont
porté sur l’analyse chimique détaillée de la fraction aromatique du différents parties de la
plante du laurus nobilis cultivé en Algérie.
Dans ce contexte, nous nous sommes proposé de réaliser :

§ Une analyse du matériel végétal ( laurus nobilis L. ) ;


§ Screening phytochimique des feuilles , des tiges, des fleurs, des fruits et des racines
du laurus nobilis L. ;
§ Une extraction des huiles essentielles de cette plante ;
§ Etude qualitative et quantitative des huiles essentielles obtenues ;
§ Formulation et analyse des pommades formulées ;
§ Et enfin une étude antimicrobienne des huiles essentielles et des pommades
formulées.

Dans la littérature le laurier est d’utilisations diverses ; il se caractérise par des feuilles,
des fruits, des fleurs , des tiges et des racines. Les travaux menés au cours de notre étude
auront permis de vérifier la conformité du matériel végétal. Le screening phytochimique a
révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs ( polyphénol :
flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols ) reconnus pour leurs propriétés biologiques et
thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la présence des
flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les propriétés
physiologiques anti-oxydantes .

De même les tiges, les fleurs, les fruits et les racines du laurus nobilis sont riche en
polyphénols , en saponine et en coumarine. Les composés réducteurs ont été détecté dans
tous les parties du laurus nobilis sauf les fruits qui ont été donné une réaction négative.

L’étude réalisée a permis aussi de constater la présence de l’amidon seulement dans les
fleurs et les fruits du laurier noble. Ces résultats sont conformes avec ce qui est décrit dans
la littérature.

Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à partir des feuilles , des tiges,
des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats des rendements en huile
essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%, respectivement. Les racines du
laurus nobilis ne contenant plus d’huile essentielle .Les quatre huiles essentielles obtenus
ont été analysés qualitativement, ensuite ils ont été caractérisés par leur composition

141 | P a g e
Conclusion

chimique grâce à des analyses chromatographiques ; dans les tiges du laurier l’eugénol
méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide apparaît comme les
constituants majoritaires de l'HE avec des pourcentages de (10.62%, 9.242%, 5.668% et
5.058%) respectivement .

Outre le 1,8-cinéole (10.655% ) , les principales composantes des feuilles étaient linalool et
terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE ( 11.072% ,
11.495%), suivi de l’eugénol méthyle éther ( 9.748 %).

Bien que dans les fruits les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene,
le Lauric anhydride , le cedren-13-ol , le β-élémène (21.83%, 16.424% ,15.057% et
11.462% ) . Les ocimenes étaient absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le
composant majoritaire des feuilles été présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un
pourcentage faible. D’où la composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des
tiges et des fleurs du laurier noble est différentes les une des autres.

L'objectif de cette étude a été atteint puisque nous avons contribué à caractériser l'huile
essentielle du laurus nobilis pour une éventuelle utilisation en phytothérapie.

Après avoir s’assurer de la bonne qualité de la matière première , il a été procédé à la


formulation des deux pommades à base de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis,
une décongestionnante des voies respiratoires et l’autre antiseptique. Les tests
macroscopiques, l’homogénéité et le pH des pommades ont été déterminés.

Les résultats de teste de tolérance des pommades préparés ont révélé non irritante.

Les extraits volatiles et les pommades formulées ont été également soumis à un
criblage pour leur activité antimicrobienne possible in vitro, contre trois souches de
bactéries pathogène et une seule espèce de levure, en employant la méthode de diffusion à
partir d’un disque solide. Tous les extraits volatiles ont réagi positivement au moins sur
une des souches microbiennes testées. Les extraits d'une même plante ont montré des
activités différentes et les CMI ont été déterminée à partir des extraits les plus actifs en
milieu gélosé, l’huile essentielle de la feuille de Laurus nobilis a témoigné d’une forte
activité antimicrobienne même vis à vis de souches multirésistantes aux certains
antibiotiques. Globalement l’activité antimicrobienne des feuilles est plus importante que
celle des fruits, des fleurs et des tiges du Laurus nobilis avec un spectre antimicrobien
large et à des doses plus faibles. Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0,
25% d’huile de laurier inhibe complètement la croissance de candida albicans, alors que
0,5% est levuricide ou fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus
l’huile de laurier noble, révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.

Ce travail nous confirme qu’il est possible de substituer de façon au moins partielle, les
antibiotiques classiques par l’utilisation des huiles essentielles.

142 | P a g e
Conclusion

Dans la perspective de poursuivre et d’approfondir ce travail, il serait intéressant :

· Du purifier les principes actifs du laurus nobilis ( polyphénol, alcaloïde, …..) et


d’évaluer leurs rôles antimicrobiens afin de pouvoir les utilisés en phytothérapie ;

· Analyser l’extrait d’eucaluptol obtenus dans ce travail, par une méthode d’analyse
physique ( CPG/SM , IR, ………..) ;

· Etudier l’effet pharmacologique des pommades formulées dans ce travail ;

· Etudier l’activité antioxydante des extrais de laurus nobilis ;

· Evaluer l’activité anti-inflammatoire des 4 huiles essentielles obtenus et de


comparer les résultats avec celle des produits synthétiques.

143 | P a g e
Glossaire

Glossaire
Glossaire

Agar : polymère de l’agarose qui rentre dans la composition des milieux de culture solide
en microbiologie. Aussi appelé gélose
Allelopathie : c’est un phénomène ou de nombreuses espèces végétales synthétisent des
molécules capables d’agir sur le développement des plantes avoisinantes
Analgésique : médication supprimant la douleur.
Antalgique : médicament qui atténue la douleur.
Antifongique : se dit d’un médicament qui agit contre les infections provoquées par les
champignons ou les levures parasites. SYN : antimycosique.
Anticonvulsivant (anticonvulsif) : efficace contre l’épilepsie, et les contractions
musculaires involontaires en série.
Antiseptique : se dit d’un agent, d’un médicament propre à prévenir les infections.
Anti-inflammatoire : qui fait dégonfler et diminuer l’irritation. La plupart des anti-
inflammatoires sont aussi des antidouleurs

Antispasmodique : se dit d’un médicament qui calme les spasmes


Arome : s’emploie pour caractériser :
-l’odeur des corps volatils issus des aliments ou boissons et perçue au cours de leur
dégustation ;
-la propriété odorante des aliments et boissons responsable de la flaveur.

Arthrite : toute inflammation aigue ou chronique frappant les articulations. On distingue


les arthrites rhumatismales, ou rhumatismes inflammatoires, et les arthrites infectieuses,
qui font suite à une infection articulaire.
Astringent : se dit d’une substance qui resserre les tissus ou diminue la sécrétion.
Camphre : substance aromatique extraite de diverses plantes.
Carminatif : qui résorbe les gaz intestinaux.
Cellules sécrétrices : les cellules sécrétrices se rencontrent dans l’épiderme et dans les
tissus plus profonds des végétaux. Ce sont certaines cellules épidermiques des tiges, de
feuilles, de pétales et d’écailles. Elles différent des autres cellules épidermiques par leur
taille plus petite et par l’absence fréquente de cutine dans leurs parois.
Cicatrisant : se dit d’une substance qui favorise la cicatrisation.
Colite : inflammation du colon.
Diurétique : qui favorise l’élimination de l’urine.
Emétique : qui provoque des vomissements.

Epicarpe : pellicule, peau qui recouvre un fruit.


Erythème : affection cutanée donnant lieu à des rougeurs disparaissant à la pression.
Glossaire

Escarre : nécrose cutanée dans la quelle les tissus mortifiés forment une croute noirâtre
qui se détache spontanément.
Expectorant : qui calme la taux, favorise l’expulsion des secrétions bronchiques.

Fongique : qui se rapporte aux champignons.


Flaveur : l’ensemble des sensations olfactives et gustatives perçues pendant la
consommation d’un produit.
Gastrite : inflammation de la muqueuse de l’estomac.

Glabre : se dit d’une culture ou d’une structure dépourvue de poils.


Glycémie : la glycémie ou taux de sucre dans le sang est mesurée sur un prélevement de
sang veineux, elle varie à l’état normal entre 0.70 et 1.10g par litre, à jeun. Au dessus de
1.30g, il y a diabète.
Hémorroïdes : varices des veines de l’anus et du rectum.
Hémostatique : propre à arrêter les hémorragies.
Hypertension : augmentation de la tension des parois d’une cavité lorsque la pression du
liquide qu’elle contient est supérieure à la normale. Cela s’applique aux artères, c’est ce
qu’on appelle l’hypertension artérielle.
Innocuité : absence de nocivité.
Membrane : structure biologique formée de feuilles comportant une bicouche lipidique ou
sont insérées diverses protéines.
Moisissure : terme d’usage courant désignant des champignons filamenteux issus du sol
ou ils vivent habituellement en saprophytes. Certains d’entre eux peuvent cependant se
comporter, chez l’homme ou l’animal, en pathogènes opportunistes.
Mycélium : ensemble des hyphes constitutifs de l’appareil végétatif des champignons.
Mycète : ce sont des organismes eucaryotes, hétérotrophes, constitués d’un thalle
unicellulaire ou filamenteux et vivant en saprophytes ou parfois en parasites.
Mycose : manifestation provoquée par la présence d’un champignons microscopique dans
l’organisme . On distingue les mycoses superficielles, et les mycoses profondes ou
systématiques.
Nucelle : tissu de réserve, diploïde, d’origine maternelle, il est en général transitoire et
disparait lors de la croissance de l’embryon. S’il persiste dans la graine , il est alors appelé
périsperme.
Ombelle : inflorescence indéfinie dont les fleurs, situées dans le même plan, sont portées
par des pédoncules partant du même point. L’ombelle ( et un involucelle à la base de
l’ombellule).

Œdème : accumulation anormale de liquide séreux dans les espaces intercellulaires du


tissu conjonctif.
Glossaire

Parasite : être vivant ( animal, végétal, champignon) qui vit aux dépens d’une autre espèce
vivante appelée hôte.
Parasitisme : comportement propre aux parasites vis-à-vis de leurs hôtes.

Péricarpe : enveloppe du fruit, provenant du développement des parois du carpelle.


Placentation : désigne la disposition des ovules à l’intérieur de l’ovaire. Une placentation
basilaire indique que les ovules sont fixés à la base des carpelles.
Poches sécrétrices : ce sont des formations anatomiques végétales qui reçoivent et
accumulent l’huile essentielle élaborée par les cellules sécrétrices qui les bordent. Les
poches sécrétrices se rencontrent généralement chez les MYRTACEES.

Poils sécréteurs : les poils sécréteurs ont une forme très variable. L’essence exsudée du
cytoplasme s’accumule dans la paroi externe de la cellule sous la cuticule qu’elle distend.
Les poils sécréteurs se rencontrent le plus souvent chez la famille des LABIEES.
Sédatif : se dit de toute substance qui agit contre la douleur, l’anxiété, l’insomnie ou qui
modère l’activité d’un organe.
Spore : élément ovoïde produit par les bactéries ou les champignons.
Sous-cutanée : sous la peau.

Stimulant : se dit de substances capables de faciliter le fonctionnement de certains


organes.
Stomachique : se dit d’une substance qui stimule et améliore la fonction gastrique.
Sessile : qualifie une fleur, un fruit ou une feuille sans pédoncule ou pétiole.

Spore : élément issu de la reproduction sexuée ou asexuée des champignons et destiné à


assurer la survie du champignon et sa propagation.
Teinture : solution obtenue en laissant une certaine quantité de drogue desséchée au
contact d’un solvant pour un temps plus ou moins long.
Taxon : unité systématique de rang quelconque. Les taxons courants sont le genre, le sous-
genre, l’espèce, la sous-espèce, la variété.

Ulcération : formation d’ulcère, l’ulcère lui-même.


Vermifuge : se dit d’un remède propre à faire évacuer les vers intestinaux.
Verticille : ensemble d’organes ( rameaux, feuilles, pièce florales) disposés en cercle
autour d’un axe, au même niveau.
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Annexes
Annexe I

Dosage de l’eau par entrainement azéotropique :


L’eau est entrainée par distillation d’un solvant qui ne lui est pas miscible, mais donne
avec elle un mélange azéotropique à température d’ébullition constante ; après
condensation par réfrigération des vapeurs de l’azéotrope, l’eau se sépare et est mesurée en
volume. Les solvants utilisés sont : le benzène (P.E.80°) qui n’entraine l’eau que
lentement, le toluène (P.E.110°) et le xylène ( mélange de trois isomères P.E.136°-140°)
qui donne l’entrainement le plus rapide et le plus complet mais qui présente des
inconvénients ( caramélisation possible des produits sensibles à la température,
condensation des gouttes d’eau au niveau supérieur du réfrigérant). La pharmacopée
française ( 9e édition, 1972) utilise le toluène.

L’appareil ( figure. ) est constitué par un ballon en verre de 500 ml, relié par un tube de
raccordement à un tube cylindrique de condensation surmonté d’un réfrigérant et prolongé
par un tube collecteur gradué en 0,1 ml [127]

Figure A 1 : Appareil de dean stark .

Perte a la dessiccation :
C’est la détermination de la perte de poids par dessiccation à l’étuve [127]

Dosage des cendres :

Dosage des cendres totales :

Elle caractérise la quantité de substances résiduelles non volatilisées lorsque l’échantillon


de drogue et complètement calciné. [127]

Dosage des cendres sulfuriques :

Ce sont des substances résiduelles non volatilisées recueillies lorsque l’échantillon de


drogue est calciner avec de l’acide sulfurique concentré, ces cendres déterminent la
quantité de substances inorganiques contenues dans la drogue. [127]
Annexe I

Dosage des cendres chlorhydriques (cendres non solubles dans l’acide chlorhydrique) :

Les cendres chlorhydriques ou cendres insoluble dans l’acide chlorhydrique consistent en


un résidu obtenu en faisant bouillir les cendres totales dans l’acide chlorhydrique à 10%.
Leur détermination permet de mesurer la quantité de matières siliceuses, spécialement de
sable qui peut souiller les drogues mal lavées ou mal triées. [127]

Principe de l’indice de gonflement :

L’indice de gonflement est le volume, en millilitres, qu’occupe 1g de drogue gonflée dans


l’eau, y compris le mucilage qui y adhère. Ce paramètre confirme la présence de
polysaccharides ( mucilages, gommes) dans la drogue végétale. [127]

Méthodes diverses de recuperation de 1,8-cinéole :

Parmi les différentes méthodes de récupération du cinéol, on distingue :

1. Méthode de l’acide bromhydrique : Cette méthode consiste à faire passer un


courant d’acide bromhydrique gazeux rigoureusement sec, dans un mélange
réfrigéré composé de dix (10) ml d’essence et quarante ( 40 )ml d’éther de pétrole
léger. Une fois que le bromhydrate de cinéol se forme ( C10H18OHBr ), il est essoré
à la trompe et lavé à l’éther de pétrole froid. Après avoir éliminé l’éther de pétrole,
le produit est traité enfin par un certain volume d’eau, ce qui a pour effet de libérer
le cinéol qui se dépose au dessus de la phase aqueuse, qui est récupérée par
décantation.
2. Méthode à l’orthocrésol : Le principe de cette méthode est basé sur la
détermination de la température de cristallisation d’un mélange formé d’huile
essentielle et d’orthocrésol. Elle détermine la teneur en 1,8-cinéol des huiles
essentielles qui ne renferment comme constituants principaux que du 1,8-cinéol et
des hydrocarbures térpeniques.
3. Extraction du cinéol par solvant : Il s’agit de la mise en contact intime de
l’échantillon d’huile essentielle à séparer avec un autre liquide appelé solvant qui
extrait préférentiellement un ou plusieurs des solutés de l’échantillon. On obtient
ainsi un extrait et un raffinat. En réalité cette extraction se résume en deux étapes.
La mise en contact de deux liquides durant un temps suffisant pour l’obtention de
l’équilibre pendant lequel le ou les solutés sont transférés de la phase
d’alimentation vers le solvant.
Le rapport des concentrations du soluté dans l’extrait et dans le raffinat, appelé
coefficient de distribution qui donne une mesure de l’affinité relative du soluté pour
les deux phases.
Le solvant joue un rôle important, il doit posséder une grande capacité de
dissolution, une faible viscosité, un point d’ébullition peu élevé, être
ininflammable, non explosif, sélectif et volatil.
Annexe I

Le choix d’un solvant de faible viscosité et de faible densité est à recommander en


vue de faciliter la diffusion du solvant, l’agitation et la séparation mécanique.
Les principaux solvants utilisés sont l’eau, les alcools, l’acétone, les hydrocarbures
( essence, benzène) et les solvants halogènes ( CCl4, CHCl3, etc…..).
4. Réparation du cinéol par cristallisation :cette méthode consiste à mettre une
quantité d’huile essentielle dans une enceinte à très basse température ( minimum -
50°C ) jusqu’à formation de deux phases.
La phase solide est récupérée par filtration et liquéfiée à la température ambiante.
Le rendement massique trouvé est de 76%. L’analyse par chromatographie en
phase gazeuse a permis de connaitre la pureté en eucalyptol qui est de 90%.
5. Récupération par distillation fractionnée : Cette méthode consiste à distiller une
quantité bien déterminée d’huile essentielle.
Une charge d’huile essentielle est introduite dans un ballon qui est chauffé par
l’intermédiaire d’une plaque chauffante pour éviter toute altération thermique des
produits.
Il est préférable de travailler sous un vide de l’ordre de 40 mm de mercure, entre la
pompe à vide et la sortie de la colonne, doit être disposé un piège à azote liquide,
permettant la condensation de tous les composés aussi légers qu’ils soient et évitant
ainsi leur passage dans la pompe à vide.
Le réfrigérant se termine par un dispositif qui permet la récupération des différentes
fractions au cours de la distillation.
Lorsque la température atteint 45°C, elle est maintenue pendant toute l’opération
grâce au régulateur de chauffe.
6. La chromatographie d’adsorption : C’est l’une des méthodes de fractionnement,
qui s’applique à la séparation des composés présentant des groupements
fonctionnels différents et de certains isomères.
Elle met en œuvre des phases stationnaires adsorbantes, telles que les gels de silice
poreuse et les gels d’alumine.
La chromatographie d’adsorption liquide-solide permet la séparation des solutés
qui sont des bases amine aliphatiques et aromatiques.
L’expérience montre que la silice convient le mieux, par contre l’alumine
conviendrait pour la séparation des solutés acides comme les phénols et les acides
carboxyliques. Notre étude s’est basée sur la récupération du cinéol par adsorption
sur le gel de silice qui n’est autre que la chromatographie d’adsorption solide-
liquide.
7. Eucalyptol donne un produit d’addition avec un exemple : 50% (p/v) solution alcoolique ;
C10H18O. C6H6O2 (mp 82-85oC),à partir de laquelle la première peut être généré.
Note : Cette méthode est surtout applicable à ces huiles volatiles qui ont une teneur plus
élevée en cinéol. [138]

Propriétés physiques et chimiques d’eucalyptol:

Point de fusion : 1.5°C


Température d'ébullition : 176 - 177°C
Densité : 0.895 - 0.92(g/ml)
Annexe I

Point d'éclair : 49 à 50°C


Indice de réfraction à 20°C : 1.450 - 1.456
Indice de péroxyde (mgOXA/I) : 160

Informations toxicologiques :

- En cas d'inhalation : Peut causer une irritation.


- En cas de contact avec la peau : Peut causer une irritation.
- En cas de contact avec les yeux : manifestations locales d'irritation
-en cas d'ingestion de quantités élevées : Peut être dangereux. effets possibles :chute de
tension, troubles du système nerveux Central

Autres données :
LD50 2480 mg/kg voie orale, rat.

Informations écologiques :
Aucun danger n'est anticipé pour l'environnement dans la mesure où cette matière est
manipulée et éliminée conformément aux normes de sécurité en place.

Caractéristiques physico-chimiques des huiles essentielles :

caractéristiques physiques de l’huile essentielle :

1.pouvoir rotatoire à 20°C : (NF T 75-113 Juin 1982)

Définition :

Angle, exprimé en milliradians et/ou degré d’angle, qui tourne le plan de polarisation
d’une radiation lumineuse de longueur d’onde ( 589,3 nm + 0,3 nm ), correspondant aux
raies D du sodium, lorsque celle-ci traverse une épaisseur de 100 mm de l’HE dans des
conditions déterminées de température.

2.indice de réfraction à 20°C : ( NF T 75-112 Aout 1977 )

Définition :

Rapport entre le sinus de l’angle d’incidence et le sinus de l’angle de réfraction d’un rayon
lumineux de longueur d’onde déterminée, passant de l’air dans l’HE maintenue à une
température constante. La longueur d’onde spécifiée est ( 589,3 + 0,3 ) nm, correspondant
aux radiations D1 et D2 du sodium = + 0,0004 ( t’– t ) : valeur lue, à la température t’, à
laquelle a été effectuée la détermination. T : température de référence.

Principe:

Suivant le type d’appareil utilisé , soit mesurage direct de l’angle de réfraction, soit
observation de la limite de réfraction totale, l’huile étant maintenue dans des conditions
d’isotropisme et de transparence.
Annexe I

3. Densité à 20°C : ( NF T 75-111 juin 1982)

Définition :

La densité d’une HE est le rapport de la masse d’un volume d’HE à 20°C à celle du même
volume d’eau distillée à 20°C.

Principe :

A l’aide d’un pycnomètre, pesées successives de volumes égaux d’huile essentielle et


d’eau, à la température de 20°C.

4. Evaluation de la miscibilité à l’éthanol :

Définition :

Une huile essentielle est dite miscible à V volumes et plus d’éthanol de titre alcoométrique
déterminé, à la température de 20 °C, lorsque le mélange de 1 volume de l’huile essentielle
considérée avec V volumes de cet éthanol est limpide et le reste après addition graduelle
d’éthanol de même titre, jusqu’à un total de 20 volumes.

Principe :

Addition graduelle à une prise d’essai de l’huile essentielle, à la température de 20 °C ,


d’éthanol de titre alcoométrique convenable.

Evaluation de la miscibilité et , éventuellement, de l’opalescence.

caractéristiques chimiques de l’huile essentielle :

1.Indice d’acide ( IA ) :

Définition :

Le nombre de milligrammes d’hydroxyde de potassium nécessaire à la neutralisation des


acides libres contenus dans 1 gramme d’HE. La neutralisation des acides libres se fait par
une solution éthanolique d’hydroxyde de potassium titré.

2.Indice d’ester ( IE ) :

Définition :

Le nombre de milligrammes d’hydroxyde de potassium nécessaire à la neutralisation des


acides libérés par hydrolyse des esters contenus dans 1 gramme d’huile essentielle.

3.Mesure du pH :
Cette mesure a été effectuée à l’aide d’un pH-mètre.
Annexe I

4.Mesure de l’indice d’iode :

L’indice d’iode exprime le degré d’insaturation du corps gras.

Définition :

L’indice d’iode est le nombre de grammes d’iode fixé sur les doubles liaisons de 100
grammes de corps gras. Il est habituellement désigné par II.

Principe :

On fait agir une solution halogénante sur le produit préalablement dissous dans du
tetrachlorure de carbone ( ou du chloroforme ). On ajoute de l’iodure de potassium et on
titre en retour avec une solution de thiosulfate de sodium.

La solution halogénante est une solution de monobromure d’iode dans l’acide acétique.
[142,144]

Réaction caractéristique :

R-CH=CH-R +I2 R-CH-CH-R

I I

I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6


Annexe II
Area Percent Report

Data File : C:\MSDCHEM\1\DATA\LAURIER3.D Vial: 1


Acq On : 10 May 2011 9:39 Operator: FATY
Sample : Huile essentielle du Laurier noble tige Inst : Instrumen
Misc : Etudiante Guedouari de l'Université d'IN Multiplr: 1.00
Sample Amount: 0.00
MS Integration Params: EVENTS.E

Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\TEST-1.M (Chemstation Integrator)


Title :

Signal : TIC

peak R.T. first max last PK peak corr. corr. % of


# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------
1 0.167 3 9 87 PH 55364 7022234 4.52% 0.480%
2 1.551 141 147 200 PV 1940681 46661244 30.03% 3.192%
3 11.732 1156 1162 1176 PB 3026 89823 0.06% 0.006%
4 12.243 1204 1213 1227 VV 7177 200275 0.13% 0.014%
5 13.106 1280 1299 1304 PV 11111 290159 0.19% 0.020%

6 13.196 1304 1308 1317 VV 8571 234643 0.15% 0.016%


7 13.658 1338 1354 1355 BV 3942 107595 0.07% 0.007%
8 13.688 1355 1357 1376 VV 2 4068 173404 0.11% 0.012%
9 14.510 1432 1439 1451 PV 5866 173357 0.11% 0.012%
10 14.681 1451 1456 1460 PV 1751 49047 0.03% 0.003%

11 14.781 1460 1466 1473 VV 5695 214968 0.14% 0.015%


12 14.971 1473 1485 1532 VV 1024872 31985235 20.59% 2.188%
13 15.493 1532 1537 1547 VV 3 3240 171188 0.11% 0.012%
14 15.834 1565 1571 1587 VV 19027 657017 0.42% 0.045%
15 16.065 1587 1594 1603 VV 18528 581932 0.37% 0.040%

16 16.205 1603 1608 1631 VV 15380 538315 0.35% 0.037%


17 16.677 1648 1655 1657 VV 2 13071 298041 0.19% 0.020%
18 16.707 1657 1658 1680 VV 4 13223 650985 0.42% 0.045%
19 17.108 1680 1698 1733 VV 1410553 82863475 53.33% 5.668%
20 17.479 1733 1735 1746 VV 8 9493 585221 0.38% 0.040%

21 17.700 1746 1757 1765 VV 2 21091 1061370 0.68% 0.073%


22 17.800 1765 1767 1773 VV 2 5543 219432 0.14% 0.015%
23 18.201 1797 1807 1816 VV 34375 1383877 0.89% 0.095%
24 18.342 1816 1821 1830 VV 33082 1163355 0.75% 0.080%
25 18.472 1830 1834 1842 VV 2 10500 389493 0.25% 0.027%

26 18.703 1842 1857 1868 VV 121208 4314891 2.78% 0.295%


27 18.843 1868 1871 1876 VV 10017 352314 0.23% 0.024%
28 18.974 1876 1884 1907 VV 2 187472 9063529 5.83% 0.620%
29 19.294 1907 1916 1933 VV 458933 16167929 10.41% 1.106%
30 19.495 1933 1936 1944 VV 2 15406 861207 0.55% 0.059%

31 19.676 1944 1954 1962 VV 819408 31395455 20.21% 2.148%


32 19.776 1962 1964 1968 VV 2 61865 1803890 1.16% 0.123%
33 19.826 1968 1969 1977 VV 2 55111 2410028 1.55% 0.165%
34 20.077 1989 1994 1997 VV 2 15894 719271 0.46% 0.049%
35 20.298 2010 2016 2020 VV 8 6769 359750 0.23% 0.025%

36 20.388 2020 2025 2034 VV 7 9107 600900 0.39% 0.041%


37 20.538 2034 2040 2071 VV 44027 3069674 1.98% 0.210%
38 20.899 2071 2076 2081 VV 4 5577 271517 0.17% 0.019%
39 21.050 2084 2091 2094 VV 8 5727 295493 0.19% 0.020%
40 21.110 2094 2097 2099 VV 3 6441 173861 0.11% 0.012%

41 21.180 2099 2104 2130 VV 2 45876 2436070 1.57% 0.167%


42 21.521 2130 2138 2142 VV 7 4862 286800 0.18% 0.020%
43 21.732 2142 2159 2171 VV 44281 2249481 1.45% 0.154%
44 21.882 2171 2174 2179 VV 7 7011 337278 0.22% 0.023%
45 22.063 2179 2192 2212 VV 2 294117 11102238 7.15% 0.759%

46 22.284 2212 2214 2222 VV 6 12026 666261 0.43% 0.046%


47 22.394 2222 2225 2259 VV 7 12506 1207089 0.78% 0.083%
48 22.815 2259 2267 2296 VV 202568 7025446 4.52% 0.481%
49 23.176 2296 2303 2318 VV 2 43771 2061359 1.33% 0.141%
50 23.397 2318 2325 2335 VV 3 34067 1657242 1.07% 0.113%

51 23.708 2335 2356 2365 VV 2472819 135099648 86.95% 9.242%


52 23.878 2365 2373 2402 VV 845418 39607036 25.49% 2.709%
53 24.300 2407 2415 2421 VV 2 68340 2957584 1.90% 0.202%
54 24.410 2421 2426 2435 VV 85407 3302098 2.13% 0.226%
55 24.560 2435 2441 2447 VV 3 31316 1371085 0.88% 0.094%

56 24.741 2447 2459 2467 VV 2 372755 14178878 9.13% 0.970%


57 25.002 2467 2485 2502 VV 2521193 155375406 100.00% 10.629%
58 25.222 2502 2507 2520 VV 97767 4901432 3.15% 0.335%
59 25.513 2526 2536 2551 VV 1297354 51588852 33.20% 3.529%
Annexe II
60 25.684 2551 2553 2561 VV 2 48279 2058446 1.32% 0.141%

61 25.824 2561 2567 2575 VV 168876 6342752 4.08% 0.434%


62 25.945 2575 2579 2588 VV 66125 3211727 2.07% 0.220%
63 26.115 2588 2596 2605 VV 2 78633 5356770 3.45% 0.366%
64 26.276 2605 2612 2619 VV 273076 10637934 6.85% 0.728%
65 26.426 2619 2627 2642 VV 4 104036 8581494 5.52% 0.587%

66 26.657 2642 2650 2652 VV 87137 3299421 2.12% 0.226%


67 26.717 2652 2656 2666 VV 2 114460 5846145 3.76% 0.400%
68 26.907 2666 2675 2681 VV 3 306394 15116016 9.73% 1.034%
69 27.028 2681 2687 2693 VV 301818 12321075 7.93% 0.843%
70 27.138 2693 2698 2701 VV 343323 12282383 7.90% 0.840%

71 27.208 2701 2705 2712 VV 2 375776 16513426 10.63% 1.130%


72 27.379 2712 2722 2736 VV 5 381898 25606176 16.48% 1.752%
73 27.600 2736 2744 2751 VV 593999 23695456 15.25% 1.621%
74 27.740 2751 2758 2772 VV 2 794797 39890210 25.67% 2.729%
75 27.900 2772 2774 2777 VV 3 76968 2140209 1.38% 0.146%

76 27.971 2777 2781 2784 VV 107045 3866153 2.49% 0.264%


77 28.041 2784 2788 2791 VV 117747 4318426 2.78% 0.295%
78 28.131 2791 2797 2802 VV 3 298207 12212089 7.86% 0.835%
79 28.241 2802 2808 2823 VV 732105 38515434 24.79% 2.635%
80 28.432 2823 2827 2838 VV 139397 7478556 4.81% 0.512%

81 28.623 2838 2846 2858 VV 5 46548 4263804 2.74% 0.292%


82 28.823 2858 2866 2870 VV 5 41891 2548612 1.64% 0.174%
83 28.934 2870 2877 2879 VV 3 93215 3681154 2.37% 0.252%
84 29.044 2879 2888 2892 VV 2 795899 36429269 23.45% 2.492%
85 29.174 2892 2901 2912 VV 1441192 73947223 47.59% 5.058%

86 29.335 2912 2917 2932 VV 2 351781 20019209 12.88% 1.369%


87 29.565 2932 2940 2944 VV 3 226776 10873617 7.00% 0.744%
88 29.676 2944 2951 2955 VV 4 222099 12478362 8.03% 0.854%
89 29.746 2955 2958 2965 VV 3 175178 7461331 4.80% 0.510%
90 29.836 2965 2967 2970 VV 2 87092 2773146 1.78% 0.190%

91 29.896 2970 2973 2977 VV 4 87021 3150604 2.03% 0.216%


92 30.007 2977 2984 2987 VV 293459 12460967 8.02% 0.852%
93 30.077 2987 2991 3000 VV 5 305317 18126582 11.67% 1.240%
94 30.207 3000 3004 3007 VV 311147 11711394 7.54% 0.801%
95 30.308 3007 3014 3030 VV 5 423724 40672596 26.18% 2.782%

96 30.579 3030 3041 3053 VV 7 829038 62674935 40.34% 4.287%


97 30.729 3053 3056 3065 VV 3 211276 11394312 7.33% 0.779%
98 30.899 3065 3073 3085 VV 668442 33972176 21.86% 2.324%
99 31.030 3085 3086 3096 VV 6 114807 6866566 4.42% 0.470%
100 31.230 3096 3106 3113 VV 2 258690 16434733 10.58% 1.124%

101 31.341 3113 3117 3136 VV 177304 13019130 8.38% 0.891%


102 31.602 3136 3143 3156 VV 4 90376 6626399 4.26% 0.453%
103 31.812 3156 3164 3166 VV 3 60927 2740553 1.76% 0.187%
104 31.923 3166 3175 3193 VV 7 88726 9295844 5.98% 0.636%
105 32.173 3193 3200 3205 VV 7 33954 2142786 1.38% 0.147%

106 32.294 3205 3212 3223 VV 8 37973 3497416 2.25% 0.239%


107 32.444 3223 3227 3231 VV 7 33835 1543677 0.99% 0.106%
108 32.514 3231 3234 3250 VV 7 32289 2686634 1.73% 0.184%
109 32.715 3250 3254 3255 VV 4 18513 575508 0.37% 0.039%
110 32.795 3255 3262 3268 VV 6 33839 1987632 1.28% 0.136%

111 32.916 3268 3274 3283 VV 9 30895 2358585 1.52% 0.161%


112 33.066 3283 3289 3303 VV 2 39617 2919487 1.88% 0.200%
113 33.247 3303 3307 3312 VV 17968 831780 0.54% 0.057%
114 33.407 3312 3323 3335 VV 6 31503 2810438 1.81% 0.192%
115 33.788 3354 3361 3363 VV 5 13834 614128 0.40% 0.042%

116 33.878 3363 3370 3381 VV 6 18786 1378442 0.89% 0.094%


117 34.119 3381 3394 3403 VV 6 11554 1203150 0.77% 0.082%
118 34.240 3403 3406 3413 VV 9 9536 507059 0.33% 0.035%
119 34.360 3413 3418 3429 VV 2 14242 866102 0.56% 0.059%
120 34.540 3429 3436 3444 VV 2 12143 793380 0.51% 0.054%

121 34.721 3450 3454 3463 VV 9 7090 426725 0.27% 0.029%


122 34.942 3469 3476 3494 VV 4 12606 885814 0.57% 0.061%
123 35.243 3494 3506 3507 VV 8 3855 188634 0.12% 0.013%
124 35.283 3507 3510 3519 VV 8 4171 222968 0.14% 0.015%
125 35.624 3529 3544 3548 VV 8 6932 497622 0.32% 0.034%

126 35.704 3548 3552 3563 VV 4 7383 409059 0.26% 0.028%


127 36.015 3563 3583 3624 VV 2 565363 38235784 24.61% 2.616%
128 36.466 3624 3628 3637 VV 5 11070 712622 0.46% 0.049%
129 36.587 3637 3640 3644 VV 6 7486 317237 0.20% 0.022%
130 36.657 3644 3647 3652 VV 7 6749 295542 0.19% 0.020%
Annexe II
131 36.747 3652 3656 3668 VV 4 6976 510719 0.33% 0.035%
132 37.018 3668 3683 3694 VV 6 12093 1195779 0.77% 0.082%
133 37.239 3700 3705 3718 VV 6 6128 477113 0.31% 0.033%
134 37.650 3733 3746 3780 VV 6 3562 515776 0.33% 0.035%
135 38.101 3783 3791 3802 VV 6 2855 217597 0.14% 0.015%

136 38.522 3821 3833 3851 PV 3 11653 731783 0.47% 0.050%


137 38.823 3851 3863 3869 PV 140481 7226885 4.65% 0.494%
138 38.914 3869 3872 3899 VV 4 98059 7094181 4.57% 0.485%
139 39.245 3899 3905 3913 VV 10 14022 1005499 0.65% 0.069%
140 39.375 3913 3918 3947 VV 6 16910 1317115 0.85% 0.090%

141 41.361 4106 4116 4129 VV 4 2068 98246 0.06% 0.007%


142 43.859 4356 4365 4378 PV 10155 587239 0.38% 0.040%
143 44.230 4396 4402 4415 VV 1818 100630 0.06% 0.007%
144 44.942 4465 4473 4495 PV 2 38761 1849040 1.19% 0.126%
145 45.584 4531 4537 4540 PV 8 740 19387 0.01% 0.001%

146 47.008 4670 4679 4689 PV 8 1368 68316 0.04% 0.005%

Sum of corrected areas: 1461873006

Abundance

TIC: LAURIER3.D
23.71
25.00
2400000

2200000

2000000

1800000

1600000
17.11 29.18
1400000 25.52

1200000
14.98
1000000
19.68 23.87 30.57
27.74
29.04
800000 28.25
30.90
27.60
600000
19.29
400000

200000

12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00
Time-->

Figure A 2 :Chromatogramme de l'huile essentielle de la tige du laurier noble


Annexe II
Area Percent Report
Data File : C:\MSDCHEM\1\DATA\LAURIER4.D Vial: 1
Acq On : 10 May 2011 14:24 Operator: FATY
Sample : Huile essentielle du Laurier noble feuilles Inst : Instrumen
Misc : Etudiante Guedouari de l'Université d'IN Multiplr: 1.00
Sample Amount: 0.00
MS Integration Params: EVENTS.E
Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\TEST-1.M (Chemstation Integrator)
Title :
Signal : TIC
peak R.T. first max last PK peak corr. corr. % of
# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------
1 1.401 126 132 142 BV 390696 4382791 1.50% 0.172%
2 1.581 142 150 199 PB 1659103 46139556 15.74% 1.810%
3 11.712 1151 1160 1174 BV 42611 1153955 0.39% 0.045%
4 11.932 1174 1182 1197 PV 424835 11233792 3.83% 0.441%
5 12.424 1223 1231 1246 VV 83797 2301458 0.79% 0.090%

6 13.316 1300 1320 1324 BV 1013770 32091818 10.95% 1.259%


7 13.407 1324 1329 1348 VV 534652 16050467 5.48% 0.630%
8 13.878 1360 1376 1400 VV 2 102370 5556782 1.90% 0.218%
9 14.309 1400 1419 1431 VV 3 19904 1405205 0.48% 0.055%
10 14.490 1431 1437 1449 VV 50989 1722294 0.59% 0.068%

11 14.711 1449 1459 1472 PV 72329 3074383 1.05% 0.121%


12 15.302 1472 1518 1551 VV 3 2605146 271657758 92.69% 10.655%
13 15.684 1551 1556 1566 VV 46556 2423553 0.83% 0.095%
14 16.025 1584 1590 1606 VV 229033 7181105 2.45% 0.282%
15 16.255 1606 1613 1622 VV 202946 6804634 2.32% 0.267%

16 16.386 1622 1626 1641 VB 36765 1196582 0.41% 0.047%


17 16.897 1665 1677 1699 PV 4 109532 4901467 1.67% 0.192%
18 17.449 1699 1732 1771 VV 2 2224241 282299751 96.32% 11.072%
19 17.940 1771 1781 1792 VV 3 54970 3012566 1.03% 0.118%
20 18.422 1821 1829 1837 VV 3 72719 2960480 1.01% 0.116%

21 18.552 1837 1842 1861 VV 4 37560 1781642 0.61% 0.070%


22 18.873 1861 1874 1886 VV 54586 2404006 0.82% 0.094%
23 19.184 1896 1905 1927 VV 3 486910 24942443 8.51% 0.978%
24 19.515 1927 1938 1956 VV 965333 39093748 13.34% 1.533%
25 19.726 1956 1959 1963 VV 2 27457 1128543 0.39% 0.044%

26 19.926 1963 1979 1985 VV 1572377 82790730 28.25% 3.247%


27 20.007 1985 1987 1994 VV 3 164000 6542832 2.23% 0.257%
28 20.117 1994 1998 2011 VV 87300 4974817 1.70% 0.195%
29 20.729 2050 2059 2079 VV 198518 9107495 3.11% 0.357%
30 21.371 2113 2123 2151 VV 393290 14217302 4.85% 0.558%

31 21.912 2166 2177 2195 VV 113412 4658758 1.59% 0.183%


32 22.253 2195 2211 2219 VV 831319 25498186 8.70% 1.000%
33 22.344 2219 2220 2232 VV 3 50366 2359793 0.81% 0.093%
34 23.006 2276 2286 2314 PV 593372 20106832 6.86% 0.789%
35 23.347 2314 2320 2327 VV 3 27468 1186065 0.40% 0.047%

36 23.567 2335 2342 2357 VV 5 109799 7248170 2.47% 0.284%


37 23.969 2357 2382 2388 VV 3 2962801 293078772 100.00% 11.495%
38 24.129 2388 2398 2426 VV 1814080 98526942 33.62% 3.864%
39 24.500 2426 2435 2441 VV 3 98525 4731327 1.61% 0.186%
40 24.611 2441 2446 2453 VV 3 91689 3879005 1.32% 0.152%

41 24.751 2453 2460 2465 VV 110465 4096862 1.40% 0.161%


42 24.962 2465 2481 2488 VV 1312905 50799818 17.33% 1.992%
43 25.242 2488 2509 2521 VV 2916315 248545198 84.80% 9.748%
44 25.413 2521 2526 2543 VV 322315 15264438 5.21% 0.599%
45 25.764 2543 2561 2580 VV 2548661 149754511 51.10% 5.874%

46 26.025 2580 2587 2595 VV 661780 24358381 8.31% 0.955%


47 26.135 2595 2598 2607 VV 3 123517 6508707 2.22% 0.255%
48 26.306 2607 2615 2622 VV 8 106116 7349941 2.51% 0.288%
49 26.466 2622 2631 2637 VV 546181 21570130 7.36% 0.846%
50 26.566 2637 2641 2643 VV 209553 6815659 2.33% 0.267%

51 26.627 2643 2647 2659 VV 3 245629 11368056 3.88% 0.446%


52 26.897 2659 2674 2680 VV 3 119921 8899988 3.04% 0.349%
53 27.098 2680 2694 2700 VV 2 908305 43156881 14.73% 1.693%
54 27.218 2700 2706 2713 VV 659010 27691957 9.45% 1.086%
55 27.409 2713 2725 2731 VV 2 901575 46156171 15.75% 1.810%

56 27.559 2731 2740 2755 VV 4 549762 36571915 12.48% 1.434%


57 27.770 2755 2761 2767 VV 2 296221 12094247 4.13% 0.474%
58 27.910 2767 2775 2794 VV 2 712340 37679882 12.86% 1.478%
59 28.141 2794 2798 2801 VV 75071 2567991 0.88% 0.101%
60 28.211 2801 2805 2808 VV 2 93742 3517460 1.20% 0.138%

61 28.302 2808 2814 2819 VV 3 245443 10395506 3.55% 0.408%


Annexe II
62 28.422 2819 2826 2839 VV 924024 43120045 14.71% 1.691%
63 28.613 2839 2845 2860 VV 207958 10686994 3.65% 0.419%
64 29.204 2875 2904 2909 VV 2 812871 46792162 15.97% 1.835%
65 29.335 2909 2917 2928 VV 1112488 56543304 19.29% 2.218%

66 29.505 2928 2934 2941 VV 2 347250 15501188 5.29% 0.608%


67 29.736 2949 2957 2966 VV 4 277216 17068946 5.82% 0.669%
68 29.836 2966 2967 2972 VV 2 161962 5370529 1.83% 0.211%
69 29.917 2972 2975 2986 VV 5 140723 8450034 2.88% 0.331%
70 30.248 2993 3008 3016 VV 6 323522 25592879 8.73% 1.004%

71 30.378 3016 3021 3025 VV 272100 11696741 3.99% 0.459%


72 30.448 3025 3028 3030 VV 3 258808 7368915 2.51% 0.289%
73 30.498 3030 3033 3038 VV 283127 12587159 4.29% 0.494%
74 30.589 3038 3042 3047 VV 4 245727 11764009 4.01% 0.461%
75 30.739 3047 3057 3069 VV 6 720188 55827167 19.05% 2.190%

76 30.900 3069 3073 3082 VV 4 216697 12610157 4.30% 0.495%


77 31.050 3082 3088 3096 VV 251913 13663075 4.66% 0.536%
78 31.160 3096 3099 3101 VV 4 115369 3618938 1.23% 0.142%
79 31.241 3101 3107 3115 VV 8 120708 8271149 2.82% 0.324%
80 31.391 3115 3122 3128 VV 2 172777 9984548 3.41% 0.392%

81 31.511 3128 3134 3152 VV 2 181890 13116559 4.48% 0.514%


82 31.782 3152 3161 3173 VV 4 67799 5406209 1.84% 0.212%
83 31.983 3173 3181 3187 VV 3 57787 3579460 1.22% 0.140%
84 32.083 3187 3191 3213 VV 8 51836 5090298 1.74% 0.200%
85 33.237 3297 3306 3320 VV 3 53636 3611200 1.23% 0.142%

86 33.537 3329 3336 3352 VV 3 37255 1875287 0.64% 0.074%


87 34.039 3365 3386 3399 BV 4 23759 1344020 0.46% 0.053%
88 34.701 3445 3452 3466 PV 3 14744 801163 0.27% 0.031%
89 36.075 3577 3589 3600 PV 2 79501 3994560 1.36% 0.157%
90 36.206 3600 3602 3625 VB 19310 1158349 0.40% 0.045%

91 38.683 3839 3849 3871 BV 34440 2144621 0.73% 0.084%

Sum of corrected areas: 2549611170


Annexe II

Abu n da nce

TIC: L AURI ER4 .D


2 3. 97
2 5. 24
2 80 0 00 0

1 5 .3 0
2 60 0 00 0 2 5. 76

2 40 0 00 0
17 .4 4
2 20 0 00 0

2 00 0 00 0
2 4 .1 3
1 80 0 00 0

1 60 0 00 0 1 9. 92

1 40 0 00 0 24 .9 6

1 20 0 00 0
29 .3 3
1 3 .3 2
1 00 0 00 0 1 9. 51 2 8. 43
2727.1 01
.4
2 2. 26 29 .2 1
80 0 00 0 3 0. 74
26 .0 3 2
27
7 .9 1
.2 2
2 3. 01
60 0 00 0 1 3. 41 2
26 .4 7 .5 6
7
1 9. 19
1 1 .9 3
40 0 00 0

20 0 00 0

1 2 .0 0 1 4 .0 0 16 .0 0 18 .0 0 20 .0 0 22 .0 0 2 4.0 0 2 6.0 0 2 8. 00 3 0. 00 3 2. 00
Time- ->

Figure A 3 : Chromatogramme de l'huile essentielle de la feuille du laurier noble

Figure A 4 : Spectre de masse d’eucalyptol

Figure A 5 : Spectre de masse de trans ocimene


Annexe II

Figure A 6 : Spectre de masse de linalool

Figure A 7 : Spectre de masse de 4-terpineol

Figure A 8 : Spectre de masse linalyl acetate


Annexe II

Area Percent Report

Data File : C:\MSDCHEM\1\DATA\LAURIER1.D Vial: 1

Acq On : 8 Mars 2012 09:38 Operator: faty

Sample : Laurier noble Inst : Instrumen

Misc : Etudiante Guedouari de INH Multiplr: 1.00

Sample Amount: 0.00

MS Integration Params: EVENTS.E

Method : C:\MSDCHEM\1\METHODS\DEFAULT.M (Chemstation Integrator)

Title :

Signal : TIC

peak R.T. first max last PK peak corr. corr. % of

# min scan scan scan TY height area % max. total

--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------

1 16.209 2804 2822 2844 BB 639797 17739399 3.28% 0.717%

2 18.227 3155 3175 3194 BV 2 434576 13157023 2.43% 0.531%

3 20.536 3562 3579 3606 BB 211438 7294291 1.35% 0.295%

4 20.907 3626 3644 3687 BB 2 629842 25476842 4.71% 1.029%

5 23.336 4048 4069 4079 BV 401612 10820957 2.00% 0.437%

6 24.885 4325 4340 4349 BV 2 458712 14465914 2.68% 0.584%

7 24.988 4349 4358 4375 VV 380162 13701824 2.53% 0.554%

8 25.285 4375 4410 4447 VB 3 117942 10599934 1.96% 0.428%

9 25.691 4469 4481 4497 BV 2 167011 5866671 1.09% 0.237%

10 26.091 4523 4551 4635 VB 6867800 283733596 52.49% 11.462%

11 26.800 4655 4675 4701 BV 586834 21000765 3.88% 0.848%

12 27.114 4717 4730 4747 BV 2 257049 8377679 1.55% 0.338%


Annexe II

13 27.583 4801 4812 4835 VV 2 229857 8685488 1.61% 0.351%

14 28.011 4857 4887 4907 BV 9 183654 13034835 2.41% 0.527%

15 28.354 4933 4947 4958 VV 2 707911 27688179 5.12% 1.118%

16 28.468 4958 4967 4970 VV 4 384330 12508873 2.31% 0.505%

17 28.531 4970 4978 4990 VV 2 704498 29202303 5.40% 1.180%

18 28.663 4990 5001 5032 VV 9 281724 19337558 3.58% 0.781%

19 28.914 5032 5045 5055 VV 4 178643 7597521 1.41% 0.307%

20 29.120 5055 5081 5104 VV 4 3066790 157560753 29.15% 6.365%

21 29.497 5131 5147 5154 VV 9 131181 6819610 1.26% 0.275%

22 29.589 5154 5163 5168 VV 3 186109 7035513 1.30% 0.284%

23 30.240 5168 5277 5291 VV 2 3573138 406565731 75.21% 16.424%

24 30.343 5291 5295 5310 VV 8 365916 17859858 3.30% 0.721%

25 30.486 5310 5320 5347 VV 3 353856 20954650 3.88% 0.846%

26 30.846 5367 5383 5400 VV 4 319844 16685230 3.09% 0.674%

27 31.360 5447 5473 5499 VV 3 338941 24275812 4.49% 0.981%

28 31.566 5499 5509 5515 VV 7 211065 9167387 1.70% 0.370%

29 31.663 5515 5526 5539 VV 5 342236 21815172 4.04% 0.881%

30 31.755 5539 5542 5557 VV 8 264241 10929443 2.02% 0.442%

31 32.092 5557 5601 5633 VV 2 5749181 372727110 68.95% 15.057%

32 32.338 5633 5644 5648 VV 6 356216 14485746 2.68% 0.585%

33 32.566 5648 5684 5721 VV 8376439 540594084 100.00% 21.838%

34 32.852 5721 5734 5750 VV 2 742094 35529777 6.57% 1.435%

35 33.732 5852 5888 5890 VV 10 393452 23535826 4.35% 0.951%


Annexe II

36 33.812 5890 5902 5945 VV 2 1231207 65955966 12.20% 2.664%

37 34.201 5945 5970 5977 VV 4 536961 25970616 4.80% 1.049%

38 34.281 5977 5984 6015 VV 4 554073 31936821 5.91% 1.290%

39 34.515 6015 6025 6048 VV 6 161187 7331146 1.36% 0.296%

40 35.447 6174 6188 6206 PV 5 113486 6355520 1.18% 0.257%

41 35.778 6206 6246 6278 VV 5 575541 45122049 8.35% 1.823%

42 36.053 6278 6294 6297 PV 6 76528 2274399 0.42% 0.092%

43 36.104 6297 6303 6313 VV 9 87495 3627928 0.67% 0.147%

44 36.224 6313 6324 6337 VV 5 206134 7658124 1.42% 0.309%

45 37.299 6474 6512 6552 BV 3 504782 29569102 5.47% 1.194%

46 40.236 6999 7026 7074 BB 6 142931 12846680 2.38% 0.519%

Sum of corrected areas: 2475479704

Abundance

TIC: LAURIER1.D

8000000

7500000

7000000

6500000

6000000

5500000

5000000

4500000

4000000

3500000

3000000

2500000

2000000

1500000

1000000

500000

16.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0042.00
Time-->

Figure A 9 : Chromatogramme de l’huile essentielle des fruits du laurus nobilis


Annexe II
Abundance

Scan 4549 (26.079 min): LAURIER1.D


81 93

450000
67

400000

350000

300000 107
53

250000

200000 121
147

150000
133 161
189
100000

50000
175
204
60
0
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210
m/z-->

Figure A 10 : Spectre de masse de cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis (β-élémène )


Annexe III

Fiches techniques des réactifs et des colorants :

Chlorure de fer a 5% :
10 g de FeCl3 + 200 ml d’eau distillée.
L’ammoniaque ½ :
30ml d’ammoniaque + 60 ml d’eau distillée.
Acétate de plomb :
9,5 g de poudre d’acétate de plomb + 10 ml eau désoxydée (bouillir puis refroidir).
Réactif de Dragen droff :
-solution a : 0,85g de nitrate de bismuth + 40 ml d’eau distillée + 10 ml d’acide
acétique.
-solution b : 8 g d’iode de potassium + 2ml d’eau distillée.
On mélange a + b.
15 ml de mélange + 20 ml d’acide acétique puis compléter a 100ml de l’eau
distillée.
Réactif de stiasny :
Mélanger 10 ml de formaldéhyde a 40% avec 5 ml d’HCl concentré.
Préparation de la solution de KOH :
· Pour une concentration de 0.1 N de KOH : on fait dissoudre 1.4 g de KOH dans
l’alcool méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.1N.
· Pour une concentration de 0.5 N de KOH : on fait dissoudre 7 g de KOH dans
l’alcool éthylique ou méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.42 N.
Réactif de carr-Price :
Solution à 20% de trichlorure d’antimoine dans le chloroforme.
Glossaire

Milieux de culture
MUELLER-HINTON gélosé ( M-H ) : ( g/l )

Infusion de viande de bœuf …………………02.0g

Hydrolysat acide de caséine ………………...17.5g

Amidon ………………………………………01.5g

Agar ……………………………………………10g

pH : 7.4

Autoclaver pendant 15 min à 115°C.

GELOSE NUTRITIF ( G N ) : ( g/l )

Peptone …………………………………………5g

Extrait de levure ………………………………..2g

Extrait de viande ……………………………….1g

NaCl ……………………………………………5g

Eau……………………………………………...1l

pH : 7.5

Autoclaver pendant 15 min à 115°C.

EAU PHYSIOLOGIQUE 9% ( NaCl )

Sodium chloride ( Fluka )………………………9g

Eau déminéralisée ………………………...1000ml

SABOURAUD GELOSE SIMPLE ( SAB ) : (g/l )

Néopeptone ……………………………………10g

Glucose ………………………………………..20g

Agar …………………………………………...20g

pH : 5 - 5.6

Autoclaver pendant 15 min à 115°.

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