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/FHC/UMBB/2012
SCIENTIFIQUE
Mémoire de Magister
Présenté par :
Devant le jury :
Ratiba
Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puissant, pour m’avoir donnée la force et la
patience.
Une thèse, tant nominative soit elle, est avant tout un travail de réflexion collective, donc
au terme de ce travail, il m’est à la fois un plaisir et un devoir de remercier sincèrement
toutes les personnes qui ont participé à sa réalisation.
Je tiens, en tout premier lieu, à remercier le personne sans qui ce présent travail n’aurait
jamais vu le jour : NABIEV Mohamed , Professeur à la faculté des hydrocarbures et de la
chimie, pour avoir encadré et dirigé ce travail avec une grande rigueur scientifique, sa
disponibilité, ses conseils et la confiance qu’il m’accordé. Qui a su trouver les mots pour
m’amener à exprimer mon rêve, faire de la recherche et transmettre les connaissances ainsi
mises en évidence ; il m’a soutenue tout au long de cette thèse, dans les bons moments,
comme dans les périodes de découragement. Je le remercie aussi pour ses qualités
humaines, qu’il trouve ici le témoignage de mon grand respect et de mon estime.
Mes remerciements s’adressent aussi aux membres du laboratoire de génie des procédés
chimiques et pharmaceutiques :Mieur AKOUCHE, Mme Hafsa ,Meme BOUDERBALA et à
Melle Djamila……... Qui ont mis à ma disposition les condition matérielles nécessaires
pour la réalisation de ce travail tout au long la période de recherche qu’ils ici mon respect
et reconnaissance.
Que les honorables membres du jury veuillent croire en mes remerciements anticipés pour
avoir accepté de faire partie de mon jury de thèse. J’ai apprécié notre interaction lors de
mon examen de thèse et lors de ma soutenance publique.
Je tiens à remercier, également, tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la
réalisation de ce modeste travail.
Liste des symboles et d’abréviations
°C : dégrée Celcius
DMSO : Diméthylsulfoxyde
DO : Densité Optique
DPPH : 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle
Fig : Figure
μg : Microgramme
H : Taux d’humidité
HD : Hydrodistillation
HE : Huile essentielle
IA : Indice d’acide
IE : Indice d’ester
IPP : Diphosphate d’isopentényle
II : Indice d’iode
IR : Indice de réfraction
IR : Infrarouge
J : Jours
Kg : Kilogramme
μl : microlitre
μm : Micromètre
μmol : micromole
nm : nanomètre
P : Pression
pH : Potentiel d’Hydrogène
ppm : partie par million
SAB : sabouraud
SM : Spectrométrie de Masse
tr : Temps de rétention
UI : unité internationale
UV : Ultra-violet
Vf : Volume finale
Vi : Volume initiale
% : pourcentage
ml : milli Litre
tr : trace
Résumé :
Les plantes sont capable de produire des substances naturelles très diversifiées, qui peuvent
être très utiles pour l’homme. Parmi ces substances on cite les huiles essentielles. A cet
effet , et dans le cadre de la valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéresse aux
espèces de la famille des Lauracées qui est l’une des familles les plus utilisés dans le
monde comme source d’épice. La plante sur laquelle a porté notre choix est une espèce de
laurier ( Laurus nobilis L.) provenant de la région de larba (BLIDA). Dans ce contexte,
l’objectif de ce travail est l’étude comparative de la pharmacognosie des différentes parties
du laurus nobilis à savoir les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines .
L’analyse phytochimique a révélé la présence de quelques groupes chimiques (polyphénols
totaux, des alcaloïdes…..etc) .Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à
partir des feuilles , des tiges, des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats
des rendements en huile essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%,
respectivement. Les racines du laurus nobilis ne contenant pas d’huile essentielle. Les
quatre huiles essentielles obtenues ont été analysées qualitativement, ensuite ils ont été
caractérisées par leur composition chimique grâce à des analyses par CG et CG/SM ; dans
les tiges du laurier l’eugénol méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide
apparaissent comme les constituants majoritaires de l'HE (10.62%, 9.24%, 5.66% et
5.05%). Outre le 1,8-cinéole (10.65% ) , les principales composantes des feuilles étaient le
linalool et le terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE (
11.07% , 11.49%), suivi du Eugénol méthyl ether ( 9.74 %).Alors que dans l'HE des fruits
les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene, le Lauric anhydride , le
cedren-13-ol et le β-élémène (21.83%, 16.42% ,15.05% et 11.46% ) . Les ocimenes étaient
absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le composant majoritaire des feuilles
était présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un pourcentage faible. D’où la
composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des tiges et des fruits du laurier
noble est différentes les une des autres.
Mots clé :Laurus nobilis, étude phytochimique, huile essentielle, test de tolérance, activité
antimicrobienne.
Summary:
Plants are capable of producing highly diverse natural substances, which can be very useful
to humans. Among these substances are cited as essential oils. For this purpose, and
through the enhancement of the flora of Algeria, it was interested in the species of the
Lauraceae family, which is one of the most families in use worldwide as a source of spice.
The plant that has turned our choice is a species of laurel (Laurus nobilis L.) from the
region of Larba (BLIDA). In this context, the objective of this work is the comparative
study of pharmacognosy the different parts of Laurus nobilis ; leaves, stems, flowers, fruits
and roots. The phytochemical analysis revealed the presence of some chemical groups (
polyphenols, alkaloids, etc. .....). The volatile oils were isolated by hydrodistillation from
leaves, stems, fruits and dried flowers of Laurus nobilis, the results of essential oil yields
are different, 0.79%, 0.1%, 1.15%, 0.82%, respectively. The roots of Laurus nobilis are not
contain essential oil. The four essential oils obtained were analyzed qualitatively, then they
were characterized by their chemical composition through analysis by GC and GC / MS, in
the stems of laurel eugenol methyl ether, terpényl acetate, linalool and caryophyllene oxide
appears as predominant materials of the essential oil (10.62%, 9.24%, 5.66% and 5.05%).
Besides 1,8-cineole (10.65%), the main components of the leaves were linalool and
terpényl acetate appears to be the major constituents of the essential oil (11.07%, 11.49%),
followed by eugenol methyl ether (9.74% ). While in the fruit essential oil the major
components that have been found are the (E)-β-ocimene, the Lauric anhydride, cedren-13-
ol and β-elemene (21.83%, 16.42%, 15.05% and 11.46%). The ocimenes were absent in
the leaves and stems. 1,8-cineole, the major component of the leaves was also present in
the stems and fruits but with a low percentage. Hence the chemical composition of
essential oils from leaves, stems and fruits of the laurel is different from one another. After
ensuring the quality of the raw material, was carried to the formulation of the two
ointments essential oil from leaves of Laurus nobilis, a decongestant and other antiseptic.
The macroscopic tests, homogeneity and pH of ointments were determined . The results of
tolerance tests revealed ointments prepared non-irritating. The volatile extracts, ointments
made were also subjected to screening for their antimicrobial activity as possible in vitro
against three strains of pathogenic bacteria and one yeast species, using the diffusion
method from a solid disk. All volatile extracts reacted positively on at least one microbial
strains tested. The volatile extracts of the same plant showed different activities and MICs
were determined from the most active extracts in agar medium, the essential oil of Laurus
nobilis leaf has demonstrated a strong antimicrobial activity even screws Screw strains
resistant to multiple antibiotics.
Key words: Laurus nobilis, phytochemical study, essential oil, tolerance test,
antimicrobial activity.
:ﻣﻠﺨﺺ
ﻣﻦ ﺑﯿﻦ ھﺬه اﻟﻤﻮاد. واﻟﺘﻲ ﯾﻤﻜﻦ أن ﺗﻜﻮن ﻣﻔﯿﺪة ﺟﺪا ﻟﻺﻧﺴﺎن،اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻗﺎدرة ﻋﻠﻰ إﻧﺘﺎج ﻣﻮاد طﺒﯿﻌﺔ ﻣﺘﻨﻮﻋﺔ ﻟﻠﻐﺎﯾﺔ
,Lauracees اھﺘﻤﻤﻨﺎ ﺑﻨﻮع ﻣﻦ أﺳﺮة, وذﻟﻚ ﻣﻦ ﺧﻼل ﺗﻌﺰﯾﺰ اﻟﻨﺒﺎﺗﺎت ﻓﻲ اﻟﺠﺰاﺋﺮ، ﻟﮭﺬا اﻟﻐﺮض.اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ
اﻟﻤﺤﻄﺔ اﻟﺘﻲ ﺣﻮﻟﺖ.اﻟﺘﻲ ﺗﻌﺪ واﺣﺪة ﻣﻦ اﻟﻌﺎﺋﻼت اﻷﻛﺜﺮ اﺳﺘﺨﺪاﻣﺎ ﻓﻲ ﺟﻤﯿﻊ أﻧﺤﺎء اﻟﻌﺎﻟﻢ ﺑﺎﻋﺘﺒﺎرھﺎ ﻣﺼﺪرا ﻣﻦ اﻟﺘﻮاﺑﻞ
ﻓﻲ ھﺬا اﻟﺴﯿﺎق ﻓﺎن اﻟﮭﺪف. ( ﺑﺎﻟﺒﻠﯿﺪةLarba ) ( ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ اﻷرﺑﻌﺎءnobilis Laurus) ﺧﯿﺎرﻧﺎ ھﻮ ﻧﻮع ﻣﻦ اﻟﻐﺎر
،اﻟﻔﻮاﻛﮫ، و ا ﻀﺎ اﻟﺴﯿﻘﺎنnobilis Laurus ﻣﻦ ھﺬا اﻟﻌﻤﻞ ھﻮ دراﺳﺔ و ﻣﻘﺎرﻧﺔ ﻷﺟﺰاء ﻣﻦ اﻟﻌﻘﺎﻗﯿﺮ اﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻣﻦ أوراق
اﻟﺦ، ﻗﻠﻮﯾﺪات، ﻛﺸﻒ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﻲ اﻟﻨﺒﺎﺗﻲ وﺟﻮد ﺑﻌﺾ اﻟﻤﺠﻤﻮﻋﺎت اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ )اﻟﺒﻮﻟﯿﻔﯿﻨﻮل اﻟﻜﻠﻲ. اﻟﺠﺬور واﻟﺰھﻮر
ﻋﻠﻰ٪0.82 ،٪1.15 ،٪0.1 ،٪0.79 ، ﻧﺘﺎﺋﺞ ﻋﺎﺋﺪات اﻟﻨﻔﻂ اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ، Laurus bilisno اﻟﻤﺠﻔﻔﺔ ﻣﻦ ﻧﺒﺘﺔ
وﻗﺪ ﺗﻢ ﺗﺤﻠﯿﻞ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ اﻷرﺑﻌﺔ. ) اﻟﻐﺎر ( ﻻ ﺗﺤﺘﻮي ﻋﻠﻰ اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔnobilis sLauru ﺟﺬور.اﻟﺘﻮاﻟﻲ
\GC وGC ﺛﻢ ﻛﺎﻧﺖ ﺗﺘﻤﯿﺰ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻣﻦ ﺧﻼل اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ ﺑﻮاﺳﻄﺔ،اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﯿﮭﺎ ﻣﻦ اﻟﻨﺎﺣﯿﺔ اﻟﻨﻮﻋﯿﺔ
MSﺑﻤﺎ ﯾﻠﻲ :ﻓﻲ ﺳﯿﻘﺎن ﻧﺒﺘﺔ اﻟﻐﺎر ﯾﺒﺪو اﻟﻐﺎﻟﺐ ﻣﻦ ﻣﻮاد ,terpenyl acetate ,eugenol methyl ether :
ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ ( 10.65%) 1 , 8-cineolﻛﺎﻧﺖ اﻟﻌﻨﺎﺻﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق linalool ،
اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﻌﺜﻮر ﻋﻠﯿﮭﺎ ھﻲ : ﻣﻜﻮﻧﺎت اﻟﻔﺎﻛﮭﺔ اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ أن ﻓﻲ ﺣﯿﻦ
ocimenes .(%11.46 ,%15.05ﻛﺎﻧﺖ ﻏﺎﺋﺒﺔ ﻓﻲ اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن .وﻛﺎن 1 , 8-cineolاﻟﻌﻨﺼﺮ اﻟﺮﺋﯿﺴﻲ ﻓﻲ
اﻷوراق أﯾﻀﺎ ﻣﻮﺟﻮدة ﻓﻲ اﻟﺴﯿﻘﺎن واﻟﻔﻮاﻛﮫ وﻟﻜﻦ ﻣﻊ ﻧﺴﺒﺔ ﻣﻨﺨﻔﻀﺔ .وﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ اﻟﺘﺮﻛﯿﺒﺔ اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻟﻌﻄﺮﯾﺔ ﻣﻦ
اﻷوراق واﻟﺴﯿﻘﺎن و اﻟﻔﻮاﻛﮫ ﻣﻦ اﻟﻐﺎر ﺗﺨﺘﻠﻒ ﻋﻦ ﺑﻌﻀﮭﺎ اﻟﺒﻌﺾ .ﺑﻌﺪ اﻟﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ ﻧﻮﻋﯿﺔ اﻟﻤﻮاد اﻟﺨﺎم،ﺗﻤﺖ ﺻﯿﺎﻏﺔ
ﻣﺮھﻤﯿﻦ ﺑﺎﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻟﻸوراق .ﺗﻢ ﺗﺤﺪﯾﺪ اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻌﯿﻨﯿﺔ ،اﻟﺘﺠﺎﻧﺲ و درﺟﺔ اﻟﺤﻤﻮﺿﺔ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ .وﻛﺸﻔﺖ ﻧﺘﺎﺋﺞ
اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ ﻟﻠﻤﺮاھﻢ اﺳﺘﻌﺪاد ﻏﯿﺮ ﻣﺰﻋﺞ .أدﺧﻠﺖ اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة اﻟﻤﺴﺘﺨﺮﺟﺔ و اﻟﻤﺮاھﻢ ﻋﻠﻰ اﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﻧﺸﺎطﮭﻢ
اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻠﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت ﻓﻲ اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺿﺪ ﺛﻼﺛﺔ ﺳﻼﻻت ﻣﻦ اﻟﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ اﻟﻤﺴﺒﺒﺔ ﻟﻸﻣﺮاض وﻧﻮع واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺨﻤﯿﺮة ،ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام
طﺮﯾﻘﺔ اﻻﻧﺘﺸﺎر ﻣﻦ ﻗﺮص ﺻﻠﺐ .ﻛﺎن رد ﻓﻌﻞ ﻛﻞ ﻣﻨﮭﺎ اﯾﺠﺎﺑﯿﺎ ﻋﻠﻰ اﻷﻗﻞ ﻋﻠﻰ واﺣﺪ ﻣﻦ اﻟﺴﻼﻻت اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﯿﺔ اﻟﺘﻲ ﺗﻢ
اﺧﺘﺒﺎرھﺎ .اﻟﺰﯾﻮت اﻟﻄﯿﺎرة ﻣﻦ ﻧﻔﺲ اﻟﻨﺒﺎت أظﮭﺮت ﺗﺤﺪﯾﺪ ﻧﺸﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ ،و أظﮭﺮت اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻷوراق
ﻛﻠﻤﺎت اﻟﺒﺤﺚ :اﻟﻐﺎر ،دراﺳﺔ ﻧﺒﺎﺗﯿﺔ ،اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ،اﺧﺘﺒﺎر اﻟﺘﺴﺎﻣﺢ ،وﻧﺸﺎط ﻣﻀﺎدات اﻟﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت.
Introduction
Introduction
Les témoignages retrouvés sur les parois rocheuses, des bas reliefs de son
environnement , des poteries en terre cuite, sont la preuve que l’homme s’est depuis la nuit
des temps servi des plantes, il leur a attribué des pouvoirs magiques, puis à appris peu à
discerner leurs propriétés. Ces plantes ont constitué pour lui une source de nourriture, voire
un moyen de guérir ses maladies . [1] On a même découvert que les animaux sauvages
utilisent instinctivement certaines plantes pour se soigner ! [2]
Alors, les substances naturelles comme les molécules bioactives issues des végétaux
suscitent actuellement un intérêt tout particulier par leurs multiples activités biologiques
(antibactérienne et antioxydante) tant appréciées dans le domaine de la santé humaine et de
l’industrie alimentaire, pharmaceutique ou cosmétique.[5]
En effet, une plante est dite médicinale lorsque l’un de ses organes par exemple la
feuille, possède des activités pharmacologiques pouvant conduire à des emplois
thérapeutiques.
Les plantes en général, se caractérisent par deux types de métabolismes qui englobe
l'ensemble de la fonction, primaire et secondaire fournissant deux types de métabolites
respectivement primaires en quantités élevées ( sucre, lipides, protéines ) et secondaires en
faible quantités mais de plus en plus grande importance qui ont été par la suite exploitées
par l'homme pour le rôle bénéfique dans un large éventail d'application.
Les huiles essentielles ou les essences, font partie de ce groupe de métabolites secondaires
et sont synthétisées et sécrétées par l’intermédiaire de cellules ou organes particuliers dans
lesquelles elles restent localisées. [ 6]
L’extraction de ces huiles essentielles est certainement la phase la plus délicate et la plus
importante du processus. Elle a pour but de capter les produits les plus subtils et les plus
fragiles élaborés par le végétal.
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Introduction
Les méthodes d’exploration et d’exploitation des matières végétales ont connu des
progrès spectaculaires quant à l’extraction et la purification de leurs principes actifs, ainsi
le passage de leur emploi sous leur forme brute à des extraits concentrés et purifiés ont
permis d’en intensifier l’effet.
Parmi les pays méditerranéen, l’Algérie, qui possède une position géographique
particulière lui accordant une large bande de végétation très variée notamment les plante
aromatique médicinales. En Algérie, la phytothérapie est une pratique très ancienne. La
connaissance empiriques se sont transmises verbalement à travers les générations et se sont
enrichies grâce à la situation géographique stratégique bien connue du l’Algérie.
Cependant, jusqu’à présent, seul le coté botanique de cette biomasse a été largement
documenté, ses propriétés biologiques ne le sont que peu. A cet effet, et dans le cadre de la
valorisation de la flore Algérienne, on s’est intéressé aux espèces de la famille des
Lauracées.
Laurus nobilis est une plante abondante choisie de cette biomasse végétale en raison du
bénéfice des propriétés thérapeutiques que lui a attribuées la médecine traditionnelle, a
savoir: les industries de l’aromatisation, de la parfumerie, de la conservation, des
cosmétiques et de la pharmacologie grâce à ses divers effets antimicrobiens et
antioxydants.
Cette étude comporte deux parties essentielles. Une partie relative à l’étude
bibliographique et une autre partie réservée à l’étude expérimentale, par conséquent dans
la partie bibliographique, nous présenterons un bilan bibliographique des connaissances
botaniques des Lauracées, en particulier l’espèce Laurus nobilis L., localisation ,
composition, utilisation….etc.
Enfin, une conclusion générale qui résume l’ensemble des résultats obtenus.
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Aperçus
bibliographique
Chapitre I
La pharmacognosie du
laurier noble.
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
· Connaitre les principales matières premières d’origine végétale utilisées telles quelles
ou pour l’extraction de certain de leur constituants ;
· Pour les principes actifs majeurs utilisés en thérapeutique, connaitre les activités
pharmacologiques, leur métabolisme, leur pharmacocinétique, leurs effets
secondaires et les contre-indications ainsi que les propriétés physicochimiques
(stabilité , solubilité , extractibilité , structure, réactivités,….) ;
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Historique :
Laurus nobilis est un arbre connu dans la mythologie grecque et romaine comme un
emblème de la victoire et le succès (Leung et Foster, 1999).Son nom commun viendrait du
celte lauer (semper virens) selon certains ou du latin laus, louange, pour souligner les
propriétés médicinales de la plante, déjà louées dans l’Antiquité. Le Laurus était consacré
à Apollon,le dieu grec de la lumière, et un symbole de paix et de la victoire utilisé pour
faire des couronnes des empereurs, des généraux, et les poètes.On pensait que, en le
mâchant, on obtiendrait le don de la prophétie. Selon Pline, le laurier était une plante
sacrée dédiée à Dionysos et à Jupiter, peut-être parce qu’on disait que les foudres
l’épargnaient. Selon Suétone, Jules César portait toujours une couronne de laurier (on
pense que c’était pour masquer sa calvitie).À Rome, on croyait que le dessèchement de
l’arbuste annonçait un désastre. À la même époque, les feuilles de laurier été à la fois un
médicament et une épice. Pendant les saturnales, des fêtes célébrées au mois de décembre,
le feuillage était tressé en guirlandes. En infusion, ses feuilles étaient consommées pour
leurs effets révulsifs et toniques sur l’estomac et la vessie ; sous forme de cataplasme,
elles passaient pour soulager les piqures de guêpe ou d’abeille. Au 1er siècle de notre ère,
le médecin grec dioscoride notait que l’écorce de laurier «brise les pierres(dans les reins)
et soulage les affections du foie ».
En Grèce ancienne, l’oracle de delphes utilisait le laurier dans ses rituels de divination.
Dans la Grèce antique, les vainqueurs des jeux olympiques ont été décorés avec des
couronnes de laurier, et ces feuilles est devenu un symbole immortel de la victoire et de
courage. Lorsque les médecins grecs ont terminé leurs études, ils ont été couronnés de
branches de laurier appelé lauris baca, et qui plus tard a donné naissance au baccalauréat
terme, qui désigne l'accomplissement d'un degré.Dans les temps bibliques, la baie était le
symbole de la richesse et de la méchanceté. En plus l'huile de laurier ou du beurre, obtenu
à partir des fruits (baies) de laurus nobilis est un ingrédient essentiel de la pommade
Laurin, une médecine populaire pour les rhumatismes et la goutte et pour le traitement de
la rate et maladies du foie. Il trouve également application en médecine
vétérinaire.[9,10,11,12,13,14]
I.3. Espèce :
Laurus nobilis L.
Laurier commun , laurier-sauce, laurier noble .
Nom latin du laurier, du celtique blaur = toujours vert. [9,11,15]
I.4. Famille :
Laurier (Laurus nobilis. L) est une plante à importance médicinales et aromatiques, qui
appartient à la famille des Lauraceae (Lauracées),famille botanique importante souvent
aromatiques, ses espèces peuvent être reconnues par leur odeur aromatique.Celle-ci
comprennent 32 genres et environ 2000-2500 espèces,dont certaines produisent des huiles
essentielles appréciées, comme la canelle, les sassafras, le camphrier, le laurier .
Les Lauraceae sont l'un des plus importants tropicales familles ligneuses (Gentry, 1988).
Des études récentes ont révélé une étroite relation entre ses genres, tous sont dioïque et la
plupart ont inflorescences ombelle sous-tendu par bractées. [16,17,18,19,20,21,22,23,24]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Règne Plantae
Sous-règne Tracheophyta = Tracheobionta
(Cormophyta)
Division Magnoliophyta
Classe Magnoliopsida
Ordre Laurales
Famille Lauraceae
Genre Laurus
Espèces Laurus nobilis L.,
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
· Les fleurs : Les fleurs sont petites odorantes en forme d'étoile à la fin du
printemps de couleur blanchâtres à jaune, les fleurs sont groupées à l’aisselle des
feuilles en petits bouquets en forme d’ombelles axillaires ou en courts
panicules.Elles sont enfermées dans un involure formé de bractées caduques à 4
dents (lobes) ; les fleurs males possèdent généralement 8 à12 étamines, dont la
plupart sont stériles, elles portent en leur centre une glande nectarifère, les fleurs
femelles portent 4 staminodes (étamines stériles), un ovaire courtement pétiolé et
divisé en 3 loges, et un stigmate court et émoussé. La floraison à lieu du mars à
mai. [12,25, 28,36,37]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Le laurier est aussi largement cultivé dans les pays arabes de la Libye au
Maroc.Actuellement cette espèce, sauvage ou cultivées, est présent dans le sud et l'ouest de
l'Europe, et aux Etats-Unis comme plante ornementale. Il pousse spontanément dans la
garrigue et les bois en Europe et autour de la Méditerranée.
[9,14,19,27,28,37,39,40,41,42,43,44,45]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
I.12. Culture :
Laurus nobilis L. ,est un arbre abondant dans différents environnements il est cultivé
dans de nombreuses régions tempérées, subtropical et chaudes et à haute précipitations du
monde. Cette plante se rencontre aussi fréquemment dans des conditions semi-arides ,il
répondre au déficit hydrique et de s'adapter à la sécheresse grâce à de nombreux
changements physiologiques et biochimiques (Impa et al., 2005).La plante nécessite de
grandes quantités d'eau pendant la première année de l'établissement des plantes.La plante
préfère les sols perméables, riches en nutriments et en humus, situés dans des
endroits protégés du vent et très ensoleillés. Le sol tourbeux riche et abondamment avec
de l'eau et l'atmosphère humide sympathique près de la côte de la mer sont des conditions
favorables à une croissance rapide et luxriant .[ 9,10, 19, 29, 39, 31,47,48]
I.13. Récolte :
Récolté les feuilles et les jeunes branches , en été, les baies en octobre, novembre à leur
maturité complète, c-à-d lorsqu’elles commencent à ce détacher d’elles même.[49]
I.14. Séchage :
HAMROUNI Ibtissem, et d’autres chercheurs tunisiens en 2010,ont étudiés les
changements qualitatives et quantitatives dans l’HE de laurier noble affecté par différentes
méthodes de séchage et les résultats ont montrés que le séchage par l'air à température
ambiante et le séchage par infrarouge à 45°C présentent un rendement en HE plus
élevé.[27] D’autres part le séchage par l’étuve à 45°C et le séchage par l’air à température
ambiante n’ont causés pratiquement aucune perte de substance volatiles par rapport à
l’herbe fraiche.[50,51]
I.15. Conservation :
Les feuilles fraiches se conservent quelques jours dans un sac plastique ou bien roulées
dans un papier absorbant légèrement humide, au réfrigérateur . Les feuilles sèches peuvent
être stockées dans des récipients hermétiques (en porcelaine, en verre ou en métal), à
l’abri de l’humidité et de la lumière. Des feuilles séchées et conservées trop longtemps
prennent une teinte rougeâtre à la lumière. Une fois pulvérisées, elles perdent rapidement
leur caractère aromatique.[25,52]Les changements dans la composition des huiles
essentielles à partir des graines de laurier ont été étudiés au cours du stockage dans
l'obscurité et la lumière. Dans ces conditions, l'huile essentielles de laurier a conservé sa
composition pour 12 moi, puisque celle-ci a retenu une composition constante au cours du
stockage dans l'obscurité et la lumière. La résistance des composants d'huile de laurier à
l'oxydation est probablement associée à la présence de substance individuels ou combinés
dont les effets de stabiliser le potentiel redox du système.Probablement, terpinenes et
d'autres composés stabilisent le système de l’huile essentielle et inhibent l'oxydation des
substances réactives.[47]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
-Acides phénylacrylique et
phénolcarbonique,
libres ou estérifiés, on trouve aussi d’autres acides comme les
acides p-coumarique,férulique, sinapique, gentisique et
vanillique.[25,60]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Monoterpènes et de sesquiterpènes oxygénés. Les racines contenait le plus de flavonoïdes avec une
teneur de(11,12 mg équivalents catéchine), tannins condensés(9,76 - 0,1mg CE/gps). Composés
phénoliques totaux (55,45 - 2,9 mg GAME / g ps) . [10,53]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Turkey α-pinene (4,9 %), sabinène ( 6,8%),β-pinene (3,6 %), 1,8-cinéol(56,7%), α-terpineol
(Izmir) (7%), α-terpinen 4-ol (2,5%).[69]
Italy (Calabria) Eudesmol(3,903 %), costunolide ( 2,342%),ermanthin(5,186 %), vitamine E (9,031%),
α-terpinyl acetate (7,145%), methyl eugenol (2,908%).[12]
Morocco α-pinene (3,71 %), sabinène ( 6,13%),β-pinene (3,14 %), 1,8-cinéol(52,43%), α-terpinyl
acetate (8,96%), limonene (5,25%).[39]
1) α-pinene (2,73 %), sabinène ( 5,44%),β-pinene (2,44 %), 1,8-
Iran cinéol(27,58%),linalool (4%), 1,4-terpineol (4,20%), α-terpinyl acetate
(Tehran) (20,62%),eugenol (2,64%), methyl eugenol (9,72%),caryophyllene oxide
(2,29%).[70]
2) α-pinene (5,26 %), sabinène ( 3,42%),β-pinene (4,06 %), 1,8-
cinéol(55,80%),linalool (1,4%), terpinene-4-ol (5,27%), α-terpinyl acetate
(15,14%), β-cymene (2,70%).[71]
α-pinene (2,1 %), sabinène ( 5,7%), 1,8-cinéol(45,5%),linalool (8,5%), camphor (2,1%),
Croatia terpinen-4-ol (2,1%), α-terpinyl acetate (9,1%),eugenol (2,5%), methyl eugenol
(10%),trans-caryophyllene (2,1%).[72]
α-pinene (2,7 %), sabinène ( 4,6%), β-pinene (2,1 %), 1,8-cinéol(16,3%), linalool
Algérie (10,9%), α-cadinol (1,2%), α-terpineol (2,6%), α-terpinyl acetate (16,6%),eugenol
(2,5%), methyl eugenol (11%),(E)-caryophyllene (6,4%), elemicin (2%),caryophyllene
oxide(4,4%),δ-cadinene (1,4%).[30]
α-pinene (2,9 %), sabinène ( 7,2%), β-pinene (2,5 %), 1,8-cinéol(32,1%), linalool (2,1%),
α-cadinol (1,1%), α-terpineol (2,3%), α-terpinyl acetate (15,6%),eugenol (2,5%), methyl
Tunisie eugenol (10,6%),(E)-caryophyllene (2,9%),elemicin (1%),caryophyllene oxide(tr),δ-
cadinene (1,1%).[30]
13 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
La composition chimique de l'huile essentielle de fleur est tout à fait différent des autres
parties de la plante, les feuilles,la tige (Fiorini et al. 1997).[9,42,63]
14 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
Les variations saisonnières ont également été observées dans la composition chimique
du laurus nobilis .[42] L’étude réalisé par Mohammadreza et Verdian-rizi décrit la
composition de l'huile essentielle des parties aériennes du Laurus nobilis dans différents
stades de croissance. Et les résultats obtenus par cette étude montre que le moment de la
récolte de cette plante n'a pas un effet majeur sur la composition chimique de l'huile
essentielle mais il a des effets sur la teneur en huile essentielle de la plante et la floraison
est le meilleur moment pour la récolte de la plante et l'obtention de l'huile essentielle.
[16,74,75] En outre, le meilleur temps de la récolte pour obtenir les huiles essentielles les
plus actifs pour Laurus nobilis (Lauraceae) est à Septembre.[76,77]
15 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
16 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
I.19.c.Propriétés antirhumatismales :
Comme une plante médicinale, les feuilles,les baies de laurier ont été utilisées comme
un remède contre les douleurs rhumatismales.[ 10,29,45, 63,89] L'huiles grasses provenant
du fruit est utilisé aussi en usage externe pour le traitement des furoncles,des entorses, des
contusions. [12,33]
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Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
18 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
de l'eau froide distillée ou l’eau distillée en ébullition sur deux champignons pathogènes,
Alternaria alternata et Fusarium oxysporum. Les résultats ont révélé que l’extrait de la
plante,en particulier celle effectuées avec l’eau distillée froide avait une forte activité
antifongique significative avec l'inhibition de la croissance des 2 champignons testés. [96]
Les résultats d’autres études ont confirmés que les extraits du laurus nobilis peuvent être
utilisés comme fongicide naturel pour lutter contre les champignons pathogènes, réduisant
ainsi la dépendance sur les fongicides synthètique.[ 54,68,97,98, 99,100]
I.19.l.L’activité anti-bactérienne :
L’huile essentielle de laurier noble constituent une riche source de composés
biologiquement actifs. Il ya eu un intérêt accru pour la recherche des propriétés
antibactériennes des extraits de cette plante aromatique ( laurier noble ), en particulier
l’huile essentielle . L’activité antibactérienne de l' huile essentielle des feuilles du Laurus
nobilis a été étudié par divers chercheurs contre plusiers souches bactériennes
(Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius , Klebsiella pneumoniae……).Et les
résultats ont montré une activité bactéricide très efficace.[ 32, 39, 75, 91,101, 102] Dans la
recherche de Lawrence and Palombo ,l'huile essentielle du laurier noble a été étudié pour
identifier l’activité contre les spores Bacillus subtilis (ATCC 6051). Les résultats ont
indiqué que l’huile exposée présente un certain niveau d'activité sporicide après 24 h .
Toutefois , pour déterminer si l'acidité d’huiles essentielle a été responsable de leurs
activités, le pH de l’huile a été déterminé, indiquant que le caractère acide de l'huile
essentielle n’étaient pas responsable de l’effets sporicide.[103] Luna-Herrera et al. ont
montré que l'activité antimycobactérienne contre des isolats de M.tuberculosis résistantes
aux médicaments cliniques était meilleure pour le mélange ( HE de laurier noble) que pour
des composés purs (fraction de deux lactones sesquiterpéniques).[104]
En outre, 24 extraits aqueux, d'éthanol, de butanol, d'hexane, de chloroforme et de
méthanol des feuilles, écorces, fruits et fleurs de Laurus nobilis ont été testés pour leur
activités anti-bactériennes . L'activité supérieure était celle de l'extrait d'écorce aqueuse
contre Staphylococcus aureus résistant (25 mm) par rapport à la pénicilline G (33 mm).
Une activité modérée anti-bactérienne des fleurs, des fruits et des extraits de feuilles contre
Klebsiella pneumoniae (Gram négatif) et Salmonella typhimurium a été également
enregistrée. Les valeurs des CMI pour les bactéries étaient relativement élevés, ce qui est
compréhensible puisque nous traitons avec des extraits bruts.Les résultats d’une étude
semblable montrent que les extraits éthanolique des feuilles de laurier noble, par exemple,
présentent un large spectre d’activité antibactérienne contre P. aeruginosa (17 mm de
zone d'inhibition) par rapport à la tétracycline (15 mm).[ 61,105,106, 107,108,109]
I.19.m. Activité antioxydante:
Ces dernières années, il a été intérêt croissant à trouver les antioxydants naturelle à
partir des plantes pour une utilisation dans les aliments et les matières médicinales pour
remplacer les antioxydants synthétiques. Depuis ces antioxydants sont restreints en raison
de leurs effets secondaires tels que la cancérogénicité. [10, 54, 56, 64,72] Le but de travail
de Ahmed M. Emam et al. était d'examiner l'activité antioxydante in vitro des feuilles du
Laurus nobilis . L’extrait éthanolique (70%) du Laurus nobilis a été exposé au balayage
19 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
I.19.p.L'activité anti-inflammatoire :
L'extrait éthanolique (80%) des feuilles de laurier séchées, administré par intubation
gastrique à des rats à une dose de 100,0 mg / kg, a entraîné une inhibition de 19% de
l'œdème induit. L’acétate d'éthyle et l’extraits d'hexane des feuilles, appliquée
extérieurement [(TPA)-inflammation de l'oreille] sur des souris à une dose de 20,0
microlitres /animal, étaient actifs comparativement au tétradécanoyl acétate de phorbol
.[44] L'huile essentielle des feuilles du Laurus nobilis a été évaluée pour les activités
antinociceptifs et anti-inflammatoires chez les souris et les rats par un équipe iranien
.L'effet analgésique et anti-inflammatoire de l'huile essentielle a été comparable aux
antalgiques de référence et auux anti-inflammatoires: la morphine et le piroxicam. les
résultats Présentés font l'huile essentielle digne d'investigations complémentaires.( Sayyah
,Saroukhani et al.,2003).[116] L'objectif de l’étude de F. Fang et al.(2005) était d'identifier
20 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
les composés des fruits et des feuilles du Laurus nobilis, qui sont responsables à l'effet
anti-inflammatoire induisant. L'isolement des composés actifs a été réalisé et six composés
ont été identifiés; ils sont tous des lactones sesquiterpènes .Ces composés possédent
différentes propriétés pharmacologiques y compris l’effet anti-inflammatoire.[117]
Par ailleurs, l'infusion aqueuse obtenue à partir des feuilles de laurier noble a été utilisé
pendant de nombreuses années chez les femmes européennes pour soulager les douleurs du
placenta .En outre,le laurier favorise l’apparition des règles et agir contre les règles
douloureuses.[ 13, 15, 91] L'huile essentielle obtenue à partir des feuilles du laurier noble
fourni la matière la plus élevé de protection in vitro contre la nitration de tyrosine.[118]
I.20.b. Argentine : La décoction des feuilles séchées est pris par voie orale pour traiter
les infections des voies respiratoires et urinaires .La moitié de 1 gramme du fruit est pris
par voie orale afin d'accélérer la mise en bas. Le jus des feuilles,3-4 gouttes dans l'eau, est
prise oralement à promouvoir les menstruations.[44]
I.20.c. Angleterre : le jus du fruit est pris oralement pour stimuler les
menstruations.[44]
I.20.d. Europe : le fruit est pris oralement lors de l'accouchement pour accélérer la
délivrance.[44]
I.20.e. Grèce : l'extrait aqueux chaude des feuilles est pris par voie orale comme
contraceptive.[44]
I.20.f. Inde : L'extrait aqueux chaude des feuilles sèches est pris par voie orale comme un
emménagogue, Le fruit est pris oralement par les femmes comme une emménagogue.[44]
I.20.g. Iran : La décoction des fruits secs est pris par voie orale pour stimuler l’appétit et
aider la digestion.L’infusion de la feuille sèche est pris par voie orale comme
21 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
I.20.h. Israël : l'extrait aqueux chaud des feuilles séchées, avec Ruta chalepensis, est
utilisé en perfusion intraveineuse pour les problèmes respiratoires. Le bain de vapeur des
feuilles séchées, en combinaison avec Salvia fruticosa, chalepensis Ruta et satureja
thymbra, est pris pour le rhumatisme et comme tonique générale. L'huile essentielle des
fruits utilisés en usage externe sur les plaies et pour les névralgiques. Le Drupe a
également été utilisé par la population juive de Djerba dans le traitement de la jaunisse et
les douleurs rhumatismales.[10,44]
I.20.i. Italie : l'extrait aqueux des feuilles séchées est utilisé contre les inflammations .
L'infusion est pris par voie orale pour aider la digestion .L’infusion de la feuille est pris par
voie orale comme antispasmodique pour les coliques abdominales, et comme sédatif
.L’huile essentielle est utilisée comme émollient pour les hémorroïdes.Le fruit macéré dans
l'alcool, est mélangé avec l’huile d'olive et utilisés extérieurement comme
antirhumatismale.[44]
I.20.j. Jordan : La décoction des feuilles est prise oralement comme anti-diarrhée .[44]
I.20.k. Maroc : La feuille est prise oralement pour les troubles du foie et pour l’hygiène
dentaire.[44]
I.20.l. Peru : L’extrait aqueux des fruits secs est pris par voie orale comme un stimulant
circulatoire et utilisé en usage externe pour adoucir les tumeurs et l’extrait aqueux chaud
de la feuille sèche est pris par voie orale comme un stimulant circulatoire réglementaire, et
à l'extérieur il est utilisé pour adoucir les tumeurs et les ulcers.[44]
I.20.m. Tunisie : Les feuilles séchées est pris oralement comme un tranquillisant et
utilisé en usage externe pour les problèmes rhumatismales.[44]
I.20.n. États-Unis : L’extrait des feuilles par l’eau chaude est pris par voie orale comme
un carminative, astringent. [44]
I.20.o. Turquie: Elle est utilisée en massage pour les rhumatismes et pour tuer les
parasites du corps. Les vétérinaires utilisent l'oléum (Oleum lauri, de l'huile fixe provenant
des fruits) comme analgésique. Le pétrole des baies parfois utilisé comme un liniment ou
analgésique pour les maux d'oreilles. Un savon jaune de l'oléum à traiter des affections de
la peau et la perte des cheveux. Le fruit, préparé à partir des différentes manières, est dit
pour aider les fibromes utérins, la rate et du foie, tumeurs internes et les tumeurs du l'œil.
[48]
I.20.p. Liban : L’extrait des feuilles et des baies, utilisé comme carminatif, est
étroitement bouché et trempé dans du brandy au soleil pendant plusieurs jours. Le résidu,
après distillation ultérieure est utilisé comme un liniment pour les rhumatismes et les
entorses, le distillat comme emménagogue. Alpinistes libanais sont dit d'utiliser les baies
pour provoquer l'avortement . Les baies macérés dans de la farine ont été cataplasmes sur
22 | P a g e
Chapitre I La pharmacognosie du laurier noble
les dislocations.La baie contient des composés repoussant les cafards, y compris le
cinéole.(Peirce,1999) [48]
Attention :
Ne jamais utiliser l’huile essentielle de laurier par voie interne. Ne pas appliquer l’huile
essentielle pure sur la peau en raison des risques d’allergie.[13]
23 | P a g e
Partie
Expérimentale
24 | P a g e
Partie pratique
25 | P a g e
Partie pratique
II.2.But et objectifs :
II.3.Matériel et méthode :
II.3.1.Matériel technique:
II.3.1.b. Solvant :
Caractéristiques des réactifs utilisés : La plupart des réactifs ont été acquis
directement au près de firmes de renommées et n’ont pas nécessité de contrôle. Par contre
certains produits ont du être soumis aux méthodes habituelles de purification pour s’assurer
d’un haut degré de pureté. [122]
26 | P a g e
Partie pratique
Tendeuse électrique , Scalpel stérile , Pansement stériles et bandes de gazes , Para film ,
Bande adhésive.
II.3.2.Matériel biologique :
Espèce : lapin ;
Race : néozélandaise ;
Couleur : blanche.
Les souches utilisées dans notre étude font parties de trois groupes de micro-organismes,
qui sont des pathogènes et des contaminants.
Les tests sont réalisés sur 3 bactéries et une levure, provenant essentiellement du
laboratoire de microbiologie de l’UNS de KOUBA et du laboratoire de microbiologie de
l’université d’USTHB de BAB ELZOUAR.
27 | P a g e
Partie pratique
Pseudomonas Bactérie -
Pseudomonadaceae
aeruginosa
Staphylococcus Bactérie + Micrococcaceae
aurus
Candida Levure / Cryptococcaceae
albicans
Suivant la méthode employée dans l’essai et selon les souches choisies, nous avons utilisé
comme milieux de culture les suivants : ( Annexe IV)
du Laurus nobilis L.
28 | P a g e
Partie pratique
II.4.Description botanique :
Le laurier noble (Laurus nobilis), objet de notre étude , appelé « Rand » en arabe. C’est
un arbre généralement dioïque, de 2 à 10m de la hauteur. L’écorce lisse et noire peut être
vert olive ou bleu rougeâtre avec des tiges courtes, lancéolées, acuminées, coriacés de 3-8
cm de large. Les feuilles sont alternes, coriaces, persistantes, elliptiques, lancéolées,
ondulées au bords. Les fleurs sont dioïques, blanchâtres, odorantes, en petites ombelles
axillaires pédonculées et involucrées et enfin les fruits sont drupacés, noir à maturité,
ovoïde de 2cm de long sur 1cm de large.
Figure 11 :différentes parties de la plante du Laurus nobilis L.( feuille, fleur et fruit ).[34]
Afin de tirer la meilleure partie des plantes médicinales, il convient de veiller à ce que
les herbes et leurs dérivés soient d’excellente qualité. Cela exige qu’elles soient cultivées
dans de
bonnes conditions, correctement séchées, bien conservée et que leur date limite de
consommation soit respectée. Le recours à des plantes de mauvaise qualité est bien souvent
une perte de temps et d’argent étant donné que vous n’en tirerez pas tous les bienfaits.
S’agissant de plantes médicinales, la qualité prime avant tout .
II.5.Récolte de laurus nobilis : La récolte des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs
et des racines ont été réalisé à la région de LARBA (BLIDA), durant les périodes
mentionnés au tableau suivant :
29 | P a g e
Partie pratique
30 | P a g e
Partie pratique
II.6.Séchage :
II.7.Pulvérisation :
II.8.Conservation :
Les échantillons ont été conservées jusqu’au moment de l’utilisation dans des bouteilles
en verre à l’abri de la lumière.
31 | P a g e
Partie pratique
Parties du
Matières séchés Matières concassés Matières broyés
laurus nobilis L.
Feuille
Fleur
Tige
Fruit
Racine
32 | P a g e
Partie pratique
Le laurier , utilisé dans cette étude a été identifier par le département de botanique, de
l’institut national d’agronomie d’Alger comme étant le laurus nobilis L.
Ordre : Laurales
Famille : Lauracées
Genre : Laurus
La feuille des végétaux vasculaires est un organe généralement aplati, ce qui lui confère
une symétrie bilatérale. Les feuilles sont exclusivement portées par la tige.
La vascularisation de la feuille est assurée par les nervures qui sont issues des "traces
foliaires" émises par le cylindre central de la tige au niveau des noeuds. La nervure
principale fait généralement saillie à la face inférieure de la feuille, on dit parfois, de façon
abusive, la face ventrale. Mais les feuilles n'ont ni dos ni ventre et le caractère "supérieur"
ou "inférieur" des faces n'est pas discriminant : si leur position physiologique la plus
fréquente chez les Dicotylédones est d'être aplaties dans un plan perpendiculaire à
l'allongement de la tige qui les porte, les exceptions sont nombreuses.
33 | P a g e
Partie pratique
34 | P a g e
Partie pratique
Figure 15: Images de coupe transversale de feuille de laurus nobilis L.(Laurier noble) et
schéma conventionnel correspondant.[126]
35 | P a g e
Partie pratique
II.10.1.taux d’humidité :
Principe :
Mode opératoire :
Résultat et discussion :
36 | P a g e
Partie pratique
Tableau 16:le taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.
7
pourcentage d'humidité ( % )
0
Feuille Tige Fleur Fruit Racine
Figure 16: variation du taux d’humidité dans les différentes parties du laurus nobilis L.
Discussion :
Les résultats obtenus montrent clairement que la drogue possède une teneur en eau,
inférieure à 10% dans ses différentes parties, d’où les échantillons sont bien conservés .
II.10.2.perte a la dessiccation :
Principe :
37 | P a g e
Partie pratique
Mode opératoire :
Peser rapidement 1g de la matière végétale dans une capsule à fond plat de diamètre 50
mm et de 30 mm de hauteur .Dessécher dans l’étuve à 100-105°C durant 02 h .Placer
dans un dessiccateur contenant du gel de silice anhydre. Laisser refroidir puis peser.[127]
PD=(P1-P2)/P1 *100
Résultat:
38 | P a g e
Partie pratique
10 8.41%
6.05% Feuille
7.17%
8.85%
5 Tige
5.29%
Baie
0
Racine
Feuille
Tige Fleur
Baie Diagramme
Racine
Fleur
Discussion :
Le résultat obtenu, montre que la poudre des feuilles, tiges, fleurs, fruits et racines ont
perdu presque ; 8.41, 6.05, 8.85, 7.17, 5.29% respectivement de leurs poids massique lors
de la dessiccation. Les résultat sont tous inférieur à 10%, d’où on peut déduire que ces
résultats sont conformes aux normes exigées par la pharmacopée européenne . [128]
Principe :
Mode opératoire :
39 | P a g e
Partie pratique
Résultat :
II.10.3.2.Cendres sulfuriques :
Principe :
Mode opératoire :
Chauffer un creuset de porcelaine à 600 ±50°C pendant 30 min. Laisser refroidir dans un
dessiccateur sur du gel de silice et peser. Placer ensuite 1g de la matière pulvérisée.
Humecter la matière avec une quantité suffisante de H2SO4 dilué (environ 1M) et chauffer
lentement jusqu’à carbonisation complète de la matière. Après refroidissement, humecter
le résidu avec un peu de H2SO4 dilué au demi, chauffer de la même manière jusqu’à ce
qu’il n’y ait plus de dégagement de fumées blanches. Calciner ensuite à 600 ±50°C jusqu’à
incinération complète du résidu. Laisser refroidir le creuset dans un dessiccateur, puis
peser. [127]
Résultat :
Principe :
40 | P a g e
Partie pratique
Mode opératoire :
Dans le creuset, ajouter au résidu obtenu, lors de la détermination des cendres sulfuriques
ou totales,15 ml d’eau et 10 ml d’HCl à 10%. Recouvrir d’un verre de montre et faire
bouillir doucement pendant 10 min. Filtrer le résidu et laver à l’eau très chaude. Dessécher
et incinérer jusqu’au rouge sombre. Laissez refroidir au dessiccateur et peser dans le
même creuset. [127]
Résultat :
Poudre de tige de laurus nobilis L. 21,5980 1,0030 21,5990 0,09 < 0,5 %
Poudre de fleur de laurus nobilis L. 12,2357 0,9735 12,2364 0,07 < 0,5 %
Poudre de baie de laurus nobilis L. 22,8011 0,9748 22,8019 0,08 < 0,5 %
Poudre de racine de laurus nobilis L. 12,2358 0,9730 12,2378 0,20 < 0,5 %
6
pourcentage des cendres ( % )
3 cendre totale
cndre sulfurique
2 cendre chlorhydrique
0
feuille tige fleur fruit racine
partie traitée du laurus nobilis
Figure 20: pourcentage ( % ) des cendres dans les différents parties de laurus nobilis L.
Discussion :
41 | P a g e
Partie pratique
Les résultats obtenus des cendres totales, sulfuriques et chlorhydriques, indiquent, d’une
part, une faible teneur en substances minérales (≤ 6 %), et d’autre part une très faible
contamination par la poussière ou le sable (≤ 0.5 %).
On remarque à partir de la figure 20 que les cendres sont plus élevés dans les racines, les
tiges et les feuilles par rapport aux fleurs et fruits ( mais dans les normes ).Cela explique
que les racines, les tiges et même les feuilles sont faiblement contaminés par la poussière
ou le sable, ce qui exige le lavage de ces parties avant leurs séchages.
D’après la figure on remarque aussi que pour toute les échantillons , le pourcentage des
cendres sulfuriques est le plus élevé , suivie par le pourcentage des cendres totales et le
pourcentage des cendres chlorhydriques est le plus faible.
Principe :
Mode opératoire :
IG = ( V1+V2+V3) /3
Résultats:
42 | P a g e
Partie pratique
12
Valeur de l'indice de gonflement
10
0
feuille tige fleur fruit racine
discussion
L’indice de gonflement des feuilles, des tiges, des fleurs, et des racines est presque
identique (5 à 6) , mais pour les fruits est plus ou moins supérieur ( 9 à 10 ) .
L’indice de gonflement indique une valeur proche de 10 seulement pour les fruits du
laurus nobilis , ce qui montre la présence de mucilages dans les fruits du laurus nobilis L.
43 | P a g e
Partie pratique
Introduire dans un erlenmeyer 1g de poudre puis 20ml d’éthanol à 80%, laisser macérer
pendant 24 heures à la température du laboratoire après avoir fermer à l’aide d’un verre de
montre . Filtrer avec du papier filtre. Peser le bécher vide (m).
Mettre le filtrat dans ce bécher, évaporer à sec et peser le bécher avec le résidu (m’).
P.E : prise d’essai. [129, 130, 131]
×
Substance extractible par l’éthanol à 80% = .
Pour déterminer le pourcentage de substances solubles dans l’eau, nous avons réalisé
une décoction pendant 15 mn d’un gramme de poudre dans 20 ml d’eau distillée. Ensuite
laisser refroidir et filtrer sur un papier filtre.
Transvaser le filtrat dans une capsule préalablement tarée (m) et placer dans l’étuve pour
l’évaporation à sec. Peser de nouveau la capsule (m’). Les substances extractibles par l’eau
ont été évaluées par la formule . Avec P.E : prise d’essai . [129, 130, 131]
×
Substance extractible par l’eau = .
Résultats :
Tableau 22: résultats de recherche des substances extractible par l’eau et par l’éthanol.
Rendement (%)
Extraits
Feuilles Fleurs Tiges Fruits Racines
44 | P a g e
Partie pratique
II.11.Screening chimiques :
Pour identifier la composition en métabolite secondaire présent dans la plante du
laurus nobilis, un screening chimique est fait. La colorimétrie et la gravimétrie ont
été les deux principales voies d’identification de ces groupes de substances en
solution. Il s’agit principalement des alcaloïdes, des flavonoïdes, des hétérosides
cardiotoniques , des quinones, des saponines et des tanins .
Pour notre travail, le screening s’est effectué sur les feuilles, les tiges, les fleurs, les
baies et les racines de la plante laurus nobilis L. Cet examen est effectué soit sur la
poudre du broyat de la plante sèche soit sur son extrait (infusé).
Extraction :
Réactions de précipitations
Introduire 1ml de filtrat dans un tube à essais , ajouter cinq gouttes de réactif de
Dragendorff. En laissant reposer 10 minutes. En présence d’alcaloïde , le réactif de
dragendroff , donne un précipité rouge-orange. [129, 130, 131]
Réaction caractéristique :
Résultats :
45 | P a g e
Partie pratique
feuilles +
alcaloïdes
tiges +
fleurs +
baies +
racines +
46 | P a g e
Partie pratique
Drogue pulvérisée 3g
Macération 24 heures dans 25 ml
neutralisation puis
a alcalinisation par NH4OH
CHCl3
( )×
%Alcaloïdes =
47 | P a g e
Partie pratique
Résultats :
Tableau 24 : pourcentage en alcaloïdes totaux.
Poids de Poids de la Masse Pourcentage
la capsule capsule après en alcaloïdes
alcaloïdes (g)
vide P1 = évaporation P2 (%)
tare (g) (g)
Feuille de Laurus nobilis 27,8043 27,8505 0,0462 1,54
L.
Tige de Laurus nobilis L. 33,5273 33,5495 0,0222 0,74
baie de Laurus nobilis L. 70,6042 70,6352 0,031 1,03
Fleur de Laurus nobilis L. 70,6042 70,6137 0,0095 0,31
Racine de Laurus nobilis 33,5273 33,5289 0,0016 0,05
L.
Racine
Fleur
Baie
Tige
Feuille
Discussion :
Ce tableau confirme les résultats obtenus dans le tableau 23, à savoir que les feuilles de
laurus nobilis sont les plus riches en alcaloïdes.
Préparation de l’infusé :
48 | P a g e
Partie pratique
15 mn puis filtrer sur papier filtre et rincer le résidu avec un peu d’eau distillée
chaude, de manière à obtenir 100 ml de filtrat.
Introduire dans un tube à essai 5 ml de l’infusé à 5%, ajouter goutte à goutte environ
1ml de solution aqueuse diluée de FeCl3 à 1% : en présence des tanins, il se développe
une coloration verdâtre (tanins catéchiques) ou bleu noirâtre (tanins galliques).
Réaction caractéristique :
49 | P a g e
Partie pratique
tiges ++
fleurs +++
baies ++
racines ++
feuilles +++
tiges ++
Tanins catéchiques fleurs +++
baies ++
racines ++
Réaction caractéristique :
50 | P a g e
Partie pratique
Résultat :
Anthocyanes feuilles -
tiges -
fleurs -
baies -
racines -
Résultat :
feuilles +
Proanthocyanidols
51 | P a g e
Partie pratique
tiges +
fleurs ++
baies +
racines +
Réaction caractéristique :
Résultats :
52 | P a g e
Partie pratique
tiges ++
Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine
fleurs +++
Rose-orangé : flavones
Couche surnageant rouge :
génine
baies +
Beige marron : hétérosides
flavonoique.
racines +
Beige orangé : hétérosides
flavonoique
Nous avons effectué la réaction à la cyanidine sans ajouter les copeaux de magnésium
et chauffé au bain-marie pendant 15 mn. En présence de leucoanthocyanes, il se développe
une coloration rouge cerise ou violacée.
Les catéchols donnent une teinte brun-rouge. [131]
53 | P a g e
Partie pratique
Leucoanthocyanes
feuilles -
tiges +
fleurs +
baies +
racines -
Anthraquinones libres :
Préparation de l’extrait :
Hydrolysat :
À une partie du résidu de la poudre épuisée par le chloroforme, ajouter 10ml d’eau
distillée et 1ml d’acide chlorhydrique concentré, ensuite maintenir le tube à essais dans un
bain marie bouillant pendant 15 minutes. Refroidir le tube sous un courant d’eau et filtrer.
Réaction de borntager :
54 | P a g e
Partie pratique
Résultats :
Tableau 30 : résultats de recherche des dérivés anthracéniques.
fleurs -
baies -
racines -
feuilles -
Quinones tiges +
combinés
55 | P a g e
Partie pratique
fleurs -
baies +
racines -
Extraction :
Agiter le filtrat avec 10ml de chloroforme sans formation d’émulsion. Laisser décanter.
Puis soutirer la phase chloroformique et évaporer à sec. Reprendre le résidu avec 2
ml d’isopropanol.
Caractérisation :
Résultats :
56 | P a g e
Partie pratique
fleurs
baies
racines
Extrait :
Introduire dans un tube à essais 1g de poudre et 20ml d’éther. Boucher, agiter et laisser
en contact pendant 24 heures. Après ce temps, filtrer et compléter à 20ml avec de l’éther.
Caractérisations :
1.Réaction de Liebermann-Buchard :
Evaporer à sec dans une capsule 10ml d’extrait. Dissoudre le résidu dans 1ml
d’anhydride acétique avec 1ml de chloroforme et recueillir la solution dans un tube à
essais. Ajouter 1 à 2ml d’acide sulfurique concentré au fond du tube à essais à l’aide d’une
pipette et ne pas agiter. La formation d’un anneau rouge-brunâtre ou violet à la zone de
57 | P a g e
Partie pratique
contact des deux liquides et la coloration verte ou violette de la couche surnageant révèlent
la présence de stérols et de triterpènes.[132]
Evaporer 5ml d’extrait éthéré dans une capsule jusqu'à sec, ajouter 2 à 3 gouttes de
solution saturée de chlorure d’antimoine (SbCl3) dans le chloroforme ou dans le
tétrachlorure de carbone (CCl4). Il se développe en présence de caroténoïdes une coloration
bleu-rouge par la suite. [132]
Résultat :
Tableau 32 : résultats de recherche des stérols et terpènes et des caroténoïdes.
tiges +
fleurs ++
baies +
racines +
Caroténoïdes feuilles +
tiges +
fleurs +
baies +
racines +
Test de Salkowski :
58 | P a g e
Partie pratique
fleurs -
baies ++
racines -
Dans une fiole conique introduire 2,5 g de poudre ; puis ajouter 50 ml d’eau
distillée et 2 ml d’acide chlorhydrique concentré, chauffer dans un bain-marie
pendant 15 mn, laisser refroidir et agiter avec 40ml d’éther, séparer la couche
éthérée puis évaporer.
Résultats :
tiges +
fleurs +
baies +
avant
59 | P a g e
Partie pratique
après
racines -
5 gouttes d’huile d’olive son ajoutées à 1ml d’infusé dans un tube à essai et la mixture
est agitée vigoureusement .
Réaction caractéristique :
Résultats :
60 | P a g e
Partie pratique
tiges ++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.
fleurs ++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.
baies +++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.
racines +++
· Présence de mousse.
· Formation d’une émulsion stable.
Préparation du décocté à 1% :
À l’aide d’un erlenmeyer de 250ml, faire une décoction de 1g de poudre dans 100ml
d’eau distillée. Chauffer pendant 15 minutes tout en maintenant une ébullition modérée.
Filtrer après refroidissement et ajuster à 100ml.
61 | P a g e
Partie pratique
Caractérisation :
Avec n = numéro du tube dans lequel la hauteur de la mousse est égale à 1cm.
Si la hauteur de la mousse est inférieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
inférieur à 100.
Si la hauteur de la mousse est supérieure à 1cm dans tous les tubes, l’indice de mousse est
supérieur à 100. [131]
Tableau 36 : résultats de calcule de l’indice de mousse .
Laurus nobilis L.
Recherche
feuilles fleurs tiges baies racines
Hauteur de la =1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans ˃1cm dans
mousse le tube n°9 le tube le tube les tubes n° les tubes n°
˃1cm dans n°10 n°10 8,9,10 9,10
le tube n°10
Indice de mousse
(Idm) 211,111 100 100 336,111 211,111
Le calcule de l’indice de mousse nous a confirmé la présence des saponisides dans tous les
parties de la plante laurus nobilis, et surtout concentré dans les baies (fruits).
62 | P a g e
Partie pratique
Réaction caractéristique :
Résultats :
tiges
+
fleurs +
baies
+
racines
++
63 | P a g e
Partie pratique
Mettre deux gouttes de l’acide sulfurique concentré sur une masse de la poudre
végétale. En présence des glucosides. La masse se colore en rouge brique, puis en
violet. [127]
Résultats :
tiges ++
fleurs +
baies ++
racines +++
Résultats :
tiges +++
64 | P a g e
Partie pratique
fleurs +
baies -
racines +
Réaction caractéristique :
Résultats :
fleurs +
65 | P a g e
Partie pratique
baies ++
racines -
Faire une décoction 1g dans 5ml d’eau distillée. Faire une filtration et ajouter 1ml
d’acide chlorhydrique, rapprocher le tube au feu doux d’une flamme bleue.
Laisser au repos et observer ensuite le précipité noir qui caractérise la présence des
irridoides en cas de leur présence.
Résultat :
66 | P a g e
Partie pratique
tiges ++
fleurs +
baies +
racines +
tiges +
fleurs +
baies +
67 | P a g e
Partie pratique
racines +
II.12.17.Tableau récapitulatif :
Anthocyane - - - - -
Proanthocyanidols + + ++ + +
Quinones libres - - - - -
combinés - + - + -
Heteroside - - + - -
cariotonique
Saponine ++ ++ ++ +++ +++
Coumarine ++ + + + ++
Composé réducteur +++ +++ + - +
Amidon - - + ++ -
Mucilage ++ + + + +
Irridoide +++ ++ + + +
Glucoside ++ ++ + ++ +++
Stérols et terpènes + + +++ + +
Carténoide + + + + +
Stéroide ++ + - ++ -
Stupéfiants - - - - -
68 | P a g e
Partie pratique
Discussions :
- une réaction positive avec le réactif de Dragen Dorff montre la présence des
alcaloïdes dans les feuilles, les tiges, les fleurs, les fruits et les racines; mais en faible
quantité.
- Les anthocyanes, les quinones et les stupéfiants sont absents dans la plante du laurus
nobilis.
-Les hétérosides cardiotoniques sont présents dans les fleurs seulement, de même l’amidon
existe seulement dans les fleurs et les baies de laurier. Tandis que les composés réducteurs
existent dans les feuilles, les fleurs, les tiges, les racines et absents dans les baies.
-Les coumarines , les mucilages, stérols, carténoide, iridoide, les glucosides et les
saponisides donnent des réactions positives ce qui indique leur présence dans les
différentes parties de la drogue végétale, a savoir ( les feuilles, les fleurs, les tiges, les
fruits et les racines). Il apparait donc que la plante laurus nobilis possède un éventail
de substances bioactives, notamment les saponisides, les coumarines,….etc.
Les saponisides présents dans la plante pourraient servir a la plante pour des agents
de communication. De toutes les façons, les saponisides peuvent faciliter
l’assimilation des génines sucrées et augmenter aussi leur action de détergence.
Cette étude a révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs
( polyphénol : flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols, ) reconnus pour leurs propriétés
biologiques et thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la
présence des flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les
propriétés physiologiques anti-oxydantes .
69 | P a g e
Partie pratique
II.12.1.procédé d’extraction :
II.12.1.a. Hydrodistillation :
100g de plante sèche est introduite dans un ballon , imprégné d’eau distillée ( 600 à 700
ml ) , l’ensemble est porté a ébullition pendant 3 heures.
Les vapeurs chargées d’huile , en traversant un réfrigérant se condensent et chutent dans
une ampoule à décanter, l’eau et l’huile se séparent par différence de densité.
L’huile séparée de l’eau aromatique est déshydratée par congélation, et/ou par le sulfate de
sodium ( Na2SO4) et conservée à +5°C.[29,134]
70 | P a g e
Partie pratique
- Légende :
71 | P a g e
Partie pratique
Tableau 45: rendement des huiles essentielles des feuilles, des tiges, des fruits, des fleurs et
des fruits du laurus nobilis.
PB ( g ) PA ( g ) R (%)
Feuilles 0.7900 100 0.79
Tiges 0,1000 100 0,10
Baies 1,1509 100 1.15
Fleurs 0.8206 100 0.82
Racines 0 100 0
1,2
pourcentages en huiles
1
essentielles ( % )
0,8
0,6
0,4
0,2 %0
0
Feuilles Tiges Fruits Fleurs Racines
Discussion :
Les résultats du calcul des rendements des feuilles, des fruits, des tiges, des fleurs et des
racines du laurus nobilis montrent clairement que le pourcentage le plus élevé est celui des
fruits (1.15 %) , ensuite le pourcentage des fleurs ( 0.82 %) suivie par celui des feuilles
(0,79 %) et enfin le pourcentage le plus faible est celui des tige (0.1 %), tandis que les
racines ne contenant plus d’huiles essentielles (0 %). Ces résultats sont en accord avec
Marzouki, Khaldi et al. , qui ont montrer que l’extraction par hydrodistillation des feuilles
du laurus nobilis d’Algérie contiennent un pourcentage de ( 0.5 ± 0.2 ) % en huile
essentielle des feuilles. [30]
72 | P a g e
Partie pratique
Discussion :
73 | P a g e
Partie pratique
Le meilleur moment d’extraction des huiles essentielles est en avril ( moment de floraison
). Parce que c’est le moment de la synthèse des différents composants chimiques.
L’extraction par hydrodistillation présente un rendement légèrement faible par rapport à
l’extraction par micro onde.
On a aussi comparés le rendement de l’huile essentielle de 3 origines différentes (
TIZI-OUZOU, M’SILA, BLIDA). Les résultat ont montré que le rendement est presque
semblable.
L'étude a indiqué aussi que le taux de vapeur est un paramètre très important. Le tableau 46
montre l'ensemble récupération du pétrole par rapport au temps de la distillation de la
vapeur pour les taux différents appliqués. Il est clair que le démarrage avec un taux de
vapeur à basse donne un meilleur rendement d'huile. Une taux de vapeur à haute au début
de la distillation à vapeur donne des taux réduits de récupération du pétrole. [137]
Mais l’extraction avec un taux de vapeur faible aux début de l’hydrodistillation peut
causer quelques réaction indésirable (hydrolyse, isomérisation,….etc) , toute en influant
sur la qualité de l’huile essentielle extraite.
74 | P a g e
Partie pratique
2,5
Rendement en huile essentielle ( % )
2
1,5 Racine
Tige
1 Baie
Fleur
0,5 Feuille
0
0 30 60 90 120 150 180 210 240
Temps d'extraction ( min )
Figure 28 : Évolution du rendement des huiles essentielles des tige, des baie, des fleur des
racine, et des feuille du laurus nobilis lors de l’hydrodistillation ,à partir de 200g de
matière végétale.
En se basant sur la figure 28, nous constatons que l’allure générale des courbes est
croissante et qu’elle tend vers un paliers au bout de 120 min.
75 | P a g e
Partie pratique
Un certain nombre d’huiles volatiles de certaines espèces des plantes ( eucalyptus ,…)
contiennent invariablement eucalyptol aussi élevés que 10% à 70%. Il se produit également
dans l’huile de feuille de laurier noble ( laurus nobilis L. ) . [138]
Toutefois, eucalyptol peut être isolée de ces huiles en adoptant l’une des méthodes
suivantes :
Méthode à l’acide phosphorique ;
Méthode à l’acide bromhydrique ;
Méthode à l’orthocrésol ;
Extraction du cinéol par solvant ;
Extraction du cinéol par cristallisation ;
Récupération par distillation fractionnée ;
La chromatographie d’adsorption. ( voir annexe I )
Cette méthode consiste à dissoudre dix (10) ml d’essence dans cinquante (50) ml
d’éther de pétrole et à ajouter peu à peu à froid, de l’acide phosphorique concentré ; la
combinaison blanche (C10H18OH3PO4) qui se dépose prend une teinte jaunâtre ou
rougeâtre. La masse cristalline est alors essorée, lavée avec de l’éther de pétrole puis
décomposée en utilisant de l’eau ; le cinéol est récupéré par décantation.
76 | P a g e
Partie pratique
Figure 30: l’huile essentielle des feilles du laurier noble dans l’ether de pétrole ( mélange 1).
77 | P a g e
Partie pratique
78 | P a g e
Partie pratique
Solubilité : insoluble dans l’eau, soluble dans les solvants organiques , de la paraffine, les
huiles fixes et de l’éthanol à 90%.............................................................................conforme
On remarque que les résultats sont conforme aux norme exiger par la pharmacopée
britannique. [138, 139, 140,141]
Stockage:
Essais chimiques :
1.Il forme des composés plus caractéristique avec HCl, HBr et H3Po4 avec points fusion
bien défini. [138, 139] ……………………………………………………….…….conforme
79 | P a g e
Partie pratique
AFNOR .
80 | P a g e
Partie pratique
A l’issue des distillations, les huiles essentielles obtenus de chaque partie de la plante
laurus nobilis , sont liquides mobiles limpides de couleur jaune à jaune pale avec des
odeurs aromatiques caractéristiques.
En particulier , l'huile essentielle extraite a partir des feuilles est d'aspect liquide mobile
limpide, de couleur jaune clair à jaune, d'odeur aromatique, épicée, avec un fond
d'eucalyptus .
Les paramètres organoleptiques de nos HE sont en accord avec ceux répertoriés dans les
normes .[142,137,143]
La valeur commerciale d’une huile essentielle est la plus part du temps estimée d’après
ses qualités organoleptiques ( l’odeur en particulier) auxquels s’ajoutent un certain nombre
de constantes appelées « indices », déterminés à partir de normes établies, parmi lesquelles
nous pouvons citer les normes AFNOR. Ces normes définissent deux types d’indices : les
indices physiques ( densité relative, pouvoir rotatoire, indice de réfraction ……..) et les
indices chimiques ( indice d’acides, indice d’ester,….).
Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.
Définition :
( voir annexe I ).
Calcul :
Le pouvoir rotatoire, exprimé en degrés d’angle, est donné par l’équation suivante :
PR= A x 100/ L
Où :
81 | P a g e
Partie pratique
Définition :
( voir annexe I ).
Principe:
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Régler le refractomètre en mesurant les indices de réfraction des produits étalons tels
que : l’eau distillée, benzoate de benzyle, éthanol.
L’appareil a été étalonné par éthanol ayant un indice de réfraction connu égale à 1.3611 à
20°C.
Calcul :
= + 0,0004 × ( − )
: valeur de lecture
t : température de l’HE
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
82 | P a g e
Partie pratique
Calcul :
= − / −
Où :
: température ambiante
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
83 | P a g e
Partie pratique
Dans le cas ou une solution limpide n’est pas obtenue après l’addition des 20 ml de solvant
, utiliser le mélange hydro-éthanolique de titre alcoométrique immédiatement supérieur .
Toutes les méthodes d’analyse et les formules présentées dans ce paragraphe proviennent
du recueil de normes AFNOR.
Définition :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Calcul :
IA= 56,11xVxC/ m
Où :
Définition :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
On prend 0.5 ml de l’échantillon pour essai. Introduire la prise d’essai dans le ballon,
puis à l’aide d’une burette ajouter 15 ml de solution de KOH ( 0.5 mole/l ). Puis on place
un réfrigérant ascendant on plonge l’ensemble dans un bain-marie , on chauffe jusqu’à
ébullition pendant 30 min. On détermine la fin de la réaction de saponification lorsqu’on
obtient une solution transparente et homogène ( Absence de trace d’huile ).
84 | P a g e
Partie pratique
solution de KOH titrées par HCl 0.5 N la différence des volumes dépensés lors du titrage
de l’essai à blanc et de l’échantillon correspondant à la quantité de KOH dépensé pour la
saponification et pour la neutralisation des acides libres contenus dans l’échantillon.
Calcul :
IE = 28,05 / m x ( V0 - V1) - IA
Où :
IA : indice d’acide.
Définition :
( voir annexe I ).
Principe :
( voir annexe I ).
Mode opératoire :
Dans une fiole conique bien sèche de 200ml, bouchant à l’émeri, introduire une prise
d’essai convenable de la substance ( le poids de la prise d’essai est déterminé par l’indice
d’iode de la substance, on prend de préférence 32g./II) exactement pesée et 10ml de
chloroforme ou de tetrachlorure de carbone. Agiter le mélange jusqu’à dissolution
complète et ajouter 25ml exactement mesurés de réactif. Boucher, agiter et abandonner le
mélange 1 heure à l’obscurité. Puis ajouter 20ml d’une solution à 10% d’iodure de
potassium, 100ml environ d’eau distillée et titrer l’iode libre au moyen d’une solution de
Na2S2O3 0.1N.
85 | P a g e
Partie pratique
× .
L’indice d’iode est égal à : I I= .
× . ×
(1ml de Na2S2O3 à 0.1N correspond à 126mg d’Iode d’où : ) [142,144]
.
Résultats :
Soluble dans
pendant 1 ans
Soluble dans
-14° 1.4773 0.915 1à 3 partie 2.6 40.5 43.1 60.94
d’alcool à
80%
[142,144,145,146,14
Soluble dans
1 à 3 partie 1à3
7,148 , 149, 150]
86 | P a g e
Partie pratique
80%
/ / partie d’alcool à
80%.
Normes
Soluble dans 3 à 10
150]
partie d’alcool à
70%.
A partir de ces valeurs, il en ressort que toutes ces constantes étant influencées par les
conditions édaphiques et climatiques ainsi que les pratiques culturales .
Cependant et malgré ces fluctuations, nous remarquons que les paramètres physico-
chimiques de nos HE sont en accord avec ceux mentionnés par les normes.
Pour les constantes chimiques, par exemple l'indice d'acide donne une idée sur le taux
d'acides libres. Notre étude confirme que cet indice, certes dans les normes, demeure
relativement élevé dans l’huile d’un an ( conservé pendant une année ) par rapport à l’huile
d’une semaine (conservé pendant une semaine ) . Cela peut trouver une explication dans la
dégradation de l'HE (hydrolyse des esters,….) durant sa conservation ( un an ), ce qui est à
terme préjudiciable. Inversement, un IA inférieur ou égale à 3 est une preuve de bonne
conservation de l’essence (faible quantité d'acides libres) c’est le cas de l’HE d’une
semaine .
Un indice de réfraction variant essentiellement avec la teneur en monoterpènes et en
dérivés oxygénés. Une forte teneur en monoterpènes donnera un indice élevé. Pour certains
auteurs, le faible indice de réfraction de l'HE indique sa faible réfraction de la lumière ce
qui pourrait favoriser son utilisation dans les produits cosmétiques. [137]
D’après la méthode d’extraction et l’étude de différent paramètre physico-chimiques de
l’huile essentielle extrait nous pouvons conclure que l’essence des feuilles du laurus
nobilis étudiée à de bonne caractéristique et peut être utilisée comme produit
pharmaceutique.
87 | P a g e
Partie pratique
La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais demeure
non suffisante pour caractériser l'HE. Il sera donc primordial de déterminer le profil
chromatographique de l'essence aromatique.
La détermination de la composition de l’essence de différentes parties du laurus nobilis à
fait l’objet de notre travail afin de caractériser les diverses constituants de ses huiles
essentielles .
Cette dernière est réalisée sur un chromatographe en phase gazeuse de type Hewlett-
Packard ( série HP 6890) couplé avec un spectromètre de masse ( série HP 5973 N MS,
ionisation par impact électronique).Cette technique permet de déterminer simultanément le
nombre de constituants de l’essence, leurs concentrations respectives, et leurs ordres de
sorties, qui renseignent sur la volatilité, c'est-à-dire de leurs masses moléculaires, et de
leurs polarités.
- Longueur : 30m
88 | P a g e
Partie pratique
Spectromètre de masse :
Résultats :
Dans les trois tableaux 50, 53 et 56 les résultats sont classés selon leurs temps de rétention
( c.à.d. selon leur ordre de sortie ).
89 | P a g e
Partie pratique
90 | P a g e
Partie pratique
Composés %
1,8-cinéol 10.655
linalool 11.072
α-terpineol 3.247
Terpényl acetate 11.495
Eugénol 3.864
Eugénol méthyl ether 9.748
β-caryophyllene 5.874
caryophyllene oxide 2.218
α-cadinol 2.190
Tableau 52: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles de
laurus nobilis L.
91 | P a g e
Partie pratique
18
16
pourcentage des classes
14
biochimiques (%)
12
10
8
6
4
2
0
oxydes monoterpénols phénols monoterpènes esters
terpéniques terpéniques
Figure 39 : Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des feuilles du laurus
nobilis L.
92 | P a g e
Partie pratique
Le profil chromatographique de notre plante montre que son essence possède tous les
constituants nécessaires. En effet, cette HE est marquée par un taux de cineol plus
important .
Autre différence biochimique entre les autres cultivars réside dans la présence ou non de
certains composés caractéristiques .
93 | P a g e
Partie pratique
Figure 40:Chromatogramme de l’huile essentielle des tiges du laurier noble (laurus nobilis
L.)
Composés %
α-thujène 3.192
1,8-cinéol 2.188
linalool 5.668
α-terpineol 2.148
Terpényl acetate 9.242
Engénol 2.709
Eugénol méthyl ether 10.62
94 | P a g e
Partie pratique
β-caryophyllene 3.529
β-cadinene 2.729
Elémicine 2.635
Spathulenol 2.492
caryophyllene oxide 5.058
τ-cadinol 2.240
α-cadinol 4.287
α-copaen-11 ol 2.324
Tableau 55: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis.
8.922
Linalol ( 5.668%), terpinén-4-ol ( 1,106%), alpha-
Monoterpénols terpinéol
( 2.148%)
Phénols 13.329
eugénol méthyl éther ( 10.62 %), engénol ( 2.709 %)
Monoterpènes 0.068
sabinène (0.02%), béta-pinène (0.016%), alpha-pinène
Esters 10.482
terpéniques acétate d'alpha-terpényle (0,481%), acétate de bornyle
95 | P a g e
Partie pratique
14
10
biochimiques ( % )
0
oxydes monoterpénols phénols monoterpènes esters
terpéniques térpéniques
Figure 41: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des tiges du laurus
nobilis .
96 | P a g e
Partie pratique
Figure 42:Chromatogramme de l’huile essentielle des fruits du laurier noble (laurus nobilis
L.)
97 | P a g e
Partie pratique
Composés %
β-élémène 11.462
Eudesma-4(14), 11 diène 1.118
cubenol 6.365
Lauric anhydride 16.424
cedren-13-ol 15.057
(E)-β-ocimene 21.838
Lanceol, cis 2.664
Spathulenol 1.290
Tableau 58: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis.
98 | P a g e
Partie pratique
40
pourcentage des calsses biochimiques ( % )
35
30
25
20
15
10
5
0
Figure 43: Classes biochimiques des composés identifiées dans l’HE des fruits du laurus
nobilis .
99 | P a g e
Partie pratique
En effet, l’HE des fruits du laurier est différentes totalement à l’HE des feuilles et des
tiges du laurier noble .
II.15.a.4. Résultats chromatographiques bibliographique de l’huile essentielle des fleurs
du Laurus nobilis L. :
100 | P a g e
Partie pratique
a-Humulene 0.5
Alloaromadendrene –
(E )-b-Farnesene 0.1
γ-Muurolene –
GermacreneD 2.4
b-Selinene 0.3
Bicyclogermacrene 2.2
a-Farnesene 1.3
Germacrene A 1.1
γ-Cadinene –
d-Cadinene t
Ni(sesquiterpene) 3.4
Elemol –
Germrene D-4-ol –
a-Eudesmol 11.8
Costunolide –
t : trace .
20
15
10
5
Feuilles
0
Tiges
β-caryophyllene ,trans caryophyllene
caryophyllene oxide
Eugénol méthyl ether
cubenol
cedren-13-ol
1,8-cinéol
Nerol
Bornéol
camphène
azulene
Cedrene
guaien
Terpinèn-4 ol
α-thujène
α-cadinol
–cadinol
Lanceol, cis
Engénol
β-pinène
fruits
Figure 44: Diagramme montrant la composition des différentes parties de laurus nobilis
avec leur pourcentage (%).
101 | P a g e
Partie pratique
1. Vaseline :
Solubilité :
Chloroforme Soluble
0,5 parties de benzene Soluble
L’eau Insoluble
L’acétone Soluble
Identification :
Norme Valeur
Densité D20 0,830 à 0,900 0,832
Tf 38 à 50°C 43°C
Acidité :
2. Menthol :
102 | P a g e
Partie pratique
Caractères :
Solubilité :
Identification :
Norme Résultat
Pouvoir rotatoire -48 à -50 -50
Point de fusion 41 à 45°C 44°C
Essais :
Solution « s » :Dissoudre 2,5 g de menthol dans 10ml d’alcool et compléter à 25ml avec le
même solvant.
Acidité ou alcalinité :
Dissoudre 1,0 g de menthol dans l’alcool et compléter à 10ml avec le même solvant,
ajouter 0,1 ml de solution de phénolphtaléine. La solution est incolore, le virage au rose de
l’indicateur nécessite quelques gouttes de NaOH à 0,01 M.
Résidu à l’évaporation :
103 | P a g e
Partie pratique
3. Salicylate de méthyle :
Caractères :
Solubilité : très peu soluble dans l’eau , miscible à l’alcool, aux huiles grasses et aux huiles
essentielles……………………………………………………………………... ( conforme )
Identification :
Essai :
Aspect de la solution : la solution est limpide et n’est pas plus fortement coloré que la
solution témoin ………………………. …………………………………….….( conforme )
Dosage :
4. Analyse du camphre :
Caractères :
Solubilité :
Identification :
Point de fusion : Le point de fusion du camphre doit varier dans l’intervalle : 174-
180°c.
104 | P a g e
Partie pratique
Point de fusion des cristaux du camphre : Le point de fusion des cristaux doit varier dans
l’intervalle : 118-121°c.
Angle de rotation optique : On le détermine sur la solution « s », il doit varier entre + 0,15°
et -0,15°.
Essais :
5. Analyse de lanoline :
Composition :
C’est une substance cireuse purifiée et anhydre obtenue à partir de la laine du mouton. Elle
peut contenir au maximum 200 parties par million de butylhydroxytoluène.
Aspect :
Solubilité:
Identification :
6.Analyse de lidocaïne:
Solubilité :
Très soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent).
Identification :
Pour environ 5 mg, ajoutez 0,5 ml d'acide nitrique fumant R. Evaporer à sec sur un bain-
marie, cool, et dissoudre le résidu dans 5 ml d'acétone R. Ajoutez 0,2 ml d'hydroxyde de
potassium alcoolique solution R. Une couleur verte se développe.
Essai :
pH 4,0 à 5,5.
Stockage :
Protégé de la lumière.
2-Hydroxybenzenecarboxylic acide.
Apparence :
Solubilité :
Légèrement soluble dans l'eau, facilement soluble dans l'éthanol (96 pour cent), peu
soluble dans le chlorure de méthylène.
Identification :
Essais :
Aspect de la solution :
106 | P a g e
Partie pratique
Apparence :
Solubilité :
Identification :
Dissolvez 0,1 g dans 1,5 ml de acide chlorhydrique dilué et complétez à 5 ml avec de l'eau
. La solution donne la réaction du zinc.
Essai :
Alcalinité :
Les différents contrôles effectuées sur les excipients et l’huile essentielle montre qu’ils
sont conformes aux normes de la pharmacopée européenne ce qui permet leurs utilisation
dans une formulation pharmaceutique.
Dans cette partie nous avons formulé quelques pommades y compris celle qui peut avoir
une propriété décongestionnante destinée a dégager les voies respiratoires, grâce aux
propriétés décongestionnantes des voies respiratoires du 1,8-cinéol composant majoritaire
de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis .
107 | P a g e
Partie pratique
% g % g % g
Hydrochlorure de
lidocaïne (anesthésine) 0 0 0,3 0,3 0,3 0,3
Solution de hydrochlorure
d’adrénaline 0 0 x x x x
Vaseline blanche 55 55 53 53 53 53
Lanoline 27 27 24 24 24 24
Huile de vaseline 13 13 10 10 10 10
Camphre 4 4 3 3 3 3
Menthe 1 1 1 1 1 1
Huile essentielle 0 0 x x x x
d’eucalyptus
Salicylate de méthyle 0 0 x x x x
Mode opératoire :
108 | P a g e
Partie pratique
Constituants Essai ( % )
Lidocaïne (Anesthésine) 1
Huile essentielle de laurus nobilis x
Acide salicylique 1
Tetraborate de Na 1
Streptocide 0,5
Vaseline blanche 60
lanoline 30
Menthe 1,2
Camphre x
Salicylate de méthyle 3
Mode opératoire :
109 | P a g e
Partie pratique
Dans un cristallisatoire, faire liquéfier une quantité de vaseline sur la plaque chauffante.
Incorporer successivement le menthol jusqu’à solubilisation, puis le streptocide, le
tetraborate de Na ,l’acide salicylique et enfin le camphre et on laisse refroidir.
Mélanger le tout puis ajouter de l’anésthésine. une fois que le mélange commence à
refroidir, on ajoute l’huile essentielle de laurier en dernier.
Mettre chaque pommade dans un récipient hermétique et conserver ces derniers dans un
endroit frais.
110 | P a g e
Partie pratique
b). Homogénéité :
111 | P a g e
Partie pratique
c). Mesure du pH :
D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.
d). La viscosité :
la viscosité représente la résistance qu’opposent les molécules d’un liquide à une force
tendant à les déplacer par glissement.
On appelle équation rhéologique d’état d’une substance, la relation qui existe entre la
déformation de cisaillement « ε » et la contrainte de cisaillement « σ ». Cette relation est
notée : ε = f (σ ).
Les courbes qui traduisent graphiquement l’équation rhéologique d’état sont appelées
rhéogramme.
112 | P a g e
Partie pratique
Avec :
σ : La contrainte de cisaillement.
Elle est réalisée par la méthode sur l’appareil à mobile tournant, cette méthode est utilisée
quelle que soit la consistance de l’émulsion.
Elle est basée sur la mesure des forces de cisaillement, et permet de mesurer la viscosité
dynamique exprimée en milli pascal / seconde.
Condition opératoires :
Nom : CSR 1
Nombre d’intervalles : 4
Les résultats obtenus sont relevés sur le tableau 68 et sont représentés dans les figures
53 ;54 :
113 | P a g e
Partie pratique
700
600
viscosité [Pa.s]
500
400
300
200
100
0
0 100 200 300 400 500 600
taux de cisaillement [1/s]
114 | P a g e
Partie pratique
700
600
500
400
300
200
100
0
0 100 200 300 400 500 600
Taux de cisaillement [1/S]
Cependant, ce fluide est dit à seuil, car il faut dépasser un seuil en contrainte σ0 avant qu’il
ne puisse s’écouler .Par définition, un seuil d’écoulement décrit la contrainte requise pour
produire l’écoulement d’une substance plastique.
Donc cette pommade est un fluide plastique, ce qui signifie qu’elle s’écoule à partir d’une
certaine valeur de contrainte σ0 . Au repos, elle possède une structure tridimensionnelle
rigide ( particules emboitées ).
Les résultats obtenus sont conformes, et la nature de la pommade est un fluide non
Newtonien pseudo plastique .
115 | P a g e
Partie pratique
Couleur : jaunâtre.
b). Homogénéité :
116 | P a g e
Partie pratique
c). Mesure du pH :
D’après la valeur du pH qui est ni très basique ni acide, nous pouvant dire que la
pommade ne provoquent pas d’irritation sur la peau.
pH 6,88 5,63
117 | P a g e
Partie pratique
La réaction cutané érythème et œdème est évaluée et quantifiée sur la zone préalablement
scarifiée ou intacte. Selon l’échelle numérique proposé par le « Journal Officiel de la
République Française » . [153]
Test de tolérance :
Les tests de tolérance locale cutanée ont pour but de prédire, à partir de la connaissance de
la toxicité sur un organisme animal vivant, le risque toxicologique chez l’homme.
Principe :
L’indice d’irritation primaire cutanée de nos produits a été déterminé chez le lapin selon la
méthode de référence publiée au Journal Officiel de la République Française du 24 octobre
1984 .
La méthode est réalisée sur 6 (six) lapins de souche néozélandaise, le dos de chaque animal
est divisé en deux zones, après élimination des poils. Sur l’une des zones, le produit est
appliqué directement, sur l’autre zone, il est appliqué après scarification. Le produit est
maintenu en contact avec la peau par un pansement pendant 24 heures.
Des lectures sont faites une heure après enlèvement du pansement, et 24 à 72 heures après
l’application du produit.
L’essai est effectué dans un lieu tranquille ou aucune perturbation ne risque d’exciter les
animaux.
Protocole expérimental :
En premier lieu, la veille de jour d’application du produit, le dos et les flancs de 6 lapins
ont été tondus à l’aide d’une tendeuse électrique.
118 | P a g e
Partie pratique
Le jour de l’essai ( Vingt-quatre heures plus tard), on effectue sur le flanc droit de
chaque animal à l’aide d’une lame de scalpel stérile, trois scarifications parallèles de
l’épiderme de 3cm de long espacées d’environ 0,5 cm, le flanc gauche restant tel quel, les
scarifications doivent abraser la cornée sans provoquer de saignement.
Une quantité de produit ( pommade ) équivalente à 0,5 g a été appliquée sur chacun des
flancs ( scarifié et normale ) des animaux sous pansement semi-occlusif. La gaze ainsi
imbibée est recouverte par le para film et le para film est recouvert d’une bande adhésive.
Les lapins sont remis dans leurs cages. Chaque produit formulé a été laissé en contact avec
la peau durant 24 heures.
119 | P a g e
Partie pratique
+ =
Figure 61: Application du produit.
C). Observation :
Vingt quatre heures plus tard, les pansements sont ôtés , les résultats sont lus au bout
d’une demi heure par au moins deux personne distinctes, une seconde lecture est faite 72
heures après l’application du produit. L’irritation cutanée a été appréciée aux sites
d’application ( scarifié et non scarifié ) à l’aide d’une échelle d’évaluation numérique
permettant de coter les érythèmes et la formation d’œdème.
L’évaluation porte sur la formation de l’érythème et de l’œdème qui sont notés suivant une
échelle numérique :
Absence d’œdème 0
Œdème très léger ( à peine visible ) 1
Léger œdème ( gonflement apparent ) 2
Œdème moyen ( épaisseur 1mm ) 3
Œdème grave ( épaisseur supérieur à 1mm ) 4
Absence d’érythème 0
Léger érythème ( à peine visible ) 1
Erythème bien visible 2
Erythème modéré à important 3
Erythème grave ( rouge pourpre ) 4
120 | P a g e
Partie pratique
∑ , ∑ ,
Ou
Avec :
E : érythème
Œ: œdème
La moyenne ainsi obtenue représente l’IP, celui-ci permet de classer le produit (pommade)
en quatre types de réponses :
Résultats :
1. Détermination de l’indice d’irritation primaire cutanée de la pommade antigrippe
( anti-rhume , décongestionnante) :
Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :
121 | P a g e
Partie pratique
Tableau 72: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai I ) :
D’après le tableau , il est noté une absence totale soit d’œdèmes ou d’érythème durant
toute la période de l’expérimentation.
Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :
Avec :
Donc :
IP = 0 / 24 = 0
IP = 0
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0 ) est inférieur à 0,5 ce qui
nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai I ) à base de HE de laurus
nobilis est non irritante pour la peau.
122 | P a g e
Partie pratique
Tableau 74: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai II ) :
D’après le tableau 74 , il est noté une absence totale d’œdèmes et quelques valeurs
d’érythème qui apparait chez certains lapin après les 72 heures de la période
d’expérimentation.
Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :
Avec :
Donc :
IP = 2 / 24 = 0,083
IP = 0,083
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,083 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai II ) à base de HE de laurus
123 | P a g e
Partie pratique
nobilis est non irritante pour la peau , donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation
cutanée humaine.
Tableau 76: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade anti-rhume à base d’huile essentielle de laurus nobilis ( Essai III ) :
D’après le tableau 76 ,les phénomènes observés sont uniquement les érythèmes avec un
degré variable . Il est noté une absence totale d’œdèmes d’érythème durant toute la
période de l’expérimentation.
Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :
Donc :
IP = 17 / 24 = 0,708
IP = 0,708
124 | P a g e
Partie pratique
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire IP ( IP = 0,708 ) est compris entre 0,5
et 2 : 0,5 < IP < 2 ; ce qui nous amène à conclure que la pommade anti-rhume ( essai III )
à base de l’HE de laurus nobilis est légèrement irritante pour la peau a cause de la
concentration élevé de l’huile essentielle de laurus nobilis.
Les résultats de l’évaluation de l’irritation primaire chez les lapins traités par la
pommade sont dans le tableau suivant :
Tableau 78: Evaluation de l’indice d’irritation cutanée primaire chez les lapins traités par
la pommade antiseptique à base d’huile essentielle de laurus nobilis :
D’après le tableau 78, les phénomènes observés sont uniquement des érythèmes avec un
degré variable au cours de la 1ere observation et une diminution remarquable après 72
heures. Il est noté également une absence totale soit d’œdèmes durant toute la période de
l’expérimentation.
Pour classer notre produit, il faut calculer l’indice d’irritation primaire à partir de
l’équation suivantes :
125 | P a g e
Partie pratique
Avec :
Donc :
IP = 8 / 24 = 0,333
IP = 0,333
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP = 0,333 ) est inférieur à 0,5 ce
qui nous amène à conclure que la pommade antiseptique à base de l’HE du laurus nobilis
est non irritante pour la peau, donc la pommade n’est pas toxique pour l’utilisation cutanée
humaine.
Discussion :
Selon le résultat obtenu, l’indice d’irritation primaire ( IP) des pommades
décongestionnantes des voies respiratoires ( essai I, essai II et essai III ) sont de 0 ; 0.083 et
0.708 respectivement. Les deux première valeur sont < 0.5 ce qui nous amène à conclure
que les deux pommades anti-rhumes ( essai I , essai II) à base de l’huile essentielle des
feuilles du laurus nobilis sont non irritantes pour la peau.
126 | P a g e
Partie pratique
Il est nécessaire de vérifier que dans la pommade préparée il y a bien les substance
annoncées ( analyse qualitative et quantitative ) et que cette dernière est bien pur et non
souillée par les interactions ou des produits de dégradation. Il faudra bien qu’elle soit
présente en qualité conforme à celle annoncée, il ne faudra pas qu’elle soit inférieur à
90%.
O NOH
-H2O
C(CH)2
+ NH2OH C(CH)2
Hydroxylamine Oxyme
On traite 1g de pommade par 10ml d’alcool, on le filtre, le filtrat obtenu est transféré dans
un creuset en porcelaine et on y ajoute 1ml de H2SO4 concentré et 1ml d’une solution
fraiche de vanilline dans l’acide sulfurique. On mélange en tournant le creuset et on le
dilue par 1ml d’eau ou d’alcool, il se forme une coloration.
Identification :
Changement de couleur jaune ( filtrat /1ml H2SO4 /1ml d’une solution fraiche de vanilline)
à une coloration rouge violette après ajout de 1ml d’alcool.
127 | P a g e
Partie pratique
II.19.Tests microbiologiques :
La technique que nous avons utilisée pour évaluer l’activité antimicrobienne de nos
produits ( HEs, pommade à base des HEs ) est l’aromatogramme ou la méthode de
diffusion en milieu gélosé en utilisant des disques stériles en cellulose.
Cette méthode utilisée par certains auteurs [155,156,157] est la technique que nous avons
utilisée pour évaluer l’activité inhibitrice de nos produits ( HEs du laurus nobilis , des
pommades a base d’huile essentielle).
Protocole expérimental :
Préparation de l’inoculum :
La méthode de diffusion sur milieu gélosé a été réalisée sur le milieu Muller-Hinton(M-
H) ( pour les bactéries ) et Sabouraud ( pour les levures ). On fait fondre les deux milieux
dans un bain marie à 95°C, puis on verse simultanément et aseptiquement une première
couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite avec 3
répétitions par couche de chaque milieu dans une boite de Pétri à raison de 15 ml par boite.
128 | P a g e
Partie pratique
Figure 64: Résultat de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis contre Candida albicans.
129 | P a g e
Partie pratique
Figure 65: Résultat de l’activité antibactérienne des huiles essentielles des feuilles du
laurus nobilis contre Escherichia coli.
Figure 67: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Escherichia coli (bactérie
gram -)
Figure 68: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4) , des
fleurs (1), des tiges (2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Staphylococcus aureus
(bactérie gram +)
130 | P a g e
Partie pratique
Figure 69: Résultats de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs (1), des tiges(2) et des fruits(3) du laurus nobilis contre Pseudomonas aeruginosa
(bactérie gram -)
Figure 70: Résultats de l’activité antifongique de l’huile essentielle des feuilles (4), des
fleurs(1), des tiges(2) et des fruits (3) du laurus nobilis contre Candida albicans .
D3= 12.50
Staphylocoque D1= 17.69
aureus Bactérie
Gram + D2= 18.91 18.11 20.12
D3= 17.75
Candida D1= 21.5
albican
Levure D2= 20.5 21 23.33
D3= 21
131 | P a g e
Partie pratique
I% : le pourcentage d’inhibition
D : diamètres d’inhibition
Tableau 81: Résultats de l’activité antimicrobienne des fruits, des fleurs, des tiges du
laurus nobilis.
132 | P a g e
Partie pratique
Discussion :
L’échelle d’estimation de l’activité antimicrobienne est donnée par Mutai et al., (2009)
[161]. Ils ont classé les diamètres des zones d’inhibition ( D ) de la croissance microbienne
en 5 classes :
Fortement inhibitrice : 21 mm ≤ D ≤ 29 mm
Modérément inhibitrice : 16 mm ≤ D ≤ 20 mm
Légèrement inhibitrice : 11 mm ≤ D ≤ 16 mm
133 | P a g e
Partie pratique
Les huiles essentielles pures des feuilles, des fruits, des fleurs, des tiges du laurus nobilis
présentent des activités sur toutes les souches bactériennes testées .
Les souches de Pseudomonas aeruginosa sont légèrement résistantes à l’égard des quatre
huiles essentielles.
Notre huile essentielle de laurier à savoir ( des feuilles et des tiges ) possède également une
activité fortement inhibitrice sur les souches de Staphylococcus aureus .
Les souches de (candida albicans) utilisées sont sensibles vis-à-vis les quatre huiles
essentielles et surtout les feuilles et les fleurs ( voir figure 70 ).
L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis révélés très actif par rapport aux autres
huiles essentielles, pour cette raison et pour la disponibilité des feuilles ( durant toute
l’année ) on a pu réalisé la concentration minimale inhibitrice ( CMI ) de l’huile essentielle
des feuilles du laurier noble .
Préparation d’inoculum :
Par la même manière de diffusion sur milieu gélosé, on prépare l’inoculum pour cette
méthode . La suspension est reprise par dilutions successives dans le tampon phosphate
salin (PBS) pour l’obtention d’une densité initiale de l’inoculum entre 105 CFU ( unités
formant colonies ) / mL et 106 CFU/mL pour chacune des souches testées.
134 | P a g e
Partie pratique
La solution d’huile essentielle doit être au 0.4/10 ( 4%). Elle a été préparée dans M-H
(pour les bactéries) et SAB ( pour les levures) additionnés de tween 80 et maintenu en
surfusion. Une série de dilution de chaque produit est préparée à des concentrations allant
de 4% à 0.03% pour l’HE . La réalisation des dilutions se fait comme suite :
2ml d’HE est dilué dans 50 ml de milieu M-H ( bactéries) ou SAB (levures ), maintenu en
surfusion, dans un premier flacon ce qui donne de 4% ( solution mère ) ; verser la moitié
du premier flacon dans un deuxième flacon et ajuster avec 25 ml de milieu pour la dilution
2% procéder de la même manière jusqu’à l’obtention de la dernière dilution de 0.03%. Les
mélanges de chaque dilution sont immédiatement repartis dans deux boites de pétri rondes
( 90 mm de diamètre ) à raison de 12.5 mm de milieu par boite. La gamme de
concentration finales obtenue correspond
à4% ;2% ;1% ;0.5% ;0.25%;0.125% ;0.06% ;0.03%.
Figure 72: Réalisation de la CMI de l’huile essentielle des feuille du laurus nobilis .
135 | P a g e
Partie pratique
Figure 73: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli (bactérie gram –)
Figure 74: Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.
Figure 75 : Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa et Staphylococcus aureus.
136 | P a g e
Partie pratique
Figure 76 : Résultats de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis contre
Candida albicans .
Figure 77: Résultat négatif de la CMI de l’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis
contre Candida albicans .
Les résultats de l’activité antibactérienne et antifongique des huiles essentielles des feuilles
du laurus nobilis L. sont consignés dans le tableau :
Bactérie Gram -
Escherichia +++ ++ + + + +/- - - -
coli
Pseudomonas +++ ++ ++ ++ ++ + + + +
aeruginosa
Levure
Candida +++ + + +/- - - - - -
albican
+ : présence de germe
- : absence de germe
137 | P a g e
Partie pratique
Bactérie gram -
Escherichia coli 1% 2%
Pseudomonas aeruginosa - -
L’huile essentielle des feuilles du laurus nobilis a exercé une activité inhibitrice vis-à-vis
des bactéries et de levure testée , sauf les souches Pseudomonas aeruginosa qui se révèle
résistantes, et cela malgré l’utilisation d’une concentration de 4%.
Ainsi, Escherichia coli s’est montré le plus sensible, il a été inhibé à partir de la
concentration minimale 1% ( v/v ).
Les levures ont montré une grande sensibilité à l’huile essentielle des feuilles du laurus
nobilis. Une concentration de 0.25% ( v/v ) d’HE était suffisante pour inhiber la croissance
de Candida albicans.
Les subcultures réalisées suite à l’obtention des CMI, ont permis d’observer les
concentrations minimales bactéricides ( CMB ) sur les 2 bactéries et les concentrations
minimales fongicides ( CMF) sur la levure testée Candida albicans.
La concentration minimale bactéricide et/ou fongicide est souvent égale ou plus élevée que
la CMI.
Les CMB déterminés ont varié aussi de 1% à 4% (v/v ). Parmi les bactéries testées , la
souche Escherichia coli s’est montrée la plus sensible (CMB=2%), tandis que
Staphyloccocus aureus était la plus résistante ( CMB=4%).
Candida albicans s’est montrée la plus sensible par rapport aux bactéries testées,
(CMF=0.5%) .
138 | P a g e
Partie pratique
Malgré les variations des CMI et CMB et/ou CMF d’un microorganisme à un autre, dans
certains cas elles sont égales indiquant ainsi une forte action bactéricide et/ou fongicide. En
effet, lorsque le rapport CMB/CMI (CMF/CMI) est inférieur ou égal à 4, l’HE est
bactéricide et/ou fongicide. Quand ce rapport est supérieur à 4, l’HE est dite bactéricide
et/ou fongistatique .[162 ]
D’après le tableau 86, nous pouvons dire que notre huile essentielle testée a un pouvoir
bactéricide et/ou fongicide sur la plus part des souches testées sauf Pseudomonas
aeruginosa. Donc, l’HE de laurus nobilis a révélé, à la fois, une activité bactéricide et
fongicide. Ce qui explique leur application aux produits pharmaceutiques.
Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0, 25% d’huile de laurier inhibe
complètement la croissance de candida albicans, alors que 0,5% est levuricide ou
fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus l’huile de laurier noble,
révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.
139 | P a g e
[partie pratique]
Glossaire
140 | P a g e
Conclusion
Pendant longtemps, les remèdes naturels et surtout les plantes médicinales furent le
principal, voire l’unique recours du médecin et cet ensemble de soins thérapeutiques, qui
fait appel aux drogues ou aux principes actifs d’origine végétal , est appelé phytothérapie.
Dans la littérature le laurier est d’utilisations diverses ; il se caractérise par des feuilles,
des fruits, des fleurs , des tiges et des racines. Les travaux menés au cours de notre étude
auront permis de vérifier la conformité du matériel végétal. Le screening phytochimique a
révélé la richesse des feuilles de laurus nobilis en composants actifs ( polyphénol :
flavonoïdes, tanins, proanthocyanidols ) reconnus pour leurs propriétés biologiques et
thérapeutiques intéressantes. Par ailleurs, nous pouvons dire que la présence des
flavonoïdes ou les polyphénols en générale, pourrait intervenir selon les propriétés
physiologiques anti-oxydantes .
De même les tiges, les fleurs, les fruits et les racines du laurus nobilis sont riche en
polyphénols , en saponine et en coumarine. Les composés réducteurs ont été détecté dans
tous les parties du laurus nobilis sauf les fruits qui ont été donné une réaction négative.
L’étude réalisée a permis aussi de constater la présence de l’amidon seulement dans les
fleurs et les fruits du laurier noble. Ces résultats sont conformes avec ce qui est décrit dans
la littérature.
Les huiles volatiles ont été isolées par hydrodistillation à partir des feuilles , des tiges,
des fruits et des fleurs séchées du Laurus nobilis, les résultats des rendements en huile
essentielle sont différents ; 0.79%, 0.1%,1.15%, 0.82%, respectivement. Les racines du
laurus nobilis ne contenant plus d’huile essentielle .Les quatre huiles essentielles obtenus
ont été analysés qualitativement, ensuite ils ont été caractérisés par leur composition
141 | P a g e
Conclusion
chimique grâce à des analyses chromatographiques ; dans les tiges du laurier l’eugénol
méthyl ether, terpényl acetate, linalool et caryophyllene oxide apparaît comme les
constituants majoritaires de l'HE avec des pourcentages de (10.62%, 9.242%, 5.668% et
5.058%) respectivement .
Outre le 1,8-cinéole (10.655% ) , les principales composantes des feuilles étaient linalool et
terpényl acetate qui apparaît comme les constituants majoritaires de l'HE ( 11.072% ,
11.495%), suivi de l’eugénol méthyle éther ( 9.748 %).
Bien que dans les fruits les composants majeurs qui ont été trouvé sont le (E)-β-ocimene,
le Lauric anhydride , le cedren-13-ol , le β-élémène (21.83%, 16.424% ,15.057% et
11.462% ) . Les ocimenes étaient absents dans les feuilles et les tiges. Le 1,8-cinéol, le
composant majoritaire des feuilles été présent aussi dans les tiges et les fruits mais avec un
pourcentage faible. D’où la composition chimique des huiles essentielles des feuilles, des
tiges et des fleurs du laurier noble est différentes les une des autres.
L'objectif de cette étude a été atteint puisque nous avons contribué à caractériser l'huile
essentielle du laurus nobilis pour une éventuelle utilisation en phytothérapie.
Les résultats de teste de tolérance des pommades préparés ont révélé non irritante.
Les extraits volatiles et les pommades formulées ont été également soumis à un
criblage pour leur activité antimicrobienne possible in vitro, contre trois souches de
bactéries pathogène et une seule espèce de levure, en employant la méthode de diffusion à
partir d’un disque solide. Tous les extraits volatiles ont réagi positivement au moins sur
une des souches microbiennes testées. Les extraits d'une même plante ont montré des
activités différentes et les CMI ont été déterminée à partir des extraits les plus actifs en
milieu gélosé, l’huile essentielle de la feuille de Laurus nobilis a témoigné d’une forte
activité antimicrobienne même vis à vis de souches multirésistantes aux certains
antibiotiques. Globalement l’activité antimicrobienne des feuilles est plus importante que
celle des fruits, des fleurs et des tiges du Laurus nobilis avec un spectre antimicrobien
large et à des doses plus faibles. Les résultats de l’analyse quantitative montrent que 0,
25% d’huile de laurier inhibe complètement la croissance de candida albicans, alors que
0,5% est levuricide ou fongicide. Concernant Escherichia coli et staphylococcus aureus
l’huile de laurier noble, révélé bactéricide à des concentration de 2%,4% ; respectivement.
Ce travail nous confirme qu’il est possible de substituer de façon au moins partielle, les
antibiotiques classiques par l’utilisation des huiles essentielles.
142 | P a g e
Conclusion
· Analyser l’extrait d’eucaluptol obtenus dans ce travail, par une méthode d’analyse
physique ( CPG/SM , IR, ………..) ;
143 | P a g e
Glossaire
Glossaire
Glossaire
Agar : polymère de l’agarose qui rentre dans la composition des milieux de culture solide
en microbiologie. Aussi appelé gélose
Allelopathie : c’est un phénomène ou de nombreuses espèces végétales synthétisent des
molécules capables d’agir sur le développement des plantes avoisinantes
Analgésique : médication supprimant la douleur.
Antalgique : médicament qui atténue la douleur.
Antifongique : se dit d’un médicament qui agit contre les infections provoquées par les
champignons ou les levures parasites. SYN : antimycosique.
Anticonvulsivant (anticonvulsif) : efficace contre l’épilepsie, et les contractions
musculaires involontaires en série.
Antiseptique : se dit d’un agent, d’un médicament propre à prévenir les infections.
Anti-inflammatoire : qui fait dégonfler et diminuer l’irritation. La plupart des anti-
inflammatoires sont aussi des antidouleurs
Escarre : nécrose cutanée dans la quelle les tissus mortifiés forment une croute noirâtre
qui se détache spontanément.
Expectorant : qui calme la taux, favorise l’expulsion des secrétions bronchiques.
Parasite : être vivant ( animal, végétal, champignon) qui vit aux dépens d’une autre espèce
vivante appelée hôte.
Parasitisme : comportement propre aux parasites vis-à-vis de leurs hôtes.
Poils sécréteurs : les poils sécréteurs ont une forme très variable. L’essence exsudée du
cytoplasme s’accumule dans la paroi externe de la cellule sous la cuticule qu’elle distend.
Les poils sécréteurs se rencontrent le plus souvent chez la famille des LABIEES.
Sédatif : se dit de toute substance qui agit contre la douleur, l’anxiété, l’insomnie ou qui
modère l’activité d’un organe.
Spore : élément ovoïde produit par les bactéries ou les champignons.
Sous-cutanée : sous la peau.
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Annexes
Annexe I
L’appareil ( figure. ) est constitué par un ballon en verre de 500 ml, relié par un tube de
raccordement à un tube cylindrique de condensation surmonté d’un réfrigérant et prolongé
par un tube collecteur gradué en 0,1 ml [127]
Perte a la dessiccation :
C’est la détermination de la perte de poids par dessiccation à l’étuve [127]
Dosage des cendres chlorhydriques (cendres non solubles dans l’acide chlorhydrique) :
Informations toxicologiques :
Autres données :
LD50 2480 mg/kg voie orale, rat.
Informations écologiques :
Aucun danger n'est anticipé pour l'environnement dans la mesure où cette matière est
manipulée et éliminée conformément aux normes de sécurité en place.
Définition :
Angle, exprimé en milliradians et/ou degré d’angle, qui tourne le plan de polarisation
d’une radiation lumineuse de longueur d’onde ( 589,3 nm + 0,3 nm ), correspondant aux
raies D du sodium, lorsque celle-ci traverse une épaisseur de 100 mm de l’HE dans des
conditions déterminées de température.
Définition :
Rapport entre le sinus de l’angle d’incidence et le sinus de l’angle de réfraction d’un rayon
lumineux de longueur d’onde déterminée, passant de l’air dans l’HE maintenue à une
température constante. La longueur d’onde spécifiée est ( 589,3 + 0,3 ) nm, correspondant
aux radiations D1 et D2 du sodium = + 0,0004 ( t’– t ) : valeur lue, à la température t’, à
laquelle a été effectuée la détermination. T : température de référence.
Principe:
Suivant le type d’appareil utilisé , soit mesurage direct de l’angle de réfraction, soit
observation de la limite de réfraction totale, l’huile étant maintenue dans des conditions
d’isotropisme et de transparence.
Annexe I
Définition :
La densité d’une HE est le rapport de la masse d’un volume d’HE à 20°C à celle du même
volume d’eau distillée à 20°C.
Principe :
Définition :
Une huile essentielle est dite miscible à V volumes et plus d’éthanol de titre alcoométrique
déterminé, à la température de 20 °C, lorsque le mélange de 1 volume de l’huile essentielle
considérée avec V volumes de cet éthanol est limpide et le reste après addition graduelle
d’éthanol de même titre, jusqu’à un total de 20 volumes.
Principe :
1.Indice d’acide ( IA ) :
Définition :
2.Indice d’ester ( IE ) :
Définition :
3.Mesure du pH :
Cette mesure a été effectuée à l’aide d’un pH-mètre.
Annexe I
Définition :
L’indice d’iode est le nombre de grammes d’iode fixé sur les doubles liaisons de 100
grammes de corps gras. Il est habituellement désigné par II.
Principe :
On fait agir une solution halogénante sur le produit préalablement dissous dans du
tetrachlorure de carbone ( ou du chloroforme ). On ajoute de l’iodure de potassium et on
titre en retour avec une solution de thiosulfate de sodium.
La solution halogénante est une solution de monobromure d’iode dans l’acide acétique.
[142,144]
Réaction caractéristique :
I I
Signal : TIC
Abundance
TIC: LAURIER3.D
23.71
25.00
2400000
2200000
2000000
1800000
1600000
17.11 29.18
1400000 25.52
1200000
14.98
1000000
19.68 23.87 30.57
27.74
29.04
800000 28.25
30.90
27.60
600000
19.29
400000
200000
12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00
Time-->
Abu n da nce
1 5 .3 0
2 60 0 00 0 2 5. 76
2 40 0 00 0
17 .4 4
2 20 0 00 0
2 00 0 00 0
2 4 .1 3
1 80 0 00 0
1 60 0 00 0 1 9. 92
1 40 0 00 0 24 .9 6
1 20 0 00 0
29 .3 3
1 3 .3 2
1 00 0 00 0 1 9. 51 2 8. 43
2727.1 01
.4
2 2. 26 29 .2 1
80 0 00 0 3 0. 74
26 .0 3 2
27
7 .9 1
.2 2
2 3. 01
60 0 00 0 1 3. 41 2
26 .4 7 .5 6
7
1 9. 19
1 1 .9 3
40 0 00 0
20 0 00 0
1 2 .0 0 1 4 .0 0 16 .0 0 18 .0 0 20 .0 0 22 .0 0 2 4.0 0 2 6.0 0 2 8. 00 3 0. 00 3 2. 00
Time- ->
Title :
Signal : TIC
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------
Abundance
TIC: LAURIER1.D
8000000
7500000
7000000
6500000
6000000
5500000
5000000
4500000
4000000
3500000
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
16.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0042.00
Time-->
450000
67
400000
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300000 107
53
250000
200000 121
147
150000
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189
100000
50000
175
204
60
0
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210
m/z-->
Chlorure de fer a 5% :
10 g de FeCl3 + 200 ml d’eau distillée.
L’ammoniaque ½ :
30ml d’ammoniaque + 60 ml d’eau distillée.
Acétate de plomb :
9,5 g de poudre d’acétate de plomb + 10 ml eau désoxydée (bouillir puis refroidir).
Réactif de Dragen droff :
-solution a : 0,85g de nitrate de bismuth + 40 ml d’eau distillée + 10 ml d’acide
acétique.
-solution b : 8 g d’iode de potassium + 2ml d’eau distillée.
On mélange a + b.
15 ml de mélange + 20 ml d’acide acétique puis compléter a 100ml de l’eau
distillée.
Réactif de stiasny :
Mélanger 10 ml de formaldéhyde a 40% avec 5 ml d’HCl concentré.
Préparation de la solution de KOH :
· Pour une concentration de 0.1 N de KOH : on fait dissoudre 1.4 g de KOH dans
l’alcool méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.1N.
· Pour une concentration de 0.5 N de KOH : on fait dissoudre 7 g de KOH dans
l’alcool éthylique ou méthylique, puis on titre avec une solution d’HCl à 0.42 N.
Réactif de carr-Price :
Solution à 20% de trichlorure d’antimoine dans le chloroforme.
Glossaire
Milieux de culture
MUELLER-HINTON gélosé ( M-H ) : ( g/l )
Amidon ………………………………………01.5g
Agar ……………………………………………10g
pH : 7.4
Peptone …………………………………………5g
NaCl ……………………………………………5g
Eau……………………………………………...1l
pH : 7.5
Néopeptone ……………………………………10g
Glucose ………………………………………..20g
Agar …………………………………………...20g
pH : 5 - 5.6