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Université Alger 1
Série de TD N° 05
Exercice1
Les appareils actuels de CLHP peuvent utiliser des colonnes de 300 μm de diamètre interne pour
lesquelles le débit optimum conseillé est de 4 μL/min.
1. Montrer par un calcul simple que ce débit conduit pratiquement à la même vitesse linéaire de la
phase mobile que pour une colonne de même type mais d’un diamètre de 4,6 mm pour laquelle le
débit conseillé est de 1 mL/min.
2. La séparation d’un échantillon comportant 16 HPA (hydrocarbures polyaromatiques) a été effectuée
sur une colonne de type C18 (L C= 25 cm, dC= 300 μm). Le débit de la phase mobile (acétonitrile/eau)
est de 4 μL/min. L’un de ces HPA a un temps de rétention de 48 min.
Calculer le volume de rétention de ce composé. Que peut-on en conclure?
3. On dispose de deux colonnes remplies de la même phase stationnaire, l’une a un diamètre intérieur
dC de 4,6 mm et l’autre, de 300μm. Les colonnes ont mêmes longueur et taux de remplissage (V S/VM).
On décide de les utiliser successivement avec le même chromatographe et dans conditions identiques,
avec les débits conseillés ci-dessus pour chacune d’elles. On injecte la même quantité d’un même
composé dans les deux expériences.
a) Quand on passe d’une colonne à l’autre, le volume de rétention (ou d’élution) du composé est-il
modifié ?
b) Si la sensibilité du détecteur n’a pas été modifiée entre les deux expériences, l’intensité du pic
correspondant sera-t-elle différente ?
Exercice2
On se propose de doser le monuron (herbicide) dans un échantillon d’eau de rivière. La solution est
analysée par HPLC. Donner le type de colonne, d’éluant et de détecteur que vous mettriez en œuvre
pour réaliser vos essais. On utilise pour le dosage la méthode d’étalonnage externe les résultats sont
dans le tableau ci-dessous:
Monuron C9H11ClN2O
Exercice 3
On étudie par CLHP la séparation de deux composés A et B avec une colonne de type RP–18. La
phase mobile est un mélange binaire d’eau et d’acétonitrile. On admettra qu’il existe une relation
linéaire entre le logarithme du facteur de capacité et le pourcentage d’acétonitrile du mélange
binaire eau/acétonitrile utilisé. À partir de 2 chromatogrammes obtenus l’un avec pour phase mobile
un mélange eau/acétonitrile 70/30v/v et l’autre avec un mélange eau/acétonitrile 30/70v/v, les
équations des deux droites sont :
Pour le composé A : log kA= −6,075 × 10−3 (% MeCN) + 1,3283
Exercice 4
Quel est l’ordre d’élution des acides suivants en HPLC avec une colonne dont la phase stationnaire
est de type C18 et comme phase mobile un tampon formiate pH 9 ? justifier votre réponse.