Etude du métabolisme

Rawane HAMZE

Le milieu minimum R2A est utilisé pour cet objectif. Il est composé de tous les constituants de milieu R2A
normal sans les sources de carbone. A chaque fois on ajoute une source unique de carbone pour tester si
elle est assimilée ou non par la souche étudiée.

Les expériences à faire sont pour P.stygius et P.oligotrophus. Les valeurs données par la suite sont pour
1 souche.

• Les sucres à tester sont : D-glucose (placard 4), L-Alanine, L-Arabinose (placard 4), L-Proline, Acide
lactique (placard 5), Glycogène (from oyster, frigo) , Acide Propionique (placard 5) et Acide 3-
hydroxybutirique (frigo en bas), pour obtenir une concentration finale de 20mM.. 20mM d’un de
ces sources de Carbone est ajouté à chaque test.
• Chaque sucre est testé en triplicata avec un témoin négatif non ensemencé ; on teste 8 sucres
donc 4 fioles avecà 20mL de milieu R2A minimum par sucre → prévenir faire 100 mMl de R2A
minimum par sucre et donc 800mL au total.
• On a 2 témoins globaux pour l’expérience : un positif avec 20mL du milieu de R2A normal et un
négatif avec 20mL de milieu de R2a minimum → prévenir faire 1L900mL de milieu R2A minimum
par souche.
• Autoclaver tous les milieux après ajout de sucres (s’a ne va pas se caraméliser).
• 2-3 jours avant la manipe, lancer la culture des souches.

Synoptique :

Prévoir 2 témoins globaux : un positif et un négatif

1x Témoin positif ajouter 200µL de HK31-P à partir de ?

 Milieu R2A normal de 20mL

1x Témoin négatif sans sucres si souches inoculées

Milieu R2A minimum de 20 Ml

Calcul de la masse du sucre à ajouter dans 100 mML pour que la concentration finale du tampon soit de
20 mM :

n (nombre de moles en mol) = m (masse en g) / M (masse molaire g/mol)

n (nombre de moles en mol) = C (concentration en mol) x V (volume en L)

m (masse en g) = M (masse molaire en g.mol-1) x C (concentration en mol/L) x V (volume en L)

C = 20 MmM ; V = 100 mMl

Sucres Masse molaire (g/mol) Masse à peser (g)

D-glucose 180.156 0.360312
L-Alanine 89.09 0.17818
L-Arabinose 150,129 0.30058
L-Proline 115.13 0.23026
Acide lactique 90.08C0=98x1.3x1000/(100x90.08) 0.1801614.14xV=0.02x0.1 ;
V=0.14mL
Glycogène Polymère de glucose 0.324
(C6H10O5)162n
Acide Propionique 74.08 0.14816
Acide 3-hydroxybutirique 104.1045 0.208209

1 témoin négatif de 20mL masse d’un des sucres

8x
3 fioles à 20 mL

100 Ml de Milieu
R2A minimum

Masse d’un des sucres

Ajouter 200µL de HK31-Pla souche
(à partir d’un milieu solide
minmum ?)

Centrifugation puis 3 lavages

successifves des bactéries dans l’eau
miliQ stérile et puis normaliser le Comptage sur des cellules de Thoma à
culot à un Mmc Ffarland de 1 partir de T= 0 jour et chaque 2 joursà
T2, T4, T7 et jusqu’à T= 10 jours