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Expérience en laboratoire

Citer ceci : J. Chem. Éduc. 2019, 96, 1205−1211 pubs.acs.org/jchemeduc

Estérification catalysée par la lipase : un laboratoire basé sur l'enquête

Activité visant à favoriser la compréhension et la compréhension des élèves du secondaire
Perceptions positives de la chimie verte
Prempree Duangpummet,† Pimchai Chaiyen,‡ et Pirom Chenprakhon*,†,§
†
Institut d'apprentissage innovant, Université Mahidol, Nakhon Pathom 73170, Thaïlande
‡
Département des sciences et de l'ingénierie biomoléculaires, École des sciences et de l'ingénierie biomoléculaires, Institut Vidyasirimedhi de
Science et technologie (VISTEC), Rayong 21210, Thaïlande
§
Centre d'excellence en technologie des protéines et des enzymes, Faculté des sciences, Université Mahidol, Bangkok 10400, Thaïlande

*S Informations complémentaires

RÉSUMÉ : Une unité d'apprentissage en laboratoire basée sur l'investigation

a été conçue pour améliorer la compréhension des élèves du secondaire de
l'application de la lipase en tant que catalyseur pour synthétiser les dérivés
d'isoamyle et d'ester de géranyle ainsi que pour promouvoir leur compréhension
et leurs perceptions positives de la chimie verte. L'unité d'apprentissage était
composée de trois laboratoires et d'un exposé final. La première activité de
laboratoire a permis aux étudiants d'apprendre à ajuster les techniques de
titrage à l'échelle macro aux techniques de titrage à l'échelle microscopique
afin que la méthode puisse être utilisée pour la détermination quantitative des
produits esters dans les deux activités de laboratoire suivantes. La deuxième
activité de laboratoire a présenté aux élèves une façon plus verte de
synthétiser des composés esters en remplaçant un catalyseur acide fort nocif
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juillet
2019
25
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le
à

par un catalyseur plus respectueux de l'environnement, une enzyme lipase.

La troisième activité de laboratoire a mis les élèves au défi de concevoir leurs
propres expériences pour synthétiser d'autres esters à l'aide de réactions d'estérification catalysées par la lipase. À la fin de l'unité d'apprentissage,
les élèves de chaque groupe ont présenté les résultats et les conclusions de la troisième activité de laboratoire à l'ensemble de la classe et expliqué
comment les 12 principes de la chimie verte ont été appliqués en laboratoire. Les résultats du test conceptuel des unités d'apprentissage et du
questionnaire sur les perceptions des unités d'apprentissage indiquent que les unités d'apprentissage peuvent favoriser la compréhension conceptuelle des élèves.
Ils ont également une perception positive de la chimie verte et des unités d'apprentissage.
MOTS CLÉS : Lycée/introduction à la chimie, enseignement en laboratoire, apprentissage basé sur l'enquête/découverte, chimie verte, esters

■ PRÉSENTATION dérivés dans un système sans solvant ont été utilisés comme modèle pour
l'étude. En général, l'estérification est une expérience vitale que les
L'enseignement de la chimie verte peut inspirer les élèves à rechercher
étudiants en sciences doivent apprendre.6,7 Par conséquent, il existe de
des connaissances approfondies et à les sensibiliser à la reconnaissance
nombreuses expériences de laboratoire d'estérification pour les étudiants
du développement d'innovations scientifiques nouvelles et durables.1 Les
de premier cycle, y compris les majeures en sciences et non scientifiques,
élèves des niveaux secondaire et collégial/universitaire constituent un bon
pour les aider à apprendre ce concept, en particulier l'estérification pour
public cible pour introduire les principes de la chimie verte et pour
synthétiser les saveurs. et parfums.8−14 La plupart des expériences
apprendre à mettre ces principes en pratique dans des situations réelles.2
utilisent une réaction catalysée par un acide,8−10,12−14 dans laquelle le
Par conséquent, la chimie verte
l'éducation a été l'un des domaines de recherche les plus actifs catalyseur n'est généralement pas récupéré et réutilisé. Au cours des
dernières années, certaines expériences d'estérification plus vertes ont
au cours des 10 dernières années.3 Les sujets ont inclus le développement
été développées qui utilisent une estérification assistée par micro­ondes
de matériel pédagogique lié à la chimie verte, comme des cours
interdisciplinaires, des démonstrations et des expériences en laboratoire. et une catalyse réutilisable.11,12 Cependant, il n'y a pas de cours de

Parmi celles­ci, les expériences de laboratoire sont largement utilisées chimie utilisant une enzyme comme catalyseur vert pour catalyser

comme outil pédagogique efficace pour illustrer comment les concepts de l'estérification, et donc, nous manquons d'un bon exemple de l'utilisation
chimie verte peuvent être appliqués et mis en œuvre dans des contextes de l'estérification catalysée par des enzymes pour introduire le concept de chimie verte. Par co
réels.4,5 Dans ce rapport, une
expérience de laboratoire pour mettre en œuvre le concept de chimie Reçu : 18 octobre 2018
verte a été développée. Réactions d'estérification catalysées par la lipase Révisé : 14 avril 2019
pour synthétiser les esters d'isoamyle et de géranyle Publié: 1 mai 2019
© 2019 American Chemical Society et
Division of Chemical Education, Inc. 1205 DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.
Chem. Éduc. 2019, 96, 1205−1211
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Journal de l'éducation chimique Expérience en laboratoire

Tableau 1. Structures chimiques de l'alcool, de l'acide carboxylique et des esters synthétisés dans cette étude

des activités de laboratoire basées sur des réactions d'estérification de son rendement élevé de conversion de produit et de son prix raisonnable
catalysées par la lipase pour la synthèse de dérivés d'esters d'isoamyle et pour une utilisation en classe (environ 1,3 USD/réaction). Dans cette leçon
de géranyle sont décrites dans cet article afin de promouvoir la d'apprentissage, la synthèse d'esters sans solvant catalysée par Novozyme
compréhension des étudiants du concept d'estérification et de promouvoir 435 a été réalisée dans un erlenmeyer. Initialement, 14,4 mmoles d'alcool
la perception des étudiants envers la chimie verte. et 7,2 mmoles d'acide carboxylique (rapport molaire 2:1) ont été mélangées,
puis 30 mg d'enzyme (1,5 % p/p) ont été ajoutés. Le mélange réactionnel a
■ ESTÉRIFICATION CATALYSÉE PAR DES LIPASES été incubé dans un agitateur orbital avec une vitesse d'agitation de 100 tr/
L'estérification est une réaction pour produire des composés esters à partir min à température ambiante. Les rendements de production en 2 h étaient
d'alcools et d'acides carboxyliques. Les étudiants doivent apprendre ce de 21 %, 68 %, 83 % et 84 % pour l'acétate d'isoamyle, le butanoate
concept en chimie organique de base. La réaction est largement utilisée d'isoamyle, l'hexanoate d'isoamyle et l'octanoate d'isoamyle, respectivement
pour la synthèse de composés aromatiques, de graisses et d'huiles.15 (voir la figure 1A ) . Pour le
Traditionnellement, les esters sont généralement produits à l'aide d'une
réaction catalysée par un acide appelée « estérification de Fischer », qui
produit généralement des déchets acides forts, et la réaction nécessite
également des températures élevées ( environ 80 °C).13,14 Pour surmonter
ces inconvénients, plusieurs enzymes, telles que la lipase et l'estérase, ont
été étudiées et utilisées pour catalyser l'estérification.16,17 Parmi celles­ci,
la lipase est l'une des enzymes les plus largement utilisées pour synthétiser
composés d'esters dans de nombreuses industries telles que les aliments,
les cosmétiques, les parfums, les arômes et les produits
pharmaceutiques.16,18,19 L'utilisation de la lipase comme catalyseur
présente plusieurs avantages. Par exemple, la réaction peut être effectuée
dans des conditions douces (à pH neutre et à basse température) et dans
un système sans solvant ; de plus, l'enzyme peut être réutilisée et la réaction
ne produit aucun déchet dangereux.20 Par conséquent, l'utilisation de
l'estérification catalysée par la lipase est plus efficace et plus écologique
que la synthèse chimique conventionnelle.
Dans cette étude, la synthèse d'esters d'isoamyle et d'esters de géranyle
à partir de l'estérification de l'alcool isoamylique ou du géraniol avec divers
acides carboxyliques (voir tableau 1) a été développée et utilisée comme
modèle d'apprentissage pour les étudiants. Les esters d'isoamyle, tels que
l'acétate d'isoamyle et le butanoate d'isoamyle, sont des composés précieux
largement utilisés dans les industries des arômes et de l'alimentation.21,22
Les esters de géranyle sont des composés de la famille des esters d'alcool
terpénoïde et peuvent être trouvés dans la nature ; ils sont utilisés comme
arômes ou parfums dans les industries alimentaire, cosmétique et
pharmaceutique.21,22 Par conséquent, ces composés sont de bons
candidats pour motiver et inspirer l'apprentissage des élèves. De plus, les
esters d'isoamyle et les esters de géranyle ont un arôme distinct, permettant
aux élèves de détecter leur formation directement en sentant.
La résine acrylique incrustée de lipase de Candida antarctica (Novozyme Figure 1. Progression de la réaction pour la synthèse des esters d'isoamyle (A) et des
435) a été utilisée comme biocatalyseur dans cette étude car esters de géranyle (B).

1206 DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.

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synthèse d'hexanoate d'isoamyle et d'octanoate d'isoamyle, les réactions

ont également atteint l'équilibre après 2 h. Semblable à la synthèse de
dérivés d'ester d'isoamyle, des dérivés d'ester de géranyle ont également
été synthétisés en utilisant une réaction d'estérification catalysée par une
lipase. La réaction sans solvant a été réalisée en ajoutant 30 mg d'enzyme
(1,5 % p/p) dans un mélange de 14,4 mmol de géraniol et 7,2 mmol
d'acide carboxylique (rapport molaire 2:1). Le mélange réactionnel a été
incubé à température ambiante avec une agitation de 100 tr/min. La
synthèse des esters de géranyle était plus lente que la synthèse des
esters d'isoamyle (voir figure 1B). Les rendements de production étaient Concept
intégré
chimie
verte
de

de 33 % pour l'acétate de géranyle, 71 % pour le butanoate de géranyle,

80 % pour l'hexanoate de géranyle et 79 % pour l'octanoate de géranyle
après 5 h. Les réactions ont également atteint l'équilibre après 6 h pour la
synthèse de l'hexanoate de géranyle et de l'octanoate de géranyle, avec
d'expérimentation.
conception
catalyseur
principes
comme
chimie
Utiliser
cadre
verte
chimie
verte.
vert.
de
et
de
les
12
(3)
unla pratique.

un rendement en pourcentage de 87 % et 88 %, respectivement. Ces Les

de
(1)
la
et (1)
de
12
(2) d'expériences
Performance
l'importance
catalyseur
l'efficacité
améliorer
Utilisation
réaction.
enzyme
principes
vertes.
L'origine
d'une
chimie
Une
pour
verte.
d'un
est
(2)
Avantages
l'utilisation
principes
obstacles
chimie
verte
réelle
des
de
de
la
et

résultats sont le premier rapport sur la synthèse d'hexanoate de géranyle

et d'octanoate de géranyle catalysés par Novozyme 435. Toutes les
identités structurelles des produits d'ester de géranyle ont été confirmées
à l'aide de GC­MS (voir les informations complémentaires pour l'instructeur, figures S2.1 à S2.8) .
La quantité de formation de produit a été déterminée par la méthode
de titrage en utilisant du NaOH 0,1 M comme solution standard et de la
phénolphtaléine comme indicateur . immédiatement 1 ml d'éthanol a été
ajouté.

Concept
ciblé

L'éthanol non seulement arrête la réaction, mais agit également comme

solvant pour le titrage du mélange avec une solution standard de NaOH.
Trois titrages ont été effectués pour chaque échantillon collecté. La
différence de quantité de NaOH utilisée entre les groupes expérimentaux estérification.
synthétiser
d'isoamyle
géranyle.
catalysée
technique
d'esters
dérivés
réaction
utilisant
lipase.
esters
titrage
base.
de des
une
de
une
par
(2)
et d'expérimentation.
Rédaction
plan
du

microscopique
pour
Une
du
de
deà
la
(1)
la à l'estérification
appropriées
détermination
conditions
la
àcatalysée
catalysée
préparation
affectent
­Facteurs
isoamyle
l'échelle
d'acides
synthèse
méthode lipase
lipase
pour
produit
des
l'aide
par
la
qui d'estérification
catalysée
concepts
chimie
verte.
lipase
Tests
par
de
sur
les
et
la

et les groupes témoins (la réaction sans l'enzyme) a été utilisée pour
calculer le pourcentage de conversion d'estérification (bien que le produit
ester puisse être hydrolysé par NaOH mais que l'hydrolyse soit très lente,
elle ne affectent de manière significative le pourcentage de conversion
d'estérification).

■ DESCRIPTION DE L'UNITÉ D'APPRENTISSAGE ET

MISE EN ŒUVRE
L'unité d'apprentissage développée démontre la synthèse de l'ester
d'isoamyle et de géranyle en utilisant une réaction d'estérification
catalysée par la lipase comme contenu de base pour présenter le concept
de chimie verte aux étudiants. L'unité d'apprentissage se compose de
trois laboratoires et d'un exposé final. Le niveau d'enquête passe d'une d'apprentissage
Activité

enquête structurée dans le laboratoire 2 à une enquête plus ouverte dans

le laboratoire 3. Les détails du laboratoire sont résumés dans le tableau
2. L'unité d'apprentissage a été appliquée lors de l'enseignement de 65
lycéens thaïlandais se spécialisant en sciences et mathématiques. Pour
évaluer l'efficacité de l'unité d'apprentissage, la recherche a été menée à
l'aide d'un modèle pré­test­post­test à un groupe. Les participants ont été
choisis par la méthode d'échantillonnage raisonné pour les étudiants
l'estérification
d'expériences
comparatives
Planification
synthétiser
catalysée
lipase. :
d'autres
utilisant
réaction.
Mission
esters
pour
par
enla estérification.

inscrits au cours « Advanced Chemistry Laboratory ». Le cours a été créé 1Adaptation

Orientation
l'échelle
l'échelle
micro.
titrage
macro
titrage
pré­
Lab
test
à
etau
du
à : une
de
par
par
de
2 et
3 estérification
estérification
Laboratoire
d'isoamyle
catalysée
Laboratoire
d'isoamyle
Synthèse
:géranyle
butanoate
catalysée
Synthèse
d'esters
lipase
lipase
une
par
par
: d'apprentissage.
Présentation
synthèse
l'unité
finale
de
et Post­
test

pour donner aux étudiants l'occasion d'apprendre un contenu stimulant

qui est différent du cadre normal de la salle de classe et qui vise à
développer les processus et les compétences scientifiques des étudiants.
C'est la première fois que ces étudiants font l'expérience d'activités Jour
(2)
1(1)
2 (2)
3 (2−3)
4 (2)
5 (1)
6

basées sur l'investigation utilisant l'estérification catalysée par la lipase d'apprentissage

présentées
pertinents
concepts
concepts
intégrés
Activités
Tableau
chimie
d'unité
verte
avec
des
des
de
et
2.
(Temps
passé,
h)

intégrée à un concept de chimie verte. Comme les étudiants ont déjà

appris la réaction d'estérification catalysée par un acide comme
connaissances de base, ils peuvent comparer les activités de laboratoire
actuellement développées avec leur expérience antérieure en termes de
chimie verte.

1207 DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.

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Laboratoire 1 : Adaptation du titrage à l'échelle macro à
Titrage à l'échelle microscopique
La première expérience de laboratoire visait à rappeler les connaissances
des étudiants sur la technique de titrage acide­base à l'échelle macro pour
déterminer les concentrations de solutions inconnues données, et les
étudiants ont été invités à adapter la technique au titrage à l'échelle
microscopique. Le concept expérimental de base était basé sur la technique
de titrage conventionnelle utilisée pour déterminer l'acide acétique
(CH3COOH). Pour la méthode conventionnelle ou le titrage à grande échelle,
les étudiants étaient autorisés à utiliser des appareils de taille normale et une
grande quantité d'acide acétique inconnu (2 ml par essai).
Après avoir répété le titrage au moins trois fois pour déterminer des
concentrations d'acide acétique inconnues, un enseignant a fourni aux élèves
un ensemble de titrage à l'échelle microscopique, comprenant une seringue
de 1 ml, un petit embout et un tube de microcentrifugeuse de 1,5 ml.
L'enseignant a demandé aux élèves de mettre en place leurs propres
de l'odeur
expériences en utilisant l'appareil de titrage à l'échelle microscopique (voir Figure 2). Un
Figure 2. Configuration de l'appareil de titrage à l'échelle microscopique.
connecté à une seringue de 1 ml, qui a été utilisée comme burette
micrométrique de 1 ml. Un flacon Erlenmeyer a été remplacé par un tube de
microcentrifugation de 1,5 ml. Les élèves ont utilisé le titrage à micro­échelle
pour déterminer les concentrations de la même solution inconnue d'acide
acétique du titrage à macro­échelle précédent, et les résultats des deux
méthodes ont été comparés. Dans cette partie, une technique de titrage a été
ajustée de la macro à la micro­échelle en réduisant la quantité de solution et
la taille de l'appareil. La solution a été réduite de 4 à 20 fois (de 2000 μL à
500 à 100 μL) en remplaçant un flacon Erlenmeyer par un tube de
microcentrifugeuse et une burette avec 1 mL dans une seringue (voir Figure
2 ) . Les résultats des étudiants n'ont montré aucune différence significative
entre les deux méthodes (voir Informations complémentaires pour l'instructeur),
indiquant que le titrage à l'échelle micro peut être utilisé pour déterminer la
concentration de composés inconnus équivalente à la technique de titrage à
l'échelle macro.
À la fin du laboratoire, l'enseignant a présenté le concept des 12 principes
de la chimie verte.25,26 Enseignants
a mené les étudiants à une discussion sur la façon dont le titrage à l'échelle
microscopique est lié aux 12 principes de la chimie verte. Ce titrage à l'échelle
microscopique répond au principe de la chimie verte en termes de réduction
de la quantité de déchets produits dans le vrai laboratoire de classe.
Laboratoire 2 : Synthèse de butanoate d'isoamyle à l'aide d'une
réaction d'estérification catalysée par une lipase
Cette expérience de laboratoire visait à montrer aux étudiants comment
remplacer un acide fort par une enzyme pour catalyser l'estérification.
1208
Expérience en laboratoire
L'estérification de l'alcool isoamylique et de l'acide butanoïque en utilisant la
lipase comme biocatalyseur a été choisie comme modèle d'apprentissage. Il
y a trois raisons majeures pour choisir cette réaction : (1) La réaction peut
avoir lieu dans un court laps de temps (la formation de produit peut atteindre
jusqu'à 80 % en 2 h). (2) Le produit de la réaction, le butanoate d'isoamyle, a
une forte odeur de banane, que les élèves peuvent facilement détecter en
sentant. (3) Le produit est largement utilisé dans l'industrie alimentaire, offrant
ainsi aux étudiants un bon exemple lié à leur vie quotidienne.
Comme c'est la première fois que la plupart des étudiants sont confrontés
à une réaction catalysée par une enzyme, ils ont réalisé des expériences
basées sur une enquête structurée.27 Les conditions et procédures
expérimentales ont été décrites dans le manuel de laboratoire de l'étudiant.
Pour la détermination du produit, les étudiants ont utilisé une micropipette
pour prélever 20 μL de l'échantillon des mélanges réactionnels toutes les 30 min.
Les étudiants pouvaient également détecter la formation du produit au moyen
de était
pourboire butanoate d'isoamyle, permettant une analyse qualitative du
produit. Ensuite, les étudiants ont utilisé le titrage à l'échelle microscopique
qu'ils avaient appris lors de la première expérience de laboratoire pour
déterminer un pourcentage de rendement de formation de produit pour
l'analyse quantitative. Les résultats des étudiants ont montré une formation
de produit de l'ordre de 60 % en 1 h (voir les informations complémentaires
pour l'instructeur, figures S1.1 à S1.2), permettant aux étudiants de découvrir
la puissance de la catalyse enzymatique dans la préparation de composés spécifiques.
Comme lors de la première expérience de laboratoire, l'enseignant a
rappelé aux élèves de lier les principes de la chimie verte à leur expérience.
L'enseignant leur a demandé de comparer la différence entre l'utilisation d'un
acide fort (qu'ils avaient déjà expérimenté dans une classe ordinaire) et
l'utilisation de la lipase comme biocatalyseur de la réaction dans cette classe
en termes de temps consommé, de coût, de pourcentage de formation de
produit, impact sur l'environnement, etc. Les élèves ont également été invités
à écrire leurs propres idées sur la façon de rendre l'expérience plus verte en
préparation de la prochaine expérience (Lab 3).
Laboratoire 3 : Synthèse d'esters d'isoamyle et de géranyle par
estérification catalysée par la lipase Après que
les élèves aient appris la méthode de synthèse d'esters en utilisant la réaction
catalysée par la lipase de l'expérience de laboratoire précédente, celle­ci les
a mis au défi de concevoir leur propre expérience pour synthétiser des
composés d'ester à l'aide de la lipase. ­estérification catalysée. Les élèves
pouvaient choisir des substrats parmi deux types d'alcool, à savoir l'alcool
isoamylique et le géraniol, et quatre types d'acide carboxylique, à savoir
l'acide acétique, l'acide butanoïque, l'acide hexanoïque et l'acide octanoïque
(voir le tableau 1 ) . Avant de commencer l'expérience de laboratoire,
l'enseignant a demandé à chaque groupe d'élèves de tirer une carte. La carte
spécifiait les types d'alcool et d'acide carboxylique et les facteurs pouvant
affecter le rendement de la réaction, tels que le rapport molaire du substrat et
la charge enzymatique.
Ensuite, les étudiants ont conçu leur propre expérience en fonction de la
carte tirée (voir manuel de laboratoire de l'étudiant, Lab 3, Informations
complémentaires). L'enseignant a vérifié la conception expérimentale des
élèves et a donné des conseils et des suggestions d'amélioration. Lorsque la
conception expérimentale a été révisée, les étudiants ont été autorisés à
mener l'expérience par eux­mêmes.
Non seulement cette expérience en laboratoire visait à aider les étudiants
à mettre en pratique la conception expérimentale et à mener leurs propres
expériences, mais elle visait également à les sensibiliser aux technologies
vertes. Dans la phase de conception expérimentale, l'enseignant a rappelé
aux élèves de concevoir des expériences qui appliquaient les 12 principes de
la chimie verte.25,26 Au cours de la discussion en laboratoire, l'enseignant
a demandé aux élèves d'écrire une discussion sur l'expérience qui était
DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.
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Journal de l'éducation chimique
Tableau 3. Résultats des étudiants du LUCT
Partie 1 : Compréhension du général Partie 2 : Compréhension de
Paramètre Concepts d'estérification et d'enzyme Concept de chimie verte
Prétest 11,65 ± 6,55 1,19 ± 0,72
(signifie )
Post­test 15,17 ± 7,79 3,29 ± 1,51
(signifie )
Gagner 3,52 ± 4,86 2,10 ± 1,39
(Post − Pré)
t 5,70 11.86
valeur p 0,000 0,000
un
Le LUCT a un score complet de 60 (36 pour la partie 1, 6 pour la partie 2 et 18 pour la partie 3). Les données proviennent de 62 étudiants (les scores de trois étudiants n'ont pas été analysés car ils
n'ont pas participé au post­test).
conforme aux principes de la chimie verte. L'expérience de laboratoire visait à
fournir aux étudiants l'occasion d'appliquer les principes de la chimie verte de
manière pratique, leur permettant de voir les possibilités ou les défis de
l'application de la chimie verte dans la pratique réelle.
L'expérience de laboratoire dans cette section a été conçue comme une
enquête ouverte dans laquelle le problème a été fourni aux étudiants, qui ont
ensuite développé une procédure d'investigation, collecté et analysé les données,
et conclu leurs conclusions.27 Cependant, si certains étudiants n'ont pas obtenu
de bons , l'enseignant les a guidés et conseillés afin qu'ils puissent atteindre leurs
objectifs d'apprentissage.
Présentation
Il s'agit de la dernière partie de l'unité d'apprentissage, qui permet aux étudiants
de résumer tous les concepts appris dans leurs trois expériences de laboratoire.
Les étudiants ont fait une présentation de 5 minutes sur les résultats du
laboratoire 3. Il y a cinq sujets à discuter : • Le nom et les avantages
de l'ester synthétisé • Conclusions et discussion des expériences
• Les 12 principes de la chimie verte pertinents pour l'expérience
• Les processus ou des méthodes qui ne respectent pas les principes de la
chimie verte
et les suggestions des élèves pour les améliorer
• Ce que les élèves ont appris de l'unité d'apprentissage
Comme dans le labo 3, les élèves de différents groupes ont sélectionné
différents facteurs pour synthétiser les composés esters (voir manuel de
laboratoire de l'élève, labo 3, informations complémentaires) ; cette séance de
présentation leur a permis de partager leurs résultats et d'en discuter avec des
amis et des enseignants. De cette façon, ils pourraient en savoir plus sur les
facteurs qui peuvent affecter l'estérification catalysée par la lipase. Par exemple,
les élèves pourraient voir comment l'augmentation de la concentration d'une
enzyme peut augmenter le taux de synthèse des esters. De plus, ils apprendraient
que les rapports molaires ainsi que les types d'acide carboxylique et d'alcool
affectaient également le taux et le pourcentage de conversion de la synthèse des
esters. En permettant aux étudiants de partager et de discuter de leurs résultats
avec des amis, une variété de contenus d'apprentissage peut être traitée pendant
une courte période. Après avoir terminé leur présentation, les élèves ont eu
l'occasion de recevoir des conseils de pairs et d'enseignants pour améliorer leur
propre rapport.
■ DANGERS
Les produits chimiques de cette unité d'apprentissage, y compris tous les acides
carboxyliques, tous les alcools et l'hydroxyde de sodium, sont classés comme
agents de corrosion cutanée. L'acide butanoïque, l'alcool isoamylique et le
géraniol sont classés comme agents irritants. Les élèves doivent être informés
des dangers de tous les produits chimiques avant d'effectuer leurs expériences
en laboratoire. Les enseignants doivent leur fournir la bonne
1209
Expérience en laboratoire
Partie 3 : Compréhension de l'estérification catalysée par la lipase
Réaction liée au concept de chimie verte Global
3,07 ± 2,95 15,90 ± 8,68
10,40 ± 4,66 28,86 ± 12,37
7,33 ± 4,52 12,96 ± 7,79
12,79 13.08
0,000 0,000
protection, comme des gants, des masques et des lunettes de protection, et
demandez­leur de porter l'équipement de protection pendant le laboratoire. Il
convient de noter que certains produits chimiques, tels que l'acide butanoïque et
l'alcool isoamylique, ont une forte odeur. Par conséquent, les enseignants doivent
demander aux élèves d'être prudents et d'utiliser ces composés sous une hotte
aspirante pour éviter la propagation d'odeurs désagréables.
■ ÉVALUATION ET DISCUSSION DE L'UNITÉ D'APPRENTISSAGE
L'efficacité de l'unité d'apprentissage a été évaluée à l'aide du test conceptuel
d'unité d'apprentissage (LUCT) et du questionnaire de perception des unités
d'apprentissage (LUPQ). Le LUCT a été construit pour évaluer la compréhension
des étudiants de l'estérification catalysée par la lipase et des concepts de chimie
verte avant et après la mise en œuvre de l'unité d'apprentissage. Après avoir
terminé l'unité d'apprentissage, les étudiants ont été invités à remplir le LUPQ,
qui comprenait 20 items de type échelle de Likert en cinq points,28 notés de 1­
fortement en désaccord à 5­ fortement en accord, et 3 questions ouvertes (voir
Informations complémentaires pour instructeur). Le but du LUPQ est d'évaluer
les perceptions des étudiants envers l'unité d'apprentissage selon trois construits
principaux : (1) les perceptions du contenu de l'estérification catalysée par la
lipase (items 1−2), (2) les perceptions des concepts de chimie verte (items 3 −9),
et (3) les perceptions des activités d'apprentissage (items 10−20). La question
ouverte composée de trois items a été utilisée pour obtenir des informations sur
ce que les étudiants aiment et n'aiment pas le plus dans l'unité d'apprentissage
et leurs suggestions pour l'améliorer.
Les résultats du prétest et du posttest LUCT de 62 étudiants ont montré que
le score moyen du posttest (28,86 ± 12,37) était significativement plus élevé que
celui du prétest (15,90 ± 8,68) à 95 % de confiance (voir tableau 3 ) . Lorsque
les données ont été analysées pour des concepts particuliers, y compris les
concepts généraux d'estérification et d'enzyme, le concept de chimie verte et la
réaction d'estérification catalysée par la lipase liée au concept de chimie verte, le
score du post­test a également montré des valeurs significativement plus élevées
que les scores du pré­test dans tous les aspects. .
Dans l'ensemble, les résultats indiquent qu'après cette unité d'apprentissage, les
étudiants ont une meilleure compréhension des concepts d'estérification catalysée
par la lipase et de chimie verte.
Les résultats du LUPQ ont été analysés et interprétés selon les critères
suivants : très négatif (1,00−1,50), modérément négatif (1,51−2,50), neutre
(2,51−3,50), modérément positif (3,51−4,50) et très positif ( 4.51−5.00), comme
indiqué dans le tableau 4.
Le score moyen des perceptions des étudiants envers le contenu était
modérément positif, avec un score moyen de 3,90 ± 0,84.
Les étudiants ont convenu que l'unité d'apprentissage les avait aidés à
comprendre le concept d'estérification catalysée par la lipase. Ils avaient une
perception modérément positive de la chimie verte, avec un score moyen de 4,05
± 0,53. Ils étaient conscients de l'importance de
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Journal de l'éducation chimique
Tableau 4. Perceptions des étudiants de l'unité d'apprentissage
moyenne
Perception de. . .
Le contenu de l'estérification 3,90 ± 0,84 Modérément positif
catalysée par la lipase
Notions de chimie verte 0,53 Modérément positif 3,89 ±
0,43
Activités d'apprentissage Modérément positif 3,94 ± 0,62
Global Modérément positif
un
Les notes sont basées sur une échelle de 1 (Fortement en désaccord) à 5
(Fortement en accord) rapportées sous forme de moyenne ± écart type. Les
données proviennent de 65 étudiants.
chimie verte et pense que ce concept devrait être appliqué à d'autres contenus
en chimie. Ils ont également convenu que le concept de chimie verte peut être
utilisé dans des applications réelles. Ces conclusions sont étayées par les
résultats des questions ouvertes, dans lesquelles l'application des principes de
la chimie verte était l'un des 3 sujets les plus appréciés par les élèves dans
cette unité d'apprentissage (voir tableau 5 ) . Ce résultat peut être directement
lié à
Tableau 5. Résultats des questions ouvertes
Classé Aimé N'a pas aimé
1 Le processus
Activités d'apprentissage (activité
basée sur l'enquête) chronophage
2 de lycéens. Les résultats du Learning Unit Conceptual Test (LUCT) et du
Méthode de titrage à l'échelle microscopique Odeur désagréable de
certains produits
chimiques
3 Application des principes de la Charge de travail des
chimie verte aux laboratoires rapports de
laboratoire
l'unité d'apprentissage elle­même parce que l'unité d'apprentissage leur a
permis d'acquérir des connaissances sur de nombreux aspects de la chimie
verte ; par exemple, dans le laboratoire 1, les étudiants ont eu l'occasion de
modifier le titrage à grande échelle en une méthode plus verte, c'est­à­dire le
titrage à micro­échelle. Dans les laboratoires 2 et 3, les étudiants ont utilisé
une enzyme, qui est un catalyseur vert, au lieu d'un acide fort, pour catalyser
la réaction dans un système sans solvant. Selon les 12 principes de la chimie
verte,25,26 l'unité d'apprentissage peut représenter au moins quatre principes
de la chimie verte, y compris la prévention de la production de déchets, la
synthèse chimique moins dangereuse, l'utilisation de la lipase comme
catalyseur (biocatalyseur) et l'utilisation d'un solvant et d'auxiliaires plus sûrs
en réalisant la réaction dans un système sans solvant.
Les perceptions des élèves des activités d'apprentissage ont montré une
perception modérément positive, avec un score moyen de 3,89 ± 0,43. Les
élèves ont perçu que l'activité d'apprentissage favorisait plusieurs compétences,
telles que les compétences expérimentales (comment concevoir des
expériences et collecter et analyser des données), la capacité à utiliser du
matériel scientifique et les compétences en communication. De plus, les
étudiants ont estimé qu'ils avaient l'occasion de concevoir et de réaliser des
expériences par eux­mêmes en tant que scientifiques, et ils ont apprécié ces
activités d'apprentissage. Les résultats peuvent indiquer que les élèves
apprécient l'apprentissage basé sur l'investigation dans lequel ils ont la
possibilité d'explorer de nouvelles connaissances par eux­mêmes, ce qui est
en corrélation avec les résultats des questions ouvertes (voir le tableau 5 ) .
Cependant, le niveau d'enquête peut être ajusté en fonction des antécédents
des étudiants.
Les résultats des questions ouvertes montrent que les 3 aspects que les
étudiants ont le plus appréciés dans cette unité d'apprentissage étaient les
activités d'apprentissage (activité basée sur l'enquête), la méthode de titrage à
l'échelle microscopique et l'application de la chimie verte.
Expérience en laboratoire
principes à leurs expériences de laboratoire, dans cet ordre (voir tableau 5).
D'autre part, les 3 aspects les plus détestés par les étudiants dans cette unité
Interprétation
d'apprentissage étaient le processus chronophage, l'odeur désagréable de
certains produits chimiques et la charge de travail des rapports de laboratoire,
4,05 ±
dans cet ordre (voir Informations complémentaires pour instructeur). Bien que
les aspects chronophages et élevés de la charge de travail soient des
caractéristiques générales de l'apprentissage basé sur l'investigation par
rapport à l'enseignement traditionnel,29 cette leçon est toujours utile pour que
les étudiants obtiennent une nouvelle expérience grâce à des activités basées
sur l'investigation en plus de leur expérience normale en laboratoire. Les
suggestions des étudiants seront utilisées pour améliorer l'unité d'apprentissage
afin de la rendre plus efficace dans les applications futures.
En résumé, les résultats du test conceptuel de l'unité d'apprentissage
(LUCT) et du questionnaire sur les perceptions de l'unité d'apprentissage
(LUPQ) indiquent clairement que les étudiants ont montré des améliorations
significatives dans la compréhension conceptuelle et ont également montré
leurs perceptions positives envers l'unité d'apprentissage et la chimie verte, ce
qui peut indiquer l'efficacité de cet apprentissage
unité.
■ CONCLUSION
L'unité d'apprentissage basée sur l'enquête intégrée à la chimie verte a été
Suggestions développée à l'aide d'une réaction d'estérification catalysée par la lipase pour
Ajuster pour une durée synthétiser des dérivés d'isoamyle et d'ester de géranyle comme modèle
plus appropriée
d'apprentissage. L'unité d'apprentissage a été mise en œuvre dans une classe
Concevoir plus loin
divers laboratoires Learning Unit Perceptions Questionnaire (LUPQ) indiquent clairement que
l'unité d'apprentissage est efficace. Après avoir participé à cette unité
Aucun
d'apprentissage, les étudiants ont montré des améliorations significatives dans
la compréhension conceptuelle et ont également montré leurs perceptions
positives envers l'unité d'apprentissage et la chimie verte.
Cette unité d'apprentissage pourrait être un exemple d'implantation efficace
de l'enseignement de la chimie verte au secondaire pour les raisons suivantes :
• Les unités d'apprentissage peuvent représenter au moins quatre principes
de chimie verte (prévention de la production de déchets, synthèse
chimique moins dangereuse, utilisation de la lipase comme catalyseur
(biocatalyseur) et utilisation d'un solvant et d'auxiliaires plus sûrs en
effectuant la réaction dans un environnement sans solvant
système). • L'utilisation d'une expérience de laboratoire basée sur
l'investigation pourrait encourager les élèves à explorer leurs
connaissances et à découvrir par eux­mêmes comment les principes
de la chimie verte peuvent être
appliqués dans des situations réelles. • L'unité d'apprentissage peut favoriser l'esprit positif des
perceptions de la chimie verte.
• L'utilisation de la synthèse de dérivés d'isoamyle et d'ester de géranyle
comme modèle d'apprentissage pourrait aider les élèves à apprendre
de manière plus significative, car ce type de substance est largement
utilisé dans les industries des arômes et de l'alimentation, que les
élèves peuvent associer à leur propre vie.
■ CONTENU ASSOCIÉ
*S Informations complémentaires
Les informations complémentaires sont disponibles sur le site Web des
publications de l'ACS au DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855.
Manuel de laboratoire étudiant (DOCX, PDF)
Informations complémentaires pour l'instructeur (DOCX, PDF)
1210 DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.
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Journal de l'éducation chimique Expérience en laboratoire

■ INFORMATIONS SUR L'AUTEUR (16) Khan, NR ; Rathod, VK Enzyme a catalysé la synthèse d'esters cosmétiques
et son intensification : une revue. Processus Biochem. 2015, 50 (11), 1793−1806.
Auteur correspondant *E­

mail : pirom.che@mahidol.ac.th. (17) Tinikul, R.; Chenprakhon, P.; Maenpuen, S.; Chayen, P.
Biotransformation des acides phénoliques d'origine végétale. Biotechnol. J. 2018, 13
ORCIDE
(6), 1700632.
(18) Serra, S.; Fuganti, C.; Brenna, E. Préparation biocatalytique d'arômes et de
Pirom Chenprakhon : 0000­0002­5927­6920
parfums naturels. Tendances Biotechnol. 2005, 23 (4), 193−8.
Remarques
(19) Dhake, KP ; Thakare, DD ; Bhanage, BM Lipase : un biocatalyseur potentiel
Les auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent. pour la synthèse de précieux composés d'esters d'arômes et de parfums. Flavor
Fragrance J. 2013, 28 (2), 71−83.
(20) Stergiou, PY; Foukis, A.; Filippou, M.; Koukouritaki, M.; Parapouli, M.;
■ REMERCIEMENTS
Théodorou, LG; Hatziloukas, E.; Afendra, A.; Pandey, A.; Papamichael, EM Progrès
Les auteurs tiennent à remercier les étudiants qui ont suivi avec dans les réactions d'estérification catalysées par la lipase. Biotechnol. Adv. 2013, 31
enthousiasme cette unité d'apprentissage. Nous remercions également (8), 1846−1859.
(21) Surburg, H.; Panten, J. Common Fragrance and Flavor Materials : Préparation,
Chawin Chomngam, qui était un enseignant coordinateur de cours très sympathique.
propriétés et utilisations, 6e éd.; Wiley­VCH : Weinheim, Allemagne, 2016.
Nous reconnaissons le soutien à la recherche du Conseil national de la
recherche de Thaïlande (NRCT) (à P. Duangpummet), de l'Université
(22) Bardane, Géorgie ; Fenaroli, G. Fenaroli's Handbook of Flavour Ingredients,
Mahidol (à P. Chenprakhon) et du Fonds de recherche thaïlandais par le
6e éd.; CRC Press : Boca Raton, Floride, 2010.
biais des subventions n° RTA5980001 (à P. Chaiyen) et MRG6180156 (à (23) Guven C, A.; Kapucu, N.; Bayraktar, E.; Mehmeto Lu, U.
P. Chenprakhon). Optimisation de la production enzymatique d'acétate d'isoamyle avec le novozym
435 de candida antarctica. Chim. Ing. Commun. 2003, 190 (5−8), 948−961.
■ RÉFÉRENCES
(24) Kuperkar, VV ; Lade, TB ; Prakash, A.; Rathod, VK Synthèse de propionate
(1) Braun, B.; Charney, R.; Clarens, A.; Farrugia, J.; Cuisines, C.; Lisowski, C.;
d'isobutyle à l'aide de lipase immobilisée dans un système sans solvant : Optimisation
Naistat, D.; O'Neil, A. Compléter nos études ­ La chimie verte dans le programme. J.
et études cinétiques. J. Mol. Catal. B : Enzyme. 2014, 99, 143−149.
Chem. Éduc. 2006, 83 (8), 1126−1128.
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(25) Anastas, PT ; Warner, JC Green Chemistry : Théorie et pratique.; Oxford
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University Press : New York, 1998.
(3) Haack, JA ; Hutchison, JE Formation en chimie verte : 25 ans de progrès et
(26) Anastas, P. ; Eghbali, N. Chimie verte : principes et pratique.
25 ans d'avance. ACS Sustainable Chem. Ing. 2016, 4 (11), 5889−5896.
Chim. Soc. Rév. 2010, 39 (1), 301−312.
(27) Buck, LB ; Bretz, SL; Towns, MH Caractérisation du niveau de recherche dans
(4) Morsch, LA; Deak, L.; Tiburzi, D.; Schuster, H.; Meyer, B. Green Aqueous Wittig
le laboratoire de premier cycle. J. Coll. Sci. Enseigner. 2008, 38 (1), 52−58.
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organique : une synthèse d'acide adipique sans danger pour l'environnement.
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J. Chem. Éduc. 2000, 77 (12), 1627.
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organique expérimentale : Manuel de laboratoire ; Academic Press : Londres, 2016 ;
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(8) Logan, JL ; Rumbaugh, CE La chimie du parfum: un cours de laboratoire pour
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(9) Epstein, JL; Castaldi, M.; Patel, G.; Telidecki, P.; Karakkat, K.
Utilisation de la chimie des arômes pour concevoir et synthétiser des parfums et des
arômes artificiels. J. Chem. Éduc. 2015, 92 (5), 954−957.
(10) Bromfield­Lee, DC; Oliver­Hoyo, MT Une expérience de cinétique d'estérification
qui repose sur le sens de l'odorat. J. Chem. Éduc. 2009, 86 (1), 82−84.

(11) Janssens, N.; Pipi, LH ; Martens, JA Réaction d'estérification utilisant l'odorat

et la vue pour la conversion et la surveillance de la récupération du catalyseur. J.
Chem. Éduc. 2014, 91 (6), 876−879.
(12) Reilly, MK; Roi, RP ; Wagner, AJ; King, SM Estérification assistée par micro­
ondes : une expérience de laboratoire à micro­échelle basée sur la découverte. J.
Chem. Éduc. 2014, 91 (10), 1706−1709.
(13) Birney, D.M. ; Starnes, SD Estérification combinatoire parallèle : une expérience
simple à utiliser dans le laboratoire de chimie organique du deuxième semestre. J.
Chem. Éduc. 1999, 76 (11), 1560.
(14) Wade, Pennsylvanie ; Rutkowsky, SA; King, DB Une expérience combinatoire
simple basée sur l'estérification de Fischer. Une expérience adaptée au laboratoire
de chimie organique du premier semestre. J
Chim. Éduc. 2006, 83 (6), 927.
(15) Liu, SQ; Hollande, R.; Crow, VL Esters et leur biosynthèse dans les produits
laitiers fermentés : une revue. Int. Dairy J. 2004, 14 (11), 923− 945.

1211 DOI : 10.1021/acs.jchemed.8b00855 J.

Chem. Éduc. 2019, 96, 1205−1211